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用于檢測目標(biāo)核酸的方法與組合物與流程

文檔序號:12249628閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種檢測樣品中的多個不同目標(biāo)核酸的方法,其中每個目標(biāo)核酸包含與第二目標(biāo)結(jié)構(gòu)域相鄰的第一目標(biāo)結(jié)構(gòu)域和位于所述第一目標(biāo)結(jié)構(gòu)域和第二目標(biāo)結(jié)構(gòu)域上游或下游的第三目標(biāo)捕獲結(jié)構(gòu)域,所述方法包含:

(a)提供多個接合襯底,各自包含:

(i)所述目標(biāo)核酸中的一種;

(ii)第一組接合探針,包含:

(A)第一核酸接合探針,包含:

(1)與所述一個目標(biāo)核酸序列的第一目標(biāo)結(jié)構(gòu)域雜交的第一探針結(jié)構(gòu)域;

(2)5'-接合部分;以及

(B)第二核酸接合探針,包含:

(1)與所述一個目標(biāo)核酸序列的第二目標(biāo)結(jié)構(gòu)域雜交的第二探針結(jié)構(gòu)域;以及

(2)3'接合部分;

(b)在不使用接合酶的情況下接合所述第一接合探針和第二接合探針以形成第一多個接合產(chǎn)物;

(c)使包含捕獲部分的目標(biāo)捕獲探針與所述目標(biāo)核酸的所述第三目標(biāo)結(jié)構(gòu)域雜交以形成目標(biāo)復(fù)合物;

(d)使用所述捕獲部分在表面上捕獲所述目標(biāo)復(fù)合物;

(e)擴增所述接合產(chǎn)物以形成擴增子;

(f)檢測所述擴增子,

從而檢測所述目標(biāo)核酸。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中:

所述目標(biāo)核酸進一步包含與第五目標(biāo)結(jié)構(gòu)域相鄰的第四目標(biāo)結(jié)構(gòu)域;

所述多個接合襯底各自進一步包含第二組接合探針,所述第二組接合探針包含與所述第四目標(biāo)結(jié)構(gòu)域雜交的第三核酸接合探針和與所述第五目標(biāo)結(jié)構(gòu)域雜交的第四核酸接合探針;

所述方法進一步包含在不存在接合酶的情況下接合所述第三接合探針和第四接合探針以使得所述一個目標(biāo)核酸序列包含多重接合產(chǎn)物;

并且所述檢測步驟(f)包含檢測由所述多重接合產(chǎn)物產(chǎn)生的擴增子。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法,其中所述目標(biāo)核酸進一步包含與第七目標(biāo)結(jié)構(gòu)域相鄰的第六目標(biāo)結(jié)構(gòu)域;

所述多個接合襯底各自進一步包含第三組接合探針,所述第三組接合探針包含與所述第六目標(biāo)結(jié)構(gòu)域雜交的第五核酸接合探針和與所述第七目標(biāo)結(jié)構(gòu)域雜交的第六核酸接合探針;

所述方法進一步包含在不存在接合酶的情況下接合所述第三接合探針和第四接合探針以使得所述一個目標(biāo)核酸序列包含多重接合產(chǎn)物。

4.根據(jù)權(quán)利要求1至3所述的方法,其中所述接合探針中的每一個進一步包含引物序列。

5.根據(jù)權(quán)利要求1至4所述的方法,其中每組接合探針的所述接合探針中的至少一個進一步包含可變間隔區(qū)序列以使得所述擴增子具有目標(biāo)特定長度。

6.根據(jù)權(quán)利要求1至5所述的方法,其中每組接合探針中僅有一個接合探針包含所述可變間隔區(qū)序列。

7.根據(jù)權(quán)利要求5至6所述的方法,其中所述可變間隔區(qū)序列含于所述接合探針的所述探針結(jié)構(gòu)域與所述引物之間。

8.根據(jù)權(quán)利要求1至7所述的方法,其中所述目標(biāo)捕獲探針的所述捕獲部分包含選自以下各項的成員:捕獲核酸序列、珠粒和結(jié)合搭配物對的結(jié)合搭配物。

9.根據(jù)權(quán)利要求1至8所述的方法,其中所述5'接合部分包含DABSYL并且所述3'接合部分包含硫代磷酸酯。

10.根據(jù)權(quán)利要求1至9所述的方法,其中所述3'接合部分包含DABSYL。

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