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用于降解2,4,6?三氯苯酚的菌株及其篩選分離方法與流程

文檔序號:11837304閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種用于降解2,4,6-三氯苯酚的菌株的篩選分離方法,其特征在于,其包括以下步驟:

馴化:采集用于處理造紙廢水的內循環(huán)厭氧反應器中的活性污泥,取相同體積的所述活性污泥和馴化培養(yǎng)基組成馴化體系,調節(jié)馴化體系的pH為7.0-7.2,將調節(jié)pH后的所述馴化體系在厭氧環(huán)境中,于30-40℃,在添加有2,4,6-三氯苯酚的固體培養(yǎng)基中進行富集馴化,直至馴化后的所述固體培養(yǎng)基中2,4,6-三氯苯酚的濃度達到800mg/L以上,得到馴化污泥;

純化:將所述馴化污泥稀釋成不同濃度的多個稀釋液,將所述多個稀釋液分別接種于添加有8-12mg/L的2,4,6-三氯苯酚的固體篩選培養(yǎng)基中,分離得到多種對2,4,6-三氯酚具有降解能力的純化菌株;

篩選:將多種所述純化菌株分別接種于添加有90-110mg/L的2,4,6-三氯苯酚的降解培養(yǎng)基中,篩選得到對2,4,6-三氯苯酚的降解效率最高的所述純化菌株,即為用于降解2,4,6-三氯苯酚的菌株。

2.根據(jù)權利要求1所述的用于降解2,4,6-三氯苯酚的菌株的篩選分離方法,其特征在于,所述馴化培養(yǎng)基的組分包括:1.73g/L的K2HPO4,1.0g/L的NH4Cl,0.1g/L的MgSO4·7H2O,0.02g/L的CaCl2,0.04g/L的MnCl2·4H2O,0.05g/L的FeCl3·6H2O,5ml的微量元素溶液,余量為無菌蒸餾水,調節(jié)pH為7.0-7.2;所述固體篩選培養(yǎng)基是在所述馴化培養(yǎng)基的基礎上添加有15-20g/L的瓊脂;所述降解培養(yǎng)基的組分與所述馴化培養(yǎng)基的組分相同。

3.根據(jù)權利要求1所述的用于降解2,4,6-三氯苯酚的菌株的篩選分離方法,其特征在于,實現(xiàn)所述厭氧環(huán)境的方法是:將調節(jié)pH后的所述馴化體系添加至馴化培養(yǎng)瓶中,向所述馴化培養(yǎng)瓶中充滿氮氣,再用帶導氣管的橡膠塞密封所述馴化培養(yǎng)瓶的瓶口,使所述導氣管位于瓶內的一端插入所述馴化體系內,所述導氣管位于瓶外的一端插入氫氧化鈉溶液中進行液封。

4.根據(jù)權利要求1所述的用于降解2,4,6-三氯苯酚的菌株的篩選分離方法,其特征在于,進行富集馴化的方法是:

將所述馴化體系置于厭氧生化培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng),將培養(yǎng)物按10%的接種量轉移至添加有50mg/L的2,4,6-三氯苯酚的所述固體培養(yǎng)基中,并放回所述厭氧生化培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng),即為一個周期;

將繼續(xù)培養(yǎng)的所述培養(yǎng)物再連續(xù)培養(yǎng)多個所述周期,逐步增加對應周期內的所述固體培養(yǎng)基中2,4,6-三氯苯酚的濃度;

在上述培養(yǎng)過程中定時取樣,測定取得的樣品中2,4,6-三氯苯酚的濃度,直至所述樣品中2,4,6-三氯苯酚的濃度達到800mg/L以上,所述樣品對應的所述培養(yǎng)物為所述馴化污泥。

5.根據(jù)權利要求1所述的用于降解2,4,6-三氯苯酚的菌株的篩選分離方法,其特征在于,所述固體培養(yǎng)基的組分包括:5g/L的牛肉膏,10g/L的蛋白胨,5g/L的NaCl,20g/L的瓊脂,余量為水,調節(jié)pH為7.0,于121℃高壓濕熱滅菌20min。

6.根據(jù)權利要求1所述的用于降解2,4,6-三氯苯酚的菌株的篩選分離方法,其特征在于,所述純化的具體方法為:

將所述馴化污泥振蕩均勻,依次取1mL振蕩后的所述馴化污泥,按梯度稀釋成濃度為10-5的稀釋液、濃度為10-6的稀釋液、濃度為10-7的稀釋液,分別取0.1mL所述濃度為10-5的稀釋液、所述濃度為10-6的稀釋液和所述濃度為10-7的稀釋液,接種到載有所述固體篩選培養(yǎng)基的平板上,用涂布棒將所述稀釋液涂布均勻;

將所述平板置于厭氧生化培養(yǎng)箱中,于35℃下恒溫培養(yǎng),待所述平板上長出菌落后,挑選生長良好的所述菌落,用平板劃線分離法在另一潔凈平板上接種劃線,將所述潔凈平板置于所述厭氧生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng),即完成一次平板劃線分離;

重復進行多次所述平板劃線分離,直到分離獲得多種具有2,4,6-三氯苯酚降解能力的培養(yǎng)菌株,將多種所述培養(yǎng)菌株放入-70℃的超低溫冰箱中保存。

7.根據(jù)權利要求6所述的用于降解2,4,6-三氯苯酚的菌株的篩選分離方法,其特征在于,所述篩選的具體方法為:分別將多種所述培養(yǎng)菌株配制成菌懸液,將所述菌懸液分別接種至所述降解培養(yǎng)基中,分別檢測接種后的所述降解培養(yǎng)基中2,4,6-三氯苯酚的濃度,對2,4,6-三氯苯酚的降解效率最高的所述培養(yǎng)菌株,即為用于降解2,4,6-三氯苯酚的所述菌株。

8.根據(jù)權利要求7所述的用于降解2,4,6-三氯苯酚的菌株的篩選分離方法,其特征在于,將菌懸液接種至降解培養(yǎng)液的方法為:分別吸取10mL的所述菌懸液添加有到190mL的添加有90-110mg/L的2,4,6-三氯苯酚的所述降解培養(yǎng)基中,于35℃恒溫培養(yǎng)5天。

9.根據(jù)權利要求7所述的用于降解2,4,6-三氯苯酚的菌株的篩選分離方法,其特征在于,所述菌懸液的配制方法為:從所述固體篩選培養(yǎng)基上挑取所述純化菌種接種到活化富集培養(yǎng)基里,于35℃下恒溫培養(yǎng)24h,將培養(yǎng)液離心10min,倒出離心后的上層液,收集其中的菌體,用無菌水反復洗滌3次后,用無菌水配制成所述菌懸液,其中,所述活化富集培養(yǎng)基的組分包括:5g/L的牛肉膏,10g/L的蛋白胨,5g/L的NaCl,余量為水,調節(jié)pH為7.0,于121℃高壓濕熱滅菌20min。

10.一種用于降解2,4,6-三氯苯酚的菌株,其特征在于,采用權利要求1至9中任一項所述的篩選分離方法得到。

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