本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域中BMP-2抗體及其在檢測骨修復(fù)材料中BMP-2蛋白含量中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP)是由骨基質(zhì)分泌的一種疏水性蛋白，屬于轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-β)超家族成員，由Urist等人于1965年首次提出，1972年定義，并于1982年首次從脫鈣骨基質(zhì)提取物中分離得到的一種活性蛋白質(zhì)。BMP家族包括BMP-1,2,4,6,7,9,12,14等，其中BMP-2具有明顯誘導(dǎo)未分化的間充質(zhì)干細(xì)胞和成纖維細(xì)胞定向分化為成骨細(xì)胞的作用并能調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞和成軟骨細(xì)胞的分化，誘導(dǎo)異位骨形成和促進(jìn)骨折愈合的功能。BMP-2是骨生成的啟動因子，可以加速骨的重建，是骨修復(fù)基因治療的理想目的基因，是目前唯一能誘導(dǎo)異位成骨的細(xì)胞因子，因而成為骨組織工程學(xué)研究中最重要的生長因子。目前，BMP-2已成功地用于治療骨不連和骨缺損的修復(fù)。BMP一般無種屬特異性，具有跨種屬誘導(dǎo)成骨能力，因而其臨床應(yīng)用前景十分廣闊。申請人使用了一種人工修飾的BMP-2，即在其末端添加了一個膠原蛋白結(jié)合結(jié)構(gòu)域(CBD)，同時使用了骨修復(fù)材料，可以顯著增加BMP-2的治療效果。

目前針對骨修復(fù)材料中BMP-2蛋白含量的直接測定無較好方法，現(xiàn)有技術(shù)中的檢測骨修復(fù)材料中BMP-2蛋白含量的方法誤差比較大?，F(xiàn)有技術(shù)中一般采用先將骨材料中BMP-2洗脫再測定洗脫液的方法，一方面BMP-2洗脫不完全或者很難洗脫下來，造成檢測不準(zhǔn)確；另一方面，洗脫液中測定BMP-2的含量，洗脫液會干擾檢測結(jié)果。或者通過測定結(jié)合前后溶液的BMP-2蛋白濃度來計算，但成品制成之后就無法準(zhǔn)確測定BMP-2的含量。這種方法結(jié)合后蛋白濃度過低，低于相關(guān)檢測方法的檢測下限，不僅操作繁瑣，而且誤差比較大。目前急需一種檢測骨修復(fù)材料中BMP-2蛋白含量的方法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是如何檢測骨修復(fù)材料或骨組織中BMP-2蛋白含量。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明首先提供了BMP-2抗體在制備檢測骨修復(fù)材料或骨組織中BMP-2蛋白含量產(chǎn)品中的應(yīng)用；其中，所述BMP-2抗體為由在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的保藏編號為CGMCC No.12257的rhBMP-2單克隆抗體細(xì)胞株44F5分泌的抗體。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明還提供了保藏編號為CGMCC No.12257的rhBMP-2單克隆抗體細(xì)胞株44F5在制備檢測骨修復(fù)材料或骨組織中BMP-2蛋白含量產(chǎn)品中的應(yīng)用。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明還提供了與所述BMP-2抗體相關(guān)的生物材料在制備檢測骨修復(fù)材料或骨組織中BMP-2蛋白含量產(chǎn)品中的應(yīng)用；所述生物材料為B1)至B10)中的任一種：

B1)編碼所述BMP-2抗體的核酸分子；

B2)含有B1)所述核酸分子的表達(dá)盒；

B3)含有B1)所述核酸分子的重組載體；

B4)含有B2)所述表達(dá)盒的重組載體；

B5)含有B1)所述核酸分子的重組微生物；

B6)含有B2)所述表達(dá)盒的重組微生物；

B7)含有B3)所述重組載體的重組微生物；

B8)含有B4)所述重組載體的重組微生物；

B9)含有B1)所述核酸分子的細(xì)胞系；

B10)含有B2)所述表達(dá)盒的細(xì)胞系。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明還提供了所述BMP-2抗體。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明還提供了所述生物材料。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明還提供了保藏編號為CGMCC No.12257的rhBMP-2單克隆抗體細(xì)胞株44F5。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明還提供了包括下述P1或P2的產(chǎn)品：

P1、檢測骨修復(fù)材料或骨組織中BMP-2蛋白含量的產(chǎn)品，包括P11、P12和P13：

P11、所述BMP-2抗體；

P12、不含BMP-2的骨修復(fù)材料或骨組織；

P13、BMP-2蛋白質(zhì)；

P2、檢測骨修復(fù)材料或骨組織中BMP-2蛋白含量的產(chǎn)品，包括P21和P22：

P21、所述BMP-2抗體；

P22、含有BMP-2的骨修復(fù)材料或骨組織。

上述產(chǎn)品還可包括進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附所需的試劑和/或儀器。

上述產(chǎn)品可僅為上述P1或P2，上述產(chǎn)品還可由上述P1或P2與進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附所需的試劑和/或儀器組成。

上述產(chǎn)品中，所述含有BMP-2的骨修復(fù)材料或骨組織中BMP-2的含量是已知的。

上述產(chǎn)品可為試劑或試劑盒，如酶聯(lián)免疫吸附試劑盒。

上述產(chǎn)品中，所述不含BMP-2的骨修復(fù)材料或骨組織具體可為煙臺正海生物科技股份有限公司產(chǎn)品。所述含有BMP-2的骨修復(fù)材料或骨組織具體可為煙臺正海生物科技股份有限公司產(chǎn)品。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明還提供了檢測骨修復(fù)材料或骨組織中BMP-2蛋白含量的方法，所述方法包括將所述BMP-2抗體與待測樣品進(jìn)行反應(yīng)，確定待測樣品中BMP-2蛋白含量。

上述方法中，所述待測樣品可為直接得到的骨修復(fù)材料或骨組織，還可為將骨修復(fù)材料或骨組織粉碎得到的骨修復(fù)材料或骨組織粉末。

上述方法還可包括利用所述BMP-2抗體與含有BMP-2蛋白的骨修復(fù)材料或骨組織標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行反應(yīng)制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，所述標(biāo)準(zhǔn)品中BMP-2蛋白的含量是已知的。所述待測樣品的BMP-2蛋白含量可以及依據(jù)所述BMP-2抗體與待測樣品反應(yīng)的結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)曲線得出。

上述方法可通過酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)檢測骨修復(fù)材料或骨組織中BMP-2蛋白含量。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明還提供了下述X1或X2或X3：

X1、所述BMP-2抗體在檢測骨修復(fù)材料或骨組織中BMP-2蛋白含量中的應(yīng)用；

X2、所述生物材料在檢測骨修復(fù)材料或骨組織中BMP-2蛋白含量中的應(yīng)用；

X3、保藏編號為CGMCC No.12257的rhBMP-2單克隆抗體細(xì)胞株44F5在檢測骨修復(fù)材料或骨組織中BMP-2蛋白含量中的應(yīng)用。

本發(fā)明首先通過動物免疫、細(xì)胞融合、雜交瘤細(xì)胞的篩選與單抗檢測、雜交瘤細(xì)胞的克隆化獲得細(xì)胞株，進(jìn)一步純化獲得鼠抗人BMP-2單克隆抗體(所述BMP-2抗體)，再建立相應(yīng)的檢測方法來對骨修復(fù)材料中BMP-2蛋白含量進(jìn)行定量。本發(fā)明可以利用BMP-2抗體直接在骨修復(fù)材料上反應(yīng)，避免蛋白洗脫后變性及洗脫不完全；本發(fā)明的BMP-2抗體特異性高，靈敏度高，可以提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。利用鼠抗人BMP-2單克隆抗體對骨修復(fù)材料中BMP-2的含量進(jìn)行檢測，回收率(即BMP-2含量檢測值與BMP-2含量實(shí)際值的比值)為106.4％，精密度為5.2％，并且建立的檢測骨修復(fù)材料或骨組織中BMP-2蛋白含量的方法比較穩(wěn)定，準(zhǔn)確性高，適用于作為常規(guī)方法來檢測骨修復(fù)材料中BMP-2蛋白含量。本發(fā)明建立的檢測骨修復(fù)材料或骨組織中BMP-2蛋白含量的方法有利于骨修復(fù)材料產(chǎn)品的研究開發(fā)，質(zhì)量控制和臨床應(yīng)用，具有較高的應(yīng)用價值。該方法有如下優(yōu)點(diǎn)：(1)操作簡便，不需要進(jìn)行蛋白洗脫等操作；(2)無需對骨修復(fù)材料中蛋白進(jìn)行洗脫，減少洗脫不完全、蛋白變性以及洗脫過程中骨修復(fù)材料中其他雜質(zhì)帶來的交叉污染，提高了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性；操作簡便快速，不需要進(jìn)行組織分離等操作；(3)結(jié)果較客觀可靠，準(zhǔn)確度高，變異小。

生物材料保藏說明

生物材料的分類命名：rhBMP-2單克隆抗體細(xì)胞株

生物材料的菌株編號：44F5

生物材料的保藏單位名稱：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心

生物材料的保藏單位簡稱：CGMCC

生物材料的保藏單位地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所，郵政編碼：100101

生物材料的保藏日期：2016年04月06日

生物材料的保藏中心登記入冊編號：CGMCC No.12257

附圖說明

圖1為不同稀釋比例的Anti-Mouse IgG(whole molecule)–Peroxidase antibody produced in rabbit的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

圖2為不同稀釋比例的鼠抗人BMP-2單克隆抗體的實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較。

圖3為最佳鼠抗人BMP-2單克隆抗體與Anti-Mouse IgG(whole molecule)–Peroxidase antibody produced in rabbit稀釋比例的下的結(jié)果。

圖4為市售單克隆抗體(Monoclonal Anti-BMP2antibody produced in mouse)的檢測結(jié)果。

圖5為市售多克隆抗體(Santa cruz公司的Goat polyclonal IgG，貨號為SC6895與SC6895P)的檢測結(jié)果。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施方式對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的詳細(xì)描述，給出的實(shí)施例僅為了闡明本發(fā)明，而不是為了限制本發(fā)明的范圍。

下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。

下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。

實(shí)施例1、骨修復(fù)材料中BMP-2蛋白含量的檢測

1、研究對象：骨修復(fù)材料(含活性BMP-2蛋白，BMP-2的含量為85.0μg/g骨修復(fù)材料)，該骨修復(fù)材料為將空白骨修復(fù)材料(煙臺正海生物科技股份有限公司的骨修復(fù)材料，本文中稱為空白骨修復(fù)材料)與BMP-2對照品(BMP-2對照品為由兩個序列表中序列1所示的蛋白質(zhì)單體組成的蛋白質(zhì))的水溶液復(fù)合，經(jīng)凍干所得產(chǎn)品。

2、BMP-2對照品：由兩個序列表中序列1所示的蛋白質(zhì)單體組成的蛋白質(zhì)

3、試劑：

生長培養(yǎng)基：DMEM(GIBCO，#11995)+10％(質(zhì)量百分比濃度)胎牛血清(GIBCO，#10099)

樣品稀釋液：PBS+1％(質(zhì)量百分比濃度)BSA(生工生物工程(上海)股份有限公司，AR2440)

Goat polyclonal IgG：Santa cruz，SC6895

Goat polyclonal IgG：Santa cruz，SC6895P

Anti-Goat IgG(whole molecule)–Peroxidase antibody produced in rabbit：sigma，A5420

Anti-Mouse IgG(whole molecule)–Peroxidase antibody produced in rabbit：sigma，A9044

Monoclonal Anti-BMP2antibody produced in mouse：sigma，WH0000650M2

洗液：PBS+1％(質(zhì)量百分比濃度)Tween-20(sigma，P9416)

TMB(3,3,5,5-四甲基聯(lián)苯胺)：sigma，1001774375

終止液：2M硫酸水溶液

96孔板：costar，42592

結(jié)合緩沖液：20mM磷酸鈉，0.15M NaCl，pH 7.0

洗脫緩沖液：0.1M鹽酸化甘氨酸，0.15M NaCl，pH3.0

pH調(diào)節(jié)溶液：1M Tris-HCI，pH8.0

4、儀器：

purifier100層析系統(tǒng)

層析柱(XK26m×250mm)，預(yù)裝MabSect SuRe(GE制造)填料，柱體積100ml

酶標(biāo)儀，MULTISKAN MK3

5、骨修復(fù)材料中BMP-2蛋白含量的檢測

5.1BMP-2單克隆抗體的制備

5.1.1動物免疫：取BLAB/C小鼠，用BMP-2(BMP-2由兩個單體組成，每個單體的序列為序列表中序列1)三次免疫后再經(jīng)過一次加強(qiáng)免疫，取脾融合。

5.1.2細(xì)胞融合：將骨髓瘤細(xì)胞與脾細(xì)胞按照1:10的比例混合，離心后加入PEG4000(生工生物工程(上海)股份有限公司，貨號為A620431)，使用不完全培養(yǎng)液終止。

5.1.3雜交瘤細(xì)胞的篩選與單抗檢測：使用HAT選擇培養(yǎng)液(南京生興生物技術(shù)有限公司，貨號：21060-017)篩選得到雜交瘤細(xì)胞系，使用ELISA的方法檢測，該雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞系已于2016年04月06日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏中心登記入冊編號：CGMCC No.12257。

5.1.4雜交瘤細(xì)胞的克隆化獲得細(xì)胞株：使用有限稀釋法克隆獲得雜交瘤細(xì)胞CGMCC No.12257細(xì)胞株。

5.1.5進(jìn)一步純化獲得鼠抗人BMP-2單克隆抗體

將雜交瘤細(xì)胞CGMCC No.12257細(xì)胞株置于細(xì)胞培養(yǎng)基中，在37℃條件下進(jìn)行培養(yǎng)，得到細(xì)胞培養(yǎng)上清液。其中，細(xì)胞培養(yǎng)基為向DMEM(高糖)培養(yǎng)基中添加小牛血清得到的細(xì)胞培養(yǎng)基，小牛血清在細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中的體積百分比濃度為10％，細(xì)胞培養(yǎng)基的pH為7.4。

用purifier100層析系統(tǒng)及預(yù)裝MabSect SuRe(GE制造)填料的層析柱(XK26m×250mm)進(jìn)行抗體的純化，步驟如下：

1.平衡層析柱：用結(jié)合緩沖液平衡層析柱，平衡體積500mL，平衡流速200cm/h；

2.上樣：細(xì)胞培養(yǎng)上清液，直接上樣，上樣流速200cm/h，上樣體積200mL；

3.淋洗：用結(jié)合緩沖液淋洗層析柱，淋洗流速200cm/h，淋洗體積500mL；

4.洗脫：以洗脫緩沖液進(jìn)行0-100％的梯度洗脫，接收洗脫峰，并用pH調(diào)節(jié)溶液將條整pH至7.0，即為經(jīng)純化的鼠抗人BMP-2單克隆抗體溶液；

5.2骨修復(fù)材料中BMP-2蛋白含量測定方法建立：

5.2.1Anti-Mouse IgG(whole molecule)–Peroxidase antibody produced in rabbit最佳稀釋比例的篩選

以上述經(jīng)純化的鼠抗人BMP-2單克隆抗體溶液按照1∶1000的體積比稀釋后得到的鼠抗人BMP-2單克隆抗體工作液包被酶標(biāo)板，將Anti-Mouse IgG(whole molecule)–Peroxidase antibody produced in rabbit分別按照1∶2000(即2000倍稀釋)，1∶5000(即5000倍稀釋)，1∶8000(即8000倍稀釋)和1∶15000(即15000倍稀釋)的體積比稀釋后得到的Anti-Mouse IgG(whole molecule)–Peroxidase antibody produced in rabbit工作液，確定Anti-Mouse IgG(whole molecule)–Peroxidase antibody produced in rabbit的最佳稀釋比例，Anti-Mouse IgG(whole molecule)–Peroxidase antibody produced in rabbit工作液的使用體積為100μl，具體操作步驟同步驟5.2.3中(1)-(10)。

結(jié)果如圖1所示，由結(jié)果可以初步確定：將Anti-Mouse IgG(whole molecule)–Peroxidase antibody produced in rabbit按照1∶8000的體積比稀釋后，結(jié)果較好。

5.2.2鼠抗人BMP-2單克隆抗體最佳稀釋比例的篩選

將鼠抗人BMP-2單克隆抗體分別按照1∶500和1∶1000的體積比稀釋后包被酶標(biāo)板，然后將Anti-Mouse IgG(whole molecule)–Peroxidase antibody produced in rabbit按照1∶8000的體積比稀釋后檢測鼠抗人BMP-2單克隆抗體的最佳稀釋比例，鼠抗人BMP-2單克隆抗體工作液的使用體積為100μl，具體操作步驟同步驟5.2.3中(1)-(10)。

結(jié)果如圖2所示，由結(jié)果可以初步確定：鼠抗人BMP-2單克隆抗體按照1∶500的體積比稀釋后，結(jié)果較好。

5.2.3根據(jù)多次試驗(yàn)，確定骨修復(fù)材料中BMP-2蛋白含量測定方法步驟如下：

(1)制備骨修復(fù)材料(含活性蛋白)標(biāo)準(zhǔn)品

準(zhǔn)確稱取0.1g空白骨修復(fù)材料，置入24孔板內(nèi)，加入已知含量的BMP-2對照品水溶液，超凈臺過夜吹干，使每克骨修復(fù)材料中BMP-2含量分別為0μg、10μg、20μg、40μg、60μg、80μg、100μg、120μg的骨修復(fù)材料標(biāo)準(zhǔn)品；將骨修復(fù)材料(BMP-2的含量為85.0μg/g骨修復(fù)材料)作為待檢樣品加至該24孔板的2個空白孔中，每孔0.1g；

(2)第二天，配制3％BSA-PBS封閉液(即向PBS中加入BSA得到的BSA的質(zhì)量百分比濃度為3％的溶液)，將骨修復(fù)材料標(biāo)準(zhǔn)品及待檢樣品中每孔加入1mL新鮮配制的3％BSA-PBS封閉液，37℃孵育2h；

(3)吸取24孔板中的封閉液，用洗液1.5mL/孔，清洗3次；向24孔板中加入鼠抗人BMP-2單克隆抗體工作液，500μl/孔，37℃孵育2h，其中，鼠抗人BMP-2單克隆抗體工作液為用樣品稀釋液按1∶500的體積比稀釋鼠抗人BMP-2單克隆抗體得到的液體；

(4)吸取24孔板中的液體，用洗液1.5mL/孔，清洗3次；

(5)向24孔板中加入Anti-Mouse IgG(whole molecule)–Peroxidase antibody produced in rabbit工作液，500μl/孔，37℃孵育2h，其中，Anti-Mouse IgG(whole molecule)–Peroxidase antibody produced in rabbit工作液為用樣品稀釋液按1∶8000的體積比稀釋Anti-Mouse IgG(whole molecule)–Peroxidase antibody produced in rabbit得到的液體；

(6)吸取24孔板中的液體，用洗液1.5mL/孔，清洗5次；

(7)加入TMB 500μl/孔，反應(yīng)約10min；

(8)從24孔板吸取溶液轉(zhuǎn)移至96孔板中，100μl/孔；

(9)向96孔板中加入終止液100μl/孔；

(10)酶標(biāo)儀在450nm波長下進(jìn)行檢測，數(shù)據(jù)分析。

通過上述骨修復(fù)材料標(biāo)準(zhǔn)品建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖3)，標(biāo)準(zhǔn)曲線為y＝0.0053x+0.1462，R²＝0.9965，待檢樣品中BMP-2的含量兩個檢測值分別為87.1μg/g和93.8μg/g，平均值為90.5μg/g，標(biāo)準(zhǔn)差為4.7μg/g，回收率(即BMP-2含量檢測值與BMP-2含量實(shí)際值的比值)為106.4％，精密度為5.2％，說明該方法比較穩(wěn)定，準(zhǔn)確性高，適用于作為常規(guī)方法來檢測骨修復(fù)材料中BMP-2蛋白含量。使用鼠抗人BMP-2單克隆抗體檢測骨修復(fù)材料中BMP-2的含量的特異性好，靈敏度高，極大地提高了實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性，對于骨修復(fù)材料中BMP-2的結(jié)合量及臨床使用具有指導(dǎo)意義。

對比例1、利用現(xiàn)有技術(shù)檢測骨修復(fù)材料中BMP-2蛋白的含量

1、不同洗脫液洗脫骨修復(fù)材料中BMP-2蛋白

1.1使用PBS進(jìn)行洗脫

將骨修復(fù)材料(含活性BMP-2蛋白，BMP-2的含量為85.0μg/g骨修復(fù)材料)置入PBS溶液中，震蕩清洗，分別于2h、4h、6h、8h、20h取樣，分別采用HPLC及elisa(采用SIGMA的Human BMP2ELISA Kit進(jìn)行檢測，產(chǎn)品編號RAB0028)的方法檢測，結(jié)果無BMP-2蛋白被洗脫下來，說明活性蛋白BMP-2與骨修復(fù)材料結(jié)合比較牢固。

1.2使用2M尿素進(jìn)行蛋白洗脫后檢測結(jié)果

使用2M尿素水溶液對骨修復(fù)材料(含活性BMP-2蛋白，BMP-2的含量為85.0μg/g骨修復(fù)材料)進(jìn)行洗脫，分別于2h、4h、6h、8h、20h進(jìn)行取樣檢測，采用HPLC的方法檢測，發(fā)現(xiàn)僅有不到30％的BMP-2蛋白被洗脫下來，使用2M尿素不能完全將BMP-2洗脫下來，表明僅利用對洗脫液中的BMP-2蛋白含量進(jìn)行檢測無法準(zhǔn)確檢測骨修復(fù)材料中BMP-2含量，而洗脫過程中引入的尿素以及骨修復(fù)材料中雜質(zhì)，對常規(guī)方法測定BMP-2蛋白含量造成干擾。

2、利用現(xiàn)有BMP-2抗體檢測骨修復(fù)材料中BMP-2蛋白的含量

2.1使用Monoclonal Anti-BMP2antibody produced in mouse檢測骨修復(fù)材料(含活性BMP-2蛋白，BMP-2的含量為85.0μg/g骨修復(fù)材料)中BMP-2蛋白含量

按照實(shí)施例1中5.2.3的骨修復(fù)材料中BMP-2蛋白含量測定方法，將鼠抗人BMP-2單克隆抗體替換為Monoclonal Anti-BMP2antibody produced in mouse，其他步驟均不變，進(jìn)行BMP-2蛋白含量的檢測，結(jié)果見圖4。利用不同骨修復(fù)材料中BMP-2蛋白含量下測得的數(shù)值得到標(biāo)準(zhǔn)曲線，然而各測得的數(shù)值均散落在圖4中標(biāo)準(zhǔn)曲線周圍，沒有很好的落在曲線上，表明利用Monoclonal Anti-BMP2antibody produced in mouse檢測骨修復(fù)材料中BMP-2蛋白含量時的特異性差，本底高。

2.2使用市售多克隆抗體檢測骨修復(fù)材料中BMP-2蛋白含量

分別使用Santa cruz公司生產(chǎn)的兩種抗BMP-2蛋白的Goat polyclonal IgG，貨號為SC6895以及SC6895P，以下分別簡稱SC6895和SC6895P，檢測骨修復(fù)材料(含活性BMP-2蛋白，BMP-2的含量為85.0μg/g骨修復(fù)材料)中BMP-2蛋白含量。

按照實(shí)施例1中5.2.3的骨修復(fù)材料中BMP-2蛋白含量測定方法，將鼠抗人BMP-2單克隆抗體分別替換為SC6895和SC6895P，其他步驟均不變，進(jìn)行BMP-2蛋白含量的檢測，結(jié)果見圖5。結(jié)果顯示，使用SC6895檢測時，利用不同骨修復(fù)材料中BMP-2蛋白含量下測得的數(shù)值得到標(biāo)準(zhǔn)曲線，然而各測得的數(shù)值均散落在圖5中標(biāo)準(zhǔn)曲線周圍，沒有很好的落在曲線上，表明利用SC6895檢測骨修復(fù)材料中BMP-2蛋白含量時的特異性差(R²＝0.7669)，本底高(在0.4附近)；表明利用SC6895檢測時的回收率低，結(jié)果可靠性不高。使用SC6895P檢測時，發(fā)現(xiàn)該SC6895P不與BMP-2相結(jié)合，無顯色。