1.一種采用檢測(cè)試劑盒對(duì)細(xì)菌性陰道炎進(jìn)行檢測(cè)的方法,其特征在于,其包括以下步驟:
(1)提取待測(cè)樣品DNA:向待測(cè)樣品中加入CTAB抽提緩沖液,按照常規(guī)CTAB法提取DNA;
(2)建立LAMP反應(yīng)體系:在PCR管中制備25μl反應(yīng)體系,其包括5pmol/μl的外引物F31μl、5pmol/μl的外引物B31μl、40pmol/μl的內(nèi)引物FIP 1μl、40pmol/μl的內(nèi)引物BIP 1μl、反應(yīng)緩沖液2.5μl、8U/μl的Bst DNA聚合酶1μl、模板DNA 2μl,加水補(bǔ)充至25μl,并以陰道加德納菌基因組DNA作為陽(yáng)性對(duì)照,以100mM Tris-HCl pH 8.0和50mM EDTA作為陰性對(duì)照;
(3)LAMP反應(yīng):將步驟(2)中的PCR管于63℃恒溫反應(yīng)60min;
(4)分析判斷反應(yīng)產(chǎn)物結(jié)果:在(3)中所得反應(yīng)產(chǎn)物中加入1μl核酸染料,如反應(yīng)液顏色為橙色,表示結(jié)果為陰性,如反應(yīng)液顏色為綠色,表示結(jié)果為陽(yáng)性;
所述檢測(cè)試劑盒包括針對(duì)陰道加德納菌保守區(qū)域設(shè)計(jì)的引物、反應(yīng)緩沖液、Bst DNA聚合酶和核酸染料,其中所述引物的核苷酸序列如下所示:
外引物F3:ATAGCTCTTGGAAACGGGTG(SEQ ID NO:1)
外引物B3:CGCAATATTCCCCACTGCTG(SEQ ID NO:2)
內(nèi)引物FIP:ACCCCATCCCATGCCACTAAAC-AATGCTGGATGCTCCAACTT(SEQ ID NO:3)
內(nèi)引物BIP:ACCTAGGCTTCGACGGGTAGC-TGGGCCGTATCTCAGTCC(SEQ ID NO:4)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的采用檢測(cè)試劑盒對(duì)細(xì)菌性陰道炎進(jìn)行檢測(cè)的方法,其特征在于:
所述外引物F3和所述外引物B3的濃度均為5pmol/μl,所述內(nèi)引物FIP和所述內(nèi)引物BIP的濃度均為40pmol/μl。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的采用檢測(cè)試劑盒對(duì)細(xì)菌性陰道炎進(jìn)行檢測(cè)的方法,其特征在于:
所述反應(yīng)緩沖液由10mM dNTP、10×ThermoPol反應(yīng)緩沖液、50mM MgSO4和5mM甜菜堿組成。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的采用檢測(cè)試劑盒對(duì)細(xì)菌性陰道炎進(jìn)行檢測(cè)的方法,其特征在于:
所述Bst DNA聚合酶的濃度為8U/μl。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的采用檢測(cè)試劑盒對(duì)細(xì)菌性陰道炎進(jìn)行檢測(cè)的方法,其特征在于:
所述核酸染料為1000×SYBR Green I。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的采用檢測(cè)試劑盒對(duì)細(xì)菌性陰道炎進(jìn)行檢測(cè)的方法,其特征在于:
所述試劑盒包括DNA提取試劑以及陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的采用檢測(cè)試劑盒對(duì)細(xì)菌性陰道炎進(jìn)行檢測(cè)的方法,其特征在于:
所述DNA提取試劑是CTAB抽提緩沖液,其由100mM Tris-HCl pH8.0、50mM EDTA、1M NaCl、1%(v/v)β-巰基乙醇、2%CTAB組成,pH 7.0-7.5。