尋找光合藍(lán)細(xì)菌與乙醇耐受相關(guān)的生物標(biāo)記物的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種尋找光合藍(lán)細(xì)菌與乙醇耐受相關(guān)的生物標(biāo)記物的方法，包括如下步驟：(1)對(duì)藍(lán)細(xì)菌進(jìn)行乙醇處理培養(yǎng)；(2)代謝物的提取；(3)GC-MS檢測(cè)及數(shù)據(jù)處理；(4)主成分分析,利用本發(fā)明的方法可以快速地將藍(lán)細(xì)菌在乙醇脅迫過程中的生物標(biāo)記物尋找出來，這些生物標(biāo)記物為研究藍(lán)細(xì)菌乙醇耐受的代謝路徑提供靶點(diǎn)，從而為進(jìn)一步提高藍(lán)細(xì)菌的乙醇耐受性提供理論基礎(chǔ)。同時(shí)也為其他菌株乙醇耐受性的優(yōu)化提供新的思路和方法。
【專利說明】尋找光合藍(lán)細(xì)菌與乙醇耐受相關(guān)的生物標(biāo)記物的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于是生物燃料領(lǐng)域，涉及一種尋找光合藍(lán)細(xì)菌與乙醇耐受相關(guān)的生物標(biāo) 記物的方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 近年來，利用光合微藻生產(chǎn)的生物乙醇逐漸替代傳統(tǒng)的化石燃料吸引了人們?cè)絹?越多的關(guān)注，然而目前微藻對(duì)乙醇的低耐受性嚴(yán)重限制了生物乙醇生產(chǎn)的經(jīng)濟(jì)可行性。因 此提高微藻對(duì)乙醇的耐受性對(duì)利用其生產(chǎn)生物燃料有著重大的意義。
[0003] 藍(lán)細(xì)菌在地球上具有極其廣范的分布，而且對(duì)環(huán)境脅迫具有極強(qiáng)的耐受性，是常 見的自養(yǎng)原核生物。由于它們能夠進(jìn)行光合作用以及固氮作用等優(yōu)勢(shì)，藍(lán)細(xì)菌相對(duì)于其它 微生物在惡略環(huán)境生長得要好。并且藍(lán)細(xì)菌易于在實(shí)驗(yàn)室或者戶外條件下大規(guī)模的培養(yǎng)。 因此，近年來在生產(chǎn)中的應(yīng)用越來越廣泛，已有數(shù)十種外源基因在其中得到表達(dá)，相關(guān)的研 究也越來越深入，這為其生產(chǎn)生物乙醇奠定了基礎(chǔ)。
[0004] 探索藍(lán)細(xì)菌在乙醇脅迫下的代謝機(jī)制有助于提高其對(duì)乙醇的耐受性。代謝物是在 生命體內(nèi)實(shí)現(xiàn)代謝過程的小分子有機(jī)化合物，是生物體基因表達(dá)的終產(chǎn)物，包括有機(jī)酸，氨 基酸，醇類化合物，胺類化合物，芳香族化合物及糖類等等多種化合物。通過對(duì)藍(lán)細(xì)菌在乙 醇脅迫過程中代謝物的檢測(cè)，可以更直觀的了解細(xì)胞對(duì)乙醇處理所做出的響應(yīng)。隨著氣質(zhì) 聯(lián)用技術(shù)的發(fā)展，細(xì)胞內(nèi)小分子代謝物得到了高通量的檢測(cè)，可以從整體水平上檢測(cè)細(xì)胞 在脅迫過程中產(chǎn)生的各類物質(zhì)在代謝水平上的變化，并結(jié)合多元統(tǒng)計(jì)分析的方法了解其耐 受機(jī)制并尋找細(xì)胞在脅迫過程中重要的生物標(biāo)記物，從而更易于尋找改進(jìn)生物乙醇工業(yè)生 產(chǎn)的關(guān)鍵點(diǎn)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種尋找光合藍(lán)細(xì)菌與乙醇耐受相關(guān)的生物標(biāo)記物的方法。
[0006] 本發(fā)明的技術(shù)方案概述如下：
[0007] 尋找光合藍(lán)細(xì)菌與乙醇耐受相關(guān)的生物標(biāo)記物的方法，包括如下步驟：
[0008] (1)對(duì)藍(lán)細(xì)菌進(jìn)行乙醇處理培養(yǎng)：
[0009] 將藍(lán)細(xì)菌在新鮮BG-11培養(yǎng)基中，在光照強(qiáng)度為40-50μπιο1/πΓ2-8,轉(zhuǎn)速為 130rpm，溫度為28-30°C條件下培養(yǎng)，在藍(lán)細(xì)菌生長到0D630為0. 2時(shí)，分別取兩個(gè)10ml菌 液，離心，其中一個(gè)去上清后加入到50ml新鮮BG-11培養(yǎng)基中作為對(duì)照組；另一個(gè)去上清 后加入到含有乙醇的50ml新鮮BG-11培養(yǎng)基中作為實(shí)驗(yàn)組，所述實(shí)驗(yàn)組中乙醇的體積濃度 為1.0%-2.0%;對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組在光照強(qiáng)度為40-5(^111〇1/111~2-8，轉(zhuǎn)速為130印111，溫度 28-30°C條件下培養(yǎng)；
[0010] ⑵代謝物的提取：
[0011] ①細(xì)胞收集：
[0012] 在48h和72h兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)取樣，用紫外分光光度計(jì)測(cè)對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的藍(lán)細(xì)菌在 48h和72h時(shí)的0D730值，按照0D730 = 4收集細(xì)胞；在4°C，7500-8000rpm條件下離心 lOmin，棄去上清，各加入lmL pH為7. 2?7. 4的PBS，將細(xì)胞重懸并吹吸混勻，分別加入到 1. 5mL離心管中，13000rpm常溫下離心5min，棄去上清；
[0013] ②細(xì)胞代謝物的提?。?br> [0014] 向步驟⑵①收集到的各個(gè)細(xì)胞中分別加入lmL體積比為10:3:1的甲醇、氯仿和 水的混合液，吹吸混勻；在液氮中反復(fù)凍融3-5次；常溫條件下15000rpm離心3min ;各吸取 100 μ L上清液分別至新的離心管中，各加入5 μ L濃度為100 μ g/ml D-山梨醇水溶液為內(nèi) 標(biāo)，混和均勻，放入真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中進(jìn)行干燥2-4h ;
[0015] ③樣品衍生化：
[0016] 向步驟⑵②獲得的各樣品中分別加入10 μ L濃度為4mg/mL的甲氧氨基鹽酸鹽 吡啶溶液，30°C，750-950rpm恒溫震蕩90-120min ;分別加入90yL N-甲基-N-三氟乙酰 胺，37°C下450-500rpm恒溫震蕩30-60min ;常溫下13000rpm離心l〇-15min，分別取上清 75 μ L分別放入樣品瓶中進(jìn)行上樣；
[0017] (3) GC-MS檢測(cè)及數(shù)據(jù)處理：
[0018] ①代謝物檢測(cè)：
[0019] 用安捷倫GC-7890偶聯(lián)MSD5975的氣質(zhì)聯(lián)用儀對(duì)步驟（2)獲得的各個(gè)樣品進(jìn)行 分析測(cè)定；色譜條件：色譜柱為HP-5MS毛細(xì)管柱，所述色譜柱規(guī)格為30mX250mm ID ;進(jìn) 樣方式為不分流進(jìn)樣；上樣量為1 μ L ;使用氦氣為載氣，載氣流速為lmL/min ;進(jìn)樣口溫度 為230°C ;升溫程序?yàn)椋撼跏紲囟葹?5°C，保持2min，之后以5°C /min的速率持續(xù)升溫至 280°C，保持5min，全程共54min ;質(zhì)譜條件：溶劑延時(shí)lOmin，電離方式EI，采用全掃描方 式，質(zhì)荷比掃描范圍：m/z38-650 ;
[0020] ②數(shù)據(jù)處理：
[0021] GC-MS分析得到的原始數(shù)據(jù)采用AMDIS軟件進(jìn)行分析，并與NIST數(shù)據(jù)庫進(jìn)行匹配， 對(duì)代謝物進(jìn)行定性分析；通過對(duì)色譜峰面積積分處理，并與內(nèi)標(biāo)物的峰面積對(duì)照，最后再以 細(xì)胞數(shù)目對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，得到對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞內(nèi)各個(gè)小分子代謝物的相對(duì)含量；
[0022] (4)主成分分析：
[0023] 用SIMCA-P軟件對(duì)步驟（3)②獲得的對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞內(nèi)各個(gè)小分子代謝物的 相對(duì)含量進(jìn)行主成分分析，得到用于表達(dá)樣本相似性和差異性的得分圖和載荷圖；在得分 圖中，樣品點(diǎn)相互之間距離越近，說明樣本的相似度越大，距離越遠(yuǎn)，說明樣本差異越大；在 載荷圖中，各個(gè)小分子代謝物用黑色三角表示，距離中心點(diǎn)越遠(yuǎn)的小分子代謝物，其在乙醇 脅迫過程中的差異就越大；通過將得分圖與載荷圖疊加，得到一個(gè)二維散點(diǎn)圖，以坐標(biāo)〇. 5 為截點(diǎn)，分布在半徑為〇. 5的圓以外的代謝物表達(dá)差異顯著，并且分布在樣本周圍的代謝 物為該樣本中差異表達(dá)的代謝物，可作為重要的候選標(biāo)記物進(jìn)行分析。
[0024] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：
[0025] 利用本發(fā)明的方法可以快速地將藍(lán)細(xì)菌在乙醇脅迫過程中的生物標(biāo)記物尋找出 來，這些生物標(biāo)記物為研究藍(lán)細(xì)菌乙醇耐受的代謝路徑提供靶點(diǎn)，從而為進(jìn)一步提高藍(lán)細(xì) 菌的乙醇耐受性提供理論基礎(chǔ)。同時(shí)也為其他菌株乙醇耐受性的優(yōu)化提供新的思路和方 法。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0026] 圖1為藍(lán)細(xì)菌在乙醇處理48h的主成分分析得分圖。
[0027] 圖2為藍(lán)細(xì)菌在乙醇處理72h的主成分分析得分圖。
[0028] 圖3為藍(lán)細(xì)菌在乙醇處理48h和72h的主成分分析得分圖與載荷圖的重疊二維 圖。

【具體實(shí)施方式】
[0029] 下面通過具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。
[0030] 實(shí)施例是為了使本領(lǐng)域的技術(shù)人員能夠更好地理解本發(fā)明，但并不對(duì)本發(fā)明作任 何限制。
[0031] 本發(fā)明各實(shí)施例使用的光合藍(lán)細(xì)菌集胞藻（Synechocystis sp. PCC6803)，該菌購 自美國菌株保藏中心ATCC，菌株代碼ATCC27184。
[0032] 選擇光合藍(lán)細(xì)菌集胞藻（Synechocystis sp. PCC6803)為實(shí)驗(yàn)材料僅是為了舉例， 證明此方法可以成功地應(yīng)用于光合藍(lán)細(xì)菌與乙醇耐受相關(guān)的生物標(biāo)記物的尋找，但本發(fā)明 同樣可以應(yīng)用于其他微生物耐受其他脅迫條件相關(guān)生物標(biāo)記物的尋找。
[0033] 實(shí)施例1
[0034] 尋找光合藍(lán)細(xì)菌與乙醇耐受相關(guān)的生物標(biāo)記物的方法，包括如下步驟：
[0035] (1)對(duì)藍(lán)細(xì)菌進(jìn)行乙醇處理培養(yǎng)：
[0036] 將藍(lán)細(xì)菌光合藍(lán)細(xì)菌集胞藻野生型在新鮮BG-11培養(yǎng)基中，在光照強(qiáng)度為 50μ mol/nT2-s，轉(zhuǎn)速為130rpm，溫度為30°C條件下培養(yǎng)，在藍(lán)細(xì)菌生長到0D630為0. 2時(shí)， 分別取兩個(gè)l〇ml菌液，離心，其中一個(gè)去上清后加入到50ml新鮮BG-11培養(yǎng)基中作為對(duì)照 組；另一個(gè)去上清后加入到含有乙醇的50ml新鮮BG-11培養(yǎng)基中作為實(shí)驗(yàn)組，所述實(shí)驗(yàn)組 中乙醇的體積濃度為1. 9% ;以上兩組樣品均有三個(gè)平行對(duì)照，對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組在光照強(qiáng)度 為50 μ mol/nT2-s，轉(zhuǎn)速為130rpm，溫度30°C條件下培養(yǎng)；
[0037] ⑵代謝物的提?。?br> [0038] ①細(xì)胞收集：
[0039] 在48h和72h兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)取樣，用紫外分光光度計(jì)測(cè)對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的藍(lán)細(xì)菌在 48h和72h時(shí)的0D730值，按照0D730 = 4收集細(xì)胞，在4°C，7600rpm條件下離心lOmin， 棄去上清，各加入lmL pH為7. 3的PBS，將細(xì)胞重懸并吹吸混勻，分別加入到1. 5mL離心管 中，13000rpm常溫下離心5min，棄去上清；
[0040] ②細(xì)胞代謝物的提?。?br> [0041] 向步驟⑵①收集到的各個(gè)細(xì)胞中分別加入lmL體積比為10:3:1的甲醇、氯仿和 水的混合液，吹吸混勻；在液氮中反復(fù)凍融3次；常溫條件下15000rpm離心3min ;各吸取 100 μ L上清液分別至新的離心管中，各加入5 μ L濃度為100 μ g/ml D-山梨醇水溶液為內(nèi) 標(biāo)，混和均勻，放入真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中進(jìn)行干燥3h ;
[0042] ③樣品衍生化：
[0043] 向步驟⑵②獲得的各樣品中分別加入10 μ L濃度為4mg/mL的甲氧氨基鹽酸鹽 吡啶溶液，30°C，750rpm恒溫震蕩90min ;分別加入90 μ L N-甲基-N-三氟乙酰胺，37°C下 450rpm恒溫震蕩30min ;常溫下13000rpm離心lOmin，分別取上清75 μ L分別放入樣品瓶 中進(jìn)行上樣；
[0044] (3) GC-MS檢測(cè)及數(shù)據(jù)處理：
[0045] ①代謝物檢測(cè)：
[0046] 用安捷倫GC-7890偶聯(lián)MSD5975的氣質(zhì)聯(lián)用儀對(duì)步驟（2)獲得的各個(gè)樣品進(jìn)行 分析測(cè)定；色譜條件：色譜柱為HP-5MS毛細(xì)管柱，所述色譜柱規(guī)格為30mX250mm ID ;進(jìn) 樣方式為不分流進(jìn)樣；上樣量為1 μ L ;使用氦氣為載氣，載氣流速為lmL/min ;進(jìn)樣口溫度 為230°C ;升溫程序?yàn)椋撼跏紲囟葹?5°C，保持2min，之后以5°C /min的速率持續(xù)升溫至 280°C，保持5min，全程共54min ;質(zhì)譜條件：溶劑延時(shí)lOmin，電離方式EI，采用全掃描方 式，質(zhì)荷比掃描范圍：m/z38-650 ;
[0047] ②數(shù)據(jù)處理：
[0048] GC-MS分析得到的原始數(shù)據(jù)采用AMDIS軟件進(jìn)行分析，并與NIST數(shù)據(jù)庫進(jìn)行匹配， 對(duì)代謝物進(jìn)行定性分析；通過對(duì)色譜峰面積積分處理，并與內(nèi)標(biāo)物的峰面積對(duì)照，最后再以 細(xì)胞數(shù)目對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，得到對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞內(nèi)各個(gè)小分子代謝物的相對(duì)含量；
[0049] (4)主成分分析：
[0050] 用SIMCA-P軟件對(duì)步驟（3)②獲得的對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞內(nèi)各個(gè)小分子代謝物的 相對(duì)含量進(jìn)行主成分分析，得到用于表達(dá)樣本相似性和差異性的得分圖和載荷圖；在得分 圖中，樣品點(diǎn)相互之間距離越近，說明樣本的相似度越大，距離越遠(yuǎn)，說明樣本差異越大；在 載荷圖中，各個(gè)小分子代謝物用黑色三角表示，距離中心點(diǎn)越遠(yuǎn)的小分子代謝物，其在乙醇 脅迫過程中的差異就越大；通過將得分圖與載荷圖疊加，得到一個(gè)二維散點(diǎn)圖，以坐標(biāo)〇. 5 為截點(diǎn)，分布在半徑為0.5的圓以外的代謝物表達(dá)差異顯著，并且分布在樣本周圍的代謝 物為該樣本中差異表達(dá)的代謝物，可作為重要的候選標(biāo)記物進(jìn)行分析。
[0051] 從圖1和圖2可以看出無論是48h的對(duì)數(shù)期還是72h的接近于平臺(tái)期，每個(gè)樣品 的平行樣都大致聚集在一起，并且實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組之間都有明顯的區(qū)分，這說明乙醇脅迫 使集胞藻的代謝過程產(chǎn)生了變化；同樣從圖3可以看出不同時(shí)間點(diǎn)的不同樣品也有顯著區(qū) 分，這預(yù)示著不同時(shí)間點(diǎn)不同細(xì)胞的代謝機(jī)制也有所差別，而且隨著處理時(shí)間的延長，實(shí)驗(yàn) 組和對(duì)照組之間的差距減小，說明細(xì)胞在脅迫條件下，通過自身調(diào)節(jié)機(jī)制使其生長狀態(tài)逐 漸趨于正常。
[0052] 除此之外，圖3所示，分布在樣品周圍且虛線圓圈（半徑0.5)以外的化合物為實(shí) 驗(yàn)過程中該樣品內(nèi)較其他樣品表達(dá)差異明顯的代謝物，分布在乙醇處理?xiàng)l件下樣品周圍的 代謝物可視為與乙醇耐受密切相關(guān)的標(biāo)記代謝物。因此，亞精胺、亞油酸、海藻糖、6-磷酸葡 萄糖、蘋果酸、甘氨酸、十七烷酸以及葉綠醇均在細(xì)胞生長對(duì)數(shù)期調(diào)控乙醇耐受過程中起到 重要作用，這些代謝物可視為細(xì)胞對(duì)數(shù)期乙醇脅迫的生物標(biāo)記物，而隨著脅迫時(shí)間的延長， 硬脂酸甲酯和棕櫚酸甲酯為細(xì)胞生長接近平臺(tái)期乙醇脅迫的生物標(biāo)記物。
[0053] 綜上所述，結(jié)合細(xì)胞主成分分析得分圖以及得分圖和載荷圖的重疊二維圖分析， 本發(fā)明的發(fā)現(xiàn)為今后提高菌株乙醇耐受性提供了可能的靶點(diǎn)和代謝物水平的理論基礎(chǔ)。
[0054] 表1 :實(shí)施例1所測(cè)得各樣品內(nèi)小分子代謝物的種類
[0055]

【權(quán)利要求】
1.尋找光合藍(lán)細(xì)菌與乙醇耐受相關(guān)的生物標(biāo)記物的方法，其特征是包括如下步驟： (1) 對(duì)藍(lán)細(xì)菌進(jìn)行乙醇處理培養(yǎng)： 將藍(lán)細(xì)菌在新鮮86-11培養(yǎng)基中，在光照強(qiáng)度為40-5(^111〇1/111~2-8，轉(zhuǎn)速為130印111， 溫度為28-30°C條件下培養(yǎng)，在藍(lán)細(xì)菌生長到0D630為0. 2時(shí)，分別取兩個(gè)10ml菌液，離 心，其中一個(gè)去上清后加入到50ml新鮮BG-11培養(yǎng)基中作為對(duì)照組；另一個(gè)去上清后加 入到含有乙醇的50ml新鮮BG-11培養(yǎng)基中作為實(shí)驗(yàn)組，所述實(shí)驗(yàn)組中乙醇的體積濃度 為1.0%-2.0%;對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組在光照強(qiáng)度為40-5(^111〇1/111~2-8，轉(zhuǎn)速為130印111，溫度 28-30°C條件下培養(yǎng)； (2) 代謝物的提?。? ① 細(xì)胞收集： 在48h和72h兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)取樣，用紫外分光光度計(jì)測(cè)對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的藍(lán)細(xì)菌在48h 和72h時(shí)的0D730值，按照0D730 = 4收集細(xì)胞；在4°C，7500-8000rpm條件下離心lOmin， 棄去上清，各加入lmL pH為7. 2?7. 4的PBS，將細(xì)胞重懸并吹吸混勻，分別加入到1. 5mL 離心管中，13000rpm常溫下離心5min，棄去上清； ② 細(xì)胞代謝物的提?。? 向步驟（2)①收集到的各個(gè)細(xì)胞中分別加入lmL體積比為10:3:1的甲醇、氯仿和水 的混合液，吹吸混勻；在液氮中反復(fù)凍融3-5次；常溫條件下15000rpm離心3min ;各吸取 100 μ L上清液分別至新的離心管中，各加入5 μ L濃度為100 μ g/ml D-山梨醇水溶液為內(nèi) 標(biāo)，混和均勻，放入真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中進(jìn)行干燥2-4h ; ③ 樣品衍生化： 向步驟⑵②獲得的各樣品中分別加入10 μ L濃度為4mg/mL的甲氧氨基鹽酸鹽吡啶 溶液，30°C，750-950rpm恒溫震蕩90-120min ;分別加入90yL N-甲基-N-三氟乙酰胺， 37°C下450-500rpm恒溫震蕩30-60min ;常溫下13000rpm離心10-15min，分別取上清75 μ L 分別放入樣品瓶中進(jìn)行上樣； (3) GC-MS檢測(cè)及數(shù)據(jù)處理： ① 代謝物檢測(cè)： 用安捷倫GC-7890偶聯(lián)MSD5975的氣質(zhì)聯(lián)用儀對(duì)步驟（2)獲得的各個(gè)樣品進(jìn)行分析測(cè) 定；色譜條件：色譜柱為HP-5MS毛細(xì)管柱，所述色譜柱規(guī)格為30mX 250mm ID ;進(jìn)樣方式為 不分流進(jìn)樣；上樣量為1 μ L ;使用氦氣為載氣，載氣流速為lmL/min ;進(jìn)樣口溫度為230°C ; 升溫程序?yàn)椋撼跏紲囟葹?5°C，保持2min，之后以5°C /min的速率持續(xù)升溫至280°C，保持 5min，全程共54min ;質(zhì)譜條件：溶劑延時(shí)lOmin，電離方式EI，采用全掃描方式，質(zhì)荷比掃描 范圍：m/z38-650 ; ② 數(shù)據(jù)處理： GC-MS分析得到的原始數(shù)據(jù)采用AMDIS軟件進(jìn)行分析，并與NIST數(shù)據(jù)庫進(jìn)行匹配，對(duì)代 謝物進(jìn)行定性分析；通過對(duì)色譜峰面積積分處理，并與內(nèi)標(biāo)物的峰面積對(duì)照，最后再以細(xì)胞 數(shù)目對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，得到對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞內(nèi)各個(gè)小分子代謝物的相對(duì)含量； (4) 主成分分析： 用SIMCA-P軟件對(duì)步驟（3)②獲得的對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞內(nèi)各個(gè)小分子代謝物的相對(duì) 含量進(jìn)行主成分分析，得到用于表達(dá)樣本相似性和差異性的得分圖和載荷圖；在得分圖中， 樣品點(diǎn)相互之間距離越近，說明樣本的相似度越大，距離越遠(yuǎn)，說明樣本差異越大；在載荷 圖中，各個(gè)小分子代謝物用黑色三角表示，距離中心點(diǎn)越遠(yuǎn)的小分子代謝物，其在乙醇脅迫 過程中的差異就越大；通過將得分圖與載荷圖疊加，得到一個(gè)二維散點(diǎn)圖，以坐標(biāo)0. 5為截 點(diǎn)，分布在半徑為0. 5的圓以外的代謝物表達(dá)差異顯著，并且分布在樣本周圍的代謝物為 該樣本中差異表達(dá)的代謝物，可作為重要的候選標(biāo)記物進(jìn)行分析。
【文檔編號(hào)】G01N33/569GK104267180SQ201410477602
【公開日】2015年1月7日 申請(qǐng)日期:2014年9月18日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月18日
【發(fā)明者】朱燁, 石朦亮, 牛向鳳, 陳磊, 張衛(wèi)文 申請(qǐng)人:天津大學(xué)