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一種胎盤絨毛板間充質(zhì)干細(xì)胞及臨床化制備方法與流程

文檔序號:11837512閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種胎盤絨毛板間充質(zhì)干細(xì)胞的臨床化制備方法,其特征在于,包括以下步驟:

(1)采集母血,并進(jìn)行傳染病檢測,然后取出胎盤,棄去覆蓋在外側(cè)的羊膜,剪取胎盤絨毛板;

(2)剔除附著在胎盤絨毛板上的血管和絨毛組織;

(3)用無菌生理鹽水清洗步驟(2)所得的胎盤絨毛板至無血色;

(4)將清洗后的絨毛板剪成1-5mm2的組織塊,然后用無菌生理鹽水清洗2-5次;

(5)將步驟(4)中的組織塊接種于完全培養(yǎng)基中,置于37℃、5%CO2潮濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng);其中完全培養(yǎng)基成分為:無血清培養(yǎng)基、30ng/mL bFGF、體積濃度為2%的GlutaMAX;

(6)每隔5-10天更換一次培養(yǎng)基,當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到70-80%時,用TrypLETM Select消化細(xì)胞;

(7)傳代培養(yǎng):消化后進(jìn)行離心處理,2000r/min離心3min,收集細(xì)胞,按1×104-2×104個細(xì)胞/cm2的密度接種于T175培養(yǎng)瓶中,然后添加20mL完全培養(yǎng)基傳代培養(yǎng),得胎盤絨毛板間充質(zhì)干細(xì)胞;

(8)針對步驟(7)所得的胎盤絨毛板間充質(zhì)干細(xì)胞,檢測以下項目中的至少一項:細(xì)胞活性、無菌檢測、細(xì)胞表面標(biāo)志物檢測、核性檢測、HLA-ABC/DR配型;

(9)凍存:將傳代培養(yǎng)所得的胎盤絨毛板間充質(zhì)干細(xì)胞按2×106-8×106個細(xì)胞/mL密度凍存于1mL凍存液中,凍存細(xì)胞經(jīng)程序降溫至-80℃后轉(zhuǎn)入液氮罐中長期保存;

(10)建立包含以上信息的胎盤干細(xì)胞的數(shù)據(jù)庫,并使該數(shù)據(jù)庫與步驟(9)的凍存細(xì)胞進(jìn)行關(guān)聯(lián)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種胎盤絨毛板間充質(zhì)干細(xì)胞的臨床化制備方法,其特征在于,步驟(1)中對胎盤的處理需在采集后72h內(nèi)進(jìn)行。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種胎盤絨毛板間充質(zhì)干細(xì)胞的臨床化制備方法,其特征在于,步驟(5)中組織塊與完全培養(yǎng)基的w/v為0.5-2.0:10-15。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種胎盤絨毛板間充質(zhì)干細(xì)胞的臨床化制備方法,其特征在于,步驟(7)中細(xì)胞密度為1×104個細(xì)胞/cm2。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種胎盤絨毛板間充質(zhì)干細(xì)胞的臨床化制備方法,其特征在于,步驟(9)中所述凍存液由以下組分組成且各組分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為:80%無血清培養(yǎng)基、13%人血白蛋白、7%二甲基砜。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種胎盤絨毛板間充質(zhì)干細(xì)胞的臨床化制備方法,其特征在于,步驟(9)中凍存時細(xì)胞密度為2×106個細(xì)胞/mL。

7.如權(quán)利要求1-6任一項所述的制備方法制備得的胎盤絨毛板間充質(zhì)干細(xì)胞。

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