本發(fā)明屬于藥物應(yīng)用領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明涉及gvs系列化合物及其用途，本發(fā)明化合物能夠明顯改善非酒精性脂肪肝和脂肪堆積。

背景技術(shù)：

非酒精性脂肪性肝病(nafld)是指除外酒精和其他明確的損肝因素所致的肝細(xì)胞內(nèi)脂肪過度沉積為主要特征的臨床病理綜合征，與胰島素抵抗和遺傳易感性密切相關(guān)的獲得性代謝應(yīng)激性肝損傷，包括單純性脂肪肝(sfl)、非酒精性脂肪性肝炎(nash)及其相關(guān)肝硬化。隨著肥胖及其相關(guān)代謝綜合征全球化的流行趨勢，非酒精性脂肪性肝病現(xiàn)已成為歐美等發(fā)達(dá)國家和我國富裕地區(qū)慢性肝病的重要病因，普通成人nafld患病率10％～30％，其中10％～20％為nash，后者10年內(nèi)肝硬化發(fā)生率高達(dá)25％。

非酒精性脂肪性肝病除可直接導(dǎo)致失代償期肝硬化、肝細(xì)胞癌和移植肝復(fù)發(fā)外，還可影響其他慢性肝病的進(jìn)展，并參與2型糖尿病和動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病。因此，通過早期防治非酒精性脂肪肝，防止對(duì)肝臟進(jìn)一步的損害極為重要。目前，針對(duì)防治非酒精性脂肪肝的藥物和保健食品種類很多，但也存在著多方面的問題，如病人不能耐受，藥后導(dǎo)致體重增加、體液潴留、心血管等各種不良反應(yīng)。因此，本領(lǐng)域迫切需要研發(fā)出防治非酒精性脂肪肝的新型藥物。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種新型gvs系列化合物及其應(yīng)用。

本發(fā)明第一方面，提供一種式a所示的化合物、其光學(xué)異構(gòu)體、水合物、溶劑化物、其前藥或其藥學(xué)上可接受的鹽的用途，用于制備藥物或制劑，所述藥物或制劑用于：

(1)治療和/或預(yù)防脂肪肝和脂肪堆積；

(2)降低血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶(ast)的活性；

(3)降低血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alt)的活性；

(4)降低血清中丙二醛(mda)的水平；

(5)升高超氧化物歧化酶(sod)的活性；

(6)升高血清中脂聯(lián)素(adp)的水平；

(7)降低脂肪酸合成酶(fas)的活性；

(8)降低低密度脂蛋白膽固醇(ldl-c)的水平；

(9)降低甘油三酯(tg)的水平；和/或

(10)升高高密度脂蛋白膽固醇(hdl-c)的水平；

式中，

x為o或n；

r1為-l-ra，其中l(wèi)為無，或選自下組的二價(jià)連接基團(tuán)：-(ch2)m-、-(cr4h)m-，m為1、2或3，r4為c1-c4烷基、c1-c4鹵代烷基、c3-c4環(huán)烷基；

ra選自下組：取代或未取代的c1-c10烷基、取代或未取代的c3-c10環(huán)烷基、取代或未取代的含有1-5個(gè)選自n、s和o中的雜原子的4-20元雜環(huán)基c1-c10烷基、取代或未取代的c5-c20芳基、取代或未取代的c5-c20芳基c1-c10烷基、和取代或未取代的含有1-5個(gè)選自n、s和o中的雜原子的c5-c20雜芳基；

所述的取代基選自下組：c1-c10烷基、c1-c6烷基羰基、羧基、硝基和鹵素；

r2選自下組：h、鹵素、甲基、甲氧基、甲酰胺基、硝基、三氟甲基和氰基；

r3為一個(gè)或多個(gè)選自下組的基團(tuán)：h、鹵素、甲基、甲氧基、甲酰胺基、硝基、三氟甲基、氰基、和3,4-環(huán)丁二烯基；

并且，當(dāng)x為o時(shí)，虛線為無，即

在另一優(yōu)選例中，所述脂肪肝為非酒精性脂肪肝。

在另一優(yōu)選例中，所述超氧化物歧化酶為血清中超氧化物歧化酶。

在另一優(yōu)選例中，所述脂肪酸合成酶為血清中脂肪酸合成酶。

在另一優(yōu)選例中，所述藥物或制劑具有選自下組的一個(gè)或多個(gè)特性：

(a)對(duì)pparγ弱激活能力；

(b)對(duì)pparγ強(qiáng)結(jié)合能力；

(c)弱的前脂肪細(xì)胞3t3-l1向脂肪細(xì)胞轉(zhuǎn)化的能力。

在另一優(yōu)選例中，所述“弱激活能力”指測試組測量值m1與對(duì)照組參比值m0之比(m1/m0)＜0.75，較佳地＜0.6，更佳地＜0.5，更佳地＜0.4，最佳地＜0.3，其中，所述對(duì)照組的化合物為羅格列酮。

在另一優(yōu)選例中，所述“強(qiáng)結(jié)合能力”指測試組測量值c1與對(duì)照組參比值c0之比(c1/c0)＞0.9，較佳地＞1，更佳地＞1.15，更佳地＞1.25，最佳地＞1.35，其中，所述對(duì)照組的化合物為羅格列酮。

在另一優(yōu)選例中，所述“弱的前脂肪細(xì)胞3t3-l1向脂肪細(xì)胞轉(zhuǎn)化的能力”指測試組測量值t1與對(duì)照組參比值t0之比(t1/t0)＜0.5，較佳地＜0.25，更佳地＜0.1，更佳地＜0.06,其中，所述對(duì)照組的化合物為羅格列酮。

本發(fā)明第二方面，提供一種式a所示的化合物、其光學(xué)異構(gòu)體、水合物、溶劑化物、其前藥或其藥學(xué)上可接受的鹽，

式中，

x為o或n；

r1為-l-ra，其中l(wèi)為無，或選自下組的二價(jià)連接基團(tuán)：-(ch2)m-、-(cr4h)m-，m為1、2或3，r4為c1-c4烷基、c1-c4鹵代烷基、c3-c4環(huán)烷基；

ra選自下組：取代或未取代的c1-c10烷基、取代或未取代的c3-c10環(huán)烷基、取代或未取代的含有1-5個(gè)選自n、s和o中的雜原子的4-20元雜環(huán)基c1-c10烷基、取代或未取代的c5-c20芳基、取代或未取代的c5-c20芳基c1-c10烷基、和取代或未取代的含有1-5個(gè)選自n、s和o中的雜原子的c5-c20雜芳基；

所述的取代基選自下組：c1-c10烷基、c1-c6烷基羰基、羧基、硝基和鹵素；

r2選自下組：h、鹵素、甲基、甲氧基、甲酰胺基、硝基、三氟甲基和氰基；

r3為一個(gè)或多個(gè)選自下組的基團(tuán)：h、鹵素、甲基、甲氧基、甲酰胺基、硝基、三氟甲基、氰基、和3,4-環(huán)丁二烯基；

并且，當(dāng)x為o時(shí)，虛線為無，即

在另一優(yōu)選例中，當(dāng)x為o時(shí)，式a化合物為

在另一優(yōu)選例中，當(dāng)x為n時(shí)，式a化合物為

在另一優(yōu)選例中，r1選自下組：取代或未取代的c1-c6烷基、取代或未取代的c3-c6環(huán)烷基、取代或未取代的含有1-3個(gè)選自n、s和o中的雜原子的4-10元雜環(huán)基c1-c6烷基、取代或未取代的c5-c10芳基、取代或未取代的c5-c10芳基c2-c6烷基、和取代或未取代的含有1-3個(gè)選自n、s和o中的雜原子的5-10元雜芳基。

在另一優(yōu)選例中，r1選自下組：芐基、苯基、吡啶-4-基甲基、吡啶-4-基乙基、1-苯乙基、甲氧基羰基芐基、和羧基芐基。

在另一優(yōu)選例中，式a化合物選自下組：

本發(fā)明第三方面，提供一種藥物組合物，包括：

(i)本發(fā)明第一方面和第二方面所述的式a化合物，其光學(xué)異構(gòu)體、水合物、溶劑化物、其前藥或其藥學(xué)上可接受的鹽；和

(ii)藥學(xué)上可接受的載體。

在另一優(yōu)選例中，所述的藥物組合物含有治療有效量或安全有效量的式a化合物，其光學(xué)異構(gòu)體、水合物、溶劑化物、其前藥或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一優(yōu)選例中，所述藥物組合物中，含有0.0001-99wt％(較佳地0.01-90wt％，更佳地，0.1-80wt％)的組分(i)，以藥物組合物的總重量計(jì)。

在另一優(yōu)選例中，所述的藥物組合物用于制備治療和/或預(yù)防脂肪肝的藥物。

本發(fā)明第四方面，提供一種用于治療和/或預(yù)防脂肪肝的方法，所述方法包括：向所需對(duì)象施用如本發(fā)明第一方面和第二方面所述的式a化合物或本發(fā)明第三方面所述的藥物組合物。

在另一優(yōu)選例中，所述對(duì)象包括人。

在另一優(yōu)選例中，所述對(duì)象包括非人哺乳動(dòng)物。

在另一優(yōu)選例中，所述非人哺乳動(dòng)物包括嚙齒動(dòng)物，如小鼠、大鼠。

在另一優(yōu)選例中，所述脂肪肝會(huì)非酒精性脂肪肝。

在另一優(yōu)選例中，施用劑量為10-10000mg/kg/天，較佳地，500-10000mg/kg/天，更佳地，1000-10000mg/kg/天。

在另一優(yōu)選例中，施用頻率為1-5次/天，較佳地，1-2次/天。

在另一優(yōu)選例中，施用包括一個(gè)或多個(gè)周期，各周期為2-30天，較佳地，3-7天。

應(yīng)理解，在本發(fā)明范圍內(nèi)中，本發(fā)明的上述各技術(shù)特征和在下文(如實(shí)施例)中具體描述的各技術(shù)特征之間都可以互相組合，從而構(gòu)成新的或優(yōu)選的技術(shù)方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

附圖說明

圖1顯示了化合物gvs-12靶向pparγ活性測試結(jié)果.(a)gvs-12的化學(xué)結(jié)構(gòu)式；(b)利用cos-7細(xì)胞進(jìn)行熒光素酶報(bào)告基因測試gvs-12的pparγ激活作用(n＝3,±sem)；(c)油紅o染色測試；(d)3t3-l1前脂肪細(xì)胞中，dmso(1μm)促脂肪分化能力結(jié)果；(e)3t3-l1前脂肪細(xì)胞中，gvs-12(1μm)促脂肪分化能力結(jié)果；(f)3t3-l1前脂肪細(xì)胞中，羅格列酮(1μm)促脂肪分化能力結(jié)果；。

圖2顯示了化合物gvs-12對(duì)脂肪肝大鼠體重的影響^#p<0.05vs模型組。

圖3顯示了化合物gvs-12對(duì)非酒精性脂肪肝大鼠的病理學(xué)檢測。

圖4顯示了化合物gvs-12對(duì)非酒精性脂肪肝大鼠血清中ast、alt、mda、sod的影響(mean±s.e.m)n＝10

*p<0.05，**p<0.01vs空白對(duì)照組；#p<0.05，##p<0.01vs模型組。

圖5顯示了化合物gvs-12對(duì)非酒精性脂肪肝大鼠血清中l(wèi)dl-c、hdl-c、tg的影響(mean±s.e.m)n＝10

*p<0.05，**p<0.01vs空白對(duì)照組；#p<0.05，##p<0.01vs模型組。

圖6顯示了化合物gvs-12對(duì)非酒精性脂肪肝大鼠血清中adp和fas的影響(mean±s.e.m)n＝10

*p<0.05，**p<0.01vs空白對(duì)照組；#p<0.05，##p<0.01vs模型組。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明人通過廣泛而深入的研究，合成了一系列的gvs化合物，所述化合 物能夠有效激動(dòng)pparγ受體，且不明顯誘導(dǎo)脂肪分化，在維持正常體重的情況下，具有改善非酒精性脂肪肝和脂肪堆積的作用。在此基礎(chǔ)上完成了本發(fā)明。

術(shù)語說明

除非另外定義，否則本文中所用的全部技術(shù)與科學(xué)術(shù)語均具有如本發(fā)明所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常理解的相同含義。

如本文所用，在提到具體列舉的數(shù)值中使用時(shí)，術(shù)語“約”意指該值可以從列舉的值變動(dòng)不多于1％。例如，如本文所用，表述“約100”包括99和101和之間的全部值(例如，99.1、99.2、99.3、99.4等)。

如本文所用，術(shù)語“含有”或“包括(包含)”可以是開放式、半封閉式和封閉式的。換言之，所述術(shù)語也包括“基本上由…構(gòu)成”、或“由…構(gòu)成”。

基團(tuán)定義

如本文所用，術(shù)語“取代或未取代的”指所述基團(tuán)可以是未取代的，或者所述基團(tuán)中的h被一個(gè)或多個(gè)(如1-10個(gè)，較佳地1-5個(gè)，更佳地1-3個(gè)，最佳地1-2個(gè))取代基所取代。

如本文所用，所述的“取代”或“取代的”指所述基團(tuán)具有一個(gè)或多個(gè)(較佳地1-6個(gè)，更佳地1-3個(gè))選自下組的取代基：c1-c6烷基羰基、羧基、硝基和鹵素。

如本文所用，術(shù)語“c1-c10烷基”是指具有1-10個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、或類似基團(tuán)；“c1-c3烷基”是指具有1-3個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基，例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、或類似基團(tuán)。

如本文所用，術(shù)語“c3-c10環(huán)烷基”指具有3-10個(gè)碳原子的環(huán)狀烷基，例如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、或類似基團(tuán)。

如本文所用，術(shù)語“c5-c20芳基”指5至20個(gè)(較佳5-14個(gè))碳原子的單價(jià)芳香族碳環(huán)基團(tuán)，它具有單環(huán)(如苯基)或稠環(huán)(如萘基或蒽基)，如果連接點(diǎn)在芳香碳原上，稠環(huán)可能是非芳香性的(如2-苯并噁唑酮，2h-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮-7-基等)。優(yōu)選的芳基包括苯基和萘基。該術(shù)語包括取代或未取代的形式，其中取代基的定義如上。

如本文所用，術(shù)語“c5-c20雜芳基”指具有5至20個(gè)碳原子和1至5個(gè)(優(yōu)選1-3個(gè))選自氧、氮和硫的雜原子的芳香基團(tuán)，這樣的雜芳基可以是單環(huán)的(如吡 啶基或呋喃基)或稠環(huán)(如吲嗪基(indolizinyl)或苯并噻吩基)，其中，所述稠環(huán)可以是非芳香性的和/或含有一個(gè)雜原子，只要連接點(diǎn)是通過芳香性雜芳基的原子。優(yōu)選地，雜芳基包括吡啶基、吡咯基、吲哚基、噻吩基和呋喃基。該術(shù)語包括取代或未取代的雜芳基。

如本文所用，術(shù)語“c4-c20雜環(huán)基”指飽和的、部分飽和的或不飽和的基團(tuán)(但不是芳香性的)，具有單環(huán)或稠環(huán)(包括橋環(huán)體系和螺環(huán)體系，具有4至20個(gè)碳原子和1至4個(gè)選自氮、硫或氧的雜原子，在稠環(huán)體系中，一個(gè)或多個(gè)環(huán)可以是環(huán)烷基、芳基或雜芳基，只要連接點(diǎn)通過非芳香性環(huán)。該術(shù)語包括取代或未取代的雜環(huán)基。

如本文所用，術(shù)語“鹵素”是指氟、氯、溴、或碘，優(yōu)選氟、氯和溴。

如本文所用，術(shù)語“鹵代的”指被相同或不同的一個(gè)或多個(gè)上述鹵原子取代的基團(tuán)，可以部分鹵代或全部鹵代，例如三氟甲基、五氟乙基、七氟異丙基、或類似基團(tuán)。

本發(fā)明的化合物可以含有一個(gè)或多個(gè)不對(duì)稱中心，并因此以消旋體、外消旋混合物、單一對(duì)映體、非對(duì)映異構(gòu)體化合物和單一非對(duì)映體的形式出現(xiàn)?？梢源嬖诘牟粚?duì)稱中心，取決于分子上各種取代基的性質(zhì)。每個(gè)這種不對(duì)稱中心將獨(dú)立地產(chǎn)生兩個(gè)旋光異構(gòu)體，并且所有可能的旋光異構(gòu)體和非對(duì)映體混合物和純或部分純的化合物包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。本發(fā)明包括化合物的所有異構(gòu)形式。

本發(fā)明化合物的用途

本發(fā)明提供了所述的式a化合物的用途，用于制備藥物或制劑，所述藥物或制劑用于：

(1)治療和/或預(yù)防脂肪肝和脂肪堆積；

(2)降低血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶(ast)的活性；

(3)降低血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alt)的活性；

(4)降低血清中丙二醛(mda)的水平；

(5)升高超氧化物歧化酶(sod)的活性；

(6)升高血清中脂聯(lián)素(adp)的水平；

(7)降低脂肪酸合成酶(fas)的活性；

(8)降低低密度脂蛋白膽固醇(ldl-c)的水平；

(9)降低甘油三酯(tg)的水平；和/或

(10)升高高密度脂蛋白膽固醇(hdl-c)的水平。

本發(fā)明化合物

如本文所用，“本發(fā)明化合物”、“式a化合物”、“gvs系列化合物”可互換使用，指式a或式a-1或式a-2化合物、其光學(xué)異構(gòu)體、水合物、溶劑化物、其前藥或其藥學(xué)上可接受的鹽。

本發(fā)明提供一種式a所示的化合物、其光學(xué)異構(gòu)體、水合物、溶劑化物、其前藥或其藥學(xué)上可接受的鹽，

式中，

x為o或n；

r1為-l-ra，其中l(wèi)為無，或選自下組的二價(jià)連接基團(tuán)：-(ch2)m-、-(cr4h)m-，m為1、2或3，r4為c1-c4烷基、c1-c4鹵代烷基、c3-c4環(huán)烷基；

ra選自下組：取代或未取代的c1-c10烷基、取代或未取代的c3-c10環(huán)烷基、取代或未取代的含有1-5個(gè)選自n、s和o中的雜原子的4-20元雜環(huán)基c1-c10烷基、取代或未取代的c5-c20芳基、取代或未取代的c5-c20芳基c1-c10烷基、和取代或未取代的含有1-5個(gè)選自n、s和o中的雜原子的c5-c20雜芳基；

所述的取代基選自下組：c1-c10烷基、c1-c6烷基羰基、羧基、硝基和鹵素；

r2選自下組：h、鹵素、甲基、甲氧基、甲酰胺基、硝基、三氟甲基和氰基；

r3為一個(gè)或多個(gè)選自下組的基團(tuán)：h、鹵素、甲基、甲氧基、甲酰胺基、硝基、三氟甲基、氰基、和3,4-環(huán)丁二烯基；

并且，當(dāng)x為o時(shí)，虛線為無，即

在另一優(yōu)選例中，當(dāng)x為o時(shí)，式a化合物為

在另一優(yōu)選例中，當(dāng)x為n時(shí)，式a化合物為

在另一優(yōu)選例中，r1選自下組：取代或未取代的c1-c6烷基、取代或未取代的c3-c6環(huán)烷基、取代或未取代的含有1-3個(gè)選自n、s和o中的雜原子的4-10元雜環(huán)基c1-c6烷基、取代或未取代的c5-c10芳基、取代或未取代的c5-c10芳基c2-c6烷基、和取代或未取代的含有1-3個(gè)選自n、s和o中的雜原子的5-10元雜芳基。

在另一優(yōu)選例中，r1選自下組：芐基、苯基、吡啶-4-基甲基、吡啶-4-基乙基、1-苯乙基、甲氧基羰基芐基、和羧基芐基。

在另一優(yōu)選例中，所述式a化合物為本發(fā)明實(shí)施例制備的化合物。

藥物組合物

本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，它包含安全有效量范圍內(nèi)的活性成分，以及藥學(xué)上可接受的載體。

本發(fā)明所述的“活性成分”是指本發(fā)明所述的通式a化合物、其光學(xué)異構(gòu)體、水合物、溶劑化物、其前藥或其藥學(xué)上可接受的鹽。

本發(fā)明所述的“活性成分”和藥物組合物用于制備治療和/或預(yù)防脂肪肝的藥物。

“安全有效量”指的是：活性成分的量足以明顯改善病情，而不至于產(chǎn)生嚴(yán)重的副作用。通常，藥物組合物含有1-2000mg活性成分/劑，更佳地，含有10-200mg活性成分/劑。較佳地，所述的“一劑”為一個(gè)藥片。

“藥學(xué)上可接受的載體”指的是：一種或多種相容性固體或液體填料或凝膠物質(zhì)，它們適合于人使用，而且必須有足夠的純度和足夠低的毒性?！跋嗳菪浴痹诖酥傅氖墙M合物中各組份能和本發(fā)明的活性成分以及它們之間相互摻和，而不明顯降低活性成分的藥效。

本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施例的化合物可以作為單獨(dú)活性藥劑給藥，也可以與一個(gè)或多個(gè)其它用于治療糖尿病的試劑組合使用。本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施例的化合物與已知的治療劑組合使用也是有效的，目前已知的化合物和其它治療糖尿病的治療劑的組合在優(yōu)選實(shí)施例范圍之內(nèi)?；谒幬锏奶厥庑再|(zhì)和所涉及的疾病，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員能夠辨別有效的藥劑組合。這種治療糖尿病的治療劑包括(但不限于)如下：文迪亞、艾可托等。優(yōu)選實(shí)施例的化合物與治療糖尿病的治療劑同時(shí) 施用時(shí)也有效。

通常，優(yōu)選實(shí)施例的化合物將以治療有效量、通過具有類似作用的藥劑的任意一種可接受的模式施用。優(yōu)選實(shí)施例的化合物(即活性成分)的實(shí)際用量根據(jù)多個(gè)因素確定，如待治療疾病的嚴(yán)重程度、患者的年齡和相對(duì)健康程度、被使用化合物的效力、施用的路徑和形式，以及其他因素。該藥物可一天施用多次，優(yōu)選地，每天一次或兩次。所有這些因素都在主治醫(yī)生的考慮范圍內(nèi)。

在本發(fā)明中，治療有效劑量通常可以是對(duì)患者一次性施用或分次施用的每日總劑量，例如，每日約0.001至約1000毫克/公斤體重，優(yōu)選地，每日約1.0至約30毫克/千克體重。單位劑量組合物(dosageunitcomposition)可包含其劑量因數(shù)以形成每日劑量。劑型的選擇取決于各種因素，例如給藥模式和藥物物質(zhì)的生物利用度。通常，優(yōu)選實(shí)施例的化合物可作為藥物組合物通過以下任意一種路線給藥：口服、全身給藥(如透皮、鼻內(nèi)或通過栓劑)、或腸外給藥(如肌內(nèi)、靜脈內(nèi)或皮下)。優(yōu)選的給藥方式為口服，可根據(jù)苦的程度調(diào)節(jié)方便的日劑量。組合物可采取的形式為片劑、丸劑、膠囊、半固體、粉劑、緩釋制劑、溶液、懸浮液、酏劑、氣霧劑或任何其他適當(dāng)?shù)慕M合物。另一種優(yōu)選的施用優(yōu)選實(shí)施例化合物的方式為吸入。這是一種將治療劑直接運(yùn)送給呼吸道的有效方法(參見，如美國專利號(hào)5,607,915)。

合適的藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑包括：如處理劑和藥物運(yùn)送改性劑和促進(jìn)劑，諸如磷酸鈣、硬脂酸鎂、滑石、單糖、二糖、淀粉、明膠、纖維素、甲基纖維素鈉、羧甲基纖維素、葡萄糖、羥丙基-b-環(huán)糊精、聚乙烯吡咯烷酮、低熔點(diǎn)蠟、離子交換樹脂等，及其任意兩種或多種的組合。液體和半固體的賦形劑可以選自甘油、丙二醇、水、乙醇和各種油，包括石油、動(dòng)物油、植物油或合成來源，如花生油、豆油、礦物油、芝麻油等。優(yōu)選的液體載體，特別是用于可注射溶液的載體，包括水、鹽水、葡萄糖水性溶液和乙二醇。其它適宜的藥學(xué)上可接受的賦形劑在《雷明頓藥物科學(xué)》(remington'spharmaceuticalsciences),mackpub.co.,新澤西(1991)有描述，通過引用納入本文。

如本文所用，術(shù)語“藥學(xué)上可接受的鹽”是指通式i化合物的非毒性酸或堿土金屬鹽。這些鹽可在最終分離和純化通式i化合物時(shí)原位制得、或分別將合適的有機(jī)或無機(jī)酸或堿與堿性或酸性官能團(tuán)反應(yīng)制得。代表性的鹽包括，但不限于：乙酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、檸檬酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、二葡糖酸鹽、環(huán)戊烷丙酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、葡萄糖庚酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、 己酸鹽、富馬酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽、甲磺酸鹽、煙酸鹽、2-萘基磺酸鹽、草酸鹽、雙羥萘酸鹽、果膠酸鹽、硫氰酸鹽、3-苯基丙酸鹽、苦味酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、對(duì)甲苯磺酸鹽和十一烷酸鹽。此外，含氮的堿性基團(tuán)可被如下試劑季銨鹽化：烷基鹵化物，如甲基、乙基、丙基、丁基的氯化物、溴化物和碘化物；二烷基硫酸鹽，如二甲基、二乙基、二丁基和二戊基硫酸酯；長鏈鹵化物如癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂基的氯化物、溴化物和碘化物；芳烷基鹵化物如芐基和苯乙基溴化物等。由此得到水溶性或油溶性或可分散產(chǎn)品?？杀挥糜谛纬伤帉W(xué)上可接受的酸加成鹽的酸的例子包括如鹽酸、硫酸、磷酸的無機(jī)酸，和如草酸、馬來酸、甲磺酸、琥珀酸、檸檬酸的有機(jī)酸。堿加成鹽可在最終分離和純化通式i的化合物時(shí)原位制得、或使羧酸部分分別與合適的堿(如藥學(xué)上可接受的金屬陽離子的氫氧化物，碳酸鹽或碳酸氫鹽)或氨、或有機(jī)伯、仲或叔胺反應(yīng)制得。藥學(xué)上可接受的鹽包括，但不限于，基于堿金屬和堿土金屬的陽離子，如鈉、鋰、鉀、鈣、鎂、鋁的鹽等，以及無毒的銨、季銨和胺陽離子，包括，但不限于：銨、四甲基銨、四乙基銨、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、乙胺等。其它代表性的用于形成堿加成鹽的有機(jī)胺包括二乙胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪等。

如本文所用，術(shù)語“藥學(xué)上可接受的前藥”是指那些優(yōu)選實(shí)施例的化合物的前藥，在體內(nèi)迅速轉(zhuǎn)化為上述通式所示的母體化合物的化合物，例如在血液中水解。在“t.higuchi和v.stella，作為新型運(yùn)送系統(tǒng)的前藥(pro-drugsasnoveldeliverysystems)，a.c.s.15symposiumseries的14卷”和“edwardb.roche編，藥物設(shè)計(jì)中的生物可逆載體(bioreversiblecarriersindrugdesign)，美國藥學(xué)協(xié)會(huì)和pergamon出版社，1987年”中提供了完整的討論，這兩者都引入本文作為參考。

本發(fā)明的主要優(yōu)點(diǎn)在于：

(1)本發(fā)明的化合物可以有效預(yù)防和/或治療脂肪肝，尤其地，在維持正常體重的情況下，具有改善非酒精性脂肪肝和脂肪堆積的作用。

(2)提供一種結(jié)構(gòu)新穎的通式a化合物。

(3)本發(fā)明化合物能激動(dòng)pparγ受體，并且不明顯誘導(dǎo)脂肪分化。

下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說 明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件如sambrook等人，分子克?。簩?shí)驗(yàn)室手冊(cè)(newyork:coldspringharborlaboratorypress,1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則百分比和份數(shù)按重量計(jì)算。

以下實(shí)施例中所用的實(shí)驗(yàn)材料和試劑如無特別說明均可從市售渠道獲得。

儀器及通用方法

4-羥基苯甲酸、芐溴、芐胺等所涉及化學(xué)試劑購于sigma公司。

石油醚、乙酸乙酯等溶劑購于上海國藥集團(tuán)。

brukeram-400型和varianmercuryplus-400型核磁共振儀。

200-300目柱層析硅膠(青島海洋化工廠)。

hsgf254tlc板(煙臺(tái)市化工研究院)。

所有溶劑均為分析純。

制備實(shí)施例

實(shí)施例1：gvs-1的合成：

步驟1：將對(duì)羥基苯甲酸(1.38g，10mmol)和芐胺(1.08g，10mmol)置于25ml圓底燒瓶中，加入bop縮合劑(5.3g,12mmol)和dmap(1.46g,12mmol)，后加入干燥的dmf20ml，室溫?cái)嚢?，tlc跟蹤反應(yīng)，3h后反應(yīng)完全ea萃取水洗濃縮得到中間體1，ms(ei):m/z227.1[m+h]⁺.

步驟2：將中間體1(230mg,1mmol)和3,4-二氟溴化芐(206mg,1mmol)置于25ml圓底燒瓶中，加入cs2co3(490mg,1.5mmol)于燒瓶中，后加入干燥的dmf8ml，室溫?cái)嚢?，tlc跟蹤反應(yīng)，3h后反應(yīng)完全，用水/乙酸乙酯萃取，直至水相沒有化合物后，合并有機(jī)相用水洗滌兩次，再用飽和nacl溶液洗滌，無水硫酸鈉干燥，最后硅膠柱分離純化(石油醚/乙酸乙酯＝8:1)得到目標(biāo)產(chǎn)物。收率80％，產(chǎn)物為白色固體。¹hnmr(400mhz,氯仿-d)δ7.79–7.73(m,2h),7.44–7.37(m,1h),7.35(d,j＝4.0hz,4h),7.32–7.27(m,1h),7.25–7.21(m,1h),7.14(m,1h),6.99–6.92(m,2h),6.38(t,j＝5.7hz,1h),5.06(t,j＝0.7hz,2h), 4.63(d,j＝5.6hz,2h).lcms(esi):m/z370.1[m+h]⁺.

實(shí)施例2：gvs-2的合成：

用3-氟-4-氯溴化芐代替3,4-二氟溴化芐照制備gvs-1的方法制備gvs-2(產(chǎn)率85％)。¹hnmr(400mhz,氯仿-d)δ7.80–7.73(m,2h),7.36(d,j＝4.4hz,4h),7.33–7.25(m,2h),7.25–7.10(m,2h),7.01–6.93(m,2h),6.32(t,j＝5.4hz,1h),5.05(s,2h),4.64(d,j＝5.6hz,2h).lcms(esi):m/z354.1[m+h]⁺.

實(shí)施例3：gvs-3的合成：

用4-三氟甲基溴化芐代替3,4-二氟溴化芐照制備gvs-1的方法制備gvs-3(產(chǎn)率81％)。¹hnmr(400mhz,氯仿-d)δ7.80–7.74(m,2h),7.69–7.61(m,2h),7.54(m,2h),7.35(d,j＝4.6hz,4h),7.33–7.27(m,1h),7.02–6.95(m,2h),6.34(s,1h),5.17(s,2h),4.63(d,j＝5.6hz,2h).lcms(esi):m/z386.1[m+h]⁺.

實(shí)施例4：gvs-4的合成：

步驟1：用4-甲氨基吡啶代替芐胺照制備中間體1的方法制備中間體2，lcms(esi):m/z229.1[m+h]⁺.

步驟2：用中間體2代替中間體1按照制備gvs-1的方法制備gvs-4(產(chǎn)率79％)。¹hnmr(400mhz,氯仿-d)δ8.55(d,j＝4.7hz,2h),7.79(d,j＝8.4hz,2h),7.41(t,j＝7.8hz,1h),7.25(s,2h),7.18–7.10(m,1h),6.98(d,j＝8.4hz,2h),6.60(t,j＝6.1hz,1h),5.08(s,2h),4.64(d,j＝6.0hz,2h).lcms(esi):m/z355.1[m+h]⁺.

實(shí)施例5：gvs-5的合成：

用中間體2代替中間體1按照制備gvs-2的方法制備gvs-5(產(chǎn)率75％)。¹hnmr(400mhz,氯仿-d)δ8.52(d,j＝5.2hz,2h),7.80(d,j＝8.4hz,2h),7.31–7.11(m,4h),6.97(d,j＝8.4hz,2h),6.78(d,j＝6.2hz,1h),5.05(s,2h),4.62(d,j＝6.0hz,2h).lcms(esi):m/z371.1[m+h]⁺.

實(shí)施例6：gvs-6的合成：

用中間體2代替中間體1按照制備gvs-3的方法制備gvs-6(產(chǎn)率77％)。¹hnmr(400mhz,氯仿-d)δ8.59–8.51(m,2h),7.83–7.77(m,2h),7.65(d,j＝8.1hz,2h),7.58–7.52(m,2h),7.25–7.22(m,2h),7.04–6.96(m,2h),6.63(t,j＝6.0hz,1h),5.17(s,2h),4.64(d,j＝6.0hz,2h).lcms(esi):m/z387.1[m+h]⁺.

實(shí)施例7：gvs-7的合成：

步驟1：用3-甲氨基吡啶代替芐胺照制備中間體1的方法制備中間體3，lcms(esi):m/z229.1[m+h]⁺.

步驟2：用中間體3代替中間體1按照制備gvs-1的方法制備gvs-7(產(chǎn)率81％)。¹hnmr(400mhz,氯仿-d)δ8.63–8.56(m,1h),8.53(dd,j＝5.0,1.7hz,1h),7.79–7.74(m,2h),7.71(d,j＝7.9hz,1h),7.40(t,j＝7.8hz,1h),7.30–7.27(m,1h),7.23(dd,j＝9.7,2.0hz,1h),7.16–7.12(m,1h),6.99–6.94(m,2h),6.53(t,j＝5.9hz,1h),5.07(s,2h),4.64(d,j＝5.9hz,2h).lcms(esi):m/z355.1[m+h]⁺.

實(shí)施例8：gvs-8的合成：

用中間體3代替中間體1按照制備gvs-2的方法制備gvs-8(產(chǎn)率70％)。¹hnmr(400mhz,氯仿-d)δ8.58(d,j＝2.3hz,1h),8.53(dd,j＝4.9,1.7hz,1h),7.83–7.73(m,2h),7.71(dt,j＝7.9,2.0hz,1h),7.40(t,j＝7.8hz,1h),7.30–7.20(m,3h),7.18–7.10(m,1h),7.02–6.91(m,2h),6.53(t,j＝6.1hz,1h),5.07(s,2h),4.64(d,j＝5.9hz,2h).lcms(esi):m/z371.1[m+h]⁺.

實(shí)施例9：gvs-9的合成：

用中間體3代替中間體1按照制備gvs-3的方法制備gvs-9(產(chǎn)率78％)。¹hnmr(400mhz,氯仿-d)δ8.49(dd,j＝17.4,3.8hz,2h),7.81–7.75(m,2h),7.68(dd,j＝7.8,2.0hz,1h),7.66–7.60(m,2h),7.52(d,j＝8.0hz,2h),7.23(dd,j＝7.8,4.9hz,1h),6.95(dt,j＝9.6,2.5hz,3h),5.14(s,2h),4.59(dd,j＝6.0,2.8hz,2h).lcms(esi):m/z387.1[m+h]⁺.

實(shí)施例10：gvs-10的合成：

步驟1：用3-甲氨基呋喃代替芐胺照制備中間體1的方法制備中間體4，lcms(esi):m/z218.1[m+h]⁺.

步驟2：用中間體4代替中間體1按照制備gvs-1的方法制備gvs-10(產(chǎn)率85％)。¹hnmr(400mhz,氯仿-d)δ8.12(dd,j＝1.8,0.7hz,1h),7.65(dd,j＝8.6,1.8hz,1h),7.38(dd,j＝1.8,0.9hz,1h),7.23(dd,j＝8.7,0.8hz,1h),7.16(d,j＝3.2hz,1h),7.08(m,1h),6.63(dd,j＝3.3,0.8hz,1h),6.46(t,j＝5.2hz,1h),6.37–6.26(m,2h),5.29(d,j＝1.3hz,2h),4.67(dd,j＝5.5,0.8hz,2h).lcms(esi):m/z344.1[m+h]⁺.

實(shí)施例11：gvs-11的合成：

用中間體4代替中間體1按照制備gvs-2的方法制備gvs-11(產(chǎn)率79％)。¹hnmr(400mhz,氯仿-d)δ7.79–7.70(m,2h),7.44–7.35(m,2h),7.23(dd,j＝9.7,1.9hz,1h),7.14(ddt,j＝8.3,2.1,0.9hz,1h),6.99–6.92(m,2h),6.38–6.31(m,2h),6.31–6.27(m,1h),5.06(s,2h),4.62(d,j＝5.4hz,2h).lcms(esi):m/z360.1[m+h]⁺.

實(shí)施例12：gvs-12的合成：

用中間體4代替中間體1按照制備gvs-3的方法制備gvs-12(產(chǎn)率82％)。¹hnmr(400mhz,氯仿-d)δ7.81–7.72(m,2h),7.65(d,j＝8.0hz,2h),7.58–7.52(m,2h),7.37(dd,j＝1.9,0.9hz,1h),7.01–6.95(m,2h),6.36–6.32(m,2h),6.29(m,1h),5.16(s,2h),4.66–4.59(m,2h).lcms(esi):m/z376.1[m+h]⁺.

實(shí)施例13：gvs-13的合成：

向反應(yīng)瓶中加入吲哚-5-甲酸甲酯(0.2mmol)、3-氟,4-氯芐溴(0.22mmol)、nah(0.22mmol)和dmf(n,n-二甲基甲酰胺)(2ml)，冰浴下攪拌直至室溫，tlc檢測反應(yīng)完全。向反應(yīng)瓶中加入1mol/l鹽酸(50ml)，乙酸乙酯萃取3次，合并有機(jī)相。再用1mol/l鹽酸、飽和nacl各洗有機(jī)相1次。無水硫酸鈉干燥過夜。抽濾除去干燥劑，旋干得粗產(chǎn)品。再經(jīng)硅膠柱色譜分離純化，得1-(4-氯-3-氟芐基)-1h-吲哚-5-羧酸甲酯(b-1)(57mg,0.18mmol)，產(chǎn)率90％。

向所得1-(4-氯-3-氟芐基)-1h-吲哚-5-羧酸甲酯(b-1)(0.18mmol)中加入4mol/l的naoh溶液(8ml)，回流攪拌，tlc檢測反應(yīng)完全。向反應(yīng)瓶中加入1mol/l鹽酸溶液調(diào)ph為酸性，乙酸乙酯萃取3次，合并有機(jī)相。再用1mol/l鹽 酸、飽和nacl各洗有機(jī)相1次。無水硫酸鈉干燥過夜。抽濾除去干燥劑，旋干得粗產(chǎn)品。再經(jīng)硅膠柱色譜分離純化，得水解產(chǎn)物1-(4-氯-3-氟芐基)-1h-吲哚-5-羧酸(b-2)(52mg,0.17mmol)，產(chǎn)率95％。

向所得1-(4-氯-3-氟芐基)-1h-吲哚-5-羧酸(b-2)(0.17mmol)加入芐胺(0.19mmol)、bop(苯并三氮唑-1-基氧基三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸鹽)(0.34mmol)、dmap(4-二甲氨基吡啶)(0.34mmol)和dmf(n,n-二甲基甲酰胺)(2ml)，室溫?cái)嚢?，tlc檢測反應(yīng)完全。向反應(yīng)瓶中加入1mol/l鹽酸(50ml)，乙酸乙酯萃取3次，合并有機(jī)相。再用1mol/l鹽酸、飽和nacl各洗有機(jī)相1次。無水硫酸鈉干燥過夜。抽濾除去干燥劑，旋干得粗產(chǎn)品。再經(jīng)硅膠柱色譜分離純化，得縮合產(chǎn)物n-芐基-1-(4-氯-3-氟芐基)-1h-吲哚-5-甲酰胺(gvs-13)(63mg,0.16mmol)，產(chǎn)率92％。¹hnmr(400mhz,dmso):δ8.92(s,1h),8.19(s,1h),7.75–7.65(m,1h),7.62(d,1h,j＝3.2hz),7.56–7.48(m,2h),7.32(s,2h),7.31(s,2h),7.27(dd,1h,j＝10.3,1.8hz),7.24-7.20(m,1h),7.00(dd,1h,j＝8.3,1.4hz),6.62(d,1h,j＝3.1hz),5.49(s,2h),4.49(d,2h,j＝6.0hz).

實(shí)施例14：gvs-14的合成：

用苯胺代替芐胺按照制備gvs-13的方法制備gvs-14(產(chǎn)率91％)。¹hnmr(400mhz,dmso):10.13(s,1h),8.26(d,1h,j＝1.0hz),7.83-7.77(m,2h),7.74(dd,1h,j＝8.6,1.5hz),7.66(d,1h,j＝3.2hz),7.59(d,1h,j＝8.7hz),7.54(t,1h,j＝8.1hz),7.34(t,2h,j＝7.9hz),7.29(dd,1h,j＝10.2,1.5hz),7.07(t,1h,j＝7.4hz),7.01(d,1h,j＝7.8hz),6.68(d,1h,j＝3.1hz),5.52(s,2h).

實(shí)施例15：gvs-15的合成：

用4-胺甲基吡啶代替芐胺按照制備gvs-13的方法制備gvs-15(產(chǎn)率93％)。¹hnmr(400mhz,dmso):δ9.01(t,1h,j＝5.9hz),8.49(dd,2h,j＝4.5,1.5hz),8.21(s,1h),7.70(dd,1h,j＝8.7,1.5hz),7.63(d,1h,j＝3.2hz),7.59–7.46(m,2h), 7.30(d,2h,j＝5.9hz),7.29–7.25(m,1h),7.07–6.94(m,1h),6.64(d,1h,j＝3.0hz),5.49(s,2h),4.50(d,2h,j＝5.9hz).

實(shí)施例16：gvs-16的合成：

用1-苯乙基乙胺代替芐胺按照制備gvs-13的方法制備gvs-16(產(chǎn)率92％)。¹hnmr(400mhz,dmso):δ8.66(d,1h,j＝8.1hz),8.19(d,1h,j＝1.2hz),7.67(dd,1h,j＝8.6,1.6hz),7.61(d,1h,j＝3.2hz),7.54-7.50(m,2h),7.41(s,1h),7.39(s,1h),7.31(t,2h,j＝7.6hz),7.25(dd,1h,j＝10.3,1.7hz),7.20(t,1h,j＝7.3hz),6.99(d,1h,j＝8.3hz),6.63(d,1h,j＝2.9hz),5.48(s,2h),5.22-5.15(m,1h),1.48(d,3h,j＝7.1hz).

實(shí)施例17：gvs-17的合成：

用3、4-二氟溴化芐代替3-氟-4-氯溴化芐按照合成gvs-13的方法制備gvs-17(產(chǎn)率72％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.93(s,1h),8.21(s,1h),7.71(d,1h,j＝8.7hz),7.62(d,1h,j＝3.2hz),7.56(d,1h,j＝8.7hz),7.42-7.28(m,6h),7.24-7.20(m,1h),7.09-6.96(m,1h),6.62(d,1h,j＝3.1hz),5.46(s,2h),4.50(d,2h,j＝5.7hz)；hrms(esi)m/zcalcdforc23h18f2n2o[m+na]⁺:399.1279,found:376.1387

實(shí)施例18：gvs-18的合成：

用4-異丙基芐胺代替芐胺按照合成gvs-17的方法制備gvs-18(產(chǎn)率76％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.90(s,1h),8.22(s,1h),7.78-7.51(m,3h),7.39-7.29(m,2h),7.21(dd,4h,j＝32.7and7.8hz),7.03(s,1h),6.62(d,1h,j＝2.6hz),5.45(s,2h),4.47(d,2h,j＝5.6hz),2.83(t,1h,j＝6.8hz),1.16(d,6h, j＝6.9hz)；hrms(esi)m/zcalcdforc26h24f2n2o[m+na]⁺:441.1756,found:418.1857.

實(shí)施例19：gvs-19的合成：

用2-胺甲基呋喃代替芐胺按照合成gvs-17的方法制備gvs-19(產(chǎn)率79％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.82(t,1h,j＝7.6hz),8.17(d,1h,j＝2.0hz),7.67(dd,1h,j＝11.6and2.4hz),7.62(d,1h,j＝4.4hz),7.57-7.53(m,2h),7.42-7.28(m,2h),7.05-7.00(m,1h),6.61(d,1h,j＝4.0hz),6.39(dd,1h,j＝4.4and2.4hz),6.25(dd,1h,j＝4.4and0.8hz),5.45(s,2h),4.47(d,2h,j＝7.6hz)；hrms(esi)m/zcalcdforc21h16f2n2o2[m+h]⁺:367.1254,found:366.1180.

實(shí)施例20：gvs-20的合成：

用溴化芐代替3-氟-4-氯溴化芐按照合成gvs-13的方法制備gvs-20(產(chǎn)率82％)。¹hnmr(400mhz,氯仿-d)δ8.13(dd,j＝1.8,0.7hz,1h),7.64(dd,j＝8.6,1.8hz,1h),7.42–7.26(m,9h),7.18(d,j＝3.2hz,1h),7.11–7.04(m,2h),6.61(dd,j＝3.2,0.9hz,1h),6.47(t,j＝5.7hz,1h),5.33(s,2h),4.67(d,j＝5.6hz,2h).lcms(esi):m/z341.2[m+h]⁺.

實(shí)施例21：gvs-21的合成：

用2-溴甲基奈代替3-氟-4-氯溴化芐按照合成gvs-13的方法制備gvs-21(產(chǎn)率69％)。¹hnmr(400mhz,氯仿-d)δ8.15(dd,j＝1.8,0.8hz,1h),7.85–7.68(m,3h),7.63(dd,j＝8.6,1.8hz,1h),7.52(s,1h),7.49–7.42(m,2h),7.41–7.26(m,6h),7.25–7.18(m,2h),6.64(dt,j＝3.2,0.8hz,1h),6.40(d,j＝6.0 hz,1h),5.50(s,2h),4.68(d,j＝5.6hz,2h).lcms(esi):m/z391.2[m+h]⁺.

實(shí)施例22：gvs-22的合成：

用4-三氟甲基溴化芐代替3、4-二氟溴化芐按照合成gvs-18的方法制備gvs-22(產(chǎn)率77％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.87(t,1h,j＝6.0hz),8.20(s,1h),7.65(dd,4h,j＝23.7and5.5hz),7.49(d,1h,j＝8.6hz),7.34(d,2h,j＝8.0hz),7.21(dd,4h,j＝24.9and8.1hz),6.63(d,1h,j＝3.0hz),5.59(s,2h),4.44(d,2h,j＝5.8hz),2.93–2.75(m,1h),1.17(d,6h,j＝6.9hz)；hrms(esi)m/zcalcdforc27h25f3n2o[m+h]⁺:451.1987,found:450.1919.

體外活性測試

實(shí)施例23：化合物對(duì)pparγ激活能力評(píng)估(熒光素酶活性測定法)：

cos-7細(xì)胞購自atcc，培養(yǎng)于10％fbs無抗生素dmem，37℃，5％co2孵育箱中。待細(xì)胞進(jìn)入對(duì)數(shù)生長期接種于24孔板中，細(xì)胞融合約70％時(shí)，按照lipofectamine2000(invitrogen)操作說明進(jìn)行質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染(50ng全長hpparγ，100ngpparγ，5ng海腎熒光素酶質(zhì)粒)。24h后轉(zhuǎn)染細(xì)胞分別用1μm化合物干預(yù)，其中1μm羅格列酮做陽性對(duì)照，dmso做陰性對(duì)照。干預(yù)24h后按reporterluciferaseassaykits(promega)操作說明測定熒光素酶活性，每組設(shè)定3個(gè)獨(dú)立測試孔。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1luciferase方法測試化合物gvs1-22對(duì)pparγ的激活能力

(注：激活能力在0.1-0.5標(biāo)記為+，在0.5-1.0標(biāo)記為++)

實(shí)施例24：tr-fret方法測試化合物與pparγ結(jié)合能力步驟：

1.將化合物1至22用dmso稀釋到1mm。dmso做陰性對(duì)照，羅格列酮陽性對(duì)照。

2.將稀釋好的化合物(1至22,羅格列酮)用tr-fretbuffer再次稀釋到2μm。

3.以tr-fretbuffer為溶劑準(zhǔn)備fluormone^tmpan-ppargreensolution(20nm)。

4.以tr-fretbuffer為溶劑準(zhǔn)備20nmtbanti-gstantibody和4μmpparγ-lbdprotein。

5.將20μl步驟2溶液,10μl步驟3溶液和10μl步驟4溶液混合在384孔板中，震蕩6小時(shí)。在酶標(biāo)儀上讀數(shù)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。

表2tr-fret方法測試化合物gvs1-22與pparγ結(jié)合能力

(注：結(jié)合能力在0.1-0.5標(biāo)記為+，在0.5-0.8標(biāo)記為++，在0.8-1.5標(biāo)記為+++)

表3部分化合物激活能力與結(jié)合能力的比值

(注：比值在0.1-0.5標(biāo)記為+，在0.5-1.0標(biāo)記為++，在1.0-5.0標(biāo)記為+++)

實(shí)施例25：gvs化合物致脂肪分化能力測試及real-timepcr測定

3t3-l1前脂肪細(xì)胞購自atcc，培養(yǎng)于含青霉素-鏈霉素雙抗的10％fbsdmem，37℃，5％co2孵育箱中。接種于培養(yǎng)板，匯合后2d加入誘導(dǎo)液(10％fbsdmem含0.5mmol/libmx(3-異丁基-1-甲基黃嘌呤),1μmol/ldex(地塞米松),850nmol/l胰島素)。72h后換成10％fbs高糖dmem含850nmol/l胰島素，每2d換一次。1μm羅格列酮為陽性對(duì)照，dmso為陰性對(duì)照，樣品組為1μm。誘導(dǎo)開始第8d進(jìn)行油紅o染色及dapi染色，顯微鏡(olympus)拍照，計(jì)算脂肪細(xì)胞分化率。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表4。

表4gvs化合物致脂肪分化能力

實(shí)施例26：gvs系列化合物在非酒精性脂肪肝中的作用

1.材料

1.1動(dòng)物

動(dòng)物spf級(jí)sd雄性大鼠60只，體重180±200g，由桂林醫(yī)學(xué)院spf實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2藥品與試劑

合成gvs系列化合物(純度>99.5％)，谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alt)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(ast)、丙二醛(mda)和超氧化物歧化酶(sod)試劑盒購于南京建成生物工程研究所。

低密度脂蛋白膽固醇(ldl-c)、高密度脂蛋白膽固醇(hdl-c)、甘油三酯(tg)試劑盒購于北京北化康泰臨床試劑有限公司。

脂聯(lián)素(adp)和脂肪酸合成酶(fas)購于武漢伊萊瑞特生物科技有限公司。

1.3原料與儀器

h2050r臺(tái)式冷凍離心機(jī)，湖南湘儀離心機(jī)儀器有限公司；

epoch酶標(biāo)儀，美國biotek公司；

752型分光光度計(jì)，上海第三分析儀器廠；

o1ympusbx51顯微鏡，奧林巴斯生產(chǎn)；

auw220d電子天平，德國sartorius公司；

tanon電泳儀，上海天能。

2.方法

2.1分組和模型建立

取sd大鼠50只(體重180±200克)隨機(jī)分為5組(n＝10)：

①空白對(duì)照組；

②模型組；

③gvs-12低劑量組(2mg/kg)；

④gvs-12中劑量組(6mg/kg)；

⑤gvs-12高劑量組(18mg/kg)。

建立高脂飲食誘導(dǎo)的非酒精性脂肪肝大鼠模型，空白組給予普通飼料喂養(yǎng)16周；模型組及給藥組給予高脂飼料(飼料配比:82.5％普通飼料+10％豬油+5％ 蛋黃粉+2％膽固醇+0.5％膽酸鈉)喂養(yǎng)16周，并于第四周開始給藥，gvs-12皮下注射給藥，連續(xù)給藥12周，空白對(duì)照組和模型組給予等體積的蒸餾水。

2.2檢測指標(biāo)

嚴(yán)格按照試劑盒的要求規(guī)范操作。

谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alt)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(ast)、丙二醛(mda)、超氧化物歧化酶(sod)試劑盒購于南京建成生物工程研究所。

低密度脂蛋白膽固醇(ldl-c)、高密度脂蛋白膽固醇(hdl-c)、總膽固醇(tc)、甘油三脂(tg)試劑盒購于北京北化康泰臨床試劑有限公司。

脂聯(lián)素(adp)和脂肪酸合成酶(fas)試劑盒購于武漢伊萊瑞特生物科技有限公司。

2.3病理學(xué)觀察

取各大鼠肝臟同一部位組織，以10％中性福爾馬林固定，脫水，包埋，切片，脫蠟，采用油紅o染色，直觀檢測gvs-12對(duì)該模型脂質(zhì)沉積的改善情況。采用he染色觀察大鼠肝臟脂肪堆積程度及炎癥程度，鏡下觀察分析肝臟組織病理情況。

2.4數(shù)據(jù)處理

用spss13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。試驗(yàn)數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±s.e.m)表示，各組間均數(shù)的比較采用單因素方差分析(one-wayanovea)，再采用dunnett-t檢驗(yàn)，以p＜0.05作為顯著性差異標(biāo)準(zhǔn)。

3.結(jié)果

(1)檢測gvs-12對(duì)非酒精性脂肪肝大鼠體重的影響。

由圖2可知，給藥組大鼠的體重與模型組相比，沒有顯著增加。

(2)病理形態(tài)學(xué)觀察，采用油紅o和he染色觀察大鼠變性程度及炎癥程度。

由圖3可知，油紅o染色結(jié)果表明模型組的脂肪已被顯著分化和沉積，而給藥組的脂肪分化明顯降低。

he染色結(jié)果表明模型組肝組織出現(xiàn)嚴(yán)重的炎癥損傷和肝纖維化，給藥組炎癥損傷逐漸減少，且呈劑量依賴性不斷地被改善。

(3)通過生化法檢測gvs-12對(duì)脂肪肝大鼠肝功能因子谷草轉(zhuǎn)氨酶(ast)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alt)、丙二醛(mda)、超氧化物歧化酶(sod)的影響。

由圖4可知，與模型組比相比，gvs-12能明顯降低血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶(ast)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alt)、丙二醛(mda)的活性及濃度，同時(shí)能夠明顯升高超氧化物歧化酶(sod)的活性；

(4)通過生化法檢測gvs-12對(duì)脂肪肝大鼠脂肪因子低密度脂蛋白膽固醇(ldl-c)、高密度脂蛋白膽固醇(hdl-c)、甘油三酯(tg)的影響；

由圖5可知，與模型組比相比，gvs-12能降低低密度脂蛋白膽固醇(ldl-c)、甘油三酯(tg)以及增加高密度脂蛋白膽固醇(hdl-c)的含量。

(5)通過elisa法檢測gvs-12對(duì)脂肪肝大鼠脂聯(lián)素(adp)、脂肪酸合成酶(fas)的影響。

由圖6可知，與模型組比相比，能升高血清中脂聯(lián)素(adp)的含量和降低脂肪酸合成酶(fas)的活性。

以上結(jié)果充分表明gvs-12具有在維持正常體重的情況下，能改善非酒精性肝臟炎癥和脂肪堆積的作用，具有良好防治非酒精性脂肪肝的作用。

綜上，本發(fā)明的具有全新母核結(jié)構(gòu)的gvs系列化合物結(jié)構(gòu)不同于羅格列酮，原料簡單易得，能綁定和激動(dòng)pparγ受體，且具有不明顯誘導(dǎo)脂肪分化特點(diǎn)作用，具有與羅格列酮相當(dāng)甚至更優(yōu)的結(jié)果。

在本發(fā)明提及的所有文獻(xiàn)都在本申請(qǐng)中引用作為參考，就如同每一篇文獻(xiàn)被單獨(dú)引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書所限定的范圍。