本發(fā)明涉及新的羧酸化合物；包含所述化合物的藥物組合物；使用所述化合物治療與關(guān)節(jié)炎相關(guān)的疼痛和/或炎癥的方法；以及用于合成所述化合物的中間體和方法。

關(guān)節(jié)炎涉及關(guān)節(jié)的炎癥，常伴有疼痛和僵硬。骨關(guān)節(jié)炎是最常見的關(guān)節(jié)炎形式，是一種復(fù)雜的關(guān)節(jié)退行性疾病，其特征在于關(guān)節(jié)軟骨和關(guān)節(jié)周圍結(jié)構(gòu)(包括骨、滑膜和相連的關(guān)節(jié)纖維組織)的逐漸破壞以及不同程度的炎癥?，F(xiàn)有的使用非甾體抗炎藥(nsaid)和環(huán)氧合酶-2抑制劑(cox-2抑制劑)的藥物治療可以減輕與骨關(guān)節(jié)炎相關(guān)的疼痛，但隨著時(shí)間的推移，所述治療可能只是中等有效的，并且均具有可變的風(fēng)險(xiǎn)/利益考慮。

非甾體抗炎藥和cox-2抑制劑通過抑制cox-2酶來減輕炎癥和疼痛。響應(yīng)于炎癥刺激，cox-2酶將花生四烯酸代謝為前列腺素h2(pgh2)。pgh2進(jìn)一步被多種酶代謝為其他的類花生酸類物質(zhì)，包括前列腺素e2(pge2)、前列腺素i2(pgi2)、前列腺素f2α(pgf2α)、前列腺素d2(pgd2)和血栓烷a2(txa2)。已知這些代謝產(chǎn)物可以引起生理和病理生理學(xué)效應(yīng)。認(rèn)為藥物介導(dǎo)的pgi2和txa2失衡可能解釋為什么非甾體抗炎藥和cox-2抑制劑會(huì)產(chǎn)生有害的胃腸道和心血管系統(tǒng)副作用。因此，這類藥物可能不適于許多之前存在或新出現(xiàn)了心血管和/或胃腸道疾病的患者。此外，隨著時(shí)間的推移，患者可能對(duì)具體的藥物治療產(chǎn)生耐受。

在花生四烯酸的代謝產(chǎn)物中，pge2已被確定為是與骨關(guān)節(jié)炎相關(guān)的病癥例如發(fā)燒、疼痛和炎癥的重要介質(zhì)。前列腺素e2特異性地通過微粒體前列腺素e2合酶-1(mpges-1)代謝pgh2代謝而生成。認(rèn)為選擇性地抑制mpges-1可能為關(guān)節(jié)炎患者提供新的治療選擇。

wo2013/146970公開了三取代的喹啉化合物并提出所公開的化合物可用于治療特別是炎癥性疾病。然而，其并沒有公開本申請(qǐng)所要求保護(hù)的化合物。

仍然需要額外的選擇來治療炎癥和減輕與關(guān)節(jié)炎相關(guān)的疼痛。本發(fā)明提供了抑制mpges-1并且可能對(duì)治療關(guān)節(jié)炎、尤其是骨關(guān)節(jié)炎患者有益的新化合物。

本發(fā)明提供了式1化合物或其可藥用鹽，

其中：n是1或2；a選自:-ch2-、-nh-和-o-；e是-ch-或n；x是n或ch；r選自:h、-ch3、f和cl；并且r1和r2獨(dú)立地是h或-ch3；g選自:

條件是當(dāng)g是時(shí)，e是ch；并且條件是當(dāng)a是-nh-或-o-時(shí)，x是ch。

本發(fā)明還提供了式2的化合物或其可藥用鹽，

其中：n是1或2；a選自:-ch2-、-nh-和-o-；x是n或ch；r選自:h、-ch3、f和cl；并且各r1獨(dú)立地選自h或-ch3；g選自:

條件是當(dāng)a是-nh-或-o-時(shí)，x是-ch-。

在另一種形式中，本發(fā)明提供了式1或2的化合物或其可藥用鹽，其中n是1。

在另一種形式中，本發(fā)明提供了式1的化合物或其可藥用鹽，其中e是n。

在另一種形式中，本發(fā)明提供了式1或2的化合物或其可藥用鹽，其中r選自:h、-ch3和f。對(duì)于更優(yōu)選的本發(fā)明化合物，r是h。

在另一種形式中，本發(fā)明提供了式1或2的化合物或其可藥用鹽，其中a是-o-或-ch2-。對(duì)于更優(yōu)選的本發(fā)明化合物，a是-ch2-。

在另一種形式中，本發(fā)明提供了式1或2的化合物或其可藥用鹽，其中g(shù)選自:

對(duì)于更優(yōu)選的本發(fā)明化合物，g選自:

對(duì)于進(jìn)一步更優(yōu)選的本發(fā)明化合物，g是

在另一種形式中，本發(fā)明提供了式1或2的化合物或其可藥用鹽，其中x是-ch-。

在另一種形式中，本發(fā)明提供了式1或2的化合物或其可藥用鹽，其中r1和r2是h。

在另一種形式中，本發(fā)明提供了式3的化合物或其可藥用鹽。

在另一種形式中，本發(fā)明提供了式1、2或3的化合物的可藥用鹽，其中所述可藥用鹽通過加入堿例如氫氧化鈉或氫氧化鉀進(jìn)行制備。在一個(gè)實(shí)施方案中，式1、2或3的化合物以鈉鹽的形式提供。

在另一種形式中，本發(fā)明提供了包含式1、2或3的化合物或其可藥用鹽以及至少一種可藥用的載體、稀釋劑或賦形劑的可藥用的組合物。

本發(fā)明還提供了在有需要的患者中治療與關(guān)節(jié)炎相關(guān)的疼痛的方法。所述方法包括向患者施用有效量的式1、2或3的化合物或其可藥用鹽。本發(fā)明還提供了治療與骨關(guān)節(jié)炎相關(guān)的疼痛的方法。所述方法包括向患者施用有效量的式1、2或3的化合物或其可藥用鹽。

本發(fā)明還提供了在有需要的患者中治療與關(guān)節(jié)炎相關(guān)的炎癥的方法。所述方法包括向患者施用有效量的式1、2或3的化合物或其可藥用鹽。本發(fā)明還提供了治療與骨關(guān)節(jié)炎相關(guān)的炎癥的方法。所述方法包括向需要所述治療的患者施用有效量的式1、2或3的化合物或其可藥用鹽。

本發(fā)明還提供了在有需要的患者中治療與關(guān)節(jié)炎相關(guān)的疼痛或炎癥的方法。所述方法包括向患者施用含有有效量的式1、2或3的化合物或其可藥用鹽的可藥用的組合物。

本發(fā)明還提供了在有需要的患者中治療與骨關(guān)節(jié)炎相關(guān)的疼痛或炎癥的方法。所述方法包括向患者施用含有有效量的式1、2或3的化合物或其可藥用鹽的可藥用的組合物。

本發(fā)明還提供了用于制備藥物的式1、2或3的化合物或其可藥用鹽。

本發(fā)明還提供了用于治療的式1、2或3的化合物或其可藥用鹽。

本發(fā)明還提供了用于治療與關(guān)節(jié)炎相關(guān)的疼痛的式1、2或3的化合物或其可藥用鹽。在另一種形式中，本發(fā)明還提供了用于治療與骨關(guān)節(jié)炎相關(guān)的疼痛的式1、2或3的化合物或其可藥用鹽。

本發(fā)明還提供了用于治療與關(guān)節(jié)炎相關(guān)的炎癥的式1、2或3的化合物或其可藥用鹽。在另一種形式中，本發(fā)明還提供了用于治療與骨關(guān)節(jié)炎相關(guān)的炎癥的式1、2或3的化合物或其可藥用鹽。

本發(fā)明還提供了式1、2或3的化合物或其可藥用鹽用于生產(chǎn)藥物的用途。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥物用于治療與關(guān)節(jié)炎相關(guān)的疼痛。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥物用于治療與骨關(guān)節(jié)炎相關(guān)的疼痛。

本發(fā)明還提供了式1、2或3的化合物或其可藥用鹽用于生產(chǎn)藥物的用途。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥物用于治療與關(guān)節(jié)炎相關(guān)的炎癥。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥物用于治療與骨關(guān)節(jié)炎相關(guān)的炎癥。

本發(fā)明還提供了式4的化合物

其中r、x、a、e和g如上所述并且r2選自:c1-4烷基、-ch2ch＝ch2、c1-4鹵代烷基、c3-6環(huán)烷基、c1-4烷基-c3-6環(huán)烷基、苯基或c1-5烷基苯基和四氫吡喃。

本文中所用的術(shù)語“治療”包括終止現(xiàn)有的癥狀或病癥、特別是與關(guān)節(jié)炎或優(yōu)選與骨關(guān)節(jié)炎相關(guān)的疼痛和/或炎癥或減輕其嚴(yán)重程度。

本文中所用的術(shù)語“患者”是指哺乳動(dòng)物例如人，以及老鼠、豚鼠、大鼠、狗、貓、牛、馬、綿羊、山羊或禽類，如雞和鴨。優(yōu)選的患者是人。

本發(fā)明的示例性化合物可以按照公認(rèn)的方法配制成藥物組合物。可藥用的載體、賦形劑和稀釋劑的例子可以參見remington’spharmaceuticalsciences,gennaro主編,mackpublishingco.eastonpa.,1990。非限制性的例子包括：淀粉、糖、甘露醇和硅衍生物；粘合劑如羧基甲基纖維素和其它纖維素衍生物、甘油單硬脂酸酯；吸附載體如高嶺土和膨潤(rùn)土；潤(rùn)滑劑如滑石粉、硬脂酸鈣和硬脂酸鎂以及固體聚乙二醇。在一種形式中，藥物制劑在500mmph8的磷酸鹽緩沖液中包含20％的captisol^tm。

優(yōu)選的藥物組合物可以配制成用于口服給藥的片劑或膠囊或配制成可注射溶液。片劑、膠囊或溶液將包含對(duì)于需要所述治療的患者而言有效量的本發(fā)明化合物。

本文中所使用的術(shù)語“有效量”是指在向患者單劑量或多劑量給藥時(shí)能夠提供所需的效果、例如在接受診斷或治療的患者中減輕或消除疼痛和/或炎癥的本發(fā)明化合物或其可藥用鹽的量或劑量。

有效量可由主治醫(yī)師、獸醫(yī)或其他診斷醫(yī)生通過利用已知的技術(shù)以及觀察在類似情況下所得到的結(jié)果來容易地確定。在確定對(duì)于患者的有效量中，要考慮許多因素，包括但不限于:哺乳動(dòng)物、鳥或家畜的物種；它的大小、年齡和一般健康情況；所涉及的具體疾病或病癥，例如與關(guān)節(jié)炎或骨關(guān)節(jié)炎相關(guān)的疼痛和/或炎癥；疾病或病癥的程度或復(fù)雜情況或嚴(yán)重程度；個(gè)體患者的反應(yīng)；給藥方式；配制成藥品形式的式1化合物或其可藥用鹽在所選擇的劑量方案中的生物利用度特征；共同使用的藥物和其它相關(guān)的情況。

在一個(gè)實(shí)施方案中，有效量可以是從每公斤體重約0.0005mg到約100mg/kg。更優(yōu)選的是，有效量可以是從約0.001mg/kg到約50mg/kg。進(jìn)一步更優(yōu)選的是，有效量可以是從約0.001mg/kg到約20mg/kg。

本發(fā)明的化合物可以與其他治療方法和/或另外的治療劑、優(yōu)選用于治療關(guān)節(jié)炎和/或骨關(guān)節(jié)炎的治療劑聯(lián)合。其實(shí)例包括非甾體抗炎藥或cox-2抑制劑，如布洛芬、阿司匹林、對(duì)乙酰氨基酚、塞來昔布、萘普生和酮洛芬；阿片類藥物，如羥考酮和芬太尼；以及糖皮質(zhì)激素，如氫化可的松、潑尼松龍和潑尼松。

示例性的化合物與另外的治療劑可以一起通過相同的遞送途徑和裝置例如單一的藥丸、膠囊、片劑或溶液進(jìn)行給藥，或者在同一時(shí)間在單獨(dú)的遞送裝置中單獨(dú)給藥或順序給藥。

本發(fā)明的化合物可以以可藥用鹽的形式提供?！翱伤幱名}”是指被認(rèn)為可用于臨床和/或獸醫(yī)應(yīng)用的本發(fā)明化合物的鹽?？伤幱名}及其常規(guī)的制備方法是本領(lǐng)域公知的。參見，例如p.stahl等人,handbookofpharmaceuticalsalts:properties,selectionanduse,(vcha/wiley-vch,2002)；s.m.berge等人,"pharmaceuticalsalts,"journalofpharmaceuticalsciences,66卷,no.1,1977年1月。

本發(fā)明的化合物或其鹽可以通過本領(lǐng)域已知的各種方法進(jìn)行制備，其中的一些方法在以下的方案、制備例和實(shí)施例中進(jìn)行了舉例說明。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員會(huì)認(rèn)識(shí)到，所描述的每個(gè)路線的具體合成步驟可以以不同的方式組合，或與不同方案中的步驟相結(jié)合，以制備本發(fā)明的化合物或其鹽。以下方案的各步驟中的產(chǎn)物可以通過常規(guī)方法回收或純化，包括萃取、蒸發(fā)、沉淀、色譜法、超臨界流體色譜法、過濾、研磨和結(jié)晶。

單個(gè)的異構(gòu)體、對(duì)映體或非對(duì)映體可以由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在合成過程中的任何方便的點(diǎn)通過例如選擇性結(jié)晶技術(shù)或手性色譜法等進(jìn)行分離或拆分(參見例如j.jacques等人，"enantiomers,racemates,andresolutions",johnwileyandsons,inc.,1981,和e.l.eliel和s.h.wilen,“stereochemistryoforganiccompounds”,wiley-interscience,1994)。此外，在以下制備例中描述的中間體含有氮和氧保護(hù)基團(tuán)。保護(hù)和脫保護(hù)條件是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的并且在文獻(xiàn)中有記載(參見例如“greene’sprotectivegroupsinorganicsynthesis”,第4版,peterg.m.wuts和theodoraw.greene,johnwileyandsons,inc.2007)。

試劑和原料通常是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員易得的。其它的試劑和原料可以通過有機(jī)和雜環(huán)化學(xué)的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)或通過制備例和實(shí)施例中描述的方法制備。

如下所示的被鋸齒線貫穿的鍵表示取代基與分子其余部分的連接點(diǎn)。

交叉的鍵表示e和z非對(duì)映體的混合物。

本文中使用的縮寫按照aldrichimicaacta,vol.17,no.1,1984定義。其它縮寫的定義如下:"δ"是指在四甲基硅烷低場(chǎng)處的百萬分比；“atcc”是指美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心；“bop”是指(苯并三唑-1-基氧基)三(二甲基氨基)六氟磷酸鹽；“bsa”是指牛血清白蛋白；“cdi”是指1,1’-羰基二咪唑；“dcc”是指1,3-二環(huán)己基碳二亞胺；“dic”是指1,3-二異丙基碳二亞胺；“dmso”是指二甲基亞砜；“edci”是指1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽；“edta”是指乙二胺四乙酸；“eia”是指酶免疫分析；“eims”是指電子電離質(zhì)譜；“esms”是指電子噴霧質(zhì)譜；“etoac”是指乙酸乙酯；“hatu”是指(二甲基氨基)-n,n-二甲基(3h-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基氧基)甲基亞胺離子六氟磷酸鹽；“hbtu”是指(1h-苯并三唑-1-基氧基)(二甲基氨基)-n,n-二甲基甲基亞胺離子六氟磷酸鹽；“hoat”是指1-羥基-7-氮雜苯并三唑；“hobt”是指1-羥基苯并三唑水合物；“ic50”是指產(chǎn)生該試劑可能的最大抑制響應(yīng)的50％的試劑濃度；“l(fā)ps”是指脂多糖；“nsaid”是指非甾體抗炎藥；“pbs”是指磷酸鹽緩沖鹽水；“pge2”是指前列腺素e2；“pgh2”是指前列腺素h2；“pgi2”是指前列腺素i2；“pybop”是指(苯并三唑-1-基-氧基三(吡咯烷-1-基)六氟磷酸鹽)；“pybrop”是指溴(三-吡咯烷基)六氟磷酸鹽；“rhil-1β”是指重組人白介素1β；“sfc”是指超臨界流體色譜法；“tbme”是指叔丁基甲基醚；“tr”是指保留時(shí)間。

以下方案、制備例和實(shí)施例進(jìn)一步說明了本發(fā)明。

方案1

在方案1的步驟1中，在本領(lǐng)域已知的條件下完成伯醇的氧化，例如采用dess-martinperiodinane^tm作為氧化劑進(jìn)行氧化，得到步驟1的醛產(chǎn)物。“pg”是氨基或羧基的保護(hù)基，例如氨基甲酸酯、酰胺和酯。所述保護(hù)基是本領(lǐng)域公知并認(rèn)可的?；蛘?，可以使用2,2,6,6-四甲基哌啶-n-氧化物作為氧化劑與溴化鉀一起使用，可以將混合物冷卻至約–10℃，然后加入次氯酸鈉得到步驟1的醛產(chǎn)物。當(dāng)a＝ch2時(shí)，可將醛與適宜的wittig試劑以及堿例如叔丁醇鉀反應(yīng)得到步驟2的烯烴產(chǎn)物。步驟2的wittig產(chǎn)物可以通過將適宜的(5-取代的-2-保護(hù)的羧基)芐基或吡啶基三苯基溴化與強(qiáng)堿一起在約0℃的溫度下處理，然后滴加2-甲酰基環(huán)烷基氨基甲酸酯進(jìn)行制備?；蛘?，在步驟4中，當(dāng)a＝n時(shí)，可將醛在還原胺化條件下用適宜的苯胺和酸例如乙酸以及還原劑例如三乙酰氧基硼氫化鈉在約0℃至室溫下處理，并且不加熱或加熱至約60℃得到步驟4的小步驟1的偶聯(lián)產(chǎn)物。然后可將該產(chǎn)物在本領(lǐng)域公知的條件下例如用三甲基碘硅烷脫保護(hù)以除去胺保護(hù)基，或在酸性條件下例如使用4mhcl的1,4-二烷溶液脫保護(hù)得到步驟4的小步驟2的產(chǎn)物。在步驟3的小步驟1中，當(dāng)a＝ch2時(shí)，可將步驟2產(chǎn)物的雙鍵在本領(lǐng)域公知的條件下還原，例如用5％–10％pd/c或5％pt/c催化劑在溶劑例如etoac和/或甲醇中，在約101至413kpa下氫化得到步驟3的產(chǎn)物。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，可以采用不同的pd催化劑、溶劑條件和氫化條件來還原雙鍵?？蓪⒉襟E3的小步驟1的產(chǎn)物在小步驟2中按照方案1的小步驟2的描述脫保護(hù)得到步驟3的小步驟2的產(chǎn)物。

方案2

或者，在方案2中，可將方案1、步驟1的醛用1-偶氮基-1-二甲氧基磷?；?丙-2-酮和無機(jī)堿例如碳酸鉀在溶劑例如甲醇中轉(zhuǎn)化成三鍵得到步驟5的產(chǎn)物。然后可將步驟5的產(chǎn)物在鈀條件下與任選取代的鹵代苯甲酸酯(例如碘代苯甲酸酯)在溶劑例如四氫呋喃中、在碘化亞銅(i)和鈀催化劑例如雙(三苯基膦)氯化鈀(ii)的存在下偶聯(lián)得到步驟6的產(chǎn)物?？蓪⑷I按照方案1、步驟3的小步驟1的描述在氫化條件下還原得到步驟7的小步驟1的產(chǎn)物。然后可將胺按照方案1、步驟4的小步驟2的描述脫保護(hù)得到步驟7的小步驟2的產(chǎn)物。

方案3

在方案3中(其中e＝nh)，將3-取代的羧基被保護(hù)的哌啶與鹵素-取代的g基團(tuán)在各種條件下進(jìn)行親核芳香族取代反應(yīng)。例如，加入無機(jī)堿例如碳酸鉀或有機(jī)堿例如n,n-二異丙基乙基胺或吡啶并加熱至約130–150℃得到步驟8的小步驟1的產(chǎn)物。隨后可以將哌啶羧基在標(biāo)準(zhǔn)條件下用無機(jī)堿例如氫氧化鈉或氫氧化鋰水溶液在溶劑例如甲醇和四氫呋喃中脫保護(hù)得到步驟8的小步驟2的產(chǎn)物。還可以采用酸性條件例如1nhcl、4mhcl的1,4-二烷溶液或硫酸水溶液將保護(hù)的羧基脫保護(hù)。親核芳香族取代反應(yīng)還可以在無溶劑條件下利用微波加熱至約200℃來完成，以得到步驟8的小步驟1的產(chǎn)物。或者，可以將取代的4-羧基哌啶利用鈀和堿例如叔丁醇鈉以及催化劑例如(2-二環(huán)己基膦基-2′,6′-二異丙氧基-1,1′-聯(lián)苯)[2-(2′-氨基-1,1′-聯(lián)苯)]鈀(ii)甲磺酸鹽在回流條件下偶聯(lián)得到其中的羧酸未保護(hù)的步驟8的產(chǎn)物。

方案4

在方案4中(其中e＝choh)，將中間體4-羧基被保護(hù)的環(huán)己醇用芐基溴在有機(jī)堿例如二異丙基乙基胺的存在下烷基化得到步驟9的產(chǎn)物，其中e＝ch(och2)。

方案5

然后可將步驟8和步驟9的產(chǎn)物與方案1、步驟4的小步驟2；方案1、步驟3的小步驟2；或方案2、步驟7的小步驟2的適宜產(chǎn)物在酰胺化條件下、在堿例如二異丙基乙基胺、偶聯(lián)劑例如1-丙烷膦酸酐的存在下進(jìn)行反應(yīng)得到步驟10的小步驟1的產(chǎn)物。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，有多種通過將羧酸和胺反應(yīng)形成酰胺的方法和試劑。例如，胺化合物與適宜的羧酸在偶聯(lián)劑的存在下、在不存在或存在有機(jī)堿例如二異丙基乙基胺或三乙胺的條件下反應(yīng)可以生成式1的化合物。偶聯(lián)劑包括碳二亞胺，例如dcc、dic、edci或羰基二咪唑例如cdi。還可以使用酰胺偶聯(lián)添加劑例如1-羥基苯并三唑水合物和hoat以促進(jìn)反應(yīng)。此外，可以使用非親核性陰離子的脲陽離子鹽或鹽例如hbtu、hatu、bop、pybop和pybrop代替更為傳統(tǒng)的偶聯(lián)劑。可以使用添加劑例如dmap以促進(jìn)反應(yīng)。然后可將步驟10的小步驟1的產(chǎn)物按照方案3、步驟8的小步驟2的描述在堿性條件下脫保護(hù)得到式1的化合物。

本發(fā)明化合物的可藥用鹽例如鹽酸鹽可以通過例如將適宜的式1、2或3的游離堿和適宜的可藥用酸例如鹽酸在適宜的溶劑例如乙醚中在本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)條件下反應(yīng)來形成。此外，所述鹽的形成還可以在對(duì)氮保護(hù)基脫保護(hù)的同時(shí)發(fā)生。所述鹽的形成是本領(lǐng)域公知并且認(rèn)可的。參見，例如gould,p.l.,“saltselectionforbasicdrugs,”internationaljournalofpharmaceutics,33:201-217(1986)；bastin,r.j.等人,“saltselectionandoptimizationproceduresforpharmaceuticalnewchemicalentities,”organicprocessresearchanddevelopment,4:427-435(2000)；和berge,s.m.等人,“pharmaceuticalsalts,”journalofpharmaceuticalsciences,66:1-19,(1977)。

以下制備例和實(shí)施例進(jìn)一步說明了本發(fā)明。

制備例1

(5-氯-2-(甲氧基羰基)芐基)三苯基溴化

將2-(溴甲基)-5-氯苯甲酸甲酯(120g,455mmol)和三苯基膦(131g,501mmol)在甲苯(1.1l)中混合。將混合物在攪拌下加熱至回流過夜。將多相的混合物冷卻至室溫。過濾混合物以收集白色沉淀。將濾餅依次用甲苯(500ml)和己烷(2×500ml)洗滌。將固體真空干燥得到白色固體狀標(biāo)題化合物(225g,94％)。esms(m/z)445(m⁺)

制備例2

(5-氟-2-(甲氧基羰基)芐基)三苯基溴化

avh-e12672-005

基本上按照制備例1的方法制備標(biāo)題化合物。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.84(dd,j＝8.8,5.8hz,1h),7.80–7.56(m,16h),7.07–6.99(m,1h),6.20(d,j＝15.4hz,2h),3.48(s,3h)。

制備例3

((1s,2r)-2-甲?；h(huán)戊基)氨基甲酸叔丁酯

將((1s,2r)-2-(羥基甲基)環(huán)戊基)氨基甲酸叔丁酯(hanselmann,r.zhou,j.ma,p.confalone,p.n.j.org.chem.2003,68(22)8739–8741)(65g,0.30mol)溶于二氯甲烷(1.3l)。將溶液冷卻至–5℃并分批加入3,3,3-三乙酰氧基-3-碘-2-苯并[c]呋喃酮(185g,436mmol)。加入完成后，將反應(yīng)混合物用二氯甲烷(2l)稀釋。將混合物依次用20wt％na2s2o3水溶液(3×2l)和飽和nahco3水溶液(2×2l)洗滌。將二氯甲烷混合物用na2so4干燥，過濾，收集濾液，減壓蒸除溶劑得到灰白色固體狀標(biāo)題化合物(65g,100％)。eims(m/z)213(m⁺)。

制備例4

2-(2-((1s,2s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)環(huán)戊基)乙烯基)-4-氯苯甲酸甲酯

將(5-氯-2-甲氧基羰基)芐基)三苯基溴化(225g,428mmol)懸浮在四氫呋喃(1.6l)中。將懸浮液冷卻至0℃并在2分鐘內(nèi)加入叔丁醇鉀(45g,401mmol)。將形成的黃色溶液的溫度保持在0℃。在20分鐘內(nèi)滴加((1s,2r)-2-甲?；h(huán)戊基)氨基甲酸叔丁酯(65g,305mmol)的四氫呋喃(300ml)溶液并保持反應(yīng)溫度低于5℃。將反應(yīng)混合物升溫至室溫并攪拌過夜。將反應(yīng)混合物用飽和碳酸氫鈉水溶液(2l)稀釋并用etoac(2×1.5l)萃取。將有機(jī)萃取液合并并將合并的萃取液用水(3l)洗滌。將有機(jī)層用硫酸鈉干燥；過濾；收集濾液并減壓濃縮得到粗品殘余物。將殘余物分成兩份。將第一部分粗品殘余物利用硅膠色譜純化，用25％至50％己烷:10％tmbe的二氯甲烷溶液梯度洗脫，將第二部分用25％至35％己烷:10％tmbe的二氯甲烷溶液梯度洗脫，得到黃色油狀的4:1e:z標(biāo)題化合物的混合物，其在放置時(shí)固化成白色固體(99.5g,262mmol,86％)。esms(m/z)402(m+na)⁺。

表1中的下列化合物可以基本上按照制備例4的方法利用適宜取代的三苯基溴化試劑制備。

表1

¹色譜分離，10％至50％etoac的二氯甲烷溶液梯度洗脫

²色譜分離，10％至50％etoac的己烷溶液梯度洗脫

³色譜分離，15％至60％etoac的己烷溶液梯度洗脫

制備例9

2-(2-((1s,2s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)環(huán)戊基)乙烯基)-4-甲基苯甲酸甲酯

將4-溴-2-(2-((1s,2s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)環(huán)戊基)乙烯基)苯甲酸甲酯(0.73g,1.72mmol)和1,4-二烷(20ml)加入到微波容器中，然后向容器中吹入氮?dú)?0分鐘。加入碳酸鉀(310mg,2.24mmol)、甲基硼酸(514mg,8.59mmol)和四(三苯基膦)鈀(115mg,0.099mmol)。將容器于150℃微波加熱45分鐘。將得到的粗品混合物與另外兩批基本上通過相同的方法制備的混合物合并，合并的理論產(chǎn)量為5.13mmol。將合并的混合物在etoac和水之間進(jìn)行分配，將有機(jī)相與水相分離。將有機(jī)相依次用飽和碳酸氫鈉(2×)和飽和氯化鈉水溶液洗滌。將有機(jī)相用mgso4干燥，過濾；收集濾液并濃縮至干。將得到的黑色油進(jìn)行硅膠柱色譜，用10/90至40/60etoac/己烷梯度洗脫得到白色固體狀標(biāo)題化合物(1.13g,3.14mmol,61％總收率)。esms(m/z)382(m+na)⁺。

制備例10

2-((((1s,2s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)環(huán)戊基)甲基)氨基)-4-氯苯甲酸甲酯

將2-氨基-4-氯苯甲酸甲酯(1.9g,10mmol)和na2so4(1.4g,9.8mmol)混合。加入((1s,2r)-2-甲?；h(huán)戊基)氨基甲酸叔丁酯(2.0g,9.4mmol)的1,2-二氯乙烷(30ml)溶液。將攪拌中的溶液冷卻至0℃并分批加入三乙酰氧基硼氫化鈉(4g,19mmol)。滴加乙酸(0.9ml,16mmol)。將反應(yīng)混合物升溫至室溫并攪拌過夜。將反應(yīng)混合物用水(50ml)和飽和碳酸氫鈉水溶液(200ml)稀釋然后將混合物用二氯甲烷(2×300ml)萃取。將有機(jī)萃取液合并并用硫酸鈉干燥。過濾混合物；收集濾液并將濾液濃縮。將得到的殘余物進(jìn)行硅膠快速柱色譜，用0-100％etoac的己烷溶液洗脫得到白色固體狀標(biāo)題化合物(1.8g,50％)。esms(m/z)(³⁵cl/³⁷cl)383/385(m+h)⁺。

制備例11

n-[(1s,2r)-2-甲?；h(huán)己基]氨基甲酸芐酯

將n-[(1s,2r)-2-(羥基甲基)環(huán)己基]氨基甲酸芐酯(4.312g,16.37mmol)(peter,m.；vandereycken,j.；bernath,g.；fueloep,f.tet.asymm.1998,9(13)2339–2347)溶于二氯甲烷(5.57ml)。加入2,2,6,6-四甲基哌啶-n-氧化物(0.0259g0.0164mmol)和溴化鉀(0.197g,1.64mmol)。將混合物冷卻至–10℃。在15分鐘內(nèi)滴加次氯酸鈉(0.77m的水溶液,23.36ml,18.01mmol)并將混合物攪拌1.5小時(shí)。加入二氯甲烷(50ml)并將混合物攪拌30分鐘。升溫至室溫并將混合物攪拌過夜。在10分鐘內(nèi)滴加次氯酸鈉(0.77m的水溶液,15ml,11.55mmol)并將混合物攪拌20分鐘。分相并將水相用二氯甲烷(2×100ml)萃取。將有機(jī)萃取液合并。通過將碘化鉀(1g)溶于1m鹽酸(150ml)制備氯化氫/碘化鉀溶液。將合并的有機(jī)萃取液用氯化氫/碘化鉀溶液洗滌，然后用2m硫代硫酸鈉水溶液(100ml)洗滌，然后再用水(100ml)洗滌。分相。將有機(jī)相用硫酸鎂干燥；過濾；收集濾液并減壓濃縮。將得到的粗品物質(zhì)進(jìn)行硅膠快速色譜，在30分鐘內(nèi)從5％二氯甲烷/己烷至75％二氯甲烷/己烷梯度洗脫，得到白色固體狀標(biāo)題化合物(3.563g,84％)。esms(m/z)262(m+h)⁺,284(m+na)⁺。

制備例12

2-((((1s,2s)-2-(((芐氧基)羰基)氨基)環(huán)己基)甲基)氨基)-4-氯苯甲酸甲酯

將2-氨基-4-氯苯甲酸甲酯(0.799g,4.22mmol)和n-[(1s,2r)-2-甲酰基環(huán)己基]氨基甲酸芐酯(1.16g4.44mmol)溶于二氯甲烷(10ml)。加入乙酸(2ml,34.90mmol)并攪拌30分鐘。一次性加入三乙酰氧基硼氫化鈉(1.96g；8.89mmol)并攪拌過夜。向混合物中加入冰(～15g)并攪拌至冰融化。將混合物用二氯甲烷(3×50ml)萃取。將合并的有機(jī)萃取液用飽和碳酸氫鈉水溶液(50ml)洗滌；用硫酸鎂干燥；過濾；收集濾液并濃縮至干。將粗品物質(zhì)進(jìn)行硅膠快速色譜，用己烷至35％etoac/己烷梯度洗脫得到無色油狀標(biāo)題化合物(1.15g,60％)。esms(m/z)(³⁵cl/³⁷cl)431/433(m+h)⁺。

制備例13

2-[[(1s,2s)-2-氨基環(huán)己基]甲基氨基]-4-氯苯甲酸甲酯

將2-((((1s,2s)-2-(((芐氧基)羰基)氨基)環(huán)己基)甲基)氨基)-4-氯苯甲酸甲酯(1.15g,2.66mmol)溶于乙腈(20ml)。加入三甲基碘硅烷(0.42ml,2.92mmol)并將混合物攪拌35分鐘。加入三甲基碘硅烷(0.42ml,2.92mmol)并將混合物攪拌30分鐘。補(bǔ)加三甲基碘硅烷(0.42ml,2.92mmol)并將混合物攪拌5分鐘。將混合物用etoac(50ml)稀釋。將有機(jī)相用2m硫代硫酸鈉水溶液(20ml)洗滌。分相。將水相用etoac(2×15ml)萃取。合并有機(jī)相和有機(jī)萃取液，用2m硫代硫酸鈉水溶液(20ml)洗滌，然后用飽和碳酸氫鈉(50ml)洗滌。用硫酸鎂干燥；過濾；收集濾液并將濾液濃縮。將殘余物進(jìn)行硅膠快速色譜，用二氯甲烷至10％甲醇/二氯甲烷在25分鐘內(nèi)梯度洗脫得到白色固體狀標(biāo)題化合物(0.472g,60％)。esms(m/z)(³⁵cl/³⁷cl)297/299(m+h)⁺。

制備例14

2-(2-((1s,2s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)環(huán)戊基)乙基)-4-氯苯甲酸甲酯

在parr^tm反應(yīng)容器中將5％pt/c(1.1g,0.71mmol)懸浮在etoac(100ml)中，然后加入2-(2-((1s,2s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)環(huán)戊基)乙烯基)-4-氯苯甲酸甲酯(45g,26mmol)和etoac(100ml)。將容器密封，將混合物用氫氣吹掃并用氫氣加壓至207kpa。30分鐘后，放氣并將反應(yīng)混合物過濾。收集濾液。將該濾液與通過類似方法用45g、5g和5g2-(2-((1s,2s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)環(huán)戊基)乙烯基)-4-氯苯甲酸甲酯原料制得的物質(zhì)合并。從合并的溶液中減壓除去溶劑得到白色固體狀標(biāo)題化合物(99g,99％總收率，按批次比例計(jì)算)。esms(m/z)(³⁵cl/³⁷cl)404/406(m+na)⁺。

制備例15

2-(2-((1s,2s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)環(huán)戊基)乙基)苯甲酸甲酯

標(biāo)題化合物基本上按照制備例14的方法制備。esms(m/z)370(m+na)⁺

制備例16

2-(2-((1s,2s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)環(huán)戊基)乙基)煙酸乙酯

在氮?dú)夥障?，?0％pd/c(501mg,0.471mmol)用最少體積的etoac處理以使固體自由地懸浮。加入2-(2-((1s,2s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)環(huán)戊基)乙烯基)煙酸酯(1.7g,4.9mmol)和甲醇(47ml)。將容器密封，用氫氣吹掃并在氫氣氛下攪拌。1小時(shí)后，將容器用氮?dú)獯祾卟⒒旌衔镞^濾。將固體用etoac洗滌。收集濾液并濃縮得到無色油狀標(biāo)題化合物，約90％純度(1.76g,4.37mmol,93％)。esms(m/z)363(m+h)⁺。

制備例17

2-(2-((1s,2s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)環(huán)戊基)乙基)-4-氟苯甲酸甲酯

向壓力容器中加入10％pd/c(0.17g)并將固體用甲醇(50ml)覆蓋。加入2-(2-((1s,2s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)環(huán)戊基)乙烯基)-4-氟苯甲酸甲酯(1.7g,4.7mmol)的甲醇(50ml)溶液。將容器用氮?dú)獯祾?，然后用氫氣吹掃。將容器用氫氣加壓?13kpa并攪拌過夜。減壓并將混合物過濾以除去顆粒物。濃縮濾液得到無色油狀標(biāo)題化合物(1.7g,4.7mmol,100％)。esms(m/z)388(m+na)⁺。

制備例18

2-(2-((1s,2s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)環(huán)戊基)乙基)-4-甲基苯甲酸甲酯

將10％pd/c(0.23g)懸浮在最小體積的etoac中，然后加入2-(2-((1s,2s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)環(huán)戊基)乙烯基)-4-甲基苯甲酸甲酯(1.13g,3.14mmol)的甲醇(63ml)溶液。向容器中充入氫氣并在氫氣氛下攪拌4小時(shí)。在另一個(gè)壓力容器中，將10％鈀碳(0.67g)用最少量的甲醇處理使固體自由懸浮。向最初的反應(yīng)混合物中在氮?dú)庀录尤胄碌臐?rùn)濕的鈀。向容器中依次吹入氮?dú)夂蜌錃?。將溶液在室溫下?13kpa氫氣下攪拌1小時(shí)。將反應(yīng)液用硅藻土過濾并將濾餅用甲醇和etoac洗滌。濃縮濾液得到無色油狀標(biāo)題化合物(0.85g,2.35mmol,75％)。esms(m/z)384(m+na)⁺。

制備例19

(±)-n-(反式2-乙炔基環(huán)戊基)氨基甲酸叔丁酯

將1-偶氮基-1-二甲氧基磷?；?丙-2-酮(1.49ml,6.98mmol)加入到(±)-n-[順式-2-甲?；h(huán)戊基]氨基甲酸叔丁酯(1.24g,5.81mmol)和碳酸鉀(1.61g,11.63mmol)在甲醇(50ml)中的混合物中。將混合物在室溫下攪拌4小時(shí)。將混合物減壓濃縮得到粗品殘余物。將粗品殘余物用etoac(100ml)稀釋，用飽和碳酸氫鈉水溶液(50ml)洗滌，分層并收集有機(jī)層。將有機(jī)層用mgso4干燥；過濾；收集濾液并減壓濃縮。將殘余物進(jìn)行硅膠快速色譜，用0％至100％etoac的己烷溶液梯度洗脫，得到白色固體狀標(biāo)題化合物(0.66g,54％)。¹hnmr(400mhz,d6-dmso)δ6.92(d,j＝7.8hz,1h),3.71(appquintj＝7.3hz,1h),2.84(s,1h),1.95–1.70(m,2h),1.60–1.46(m,3h),1.36(s,9h),1.37–1.29(m,2h)。

制備例20

2-((反式2-((叔丁氧基羰基)氨基)環(huán)戊基)乙炔基)-4-氯苯甲酸甲酯

將二異丙基胺(0.44ml,3.11mmol)加入到(±)-n-(反式2-乙炔基環(huán)戊基)氨基甲酸叔丁酯(0.65g,3.11mmol)和4-氯-2-碘苯甲酸甲酯(1.11g,3.73mmol)的四氫呋喃(12ml)溶液中。將溶液用氮?dú)獯祾?分鐘。加入碘化亞銅(i)(11.8mg,0.062mmol)和雙(三苯基膦)氯化鈀(ii)(43mg,0.062mmol)。將混合物在室溫下攪拌過夜。用水(50ml)終止反應(yīng)并用etoac(3×50ml)萃取。將有機(jī)萃取液合并；用鹽水(50ml)洗滌；收集有機(jī)層；用硫酸鎂干燥；過濾；收集濾液并減壓濃縮。將得到的粗品物質(zhì)進(jìn)行硅膠快速色譜，用0％至50％etoac的己烷溶液梯度洗脫，得到淡黃色固體狀標(biāo)題化合物(0.57g,49％)。esms(m/z)(³⁵cl/³⁷cl)400/402(m+na)⁺。

制備例21

2-(2-(反式2-((叔丁氧基羰基)氨基)環(huán)戊基)乙基)-4-氯苯甲酸甲酯

將10％鈀碳(0.40g,0.38mmol)加入到2-((反式2-((叔丁氧基羰基)氨基)環(huán)戊基)乙炔基)-4-氯苯甲酸甲酯(0.57g,1.51mmol)的etoac(20ml)溶液中。將溶液用氫氣吹掃并在氫氣氛下攪拌1.5小時(shí)。將反應(yīng)混合物用硅藻土過濾。將濾液減壓濃縮得到白色固體狀標(biāo)題化合物，¹hnmr顯示純度約為90％(0.56g,87％)。esms(m/z)(³⁵cl/³⁷cl)404/406(m+na)⁺。

制備例22

2-(2-((1s,2s)-2-氨基環(huán)戊基)乙基)-4-氯苯甲酸甲酯鹽酸鹽

將2-(2-((1s,2s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)環(huán)戊基)乙烯基)-4-氯苯甲酸酯(99g,260mmol)溶于1,4-二烷(500ml)并加入氯化氫(4.0m的1,4-二烷溶液,1.0l,4.0mol)。將混合物在室溫下攪拌過夜。將溶液用tbme(500ml)稀釋并過濾收集形成的白色沉淀。將沉淀用tbme(3×300ml)洗滌。收集并濃縮濾液得到另一部分白色固體。過濾混合物以收集白色固體并將固體用tbme(3×300ml)洗滌。合并兩批白色固體得到標(biāo)題化合物(67.4g,96％)。esms(m/z)282(m+h)⁺。

按照制備例22的方法制備表2中的下列化合物。

表2

¹將原料懸浮在二氯甲烷中然后加入4nhcl的二烷溶液。

²通過用乙醚沉淀然后過濾分離標(biāo)題化合物。

³通過濃縮粗品反應(yīng)混合物分離標(biāo)題化合物。

⁴將原料直接懸浮在4.0mhcl的二烷溶液中。

⁵在5℃下向原料中加入4nhcl的二烷溶液并使其溫?zé)嶂潦覝亍?/p>

制備例30

2-(2-((1s,2s)-2-氨基環(huán)戊基)乙基)苯甲酸甲酯

將5％pd/c(0.82g,0.4mmol)懸浮在位于parr^tm燒瓶中的甲醇(20ml)中，然后向懸浮液中加入2-(2-((1s,2s)-2-氨基環(huán)戊基)乙基)-4-氯苯甲酸甲酯鹽酸鹽(8.0g,25mmol)、甲醇(180ml)和三乙胺(14ml,99mmol)。將燒瓶密封、凈化并將燒瓶用氫氣加壓至427kpa。需要時(shí)將燒瓶用氫氣再次加壓。3小時(shí)后，將反應(yīng)混合物過濾。減壓濃縮濾液。將殘余物用水(100ml)稀釋并用二氯甲烷(3×250ml)萃取。將合并的有機(jī)層用na2so4干燥；過濾；收集濾液并將濾液濃縮得到純度為97％的白色固體狀標(biāo)題化合物(65g,26mmol,105％)。esms(m/z)248(m+h)⁺

制備例31

1-(8-甲基喹啉-2-基)哌啶-4-甲酸乙酯

將2-氯-8-甲基-喹啉(50g,281mmol)和哌啶-4-甲酸乙酯(67g,426mmol)在dmso(400ml)中混合。加入碳酸鉀(80g,579mmol)并將混合物加熱至130℃，然后在130℃下攪拌過夜。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用水(2.0l)稀釋并用etoac(2×1.5l)萃取。合并萃取液，用na2so4干燥；過濾除去固體；收集濾液并濃縮得到殘余物。將殘余物進(jìn)行硅膠柱色譜，用10/90至20/80己烷/tbme梯度洗脫得到粘稠的橙色油狀標(biāo)題化合物(75.5g,90％)。esms(m/z)299(m+h)⁺

制備例32

1-(8-甲基喹啉-2-基)哌啶-4-甲酸

將1-(8-甲基喹啉-2-基)哌啶-4-甲酸乙酯(75.5g,253mmol)、四氫呋喃(1.0l)和甲醇(500ml)混合然后向溶液中加入5m氫氧化鈉水溶液(510ml,2.55mol)。將混合物在室溫下攪拌過夜。將反應(yīng)混合物減壓濃縮；用水(500ml)稀釋并將形成的混合物冷卻至5℃。將混合物用5m鹽酸酸化至ph6–7以誘導(dǎo)沉淀。過濾分離固體。將固體用水充分洗滌。將固體在真空烘箱中于40℃干燥過夜得到灰白色固體狀標(biāo)題化合物(65g,95％)。esms(m/z)271(m+h)⁺。

制備例33

1-(4-(三氟甲氧基)苯基)哌啶-4-甲酸

將哌啶-4-甲酸(1.00g,7.74mmol)、對(duì)-溴苯基三氟甲基醚(1.87g,7.74mmol)、叔丁醇鈉(1.86g,19.4mmol)和1,4-二烷(77ml)混合。用氮?dú)獯祾?0分鐘。加入(2-二環(huán)己基膦基-2′,6′-二異丙氧基-1,1′-聯(lián)苯)[2-(2′-氨基-1,1′-聯(lián)苯)]鈀(ii)甲磺酸鹽并回流過夜。將反應(yīng)液冷卻至室溫。將混合物在水和etoac之間進(jìn)行分配。將水層用3nhcl酸化至ph4并用etoac(3×100ml)萃取。將合并的有機(jī)層用飽和nacl水溶液洗滌；用硫酸鎂干燥；過濾；收集濾液并濃縮得到標(biāo)題化合物(1.39g,4.81mmol,62％)。esms(m/z)290(m+h)⁺。

制備例34

反式4-羥基環(huán)己烷-1-甲酸甲酯

將(三甲基硅烷基)重氮甲烷(2.0m的己烷溶液,7.6ml,15mmol)在15分鐘內(nèi)分批加入到反式4-羥基環(huán)己烷-1-甲酸(2.0g,13.8mmol)的無水甲苯(30ml)和甲醇(10ml)溶液中。將混合物攪拌10分鐘然后加入乙酸(1.0mg,0.017mmol)。將混合物濃縮得到油。將油減壓干燥過夜得到標(biāo)題化合物(2.14g,97％),h¹nmr(400mhz,d6-dmso):δ4.54(d,j＝4.3hz,1h),3.54(s,3h),3.30(m,1h),2.17(m,1h),1.83–1.75(m,4h),1.30(m,2h),1.15(m,2h)。

制備例35

反式4-(芐氧基)環(huán)己烷-1-甲酸

將密封的反式4-羥基環(huán)己烷-1-甲酸甲酯(1.0g,6.3mmol)、芐基溴(0.76ml,6.4mmol)和n,n-二異丙基乙基胺(2.5ml,14mmol)的混合物于150℃加熱1小時(shí)。向形成的多相混合物中加入1nhcl(25ml)并用etoac萃取(3次)。將合并的有機(jī)相用mgso4干燥并濃縮得到橙色油。將殘余的橙色油溶于甲醇(10ml)和四氫呋喃(10ml)。加入5n氫氧化鈉(3.0ml)。將混合物攪拌過夜。將溶液用5nhcl(3.0ml)中和并濃縮至干。將得到的固體溶于etoac和水。分層，將水層用etoac萃取(2次)。將合并的有機(jī)層用mgso4干燥；過濾；收集濾液并濃縮得到固體狀標(biāo)題化合物(1.16g,4.95mmol,78％)。esms(m/z)233(m–h)。

制備例36

1-(5-氟吡啶-2-基)哌啶-4-甲酸乙酯

將哌啶4-甲酸乙酯(2.8ml,18mmol)和2,5-二氟吡啶(2.0ml,25mmol)以及吡啶(2.0ml)在容器中混合。將容器密封并于200℃加熱1小時(shí)。將混合物冷卻至室溫；將混合物用水(15ml)和etoac(50ml)稀釋并分相。將etoac層用飽和nacl水溶液(15ml)洗滌。將etoac層用na2so4干燥；過濾；收集濾液并濃縮溶液得到棕色油。將該棕色油進(jìn)行硅膠快速柱色譜，用90:10至70:30己烷:乙酸乙酯洗脫得到無色油狀標(biāo)題化合物(2.32g,9.2mmol,52％)。esms(m/z)253(m+h)⁺。

制備例37

1-(5-氟吡啶-2-基)哌啶-4-甲酸

將2.0m氫氧化鈉水溶液(12ml,24mmol)加入到1-(5-氟-2-吡啶基)哌啶-4-甲酸乙酯(2.32g,9.2mmol)的四氫呋喃(9ml)和甲醇(18ml)溶液中。將溶液在室溫下攪拌5小時(shí)。將溶液濃縮并將殘余物用5n鹽酸(4.8ml,24mmol)處理以誘導(dǎo)沉淀。將懸浮液過濾，收集白色沉淀并減壓干燥得到白色固體狀標(biāo)題化合物(1.9g,84mmol,92％)。esms(m/z)225(m+h)⁺。

制備例38

1-(對(duì)甲苯基)哌啶-4-甲酸

將1,4-二烷(60ml)用氮?dú)獯祾?0分鐘。向混合物中加入哌啶-4-甲酸(750mg,5.81mmol)、4-溴甲苯(1.0g,5.85mmol)和叔丁醇鈉(1.4g,13mmol)。將混合物再次用氮?dú)獯祾?。向混合物中加?2-二環(huán)己基膦基-2′,6′-二異丙氧基-1,1′-聯(lián)苯)[2-(2′-氨基-1,1′-聯(lián)苯)]鈀(ii)甲磺酸鹽并在氮?dú)夥障禄亓鬟^夜。將溶液在etoac和水之間進(jìn)行分配。將水層用3nhcl酸化至ph4。將水層用etoac(3×35ml)萃取。將合并的有機(jī)萃取液用飽和nacl水溶液洗滌；用硫酸鎂干燥；收集濾液并濃縮得到標(biāo)題化合物(545mg,2.49mmol,43％)。esms(m/z)220(m+h)⁺。

制備例39

1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)哌啶-4-甲酸乙酯

將哌啶4-甲酸乙酯(0.93ml,6.1mmol)加入到5-氟-2-(三氟甲基)吡啶(1.0g,6.1mmol)中。將混合物用氮?dú)獯祾?分鐘，然后用biotage^tminitiator于200℃微波加熱90分鐘。將反應(yīng)混合物通過硅膠色譜純化，用100％己烷至40％etoac的己烷溶液梯度洗脫，得到無色油狀標(biāo)題化合物(1.27g,4.2mmol,69％)。esms(m/z)303(m+h)⁺。

制備例40

1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)哌啶-4-甲酸

將1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)哌啶-4-甲酸乙酯(1.27g,4.20mmol)溶于甲醇(2ml)、四氫呋喃(10ml)和naoh水溶液(5m,1.68ml,8.40mmol)。將混合物在室溫下攪拌過夜。將混合物濃縮得到白色固體；用水(20ml)稀釋并用5nhcl調(diào)節(jié)ph至5。將溶液濃縮得到白色固體。將固體在乙醇(100ml)中打漿并過濾以除去鹽。將濾液減壓濃縮得到白色固體狀標(biāo)題化合物(1.10g,4.01mmol,95％)。esms(m/z)278(m+h)⁺。

制備例41

o1-叔丁基-o4-甲基3,3-二甲基-2,6-二氫吡啶-1,4-二甲酸酯

將乙酸鈀(ii)(4.40g,20.0mmol)、1,1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵(13.3g,22.8mmol)、3,3-二甲基-4-(三氟甲基磺酰氧基)-2,6-二氫吡啶-1-甲酸叔丁酯(72.0g,150mmol)、無水乙腈(850ml)、無水甲醇(570ml)和三乙胺(36.0ml,245mmol)加入到裝有機(jī)械攪拌器的2-lparr^tm高壓釜中。將反應(yīng)器密封；吹掃；用一氧化碳加壓至689kpa。將混合物加熱至65℃加熱2.25小時(shí)；然后將混合物冷卻至室溫；小心地將反應(yīng)容器放氣(小心！毒氣！)。減壓濃縮。將該物質(zhì)與另外5批基本上按照相同的方法以相同規(guī)模制備的物質(zhì)合并并將合并的物質(zhì)進(jìn)行快速硅膠色譜，用0％至20％tbme的己烷溶液梯度洗脫，得到純度約為83％的黃色油狀標(biāo)題化合物(260g,88％)。esms(m/z)214(m–t-bu+2h)⁺。

制備例42

o1-叔丁基-o4-甲基3,3-二甲基哌啶-1,4-二甲酸酯

將鈀(10wt％鈀碳,5.4g,5.1mmol)懸浮在甲醇(700ml)中，然后加入o1-叔丁基-o4-甲基3,3-二甲基-2,6-二氫吡啶-1,4-二甲酸酯(130g,396mmol)的甲醇(700ml)溶液。將混合物密封在容器中；然后將容器依次用氮?dú)夂蜌錃獯祾?。將容器用氫氣加壓?14kpa并在室溫下攪拌1.5小時(shí)。釋放壓力并將混合物過濾除去催化劑。將濾液與通過類似方法制備的另一反應(yīng)的濾液合并并減壓除去揮發(fā)性溶劑得到純度約為85％的黃色油狀標(biāo)題化合物(240g,95％)。esms(m/z)216(m–t-bu+2h)⁺。

制備例43

3,3-二甲基哌啶-4-甲酸甲酯鹽酸鹽

將hcl(4.0m1,4-二烷的溶液,2.0l,8.0mol)加入到o1-叔丁基-o4-甲基3,3-二甲基哌啶-1,4-二甲酸酯(240g,752mmol)的1,4-二烷(500ml)溶液中。將形成的混合物在室溫下攪拌過夜，然后減壓濃縮。將殘余物用tbme(500ml)稀釋并通過過濾分離出固體。將濾餅用tbme(2×400ml)沖洗并將固體在35℃的真空烘箱中干燥過夜得到白色固體狀標(biāo)題化合物(144g,92％)。esms(m/z)172(m+h)⁺。

制備例44

(–)-(4s)-3,3-二甲基-1-(8-甲基-2-喹啉基)哌啶-4-甲酸甲酯

將3,3-二甲基哌啶-4-甲酸甲酯鹽酸鹽(144g,693mmol)、2-氯-8-甲基喹啉(125g,704mmol)、dmso(1.4l)和k2co3(210g,1.52mol)混合。將形成的混合物于131±1℃攪拌過夜。將混合物冷卻至室溫，過濾除去固體，用水(2l)稀釋并用etoac(2×3l)萃取。將合并的有機(jī)萃取液用水(3×1.5l)洗滌，用na2so4干燥，過濾，收集濾液并減壓濃縮。將得到的粗品物質(zhì)進(jìn)行快速硅膠色譜，用25％至30％(10％tbme的dcm溶液)的己烷溶液梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物的外消旋物。將該物質(zhì)溶于甲醇(7.5l)并將溶液過濾。將濾液標(biāo)記為“溶液a”。將該物質(zhì)進(jìn)行手性sfc(chiralpakoj-h,50mm×250mm×5μm)，用15％(0.2％二甲基乙基胺的i-proh溶液)/co2作為流動(dòng)相，流速400g/min，每95秒注射5ml溶液a直至所有的物質(zhì)被消耗掉。每次注射后，收集洗脫的第一級(jí)分(tr＝2.57min，sfc方法1)并棄除第二級(jí)分(tr＝3.17min，sfc方法1)。將收集的級(jí)分與得自之前反應(yīng)的分離物合并并除去揮發(fā)性物質(zhì)得到98g3,3-二甲基哌啶-4-甲酸甲酯鹽酸鹽粗品。將該物質(zhì)用熱的乙醇(1.38l)重結(jié)晶，通過過濾分離結(jié)晶并在40℃的真空烘箱中干燥過夜得到白色結(jié)晶固體狀標(biāo)題化合物(156g,43％收率,按批次比例計(jì))。esms(m/z)313(m+h)⁺,[α]²⁰d–45°(c0.21,ch2cl2)。ee＝>99％(通過sfc方法1測(cè)定)。sfc方法1:分析在daicelchiralpakoj-h柱(100mm長(zhǎng),4.6mm內(nèi)徑,5μm粒徑)上進(jìn)行。使用的流動(dòng)相為:8％(20mmnh3的i-proh溶液)和92％壓力為100巴的co2(scf)。在35℃下進(jìn)行，流速3ml/分鐘。uv(dad)光譜采集在220nm波長(zhǎng)下進(jìn)行。

制備例45

(–)-(4s)-3,3-二甲基-1-(8-甲基-2-喹啉基)哌啶-4-甲酸

將(4s)-3,3-二甲基-1-(8-甲基-2-喹啉基)哌啶-4-甲酸甲酯(154g,493mmol)用硫酸(10％v/v的水溶液,2.31l,2.75mol)處理。將混合物在攪拌下加熱回流過夜。將混合物冷卻至室溫然后加入naoh(50wt％的水溶液)直至ph達(dá)到13。加入tbme(500ml)得到三相的混合物。從頂部到底部，將各層標(biāo)記為“a層”、“b層”和“c層”。除去c層。向a和b層中加入水(600ml)，然后將有機(jī)層置于一邊。將水層與c層混合。將c層用tbme(500ml)萃取并將有機(jī)層置于一邊。向c層中加入hcl(5.0m的水溶液)直至ph達(dá)到6.5。將c層用tbme(2×400ml)萃取。合并所有的有機(jī)萃取液；用硫酸鎂干燥；過濾；收集濾液并減壓濃縮得到白色固體狀標(biāo)題化合物，純度96％(145g,95％)。esms(m/z)299(m+h)⁺,[α]²⁰d–59.6°(c3.12,ch3oh)。

制備例46

2-(2-((1s,2s)-2-(1-(8-甲基喹啉-2-基)哌啶-4-甲酰氨基)環(huán)戊基)乙基)苯甲酸甲酯

將2-(2-((1s,2s)-2-氨基環(huán)戊基)乙基)苯甲酸甲酯(6.5g,26mmol,97％純度)和1-(8-甲基喹啉-2-基)哌啶-4-甲酸(7.8g,29mmol)溶于二氯甲烷(350ml)。將混合物冷卻至0℃并加入二異丙基乙基胺(10ml,57mmol)。加入1-丙烷膦酸酐(50wt％的etoac溶液,25ml,41.6mmol)，控制加入的速率以保持反應(yīng)的內(nèi)部溫度在0℃至4℃之間。將反應(yīng)混合物升溫至室溫過夜。將混合物小心地倒入nahco3水溶液(1.0l)中。分層并將水層用二氯甲烷(500ml)萃取。合并有機(jī)層，將合并的有機(jī)層用飽和nacl水溶液(200ml)洗滌；用na2so4干燥；過濾；收集濾液并將濾液濃縮得到殘余物。將殘余物進(jìn)行硅膠快速柱色譜，用20至29％tbme在1:1二氯甲烷和己烷的混合物中的溶液梯度洗脫。將混合的級(jí)分再次通過硅膠快速柱色譜純化，用二氯甲烷至25％tbme的二氯甲烷溶液梯度洗脫得到標(biāo)題化合物(10.8g,84％)。esms(m/z)500(m+h)⁺

制備例47

4-氟-2-(2-((1s,2s)-2-(1-(4-(三氟甲基)苯基)哌啶-4-甲酰氨基)環(huán)戊基)乙基)苯甲酸甲酯

將2-(2-((1s,2s)-2-氨基環(huán)戊基)乙基)-4-氟苯甲酸甲酯鹽酸鹽(0.15g,0.50mmol)、1-(4-(三氟甲基)苯基)哌啶-4-甲酸(0.14g,0.52mmol)和etoac(5ml)混合。加入二異丙基乙基胺(0.26ml,1.5mmol)和1-丙烷膦酸酐(50％的etoac溶液,0.51ml,0.99mmol)。將反應(yīng)液在室溫下攪拌過夜。將反應(yīng)液用飽和nahco3水溶液稀釋并攪拌30分鐘。將有機(jī)層用etoac(10ml)稀釋并分液。將有機(jī)層再次用飽和nahco3水溶液洗滌；用硫酸鎂干燥；過濾；收集濾液并濃縮得到白色固體。將殘余物進(jìn)行硅膠快速柱色譜，用10％至50％etoac的二氯甲烷溶液梯度洗脫得到標(biāo)題化合物(0.127mg,0.24mmol,49％)。esms(m/z)521(m+h)⁺。

制備例48

4-甲基-2-(2-((1s,2s)-2-(1-(4-(三氟甲基)苯基)哌啶-4-甲酰氨基)環(huán)戊基)乙基)苯甲酸甲酯

基本上按照制備例48描述的方法制備標(biāo)題化合物。esms(m/z)(m+1)⁺517

制備例49

4-氯-2-(2-((1s,2s)-2-(1-(對(duì)甲苯基)哌啶-4-甲酰氨基)環(huán)戊基)乙基)苯甲酸甲酯

將2-(2-((1s,2s)-2-氨基環(huán)戊基)乙基)-4-氯苯甲酸酯鹽酸鹽(100mg,0.314mmol)、1-(對(duì)甲苯基)哌啶-4-甲酸(75mg,0.342mmol)和1-羥基苯并三唑水合物(12mg,0.087mmol)在二氯甲烷(5ml)和三乙胺(0.150ml,1.08mmol)中混合得到漿液。加入edci(100mg,0.52mmol)。將混合物在室溫下攪拌過夜。將混合物進(jìn)行硅膠快速柱色譜，用50/50etoac/硅烷洗脫得到白色固體狀標(biāo)題化合物(95mg,0.196mmol,62％)。esms(m/z)483(m+h)⁺。

基本上按照以上關(guān)于制備例49所述的方法制備表3中的下列化合物。

表3

¹色譜法，用95:5至50:50己烷:乙酸乙酯梯度洗脫

²色譜法，用100:0至50:50己烷:乙酸乙酯梯度洗脫

制備例54

2-(2-((1s,2s)-2-(1-(4-(三氟甲基)苯基)哌啶-4-甲酰氨基)環(huán)戊基)乙基)苯甲酸甲酯

將2-(2-((1s,2s)-2-氨基環(huán)戊基)乙基)苯甲酸甲酯鹽酸鹽(0.25g,0.88mmol)、1-(4-(三氟甲基)苯基)哌啶-4-甲酸(0.25g,0.88mmol)和二甲基甲酰胺(4.4ml)混合。加入bop(0.52g,1.1mmol)和三乙胺(0.43ml,3.1mmol)。將混合物在室溫下攪拌過夜。用水稀釋并用etoac萃取(3×20ml)。將合并的有機(jī)相用飽和氯化鈉水溶液洗滌并用硫酸鎂干燥；過濾；收集濾液并減壓濃縮。將濃縮的殘余物進(jìn)行硅膠快速柱色譜，用10/90至75/25etoac/己烷梯度洗脫得到標(biāo)題化合物(0.3g,70％)。esms(m/z)503(m+h)⁺。

基本上按照以上關(guān)于制備例54所述的方法制備表4中的下列化合物。

表4

¹進(jìn)行色譜，用0:100至25:75二氯甲烷:etoac梯度洗脫。

²用二異丙基乙基胺作為堿。

³進(jìn)行色譜，用10:90至20:80己烷:etoac梯度洗脫。

⁴進(jìn)行色譜，用10:90至0:100己烷:etoac梯度洗脫。

⁵進(jìn)行色譜，用0:100至50:50二氯甲烷:乙酸乙酯梯度洗脫。

⁶進(jìn)行色譜，用10:90至0:100己烷:etoac梯度洗脫。

在硅膠快速柱色譜后，將殘余物通過反相色譜純化，用乙腈和含有0.1％甲酸的水洗脫得到標(biāo)題化合物。

⁷將粗品殘余物通過柱色譜純化兩次，用100:0至85:15二氯甲烷:乙酸乙酯作為洗脫劑。將得到的殘余物再次通過柱色譜純化，用100:0至10:90二氯甲烷:etoac梯度洗脫。

制備例62

((1r,2s)-2-氨基環(huán)戊烷)甲醇鹽酸鹽

將((1s,2r)-2-(羥基甲基)環(huán)戊基)氨基甲酸叔丁酯(1.15g,5.34mmol)和hcl(4.0m的二烷溶液,62ml)混合。將溶液在室溫下攪拌2小時(shí)然后減壓濃縮得到白色固體狀標(biāo)題化合物(802mg,5.29mmol)。¹hnmr(400mhz,d6-dmso)δ3.00(dd,j＝11.2,4.9hz,1h),2.94–2.84(m,2h),1.61–1.51(m,1h),1.49–1.29(m,1h),1.14–0.72(m,5h)。

制備例63

n-((1s,2r)-2-(羥基甲基)環(huán)戊基)-1-(4-(三氟甲基)苯基)哌啶-4-甲酰胺

將((1r,2s)-2-氨基環(huán)戊基)甲醇鹽酸鹽(200mg,1.3mmol)溶于二甲基甲酰胺(6.6ml)并加入1-(4-(三氟甲基)苯基)哌啶-4-甲酸(360mg,1.32mmol)、二異丙基乙基胺(1.38ml,7.91mmol)和o-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-n,n,n’,n’-四甲基脲陽離子六氟磷酸鹽(601mg,1.58mmol)。將混合物在室溫下攪拌過夜。將混合物用etoac稀釋并將形成的混合物依次用1nhcl水溶液、飽和nahco3水溶液、5％licl水溶液和飽和nacl水溶液洗滌。將有機(jī)層用na2so4干燥；過濾，收集濾液并減壓濃縮得到黃褐色固體狀標(biāo)題化合物(600mg,98％)。esms(m/z)371(m+h)⁺。

實(shí)施例1

2-(2-((1s,2s)-2-(1-(8-甲基喹啉-2-基)哌啶-4-甲酰氨基)環(huán)戊基)乙基)苯甲酸

將2-(2-((1s,2s)-2-(1-(8-甲基喹啉-2-基)哌啶-4-甲酰氨基)環(huán)戊基)乙基)苯甲酸甲酯(10.7g,21.4mmol)溶于四氫呋喃(150ml)和甲醇(100ml)。向混合物中滴加5m氫氧化鈉水溶液(45ml,225mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。將反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?5℃并繼續(xù)攪拌8小時(shí)。將混合物冷卻至室溫并將其減壓濃縮。將殘余物用水(500ml)稀釋并將得到的混合物用1nhcl酸化至ph6–7。過濾分離沉淀出的固體并將濾餅用水充分洗滌。將固體干燥得到灰白色固體狀標(biāo)題化合物(10g,96％)。esms(m/z)486(m+h)⁺

實(shí)施例2

2-(2-((1s,2s)-2-(1-(4-(三氟甲氧基)苯基)哌啶-4-甲酰氨基)環(huán)戊基)乙基)苯甲酸

將2n氫氧化鈉水溶液(0.70ml,1.4mmol)加入到2-(2-((1s,2s)-2-(1-(4-(三氟甲氧基)苯基)哌啶-4-甲酰氨基)環(huán)戊基)乙基)苯甲酸甲酯(135mg,0.260mmol)的甲醇(2.0ml)和四氫呋喃(2.0ml)溶液中。將混合物加熱至70℃。3小時(shí)后，加入2n氫氧化鈉水溶液(0.70ml,1.4mmol)。將混合物于70℃繼續(xù)加熱1小時(shí)。加入5n鹽酸(0.56ml)。將混合物濃縮至干。將固體用少量甲醇研磨然后加入水。真空過濾收集沉淀得到白色固體狀標(biāo)題化合物，lcms顯示純度為93％(114mg,0.20mmol,81％)。esms(m/z)505(m+h)⁺。

實(shí)施例3

2-(2-((1s,2s)-2-(1-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)哌啶-4-甲酰氨基)環(huán)戊基)乙基)苯甲酸

將5n氫氧化鈉水溶液(2ml,10mmol)加入到2-(2-((1s,2s)-2-(1-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)哌啶-4-甲酰氨基)環(huán)戊基)乙基)苯甲酸甲酯(700mg,1.39mmol)的甲醇(10ml)和四氫呋喃(10ml)溶液中。將混合物加熱至70℃。3小時(shí)后，加入5n氫氧化鈉水溶液(2ml,10mmol)。將反應(yīng)液于70℃繼續(xù)加熱2小時(shí)。加入5nhcl(4ml)并濃縮至干。將固體用少量甲醇研磨然后加入水。真空過濾收集沉淀得到白色固體狀標(biāo)題化合物(551mg,1.13mmol,82％)。esms(m/z)490(m+h)⁺.

實(shí)施例4

2-(2-((1s,2s)-2-(1-(4-(三氟甲基)苯基)哌啶-4-甲酰氨基)環(huán)戊基)乙基)苯甲酸

將2-(2-((1s,2s)-2-(1-(4-(三氟甲基)苯基)哌啶-4-甲酰氨基)環(huán)戊基)乙基)苯甲酸甲酯(0.3g,0.6mmol)溶于甲醇(3ml)和四氫呋喃(10ml)。加入氫氧化鋰(0.5m的水溶液,5ml,2mmol)。將混合物加熱至45℃過夜。將混合物冷卻至室溫并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上除去揮發(fā)性物質(zhì)。將溶液用5nhcl酸化以誘導(dǎo)沉淀。收集沉淀；用水洗滌并真空干燥得到標(biāo)題化合物(0.31g,0.63mmol,100％)。esms(m/z)489(m+h)⁺。

實(shí)施例5

2-(2-((1s,2s)-2-((反式)-4-(芐氧基)環(huán)己烷-1-甲酰氨基)環(huán)戊基)乙基)-4-氯苯甲酸

將4n氫氧化鈉水溶液(2.0ml)加入到2-(2-((1s,2s)-2-((反式)-4-(芐氧基)環(huán)己烷-1-甲酰氨基)環(huán)戊基)乙基)-4-氯苯甲酸甲酯(518mg,1.04mmol)的甲醇(5ml)和四氫呋喃(4ml)溶液中。將混合物加熱至70℃。3小時(shí)后，加入5n鹽酸(2ml)并濃縮至干。將固體用少量甲醇研磨然后加入水。過濾收集固體得到白色固體狀標(biāo)題化合物(425mg,0.878mmol,84％)。esms(m/z)(³⁵cl/³⁷cl)484/486(m+h)⁺。

實(shí)施例6

4-氯-2-(2-((1s,2s)-2-(1-(5-氟吡啶-2-基)哌啶-4-甲酰氨基)環(huán)戊基)乙基)苯甲酸

將2.0m氫氧化鈉水溶液(0.4ml,0.8mmol)加入到4-氯-2-(2-((1s,2s)-2-(1-(5-氟吡啶-2-基)哌啶-4-甲酰氨基)環(huán)戊基)乙基)苯甲酸甲酯(80mg,0.16mmol)的四氫呋喃(1.0ml)和甲醇(2ml)溶液中。將混合物加熱至52℃6.5小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻并減壓濃縮。將混合物用冰處理并用1.0nhcl酸化至ph4。將混合物用飽和nacl水溶液(15ml)稀釋并用etoac(20ml)萃取。將有機(jī)萃取液用na2so4干燥；過濾；收集濾液并減壓濃縮。將形成的膠狀物用最少量的乙醚研磨并過濾分離形成的白色固體得到標(biāo)題化合物(77mg,0.16mmol,100％)。esms(m/z)(³⁵cl/³⁷cl)474/476(m+h)⁺。

實(shí)施例7

4-氯-2-(2-((1s,2s)-2-(1-(對(duì)甲苯基)哌啶-4-甲酰氨基)環(huán)戊基)乙基)苯甲酸

將5.0n氫氧化鈉水溶液(1.0ml,5.0mmol)加入到4-氯-2-(2-((1s,2s)-2-(1-(對(duì)甲苯基)哌啶-4-甲酰氨基)環(huán)戊基)乙基)苯甲酸甲酯(95mg,0.196mmol)的甲醇(2ml)和四氫呋喃(2ml)溶液中。將混合物于70℃加熱4小時(shí)。加入5n鹽酸(1.0ml)并除去揮發(fā)性物質(zhì)得到固體。將固體用少量甲醇研磨然后加入水。過濾收集米色固體得到標(biāo)題化合物(60mg,0.13mmol,65％)。esms(m/z)(³⁵cl/³⁷cl)469/471(m+h)⁺。

實(shí)施例8

4-氯-2-(2-((1s,2s)-2-(1-(4-(三氟甲基)苯基)哌啶-4-甲酰氨基)環(huán)戊基)乙基)苯甲酸

將4-氯-2-(2-((1s,2s)-2-(1-(4-(三氟甲基)苯基)哌啶-4-甲酰氨基)環(huán)戊基)乙基)苯甲酸甲酯(1.4g,2.61mmol)溶于四氫呋喃(26ml)。加入lioh水溶液(0.5m,21ml)。將混合物加熱至110℃加熱2小時(shí)然后于100℃加熱3.5小時(shí)。將混合物冷卻至室溫并攪拌過夜。將混合物于100℃攪拌直至所有的原料被消耗掉(約5小時(shí))。將反應(yīng)液冷卻至室溫并將溶劑蒸發(fā)。將殘余物用5nhcl水溶液酸化至ph5。收集形成的白色沉淀；用水洗滌并真空干燥得到標(biāo)題化合物(1.34g,2.56mmol,98％)。esms(m/z)(³⁵cl/³⁷cl)523/525(m+h)⁺。

實(shí)施例9

4-氯-2-(2-((1s,2s)-2-(1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)哌啶-4-甲酰氨基)環(huán)戊基)乙基)苯甲酸

將naoh水溶液(1.0m,0.5ml)加入到4-氯-2-(2-((1s,2s)-2-(1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)哌啶-4-甲酰氨基)環(huán)戊基)乙基)苯甲酸甲酯(58mg,0.11mmol)的甲醇(3.0ml)溶液中。將混合物加熱至50℃并攪拌過夜。加入鹽酸(5m,0.5ml)。減壓濃縮。用甲苯共沸除去水。將殘余物懸浮在20％四氫呋喃的etoac溶液(10ml)中；用飽和nacl水溶液(10ml)洗滌；用硫酸鎂干燥；過濾；收集濾液并減壓濃縮得到標(biāo)題化合物(51mg,0.097mmol,90％)。esms(m/z)(³⁵cl/³⁷cl)524/526(m+h)⁺。

實(shí)施例10

4-氯-2-(2-((1s,2s)-2-((s)-3,3-二甲基-1-(8-甲基喹啉-2-基)哌啶-4-甲酰氨基)環(huán)戊基)乙基)苯甲酸

將4-氯-2-(2-((1s,2s)-2-((s)-3,3-二甲基-1-(8-甲基喹啉-2-基)哌啶-4-甲酰氨基)環(huán)戊基)乙基)苯甲酸甲酯(284mg,0.505mmol)溶于甲醇(3ml)和四氫呋喃(3ml)。加入lioh水溶液(0.5m,5ml)。將混合物于50℃加熱過夜。將溶液濃縮。將含水混合物用1nhcl水溶液酸化至ph1。將混合物用水(20ml)稀釋并攪拌30分鐘。通過過濾分離淺黃色的沉淀并使空氣通過濾餅以對(duì)其進(jìn)行干燥，得到標(biāo)題化合物(174mg,0.318mmol,63％)。esms(m/z)(³⁵cl/³⁷cl)548/550(m+h)⁺。¹hnmr(400.13mhz,d-6-dmso)δ7.91(d,j＝9.2hz,1h),7.70-7.68(m,2h),7.47(d,j＝8.0hz,1h),7.35(d,j＝9.11h),7.23-7.17(m,3h),7.05(t,j＝7.5hz,1h),4.63-4.60(m,1h),4.23-4.20(m,1h),4.09(d,j＝13.4hz,1h),3.03-3.00(m,2h),2.83-2.82(m,2h),2.39-2.27(m,1h),1.89-1.87(m,11h),0.96(s,3h),0.91(s,3h)。

實(shí)施例11

2-(2-((1s,2s)-2-(1-(4-(三氟甲基)苯基)哌啶-4-甲酰氨基)環(huán)戊基)乙基)煙酸

將2-(2-((1s,2s)-2-(1-(4-(三氟甲基)苯基)哌啶-4-甲酰氨基)環(huán)戊基)乙基)煙酸乙酯(146mg,0.282mmol)溶于四氫呋喃(3ml)和甲醇(1ml)。加入0.5m氫氧化鋰水溶液(1.5ml,0.75mmol)。將容器密封并將密封的容器于45℃加熱過夜。將混合物冷卻至室溫并濃縮除去揮發(fā)性有機(jī)物。將混合物用1n鹽酸酸化至ph3并通過過濾收集形成的白色沉淀。將濾液進(jìn)一步酸化至ph1得到黃色膠狀物。合并所有的溶液和分離物并濃縮。將殘余物進(jìn)行反相柱色譜，用10％至55％乙腈和含有10mm(nh4)2co3和5％甲醇的水梯度洗脫，得到白色固體狀標(biāo)題化合物(50mg,0.10mmol,36％)。esms(m/z)490(m+h)⁺。

實(shí)施例12

4-甲基-2-(2-((1s,2s)-2-(1-(4-(三氟甲基)苯基)哌啶-4-甲酰氨基)環(huán)戊基)乙基)苯甲酸

將4-甲基-2-(2-((1s,2s)-2-(1-(4-(三氟甲基)苯基)哌啶-4-甲酰氨基)環(huán)戊基)乙基)苯甲酸乙酯(369mg,0.714mmol)溶于四氫呋喃(30ml)和甲醇(10ml)。加入氫氧化鋰水溶液(0.5m,15ml)。將混合物于45℃加熱并攪拌過夜。22小時(shí)后，將溫度升高至70℃達(dá)1小時(shí)，然后將混合物于4℃下保存直至重新開始加熱。將反應(yīng)液于55℃加熱5小時(shí)。將混合物濃縮，加入5nhcl將混合物酸化至ph1。攪拌20分鐘。過濾分離白色沉淀。將固體在40℃的真空室中干燥得到標(biāo)題化合物(338mg,0.672mmol,94％)。esms(m/z)503(m+h)⁺。

實(shí)施例13

4-氟-2-(2-((1s,2s)-2-(1-(4-(三氟甲基)苯基)哌啶-4-甲酰氨基)環(huán)戊基)乙基)苯甲酸

將4-氟-2-(2-((1s,2s)-2-(1-(4-(三氟甲基)苯基)哌啶-4-甲酰氨基)環(huán)戊基)乙基)苯甲酸甲酯(127mg,0.244mmol)溶于四氫呋喃(3ml)、甲醇(1ml)和氫氧化鋰水溶液(0.5m,1.5ml)。將溶液于45℃加熱過夜。將溶液部分濃縮以除去有機(jī)物，然后用hcl將水溶液調(diào)至ph1。通過過濾分離白色沉淀并使空氣通過沉淀以對(duì)其進(jìn)行干燥，得到標(biāo)題化合物(116mg,0.229mmol,94％)。esms(m/z)507(m+h)⁺。

實(shí)施例14

4-氯-2-((((1s,2s)-2-(1-(4-(三氟甲基)苯基)哌啶-4-甲酰氨基)環(huán)戊基)甲基)氨基)苯甲酸

將4-氯-2-((((1s,2s)-2-(1-(4-(三氟甲基)苯基)哌啶-4-甲酰氨基)環(huán)戊基)甲基)氨基)苯甲酸甲酯(0.25g,0.46mmol)溶于四氫呋喃(10ml)和甲醇(1ml)。加入5.0m氫氧化鈉水溶液(0.19ml,0.93mmol)。將容器密封并在biotageinitiator^tm中于100℃微波加熱30分鐘。將混合物用水(50ml)稀釋并加入按照類似方式制備的第二批4-氯-2-((((1s,2s)-2-(1-(4-(三氟甲基)苯基)哌啶-4-甲酰氨基)環(huán)戊基)甲基)氨基)苯甲酸(0.29g,0.52mmol)。向劇烈攪拌的溶液中加入1.0n鹽酸直至ph達(dá)到7。過濾分離沉淀得到白色固體狀標(biāo)題化合物(0.50g,0.95mmol,84％總收率)。esms(m/z)(³⁵cl/³⁷cl)537/539(m+h)⁺。

實(shí)施例15

4-甲基-2-(((1r,2s)-2-(1-(4-(三氟甲基)苯基)哌啶-4-甲酰氨基)環(huán)戊基)甲氧基)苯甲酸

將2-氟-4-甲基苯甲酸(50mg,0.32mmol)和n-((1s,2r)-2-(羥基甲基)環(huán)戊基)-1-(4-(三氟甲基)苯基)哌啶-4-甲酰胺(141mg,0.324mmol)以及四氫呋喃(3.24ml)混合。分批加入氫化鈉(60％礦物油分散液,97mg,2.43mmol)。將混合物加熱回流過夜。將混合物冷卻至室溫。用etoac稀釋并將有機(jī)相和水相分離。將有機(jī)相用na2so4干燥；過濾；收集濾液并減壓濃縮。將殘余物進(jìn)行反相快色柱色譜，用10％至100％乙腈的水溶液洗脫。收集所需的級(jí)分。除去溶劑并將得到的殘余物于50℃下真空干燥得到淺黃色固體狀標(biāo)題化合物(59.4mg,0.117mmol,36％)。esms(m/z)505(m+h)⁺。

基本上按照以上實(shí)施例15所述的方法制備表5中的下列化合物。

表5

實(shí)施例18

4-氯-2-[[(1s,2s)-2-[[1-[3-(三氟甲基)苯基]哌啶-4-羰基]氨基]環(huán)己基]甲基氨基]苯甲酸

將4-氯-2-[[(1s,2s)-2-[[1-[3-(三氟甲基)苯基]哌啶-4-羰基]氨基]環(huán)己基]甲基氨基]苯甲酸甲酯(0.046g,0.083mmol)溶于四氫呋喃(2ml)和甲醇(1ml)。加入5n氫氧化鈉的水溶液(1.00ml,5.00mmol)。攪拌過夜。將混合物用1n氯化氫水溶液酸化至ph7。將混合物減壓濃縮至約～3ml體積。過濾收集固體并將固體用水洗滌。將固體于50℃下真空干燥過夜得到白色固體狀標(biāo)題化合物(0.032g,71％)。esms(m/z)(³⁵cl/³⁷cl)538/540(m+h)⁺。

實(shí)施例19

(±)-4-氯-2-(2-(反式-2-(1-(4-(三氟甲基)苯基)哌啶-4-甲酰氨基)環(huán)戊基)乙基)苯甲酸

將4-氯-2-(2-(反式-2-(1-(4-(三氟甲基)苯基)哌啶-4-甲酰氨基)環(huán)戊基)乙基)苯甲酸甲酯(0.046g,0.085mmol)溶于四氫呋喃(2ml)和meoh(0.5ml)。加入5m氫氧化鈉水溶液(0.034ml,0.17mmol)。將混合物在室溫下攪拌過夜。用水(5ml)稀釋并通過滴加0.1mhcl水溶液將ph調(diào)至4。將水層用etoac萃取(3×10ml)。將有機(jī)萃取液合并；用鹽水洗滌(25ml)；用硫酸鎂干燥；過濾；收集濾液并減壓濃縮得到白色固體狀標(biāo)題化合物(0.041g,89％)。esms(m/z)(³⁵cl/³⁷cl)523/525(m+h)⁺。

生物學(xué)試驗(yàn)

人mpges-1酶抑制試驗(yàn)

將人mpges-1(invitrogen^tm(目錄號(hào)97002rg,克隆id6374722))亞克隆至pcdna3.1并在hek-293e細(xì)胞中瞬時(shí)表達(dá)。根據(jù)公布的方法從細(xì)胞沉淀制備微粒體(oullet等人,purificationandcharacterizationofrecombinantmicrosomalprostaglandinesynthase-1,proteinexpressionandpurification,26pp489-495(2002)；和thoren等人,humanmicrosomalprostanglandinesynthase-1,j.biolchem.278(25)pp22199-22209(2003))。簡(jiǎn)而言之，向細(xì)胞沉淀中加入勻漿緩沖液(15mmtris-hcl,ph8.0；0.25m蔗糖；0.1mm乙二胺四乙酸(edta)；1mm谷胱甘肽)并在冰上超聲處理5×30秒。將勻漿于4℃以5,000×g離心10分鐘。將上清液潷析并加載到beckman管中，于4℃以150,000×g離心90分鐘。通過傾析棄除上清液部分并將沉積物重新懸浮在試驗(yàn)緩沖液(10mm磷酸鈉，ph7.0；10％甘油；2.5mm谷胱甘肽；completeproteaseinhibitorcocktail^tm(roche))中。蛋白質(zhì)濃度用piercecoomassieplus^tm試劑測(cè)定。

對(duì)于酶試驗(yàn)，將微粒體用試驗(yàn)緩沖液稀釋并將所得到的溶液以14μl/孔添加到384孔試驗(yàn)板的孔中。在tecan_mc384^tm上生成化合物稀釋板(nunccat#249944)并以4μl/孔添加到試驗(yàn)板。將前列腺素h2(pgh2)在臨使用前用試驗(yàn)緩沖液稀釋并以14μl/孔添加到試驗(yàn)板。終濃度為6.52μg/ml微粒體和1.67μmpgh2。在室溫下溫育2.5分鐘后，加入2.5μl/孔1mg/mlsncl2在0.5nhcl中的溶液停止反應(yīng)。將5μl停止了的反應(yīng)液轉(zhuǎn)移到含有45μl0.1％甲酸的384孔中并將板在–80℃存放。將板運(yùn)到agilenttechnologies(以前的biociuslifesciences(wakefield,ma01880))進(jìn)行pge2的標(biāo)準(zhǔn)lc/ms分析。使用數(shù)據(jù)來計(jì)算ic50(μm)。實(shí)施例的化合物抑制人mpges-1的ic50μm值小于100nm。該結(jié)果表明，實(shí)施例1的化合物在分離的酶制劑中是mpges-1酶的強(qiáng)效抑制劑。

測(cè)量類花生酸選擇性的細(xì)胞試驗(yàn)

人上皮性肺癌細(xì)胞系a549得自atcc(ccl-185)并在標(biāo)準(zhǔn)的5％co2潮濕氣氛中于37℃下維持在細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基(kaighn’sf12細(xì)胞培養(yǎng)基+10％胎牛血清(fbs))中。細(xì)胞每周以1:3傳代兩次。

試驗(yàn)中，通過用磷酸鹽緩沖鹽水(pbs)洗滌一次，然后用胰蛋白酶-edta洗滌一次從燒瓶中收獲細(xì)胞。在37℃下3–5分鐘后，將細(xì)胞懸浮在細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基中并在25℃下以2000rpm離心5分鐘。將上清液吸出，將細(xì)胞團(tuán)重新懸浮在細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基中。通過將細(xì)胞的等分試樣在pbs和臺(tái)盼藍(lán)中稀釋并將其在血細(xì)胞計(jì)數(shù)器上計(jì)數(shù)來確定細(xì)胞數(shù)量。在處理前24小時(shí)，將細(xì)胞以40000/孔在96孔falcon板上鋪板。將化合物用dmso在screenmates管中稀釋至最終濃度的100倍。從細(xì)胞中除去培養(yǎng)基并加入新鮮的培養(yǎng)基(90μl/孔)。將化合物以1μl/孔進(jìn)行添加，n＝2，每種化合物7個(gè)濃度。將細(xì)胞用化合物在37℃、5％co2下預(yù)處理30分鐘。通過加入在細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基中稀釋至10倍終濃度的重組人白介素1β(rhil-1β)誘導(dǎo)前列腺素e2生成。加入10μl/孔的等分試樣以達(dá)到0.1ng/ml的最終rhil-1β濃度。處理過程約為18小時(shí)。從v形底聚丙烯板中除去條件培養(yǎng)基。通過特異性酶免疫分析(eia)，根據(jù)制造商的協(xié)議(cayman)測(cè)定條件培養(yǎng)基中pge2和前列腺素i2(pgi2)的水平。簡(jiǎn)而言之，將條件培養(yǎng)基(1μl)加入涂有捕獲抗體并含有制造商提供的eia緩沖液(49μl)的96孔板的各孔中。將示蹤劑用eia緩沖液(50μl)稀釋。將檢測(cè)抗體用eia緩沖液(50μl)稀釋。將板用粘性密封膜覆蓋并在室溫下在100rpm的定軌搖床上溫育1小時(shí)。將洗滌緩沖液在millipore純化水中稀釋并用板洗滌器以5×350μl/孔洗滌板。將底物(ellman試劑)用millipore純化水稀釋然后以200μl/孔加入板中。在100rpm的定軌搖床上在室溫下大約90-120分鐘后，將板在板閱讀器上在a412讀數(shù)。用pge2的標(biāo)準(zhǔn)曲線校準(zhǔn)樣品。在該試驗(yàn)中，實(shí)施例1的化合物抑制pge2形成的ic50為0.0053μm。

人全血試驗(yàn)

將來自正常獻(xiàn)血者的血液收集在含有肝素鈉的真空采血管中。所選擇的獻(xiàn)血者確認(rèn)他們?cè)讷I(xiàn)血前的兩周內(nèi)沒有服用過非甾體抗炎藥、阿司匹林、或糖皮質(zhì)激素。將每個(gè)獻(xiàn)血者的所有采血管匯集于250毫升錐形離心管并以436.5μl/孔分布在深孔聚丙烯板中。將化合物用dmso稀釋至100倍的終濃度并以4.5μl/孔一式兩份或一式三份地添加以產(chǎn)生7個(gè)點(diǎn)的曲線。將血用化合物在37℃、5％co2的潮濕氣氛中預(yù)處理，用microclimeenvironmentalmicroplate蓋覆蓋，30分鐘后，加入9μl/孔5mg/ml脂多糖(lps,sigma,血清型0111:b4)在1mg/mlbsa/pbs中的溶液達(dá)到100μg/ml的lps終濃度。將板在37℃、5％co2的潮濕氣氛中溫育20-24小時(shí)。將板用鋁箔蓋緊密密封并在冰上冷凍約1小時(shí)。然后將板在eppendorf5810r離心機(jī)中在4℃下以1800×g離心10分鐘。用帶有無菌過濾尖頭的raininl200從細(xì)胞層分出血漿并轉(zhuǎn)移到v形底聚丙烯板中。將一百微升定量轉(zhuǎn)移到costar集群管塊中并加入400μl/孔的甲醇停止試劑和內(nèi)標(biāo)物d4-pge2、d4-pgf2α和d4-txa2β。將樣品渦旋5分鐘，放置在–20℃至少一個(gè)小時(shí)。將樣品在eppendorf5810r中以4000rpm離心10分鐘。

用watershlb30mg/床96孔板在真空歧管上進(jìn)行固相提?。翰襟E1，將矩陣用甲醇(1ml)洗滌，然后用0.1％的甲酸水溶液(1ml)洗滌；步驟2，將400μl樣品與0.1％甲酸水溶液(900μl)一起上樣并使其結(jié)合5分鐘；步驟3，將矩陣用0.1％甲酸水溶液(600μl)洗滌，然后用80/20水/甲醇(600μl)洗滌；步驟4，將產(chǎn)物用2-500μl體積的乙酸乙酯洗脫；步驟5，將樣品在氮?dú)夥障赂稍锊⒃诤?.1％甲酸的75/25水/乙腈(50μl)中復(fù)溶。將產(chǎn)品通過lc/ms/ms進(jìn)行分析。在該試驗(yàn)中，實(shí)施例1的化合物以0.0059±0.0034的ic50抑制pge2的形成，n＝6，>95％置信限。該結(jié)果表明，實(shí)施例1的化合物在人全血中抑制pge2的合成。