本發(fā)明涉及農(nóng)產(chǎn)品綜合利用領域，具體涉及一種黃花菜中秋水仙堿的提取工藝。

背景技術：

黃花菜是我國一種傳統(tǒng)的食花蔬菜。由于其營養(yǎng)豐富，含糖類、蛋白質(zhì)、無機鹽及多種人體必需氨基酸，且含量高于胡蘿卜、花椰菜、番茄等常見蔬菜，被譽為蔬菜類中的四大珍品之一。黃花菜中含秋水仙堿，加工不當，容易引起中毒。由于黃花菜中秋水仙堿易溶于水，且含量較低，不易提取和檢測。

秋水仙堿，是一種生物堿，因最初從百合科植物秋水仙中提取出來，又稱秋水仙素。純秋水仙堿呈黃色針狀結晶，熔點157℃。易溶于水、乙醇和氯仿。

黃花菜中含秋水仙堿，加工不當，容易引起中毒。由于黃花菜中秋水仙堿易溶于水，且含量較低，不易提取。本發(fā)明利用溶劑萃取法對黃花菜中秋水仙堿進行提取條件進行優(yōu)化，為黃花菜中秋水仙堿提取和低毒或無毒黃花菜育種提供理論依據(jù)。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的問題是提供一種提取工藝簡單，可操作性強，提取率高的黃花菜中秋水仙堿的提取工藝。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術方案為：所提供的一種黃花菜中秋水仙堿的提取工藝，包括以下步驟：

(1)黃花菜花蕾頂端微張時，采集其花蕾，70℃下烘干，粉碎成粉，過40目篩；

(2)稱取步驟(1)中獲得的花蕾干粉，用濾紙包好，在氨水中堿化，將其轉(zhuǎn)移到到索氏提取器中，無水乙醇作提取劑，80-100℃下恒溫浸提，得秋水仙堿粗提液；

(3)蒸發(fā)去除秋水仙堿粗提液中的乙醇，用蒸餾水溶解濃縮物；

(4)溶劑萃取步驟(3)中獲得的秋水仙堿溶液3次，濃縮得到秋水仙堿樣品，-20℃保存，備用。

作為進一步改進，所述步驟(2)中氨水的濃度為25％。

作為進一步改進，所述步驟(2)中花蕾干粉與無水乙醇的料液比為1：(4-12)。

作為進一步改進，所述步驟(2)中浸提時間為2-10小時。

作為進一步改進，所述步驟(3)中蒸發(fā)所用的儀器為旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。

作為進一步改進，所述步驟(2)中花蕾干粉(g)與無水乙醇(ml)的料液比為1：8，浸提溫度為85℃，浸提時間為8小時。

采用本發(fā)明的技術方案，利用溶劑萃取的方法對黃花菜中秋水仙堿進行提取，提取過程簡單，可操作性強，成功地解決了目前黃花菜中秋水仙堿提取難的問題，提高了食品安全，整個提取過程，通過綜合分析各個工藝參數(shù)之間的相互影響，嚴格控制黃花菜花蕾干粉和無水乙醇的料液比，浸提溫度和浸提時間，獲得了最佳的提取率。

附圖說明

圖1為本發(fā)明的技術流程圖。

圖2為秋水仙堿標樣液相色譜圖。

圖3為秋水仙堿標樣標準曲線。

圖4為提取溫度對秋水仙堿提取的影響的曲線圖。

圖5為浸提時間對秋水仙堿提取的影響的曲線圖。

圖6為料液比對秋水仙堿提取的影響的曲線圖。

具體實施方式

為使本發(fā)明實現(xiàn)的技術手段、創(chuàng)作特征、達成目的與功效易于明白了解，下面結合具體實施方式，進一步闡述本發(fā)明。

實施例1

如圖1所示，一種黃花菜中秋水仙堿的提取工藝，包括以下步驟：

(1)黃花菜花蕾頂端微張時，采集其花蕾，70℃下烘干，粉碎成粉，過40目篩；

(2)稱取步驟(1)中獲得的花蕾干粉3g，用濾紙包好，在濃度為25％的氨水中堿化10分鐘，將其轉(zhuǎn)移到到索氏提取器中，80ml無水乙醇作提取劑，80℃下恒溫浸提8小時，得秋水仙堿粗提液；

(3)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中蒸發(fā)去除秋水仙堿粗提液中的乙醇，用蒸餾水溶解濃縮物；

(4)溶劑萃取步驟(3)中獲得的秋水仙堿溶液3次，濃縮得到秋水仙堿樣品，-20℃保存，備用。

實施例2

其余與實施例1相同，不同之處在于：浸提溫度為85℃。

實施例3

其余與實施例1相同，不同之處在于：浸提溫度為90℃。

實施例4

其余與實施例1相同，不同之處在于：浸提溫度為95℃。

實施例5

其余與實施例1相同，不同之處在于：浸提溫度為100℃。

實施例6

一種黃花菜中秋水仙堿的提取工藝，包括以下步驟：

(1)黃花菜花蕾頂端微張時，采集其花蕾，70℃下烘干，粉碎成粉，過40目篩；

(2)稱取步驟(1)中獲得的花蕾干粉3g，用濾紙包好，在濃度為25％的氨水中堿化10分鐘，將其轉(zhuǎn)移到到索氏提取器中，80ml無水乙醇作提取劑，85℃下恒溫浸提2小時，得秋水仙堿粗提液；

(3)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中蒸發(fā)去除秋水仙堿粗提液中的乙醇，用蒸餾水溶解濃縮物；

(4)溶劑萃取步驟(3)中獲得的秋水仙堿溶液3次，濃縮得到秋水仙堿樣品，-20℃保存，備用。

實施例7

其余與實施例6相同，不同之處在于：浸提時間為4小時。

實施例8

其余與實施例6相同，不同之處在于：浸提溫度為6小時。

實施例9

其余與實施例6相同，不同之處在于：浸提溫度為8小時。

實施例10

其余與實施例6相同，不同之處在于：浸提溫度為10小時。

實施例11

一種黃花菜中秋水仙堿的提取工藝，包括以下步驟：

(1)黃花菜花蕾頂端微張時，采集其花蕾，70℃下烘干，粉碎成粉，過40目篩；

(2)稱取步驟(1)中獲得的花蕾干粉3g，用濾紙包好，在濃度為25％的氨水中堿化10分鐘，將其轉(zhuǎn)移到到索氏提取器中，加入一定量的無水乙醇作提取劑，85℃下恒溫浸提8小時，得秋水仙堿粗提液，其中，花蕾干粉(g)與無水乙醇(ml)的料液比為1：4；

(3)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中蒸發(fā)去除秋水仙堿粗提液中的乙醇，用蒸餾水溶解濃縮物；

(4)溶劑萃取步驟(3)中獲得的秋水仙堿溶液3次，濃縮得到秋水仙堿樣品，-20℃保存，備用。

實施例12

其余與實施例11相同，不同之處在于：花蕾干粉(g)與無水乙醇(ml)的料液比為1：6。

實施例13

其余與實施例11相同，不同之處在于：花蕾干粉(g)與無水乙醇(ml)的料液比為1：8。

實施例14

其余與實施例11相同，不同之處在于：花蕾干粉(g)與無水乙醇(ml)的料液比為1：10。

實施例15

其余與實施例11相同，不同之處在于：花蕾干粉(g)與無水乙醇(ml)的料液比為1：12。

正交試驗

根據(jù)上述單因素試驗確定的范圍，即每個因素設置5個實施例，共15個實施例。正交設計L9(34)對秋水仙堿提取過程的4個因素在3個水平上進行優(yōu)化試驗，確定秋水仙堿提取過程中各因素的最佳水平。

秋水仙堿含量測定：

秋水仙堿含量用高效液相色譜法測定，所用甲醇為色譜純，水為娃哈哈純凈水。

液相色譜條件：甲醇：水(V:V)＝44：56；流速1mL/min；進樣量：20μL；紫外檢測波長：353nm；柱溫：25℃。

檢測步驟：

(1)將甲醇和純凈水在超聲波清洗儀中放置1h，去除溶液中的空氣。

(2)準確配制濃度為1，5，10，30，50μL/mL的秋水仙堿甲醇溶液，各取20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以對照品溶液的濃度Y與峰面積X進行線性回歸計算。

(3)將秋水仙堿樣品分別溶于3mL甲醇中，經(jīng)0.45μm的濾膜過濾后，取20μL進行液相色譜分析。測得每個實施例的秋水仙堿的提取率如下表所示：

秋水仙堿提取的單因素試驗：

通過上述試驗對提取溫度、提取時間及料液比3個因素進行了初步確定，結果如下：

由圖4可知，溫度在80-85℃，溶劑中秋水仙堿的含量隨溫度升高而升高；當溫度超過85℃后，提取率反而逐漸減少，這可能與高溫條件下秋水仙堿的分解有關。故初步確定黃花菜秋水仙堿提取最佳溫度選85℃為宜。

由圖5可知，提取時間為2-8h時，溶劑中秋水仙堿含量隨提取時間增加而增加，當提取時間超過8h后，秋水仙堿含量反而有所下降，這可能是高溫條件下溶劑長時間的提取，部分秋水仙堿開始降解，再加之溶劑揮發(fā)較多，影響提取效果導致，故初定最佳提取時間選8h。

由圖6可知，秋水仙堿的提取率隨料液比的增大而增大，提取溶劑比例較小(1：4，1：6)時，秋水仙堿提取率較低，原因可能是所用乙醇量少，未能與樣品充分接觸。當料液比高于1：8后，秋水仙堿提取率雖仍在提高，但變化不明顯，初定1：8為提取秋水仙堿的最佳料液比。

正交試驗結果

根據(jù)單因素試驗結果，正交設計L9(34)對影響秋水仙堿提取效果的4個因素進行正交試驗，各設置3個水平，每個水平兩次重復，將結果進行方差分析，結果如下。

表2正交試驗表

表3正交結果分析表

注：Kn表示以n水平試驗的秋水仙堿含量之和；Xn為以n水平試驗的秋水仙堿含量之和的平均值；R為極差。

表4正交設計方差分析表

表5各處理平均數(shù)間多重比較

表3中極差Rc>Ra>Rb，表明料液比是影響秋水仙堿提取的主要因素，其次是提取溫度和提取時間。表4中對A、B、C三因素效應進行F檢測，結果表明3個因素均達極顯著，且A>B>C，這與直觀分析的結果不一致，說明三個因素間有交互作用。表5中對各處理平均數(shù)之間進行多重比較，表明A因素最優(yōu)水平為A2，B因素最優(yōu)水平為B3，C因素最優(yōu)水平為C2。故本試驗最優(yōu)處理組合為A2B3C2，即黃花菜中秋水仙堿提取條件為：溫度85℃，提取時間8h，料液比1：8。

顯然本發(fā)明具體實現(xiàn)并不受上述方式的限制，只要采用了本發(fā)明的方法構思和技術方案進行的各種非實質(zhì)性的改進，或未經(jīng)改進將本發(fā)明的構思和技術方案直接應用于其它場合的，均在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。