一種基于RAFT聚合法提高7,8-二羥基黃酮水溶性的方法技術(shù)領(lǐng)域：本發(fā)明屬于RAFT聚合、PEG-A單體接枝和藥物毒性測試技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種基于RAFT聚合方法提高7,8-二羥基黃酮水溶性的方法，將PEG-A通過RAFT聚合接枝到藥物上從而提高藥物的水溶性的方法。

背景技術(shù)：
：7,8-二羥基黃酮(7，8-DHF)是一種可以模仿腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)效應(yīng)的藥物，它可以通過血腦屏障進(jìn)入大腦細(xì)胞組織，對神經(jīng)系統(tǒng)起到了保護(hù)的作用，從而可以用于改善多種腦功能異常的疾病，如帕金森病。但是由于7，8-二羥基黃酮的水溶性較差，影響了它的藥物作用時間和效果，因此，考慮通過對7，8-二羥基黃酮進(jìn)行改性以增加它的水溶性，因為PEG-A結(jié)構(gòu)上的親水性基團(tuán)羥基可以大大的提高藥物的水溶性，所以尋求設(shè)計一種通過RAFT聚合反應(yīng)在7，8-二羥基黃酮上接枝PEG-A，以達(dá)到增加其水溶性目的方法，為治愈帕金森等多種神經(jīng)退行性疾病提供可行性方案。帕金森病(Parkinson’disease，PD)早期被稱為“震顫麻痹”，它是一種常見的緩慢進(jìn)行性神經(jīng)系統(tǒng)病變疾病，多發(fā)于中老年人，平均發(fā)病年齡基本上都在在60歲左右，40歲以下的青年型帕金森患者很少，我國65歲以上人群的帕金森病(PD)患病率更是到了1.7％左右。而且帕金森病(PD)的患病率和發(fā)病率還會隨著年齡的增長而逐漸的增加，這說明衰老也能增加發(fā)病的幾率。另外，大多數(shù)的帕金森病患者是沒有家族史的，只有極少數(shù)的病變患者會有家族史。帕金森病的癥狀在剛開始時可能不太明顯，但以后病情會逐漸的加重，一般會先出現(xiàn)肢體的一側(cè)不靈活，然后就會波及到了肢體的另一側(cè)，主要體現(xiàn)在手腳等部位有靜止性震顫、運動動作艱難、肌肉僵硬發(fā)直、姿勢出現(xiàn)平衡性障礙等，但是他們的四肢肌肉力量并沒有完全喪失，仍然可以做常人的事情，只不過會比較艱辛。另外，帕金森病患者除了會出現(xiàn)上述的癥狀外，可能還會伴隨著其他非運動的癥狀，如情緒異常的低落消沉、恐慌焦慮、失眠、認(rèn)知有障礙、身體會感到疲憊及疼痛等等。帕金森疾病的這一系列癥狀已經(jīng)給患者和他們的家人帶來了嚴(yán)重的不便，更是驚醒人們要深刻的認(rèn)識他們的危害，積極的了解帕金森疾病的相關(guān)知識。雖然隨著研究學(xué)者不斷的探討研究，對帕金森病(PD)的了解也是逐步的深入，但是由于帕金森病理的這個謎團(tuán)至今也尚未解開，抗帕金森(PD)藥物的反應(yīng)機理更是復(fù)雜多變，所以即使目前治療帕金森(PD)疾病的方法和路徑如雨后春筍般層出不窮，PD的治療仍然是以藥物療法為主?，F(xiàn)在，藥物治療的原理主要是及時補充人體內(nèi)缺失的多巴胺，市面上的藥品主要有抗膽堿類、多巴類(左旋多巴)、多巴胺受體激動劑和促動劑等等，這些藥品雖然可以在一定時期內(nèi)可以保護(hù)和修復(fù)一些神經(jīng)，緩解患者的帕金森癥狀，提高他們的生活質(zhì)量，但是如果長期的服用這些藥物，大多數(shù)的患者可能會出現(xiàn)治療效果減弱、癥狀波蕩起伏不定、精神異常、機體運動障礙等副作用，甚至一些藥物產(chǎn)生的代謝物會與細(xì)胞內(nèi)的某些物質(zhì)發(fā)生有毒反應(yīng)，加重了患者的癥狀。所以需要尋找更加持續(xù)高效且健康的藥品，在近期的研究中，科學(xué)家發(fā)現(xiàn)7,8-二羥基黃酮不僅可以減少細(xì)胞的死亡和神經(jīng)細(xì)胞元的喪失來保護(hù)神經(jīng)系統(tǒng)，還可以穿過血腦屏障進(jìn)入大腦，仿照腦源性神經(jīng)保護(hù)因子(BDNF)的表達(dá)，繼而增加了基底內(nèi)膽堿神經(jīng)元的數(shù)目，從而提高了神經(jīng)元細(xì)胞群的抗氧化能力，達(dá)到保護(hù)神經(jīng)系統(tǒng)的目的。

技術(shù)實現(xiàn)要素：
：本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)存在的缺點，尋求設(shè)計提供一種通過RAFT聚合法提高7,8-二羥基黃酮水溶性的方法，通過RAFT聚合反應(yīng)在7，8-DHF上接枝PEG-A，以達(dá)到增加其水溶性的目的。為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明具體包括以下步驟：1、將RAFT試劑進(jìn)行酰氯化反應(yīng)：(1)分別各取25mL二氯甲烷、四氫呋喃、正己烷、甲苯于容量瓶，并分別置于無水硫酸鈉中干燥；(2)稱取RAFT試劑1.50g于25mL圓底燒瓶用6mL二氯甲烷溶解，將10mL二氯亞砜用等體積二氯甲烷稀釋，逐滴加入到圓底燒瓶，在75℃下回流；(3)將所得產(chǎn)物在40℃下旋蒸至只剩固體，加入5mL甲苯，再次旋蒸，如此重復(fù)進(jìn)行三次；(4)用重量百分比濃度大于98.0％正己烷洗滌沉淀，并超聲處理，重復(fù)進(jìn)行三次，得到沉淀；2、將RAFT試劑接枝到7，8-DHF上：(1)取步驟1制備的0.17g沉淀溶于5mL四氫呋喃得到溶解后的沉淀，取0.05g黃酮溶于3mL四氫呋喃并進(jìn)行超聲處理得到溶解后的黃酮冰??；(2)在溶解后的黃酮冰浴中加入1mL三乙胺，再將溶解后的沉淀逐滴加入到黃酮冰浴中，在30攝氏度溫度條件下反應(yīng)24h；(3)配制1mol/L的稀鹽酸溶液100mL；(4)將步驟(2)反應(yīng)得到的產(chǎn)物50℃下旋蒸，直至只剩下固體沉淀；(5)用步驟(3)配制的稀鹽酸洗滌固體沉淀后再用有機膜抽濾，洗去三乙胺鹽酸鹽等鹽類；(6)將剩下的物質(zhì)溶于二氯甲烷，超聲處理后用普通濾紙抽濾，收集濾液；(7)將濾液靜止析出固體，抽濾得到固體產(chǎn)物；3、RAFT聚合反應(yīng)將PEG-A接枝到7，8-DHF上：取5mg固體產(chǎn)物、0.31g單體聚(乙二醇)甲基醚丙烯酸酯(PEG-A)、0.0007gAIBN依次止于25mL圓底燒瓶，通入氮氣30分鐘，70℃下進(jìn)行聚合反應(yīng)24h得到聚合產(chǎn)物。本發(fā)明所述RAFT試劑為具有羧基的RAFT試劑。本發(fā)明所述步驟3所述單體聚(乙二醇)甲基醚丙烯酸酯(PEG-A)是有雙鍵的PEG單體。本發(fā)明步驟3中通過控制單體與RAFT試劑的比例來控制改性后藥物(聚合產(chǎn)物)的聚合度，聚合產(chǎn)物的分散度(PDI)<1.3。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，其工藝簡單，操作方便，7，8-DHF水溶性的提高效果明顯，易于控制分子量，成本低，毒性低，可通過RAFT聚合較為精確控制聚合度，從而合成具有不同分子量，不同聚合度的7，8-DHF。附圖說明：圖1為本發(fā)明的工藝流程原理示意圖。圖2為本發(fā)明實施例1中7，8-DHF溶解度測定圖。圖3為本發(fā)明實施例2中7，8-DHF藥物藥效測定曲線圖，其中(a)7，8-DHF以及改性后的7，8-DHF的絕對藥效的測定，(b)為改性后7，8-DHF相對于7，8-DHF藥效(100％)的相對藥效的測定。具體實施方式：下面通過實例并結(jié)合附圖對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。實施例1：7，8-DHF溶解度的測定本實施例對改性后7，8-DHF(7個樣本是通過控制RAFT試劑與單體的比例分別得到，樣本1為純7，8-DHF；樣本2比例為1:10；樣本3比例為1:20；樣本4比例為1:30；樣本5比例為1:40；樣本6比例為1:50；樣本7比例為1:60)的溶解度進(jìn)行了測定，測定結(jié)果如圖2所示，從圖2中可以看出7，8-DHF的溶解度在10044μmol/L左右，相對于改性前只有126.8μmol/L溶解度的7，8-DHF，改性后的7，8-DHF(聚合度為60時)的溶解度提高了78倍。實施例2：改性后藥物藥效的測定本實施例對改性后的7，8-DHF藥物藥效進(jìn)行測定，結(jié)果如圖3所示，從圖3(a)可以看出，這7個聚合度的樣本的血管舒張度分別是88.6±6.2％,84.3±4.3％,80.2±6.2％,79.6±3.3％,77.2±4.9％,75.9±3.8％and70.2±1.8％；圖3(b)表明改性后的7，8-DHF的藥效隨著聚合度的增加而減小.當(dāng)聚合度為60時，改性后的7，8-DHF的藥效為原藥物水平的79.2％。實施例3：改性后細(xì)胞毒性的測定(DT為細(xì)胞毒性等級)本實施例對改性后7，8-DHF藥物對細(xì)胞毒性進(jìn)行測定，結(jié)果如表1所示，由表1可得改性后的藥物對細(xì)胞的毒性等級為一，與原來藥物的毒性為同一等級，其藥效只有小幅度降低，藥物的毒性與原來為同一等級。表1：