本發(fā)明涉及液體菌種技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種基于發(fā)芽綠豆胚的姬松茸培養(yǎng)基以及姬松茸液體菌種制備方法。
背景技術(shù)：
姬松茸生產(chǎn)過程中，液體菌種具有固體菌種所不可比擬的優(yōu)勢，液體菌種具有生產(chǎn)周期短，菌齡短而一致，純度高、活力強(qiáng)，接種簡便快捷，易實(shí)行工廠化、規(guī)模化、標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)。現(xiàn)在，越來越多的人都在研究和使用液體菌種，而液體菌種的推廣和使用也是實(shí)現(xiàn)食用菌工廠化、規(guī)模化、標(biāo)準(zhǔn)化的必然趨勢。但是液體菌種也存在著自身的缺陷和不足：1、液體菌種萌發(fā)點(diǎn)多生長速度快，但是穿透力不強(qiáng)，培養(yǎng)料過粗菌絲不易吃透培養(yǎng)料，菌絲將沿著培養(yǎng)料表面快速生長，培養(yǎng)料內(nèi)部菌絲量很少，嚴(yán)重影響了菌種產(chǎn)量和質(zhì)量的問題；2、常規(guī)的液體菌種雖然解決了固體菌種存在的一些問題，能明顯縮短栽培周期、增強(qiáng)菌種活力和抗逆性、降低菌種污染率、使得菌種質(zhì)量整齊度提高，但仍存在例如發(fā)酵得到的液體菌種中菌球的密度、大小、均勻度等物理特性不是很理想等不足，如果用攪拌剪切的方法將菌球打碎，得到的菌種均勻度會(huì)更理想，但是，高速攪拌粉碎和打漿的剪切力對菌種傷害極大，對菌種整體的質(zhì)量影響較為嚴(yán)重。開發(fā)分布均勻且具有更小粒徑菌絲球的高質(zhì)量的液體菌種具有重要意義。公開號CN105309194A《食用菌微粒液體菌種生產(chǎn)新技術(shù)》提供了一種菌絲球粒徑在0.5㎜的食用菌微粒液體菌種，采用的增加食用菌液體菌種培養(yǎng)液通氣量，使通氣量在1:0.6—0.9V/V?min為適宜，同時(shí)在通氣發(fā)酵罐內(nèi)裝置攪拌器使培養(yǎng)液渦流運(yùn)動(dòng)延長氣泡的運(yùn)動(dòng)路線的技術(shù)操作方法，該生產(chǎn)微粒液體菌種的方法是從生產(chǎn)工藝上進(jìn)行改進(jìn)，并沒有液體菌種培養(yǎng)基方面進(jìn)行改進(jìn)，實(shí)施起來技術(shù)難度要求高；公開號CN105130516A《分子級生物培養(yǎng)基制作方法》提到了分子級生物培養(yǎng)基營養(yǎng)成分可以快速全面的被吸收，促進(jìn)液體菌種的生長，但是并沒有提到分子級生物培養(yǎng)基對液體菌種菌絲球直徑大小的影響。發(fā)展一種基于液體菌種培養(yǎng)基原材料成分改進(jìn)液體菌種菌絲球直徑改善食用菌菌種產(chǎn)量和質(zhì)量的技術(shù)，具有重要的意義。
細(xì)菌納米纖維素是自然界的豐富的可再生產(chǎn)物之一，細(xì)菌納米纖維素是纖維素的物理最小結(jié)構(gòu)單元，是指直徑1-100nm之間的纖維，細(xì)菌納米纖維素質(zhì)輕，生物相容性好，可降解、可再生，反應(yīng)活性高，且具有楊氏模量高，聚合度高，潔凈度高，強(qiáng)度高，比表面積大等優(yōu)勢。將細(xì)菌納米纖維素作作為食用菌液體菌種培養(yǎng)基原材料，對食用菌液體菌種的菌絲球分布以及直徑具有一定的影響，進(jìn)而起到改善食用菌菌種質(zhì)量的作用。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明目的就是為了彌補(bǔ)已有技術(shù)的缺陷，提供一種基于發(fā)芽綠豆胚的姬松茸培養(yǎng)基以及姬松茸液體菌種制備方法。
本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：
一種基于發(fā)芽綠豆胚的姬松茸培養(yǎng)基，包括以下重量份組分：麥芽浸提液140-145、發(fā)芽綠豆胚180-182、富硒酵母8-9、小分子魷魚活性肽25-30、五碳糖29-30、兒茶素4-5、谷氨酸鈉3-4、復(fù)合維生素1-1.2、麥芽糊精1-1.1、聚乙二醇1-1.1、石膏0.6-0.7、硫酸鎂0.7-0.8、磷酸二氫鉀0.5-0.6、過磷酸鈣0.7-0.8、納米級電氣石粉5.6-6、細(xì)菌納米纖維素6.2-6.5、適量的水。
一種采用上述的培養(yǎng)基制備姬松茸液體菌種的方法，包括以下步驟：
（1）、將納米級電氣石粉和水按照0.1g/L混合，通電激發(fā)制備無菌水備用；將麥芽糊精、聚乙二醇、石膏、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、過磷酸鈣的總量和無菌水按1g/L混合攪拌溶解得溶液一；將五碳糖、兒茶素、谷氨酸鈉、復(fù)合維生素的總量和無菌水按100g/L混合在30℃攪拌溶解得溶液二；將麥芽浸提液、發(fā)芽綠豆胚、富硒酵母混合并加入總重量3-5倍的水，低溫35℃小火文煮2h至發(fā)芽綠豆胚軟化，過濾得濾渣和濾液，將濾液、小分子魷魚活性肽的總量與無菌水按350g/L混合攪拌均勻，并在進(jìn)行98℃進(jìn)行巴氏滅菌滅酶10min，得溶液三備用；將濾渣和一半的納米細(xì)菌纖維素混合均勻堆置發(fā)酵4d，之后放入超微納米粉碎機(jī)中進(jìn)行粉碎處理20min，之后采用高溫膨化機(jī)處理15min得富硒失活綠豆胚芽超微粉備用；
（2）、將溶液三保持20℃、溶液二保持25℃、溶液一保持30℃，先將溶液一加入到溶液二中混合攪拌均勻得復(fù)合液，在將該復(fù)合液加入到溶液三中混合攪拌均勻得營養(yǎng)液，并調(diào)整pH，此后對該營養(yǎng)液進(jìn)行通電激發(fā)處理30min得液體培養(yǎng)基備用；
（3）、將姬松茸母種在無菌環(huán)境中先接種到一半的液體培養(yǎng)基上進(jìn)行液體發(fā)酵，發(fā)酵條件為pH5-5.5、接種量11%、溫度28-30℃、搖床轉(zhuǎn)速100r/min、培養(yǎng)12-14h，得姬松茸液體菌種一；
（4）、將剩余一半的液體培養(yǎng)基、剩余一半的細(xì)菌納米纖維素?zé)o菌混合均勻，之后加入富硒失活綠豆胚芽超微粉以及總重量2倍的無菌水，高壓均質(zhì)之后，通電激化配合高溫再次滅菌，并放置到無菌培養(yǎng)瓶中，得復(fù)合培養(yǎng)基，將步驟（3）得到的姬松茸液體菌種一按58%的接種量在無菌環(huán)境中接種到該培養(yǎng)瓶中，溫度24-25℃，搖床轉(zhuǎn)速100r/min、并鼓入無菌氧氣，培養(yǎng)39-40h即得。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是：
本發(fā)明采用麥芽浸提液、發(fā)芽綠豆胚、小分子魷魚活性肽、五碳糖配合營養(yǎng)物質(zhì)谷氨酸鈉、復(fù)合維生素、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、過磷酸鈣、細(xì)菌納米纖維素等作為培養(yǎng)基制備姬松茸液體菌種，培養(yǎng)基的營養(yǎng)豐富，經(jīng)過浸提、堆置發(fā)酵等一系列處理，培養(yǎng)基營養(yǎng)成分小分子化，能夠有效被姬松茸液體菌種菌絲球吸收和利用；富硒酵母最終被納米化之后直接作為培養(yǎng)基的有效成分，提高了姬松茸液體菌種的富硒效果，可以顯著提高其有機(jī)硒含量；采用的納米細(xì)菌纖維素提高了培養(yǎng)基的穩(wěn)定性和均勻性，為姬松茸液體菌種提供了良好的生長發(fā)育空間以及原料成分，本發(fā)明制備的制備液體菌種過程簡單，安全性好，且制備的液體菌種菌絲球大小合適，分布均勻，移栽后抗逆性好，成活率好。
具體實(shí)施方式
一種基于發(fā)芽綠豆胚的姬松茸培養(yǎng)基，包括以下重量份組分：麥芽浸提液140、發(fā)芽綠豆胚180、富硒酵母8、小分子魷魚活性肽25、五碳糖29、兒茶素4、谷氨酸鈉3、復(fù)合維生素1、麥芽糊精1、聚乙二醇1、石膏0.6、硫酸鎂0.7、磷酸二氫鉀0.5、過磷酸鈣0.7、納米級電氣石粉5.6、細(xì)菌納米纖維素6.2、適量的水。
一種采用上述的培養(yǎng)基制備姬松茸液體菌種的方法，包括以下步驟：
（1）、將納米級電氣石粉和水按照0.1g/L混合，通電激發(fā)制備無菌水備用；將麥芽糊精、聚乙二醇、石膏、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、過磷酸鈣的總量和無菌水按1g/L混合攪拌溶解得溶液一；將五碳糖、兒茶素、谷氨酸鈉、復(fù)合維生素的總量和無菌水按100g/L混合在30℃攪拌溶解得溶液二；將麥芽浸提液、發(fā)芽綠豆胚、富硒酵母混合并加入總重量3倍的水，低溫35℃小火文煮2h至發(fā)芽綠豆胚軟化，過濾得濾渣和濾液，將濾液、小分子魷魚活性肽的總量與無菌水按350g/L混合攪拌均勻，并在進(jìn)行98℃進(jìn)行巴氏滅菌滅酶10min，得溶液三備用；將濾渣和一半的納米細(xì)菌纖維素混合均勻堆置發(fā)酵4d，之后放入超微納米粉碎機(jī)中進(jìn)行粉碎處理20min，之后采用高溫膨化機(jī)處理15min得富硒失活綠豆胚芽超微粉備用；
（2）、將溶液三保持20℃、溶液二保持25℃、溶液一保持30℃，先將溶液一加入到溶液二中混合攪拌均勻得復(fù)合液，在將該復(fù)合液加入到溶液三中混合攪拌均勻得營養(yǎng)液，并調(diào)整pH，此后對該營養(yǎng)液進(jìn)行通電激發(fā)處理30min得液體培養(yǎng)基備用；
（3）、將姬松茸母種在無菌環(huán)境中先接種到一半的液體培養(yǎng)基上進(jìn)行液體發(fā)酵，發(fā)酵條件為pH5、接種量11%、溫度28℃、搖床轉(zhuǎn)速100r/min、培養(yǎng)12h，得姬松茸液體菌種一；
（4）、將剩余一半的液體培養(yǎng)基、剩余一半的細(xì)菌納米纖維素?zé)o菌混合均勻，之后加入富硒失活綠豆胚芽超微粉以及總重量2倍的無菌水，高壓均質(zhì)之后，通電激化配合高溫再次滅菌，并放置到無菌培養(yǎng)瓶中，得復(fù)合培養(yǎng)基，將步驟（3）得到的姬松茸液體菌種一按58%的接種量在無菌環(huán)境中接種到該培養(yǎng)瓶中，溫度24℃，搖床轉(zhuǎn)速100r/min、并鼓入無菌氧氣，培養(yǎng)39h即得。