本發(fā)明涉及苯并噻唑酮化合物、其制備、其作為β-2腎上腺受體激動(dòng)劑的醫(yī)療用途并且涉及包含其的藥物、藥物組合物及組合。為β-2-腎上腺受體激動(dòng)劑的苯并噻唑酮化合物描述于WO2004/16601和WO2006/056471中。WO2005/110990也將苯并-稠合的雜環(huán)描述為β-2激動(dòng)劑。盡管β-2激動(dòng)劑一直以來由于其支氣管擴(kuò)張性質(zhì)為人所知，但是它們還因其產(chǎn)生骨骼肌肥大的能力而為人所知。很多研究已關(guān)注β-2激動(dòng)劑的合成代謝性質(zhì)的治療應(yīng)用，用于減輕肌肉萎縮和改善肌肉功能。但是，這類化合物也與不期望的副作用相關(guān)，包括不良心血管相關(guān)事件的風(fēng)險(xiǎn)增加。因此，迄今為止β-2激動(dòng)劑在肌肉萎縮疾病中的用途已受心臟肥大和可能對心血管功能的潛在有害作用的限制。需要提供為良好候選藥物的新β-2激動(dòng)劑。特別地，新β-2激動(dòng)劑應(yīng)有效地結(jié)合β-2腎上腺受體，同時(shí)對其它受體如例如β-1腎上腺受體、α-1A腎上腺受體或5HT2C受體顯示極小的親合力，并且顯示作為激動(dòng)劑的功能活性。其應(yīng)該是代謝穩(wěn)定的并且具有有利的藥動(dòng)學(xué)性質(zhì)。其應(yīng)該是無毒的并且展示極少的副作用，特別是比已知上市β-2激動(dòng)劑如例如福莫特羅更少的心臟副作用。而且，理想的候選藥物將以穩(wěn)定的、不吸濕的且容易配制的物理形態(tài)存在。本發(fā)明化合物為選擇性β-2激動(dòng)劑。特別地，其顯示相較于已知β-2激動(dòng)劑如福莫特羅而言增加的對β-2腎上腺受體的親合力，這大于它對β-1腎上腺受體或α-1A腎上腺受體的親合力。令人驚訝的是，它還顯示與其外消旋物或其相應(yīng)的對映異構(gòu)體相比而言對血清素受體(5HT2C)較低的親合力和在表達(dá)5HT2c的細(xì)胞中較低的功能效力，這表明它不影響可能導(dǎo)致體重降低、可能抵消β-2激動(dòng)劑誘導(dǎo)的骨骼肌肥大的運(yùn)動(dòng)活性和食物攝取。5HT2c受體激動(dòng)劑對能量攝取和體重的負(fù)面影響由J.Halford和J.Harrold在HandbExpPharmacol.2012；(209)349-56中描述。因此，本發(fā)明化合物可潛在用于治療各種病癥，特別地用于治療或預(yù)防肌肉萎縮疾病(musclewastingdisease)如肌肉營養(yǎng)不良、廢用相關(guān)萎縮、惡病質(zhì)或肌肉減少癥。惡病質(zhì)的治療也是所考慮的用途。所有形式的惡病質(zhì)可用本發(fā)明化合物治療，例如包括癌癥惡病質(zhì)。在本發(fā)明的第一方面，因此提供乙酸鹽形式的式(I)化合物，其為本發(fā)明化合物為(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮乙酸鹽。以下為本發(fā)明的實(shí)施方案：實(shí)施方案1：根據(jù)本發(fā)明的第一方面的化合物。實(shí)施方案2：化合物，其為(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮乙酸鹽。實(shí)施方案3：藥物組合物，其包含藥學(xué)有效量的根據(jù)實(shí)施方案1或2的化合物和一種或多種藥學(xué)上可接受的載體。實(shí)施方案4：根據(jù)實(shí)施方案3的藥物組合物，其中所述藥學(xué)上可接受的載體之一為苯甲醇。實(shí)施方案5：組合，其包含藥學(xué)有效量的根據(jù)實(shí)施方案1或2的化合物和一種或多種治療活性助劑。實(shí)施方案6：治療或預(yù)防肌肉營養(yǎng)不良、廢用相關(guān)萎縮、惡病質(zhì)或肌肉減少癥的方法，其包括向需要其的對象施用藥學(xué)有效量的根據(jù)實(shí)施方案1或2的化合物。實(shí)施方案7：根據(jù)實(shí)施方案6的方法，其中所述化合物通過皮下輸注或注射施用。實(shí)施方案8：根據(jù)實(shí)施方案1或2的化合物，其用作藥物。實(shí)施方案9：根據(jù)實(shí)施方案1或2的化合物，其用于治療或預(yù)防肌肉營養(yǎng)不良、廢用相關(guān)萎縮、惡病質(zhì)或肌肉減少癥。實(shí)施方案10：根據(jù)實(shí)施方案1或2的化合物在制備用于治療或預(yù)防肌肉營養(yǎng)不良、廢用相關(guān)萎縮、惡病質(zhì)或肌肉減少癥的藥物中的用途。實(shí)施方案11：用于制備乙酸鹽形式的式(I)化合物的方法，其包括以下步驟：a)使游離形式或藥學(xué)上可接受鹽形式的式(IIa)化合物與2-(4-丁氧基-苯基)-1,1-二甲基-乙胺反應(yīng)，其中Ra和Rb為保護(hù)基；b)使任選存在的保護(hù)基斷裂；c)回收如此可得的乙酸鹽形式的式(I)化合物。實(shí)施方案12：根據(jù)實(shí)施方案11的用于制備乙酸鹽形式的式(I)化合物的方法，其中化合物(IIa)通過游離形式或藥學(xué)上可接受鹽形式的式(IIIa)化合物與堿和任選的相轉(zhuǎn)移催化劑的反應(yīng)而獲得，其中Ra和Rb為保護(hù)基且LG是離去基團(tuán)。實(shí)施方案13：根據(jù)實(shí)施方案12的方法，其中所述堿為碳酸鉀。實(shí)施方案14：根據(jù)實(shí)施方案13的方法，其中所述堿為氫氧化鈉。實(shí)施方案15：根據(jù)實(shí)施方案12至14中任一項(xiàng)的方法，其中所述相轉(zhuǎn)移催化劑為四丁基碘化銨。實(shí)施方案16：根據(jù)實(shí)施方案12至15的用于制備乙酸鹽形式的式(I)化合物的方法，其中化合物(IIIa)通過游離形式或藥學(xué)上可接受鹽形式的式(IVa-2)化合物的立體選擇性還原而獲得，其中Ra和Rb為保護(hù)基且LG是離去基團(tuán)。實(shí)施方案17：根據(jù)實(shí)施方案16的方法，其中所述立體選擇性還原用[N-[(1S,2S)-2-(氨基-κN)-1,2-二苯基乙基]-4-甲基苯磺酰胺合-κN]氯[(1,2,3,4,5,6-η)-1-甲基-4-(1-甲基乙基)苯]-釕(RuCl(對甲基異丙基苯)[(S,S)-Ts-DPEN])進(jìn)行。實(shí)施方案18：根據(jù)實(shí)施方案16或17的方法，其中LG為氯。實(shí)施方案19：根據(jù)實(shí)施方案18的方法，其中游離形式或藥學(xué)上可接受鹽形式的化合物(IVa’-2)通過游離形式或藥學(xué)上可接受鹽形式的式(Va)化合物與2-氯-N-甲氧基-N-甲基-乙酰胺在強(qiáng)堿存在下的反應(yīng)而獲得，其中Ra和Rb為保護(hù)基且Hal為鹵素。實(shí)施方案20：根據(jù)實(shí)施方案19的方法，其中所述強(qiáng)堿為叔丁基鋰。實(shí)施方案21：用于制備乙酸鹽形式的式(I)化合物的方法，其包括以下步驟：a)使游離形式或藥學(xué)上可接受鹽形式的式(IIIa)化合物與2-(4-丁氧基-苯基)-1，1-二甲基-乙胺反應(yīng)，其中Ra和Rb為保護(hù)基且LG是離去基團(tuán)；b)使仍存在的任何保護(hù)基斷裂；c)回收如此可得的乙酸鹽形式的式(I)化合物。實(shí)施方案22：根據(jù)實(shí)施方案21的方法，其中LG為氯或?qū)?甲苯磺?；?shí)施方案23：根據(jù)實(shí)施方案11至22中任一項(xiàng)的方法，其中Ra為叔丁基。實(shí)施方案24：根據(jù)實(shí)施方案11至23中任一項(xiàng)的方法，其中Rb為異丙基。附圖簡述圖1顯示用福莫特羅vs(相對)化合物A(本發(fā)明化合物)注射的大鼠中的骨骼肌質(zhì)量和心臟質(zhì)量增加-(數(shù)值表示為平均±SEM(n＝5-6)；骨骼肌群(腓腸肌-比目魚肌-脛骨肌)通過初始體重標(biāo)準(zhǔn)化；心臟重量通過腦重量標(biāo)準(zhǔn)化。圖2a顯示當(dāng)使用福莫特羅vs化合物A(本發(fā)明化合物)時(shí)離體兔竇房結(jié)的搏動(dòng)率的增加。圖2b顯示當(dāng)使用福莫特羅vs化合物A(本發(fā)明化合物)時(shí)離體兔心臟的起搏器活動(dòng)的增加。圖3a和3b分別顯示皮下快速濃注化合物A(本發(fā)明化合物)或福莫特羅后大鼠的心率變化。圖3c比較施用福莫特羅vs化合物A(本發(fā)明化合物)時(shí)大鼠的平均心率變化。圖4a和4b分別顯示恒河猴在皮下快速濃注化合物A(本發(fā)明化合物)或福莫特羅后的心率變化。圖5顯示結(jié)晶游離堿化合物A(本發(fā)明化合物)的X射線粉末衍射圖。圖6顯示化合物A(本發(fā)明化合物)的結(jié)晶乙酸鹽的X射線粉末衍射圖。圖7顯示化合物A(本發(fā)明化合物)的結(jié)晶羥乙酸鹽的X射線粉末衍射圖。除非另有指明，否則術(shù)語“本發(fā)明的化合物”、“本發(fā)明化合物”或“化合物A”是指式(I)化合物、所述化合物的鹽、所述化合物或鹽的水合物或溶劑化物、以及互變異構(gòu)體和同位素標(biāo)記的化合物(包括氘取代)。本發(fā)明化合物進(jìn)一步包含式(I)化合物及其鹽的多晶型物。如本文所使用，術(shù)語“鹵素”或“鹵代”是指氟、氯、溴和碘。如本文所使用，絕對立體化學(xué)根據(jù)Cahn-lngold-PrelogR-S系統(tǒng)來指定。當(dāng)化合物為純對映異構(gòu)體時(shí)，各手性碳上的立體化學(xué)可以用R或S來指定。根據(jù)其在鈉D線波長下對平面偏振光的旋轉(zhuǎn)方向(右旋或左旋)，其絕對構(gòu)型未知的已拆分化合物可以被指定為(+)或(-)?；衔锏娜魏尾粚ΨQ原子(例如碳等)可以以外消旋或?qū)τ钞悩?gòu)體富集的構(gòu)型例如(R)-、(S)-或(R,S)-構(gòu)型存在。立體異構(gòu)體的外消旋50:50混合物分別通過(R)至(S)或(S)至(R)形式的對映異構(gòu)體過量被指定為(R,S)和對映異構(gòu)體富集形式。對映異構(gòu)體過量通常由方程式ee＝((m1-m2)/(m1+m2))*100％表示，其中m1和m2表示各自對映異構(gòu)體形式R和S的質(zhì)量。本發(fā)明化合物含有一個(gè)不對稱中心，其關(guān)于絕對立體化學(xué)被定義為(R)。其相應(yīng)的對映異構(gòu)體被定義為(S)，其為活性較低形式。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，不對稱原子在(R)-構(gòu)型中具有至少95、98或99％對映異構(gòu)體過量。因此在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，提供至少95％對映異構(gòu)體過量的(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮乙酸鹽。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，提供至少98％對映異構(gòu)體過量的(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮乙酸鹽。在本發(fā)明的又一個(gè)實(shí)施方案中，提供至少99％對映異構(gòu)體過量的(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮乙酸鹽。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，提供包含治療有效量的(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮乙酸鹽和一種或多種藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物，其中所述(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮乙酸鹽以至少95％對映異構(gòu)體過量存在。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，提供包含治療有效量的(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮乙酸鹽和一種或多種藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物，其中所述(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮乙酸鹽以至少98％對映異構(gòu)體過量存在。在本發(fā)明的又一個(gè)實(shí)施方案中，提供包含治療有效量的(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮乙酸鹽和一種或多種藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物，其中所述(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮乙酸鹽以至少99％對映異構(gòu)體過量存在。取決于起始材料的選擇和化學(xué)合成的方法，化合物可以以一種可能異構(gòu)體的形式或作為其混合物、例如作為純光學(xué)異構(gòu)體、或作為異構(gòu)體混合物如外消旋物存在。光學(xué)活性的(R)-和(S)-異構(gòu)體可使用手性合成子或手性試劑制備，或使用常規(guī)技術(shù)拆分。意欲包括本發(fā)明化合物的所有互變異構(gòu)形式。因此，如本文所使用，本發(fā)明化合物可以呈互變異構(gòu)體或其混合物的形式。任何所生成的最終產(chǎn)品或合成中間體的外消旋物可通過已知方法、例如通過分離用光學(xué)活性的酸或堿獲得的其非對映異構(gòu)的鹽并釋放光學(xué)活性的酸性或堿性化合物，被拆分成光學(xué)對映體。特別地，因此，例如通過與光學(xué)活性的酸形成的鹽的分步結(jié)晶，堿性部分可用于將本發(fā)明化合物拆分為光學(xué)對映體，所述光學(xué)活性的酸例如酒石酸、二苯甲?；剖帷⒍阴；剖帷⒍?O,O'-對甲苯?；剖?、扁桃酸、蘋果酸或樟腦-10-磺酸。外消旋或?qū)τ钞悩?gòu)體富集的產(chǎn)品也可通過手性色譜法例如高效液相色譜法(HPLC)、使用手性吸附劑來拆分。如本文所使用，術(shù)語“鹽”是指本發(fā)明化合物的酸加成或堿加成鹽?！胞}”特別包括“藥學(xué)上可接受的鹽”。術(shù)語“藥學(xué)上可接受的鹽”是指保留本發(fā)明化合物的生物有效性和性質(zhì)并且通常不是生物學(xué)上或在其它方面不期望的鹽。本發(fā)明的式I化合物由于側(cè)鏈中堿性氨基的存在能夠與所定義的酸形成特征鹽。其也由于雜環(huán)部分中兩個(gè)酸性基團(tuán)(苯酚；噻唑酮環(huán))的存在能夠與所定義的酸形成特征鹽。藥學(xué)上可接受的酸加成鹽可與無機(jī)酸和有機(jī)酸形成，例如乙酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、溴化物/氫溴酸鹽、碳酸氫鹽/碳酸鹽、硫酸氫鹽/硫酸鹽、樟腦磺酸鹽、氯化物/鹽酸鹽、氯茶堿鹽(chlortheophyllonate)、檸檬酸鹽、乙二磺酸鹽、富馬酸鹽、葡萄糖庚酸鹽、葡萄糖酸鹽、葡糖醛酸鹽、羥乙酸鹽、馬尿酸鹽、氫碘酸鹽/碘化物、羥乙磺酸鹽、乳酸鹽、乳糖醛酸鹽、月桂基硫酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、丙二酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、甲基硫酸鹽、萘甲酸鹽、萘磺酸鹽、煙酸鹽、硝酸鹽、十八酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、撲酸鹽、磷酸鹽/磷酸氫鹽/磷酸二氫鹽、聚半乳糖醛酸鹽、丙酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、磺基水楊酸鹽、酒石酸鹽、甲苯磺酸鹽和三氟乙酸鹽。提供了乙酸鹽、苯甲酸鹽、樟腦酸鹽、富馬酸鹽、羥乙酸鹽、乳酸鹽、丙二酸鹽、甲磺酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽或昔萘酸鹽(xinafoate)形式的(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮。本發(fā)明涉及乙酸鹽形式的(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮。提供了羥乙酸鹽形式的(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮?？梢杂善溲苌玫禁}的無機(jī)酸包括例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等?？梢杂善溲苌玫禁}的有機(jī)酸包括例如乙酸、丙酸、羥乙酸、草酸、馬來酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、磺基水楊酸等。藥學(xué)上可接受的堿加成鹽可與無機(jī)堿和有機(jī)堿形成?？梢杂善溲苌玫禁}的無機(jī)堿包括例如銨鹽和周期表的I至XII族的金屬。在某些實(shí)施方案中，鹽衍生自鈉、鉀、銨、鈣、鎂和鐵；特別適合的鹽包括銨、鉀、鈉、鈣和鎂鹽?？梢杂善溲苌玫禁}的有機(jī)堿包括例如伯胺、仲胺和叔胺，取代的胺包括天然存在的取代的胺、環(huán)胺、堿性離子交換樹脂等。某些有機(jī)胺包括異丙基胺、芐星青霉素(benzathine)、膽堿鹽(cholinate)、二乙醇胺、二乙胺、賴氨酸、葡甲胺、哌嗪和氨丁三醇。本發(fā)明的藥學(xué)上可接受的鹽可由堿性或酸性部分、通過常規(guī)化學(xué)方法合成。通常，此類鹽可通過使化合物的游離酸形式與化學(xué)計(jì)算量的適合的堿(如Na、Ca、Mg或K氫氧化物、碳酸鹽、碳酸氫鹽等)反應(yīng)或通過使化合物的游離堿形式與化學(xué)計(jì)算量的適合的酸反應(yīng)來制備。此類反應(yīng)通常是在水中或者在有機(jī)溶劑中或者在兩者的混合物中進(jìn)行。通常，當(dāng)適合時(shí)，應(yīng)用非水介質(zhì)如醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈是期望的。另外適合的鹽的列表可見于例如“Remington'sPharmaceuticalSciences”,第20版，MackPublishingCompany,Easton,Pa.,(1985)；和Stahl和Wermuth的“HandbookofPharmaceuticalSalts：Properties,Selection,andUse”(Wiley-VCH,Weinheim,Germany,第二修訂版，2011)中。而且，本發(fā)明化合物、包括其鹽也可以以其水合物形式獲得，或包括其它用于其結(jié)晶的溶劑。本發(fā)明化合物可固有地或通過設(shè)計(jì)與藥學(xué)上可接受的溶劑(包括水)形成溶劑化物；因此，本發(fā)明意指包括溶劑化的和非溶劑化的形式。術(shù)語“溶劑化物”是指本發(fā)明化合物(包括其藥學(xué)上可接受的鹽)與一種或多種溶劑分子的分子復(fù)合物。此類溶劑分子是藥學(xué)領(lǐng)域中常用的那些，已知其對受者是無害的，例如水、乙醇等。術(shù)語“水合物”是指其中溶劑分子是水的復(fù)合物。本發(fā)明化合物、包括其鹽、水合物和溶劑化物，可固有地或通過設(shè)計(jì)形成多晶型物。提供了結(jié)晶形式的(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，提供結(jié)晶形式的(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮乙酸鹽。提供了結(jié)晶形式的(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮羥乙酸鹽。提供了基本上純形式的結(jié)晶(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，提供基本上純形式的結(jié)晶(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮乙酸鹽。提供了基本上純形式的結(jié)晶(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮羥乙酸鹽。如本文所使用，“基本上純的”當(dāng)關(guān)于結(jié)晶(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮或其藥學(xué)上可接受的鹽使用時(shí)，意指基于化合物或其藥學(xué)上可接受鹽的重量，具有大于90重量％的純度，包括大于90、91、92、93、94、95、96、97、98和99重量％，并且也包括等于約100重量％的(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮。反應(yīng)雜質(zhì)和/或處理雜質(zhì)的存在可通過本領(lǐng)域已知的分析技術(shù)來測定，如例如色譜法、核磁共振光譜法、質(zhì)譜法或紅外光譜法。本公開涉及(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮的結(jié)晶形式，其在使用CuKα輻射測量時(shí)的X射線粉末衍射圖含有至少一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)具有選自8.5、13.3、13.9、14.4、15.2、17.2、17.5、18.1、21.3和22.5°的折射角2theta(θ)值的峰，更特別地其中所述值為加或減0.2°2θ。在一個(gè)實(shí)施方案中，本公開涉及(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮的結(jié)晶形式，其在使用CuKα輻射測量時(shí)的X射線粉末衍射圖含有在15.2°的折射角2θ值處的峰，更特別地其中所述值為加或減0.2°2θ。在一個(gè)實(shí)施方案中，本公開涉及(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮的結(jié)晶形式，其在使用CuKα輻射測量時(shí)的X射線粉末衍射圖含有在18.1°的折射角2θ值處的峰，更特別地其中所述值為加或減0.2°2θ。在一個(gè)實(shí)施方案中，本公開涉及(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮的結(jié)晶形式，其在使用CuKα輻射測量時(shí)的X射線粉末衍射圖含有在22.5°的折射角2θ值處的峰，更特別地其中所述值為加或減0.2°2θ。在一個(gè)實(shí)施方案中，本公開涉及(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮的結(jié)晶形式，其在使用CuKα輻射測量時(shí)的X射線粉末衍射圖與圖5所示的X射線粉末衍射圖基本上相同。對于細(xì)節(jié)參見實(shí)施例5。在另一方面，本發(fā)明涉及(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮的乙酸鹽的結(jié)晶形式，其在使用CuKα輻射測量時(shí)的X射線粉末衍射圖含有至少一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)具有選自8.8、11.5、16.4、17.6、18.2、19.6、20.1、20.8和21.1°的折射角2theta(θ)值的峰，更特別地其中所述值為加或減0.2°2θ。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮的乙酸鹽的結(jié)晶形式，其在使用CuKα輻射測量時(shí)的X射線粉末衍射圖含有在8.8°的折射角2θ值處的峰，更特別地其中所述值為加或減0.2°2θ。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮的乙酸鹽的結(jié)晶形式，其在使用CuKα輻射測量時(shí)的X射線粉末衍射圖含有在16.4°的折射角2θ值處的峰，更特別地其中所述值為加或減0.2°2θ。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮的乙酸鹽的結(jié)晶形式，其在使用CuKα輻射測量時(shí)的X射線粉末衍射圖含有在20.8°的折射角2θ值處的峰，更特別地其中所述值為加或減0.2°2θ。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮的乙酸鹽的結(jié)晶形式，其在使用CuKα輻射測量時(shí)的X射線粉末衍射圖與圖6所示的X射線粉末衍射圖基本上相同。對于細(xì)節(jié)參見實(shí)施例6。在又一方面，本公開涉及(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮的羥乙酸鹽的結(jié)晶形式，其在使用CuKα輻射測量時(shí)的X射線粉末衍射圖含有至少一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)具有選自8.7、11.6、16.1、18.0、19.8、20.7和21.1°的折射角2theta(θ)值的峰，更特別地其中所述值為加或減0.2°2θ。在一個(gè)實(shí)施方案中，本公開涉及(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮的羥乙酸鹽的結(jié)晶形式，其在使用CuKα輻射測量時(shí)的X射線粉末衍射圖含有在18.0°的折射角2θ值處的峰，更特別地其中所述值為加或減0.2°2θ。在一個(gè)實(shí)施方案中，本公開涉及(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮的羥乙酸鹽的結(jié)晶形式，其在使用CuKα輻射測量時(shí)的X射線粉末衍射圖含有在19.8°的折射角2θ值處的峰，更特別地其中所述值為加或減0.2°2θ。在一個(gè)實(shí)施方案中，本公開涉及(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮的羥乙酸鹽的結(jié)晶形式，其在使用CuKα輻射測量時(shí)的X射線粉末衍射圖含有在20.7°的折射角2θ值處的峰，更特別地其中所述值為加或減0.2°2θ。在一個(gè)實(shí)施方案中，本公開涉及(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮的羥乙酸鹽的結(jié)晶形式，其在使用CuKα輻射測量時(shí)的X射線粉末衍射圖與圖7所示的X射線粉末衍射圖基本上相同。對于細(xì)節(jié)參見實(shí)施例7。關(guān)于X射線衍射峰位置的術(shù)語“基本上相同”意指考慮典型的峰位置和強(qiáng)度變異性。例如，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，峰位置(2θ)將顯示一些儀器間變異性，通常高達(dá)0.2°。此外，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，相對峰強(qiáng)度將顯示儀器間變異性以及由于結(jié)晶度、優(yōu)選取向、所制備樣品表面和其它本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的因素導(dǎo)致的變異性，并且應(yīng)僅視為定性量度。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員也應(yīng)理解，X射線衍射圖的獲得具有測量誤差，其取決于所用的測量條件。特別地，眾所周知的是X射線衍射圖的強(qiáng)度可隨所用測量條件波動(dòng)。應(yīng)進(jìn)一步理解，相對強(qiáng)度也可隨實(shí)驗(yàn)條件變化，并且因此，不應(yīng)考慮準(zhǔn)確的強(qiáng)度次序。此外，常規(guī)X射線衍射圖的衍射角的測量誤差通常約5％或更小，并且應(yīng)考慮這種測量誤差程度與前述衍射角有關(guān)。因此，應(yīng)理解，本公開的晶體形式并不限于提供與本文公開的附圖5、6和7中描述的X射線衍射圖完全相同的X射線衍射圖的晶體形式。提供與附圖5、6和7中公開的X射線衍射圖基本相同的X射線衍射圖的任何晶體形式屬于本公開的范圍之內(nèi)。確定X射線衍射圖的基本同一性的能力在本領(lǐng)域普通技術(shù)人員的范圍之內(nèi)。依據(jù)本發(fā)明的藥學(xué)上可接受的溶劑化物包括其中結(jié)晶溶劑可被同位素取代的那些，例如D2O、d6-丙酮、d6-DMSO。本文給出的通式也意圖表示化合物的未標(biāo)記形式和同位素標(biāo)記的形式。同位素標(biāo)記的本發(fā)明化合物具有由本文給出的通式描述的結(jié)構(gòu)，除了一個(gè)或多個(gè)原子被具有所選原子質(zhì)量或質(zhì)量數(shù)的原子替換之外。可摻入本發(fā)明化合物中的同位素的實(shí)例包括氫、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，分別如2H、3H、11C、13C、14C、15N、18F、31P、32P、35S、36Cl、125I。本發(fā)明包括各種同位素標(biāo)記的如本文定義的化合物，例如存在放射性同位素如3H和14C的那些、或存在非放射性同位素如2H和13C的那些。此類同位素標(biāo)記的化合物可用于代謝研究(用14C)、反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究(用例如2H或3H)、檢測或成像技術(shù)如正電子發(fā)射斷層攝影術(shù)(PET)或單光子發(fā)射計(jì)算機(jī)斷層攝影術(shù)(SPECT)，包括藥物或底物組織分布測定，或用于放射性治療患者。特別地，18F或標(biāo)記的化合物可特別地適于PET或SPECT研究。同位素標(biāo)記的式(I)化合物一般可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)技術(shù)或通過類似于隨附實(shí)施例中描述的那些方法、使用適當(dāng)?shù)耐凰貥?biāo)記的試劑代替先前所用的非標(biāo)記試劑來制備。此外，用較重的同位素、特別地是氘(即2H或D)取代可提供由更好的代謝穩(wěn)定性產(chǎn)生的某些治療優(yōu)勢，例如增加的體內(nèi)半衰期或降低的劑量需求或治療指數(shù)有所改善。應(yīng)理解，氘在這種意義上被視為式(I)化合物的取代基。此類較重同位素、特別是氘的濃度可通過同位素富集因子來定義。如本文所使用的術(shù)語“同位素富集因子”意指同位素豐度和指定同位素的天然豐度之間的比例。如果本發(fā)明化合物中的取代基記為氘，則對于每個(gè)指定的氘原子，此類化合物的同位素富集因子為至少3500(在每個(gè)指定的氘原子，52.5％氘摻入)、至少4000(60％氘摻入)、至少4500(67.5％氘摻入)、至少5000(75％氘摻入)、至少5500(82.5％氘摻入)、至少6000(90％氘摻入)、至少6333.3(95％氘摻入)、至少6466.7(97％氘摻入)、至少6600(99％氘摻入)或至少6633.3(99.5％氘摻入)。本發(fā)明化合物能夠與適合的共晶形成劑(former)形成共晶。這些共晶可由式(I)化合物、通過已知的共晶形成方法制備。此類方法包括研磨、加熱、共升華、共熔或在溶液中使式(I)化合物與共晶形成劑在結(jié)晶條件下接觸并分離由此形成的共晶。適合的共晶形成劑包括描述于WO2004/078163中的那些。因此本發(fā)明還提供包含式(I)化合物的共晶。如本文所使用，術(shù)語“藥學(xué)上可接受的載體”包括任何和所有溶劑、分散介質(zhì)、包衣材料、表面活性劑、抗氧化劑、防腐劑(例如抗菌劑、抗真菌劑)、等滲劑、吸收延遲劑、鹽、防腐劑、藥物穩(wěn)定劑、粘合劑、賦形劑、崩解劑、潤滑劑、甜味劑、矯味劑、染料等及其組合，其對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是已知的(參見例如Remington'sPharmaceuticalSciences，第18版MackPrintingCompany,1990,第1289-1329頁)。任何常規(guī)載體，除了與活性成分不相容的以外，涵蓋其在治療或藥物組合物中的使用。本發(fā)明化合物的術(shù)語“治療有效量”是指將引起對象生物學(xué)或醫(yī)學(xué)響應(yīng)的本發(fā)明化合物的量，例如降低或抑制酶或蛋白質(zhì)活性、或減輕癥狀、緩解疾患、減慢或延遲疾病進(jìn)展、或預(yù)防疾病等。在一個(gè)非限制性實(shí)施方案中，術(shù)語“治療有效量”是指如下的本發(fā)明化合物的量，當(dāng)將其施用至對象時(shí)，其有效地(1)至少部分緩解、抑制、預(yù)防和/或減輕與β-2-腎上腺受體活性相關(guān)的疾患或病癥或疾病；或(2)增加或提升β-2-腎上腺受體的活性。在另一個(gè)非限制性實(shí)施方案中，術(shù)語“治療有效量”是指如下的本發(fā)明化合物的量，當(dāng)將其施用至細(xì)胞或組織或非細(xì)胞生物材料或培養(yǎng)基時(shí)，其有效地至少部分增加或提升β-2-腎上腺受體的活性。在上面實(shí)施方案中對于β-2-腎上腺受體所闡明的術(shù)語“治療有效量”的含義還以相同方式適用于任何其它相關(guān)的蛋白質(zhì)/肽/酶如IGF-1模擬物或ActRIIB/肌抑素(myostatin)阻滯劑等。如本文所使用，術(shù)語“對象”是指動(dòng)物。通常，所述動(dòng)物是哺乳動(dòng)物。對象還指例如靈長類動(dòng)物(例如人、雄性或雌性)、牛、綿羊、山羊、馬、狗、貓、兔、大鼠、小鼠、魚、鳥等。在某些實(shí)施方案中，對象是靈長類動(dòng)物。在另外其它實(shí)施方案中，所述對象是人。如本文所使用，術(shù)語“抑制”是指降低或遏抑給定疾病、癥狀或病癥或疾病、或者顯著降低生物學(xué)活性或過程的基線活性。如本文所使用，術(shù)語“治療”任何疾病或病癥在一個(gè)實(shí)施方案中是指減輕所述疾病或病癥(即減慢或停止或減低所述疾病或其至少一種臨床癥狀的發(fā)展)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，“治療”是指緩解或減輕至少一個(gè)生理參數(shù)，包括不可被患者辨別的那些。在又一個(gè)實(shí)施方案中，“治療”是指在身體上(例如可辨別癥狀的穩(wěn)定)、生理學(xué)上(例如身體參數(shù)的穩(wěn)定)或在兩者上調(diào)節(jié)疾病或病癥。在又一個(gè)實(shí)施方案中，“治療”是指預(yù)防或延遲疾病或病癥的發(fā)作或發(fā)展或進(jìn)展。如本文所使用，如果對象將在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)或生活質(zhì)量方面從此類治療受益，則對象“需要”治療。如本文所使用，在本發(fā)明中(尤其在權(quán)利要求中)使用的術(shù)語“一個(gè)”、“一種”、“所述”和類似的術(shù)語被理解為包括單數(shù)和復(fù)數(shù)，除非本文中另外特別指出或根據(jù)上下文明顯矛盾。本文中描述的所有方法可以以任何適合的順序進(jìn)行，除非本文中另外特別指出或根據(jù)上下文明顯矛盾。本文提供的任何和所有實(shí)例或示例性語言(例如“如”)的使用僅旨在更好地闡明本發(fā)明，而不對要求保護(hù)的本發(fā)明的范圍進(jìn)行任何限制。式(I)化合物可根據(jù)下文提供的流程制備：以下更詳細(xì)地描述方法步驟。步驟1：使其中Hal表示鹵素且Ra為保護(hù)基的式(VIa)化合物與其中Rb為保護(hù)基的式RbOH的化合物在適合的堿例如三乙胺存在下反應(yīng)，以得到其中Hal表示鹵素且Ra和Rb為保護(hù)基的式(Va)化合物。步驟2：使式(Va)化合物與適合的強(qiáng)堿例如叔丁基鋰、在適合的溶劑例如四氫呋喃(THF)中、在適合的羰基化試劑例如適合的酰胺存在下反應(yīng)，以得到其中Ra和Rb為保護(hù)基且Rc是氫或任何衍生自羰基化試劑的部分的式(IVa)化合物。步驟3：式(IVa)化合物在立體選擇性轉(zhuǎn)化之前被任選官能化，以得到其中Ra和Rb為保護(hù)基且LG是離去基團(tuán)的式(IIIa)化合物。步驟4：使式(IIIa)化合物用適合的堿例如碳酸氫鈉處理，以得到其中Ra和Rb為保護(hù)基的式(IIa)化合物。步驟5：使式(IIa)或(IIIa)的化合物與2-(4-丁氧基-苯基)-1,1-二甲基-乙胺在適合的溶劑例如甲苯中、任選地在適合的堿例如碳酸鉀存在下反應(yīng)，接著在適合的酸例如鹽酸存在下脫保護(hù)，以得到式(I)化合物。在另一方面，本發(fā)明涉及用于制備乙酸鹽形式的式(I)化合物的方法，其包括a)使游離形式或藥學(xué)上可接受鹽形式的式(IIa)化合物與2-(4-丁氧基-苯基)-1,1-二甲基-乙胺反應(yīng)，其中Ra和Rb為保護(hù)基；b)使仍存在的任何保護(hù)基斷裂；c)回收如此可得的乙酸鹽形式的式(I)化合物。在另一方面，本發(fā)明涉及用于制備乙酸鹽形式的式(I)化合物的方法，其包括以下步驟：a)使游離形式或藥學(xué)上可接受鹽形式的式(IIIa)化合物與2-(4-丁氧基-苯基)-1,1-二甲基-乙胺反應(yīng)，其中Ra和Rb為保護(hù)基且LG是離去基團(tuán)；b)使仍存在的任何保護(hù)基斷裂；c)回收如此可得的乙酸鹽形式的式(I)化合物。在另一方面，本公開涉及用于制備游離形式或藥學(xué)上可接受鹽形式的式(IIIa)化合物的方法，其包括立體選擇性還原游離形式或藥學(xué)上可接受鹽形式的式(IVa-2)化合物，其中Ra和Rb為保護(hù)基且LG是離去基團(tuán)，以得到游離形式或藥學(xué)上可接受鹽形式的式(IIIa)化合物。在本發(fā)明或本公開的方法中，典型保護(hù)基包括異丙基、叔丁基、叔丁基二甲基甲硅烷基。在本發(fā)明或本公開的方法中，典型的離去基團(tuán)包括氯化物、對甲苯磺?；寤?、甲烷磺?；⒈交酋；?、碘化物。反應(yīng)可根據(jù)常規(guī)方法、例如如實(shí)施例中描述來實(shí)現(xiàn)。反應(yīng)混合物的后處理和由此獲得的化合物的純化可依據(jù)已知方法進(jìn)行。酸加成鹽可由游離堿以已知方式生成，反之亦然。式(I)化合物也可通過其它常規(guī)方法例如如實(shí)施例中描述的方法來制備，所述方法為本發(fā)明的其它方面。所用的起始材料是已知的或可根據(jù)常規(guī)方法從已知化合物開始制備，例如如實(shí)施例中所描述。本發(fā)明進(jìn)一步包括本發(fā)明方法的任何變型，其中在其任何階段可獲得的中間產(chǎn)物用作起始材料并且進(jìn)行剩余的步驟，或其中起始材料在反應(yīng)條件下原位形成，或其中以其鹽或光學(xué)純材料的形式使用反應(yīng)組分。本發(fā)明化合物和中間體也可根據(jù)對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言眾所周知的方法彼此轉(zhuǎn)化。在另一方面，本公開涉及游離形式或藥學(xué)上可接受鹽形式的式(IIa)化合物，其中Ra和Rb為保護(hù)基。Ra和Rb可獨(dú)立地選自叔丁基、異丙基和叔丁基二甲基甲硅烷基。一方面，Ra是叔丁基。一方面，Rb是異丙基。在另一方面，本公開涉及游離形式或藥學(xué)上可接受鹽形式的式(IIIa-2)化合物，其中Ra和Rb為保護(hù)基。Ra和Rb可獨(dú)立地選自叔丁基、異丙基和叔丁基二甲基甲硅烷基。一方面，Ra是叔丁基。一方面，Rb是異丙基。在另一方面，本公開涉及游離形式或藥學(xué)上可接受鹽形式的式(IVa-2)化合物，其中Ra和Rb為保護(hù)基且LG是離去基團(tuán)。LG可以是氯。Ra和Rb可獨(dú)立地選自叔丁基、異丙基和叔丁基二甲基甲硅烷基。一方面，Ra是叔丁基。一方面，Rb是異丙基。在另一方面，本公開涉及游離形式或藥學(xué)上可接受鹽形式的式(Ia)化合物，其中Ra和Rb為保護(hù)基。Ra和Rb可獨(dú)立地選自叔丁基、異丙基和叔丁基二甲基甲硅烷基。一方面，Ra是叔丁基。一方面，Rb是異丙基。在另一方面，本發(fā)明提供藥物組合物，其包含乙酸鹽形式的本發(fā)明化合物和藥學(xué)上可接受的載體。特別地，本公開涉及藥物組合物，其包含治療有效量的游離形式的式(I)化合物和一種或多種藥學(xué)上可接受的載體。在一個(gè)實(shí)施方案中，本公開涉及藥物組合物，其包含治療有效量的藥學(xué)上可接受鹽形式的式(I)化合物和一種或多種藥學(xué)上可接受的載體。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及藥物組合物，其包含治療有效量的乙酸鹽形式的式(I)化合物和一種或多種藥學(xué)上可接受的載體。在又一個(gè)實(shí)施方案中，本公開涉及藥物組合物，其包含治療有效量的羥乙酸鹽形式的式(I)化合物和一種或多種藥學(xué)上可接受的載體。藥物組合物可被配制用于特定施用途徑如口服施用、經(jīng)皮應(yīng)用、胃腸外施用、直腸施用、皮下施用等。此外，本發(fā)明的藥物組合物可被制備成固體形式(包括不限于膠囊、片劑、丸劑、顆粒、粉末或栓劑)、或液體形式(包括不限于溶液、混懸液或乳液)?？蓪λ幬锝M合物進(jìn)行常規(guī)藥學(xué)操作如滅菌和/或可含有常規(guī)惰性稀釋劑、潤滑劑或緩沖劑以及佐劑如防腐劑、穩(wěn)定劑、潤濕劑、乳化劑和緩沖液等。典型地，藥物組合物為片劑或明膠膠囊，其包含活性成分和a)稀釋劑，例如乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露醇、山梨糖醇、纖維素和/或甘氨酸；b)潤滑劑，例如二氧化硅、滑石粉、硬脂酸、其鎂或鈣鹽和/或聚乙二醇；對于片劑而言還包含c)粘合劑，例如硅酸鎂鋁、淀粉糊、明膠、黃耆膠、甲基纖維素、羧基甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮；如果需要的話還包含d)崩解劑，例如淀粉類、瓊脂、藻酸或其鈉鹽、或泡騰混合物；和/或e)吸收劑、著色劑、矯味劑和甜味劑。可根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法對片劑包薄膜衣或包腸衣。適用于口服施用的組合物包括有效量的本發(fā)明化合物，呈片劑、錠劑、水性或油性混懸液、可分散粉末或顆粒、乳劑、硬或軟膠囊、或糖漿或酏劑形式。預(yù)期用于口服的組合物根據(jù)本領(lǐng)域已知的用于制備藥物組合物的任何方法來制備，并且此類組合物可含有一種或多種選自甜味劑、矯味劑、著色劑和防腐劑的試劑，以提供藥學(xué)上美觀和適口的制劑。片劑可含有與適于制備片劑的無毒藥學(xué)上可接受的賦形劑混合的活性成分。這些賦形劑為例如惰性稀釋劑如碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉；制粒劑和崩解劑，例如玉米淀粉、或藻酸；粘合劑，例如淀粉、明膠或阿拉伯膠；和潤滑劑，例如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石。不對片劑進(jìn)行包衣或通過已知技術(shù)對片劑進(jìn)行包衣以延遲其在胃腸道中的崩解和吸收并由此在長時(shí)間內(nèi)提供持續(xù)的作用。例如，可以使用時(shí)間延遲材料如甘油單硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯。用于口服的制劑可以以其中所述活性成分與惰性固體稀釋劑例如碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土混合的硬明膠膠囊形式呈現(xiàn)，或可以以其中所述活性成分與水或油性介質(zhì)例如花生油、液體石蠟或橄欖油混合的軟明膠膠囊呈遞。本發(fā)明化合物可以作為在溶液或混懸液賦形劑中含有藥物的液體劑型向臨床前物種口服施用。溶液賦形劑可由表面活性劑(例如cremophor或solutol)、溶劑(例如丙二醇)和緩沖劑(例如檸檬酸緩沖劑)組成?；鞈乙褐苿┛珊斜砻婊钚詣?例如Tween80)、聚合物劑(例如甲基纖維素(MC))和緩沖劑(例如磷酸鹽)。適用于臨床前研究的溶液制劑的實(shí)例在下面列出：成分(％w/w)溶液1溶液2CremophorRH4010-SolutolHS15-10檸檬酸緩沖液50mM,pH39090制備：首先將(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮)的游離堿或乙酸鹽溶解于表面活性劑中并且混合直至獲得溶液。接下來加入緩沖液并且將溶液混合以提供澄清溶液。溶液制劑1和2能夠承載至多10mg/mL劑量。兩種制劑在RT下1周后在化學(xué)上和物理上是穩(wěn)定的。適用于臨床前研究的混懸液制劑的實(shí)例在下面列出：制備：將(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮)分散于表面活性劑中并且混合以均質(zhì)化混懸液。然后滴加聚合物溶液并且混合。獲得具有小顆粒的均質(zhì)混懸液?；鞈乙涸赗T下1周后在化學(xué)上和物理上是穩(wěn)定的。某些可注射組合物是等滲水性溶液或混懸液，并且栓劑有利地是由脂肪乳液或混懸液制備。所述組合物可被滅菌和/或含有佐劑，如防腐劑、穩(wěn)定劑、潤濕劑或乳化劑、溶解促進(jìn)劑(solutionpromoter)、用于調(diào)節(jié)滲透壓的鹽和/或緩沖劑。此外，它們也可含有其它有治療價(jià)值的物質(zhì)。所述組合物分別根據(jù)常規(guī)混合、制?；虬路椒▉碇苽?，且含有約0.1-75％或含有約1-50％的活性成分。適用于皮下施用的組合物包括例如本發(fā)明化合物以及2.5％泊洛沙姆407于0.9％氯化鈉中。適用于可注射組合物的裝置的實(shí)例包括輸注泵如Insulet’sOmniPod系統(tǒng)。本發(fā)明化合物也可通過多劑皮下注射、使用自動(dòng)注射器或PEN注射器施用。適用于此類皮下注射的制劑組合物在下面列出。發(fā)現(xiàn)苯甲醇(相比于苯酚或間甲酚)是特別適合的皮下注射制劑的防腐劑。因此，在本公開的一個(gè)實(shí)施方案中，提供藥物組合物，其包含治療有效量的化合物A或其藥學(xué)上可接受的鹽(例如乙酸鹽形式的化合物A)以及苯甲醇。在本公開的另一實(shí)施方案中，提供藥物組合物，其包含治療有效量的化合物A或其藥學(xué)上可接受的鹽(例如乙酸鹽形式的化合物A)和0.1至10、0.1至5、0.5至2、0.5至1.5、或0.9至1.1％(w/v)的苯甲醇。適用于經(jīng)皮應(yīng)用的組合物包括有效量的本發(fā)明化合物和適合的載體。適用于經(jīng)皮遞送的載體包括可吸收的藥理學(xué)上可接受的溶劑以幫助通過宿主的皮膚。PG/OA(丙二醇/油醇)的組合是適合溶劑的實(shí)例。例如，經(jīng)皮裝置可以呈繃帶形式，其包含背襯元件、任選地具有載體的含有化合物的貯庫、任選的用于在長時(shí)間內(nèi)以受控和預(yù)定的速率將所述化合物遞送到宿主皮膚的控速屏障，和確保該裝置位于皮膚上的部件。適用于局部應(yīng)用例如用于皮膚和眼睛的組合物包括水溶液、混懸液、軟膏、霜?jiǎng)?、凝膠或可霧化制劑，例如用于通過氣溶膠遞送的制劑等。此類局部遞送系統(tǒng)特別適用于皮膚應(yīng)用。因此，它們特別地適用于本領(lǐng)域眾所周知的局部制劑、包括化妝品制劑中。此類制劑可含有增溶劑、穩(wěn)定劑、張力增強(qiáng)劑、緩沖劑和防腐劑。如本文所使用，局部應(yīng)用也可涉及吸入或鼻內(nèi)應(yīng)用。它們可適宜地從干粉吸入器以干粉形式(單獨(dú)、混合物形式，例如具有乳糖的干摻混物、或具有磷脂的混合型組分顆粒)，或在使用或不使用適合的推進(jìn)劑下從加壓容器、泵、噴霧器、霧化器或霧化吸入器以氣溶膠噴霧形式遞送。本發(fā)明進(jìn)一步提供包含本發(fā)明化合物作為活性成分的無水藥物組合物和劑型，因?yàn)樗纱龠M(jìn)某些化合物的降解。本發(fā)明的無水藥物組合物和劑型可使用無水或含有低水分的成分且在低水分或低濕度條件下制備。無水藥物組合物以可保持其無水性質(zhì)的方式制備和貯存。因此，無水組合物使用已知防止接觸到水的材料包裝，從而使它們可以包括在適合的處方藥盒中。適合包裝的實(shí)例包括但不限于密封箔、塑料、單位劑量容器(例如小瓶)、泡罩包裝和帶狀包(strippack)。本發(fā)明進(jìn)一步提供藥物組合物和劑型，其包含一種或多種降低作為活性成分的本發(fā)明化合物的分解速率的試劑。此類試劑，本文稱作“穩(wěn)定劑”包括但不限于抗氧化劑如抗壞血酸、pH緩沖劑或鹽緩沖劑等。游離形式或藥學(xué)上可接受鹽形式的式(I)化合物展現(xiàn)出有價(jià)值的藥理學(xué)性質(zhì)，例如β-2-腎上腺受體調(diào)節(jié)性質(zhì)，例如如在下一章節(jié)中提供的體外和體內(nèi)測試中所示，并因此指示用于治療或用作研究化學(xué)品，例如用作工具化合物。本發(fā)明化合物可用于治療選自：肌肉營養(yǎng)不良、廢用相關(guān)萎縮、惡病質(zhì)或肌肉減少癥的適應(yīng)癥。因此，作為另一實(shí)施方案，本發(fā)明提供作為藥物的如本文定義的式(I)化合物。在實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及用作藥物的式(I)化合物。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及用于治療或預(yù)防肌肉營養(yǎng)不良、廢用相關(guān)萎縮、惡病質(zhì)或肌肉減少癥的式(I)化合物。因此，作為另一實(shí)施方案，本發(fā)明提供式(I)化合物在治療中的用途。在另一實(shí)施方案中，治療選自可通過激活β-2-腎上腺受體進(jìn)行治療的疾病。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述疾病選自肌肉營養(yǎng)不良、廢用相關(guān)萎縮、惡病質(zhì)或肌肉減少癥。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供治療通過激活β-2-腎上腺受體進(jìn)行治療的疾病的方法，其包括施用治療有效量的式(I)化合物。在另一實(shí)施方案中，所述疾病選自肌肉營養(yǎng)不良、廢用相關(guān)萎縮、惡病質(zhì)或肌肉減少癥。本公開的另一方面因此涉及治療或預(yù)防肌肉營養(yǎng)不良、廢用相關(guān)萎縮、惡病質(zhì)或肌肉減少癥的方法，其包括向需要其的對象施用治療有效量的游離形式或藥學(xué)上可接受鹽形式的式(I)化合物。作為另一實(shí)施方案，本發(fā)明提供式(I)化合物在制備藥物中的用途。在另一實(shí)施方案中，所述藥物用于治療疾病或病患，其可通過激活β-2腎上腺受體進(jìn)行治療。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述疾病選自上文提及的列表，適宜為肌肉萎縮疾病，更適宜為肌肉營養(yǎng)不良、廢用相關(guān)萎縮、惡病質(zhì)或肌肉減少癥。本發(fā)明化合物可與一種或多種其它治療劑同時(shí)、或之前或之后施用。本發(fā)明化合物可單獨(dú)、通過相同或不同的施用路徑、或在與其它活性劑相同的藥物組合物中一起施用。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供用于在療法中同時(shí)、分開或相繼使用的組合制劑形式的產(chǎn)品，其包含式(I)化合物和至少一種其它治療劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述療法為治療受β-2腎上腺受體激動(dòng)作用調(diào)節(jié)的疾病或疾患。以組合制劑形式提供的產(chǎn)品包括包含式(I)化合物和其它治療劑一起在同一藥物組合物中的組合物、或式(I)化合物和其它治療劑呈單獨(dú)形式、例如呈藥盒形式。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供藥物組合物，其包含式(I)化合物和另外的治療劑。任選地，藥物組合物可包含如上所述的藥學(xué)上可接受的賦形劑。本發(fā)明的另一方面因此涉及包含治療有效量的式(I)化合物和一種或多種治療活性助劑的組合。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含兩種或更多種單獨(dú)的藥物組合物的藥盒，至少一種所述藥物組合物含有式(I)化合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，藥盒包含用于單獨(dú)保留所述組合物的構(gòu)件，如容器、分開的瓶、或分開的箔包。此類藥盒的實(shí)例為泡罩包裝，如通常用于片劑、膠囊等的包裝。本發(fā)明的藥盒可用于施用不同的劑型，例如口服和胃腸外，用于施用不同劑量間隔的單獨(dú)組合物、或用于彼此滴定單獨(dú)組合物。為了有助于順應(yīng)性，本發(fā)明的藥盒通常包含施用說明。在本發(fā)明的組合療法中，本發(fā)明化合物和其它治療劑可由相同或不同的制造商制造和/或配制。而且，本發(fā)明化合物和其它治療劑可一起合并成組合療法：(i)在向醫(yī)師發(fā)布組合產(chǎn)品之前(例如在包含本發(fā)明化合物和其它治療劑的藥盒的情況下)；(ii)在施用前不久由醫(yī)師自身操作(或在醫(yī)師指導(dǎo)下)；(iii)由患者自身操作，例如在相繼施用本發(fā)明化合物和其它治療劑的期間。因此，本發(fā)明提供式(I)化合物用于治療受β-2腎上腺受體激動(dòng)作用調(diào)節(jié)的疾病或疾患的用途，其中所述藥物被制備用于與另外的治療劑一起施用。本發(fā)明還提供另外的治療劑用于治療受β-2腎上腺受體激動(dòng)作用調(diào)節(jié)的疾病或疾患的用途，其中所述藥物與式(I)化合物一起施用。本發(fā)明還提供在治療受β-2腎上腺受體激動(dòng)作用調(diào)節(jié)的疾病或疾患的方法中使用的式(I)化合物，其中式(I)化合物被制備用于與另外的治療劑一起施用。本發(fā)明還提供在治療受β-2腎上腺受體激動(dòng)作用調(diào)節(jié)的疾病或疾患的方法中使用的另外的治療劑，其中所述其它治療劑被制備用于與式(I)化合物一起施用。本發(fā)明還提供在治療受β-2腎上腺受體激動(dòng)作用調(diào)節(jié)的疾病或疾患的方法中使用的式(I)化合物，其中式(I)化合物與另外的治療劑一起施用。本發(fā)明還提供在治療受β-2腎上腺受體激動(dòng)作用調(diào)節(jié)的疾病或疾患的方法中使用的另外的治療劑，其中所述其它治療劑與式(I)化合物一起施用。本發(fā)明還提供式(I)化合物用于治療受β-2腎上腺受體調(diào)節(jié)的疾病或疾患的用途，其中所述患者先前(例如在24小時(shí))已被另外的治療劑治療。本發(fā)明還提供另外的治療劑用于治療受β-2腎上腺受體調(diào)節(jié)的疾病或疾患的用途，其中所述患先前(例如在24小時(shí))已被式(I)化合物治療。在一個(gè)實(shí)施方案中，其它治療劑選自睪酮、雄激素激動(dòng)劑、或SARM(選擇性雄激素受體調(diào)節(jié)劑)；IGF-1模擬物；肌抑素和其受體ActRIIA/B阻滯劑；TGFβ和活化素阻滯劑(作為抗萎縮劑)；Muf1/MAFbxE3連接酶抑制劑；HDAC抑制劑或任何溶瘤劑(例如用于癌癥惡病質(zhì))；抗炎劑如NSAID、TNF或IL-1b阻滯劑；代謝調(diào)節(jié)劑如PPAR激動(dòng)劑或IL-15模擬物；心血管劑如b(1)阻滯劑(例如奈必洛爾)或ARB(例如用于心臟惡病質(zhì))；用于外顯子跳躍的反義寡核苷酸(例如用于營養(yǎng)不良)；食欲增強(qiáng)劑如胃饑餓素(ghrelin)、孕酮或MC-4拮抗劑；高蛋白營養(yǎng)補(bǔ)充劑等。對于約50-70kg的對象而言，本發(fā)明的藥物組合物或組合可以呈約0.05-1000mg活性成分、或約0.05-500mg或約0.05-250mg或約0.05-150mg或約0.05-100mg、或約0.05-50mg或約0.05-10mg活性成分的單位劑量。治療有效劑量的化合物、藥物組合物或其組合取決于對象的物種、體重、年齡和個(gè)體情況、正治療的病癥或疾病或其嚴(yán)重度。具有普通技能的醫(yī)師、臨床醫(yī)生或獸醫(yī)可容易地確定每一種活性成分預(yù)防、治療或抑制病癥或疾病的進(jìn)展所需的有效量。上述劑量性質(zhì)可有利地使用哺乳動(dòng)物例如小鼠、大鼠、狗、猴或離體器官、組織及其制品在體外和體內(nèi)測試中論證。本發(fā)明化合物可以以溶液形式例如水溶液在體外應(yīng)用，以及腸內(nèi)、胃腸外、有利地皮下例如以混懸液形式或于水溶液中在體內(nèi)應(yīng)用。體外劑量可在約10-3摩爾至10-9摩爾濃度之間變動(dòng)。體內(nèi)治療有效量可根據(jù)施用路徑，在約0.01-500mg/kg之間、或在約0.01-100mg/kg之間、或在約0.01-1mg/kg之間、或在約0.01-0.1mg/kg之間變化。本發(fā)明化合物的活性可通過下列體外方法評價(jià)。此外在實(shí)施例中還描述體內(nèi)方法。測試1：使用CHO細(xì)胞和骨骼肌細(xì)胞的體外細(xì)胞功能測定cAMP：人骨骼肌細(xì)胞(skMC)獲自Cambrex(目錄號(hào)CC-2561)且在獲自Cambrex的骨骼基礎(chǔ)培養(yǎng)基(SkeletalBasalMedium)(SKBM)(目錄號(hào)#CC-3161)中培養(yǎng)。cAMP響應(yīng)使用獲自Cisbio或CisCompetitiveIntelligence(目錄號(hào)62AM4PEC)的cAMP動(dòng)態(tài)2容量HTRF-Assay試劑盒進(jìn)行測量。在37℃、5％CO2下，在384孔板中將skMC細(xì)胞在補(bǔ)充有20％FCS的SKBM細(xì)胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)1天。第二天，將細(xì)胞用50μLPBS洗滌兩次，并且在37℃、7.5％CO2下在無血清SKBM中、在1μM獲自Sigma的SB431542(一種ALK4/5抑制劑)(目錄號(hào)S4317)的存在下分化3天。第4天，除去補(bǔ)充有1μMSB431542的無血清SKBM，將細(xì)胞用50μLPBS洗滌兩次并且在37℃、7.5％CO2下、在不含SB431542(50μL/孔)的無血清SKBM中進(jìn)一步分化1天。以標(biāo)準(zhǔn)方法從新生大鼠分離大鼠skMC和心肌細(xì)胞并且如上處理。在NovartisInstitutesforBioMedicalResearch生產(chǎn)用人β腎上腺受體(β1或β2)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的中國倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞并且如前所述進(jìn)行培養(yǎng)(JPharmacolExpTher.2006年5月；317(2):762-70)。在刺激緩沖液中以2x所需濃度制成化合物并且在96孔板中(U型)制備于刺激緩沖液中的1:10系列稀釋液。將DMSO對照標(biāo)準(zhǔn)化為最高稀釋液的DMSO含量，例如對于10-5M(x2)濃度的第一化合物稀釋液，為0.1％DMSO(x2)。在384孔板中以20μL刺激體積進(jìn)行測定，并且最終測定體積為40μL/孔。在實(shí)驗(yàn)當(dāng)天，通過在紙堆上反轉(zhuǎn)和輕敲板2-3次從384孔細(xì)胞培養(yǎng)板除去培養(yǎng)基。首先將10μL新鮮培養(yǎng)基/孔加入384孔板中。在室溫孵育10分鐘后，將10μL/孔工作化合物稀釋液加至細(xì)胞并在室溫于暗處孵育30分鐘。在此期間，通過稀釋試劑盒提供的抗cAMP穴狀化合物和cAMPD21:20在裂解緩沖液中的儲(chǔ)備液來制備試劑的工作溶液。孵育化合物30分鐘后，將10μLcAMP-D2和10μL抗cAMP穴狀化合物相繼加入至測定板。在室溫于暗處孵育1小時(shí)后，用PheraStar(激發(fā)波長：337nm，發(fā)射波長：620nm和665nm)進(jìn)行測量。Ca2+：人腎上腺素能α1ACHO-K1細(xì)胞系購自PerkinElmer(ValiScreenTMStable重組GPCR細(xì)胞系，目錄號(hào)ES-036-C，批號(hào)M1W-C1,Boston,Massachusetts,USA)。實(shí)驗(yàn)前一天，將α1A冷凍細(xì)胞(1千萬每ml和每小瓶)在37℃的水浴中解凍。將細(xì)胞懸浮液以1,000rpm離心5分鐘且將細(xì)胞團(tuán)塊重懸浮于細(xì)胞培養(yǎng)基中。將細(xì)胞以50μL細(xì)胞培養(yǎng)基中8,000細(xì)胞/孔的密度接種于具有透明底部的黑色384孔板中。在37℃、5％CO2下孵育板約24小時(shí)。在實(shí)驗(yàn)當(dāng)天，使用細(xì)胞洗滌器(TECANPW3)除去培養(yǎng)基。在最后洗滌后，留10μL于孔中。加入40μL加載緩沖液且將細(xì)胞在37℃、5％CO2下加載60min。使用TECANPW3洗滌平板，留下20μL測定緩沖液，且將板在RT孵育至少20分鐘，然后進(jìn)行FLIPR實(shí)驗(yàn)。接著以激動(dòng)劑和/或拮抗劑模式表征化合物。對于測定驗(yàn)證，利用新鮮細(xì)胞進(jìn)行相同方案。在這種情況下，使用3mlTrypsin-EDTA從150cm2燒瓶剝離細(xì)胞，離心且重懸浮于細(xì)胞培養(yǎng)基。通過加入5μL化合物(5X)、使用FLIPR頭來刺激細(xì)胞。起激動(dòng)劑作用的化合物誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)鈣的短暫增加。這記錄在FLIPR系統(tǒng)上。首先每秒記錄信號(hào)基線的量度，持續(xù)2分鐘，接著注射化合物。通過用氬離子激光在488nm以0.6W激光功率激發(fā)細(xì)胞并用CCD照相機(jī)(0.4秒opening)記錄熒光信號(hào)2分鐘進(jìn)行鈣測量。通過加入5μL測定緩沖液測定低對照(未刺激細(xì)胞)。通過加入5μL高濃度EC100(A-61603在1μM)的已知激動(dòng)劑測定高對照，并且也在每個(gè)板中加入?yún)⒄占?dòng)劑化合物。本發(fā)明化合物在測試測定1中展現(xiàn)出功效，EC50小于10nM。具體活性示于實(shí)施例10。本發(fā)明化合物的其它具體活性描述于實(shí)施例11至15中。下列實(shí)施例意指闡明本發(fā)明并且不應(yīng)解釋為限制本發(fā)明。溫度以攝氏度給出。如果沒有另外提及，則所有蒸發(fā)在減壓下進(jìn)行，通常在約15mmHg至100mmHg(＝20-133毫巴)之間。最終產(chǎn)物、中間體和起始材料的結(jié)構(gòu)通過標(biāo)準(zhǔn)分析方法確認(rèn)，例如微量分析和光譜特征(例如MS、IR、NMR)。所用的縮寫為本領(lǐng)域常見的縮寫。用于合成本發(fā)明化合物的所有起始材料、結(jié)構(gòu)單元、試劑、酸、堿、脫水劑、溶劑和催化劑或者商購可得或者可通過本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的有機(jī)合成方法來制備(Houben-Weyl第4版1952,MethodsofOrganicSynthesis,Thieme,第21卷)。此外，本發(fā)明化合物可通過本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的示于下列實(shí)施例中的有機(jī)合成方法來制備。實(shí)施例縮寫列表：1M1摩爾APCI大氣壓化學(xué)電離Aq水性AR腎上腺受體atm大氣壓br寬cm厘米d雙重峰dd雙二重峰ddd雙重雙二重峰(DHDQ)2PHAL氫化奎尼丁1,4-酞嗪二基二醚DMAC二甲基乙酰胺DMSO二甲基亞砜DSC差示掃描量熱法ee對映異構(gòu)體過量equiv當(dāng)量ES電子噴霧g克h小時(shí)HPLC高效液相色譜法HRMS高分辨率質(zhì)譜法m多重峰MC甲基纖維素mbar毫巴MeOH甲醇min分鐘ml毫升MS質(zhì)譜法MTBE甲基叔丁基醚nm納米NMR核磁共振RT保留時(shí)間r.t.室溫s單重峰sat.飽和sept七重峰t三重峰TFA三氟乙酸μm微米w/v重量/體積XRPDx射線粉末衍射除非另有指出，否則在Agilent1100系列LC/AgilentMS6210Quadrupole上記錄HPLC/MS光譜。使用WatersSymmetryC8柱(3.5um；2.1x50mm)(WAT200624)。應(yīng)用下列梯度方法(％＝體積百分比)：A＝水+0.1％TFA/B＝乙腈+0.1％TFA；0.0–2.0min90A:10B–5A:95B；2.0–3.0min5A:95B；3.0–3.3min5A:95B–90A:10B；流速1.0ml/min；柱溫50℃。在APCI模式中電離所有化合物。1H-NMR光譜在VarianMercury(400MHz)儀或BrukerAdvance(600MHz)儀上記錄。在PerkinElmerPolarimeter341上測量旋光度。實(shí)施例2b、2c、2d、2e、2g的LCMS條件：質(zhì)譜站：具有Agilent1200HPLC的Agilent6130四極LC/MS；柱：AgilentZorbaxSB-C18(快速分離),2.1*30mm,3.5μm；流動(dòng)相：B：含0.1％甲酸的水；C：含0.1％甲酸的MeCN；1.0min至6.0min，95％B至5％B，和5％C至95％C；6.0min至9.0min，5％B和95％C；間隔時(shí)間：2.0min；流速：0.8ml/min；柱溫：30℃；UV檢測：210nm和254nm；MS正離子和負(fù)離子掃描：80-1000；電離法：API-ES.實(shí)施例2f的HRMS條件：儀器：與SynaptQ-TOFMS耦接的WatersAcquityUPLC；柱：WatersAcquityUPLCBEHC18,2.1*50mm,1.7μm流動(dòng)相：A：含0.1％甲酸的水，B：含0.1％甲酸的乙腈；柱溫：于室溫；UV檢測：從190nm至400nm掃描；流速：0.5mL/min；梯度條件：電離法：ESI+；MS掃描范圍：100-1000m/z.中間體A：2-(4-丁氧基苯基)-1,1-二甲基-乙胺a)4-(2-甲基-2-硝基丙基)苯酚將4-(羥基甲基)苯酚(20g)、KOtBu(27.1g)和DMAC(200mL)的混合物用磁力攪拌器攪拌。在20min內(nèi)緩慢加入2-硝基丙烷(21.5g)。將混合物加熱至140℃保持5小時(shí)，然后冷卻至室溫。緩慢加入混合物以冷卻HCl水溶液(3.0％,600mL)，然后用MTBE萃取(300ml*1,200ml*1)。將有機(jī)層合并，用水(300ml*2)和飽和NaCl水溶液(50ml*1)洗滌，然后用無水Na2SO4干燥。將混合物過濾并在真空下濃縮，得到淺黃色固體(28.5g)，其不經(jīng)進(jìn)一步純化即用于下一步驟。[M-1]+＝194.2；RT＝5.3分鐘。1H-NMR(400MHz,CDCl3)ppm6.96(d,J＝8.5Hz,2H),6.75(d,J＝8.5Hz,2H),3.11(s,2H),1.56(s,6H)。b)1-丁氧基-4-(2-甲基-2-硝基丙基)苯將4-(2-甲基-2-硝基丙基)苯酚(20.4g)、1-溴丁烷(28.7g)、DMAC(200ml)、K2CO3(21.6g)、四丁基碘化銨(38.7g)的混合物用磁力攪拌器攪拌且加熱至85℃保持17h。將混合物冷卻至0-10℃且加入水(700ml)。將混合物用MTBE萃取(300ml*1,200ml*1)。將合并的有機(jī)相用水(250ml*2)洗滌，然后在真空下濃縮，得到紅褐色油狀物(27.8g)，其不經(jīng)進(jìn)一步純化即用于下一步驟。1H-NMR(400MHz,CDCl3)ppm7.0(d,J＝8.8Hz,2H),6.81(d,J＝8.8Hz,2H),3.93(t,J＝6.6Hz,2H),3.12(s,2H),1.74(m,2H),1.56(s,6H),1.48(m,2H),0.97(t,3H)。c)2-(4-丁氧基苯基)-1,1-二甲基-乙胺在氫化反應(yīng)器(1L)中，加入1-丁氧基-4-(2-甲基-2-硝基丙基)苯(27.8g)在AcOH(270ml)中的溶液，接著加入濕阮內(nèi)鎳(7.0g)。用H2吹掃混合物3次，然后加熱至60℃且在5.0atm下保持?jǐn)嚢?6h。過濾混合物，在真空下濃縮總濾液。所得殘余物用水(150ml)/正庚烷(80ml)稀釋，將水層再次用正庚烷(80ml)洗滌。將水層用NaOH(～20％)調(diào)節(jié)至pH～11，然后用MTBE(100ml*1)和EtOAc(150ml*2)萃取。棄去中間層。將所有頂層合并，用飽和NaHCO3(100ml)和飽和NaCl(100ml)洗滌，然后用無水Na2SO4干燥。過濾后，濃縮混合物。攪拌所得殘余物，加入HCl在異丙醇中的溶液(2M,40ml)。將漿液加熱至60℃，加入正庚烷(120ml)。將混合物冷卻至20℃，然后過濾，用一些正庚烷洗滌濾餅。將白色固體在空氣中干燥2天，得到10g純HCl鹽產(chǎn)物。收率：35.2％。[MH]+＝222.2；RT＝5.0分鐘。1H-NMR(400MHz,d-DMSO)ppm8.13(s,3H),7.12(d,J＝8.6Hz,2H),6.88(d,J＝8.5Hz,2H),3.93(t,J＝6.4Hz,2H),2.80(s,2H),1.67(m,2H),1.42(m,2H),1.18(s,6H),0.92(t,3H)。實(shí)施例1：(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮a)1-叔丁氧基-3-氟-5-異硫氰酰基苯分開且同時(shí)加入含硫光氣(33.6g)的CHCl3(250ml)和含K2CO3(64.7g)的H2O(450ml)，在0℃滴加至3-叔丁氧基-5-氟-苯基-胺(42.9g)在CHCl3(350ml)中的溶液。將反應(yīng)混合物升溫至室溫過夜。將有機(jī)物分離且用水(3x)、鹽水(1x)洗滌，經(jīng)MgSO4干燥，過濾并真空除去溶劑。標(biāo)題化合物通過急驟柱色譜法(二氧化硅，洗脫液二氯甲烷/異己烷1:3)獲得。1HNMR(CDCl3,400MHz)；6.70(m,3H),1.40(s,9H)。b)(3-叔丁氧基-5-氟-苯基)-硫代氨基甲酸O-異丙酯將1-叔丁氧基-3-氟-5-異硫氰?；?24.0g)和三乙胺(10.9g)溶解于異丙醇(150ml)。將反應(yīng)混合物回流18小時(shí)并真空除去溶劑。將粗產(chǎn)物溶解于己烷：乙醚(19:1)中。真空除去乙醚并將溶液冷卻至0℃保持3小時(shí)。過濾溶液，得到標(biāo)題化合物。1HNMR(CDCl3,400MHz)；8.10(brs,1H),6.65(brs,2H),6.45(ddd,1H)5.60(sept,1H),1.35(d,6H),1.30(s,9H)。c)5-叔丁氧基-2-異丙氧基-苯并噻唑-7-甲醛將(3-叔丁氧基-5-氟-苯基)-硫代氨基甲酸O-異丙酯(2.2g)溶解于干燥四氫呋喃(20ml)中。將反應(yīng)混合物冷卻至-78℃并在20分鐘內(nèi)加入叔丁基鋰(15.2ml，1.5M溶液)。然后將反應(yīng)混合物升溫至-10℃保持75分鐘。然后將反應(yīng)混合物再冷卻至-78℃，加入N,N-二甲基-甲酰胺(1.5g)并將反應(yīng)混合物緩慢升溫至室溫，然后在-10℃攪拌1小時(shí)。將反應(yīng)混合物用HCl(aq)(5ml，2M溶液)淬滅，將有機(jī)物在乙酸乙酯/水之間分離且真空除去。標(biāo)題化合物通過急驟柱色譜法(二氧化硅，洗脫液乙酸乙酯/異己烷1:9)獲得。MS(ES+)m/e294(MH+)。d)5-叔丁氧基-2-異丙氧基-7-乙烯基并噻唑在氬氣下將Ph3PMe.Br(5.0g)溶解于干燥四氫呋喃(100ml)中。在室溫于10分鐘內(nèi)加入N-丁基鋰(8.8ml，1.6M溶液)，將反應(yīng)混合物攪拌另外30分鐘。將5-叔丁氧基-2-異丙氧基-苯并噻唑-7-甲醛(1.25g)在二氯甲烷(40ml)中的溶液滴加至反應(yīng)混合物，并將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?.5小時(shí)。真空除去溶劑，再溶解于乙酸乙酯中，用水(3x)、鹽水(1x)洗滌，經(jīng)MgSO4干燥，過濾并真空除去溶劑。標(biāo)題化合物通過急驟柱色譜法(二氧化硅，洗脫液乙酸乙酯/異己烷1:9)獲得。MS(ES+)m/e292(MH+)。e)(R)-1-(5-叔丁氧基-2-異丙氧基-苯并噻唑-7-基)-乙烷-1.2-二醇在氬氣下將K3Fe(CN)6(1.2g)、K2CO3(0.5g)、(DHQD)2PHAl(19mg)溶解于叔丁醇/水(15ml,1:1混合物)并攪拌15分鐘。將反應(yīng)混合物冷卻至0℃并加入OsO4(3.1mg)，接著加入5-叔丁氧基-2-異丙氧基-7-乙烯基苯并噻唑(0.35g)。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢柽^夜。將反應(yīng)混合物用偏亞硫酸鈉(sodium-meta-bisulfate)(1g)淬滅并攪拌1.5小時(shí)。加入乙酸乙酯，分離有機(jī)物，用(2x)水、(1x)鹽水洗滌，經(jīng)MgSO4干燥，過濾并真空除去溶劑。標(biāo)題化合物通過急驟柱色譜法(二氧化硅，洗脫液乙酸乙酯/異己烷2:5)獲得。MS(ES+)m/e326(MH+)。f)(R)-2-(5-叔丁氧基-2-異丙氧基苯并[d]噻唑-7-基)-2-羥基乙基-4-甲基苯磺酸酯向經(jīng)吹掃并保持惰性氮?dú)鈿夥盏?00-ml3頸圓底燒瓶中放置(R)-1-(5-叔丁氧基-2-異丙氧基-苯并[d]噻唑-7-基)乙烷-1,2-二醇(20g，59.05mmol)在吡啶(240ml)中的溶液和分子篩(5g)。接著在攪拌下于0℃逐滴加入甲苯磺酰氯(甲苯磺?；?(15.3g，79.73mmol)在吡啶(60ml)中的溶液。將所得溶液在室溫?cái)嚢?h。然后通過加入1000ml1M氯化氫淬滅反應(yīng)。將所得溶液用2x300ml乙酸乙酯萃取并將有機(jī)層合并。將有機(jī)相用1x500ml1M氯化氫、1x500ml10％碳酸氫鈉和300ml鹽水洗滌。將混合物經(jīng)無水硫酸鈉干燥并在真空下濃縮。用乙酸乙酯/石油醚(1:10)將殘余物施加至硅膠柱。這產(chǎn)生26g(87％)(R)-4-甲基苯磺酸2-(5-叔丁氧基-2-異丙氧基苯并[d]噻唑-7-基)-2-羥基乙酯，為黃色油狀物。LC/MSRT＝2.47min；(m/z)：480[M+H]+。1H-NMR：(400MHz,DMSO-d6)：δ(ppm)7.57(d,2H)；7.36(d,2H)；7.17(d,1H)；6.79(d,1H)；6.32(d,1H)；5.37-5.26(m,1H)；4.97-4.90(m,1H)；4.12-4.00(m,2H)；2.40(s,3H)；1.45-1.38(m,6H)；1.32(s,9H)。g)(R)-1-(5-叔丁氧基-2-異丙氧基苯并[d]噻唑-7-基)-2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)乙醇向1000-mL4頸圓底燒瓶放置(R)-2-(5-叔丁氧基-2-異丙氧基苯并[d]噻唑-7-基)-2-羥基乙基-4-甲基苯磺酸酯(26g，51.55mmol,1.00當(dāng)量)在甲苯(320mL)中的溶液和2-(4-丁氧基苯基)-1,1-二甲基-乙胺(中間體A)(22g，99.47mmol,1.93當(dāng)量)。將溶液在油浴中于90℃攪拌24h。將所得混合物在真空下濃縮。用乙酸乙酯/石油醚(1:8)將殘余物施加至硅膠柱。這產(chǎn)生16g(58％)(R)-1-(5-叔丁氧基-2-異丙氧基苯并[d]噻唑-7-基)-2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)乙醇，為淺黃色油狀物。LC/MS：RT＝2.24min(m/z)：529[M+H]+。1H-NMR：(600MHz,DMSO-d6)：δ(ppm)7.12(s,1H)；6.83(d,2H)；6.77(s,1H)；6.63(d,2H)；5.80(br.s,1H)；5.38-5.30(m,1H)；4.70-4.66(m,1H)；3.90(t,2H)；2.81-2.61(m,2H)；2.50-2.39(m,2H)；1.71-1.62(m,2H)；1.47-1.41(m,2H)；1.41(d,6H)；1.22(s,9H)；0.91(q,3H)；0.88(s,3H)；0.83(s,3H)。h)(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮將(R)-1-(5-叔丁氧基-2-異丙氧基苯并[d]噻唑-7-基)-2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)乙醇(3.5g)在甲酸(40ml)中的溶液在環(huán)境溫度下攪拌68h。加入50ml水，并將所得混合物蒸發(fā)至干(旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，15毫巴,40℃)以得到3.8g粗產(chǎn)物。將該物質(zhì)在飽和碳酸氫鈉水溶液(50ml)和乙酸乙酯(50ml)之間分配以除去甲酸。將水層用乙酸乙酯(各30ml)萃取3x。將合并的有機(jī)萃取液經(jīng)硫酸鎂干燥，過濾并濃縮，得到3g粗制游離堿。將該物質(zhì)進(jìn)行急驟色譜分析(硅膠；梯度含0-60％甲醇的二氯甲烷)。收集純級(jí)分并蒸發(fā)至干，得到1.74g無定型半固體。將該物質(zhì)進(jìn)行手性制備型色譜法[柱：ChiralpakIC(20um)7.65x37.5cm；洗脫液：正庚烷/二氯甲烷/乙醇/二乙胺50:30:20(+0.05二乙胺)；流速＝70ml/min；濃度：2.5g/50ml洗脫液；檢測：UV,220nm]以得到純對映異構(gòu)體(100％ee)。將該物質(zhì)在60℃溶解于45ml乙腈中。使溶液歷經(jīng)18h冷卻至環(huán)境溫度，期間沉淀出現(xiàn)。將混合物用5ml冷(4℃)乙腈稀釋并通過布氏漏斗過濾。將濾餅用冷乙腈洗滌兩次。然后收集濕固體并在環(huán)境溫度下真空干燥(0.2毫巴)過夜，得到1.42g(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮，為無色粉末。LC/MS：RT＝1.81min(m/z)：431[M+H]+。1H-NMR：(600MHz,DMSO-d6)：δ(ppm)11.5(br.s,1H)；9.57(br.s,1H)；6.99(d,2H)；6.76(d,2H)；6.52(s,1H)；6.47(s,1H)；5.63(br.s,1H)；4.53-4.48(m,1H)；3.90(t,2H)；2.74-2.63(m,2H)；2.54-2.45(m,2H)；1.71-1.62(m,2H)；1.49-1.40(m,2H)；0.93(q,3H)；0.89(s,6H)。旋光度：[α]D22＝-43o(c＝1.0g/100mlMeOH)。實(shí)施例2：(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮的替代路徑a)1-叔丁氧基-3-氟-5-異硫氰?；?苯將1,1'-硫代羰基二咪唑(423g，2.37mol)溶解于二氯甲烷(3200ml)中。將混合物在N2氣氛下攪拌，同時(shí)在2h內(nèi)緩慢加入3-叔丁氧基-5-氟苯胺(435g，2.37mol)在二氯甲烷(800ml)中的溶液。然后將混合物在20℃保持?jǐn)嚢?6h。將混合物用水(3000ml)稀釋。將分離的二氯甲烷相再次用水(3000ml)洗滌，然后用無水Na2SO4干燥2h。過濾混合物，并將濾液在真空下濃縮以除去溶劑，得到1-叔丁氧基-3-氟-5-異硫氰酰基-苯(499g)。1H-NMR(400MHz,CDCl3)：6.63-6.68(m,3H),1.37(s,9H)。b)(3-叔丁氧基-5-氟-苯基)-硫代氨基甲酸O-異丙酯向1-叔丁氧基-3-氟-5-異硫氰?；?460g，2.04mol)在無水異丙醇(3250ml)中的溶液加入三乙胺(315g，3.06mol)。將混合物在N2氣氛下加熱至回流16h并將溫度冷卻至40-50℃。濃縮后，將所得深色殘余物用正庚烷(1000ml)稀釋并加熱至60℃。將混合物緩慢冷卻至25℃，同時(shí)加入晶種。觀察到漿液并在25℃攪拌16h，之后在2h內(nèi)緩慢冷卻至0-10℃。過濾并用正庚烷(200ml)洗滌后，將所收集的固體在真空下、于40-45℃在烘箱中干燥18h，得到(3-叔丁氧基-5-氟-苯基)-硫代氨基甲酸O-異丙酯(453.1g)。LCMS：[M+H]+＝286.1；RT＝7.2分鐘。1H-NMR(400MHz,CDCl3)：8.18(s,1H),6.81(m,2H),6.51(dt,J＝10.2Hz,1H),5.66(七重峰，J＝6.3Hz,1H),1.42(d,J＝6.2Hz,6H),1.37(s,9H)。c)1-(5-叔丁氧基-2-異丙氧基-苯并噻唑-7-基)-2-氯-乙酮在氮?dú)鈿夥障拢诘陀?65℃的溫度將叔丁基鋰溶液(481ml,737.6mmol,1.6M)滴加至(3-叔丁氧基-5-氟-苯基)-硫代氨基甲酸O-異丙酯(200g，700.83mmol)在2-Me-THF(1600ml)中的溶液。將反應(yīng)溫度升溫至-35℃，并緩慢加入第二部分的叔丁基鋰(388ml,737.6mmol,1.9M)，同時(shí)保持溫度低于-35℃。然后將反應(yīng)混合物在該溫度攪拌3h并冷卻降至-70℃。將N-甲基-N-甲氧基氯乙酰胺(96.4g，700.83mmol)在2-MeTHF(300ml)中的溶液加入至反應(yīng)混合物，同時(shí)保持溫度低于-70℃。然后將混合物升溫至-30℃并攪拌45分鐘。將冷反應(yīng)混合物通過逐滴加入含30％HCl的異丙醇(240g)、接著加入1500ml水來淬滅。將有機(jī)層相繼用1000ml水、1500ml飽和NaHCO3水溶液和1500ml鹽水來洗滌。濃縮后，將所得淺褐色殘余物加入至異丙醇(135ml)。將混合物升溫至50℃并緩慢冷卻降至25℃。將正庚烷(135ml)滴加至溶液并將混合物攪拌過夜。過濾漿液并將濾餅用正庚烷(40ml)洗滌，接著用另一部分的正庚烷(20ml)洗滌。將濾餅在真空下干燥，得到為灰白色粉末的1-(5-叔丁氧基-2-異丙氧基-苯并噻唑-7-基)-2-氯-乙酮(42.8g，17.9％收率)。1HNMR(400MHz,CDCl3)：7.60(d,J＝2.0Hz,1H),7.45(d,J＝2.0Hz,1H),5.40(七重峰，J＝6.3Hz,1H),4.77(s,2H),1.47(d,J＝6.3Hz,6H),1.40(s,9H)。LCMS：[M+H]+＝342.1,RT＝7.29min。d)(R)-1-(5-叔丁氧基-2-異丙氧基-苯并噻唑-7-基)-2-氯-乙醇將1-(5-叔丁氧基-2-異丙氧基苯并[d]噻唑-7-基)-2-氯-乙酮(70g，204.8mmol)和RuCl(對甲基異丙基苯)[(S,S)-Ts-DPEN](1.954g，3.07mmol)在甲醇/DMF(1330ml/70ml)中的懸浮液脫氣，并用N2再填充三次。緩慢加入經(jīng)脫氣的甲酸(28.3g)在Et3N(124.3g)中的預(yù)制混合物，同時(shí)保持內(nèi)部溫度在15至20℃之間。將所得黃色懸浮液升溫至30℃。2h后將反應(yīng)混合物冷卻至25℃，然后將水(750ml)加至到反應(yīng)混合物中，接著一次性加入乙酸(56ml)。濃縮混合物，然后用TBME(1000ml)稀釋。將水相分離，用TBME(1000ml)萃取。將合并的有機(jī)相相繼用水和鹽水洗滌，然后用Na2SO4干燥且在真空下濃縮，得到(R)-1-(5-叔丁氧基-2-異丙氧基-苯并噻唑-7-基)-2-氯-乙醇(72g)。LCMS(方法A)：[M+H]+＝343.1,RT＝5.67min。1HNMR(400MHz,CDCl3)：7.29(d,J＝2.0Hz,1H),6.83(d,J＝2.0Hz,1H),5.37(七重峰，J＝6.3Hz,1H),4.96(m,1H),3.74(m,2H),3.01(s,1H),1.46(d,J＝6.2Hz,6H),1.36(s,9H)。e)(R)-5-叔丁氧基-2-異丙氧基-7-環(huán)氧乙烷基-苯并噻唑向(R)-1-(5-叔丁氧基-2-異丙氧基苯并[d]噻唑-7-基)-2-氯-乙醇(140g，407.1mmol)在TBME(420ml)中的溶液滴加NaOH水溶液(2M,420ml)，接著一次性加入四丁基碘化銨(7.52g，20.36mmol)。在26℃4h后，加入400mlTBME并分離有機(jī)層。將水層用TBME(400ml)萃取。將合并的有機(jī)層用水(400ml)和鹽水(400ml)洗滌，得到(R)-5-叔丁氧基-2-異丙氧基-7-環(huán)氧乙烷基-苯并噻唑(122g)。LCMS：[M+H]+＝308.0,RT＝6.80min。1HNMR(400MHz,CDCl3)ppm7.28(d,J＝2.0Hz,1H),6.85(d,J＝2.0Hz,1H),5.38(m,1H),3.96(m,1H),3.15(dd,J＝4.3,5.5Hz,1H),2.94(dd,J＝4.3,5.5Hz,1H),1.45(d,J＝Hz,6H),1.37(s,9H)。f)(R)-1-(5-叔丁氧基-2-異丙氧基苯并[d]噻唑-7-基)-2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)乙醇將(R)-5-叔丁氧基-2-異丙氧基-7-環(huán)氧乙烷基-苯并噻唑(145g，471.7mmol)和2-(4-丁氧基-苯基)-1,1-二甲基-乙胺(114.8g，518.9mmol)溶解于DMSO(850ml)。將反應(yīng)混合物加熱至80℃并攪拌27h。然后將混合物冷卻至25℃并加入至攪拌的水(1500ml)和TBME(1500ml)的混合物。將水層分離并用TBME(1000ml)萃取。將合并的有機(jī)層相繼用水(1500ml)和鹽水(1000ml)洗滌，用無水Na2SO4干燥。濃縮后，將殘余物通過柱色譜法(用含10％EtOAc的正庚烷至含33％EtOAc的正庚烷洗脫)純化。獲得為灰白色固體的固體產(chǎn)物(R)-1-(5-叔丁氧基-2-異丙氧基苯并[d]噻唑-7-基)-2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)乙醇(140g)。HRMS：[M+1]529.2996。1HNMR(400MHz,CDCl3)：7.26(m,1H),7.01(m,1H),6.99(m,1H),6.78-6.80(m,3H),5.39(m,1H),4.65(dd,J＝3.8,8.8Hz,1H),3.83(t,J＝6.4Hz,2H),2.96(dd,J＝3.8,12Hz,1H),2.74(dd,J＝8.8,12Hz,1H),2.60(dd,J＝13.6,17.6Hz,2H),1.72-1.79(m,2H),1.50(m,2H),1.46(d,J＝2.0Hz,3H),1.45(d,J＝2.0Hz,3H),1.35(s,9H),1.06(s,3H),1.04(s,3H),0.98(t,J＝7.2Hz,3H)。g)(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮向(R)-1-(5-叔丁氧基-2-異丙氧基苯并[d]噻唑-7-基)-2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)乙醇(7.5g)在異丙醇(30ml)和水(25ml)中的溶液加入1MHCl水溶液(43ml)。然后將反應(yīng)混合物加熱至60℃并攪拌2.5h。將混合物冷卻至50℃，然后緩慢加入2MNaOH水溶液(18ml)以調(diào)節(jié)pH在8.2-8.4之間。然后將反應(yīng)混合物冷卻至30℃，接著用TBME萃取(第一次用40ml，第二次用25ml)。將兩個(gè)有機(jī)層合并，用水(兩次共38ml)洗滌，之后用無水Na2SO4干燥。過濾后，濃縮濾液，然后溶解于MeCN(145ml)中。將溶液用活性碳(0.6g)處理并加熱至60℃。第二次過濾后，將濾餅用MeCN(兩次共10ml)洗滌，將濾液在60℃結(jié)晶，獲得(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮(3.8g)。e.e.＝97.6％.LCMS(方法A)：[M+H]+＝431.2。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)：9.5(br.s,1H),6.81(d,J＝8.5Hz,2H),6.57(d,J＝8.6Hz,2H),6.33(d,J＝2.2Hz,1H),6.30(d,J＝2.2Hz,1H),4.43(br.s,1H),3.69(t,J＝6.4Hz,2H),2.58-2.59(m,2H),2.24-2.31(m,2H),1.41-1.48(m,2H),1.15-1.25(m,2H),0.78(s,6H),0.70(t,J＝7.4Hz,3H)。實(shí)施例3：(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮乙酸鹽在50ml四頸燒瓶中，將500mg(1.161mmol)游離堿(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮懸浮于10.0ml乙腈和0.25ml水中并在室溫用槳攪拌。將懸浮液在50℃的內(nèi)部溫度(外套溫度75℃)加熱并加入72mg乙酸(1.161mmol)(形成澄清的黃色溶液)。將溶液于室溫在30min內(nèi)冷卻，加入0.15ml水。然后將溶液用(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮乙酸鹽引晶并在室溫?cái)嚢柽^夜(16h)。然后將懸浮液在室溫通過玻璃濾器過濾，并用1ml乙腈洗滌三次。于室溫將510mg濕濾餅在干燥烘箱中干燥過夜(16h)至干。收率：508mg白色粉末(89.1％)(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮乙酸鹽晶種的制備將57.0mg(0.132mmol)游離堿(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮和8.03mg(0.132mmol)乙酸溶解于1.0ml乙腈和0.05ml水中。在磁力攪拌器攪拌的情況下將溶液在室溫?cái)嚢琛＿^夜后沉淀出現(xiàn)。然后將溶液在室溫通過玻璃濾器過濾并用0.5ml乙腈洗滌三次。將濕濾餅于室溫在干燥烘箱中干燥過夜(16h)至干。收率：57mg白色粉末。實(shí)施例3a：用于形成(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮乙酸鹽的替代方法將(R)-1-(5-叔丁氧基-2-異丙氧基苯并[d]噻唑-7-基)-2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)乙醇(1當(dāng)量)懸浮于異丙醇中。在50至60°，在約30-60min內(nèi)加入1M鹽酸水溶液(3當(dāng)量)。完全反應(yīng)(在60℃約2.5小時(shí))后將溶液冷卻至20℃，在該溫度逐步加入2M氫氧化鈉(3當(dāng)量)。完全加入后，將乳化的游離堿(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮萃取到乙酸乙酯中，并用水洗滌有機(jī)層。將有機(jī)層用活性碳處理，并使用作為助濾劑的微晶纖維素過濾。將濾餅用乙酸乙酯洗滌。通過于55℃的外套溫度在減壓下蒸餾，將含有游離堿(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮的濾液小心濃縮至限定的殘余體積。然后加入乙酸異丙酯并通過于55℃的外套溫度在減壓下蒸餾至限定的殘余體積來部分除去。在50-55℃將更多的乙酸異丙酯和乙酸在乙酸異丙酯中的溶液加入至溫?zé)岬恼麴s殘余物。在加入乙酸期間，將批次用(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮乙酸鹽引晶，以早在50-55℃引發(fā)乙酸鹽的受控結(jié)晶。逐漸冷卻至0℃后，過濾產(chǎn)物懸浮液并用冷乙酸異丙酯洗滌兩次。將濾餅在減壓下于50至90℃干燥直至恒重，得到結(jié)晶(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮乙酸鹽，典型收率為約80％。實(shí)施例4：(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮羥乙酸鹽在50mL四頸燒瓶中，將500mg(1.161mmol)游離堿(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮懸浮于10.0ml乙腈和0.25ml水中，并在室溫用槳攪拌。將懸浮液在60℃的內(nèi)部溫度(外套溫度85℃)加熱并將90mg2-羥基乙酸(1.161mmol)加入至溶液。然后在60℃的內(nèi)部溫度加入0.25ml水。在30℃的內(nèi)部溫度將溶液用(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮羥乙酸鹽引晶并在室溫?cái)嚢柽^夜(16h)。將另10ml乙腈加入并在室溫?cái)嚢枵麄€(gè)周末。將懸浮液在室溫通過玻璃濾器過濾，并用1.0ml乙腈/水9:1v/v洗滌1次，用1.0ml乙腈洗滌兩次。將320mg濕濾餅于室溫在干燥烘箱中干燥過夜(16h)至干。(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮羥乙酸鹽晶種的制備將63.0mg(0.146mmol)游離堿(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮和11.24mg(0.146mmol)羥乙酸溶解于1.0ml乙腈和0.05ml水中。將溶液在室溫用磁力攪拌器攪拌。過夜形成沉淀。將懸浮液在室溫通過玻璃濾器過濾，并用0.5ml乙腈洗滌三次。將濕濾餅于室溫在干燥烘箱中干燥過夜(16h)至干。收率：52mg白色粉末。實(shí)施例5、6和7：結(jié)晶(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮及其乙酸鹽和羥乙酸鹽形式的XRPD和DSC分析在下列實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行游離堿結(jié)晶(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮及其乙酸鹽和羥乙酸鹽形式的XRPD分析。在下列實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行DSC分析：實(shí)施例5：結(jié)晶(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮的XRPD分析在XRPD分析之前，如下所述將游離堿(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮重結(jié)晶。于100ml四頸燒瓶中，將4.0g(2.232mmol)(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮懸浮于24.0ml乙酸乙酯中并在室溫用槳攪拌。將懸浮液在70℃的內(nèi)部溫度(外套溫度90℃)溶解，以提供澄清的黃色溶液。將溶液歷經(jīng)30min在室溫冷卻并在35℃的內(nèi)部溫度用游離堿(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮引晶(結(jié)晶形成非常緩慢)，并在室溫?cái)嚢柽^夜(16h)。然后將溶液在室溫通過玻璃濾器過濾(快速過濾，歷時(shí)：<1min)并用2.0ml乙酸乙酯洗滌3次(澄清的黃色母液)。將5.82g濕濾餅在干燥烘箱中于室溫干燥過夜16h，且于40℃干燥16h。收率：3.63g白色粉末(90.75％)結(jié)晶(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮通過XRPD分析，且特征峰示于下表中(也參見圖5)。其中，在8.5、13.3、13.9、14.4、15.2、17.2、17.5、18.1、21.3和22.5°2θ處的峰最具特征性。角度(2θ°)強(qiáng)度％角度(2θ°)強(qiáng)度％8.5中等21.7高11.4中等22.5高12.7中等23.3高13.3中等23.6中等13.9中等24.4中等14.4中等25.6中等15.2中等26.1高17.2高26.6高17.5高27.9中等18.1高28.5中等21.3中等28.9中等結(jié)晶游離堿(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮通過DSC分析且發(fā)現(xiàn)在約115℃開始熔化。實(shí)施例6：結(jié)晶(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮乙酸鹽的XRPD分析結(jié)晶(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮乙酸鹽通過XRPD分析且特征峰示于下表中(也參見圖6)。其中在8.8、11.5、16.4、17.6、18.2、19.6、20.1、20.8和21.1°2θ處的峰最具特征性。角度(2θ°)強(qiáng)度％角度(2θ°)強(qiáng)度％8.8高19.1低10.0低19.6中等11.5高20.1高14.2低20.8高14.6低21.1中等15.7低23.3中等16.4高26.2低17.6中等26.6中等18.2高27.1中等結(jié)晶(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮乙酸鹽通過DSC分析且發(fā)現(xiàn)在約170℃處具有寬吸熱。實(shí)施例7：結(jié)晶(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮羥乙酸鹽的XRPD分析結(jié)晶(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮羥乙酸鹽通過XRPD分析且特征峰示于下表中(也參見圖7)。其中在8.7、11.6、16.1、18.0、19.8、20.7和21.1°2θ處的峰最具特征性。結(jié)晶(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羥基乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮羥乙酸鹽通過DSC分析且發(fā)現(xiàn)在約188℃開始熔化。實(shí)施例8：用于制備適用于皮下施用乙酸鹽形式的化合物A的藥物制劑的方法對于1.00升藥物產(chǎn)品溶液，將約900g注射用水放置到適用于藥物摻混的干凈容器中。加入50g甘露醇、0.60g乙酸和10g苯甲醇且溶解于注射用水中。然后加入1.00g化合物A并溶解。用1N氫氧化鈉溶液將pH調(diào)節(jié)至目標(biāo)值，例如5.0。然后將注射用水加至1.016kg的目標(biāo)產(chǎn)物溶液重量。將藥物產(chǎn)品溶液通過0.22μmPVDF膜無菌過濾到經(jīng)洗滌的、經(jīng)除熱原的小瓶中，用無菌橡膠塞密閉并卷邊。最后將小瓶通過高壓滅菌法滅菌。實(shí)施例8a：用于制備適用于皮下施用乙酸鹽形式的化合物A的藥物制劑的替代方法對于1.00升藥物產(chǎn)品溶液，將約900g注射用水放置到適用于藥物摻混的干凈容器中。加入50g甘露醇和10g苯甲醇且溶解于注射用水中。然后加入1.14g化合物A的乙酸鹽并溶解。用乙酸溶液將pH調(diào)節(jié)至目標(biāo)值，例如5.0。然后將注射用水加至1.016kg的目標(biāo)產(chǎn)物溶液重量。將藥物產(chǎn)品溶液通過0.22μmPVDF膜無菌過濾到經(jīng)洗滌的、經(jīng)除熱原的小瓶中，用無菌橡膠塞密閉并卷邊。最后將小瓶通過高壓滅菌法滅菌。實(shí)施例9：游離堿、乙酸鹽和羥乙酸鹽形式的化合物A的比較溶解度分析化合物A的游離堿形式以及乙酸鹽和羥乙酸鹽形式的相對溶解度并結(jié)果示于下表中。通過加入用于pH調(diào)節(jié)的HCl或NaOH滴定溶液?；衔顰的乙酸鹽和羥乙酸鹽形式相對于其游離堿形式改善的水溶解度使化合物A的乙酸鹽和羥乙酸鹽更適于皮下注射或輸注。實(shí)施例10：本發(fā)明化合物(化合物A)、其對映異構(gòu)體(化合物B)、其外消旋物(化合物A/B)和福莫特羅的體外細(xì)胞特性本發(fā)明化合物(化合物A)在如前文所述的測試1中顯示下列EC50值。skMC：分化的骨骼肌小管；*：與福莫特羅相比；**：與異丙腎上腺素相比；#：cAMP(對于β1和β2)，Ca2+(對于α1A)；n.d.未測定本發(fā)明化合物(化合物A)是有效的選擇性β2AR激動(dòng)劑，對β1AR具有非常低的內(nèi)在功效且對α1AAR無功效。其對映異構(gòu)體化合物B對β2AR非常弱，EC50為950nM。實(shí)施例11：福莫特羅和化合物A對骨骼肌和心臟重量的體內(nèi)作用重量為350-400g的雄性WistarHanIGS(InternationalGeneticStandard)大鼠(Crl:WI(Han))購自CharlesRiverLaboratories。使大鼠適應(yīng)設(shè)施7天。在25℃將動(dòng)物以12:12h光-暗周期分組(每組3只動(dòng)物)關(guān)養(yǎng)。使它們進(jìn)食含有18.2％蛋白質(zhì)和3.0％脂肪的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室飲食，其能量含量為15.8MJ/kg(NAFAG3890,Kliba,Basel,Switzerland)。無限制地提供食物和水。將福莫特羅或化合物A溶解于下示賦形劑中，以在用Alzet模型2ML428天的情況下，達(dá)到0.003至0.03mg/kg/天的劑量范圍(對于福莫特羅)和0.01至0.1mg/kg/天的劑量范圍(對于化合物A)。將泵用溶液填充并在37℃于PBS中保持?jǐn)?shù)小時(shí)直至手術(shù)植入。在手術(shù)前至少30分鐘，大鼠用0.02mg/kg劑量的Temgesic以1ml/kg的體積皮下治療，然后將如上所示用溶液填充的泵皮下植入到用3％濃度的異氟烷麻醉下的大鼠的背部。手術(shù)后24h和48h將Temgesic皮下施用至大鼠。每周測量體重兩次。手術(shù)后10天在麻醉下除去夾子。治療后四周，用CO2將大鼠施以安樂死，切割脛骨肌前部、腓腸肌和比目魚肌、心臟和腦并稱重。腦重量用于器官重量的標(biāo)準(zhǔn)化。結(jié)果以平均+/-SEM表示。在單向方差分析后使用Dunnett's多重比較實(shí)驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，以比較治療組和賦形劑對照組。當(dāng)概率值為<0.05時(shí)則認(rèn)為差異是顯著的：*：通過GraphPadPrism5.0版(GraphPadSoftware,Inc.,LaJolla,CA)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。將肌肉重量標(biāo)準(zhǔn)化為第0天時(shí)的體重(初始體重)并且心臟重量通過腦重量來標(biāo)準(zhǔn)化。研究1：福莫特羅*賦形劑：20％于鹽水中的1:2Cremophor:乙醇(0.9％NaCl)研究2：化合物A*賦形劑：20％于鹽水中的1:2Cremophor:乙醇(0.9％NaCl)圖1顯示：福莫特羅誘導(dǎo)骨骼肌肥大和心臟質(zhì)量增加至相同程度，同時(shí)化合物A誘導(dǎo)骨骼肌肥大，而對心臟質(zhì)量的影響最小，表明化合物A展現(xiàn)出對骨骼肌的選擇性作用超過心臟肌肉。0.01mg/kg/天的化合物A顯著誘導(dǎo)骨骼肌肥大達(dá)11％，其中穩(wěn)態(tài)血漿濃度為～0.2nM，而即使在0.1mg/kg/天時(shí)也未對心臟形態(tài)學(xué)有所發(fā)現(xiàn)，其中穩(wěn)態(tài)濃度為～2nM。實(shí)施例12：福莫特羅和化合物A對離體器官功能(左心房收縮、竇房結(jié)搏動(dòng)頻率和整個(gè)心臟自動(dòng)節(jié)律性)的作用方法左心房收縮：使用體重為600+/-80g的DunkinHartley豚鼠的左心房，在RicercaBiosciences,LLC(目錄號(hào)407500Adrenergicβ1)進(jìn)行左心房收縮測定(Arch.Int.Pharmacodyn.1971:191:133-141.)。竇房結(jié)搏動(dòng)頻率：使用氯胺酮/賽拉嗪的混合物i.v.進(jìn)行深度麻醉后，通過放血?dú)⑺繬ewZealand白色雌性兔?？焖俪バ呐K，并將其放置在Tyrode's溶液中。用95％O2、5％CO2向該溶液連續(xù)供氣，并預(yù)先升溫至約36±0.5℃。從心臟剩余部分分離右心房。將制備物安置于組織浴中并在37±0.5℃保持至少1小時(shí)穩(wěn)定。用連接至高輸出阻抗中和放大器(VF-180微電極放大器，Bio-Logic)的填充有3MKCl的標(biāo)準(zhǔn)玻璃微電極細(xì)胞內(nèi)記錄動(dòng)作電位(AP)。AP在數(shù)字示波器(HM-407示波器，HAMEG)上顯示，借助于高分辨率數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)(Notocord軟件hem4.2,NotocordSA,Croissy,France)進(jìn)行分析。穩(wěn)定1小時(shí)后，將化合物以遞增濃度加入至Tyrode’s溶液，將每種濃度保持30分鐘。兩種濃度之間無清洗。在30分鐘灌注期結(jié)束時(shí)，通過分析實(shí)驗(yàn)方案期間的動(dòng)作電位進(jìn)行電生理測量。通過對每10秒搏動(dòng)次數(shù)計(jì)數(shù)，以每分鐘搏動(dòng)次數(shù)(bpm)表示結(jié)果，評價(jià)SA自主頻率。數(shù)據(jù)被表示為平均±SEM。自動(dòng)節(jié)律性：在離體Langendorff灌注的兔心臟中研究自動(dòng)節(jié)律性，由HondeghemPharmaceuticalsConsultingN.V.,B-8400Oostende,Belgium實(shí)施。對來自稱重為約2.5kg的約3月齡白化雌性兔的心臟運(yùn)行測試。使用根據(jù)Langendorff技術(shù)灌注的離體兔心臟、在全自動(dòng)模型中測量化合物的作用。用遞增濃度的測試項(xiàng)目逆行灌注自主搏動(dòng)的心臟。將一個(gè)電極小心地放置在左心房上以記錄竇結(jié)自動(dòng)節(jié)律性的循環(huán)時(shí)間。圖2a和2b顯示將福莫特羅與本發(fā)明化合物(化合物A)比較時(shí)所獲得的結(jié)果。與福莫特羅比較，化合物A顯示最高10μM時(shí)仍對左心房收縮無作用，且對起搏器活動(dòng)具有較小的直接作用。福莫特羅化合物A左心房收縮EC50(n＝2)17nM>10μM竇房結(jié)搏動(dòng)率，最大增加(n＝6)+45％+6.2％自動(dòng)節(jié)律性，最大增加(n＝3)+46％+17％圖2a和2b的值被表示為平均±SEM；竇房結(jié)(n＝6)，離體心臟(n＝3)實(shí)施例13：福莫特羅和化合物A對心率的體內(nèi)作用WistarHan(W-H)IGS(InternationalGeneticStandard)大鼠(Crl:WI(Han))購自CharlesRiverLaboratories。長期植入股動(dòng)脈和靜脈導(dǎo)管并通過彈簧拴系-旋轉(zhuǎn)(springtether-swivel)系統(tǒng)外置，關(guān)養(yǎng)在專門的籠子中。將動(dòng)脈導(dǎo)管連接至壓力傳感器以連續(xù)測量脈壓、平均動(dòng)脈壓和心率，其由血壓信號(hào)經(jīng)由數(shù)字?jǐn)?shù)據(jù)采集系統(tǒng)得到。經(jīng)由通過皮膚buttun植入的s.c導(dǎo)管施用化合物。數(shù)值被表示為平均±SEM(n＝3)。當(dāng)皮下快速濃注達(dá)0.3mg/kg施用時(shí)，化合物A與福莫特羅相比顯示較小的心率增加，如示于圖3a、3b和3c中。實(shí)施例14：福莫特羅和化合物A對心率的體內(nèi)作用將體重約為4至8kg的24只雌性恒河猴隨機(jī)分成4組(n＝6)。在單次皮下施用化合物后，將動(dòng)物限制在椅子上至多4小時(shí)，然后回到其圍欄。使用SurgivetV3304裝置測量心率。數(shù)值表示為平均±SEM(n＝6)。當(dāng)皮下快速濃注達(dá)0.03mg/kg施用時(shí)，化合物A與福莫特羅相比顯示較小的心率增加，如示于圖4a和4b中。實(shí)施例15：化合物A、其對映異構(gòu)體(化合物B)及其外消旋物(化合物A/B)對血清素5-HT2C受體的作用將人重組hr5-HT2CCHO細(xì)胞膜(BiosignalPackard,USA)和3H-美舒麥角(mesulergine)(NENLifeScienceProducts,USA,1nM)用于測量化合物對人5-HT2C受體的結(jié)合親合力。在1μM美舒麥角存在下評價(jià)非特異性結(jié)合。在22℃將250μL總體積中的各50μL的膜、配體和化合物在96孔板中含有50mMTris,0.1％抗壞血酸,10μM優(yōu)降寧(Pargyline)的緩沖液(pH7.7)中孵育60min。將板過濾，在冰冷的50mMTris中洗滌3次，干燥并在Topcount中測量。將在不含抗生素的培養(yǎng)基中生長至對數(shù)中期的、共表達(dá)線粒體水母發(fā)光蛋白(apoaequorin)、重組血清素5-HT2Cne和混雜G蛋白Gα16的CHO-K1細(xì)胞用PBS-EDTA剝離，離心并以1x106個(gè)細(xì)胞/ml的濃度重懸浮于測定緩沖液(DMEM/HAM’sF12，含有HEPES、不含酚紅+0.1％BSA無蛋白酶)中。將細(xì)胞與腔腸素(coelenterazine)h在室溫孵育至少4h。參照激動(dòng)劑為a-甲基-5-HT。對于激動(dòng)劑測試，將50μL細(xì)胞懸浮液與50μL測試或參照激動(dòng)劑在96孔板中混合。使用Hamamatsu功能藥物篩選系統(tǒng)6000(FDSS6000)光度計(jì)記錄所得的光發(fā)射。測試化合物的激動(dòng)劑活性表示為在其EC100濃度時(shí)參照激動(dòng)劑活性的百分比。血清素5-HT2C結(jié)合CHOEC50(Emax％)5-HTn.d.0.24nM化合物A(R)11μM280nM(83％)化合物B(S)0.8μM19.7nM(99％)化合物A/B1.7μM25nM(113％)當(dāng)與β2AR激動(dòng)劑活性(5.6nM)比較時(shí)，化合物A對5-HT2C的活性低50倍，而其對映異構(gòu)體化合物B對β2AR的活性非常弱，EC50為950nM，但對5-HT2C的活性則強(qiáng)得多，EC50為19.7nM，顯示對目標(biāo)的選擇性逆轉(zhuǎn)。當(dāng)與外消旋物或(S)對映異構(gòu)體比較時(shí)，化合物A對5-HT2C的活性也低10倍，表明該化合物的副作用特性是有利的。當(dāng)前第1頁1 2 3 當(dāng)前第1頁1 2 3