概括地講，本發(fā)明涉及用于治療由布魯頓酪氨酸激酶(btk,btk)介導(dǎo)的疾病的化合物，包括炎癥、免疫性疾病和癌癥，更具體地講，本發(fā)明涉及能夠抑制btk活性的化合物。本發(fā)明還涉及使用化合物用于在體外、原位和體內(nèi)診斷或者治療哺乳動(dòng)物細(xì)胞或相關(guān)病理狀態(tài)的方法。

背景技術(shù)：

蛋白激酶(人類酶的最大家族)包括超過(guò)500種蛋白質(zhì)。布魯頓酪氨酸激酶(btk)是酪氨酸激酶tec家族的一員，是早期b-細(xì)胞發(fā)育以及成熟b-細(xì)胞活化、信號(hào)傳導(dǎo)和存活的調(diào)節(jié)者(t.hunter,cell198750:823－829)。

通過(guò)b-細(xì)胞受體(bcr)的b-細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)可能導(dǎo)致廣泛的生物學(xué)輸出，這反過(guò)來(lái)又依賴于b-細(xì)胞的發(fā)育階段。bcr信號(hào)的幅度和持續(xù)時(shí)間必須精確調(diào)節(jié)。異常的bcr-介導(dǎo)的信號(hào)可能導(dǎo)致失調(diào)的b-細(xì)胞活化和/或?qū)е露喾N自身免疫性和/或炎性疾病的病原性自身抗體的形成。人類btk突變導(dǎo)致與x相關(guān)的血中丙種球蛋白缺乏(xla)。此疾病與下列有關(guān)：b細(xì)胞的成熟受損，免疫球蛋白的產(chǎn)生降低，t細(xì)胞非依賴性免疫應(yīng)答受損和相應(yīng)于bcr刺激的持續(xù)鈣信號(hào)的顯著衰減。在過(guò)敏性疾病和/或自身免疫性疾病和/或炎性疾病中btk的作用的證據(jù)已經(jīng)在btk缺陷型小鼠模型中確立。例如，在系統(tǒng)性紅斑狼瘡(sle)的標(biāo)準(zhǔn)鼠科臨床前模型中，已顯示btk缺乏導(dǎo)致疾病惡化的顯著改善。另外，btk缺乏小鼠對(duì)膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎的發(fā)病也具有抗性，并且不容易患葡萄球菌誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎。大量的證據(jù)支持在自身免疫性和/或炎性疾病的發(fā)病機(jī)制中b細(xì)胞和體液免疫系統(tǒng)發(fā)揮作用。研發(fā)的用于消耗b細(xì)胞的蛋白類療法(例如genentech/biogenidec)代表了一種治療多種自身免疫和/或炎性疾病的方法。鑒于btk在b-細(xì)胞活化中的作用，btk的抑制劑可以用作b-細(xì)胞疾病和b-細(xì)胞介導(dǎo)的病原性活性(例如自身抗體的產(chǎn)生)的抑制劑。btk還可以在破骨細(xì)胞、肥大細(xì)胞和單核細(xì)胞中表達(dá)，并且已經(jīng)被證明對(duì)這些細(xì)胞的功能是重要的。例如，小鼠btk缺乏與受損的ige介導(dǎo)的肥大細(xì)胞活化(tnf-α和其它炎性細(xì)胞因子的釋放顯著降低)有關(guān)，人btk缺乏與由活化的單核細(xì)胞導(dǎo)致的tnf-α的產(chǎn)生的顯著降低相關(guān)。

因此，btk活性的抑制可以用于治療過(guò)敏性疾病和/或自身免疫性疾病和/或炎性疾病，例如：sle、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(whang等(2014)drugdiscoverytoday，印刷中(inpress)；kim等(2011)bioorganic&med.chem.letters21:6258－6263)、多脈管炎、原發(fā)性血小板減少性紫癜(itp)、重癥肌無(wú)力、過(guò)敏性鼻炎和哮喘(dipaolo等(2011)naturechem.biol.7(1):41－50；liu(2011)drugmetab.anddisposition39(10):1840－1849；liu等(2011)jour.ofpharm.andexper.ther.338(1):154－163；lou等(2012)j.med.chem.55(10):4539－4550；xud.等(2012)jour.pharm.andexp.ther.341(1):90－103)。此外，已經(jīng)報(bào)道btk能夠在細(xì)胞凋亡中發(fā)揮作用(islam和smithimmunol.rev.2000178:49)；因而，btk活性的抑制可以用于治療癌癥，還可以治療b細(xì)胞淋巴瘤、白血病和其它惡性血液病(us7514444；feldhahn等j.exp.med.2005201:1837)。另外，鑒于btk在破骨細(xì)胞功能中的作用，btk活性的抑制可以用于治療骨病，例如骨質(zhì)疏松癥。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

發(fā)明概述

概括地講，本發(fā)明涉及具有布魯頓酪氨酸激酶(btk)調(diào)節(jié)活性的吡唑甲酰胺化合物，其具有式i結(jié)構(gòu)：

包括立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體或其可藥用的鹽。各種取代基如本文中所定義。

本發(fā)明的一個(gè)方面為藥用組合物，其含有式i化合物和可藥用的載體、助流劑、稀釋劑或賦形劑。藥用組合物還可以含有第二種治療藥物。

本發(fā)明的另一方面為制備藥用組合物的方法，該方法包括使得式i化合物與可藥用載體的組合。

本發(fā)明包括治療疾病或病癥的方法，該方法包括給予患者治療有效量的式i化合物，所述患者患有選自下列的疾病或病癥：免疫性疾病、癌癥、心血管疾病、病毒性感染、炎癥、代謝性/內(nèi)分泌功能疾病和神經(jīng)性疾病以及由布魯頓酪氨酸激酶介導(dǎo)的疾病。

本發(fā)明包括用于治療由布魯頓酪氨酸激酶介導(dǎo)的病癥的試劑盒，其包括：a)包含式i化合物的第一種藥用組合物；和b)使用說(shuō)明書(shū)。

本發(fā)明包括用作藥物的式i化合物。

本發(fā)明包括用于治療選自下列的疾病或病癥的式i化合物：免疫性疾病、癌癥、心血管疾病、病毒性感染、炎癥、代謝性/內(nèi)分泌功能疾病和神經(jīng)性疾病以及由布魯頓酪氨酸激酶介導(dǎo)的疾病。

本發(fā)明包括在治療疾病或病癥中與其它治療藥物組合使用的式i化合物。

本發(fā)明包括式i化合物在生產(chǎn)用于治療下列疾病的藥物中的用途：免疫性疾病、癌癥、心血管疾病、病毒性感染、炎癥、代謝性/內(nèi)分泌功能疾病和神經(jīng)性疾病，其中所述藥物能夠介導(dǎo)布魯頓酪氨酸激酶。

本發(fā)明包括用于治療下列疾病的式i化合物：免疫性疾病、癌癥、心血管疾病、病毒性感染、炎癥、代謝性/內(nèi)分泌功能疾病和神經(jīng)性疾病，其中所述藥物能夠介導(dǎo)布魯頓酪氨酸激酶。

本發(fā)明包括制備式i化合物的方法。

本發(fā)明包括本文中所述的發(fā)明。

示例性實(shí)施方案的詳述

現(xiàn)在將詳細(xì)地說(shuō)明本發(fā)明的某些實(shí)施方案，其實(shí)例描述于隨附的結(jié)構(gòu)和分子式中。盡管本發(fā)明將結(jié)合所列舉的實(shí)施方案進(jìn)行描述，但是應(yīng)當(dāng)理解，它們并不應(yīng)當(dāng)將本發(fā)明限制于那些實(shí)施方案。相反，本發(fā)明意圖涵蓋所有的可選方案、修訂方案和等同方案，它們均可以包含在由權(quán)利要求所定義的本發(fā)明的范圍之內(nèi)。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以識(shí)別與本文中所述那些方法和材料類似或等同的多種方法和材料，它們可以用于實(shí)施本發(fā)明。本發(fā)明不以任何方式限定于所描述的方法和材料。在一個(gè)或多個(gè)引入的文獻(xiàn)、專利和類似文獻(xiàn)與本申請(qǐng)不同或有矛盾的情況下，包括但不限于定義的術(shù)語(yǔ)、術(shù)語(yǔ)的用法、描述的技術(shù)等，以本申請(qǐng)為準(zhǔn)。除非另有定義，本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有如本發(fā)明所屬領(lǐng)域中技術(shù)人員通常所理解的相同含義。盡管與本文中所述那些方法和材料類似或等同的方法和材料可以用于實(shí)施或測(cè)試本發(fā)明，下面描述了合適的方法和材料。本文提及的所有出版物、專利申請(qǐng)、專利和其它參考文獻(xiàn)以其全部?jī)?nèi)容引入本文作為參考。除非另有說(shuō)明，在本申請(qǐng)中使用的命名法是基于iupac系統(tǒng)命名的。

定義

當(dāng)表明取代基的數(shù)目時(shí)，術(shù)語(yǔ)“一個(gè)或多個(gè)”是指從一個(gè)取代基至最多可能的取代數(shù)目的范圍，即一個(gè)氫被取代至所有的氫被取代基取代。術(shù)語(yǔ)“取代基”表示取代母體分子上氫原子的原子或原子團(tuán)。術(shù)語(yǔ)“取代的”表示攜有一個(gè)或多個(gè)取代基的一個(gè)特定基團(tuán)。當(dāng)任何基團(tuán)可以攜有多個(gè)取代基并且提供了各種可能的取代基時(shí)，所述取代基可以獨(dú)立選擇并且不需要是相同的。術(shù)語(yǔ)“未取代的”是指指定的基團(tuán)不攜帶取代基。術(shù)語(yǔ)“任選取代的”是指指定的基團(tuán)是未取代的或者被獨(dú)立選自可能取代基的一個(gè)或多個(gè)取代基取代。當(dāng)指示取代基的數(shù)目時(shí)，術(shù)語(yǔ)“一個(gè)或多個(gè)”是指從一個(gè)取代基至最高可能數(shù)目的取代，即，取代基替換一個(gè)氫，最多替換所有的氫。當(dāng)表明取代基的數(shù)目時(shí)，

本文中使用的術(shù)語(yǔ)“烷基”是指1－12個(gè)碳原子(c1-c12)的飽和的直鏈或支鏈單價(jià)烴基團(tuán)，其中烷基可以任選被一或多個(gè)下文所述的取代基獨(dú)立取代。在另一個(gè)實(shí)施方案中，烷基為1－8個(gè)碳原子(c1-c8)，或者為1－6個(gè)碳原子(c1-c6)。烷基的示例包括但不限于甲基(me、-ch3)、乙基(et、-ch2ch3)、1-丙基(正-pr、正-丙基、-ch2ch2ch3)、2-丙基(i-pr、異-丙基、-ch(ch3)2)、1-丁基(n-bu、正-丁基、-ch2ch2ch2ch3)、2-甲基-1-丙基(i-bu、異-丁基、-ch2ch(ch3)2)、2-丁基(s-bu、仲-丁基、-ch(ch3)ch2ch3)、2-甲基-2-丙基(t-bu、叔-丁基、-c(ch3)3)、1-戊基(正-戊基、-ch2ch2ch2ch2ch3)、2-戊基(-ch(ch3)ch2ch2ch3)、3-戊基(-ch(ch2ch3)2)、2-甲基-2-丁基(-c(ch3)2ch2ch3)、3-甲基-2-丁基(-ch(ch3)ch(ch3)2)、3-甲基-1-丁基(-ch2ch2ch(ch3)2)、2-甲基-1-丁基(-ch2ch(ch3)ch2ch3)、1-己基(-ch2ch2ch2ch2ch2ch3)、2-己基(-ch(ch3)ch2ch2ch2ch3)、3-己基(-ch(ch2ch3)(ch2ch2ch3))、2-甲基-2-戊基(-c(ch3)2ch2ch2ch3)、3-甲基-2-戊基(-ch(ch3)ch(ch3)ch2ch3)、4-甲基-2-戊基(-ch(ch3)ch2ch(ch3)2)、3-甲基-3-戊基(-c(ch3)(ch2ch3)2)、2-甲基-3-戊基(-ch(ch2ch3)ch(ch3)2)、2,3-二甲基-2-丁基(-c(ch3)2ch(ch3)2)、3,3-二甲基-2-丁基(-ch(ch3)c(ch3)3、1-庚基、1-辛基等。

本文中使用的術(shù)語(yǔ)“亞烷基”是指1－12個(gè)碳原子(c1-c12)的飽和的直鏈或支鏈二價(jià)烴基團(tuán)，其中亞烷基可以任選被一或多個(gè)下文所述的取代基獨(dú)立取代。在另一個(gè)實(shí)施方案中，亞烷基為1－8個(gè)碳原子(c1-c8)，或者為1－6個(gè)碳原子(c1-c6)。亞烷基的示例包括但不限于亞甲基(-ch2-)、亞乙基(-ch2ch2-)、亞丙基(-ch2ch2ch2-)等。

術(shù)語(yǔ)“鏈烯基”是指具有至少一個(gè)不飽和位點(diǎn)(即碳-碳sp²雙鍵)的2－8個(gè)碳原子(c2-c8)的直鏈或支鏈單價(jià)烴基團(tuán)，其中所述鏈烯基任選被一或多個(gè)本文中所述取代基獨(dú)立取代，包括具有“順式”和“反式”取向的基團(tuán)，或者選擇的“e”和“z”取向。示例包括但不限于乙烯基(-ch＝ch2)、烯丙基(-ch2ch＝ch2)等。

術(shù)語(yǔ)“亞鏈烯基”是指具有至少一個(gè)不飽和位點(diǎn)(即碳-碳sp²雙鍵)的2－8個(gè)碳原子(c2-c8)的直鏈或支鏈二價(jià)烴基團(tuán)，其中所述亞鏈烯基可以任選被一或多個(gè)本文中所述取代基獨(dú)立取代，包括具有“順式”和“反式”取向的基團(tuán)，或者“e”和“z”取向。示例包括但不限于亞乙烯基(-ch＝ch-)、烯丙基(-ch2ch＝ch-)等。

術(shù)語(yǔ)“炔基”是指具有至少一個(gè)不飽和位點(diǎn)(即碳-碳sp三鍵)的2－8個(gè)碳原子(c2-c8)的直鏈或支鏈單價(jià)烴基團(tuán)，其中所述炔基可以任選被一或多個(gè)本文中所述取代基獨(dú)立取代。示例包括但不限于乙炔基(-c≡ch)、丙炔基(炔丙基，-ch2c≡ch)等。

術(shù)語(yǔ)“亞炔基”是指具有至少一個(gè)不飽和位點(diǎn)(即碳-碳sp三鍵)的2－8個(gè)碳原子(c2-c8)的直鏈或支鏈二價(jià)烴基團(tuán)，其中所述亞炔基可以任選被一或多個(gè)本文中所述取代基獨(dú)立取代。示例包括但不限于亞乙炔基(-c≡c-)、亞丙炔基(亞炔丙基，-ch2c≡c-)等。

術(shù)語(yǔ)“碳環(huán)”、“碳環(huán)基”、“碳環(huán)環(huán)”和“環(huán)烷基”是指單價(jià)非芳族的飽和的或部分不飽和的環(huán)，該環(huán)可以為具有3至12個(gè)碳原子(c3-c12)的單環(huán)或7至12個(gè)環(huán)碳原子的雙環(huán)。具有7至12個(gè)原子的雙環(huán)碳環(huán)可以排列為例如雙環(huán)[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]系統(tǒng)，具有9或10個(gè)環(huán)原子的雙環(huán)碳環(huán)可以排列為雙環(huán)[5,6]或[6,6]系統(tǒng)，或者排列為橋接系統(tǒng)，例如雙環(huán)[2.2.1]庚烷、雙環(huán)[2.2.2]辛烷和雙環(huán)[3.2.2]壬烷。螺碳環(huán)基部分也包括在本定義的范圍內(nèi)。螺碳環(huán)基部分的實(shí)例包括[2.2]戊烷基、[2.3]己烷基和[2.4]庚烷基。單環(huán)碳環(huán)的示例包括但不限于環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、1-環(huán)戊-1-烯基、1-環(huán)戊-2-烯基、1-環(huán)戊-3-烯基、環(huán)己基、1-環(huán)己-1-烯基、1-環(huán)己-2-烯基、1-環(huán)己-3-烯基、環(huán)己二烯基、環(huán)庚基、環(huán)辛基、環(huán)壬基、環(huán)癸基、環(huán)十一基、環(huán)十二烷基等。碳環(huán)基任選被一或多個(gè)本文中所述取代基獨(dú)立取代。

“芳基”是指通過(guò)從母體芳族環(huán)系的單個(gè)碳原子上除去一個(gè)氫原子而衍生的6－20個(gè)碳原子(c6-c20)的單價(jià)芳族烴基團(tuán)。某些芳基在示例性結(jié)構(gòu)上表示為“ar”。芳基包括包含與飽和的、部分不飽和的環(huán)或者芳族碳環(huán)稠合的芳族環(huán)的雙環(huán)基團(tuán)。典型的芳基包括但不限于由下列基團(tuán)衍生的基團(tuán)：苯(苯基)、取代的苯、萘、蒽、聯(lián)苯基、茚基、茚滿基、1,2-二氫萘、1,2,3,4-四氫萘基等。芳基任選被一或多個(gè)本文中所述取代基獨(dú)立取代。

“亞芳基”是指通過(guò)從母體芳族環(huán)系的二個(gè)碳原子上除去二個(gè)氫原子而衍生的6－20個(gè)碳原子(c6-c20)的二價(jià)芳族烴基團(tuán)。某些亞芳基在示例性結(jié)構(gòu)上表示為“ar”。亞芳基包括包含與飽和的、部分不飽和的環(huán)或者芳族碳環(huán)稠合的芳族環(huán)的雙環(huán)基團(tuán)。典型的亞芳基包括但不限于由下列基團(tuán)衍生的基團(tuán)：苯(亞苯基)、取代的苯、萘、蒽、亞聯(lián)苯基、亞茚基、亞茚滿基、1,2-二氫萘、1,2,3,4-四氫萘等。亞芳基任選被一或多個(gè)本文中所述取代基獨(dú)立取代。

術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)”、“雜環(huán)基”和“雜環(huán)環(huán)”在本文中可互換使用，是指3至約20個(gè)環(huán)原子的飽和或部分不飽和(即在所述環(huán)中具有一個(gè)或多個(gè)雙鍵和/或三鍵)的碳環(huán)基團(tuán)，其中至少一個(gè)環(huán)原子為選自氮、氧、磷和硫的雜原子，其余的環(huán)原子為c，其中一個(gè)或多個(gè)環(huán)原子任選被下文描述的一個(gè)或多個(gè)取代基獨(dú)立取代。雜環(huán)可以是具有3－7個(gè)環(huán)成員(2－6個(gè)碳原子和1－4個(gè)選自n、o、p和s的雜原子)單環(huán)或者具有7－10個(gè)環(huán)成員(4－9個(gè)碳原子和1－6個(gè)選自n、o、p和s的雜原子)的雙環(huán)，例如雙環(huán)[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]系統(tǒng)。雜環(huán)描述于paquette,leoa.；“principlesofmodernheterocyclicchemistry(現(xiàn)代雜環(huán)化學(xué)原理)”(w.a.benjamin,newyork,1968)，特別是第1、3、4、6、7和9章；“thechemistryofheterocycliccompounds,aseriesofmonographs(雜環(huán)化合物化學(xué)，系列專著)”(johnwiley&sons,newyork,1950至今),特別是第13、14、16、19和28卷；和j.am.chem.soc.(1960)82:5566?！半s環(huán)基”還包括其中雜環(huán)基團(tuán)與飽和的、部分不飽和的環(huán)或芳族碳環(huán)或雜環(huán)環(huán)稠合的基團(tuán)。雜環(huán)環(huán)的示例包括但不限于嗎啉-4-基、哌啶-1-基、哌嗪基、哌嗪-4-基-2-酮、哌嗪-4-基-3-酮、吡咯烷-1-基、硫代嗎啉-4-基、s-二氧代硫代嗎啉-4-基、氮雜環(huán)辛烷-1-基、氮雜環(huán)丁烷-1-基、八氫吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基、[1,4]二氮雜環(huán)庚-1-基、吡咯烷基、四氫呋喃基、二氫呋喃基、四氫噻吩基、四氫吡喃基、二氫吡喃基、四氫噻喃基、哌啶子基、嗎啉代、硫代嗎啉代、硫氧雜環(huán)己基(thioxanyl)、哌嗪基、高哌嗪基、氮雜環(huán)丁基、氧雜環(huán)丁基、硫雜環(huán)丁基(thietanyl)、高哌啶基、氧雜環(huán)庚烷基(oxepanyl)、硫雜環(huán)庚烷基(thiepanyl)、氧氮雜基(oxazepinyl)、二氮雜基、硫氮雜基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、二氫吲哚基、2h-吡喃基、4h-吡喃基、二噁烷基、1,3-二氧戊環(huán)基、吡唑啉基、二噻烷基、二硫戊環(huán)基(dithiolanyl)、二氫吡喃基、二氫噻吩基、二氫呋喃基、吡唑烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、3-氮雜雙環(huán)[3.1.0]己烷基、3-氮雜雙環(huán)[4.1.0]庚烷基、氮雜雙環(huán)[2.2.2]己烷基、3h-吲哚基、喹嗪基和n-吡啶基脲。螺雜環(huán)基部分應(yīng)當(dāng)也包括在本發(fā)明定義的范圍內(nèi)。螺雜環(huán)基部分的示例包括氮雜螺[2.5]辛基和氮雜螺[2.4]庚烷基。其中2個(gè)環(huán)原子被氧代(＝o)取代的雜環(huán)基團(tuán)為嘧啶酮基(pyrimidinonyl)和1,1-二氧代-硫代嗎啉基。本文中的雜環(huán)基團(tuán)任選被一或多個(gè)本文中所述取代基獨(dú)立取代。

術(shù)語(yǔ)“雜芳基”是指5-、6-或7-元環(huán)的單價(jià)芳族基團(tuán)，包括5－20個(gè)原子的稠合環(huán)系(其中至少一個(gè)為芳族)，其包含一或多個(gè)獨(dú)立選自氮、氧和硫的雜原子。雜芳基的示例為吡啶基(包括例如2-羥基吡啶基)、咪唑基、咪唑并吡啶基、嘧啶基(包括例如4-羥基嘧啶基)、吡唑基、三唑基、吡嗪基、四唑基、呋喃基、噻吩基、異噁唑基、噻唑基、噁二唑基、噁唑基、異噻唑基、吡咯基、喹啉基、異喹啉基、四氫異喹啉基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、噌啉基、吲唑基、中氮茚基、2,3-二氮雜萘基、噠嗪基、三嗪基、異吲哚基、蝶啶基、嘌呤基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基、噻二唑基、呋咱基、苯并呋咱基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噁唑啉基、喹唑啉基、喹喔啉基、1,5-二氮雜萘基和呋喃并吡啶基。雜芳基任選被一或多個(gè)本文中所述取代基獨(dú)立取代。

雜環(huán)或雜芳基可以是碳(碳連接的)或氮(氮連接的)鍵合的，如果是可能的話。舉例而非限定，碳鍵合的雜環(huán)或雜芳基鍵合的位置為吡啶的2、3、4、5或6位，噠嗪的3、4、5或6位，嘧啶的2、4、5或6位，吡嗪的2、3、5或6位，呋喃、四氫呋喃、噻喃、噻吩、吡咯或四氫吡咯的2、3、4或5位，噁唑、咪唑或噻唑的2、4或5位，異噁唑、吡唑或異噻唑的3、4或5位，氮丙啶的2或3位、氮雜環(huán)丁烷的2、3或4位、喹啉的2、3、4、5、6、7或8位或異喹啉的1、3、4、5、6、7或8位。

舉例而非限定，氮鍵合的雜環(huán)或雜芳基鍵合的位置為氮丙啶、氮雜環(huán)丁烷、吡咯、吡咯烷、2-吡咯啉、3-吡咯啉、咪唑、咪唑烷、2-咪唑啉、3-咪唑啉、吡唑、吡唑啉、2-吡唑啉、3-吡唑啉、哌啶、哌嗪、吲哚、二氫吲哚、1h-吲唑的1位，異吲哚或異吲哚啉的2位，嗎啉的4位，咔唑或β-咔啉的9位。

術(shù)語(yǔ)“治療”是指治療性治療，其中所述目的是減緩(減輕)不期望的生理變化或病癥，如關(guān)節(jié)炎或癌癥的發(fā)展或擴(kuò)散。在本發(fā)明中，有益的或期望的臨床結(jié)果包括但不限于癥狀的緩解，疾病程度的減輕，疾病狀態(tài)的穩(wěn)定(即不惡化)，疾病進(jìn)程的延緩或減慢，疾病狀態(tài)的改善或緩和減輕，以及緩解(無(wú)論是部分還是全部)，無(wú)論是可檢測(cè)的還是不可檢測(cè)的?！爸委煛边€可以是指與如果不接受治療的預(yù)期存活相比可以延長(zhǎng)存活。那些需要治療的個(gè)體包括患有所述病癥或病癥的那些個(gè)體。

短語(yǔ)“治療有效量”是指下列情況下本發(fā)明化合物的量：(i)治療特定疾病、狀況或病癥，(ⅱ)減少、改善或消除特定疾病、病癥或紊亂的一種或多種癥狀，或(iii)預(yù)防或延遲本文中所述特定疾病、病癥或紊亂的一種或多種癥狀的發(fā)作。在癌癥的情況下，藥物的治療有效量可減少癌細(xì)胞的數(shù)目；減少腫瘤的大??；抑制(即，減緩至一定程度并優(yōu)選終止)癌細(xì)胞浸潤(rùn)到周圍器官中；抑制(即，減緩至一定程度并優(yōu)選終止)腫瘤轉(zhuǎn)移；在一定程度上抑制腫瘤生長(zhǎng)；和/或在一定程度上減輕一種或多種與癌癥相關(guān)的癥狀。藥物可以在一定程度上預(yù)防已有癌細(xì)胞生長(zhǎng)和/或殺死已有的癌細(xì)胞，它可能是抑制細(xì)胞的和/或細(xì)胞毒性的。對(duì)于癌癥治療，可以例如通過(guò)評(píng)價(jià)疾病進(jìn)展時(shí)間(ttp)和/或確定應(yīng)答率(rr)測(cè)定療效。

本文中使用的“炎性疾病”可以是指任何疾病、病癥或綜合征，其中過(guò)度的或失調(diào)的炎性應(yīng)答可能導(dǎo)致過(guò)度的炎性癥狀、宿主組織損傷或組織功能損害。“炎性疾病”還是指通過(guò)白細(xì)胞流入和/或中性粒細(xì)胞趨化而介導(dǎo)的病理狀態(tài)。

本文中使用的“炎癥”是指由于組織損害或破壞而引發(fā)的局部、保護(hù)性應(yīng)答，這可以用于破壞、稀釋或杜絕(隔絕)有害成分和受損的組織。炎癥顯而易見(jiàn)地與白細(xì)胞流入和/或中性粒細(xì)胞趨化有關(guān)。炎癥可以起因于病原生物體和病毒的感染，還可以起因于非傳染性途徑，例如創(chuàng)傷或心肌梗死或中風(fēng)后的再灌注、外來(lái)抗原的免疫應(yīng)答和自身免疫應(yīng)答。因此，適合于采用式ⅰ化合物治療的炎性病癥包括與特異性防御系統(tǒng)的反應(yīng)以及非特異性防御系統(tǒng)的反應(yīng)有關(guān)的病癥。

“特異性防御系統(tǒng)”是指對(duì)于特定抗原的存在作出反應(yīng)的免疫系統(tǒng)的組成部分。由特異性防御系統(tǒng)的應(yīng)答導(dǎo)致的炎癥的示例包括對(duì)外來(lái)抗原的典型應(yīng)答、自身免疫性疾病和由t細(xì)胞介導(dǎo)的遲發(fā)型超敏反應(yīng)應(yīng)答。慢性炎性疾病、實(shí)體移植的組織和器官(例如腎和骨髓移植)的排斥以及移植物抗宿主病(gvhd)是特異性防御系統(tǒng)的炎性反應(yīng)的進(jìn)一步示例。

本文中使用的術(shù)語(yǔ)“非特異性防御系統(tǒng)”是指由不能免疫記憶的白細(xì)胞(例如粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞)介導(dǎo)的炎性病癥。至少部分由非特異性防御系統(tǒng)反應(yīng)導(dǎo)致的炎癥的示例包括與下列病癥相關(guān)的炎癥：例如成人(急性)呼吸窘迫綜合征(ards)或多器官損傷綜合征；再灌注損傷；急性腎小球腎炎；反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎；具有急性炎癥性成分的皮膚病；急性化膿性腦膜炎或其它中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎性疾病(例如中風(fēng))；熱損傷；炎性腸??；粒細(xì)胞輸注相關(guān)綜合征；和細(xì)胞因子誘導(dǎo)的毒性。

本文所使用的“自身免疫性疾病”是指其中組織損傷與對(duì)人體自身成分由體液或細(xì)胞介導(dǎo)的反應(yīng)相關(guān)的任何病癥。

本文中使用的“過(guò)敏性疾病”是指由于過(guò)敏導(dǎo)致的任何癥狀、組織損傷或組織功能的喪失。本文中使用的“關(guān)節(jié)炎疾病”是指特征在于可歸因于多種病因?qū)W的關(guān)節(jié)炎性病變的任何疾病。本文中使用的“皮炎”是指皮膚疾病大家族中的任何一種，其特征在于可歸因于多種病因的皮膚炎性癥病。本文中使用的“移植排斥”是指針對(duì)移植組織如器官或細(xì)胞(例如骨髓)的任何免疫反應(yīng)，其特征在于接枝的和周圍組織的功能喪失、疼痛、腫脹、白細(xì)胞增多和血小板減少。本發(fā)明的治療方法包括用于治療與炎性細(xì)胞活化有關(guān)的病癥的方法。

“炎性細(xì)胞激活”是指在炎性細(xì)胞(包括但不限于單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、t淋巴細(xì)胞、b淋巴細(xì)胞、粒細(xì)胞(即多形核白細(xì)胞，如嗜中性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞)、肥大細(xì)胞、樹(shù)突細(xì)胞、朗格漢斯細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞)中通過(guò)增生性細(xì)胞響應(yīng)的刺激物(包括但不限于細(xì)胞因子、抗原或自身抗體)的誘導(dǎo)、可溶性介質(zhì)(包括但不限于細(xì)胞因子、氧自由基、酶、前列腺素或血管活性胺)的產(chǎn)生或者新的或增加數(shù)量的介質(zhì)(包括但不限于主要組織相容性抗原或細(xì)胞粘附分子)的細(xì)胞表面表達(dá)。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，這些細(xì)胞中的這些表型的一種或組合的激活可以促進(jìn)炎性疾病的發(fā)生、延續(xù)或惡化。

術(shù)語(yǔ)“nsaids”是“非甾體抗炎藥”的縮寫，是具有鎮(zhèn)痛、解熱(降低升高的體溫并且在不損害意識(shí)的情況下緩解疼痛)作用的治療藥物，并且在較高劑量時(shí)，具有抗炎作用(減少炎癥)。術(shù)語(yǔ)“非甾體”用于將這些藥物與類固醇區(qū)別，其(在廣泛的其它作用中)也有類花生酸抑制、抗炎作用。作為鎮(zhèn)痛藥，nsaids的與眾不同在于它們是非麻醉性的。nsaids包括阿司匹林、布洛芬和萘普生。nsaids通常適用于其中存在疼痛和炎癥的急性或慢性疾病的治療。nsaids通常適用于下列疾病的癥狀緩解：類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、炎性關(guān)節(jié)病(例如強(qiáng)直性脊柱炎)、銀屑病關(guān)節(jié)炎、萊特爾氏綜合征、急性痛風(fēng)、痛經(jīng)、轉(zhuǎn)移性骨痛、頭痛和偏頭痛、手術(shù)后疼痛、由于炎癥和組織損傷導(dǎo)致的輕度至中度疼痛、發(fā)熱、腸梗阻和腎絞痛。大多數(shù)的nsaids作為酶環(huán)氧合酶的非選擇性抑制劑，同時(shí)抑制環(huán)氧合酶-1(cox-1)和環(huán)氧合酶-2(cox-2)同工酶。環(huán)氧合酶能夠催化源自花生四烯酸(其本身通過(guò)磷脂酶a2衍生自細(xì)胞磷脂雙分子層)的前列腺素和血栓素的形成。前列腺素(除其它外)扮演了炎癥過(guò)程中的信使分子的角色。cox-2抑制劑包括塞來(lái)考昔、艾托考昔、羅美昔布、帕瑞考昔、羅非考昔和伐地考昔。

術(shù)語(yǔ)“癌癥”是指或描述哺乳動(dòng)物中的生理學(xué)狀況，其典型特征在于失調(diào)的細(xì)胞生長(zhǎng)?！澳[瘤”包含一種或多種癌細(xì)胞。癌癥的示例包括但不限于癌、淋巴瘤、胚細(xì)胞瘤、肉瘤和白血病或淋巴惡性腫瘤。此類癌癥的更具體的示例包括鱗狀細(xì)胞癌(例如上皮鱗狀細(xì)胞癌)；肺癌，包括小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌(“nsclc”)，肺腺癌和肺鱗狀細(xì)胞癌；腹膜癌、肝細(xì)胞癌、胃癌包括胃腸癌、胰腺癌、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、子宮頸癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝細(xì)胞瘤、乳腺癌、結(jié)腸癌、直腸癌、結(jié)腸直腸癌、子宮內(nèi)膜癌或子宮癌、唾液腺癌、腎癌、前列腺癌、外陰癌、甲狀腺癌、肝癌、肛門癌、陰莖癌以及頭和頸癌。

“惡性血液病”(英英拼寫“血液學(xué)”惡性腫瘤)是能夠影響血液、骨髓和淋巴結(jié)的癌癥類型。由于以上三者與免疫系統(tǒng)密切相關(guān)，影響以上三者之一的疾病往往也會(huì)影響到其它：盡管淋巴瘤是淋巴結(jié)的疾病，但它常常會(huì)傳播到骨髓，影響血液。惡性血液病是惡性腫瘤(“癌癥”)，它們通常由血液學(xué)和/或腫瘤學(xué)專家治療。在某些中心，“血液學(xué)/腫瘤科”是內(nèi)科的一個(gè)?？疲谄渌胤?，它們被認(rèn)為是獨(dú)立的部門(也有手術(shù)和放射腫瘤學(xué)家)。并非所有的血液病都是惡性的(“癌”)；這些其它血液病癥也可以通過(guò)血液學(xué)專家進(jìn)行治療。惡性血液病可以派生自兩個(gè)主要的血細(xì)胞系：骨髓和淋巴細(xì)胞系。骨髓細(xì)胞系通常產(chǎn)生粒細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板、巨噬細(xì)胞和肥大細(xì)胞；淋巴細(xì)胞系產(chǎn)生b、t、nk和漿細(xì)胞。淋巴瘤、淋巴細(xì)胞性白血病和骨髓瘤源自淋巴系，而急性和慢性骨髓性白血病、骨髓增生異常綜合征和骨髓增生性疾病起源于骨髓。白血病包括急性淋巴細(xì)胞白血病(all)、急性骨髓性白血病(aml)、慢性淋巴細(xì)胞白血病(cll)、慢性髓細(xì)胞性白血病(cml)、急性單核細(xì)胞白血病(amol)和小淋巴細(xì)胞性淋巴瘤(sll)。淋巴瘤包括霍奇金淋巴瘤(共有四種亞型)和非霍奇金淋巴瘤(nhl，所有亞型)。

“化療藥”是用于癌癥治療的化學(xué)化合物，無(wú)論是何種作用機(jī)制?；熕幍姆N類包括但不限于：烷化劑、抗代謝物、紡錘體毒植物生物堿、細(xì)胞毒藥物/抗腫瘤抗生素、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、抗體、光敏劑和激酶抑制劑?；熕幇ㄓ糜凇鞍邢蛑委煛焙统Ｒ?guī)化療中使用的化合物?；熕幍氖纠ǎ阂吏斕婺?imbruvica^tm,apci-32765,pharmacyclicsinc./janssenbiotechinc.；casreg.no.936563-96-1,us7514444)、艾代拉利司(idelalisib)(原名cal-101,gs1101,gs-1101,gileadsciencesinc.；casreg.no.1146702-54-6)、埃羅替尼(genentech/osipharm.)、多西他賽(sanofi-aventis)、5-fu(氟尿嘧啶，5-氟尿嘧啶,casreg.no.51-21-8)、吉西他濱(lilly)、pd-0325901(casno.391210-10-9,pfizer)、順鉑(順-二胺，二氯鉑(ii),casno.15663-27-1)、卡鉑(casno.41575-94-4)、紫杉醇(bristol-myerssquibboncology,princeton,n.j.)、曲妥珠單抗(genentech)、替莫唑胺(4-甲基-5-氧代-2,3,4,6,8-五氮雜雙環(huán)[4.3.0]壬-2,7,9-三烯-9-甲酰胺,casno.85622-93-1,scheringplough)、他莫昔芬((z)-2-[4-(1,2-二苯基丁-1-烯基)苯氧基]-n,n-二甲基乙胺,)和多柔比星akti-1/2、hppd和雷帕霉素。

化療藥包括bcl-2抑制劑和jak抑制劑。

更多的化療藥示例包括：奧沙利鉑(sanofi)、硼替佐米(millenniumpharm.)、舒尼替尼(su11248,pfizer)、來(lái)曲唑(novartis)、甲磺酸伊馬替尼(novartis)、xl-518(考比替尼，mek抑制劑，exelixis，wo2007/044515)、arry-886(mek抑制劑,azd6244,arraybiopharma,astrazeneca)、sf-1126(pi3k抑制劑,semaforepharmaceuticals)、bez-235(pi3k抑制劑,novartis)、xl-147(pi3k抑制劑,exelixis)、ptk787/zk222584(novartis)、氟維司群(astrazeneca)、亞葉酸、雷帕霉素(西羅莫司,wyeth)、拉帕替尼(gsk572016,glaxosmithkline)、洛那法尼(sarasar^tm,sch66336,scheringplough)、索拉非尼(bay43-9006,bayerlabs)、吉非替尼(astrazeneca)、伊立替康(cpt-11,pfizer)、替吡法尼(zarnestra^tm,johnson&johnson)、abraxane^tm(不含cremophor)、紫杉醇的白蛋白工程化納米顆粒(americanpharmaceuticalpartners,schaumberg,il)、凡德他尼(rinn,zd6474,astrazeneca)、苯丁酸氮芥、ag1478、ag1571(su5271；sugen)、西羅莫司酯化物(wyeth)、帕唑帕尼(glaxosmithkline)、坎磷酰胺(canfosfamide)(telik)、噻替派和環(huán)磷酰胺烷基磺酸鹽，例如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙啶類，例如苯佐替派、卡波昆、美妥替哌和uredopa；乙烯亞胺和甲基三聚氰胺(methylamelamines)類，包括六甲蜜胺、曲他胺、三亞乙基蜜胺(triethylenemelamine)、三亞乙基硫代磷酸胺和三甲基蜜胺(trimethylomelamine)；番荔素(acetogenins)(特別是布拉他辛(bullatacin)和布拉他辛酮(bullatacinone))；喜樹(shù)堿類(包括合成的類似物拓?fù)涮婵?；苔蘚抑素；callystatin；cc-1065(包括其阿多來(lái)新(adozelesin)、卡折來(lái)新(carzelesin)和比折來(lái)新(bizelesin)合成類似物)；念珠藻素類(特別是念珠藻素1和念珠藻素8)；多拉司他汀(dolastatin)；多卡霉素(duocarmycin)(包括合成類似物，kw-2189和cb1-tm1)；軟珊瑚素(eleutherobin)；水鬼蕉堿(pancratistatin)；asarcodictyin；海綿抑制素(spongistatin)；氮芥類，例如苯丁酸氮芥、萘氮芥、氯磷酰胺、雌莫司汀、異環(huán)磷酰胺、二氯甲基二乙胺(氮芥)、氮芥氧化物鹽酸鹽、美法侖、新恩比興(novembichin)、苯芥膽甾醇、潑尼氮芥、曲洛磷胺、尿嘧啶氮芥；亞硝基脲類，如卡莫司汀、氯脲霉素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀和ranimnustine；抗生素類，如烯二炔類抗生素(例如卡奇霉素、卡奇霉素γ1i、卡奇霉素ωi1(angewchem.intl.ed.engl.(1994)33:183－186)；dynemicin,dynemicina；雙膦酸類，例如氯膦酸鹽；拉霉素(esperamicin)；以及新制癌菌素(neocarzinostatin)發(fā)色團(tuán)和相關(guān)的色蛋白烯二炔抗菌素發(fā)色團(tuán))、阿克拉霉素(aclacinomycin)、放線菌素(actinomycin)、氛茴霉素(authramycin)、偶氮絲氨酸(azaserine)、博來(lái)霉素(bleomycin)、放線菌素c(cactinomycin)、carabicin、洋紅霉素(carminomycin)、嗜癌菌素(carzinophilin)、色霉素(chromomycin)、放線菌素d(dactinomycin)、柔紅霉素(daunombicin)、地托比星(detorubicin)、6-重氮-5-氧代-l-正亮氨酸、嗎啉代-多柔比星、氰基嗎啉代-多柔比星、2-吡咯啉并-多柔比星和脫氧多柔比星)、表柔比星(epimbicin)、依索比星(esombicin)、伊達(dá)比星(idarubicin)、萘莫柔比星(nemorubicin)、麻西羅霉素(marcellomycin)、絲裂霉素類(mitomycins)(例如絲裂霉素c)、霉酚酸(mycophenolicacid)、諾拉霉素(nogalamycin)、橄欖霉素(olivomycin)、培洛霉素(peplomycin)、泊非霉素(porfiromycin)、嘌呤霉素(puromycin)、三鐵阿霉素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、鏈黑菌素(streptonigrin)、鏈脲菌素(streptozocin)、殺結(jié)核菌素(tubercidin)、烏苯美司(ubenimex)、凈司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zombicin)；抗代謝物類，例如氨甲蝶呤(methotrexate)和5-氟尿嘧啶(5-fu)；葉酸類似物，例如二甲葉酸(denopterin)、氨甲蝶呤(methotrexate)、蝶羅呤(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤類似物，例如氟達(dá)拉濱(fludarabine)、6-巰基嘌呤(mercaptopurine)、硫脒嘌呤(thiamiprine)、硫鳥(niǎo)嘌呤(thioguanine)；嘧啶類似物，諸如安西他濱(ancitabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、6-氮尿苷(azauridine)、卡莫氟(carmofiar)、阿糖胞苷(cytarabine)、雙脫氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依諾他濱(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine)；雄激素類，例如卡魯睪酮(calusterone)、曲他雄酮丙酸鹽(dromostanolonepropionate)、環(huán)硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睪內(nèi)酯(testolactone)；抗腎上腺類，例如氨魯米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；葉酸補(bǔ)充劑，例如葉酸(folinicacid)；醋葡醛內(nèi)酯(aceglatone)；醒磷酰胺糖苷(aldophosphamideglycoside)；氨基乙酰丙酸(aminolevulinicacid)；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；塔布辛(bestrabucil)；比生群(bisantrene)；依達(dá)曲沙(edatraxate)；地磷酰胺(defosfamide)；地美可辛(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；elfornithine；依利醋銨(elliptiniumacetate)；埃博霉素；依托格魯(etoglucid)；硝酸鎵(galliumnitrate)；羥脲(hydroxyurea)；香菇多糖(lentinan)；氯尼達(dá)明(lonidamine)；美登木素生物堿類(maytansinoids)，例如美登素(maytansine)和安絲菌素(ansamitocin)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫派達(dá)醇(mopidamol)；尼曲吖啶(nitracrine)；噴司他丁(pentostatin)；蛋氨氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；鬼臼酸(podophyllinicacid)；2-乙基酰肼(ethylhydrazide)；丙卡巴肼(procarbazine)；多糖復(fù)合物(jhsnaturalproducts,eugene,or)；雷佐生(razoxane)；根霉素(rhizoxin)；西佐喃(sizofiran)；鍺螺胺(spirogermanium)；細(xì)交鏈孢菌酮酸(tenuazonicacid)；三亞胺醌(triaziquone)；2,2',2"-三氯三乙胺；單端孢霉烯族毒素類(trichothecenes)(尤其是t-2毒素、疣孢菌素a(verrucarina)、桿孢菌素(roridina)和蛇形菌素(anguidin))；烏拉坦(urethan)；長(zhǎng)春地辛(vindesine)；達(dá)卡巴嗪(dacarbazine)；甘露莫司汀(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴衛(wèi)矛醇(mitolactol)；派泊溴烷(pipobroman)；加胞嘧啶(gacytosine)；阿糖胞苷(ambinoside)(“ara-c”)；環(huán)磷酰胺；塞替派(thiotepa)；6-硫鳥(niǎo)嘌呤；巰基嘌呤；氨甲蝶呤；鉑類似物，例如順鉑(cisplatin)和卡鉑(carboplatin)；長(zhǎng)春花堿(vinblastine)；依托泊苷(etoposide)(vp-16)；異環(huán)磷酰胺(ifosfamide)；米托蒽醌(mitoxantrone)；長(zhǎng)春新堿(vincristine)；長(zhǎng)春瑞濱(vinorelbine)(navelbine)；米托蒽醌(novantrone)；替尼泊苷(teniposide)；依達(dá)曲沙(edatrexate)；道諾霉素(daunomycin)；氨基蝶呤(aminopterin)；卡培他濱(capecitabine)(roche)；伊班膦酸鹽(ibandronate)；cpt-11；拓樸異構(gòu)酶抑制劑rfs2000；二氟甲基鳥(niǎo)氨酸(dmfo)；類視黃酸類(retinoids)，例如視黃酸(retinoicacid)；以及任何上述藥物的可藥用的鹽、酸和衍生物。

“化療藥”的定義中還包括：(i)能夠調(diào)節(jié)或抑制針對(duì)腫瘤的激素作用的抗激素藥，例如抗雌激素藥和選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑(serms)，包括例如他莫昔芬(包括檸檬酸他莫昔芬)、雷洛昔芬、屈洛昔芬、4-羥基他莫昔芬、曲沃昔芬、雷洛昔芬(keoxifene)、ly117018、奧那司酮和(檸檬酸托瑞米芬)；(ii)能夠抑制芳香酶的芳香酶抑制劑，其能夠調(diào)節(jié)腎上腺中雌激素的產(chǎn)生，例如4(5)-咪唑類、氨魯米特、(醋酸甲地孕酮)、(依西美坦；pfizer)、福美坦、法倔唑、(伏氯唑)、(來(lái)曲唑；novartis)和(阿那曲唑；astrazeneca)；(iii)抗雄激素藥，例如氟他胺、尼魯米特、比卡魯胺、亮丙瑞林和戈舍瑞林；以及曲他沙濱(1,3-二氧戊環(huán)核苷胞嘧啶類似物)；(iv)蛋白激酶抑制劑，例如mek抑制劑(wo2007/044515)；(v)脂質(zhì)激酶抑制劑；(vi)反義寡核苷酸，尤其那些在與異常細(xì)胞增殖有關(guān)的信號(hào)通路中抑制了基因(例如pkc-α、raf、h-ras)表達(dá)的反義寡核苷酸，例如奧利默森(oblimersen)(gentainc.)；(vii)核酶，如vegf表達(dá)抑制劑(例如)和her2表達(dá)抑制劑；(viii)疫苗，如基因治療疫苗，例如和ril-2；拓?fù)洚悩?gòu)酶1抑制劑，例如rmrh；(ix)抗血管生成劑，例如貝伐單抗(genentech)以及任意上述藥物的可藥用的鹽、酸或衍生物。

“化療藥”定義中還包括治療性抗體，例如阿侖單抗(campath)、貝伐單抗(genentech)；西妥昔單抗(imclone)；帕尼單抗(amgen)、利妥昔單抗(genentech/biogenidec)、帕妥珠單抗(omnitarg^tm,2c4,genentech)、曲妥珠單抗(genentech)、托西莫單抗(bexxar,corixia)和抗體藥物綴合物，吉妥單抗奧唑米星(wyeth)。

作為化療藥與本發(fā)明的btk抑制劑組合使用的有治療效能的人源化單克隆抗體包括：阿侖單抗、阿泊珠單抗、阿塞珠單抗、atlizumab、巴匹珠單抗(bapineuzumab)、貝伐單抗、比伐單抗(bivatuzumabmertansine)、莫坎妥珠單抗(cantuzumabmertansine)、西利珠單抗(cedelizumab)、賽妥珠單抗(certolizumabpegol)、cidfusituzumab、cidtuzumab、達(dá)利珠單抗(daclizumab)、依庫(kù)麗單抗(eculizumab)、依法珠單抗(efalizumab)、依帕珠單抗(epratuzumab)、厄利珠單抗(erlizumab)、泛維珠單抗(felvizumab)、芳妥珠單抗(fontolizumab)、奧吉妥珠單抗(gemtuzumabozogamicin)、奧英妥珠單抗(inotuzumabozogamicin)、伊匹單抗(ipilimumab)、拉貝珠單抗(labetuzumab)、林妥珠單抗(lintuzumab)、馬妥珠單抗(matuzumab)、美泊珠單抗(mepolizumab)、莫維珠單抗(motavizumab)、motovizumab、那他珠單抗(natalizumab)、尼妥珠單抗(nimotuzumab)、nolovizumab、numavizumab、ocrelizumab、奧馬珠單抗(omalizumab)、帕利珠單抗、帕考珠單抗(pascolizumab)、pecfusituzumab、pectuzumab、帕妥珠單抗、培克珠單抗、ralivizumab、雷珠單抗、reslivizumab、瑞利珠單抗(reslizumab)、resyvizumab、羅維珠單抗(rovelizumab)、盧利珠單抗(ruplizumab)、西羅珠單抗(sibrotuzumab)、西利珠單抗(siplizumab)、索土珠單抗(sontuzumab)、替他珠單抗(tacatuzumabtetraxetan)、他度珠單抗(tadocizumab)、他利珠單抗、特非珠單抗(tefibazumab)、托珠單抗、托利珠單抗(toralizumab)、曲妥珠單抗、西莫白介素單抗(tucotuzumabcelmoleukin)、tucusituzumab、umavizumab、烏珠單抗(urtoxazumab)和維西珠單抗(visilizumab)。

“代謝物”是指定的化合物或其鹽在體內(nèi)通過(guò)代謝產(chǎn)生的產(chǎn)物。化合物的代謝物可以使用本領(lǐng)域中已知的常規(guī)技術(shù)來(lái)鑒定，它們的活動(dòng)使用如本文所述的那些試驗(yàn)來(lái)確定。此類產(chǎn)物可能例如產(chǎn)生自所施用化合物的氧化、還原、水解、酰胺化、脫酰胺化、酯化、脫酯化、酶裂解等。因此，本發(fā)明包括本發(fā)明化合物的代謝物，包括通過(guò)以下過(guò)程中產(chǎn)生的化合物：使得本發(fā)明的式i化合物與哺乳動(dòng)物接觸一段時(shí)間，該時(shí)間足以獲得其代謝產(chǎn)物。

術(shù)語(yǔ)“包裝說(shuō)明書(shū)”用于指通常包含在治療產(chǎn)品的商業(yè)包裝中的說(shuō)明書(shū)，其含有關(guān)于與使用此類治療產(chǎn)品有關(guān)的適應(yīng)癥、用法、劑量、給藥、禁忌癥和/或警告的信息。

術(shù)語(yǔ)“手性”是指與鏡像配對(duì)分子具有不可重疊性的分子，而術(shù)語(yǔ)“非手性”是指與其鏡像配對(duì)分子具有可重疊性的分子。

術(shù)語(yǔ)“立體異構(gòu)體”是指具有相同化學(xué)組成但原子或基團(tuán)的空間排列不同的化合物。

“非對(duì)映體”是指具有兩個(gè)或更多個(gè)手性中心并且其分子彼此不為鏡像的立體異構(gòu)體。非對(duì)映體具有不同的物理性質(zhì)，例如熔點(diǎn)、沸點(diǎn)、光譜性質(zhì)和反應(yīng)性。非對(duì)映體的混合物可通過(guò)高分辨分析方法分離，例如電泳法和色譜法。

“對(duì)映體”是指化合物的兩種立體異構(gòu)體，其彼此的鏡像為不可重疊的。

本文中使用的立體化學(xué)定義和慣例通常遵循s.p.parker編寫的mcgraw-hilldictionaryofchemicalterms(1984)mcgraw-hillbookcompany,newyork；和eliel,e.和wilen,s.,“有機(jī)化合物的立體化學(xué)(stereochemistryoforganiccompounds)”,johnwiley&sons,inc.,newyork,1994。本發(fā)明的化合物可以含有不對(duì)稱或手性中心，因此以不同的立體異構(gòu)形式存在。本發(fā)明化合物所有立體異構(gòu)形式，包括但不限于非對(duì)映體、對(duì)映體和阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體以及它們的混合物如外消旋混合物，構(gòu)成本發(fā)明的一部分。許多有機(jī)化合物存在光學(xué)活性形式，即它們具有旋轉(zhuǎn)平面偏振光的平面的能力。在描述旋光學(xué)活性化合物時(shí)，前綴d和l或者r和s，用于表示該分子的手性中心的絕對(duì)構(gòu)型。所述前綴d和l或(+)和(-)用于指定化合物對(duì)平面偏振光的旋轉(zhuǎn)的符號(hào)，用(-)或l表示化合物是左旋的。帶有(+)或d前綴的化合物是右旋的。對(duì)于給定的化學(xué)結(jié)構(gòu)，這些立體異構(gòu)體是相同的，只是它們是彼此的鏡像。特定的立體異構(gòu)還可被稱為對(duì)映異構(gòu)體，此類異構(gòu)體的混合物通常稱為對(duì)映體混合物。對(duì)映異構(gòu)體的50:50混合物稱為外消旋混合物或外消旋體，這可能發(fā)生在化學(xué)反應(yīng)或過(guò)程中沒(méi)有立體選擇性或立體專一性時(shí)。術(shù)語(yǔ)“外消旋混合物”和“外消旋物”是指兩種類型的對(duì)映體的沒(méi)有光學(xué)活性的等摩爾混合物。對(duì)映體可以通過(guò)手性分離方法從外消旋混合物中分離，如超臨界流體色譜(sfc)。在分離的對(duì)映異構(gòu)體中手性中心構(gòu)型的指定可以是試驗(yàn)性的(tentative)，為用于說(shuō)明，在表1中給出結(jié)構(gòu)，立體化學(xué)最終例如通過(guò)x-射線晶體數(shù)據(jù)確認(rèn)。

術(shù)語(yǔ)“互變異構(gòu)體”或“互變異構(gòu)形式”是指可以經(jīng)由低能壘互相轉(zhuǎn)化的不同能量的結(jié)構(gòu)異構(gòu)體。例如，質(zhì)子互變異構(gòu)體(也稱為質(zhì)子異變互變異構(gòu)體)包括經(jīng)由質(zhì)子遷移的互變現(xiàn)象，如酮-烯醇和亞胺-烯胺的異構(gòu)化。化合價(jià)互變異構(gòu)體包括通過(guò)某些結(jié)合電子的重排的互變現(xiàn)象。

術(shù)語(yǔ)“可藥用的酸加成鹽”是指不是生物學(xué)上或其它方面不合需要的鹽?？伤幱玫柠}包括酸和堿加成鹽。短語(yǔ)“可藥用的”表示該物質(zhì)或組合物必須是化學(xué)上和/或毒理學(xué)上可兼容的，包括與制劑的其它成分和/或采用其處理的哺乳動(dòng)物。

術(shù)語(yǔ)“可藥用的鹽”是指那些與下列酸形成的可藥用的鹽：無(wú)機(jī)酸，例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、碳酸、磷酸；選自脂族、環(huán)脂族、芳族、芳基-脂族、雜環(huán)、羧酸和磺酸類有機(jī)酸的有機(jī)酸：例如甲酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、葡糖酸、乳酸、丙酮酸、草酸、蘋果酸、馬來(lái)酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、天冬氨酸、抗壞血酸、谷氨酸、鄰氨基苯甲酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、撲酸、苯乙酸、甲磺酸“甲磺酸鹽(酯)”、乙磺酸、對(duì)甲苯磺酸和水楊酸。

術(shù)語(yǔ)“可藥用的堿加成鹽”是指那些與有機(jī)或無(wú)機(jī)堿形成的可藥用的鹽?？伤幱玫臒o(wú)機(jī)堿的示例包括鈉、鉀、銨、鈣、鎂、鐵、鋅、銅、錳、鋁的鹽。從可藥用的有機(jī)無(wú)毒堿衍生的鹽包括下列的鹽：伯、仲和叔胺；取代胺，包括天然存在的取代胺、環(huán)胺和堿性離子交換樹(shù)脂，例如異丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、2-二乙基氨基乙醇、三甲胺、二環(huán)己基胺、賴氨酸、精氨酸、組氨酸、咖啡因、普魯卡因、海巴明、膽堿、甜菜堿、乙二胺、葡糖胺、甲基葡萄糖胺、可可堿、嘌呤、哌嗪、哌啶、n-乙基哌啶和聚胺樹(shù)脂。

“溶劑化物”是指一或多個(gè)溶劑分子與本發(fā)明化合物的結(jié)合物或復(fù)合物。形成溶劑化物的溶劑的示例包括但不限于水、異丙醇、乙醇、甲醇、dmso、乙酸乙酯、乙酸和乙醇胺。

術(shù)語(yǔ)“ec50”是半數(shù)最大有效濃度，是指能夠在體內(nèi)獲得50％最大特定效果所需要的特定化合物的血漿濃度。

術(shù)語(yǔ)“ki”是抑制常數(shù)，表示特定抑制劑與受體的絕對(duì)結(jié)合親和力。其可以采用競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合實(shí)驗(yàn)測(cè)定，其等于當(dāng)其中如果沒(méi)有競(jìng)爭(zhēng)配體(例如放射性配體)存在時(shí)特定抑制劑會(huì)占據(jù)受體50％的濃度。ki值可以經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換為pki值(-logki)，其中較高的值以指數(shù)方式表示更大的效能。

術(shù)語(yǔ)“ic50”是半數(shù)最大抑制濃度，是指能夠在體外獲得50％生物學(xué)過(guò)程抑制所需要的特定化合物的血漿濃度。ic50值可以經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換為pic50值(-logic50),其中較高的值以指數(shù)方式表示更大的效能。ic50值不是一個(gè)絕對(duì)值，而是取決于實(shí)驗(yàn)條件，例如使用的濃度，其可以使用cheng-prusoff方程轉(zhuǎn)化為絕對(duì)抑制常數(shù)(ki)(biochem.pharmacol.(1973)22:3099)?？梢杂?jì)算其它抑制百分比參數(shù),例如ic70、ic90等。

“本發(fā)明化合物”和“式i化合物”包括式i化合物及其立體異構(gòu)體、幾何異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、溶劑化物、代謝物和可藥用的鹽。

本文中給出的任何分子式或結(jié)構(gòu)(包括式i化合物)也應(yīng)當(dāng)表示該化合物的水合物、溶劑化物和多晶型物以及它們的混合物。

本文中給出的任何分子式或結(jié)構(gòu)(包括式i化合物)也應(yīng)當(dāng)表示該化合物的未標(biāo)記形式以及同位素標(biāo)記形式。同位素標(biāo)記的化合物具有本文中給出的結(jié)構(gòu)式所描繪的結(jié)構(gòu)，但是其中的一或多個(gè)原子被具有選定原子或質(zhì)量數(shù)的原子所代替?？梢該饺氲奖景l(fā)明化合物中的同位素的示例包括氫、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，例如但不限于2h(氘,d)、3h(氚)、11c、13c、14c、15n、18f、31p、32p、35s、36cl和125i。本發(fā)明包括各種同位素標(biāo)記的本發(fā)明化合物，例如那些其中摻入放射性同位素(例如3h、13c和14c)的化合物。此類同位素標(biāo)記的化合物可以用于代謝研究、反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究、檢測(cè)或成像技術(shù)，例如正電子成像術(shù)(pet)或單光子發(fā)射計(jì)算機(jī)斷層成像術(shù)(spect)，包括用于藥物或底物組織分布實(shí)驗(yàn)或者用于患者的放射性治療。本發(fā)明的氘標(biāo)記的或取代的治療性化合物已經(jīng)提高了dmpk(藥物代謝和藥物動(dòng)力學(xué))特性，涉及分布、代謝和排泄(adme)。由于其具有較好的代謝穩(wěn)定性，采用較重同位素(特別是氘)的取代可以提供一定的治療上的益處，例如增加體內(nèi)半衰期或降低劑量需求。18f標(biāo)記的本發(fā)明化合物可以用于pet或spect研究。通常，可以根據(jù)下文所述實(shí)施例和制備方法中所公開(kāi)的方法，采用容易獲得的同位素標(biāo)記試劑代替非同位素標(biāo)記試劑，制備同位素標(biāo)記的本發(fā)明化合物及其前藥。另外，由于其具有較好的代謝穩(wěn)定性，采用較重同位素(特別是氘(即2h或d))的取代可以提供一定的治療上的益處，例如增加體內(nèi)半衰期或降低劑量需求或者改善治療指數(shù)。應(yīng)當(dāng)理解，在本文中氘可以被視為是式(i)化合物的取代基。此類較重同位素(特別是氘)的濃度可以通過(guò)同位素富集因子定義。在本發(fā)明的化合物中，沒(méi)有特別指定為具體同位素的任何原子應(yīng)當(dāng)表示該原子的任何穩(wěn)定的同位素。除非另有說(shuō)明，當(dāng)一個(gè)位置被特別指定為“h”或“氫”時(shí)，所述位置應(yīng)理解為其天然豐度同位素組成的氫。因此，在本發(fā)明化合物中，被特別指定為氘(d)的任何原子應(yīng)當(dāng)是表示氘。

吡唑甲酰胺化合物

本發(fā)明提供了式i的吡唑甲酰胺化合物及其藥物制劑，其可以有效地用于治療由btk調(diào)節(jié)的疾病和/或病癥。

式i化合物具有下列結(jié)構(gòu)或其立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體或其可藥用的鹽：

其中：

x為ch或n；

r¹、r²和r³獨(dú)立選自h、-c(o)nh2、c6-c20芳基、c3-c12碳環(huán)基、c2-c20雜環(huán)基、c1-c20雜芳基、-nh2、-nh-(c6-c20芳基)、-nh-(c1-c20雜芳基)、-c(o)-(c1-c12烷基)、-c(o)-(c3-c12碳環(huán)基)、-nh-(c1-c12亞烷基)-(c2-c20雜環(huán)基)、-nh-(c1-c20雜芳基)-(c2-c20雜環(huán)基)、-nhc(o)-(c3-c12碳環(huán)基)、-nhc(o)-(c1-c12烷基)、-(c6-c20芳基)-c(o)-(c2-c20雜環(huán)基)和-(c1-c20雜芳基)-(c2-c20雜環(huán)基)；

或r¹和r²任選形成稠合的6元芳基、碳環(huán)基、雜環(huán)基或雜芳基環(huán)；

至少一個(gè)r¹、r²和r³為-c(o)nh2；

r⁴選自h、f、cl、cn、-ch2oh、-ch(ch3)oh、-c(ch3)2oh、-ch(cf3)oh、-ch2f、-chf2、-ch2chf2、-cf3、-c(o)nh2、-c(o)nhch3、-c(o)n(ch3)2、-nh2、-nhch3、-n(ch3)2、-nhc(o)ch3、-oh、-och3、-och2ch3、-och2ch2oh、環(huán)丙基、環(huán)丙基甲基、1-羥基環(huán)丙基、咪唑基、吡唑基、3-羥基-氧雜環(huán)丁烷-3-基、氧雜環(huán)丁烷-3-基和氮雜環(huán)丁烷-1-基；

r⁵為h、f、cl或cn；

r⁶選自下列結(jié)構(gòu)：

其中波浪線表示連接點(diǎn)；并且

烷基、碳環(huán)基、雜環(huán)基、芳基和雜芳基任選被一或多個(gè)獨(dú)立選自下列的基團(tuán)取代：f、cl、br、i、-cn、-ch3、-ch2ch3、-ch(ch3)2、-ch2ch(ch3)2、-ch2nh2、-ch2nhch3、-ch2n(ch3)2、-ch2oh、-ch2och3、-ch2ch2oh、-c(ch3)2oh、-ch(oh)ch(ch3)2、-c(ch3)2ch2oh、-ch2ch2so2ch3、-ch2op(o)(oh)2、-ch2f、-chf2、-cf3、-ch2cf3、-ch2chf2、-ch(ch3)cn、-c(ch3)2cn、-ch2cn、-co2h、-coch3、-co2ch3、-co2c(ch3)3、-coch(oh)ch3、-conh2、-conhch3、-con(ch3)2、-conh(ch2ch2n(ch3)2)、-c(ch3)2conh2、-nh2、-nhch3、-n(ch3)2、-nhcoch3、-n(ch3)coch3、-nhs(o)2ch3、-n(ch3)c(ch3)2conh2、-n(ch3)ch2ch2s(o)2ch3、-no2、＝o、-oh、-och3、-och2ch3、-och2ch2och3、-och2ch2oh、-och2ch2n(ch3)2、-op(o)(oh)2、-s(o)2n(ch3)2、-sch3、-s(o)2ch3、-s(o)3h、環(huán)丙基、氧雜環(huán)丁基、氮雜環(huán)丁基、1-甲基氮雜環(huán)丁烷-3-基)氧基、n-甲基-n-氧雜環(huán)丁烷-3-基氨基、氮雜環(huán)丁烷-1-基甲基、吡咯烷-1-基和嗎啉代。

式i化合物的典型的實(shí)施方案包括其中x為n.

式i化合物的典型的實(shí)施方案包括其中x為ch.

式i化合物的典型的實(shí)施方案包括其中r¹為-c(o)nh2.

式i化合物的典型的實(shí)施方案包括其中r²為-c(o)nh2。

式i化合物的典型的實(shí)施方案包括其中r³為-c(o)nh2。

式i化合物的典型的實(shí)施方案包括其中r¹、r²和r³中的一個(gè)為-nh-(c6-c20芳基)或-nh-(c1-c20雜芳基),其中芳基和雜芳基任選被一或多個(gè)獨(dú)立選自下列的基團(tuán)取代：f、cl、br、i、-cn、-ch3、-ch2ch3、-ch(ch3)2、-ch2ch(ch3)2、-ch2nh2、-ch2nhch3、-ch2n(ch3)2、-ch2oh、-ch2och3、-ch2ch2oh、-c(ch3)2oh、-ch(oh)ch(ch3)2、-c(ch3)2ch2oh、-ch2ch2so2ch3、-ch2op(o)(oh)2、-ch2f、-chf2、-cf3、-ch2cf3、-ch2chf2、-ch(ch3)cn、-c(ch3)2cn、-ch2cn、-co2h、-coch3、-co2ch3、-co2c(ch3)3、-coch(oh)ch3、-conh2、-conhch3、-con(ch3)2、-conh(ch2ch2n(ch3)2)、-c(ch3)2conh2、-nh2、-nhch3、-n(ch3)2、-nhcoch3、-n(ch3)coch3、-nhs(o)2ch3、-n(ch3)c(ch3)2conh2、-n(ch3)ch2ch2s(o)2ch3、-no2、＝o、-oh、-och3、-och2ch3、-och2ch2och3、-och2ch2oh、-och2ch2n(ch3)2、-op(o)(oh)2、-s(o)2n(ch3)2、-sch3、-s(o)2ch3、-s(o)3h、環(huán)丙基、氧雜環(huán)丁基、氮雜環(huán)丁基、1-甲基氮雜環(huán)丁烷-3-基)氧基、n-甲基-n-氧雜環(huán)丁烷-3-基氨基、氮雜環(huán)丁烷-1-基甲基、吡咯烷-1-基和嗎啉代。

式i化合物的典型的實(shí)施方案包括其中r⁴為-ch2oh。

式i化合物的典型的實(shí)施方案包括其中r⁵為h。

式i化合物的典型的實(shí)施方案包括其中r⁶為：

式i化合物的典型的實(shí)施方案包括其中r⁶為：

式i化合物的典型的實(shí)施方案包括其中所述化合物選自表1。

本發(fā)明的式i化合物可以包含不對(duì)稱或手性中心，因此存在不同的立體異構(gòu)體形式。本發(fā)明化合物的所有立體異構(gòu)形式應(yīng)當(dāng)包括但不限于非對(duì)映異構(gòu)體、對(duì)映異構(gòu)體和阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體以及它們的混合物(例如外消旋混合物)，它們構(gòu)成了本發(fā)明的一部分。在某些情況下，立體化學(xué)尚未確定，或者臨時(shí)(provisionally)指定。

此外，本發(fā)明包括所有非對(duì)映體，包括順-反(幾何)和構(gòu)象異構(gòu)體。例如，如果式i化合物包含雙鍵或稠合的環(huán)，則順式-和反式-形式以及它們的混合物均包含在本發(fā)明的范圍內(nèi)。

在本文所示的結(jié)構(gòu)中，當(dāng)未指定任何具體手性原子的立體化學(xué)時(shí)，則應(yīng)當(dāng)考慮所有立體異構(gòu)體并且包括在本發(fā)明的化合物中。當(dāng)立體化學(xué)通過(guò)用代表特定構(gòu)型的實(shí)楔或虛線表示時(shí)，則該立體異構(gòu)體如此指定和定義。

本發(fā)明化合物可以以非溶劑化物或可藥用的溶劑的溶劑化物形式存在，所述溶劑為例如水、乙醇等，本發(fā)明應(yīng)當(dāng)涵蓋溶劑化和非溶劑化這兩種形式。

本發(fā)明化合物也可以存在不同的互變異構(gòu)形式，所有這些形式均包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。術(shù)語(yǔ)“互變異構(gòu)體”或“互變異構(gòu)形式”是指可以經(jīng)由低能壘互相轉(zhuǎn)化的不同能量的結(jié)構(gòu)異構(gòu)體。例如，質(zhì)子互變異構(gòu)體(也稱為質(zhì)子異變互變異構(gòu)體)包括經(jīng)由質(zhì)子遷移的互變現(xiàn)象，如酮-烯醇和亞胺-烯胺的異構(gòu)化?；蟽r(jià)互變異構(gòu)體包括通過(guò)某些結(jié)合電子的重排的互變現(xiàn)象。

生物學(xué)評(píng)價(jià)

作為酶活性(或其它生物學(xué)活性)抑制劑的式ⅰ化合物的相對(duì)功效可以通過(guò)測(cè)定每個(gè)化合物抑制所述活性至預(yù)定程度的濃度然后比較獲得的結(jié)果進(jìn)行確定。通常，優(yōu)選的測(cè)定為在生化測(cè)定中抑制活性達(dá)50％的濃度，即50％抑制濃度或“ic50”。ic50值的測(cè)定可使用本領(lǐng)域中已知的常規(guī)技術(shù)來(lái)完成。在一般情況下，ic50值可以通過(guò)測(cè)定所研究的抑制劑濃度范圍內(nèi)給定酶的活性來(lái)確定。然后使用實(shí)驗(yàn)獲得的酶活性的值對(duì)使用的抑制劑的濃度作圖。顯示50％的酶活性(相對(duì)于不存在任何抑制劑的活性)的抑制劑的濃度作為ic50值。類似地，其它抑制劑濃度可通過(guò)適當(dāng)?shù)幕钚詼y(cè)定確定。例如，在某些情況下，可以確定90％抑制濃度，即ic90等。

i化合物可以通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)生物化學(xué)btk激酶試驗(yàn)(實(shí)施例901)測(cè)試。

可以用于測(cè)試式i化合物的標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞btk激酶試驗(yàn)的通用方法為ramos細(xì)胞btk試驗(yàn)(實(shí)施例902)。

標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞b-細(xì)胞增生試驗(yàn)可以用于測(cè)試式i化合物與源自balb/c小鼠脾臟純化的b-細(xì)胞(實(shí)施例903)。

標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞t-細(xì)胞增生試驗(yàn)可以用于測(cè)試式i化合物與源自balb/c小鼠脾臟純化的t-細(xì)胞(實(shí)施例904)。

式i化合物的cd86抑制試驗(yàn)可以通過(guò)采用純化自8-16周齡balb/c小鼠脾臟的小鼠全脾細(xì)胞的抑制b細(xì)胞活性進(jìn)行(實(shí)施例905)。

式i化合物的b-all細(xì)胞存活試驗(yàn)可以通過(guò)測(cè)定在培養(yǎng)基中存活的b-all細(xì)胞數(shù)進(jìn)行(實(shí)施例906)。

式i化合物的cd69全血試驗(yàn)可以通過(guò)測(cè)定化合物抑制通過(guò)表面igm與山羊f(ab’)2抗人igm的交聯(lián)激活人全血中b淋巴細(xì)胞的cd69的產(chǎn)生的能力進(jìn)行(實(shí)施例907)。cd69為與淋巴細(xì)胞遷移和細(xì)胞因子分泌有關(guān)的一類iic-型凝聚素。cd69表達(dá)代表了白細(xì)胞激活的最初可獲得的標(biāo)識(shí)之一，其快速誘導(dǎo)通過(guò)轉(zhuǎn)錄激活發(fā)生(vazquez等(2009)jour.ofimmunologypublishedoctober19,2009,doi:10.4049/jimmunol.0900839)。通過(guò)選擇性btk抑制劑的抗原受體刺激的濃度依賴性抑制能夠誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞激活標(biāo)記物cd69的細(xì)胞表面表達(dá)(honigberg等(2010)proc.natl.acad.sci.107(29):13075－13080)。因此，通過(guò)選擇性btk抑制劑的cd69抑制可能與某些b-細(xì)胞疾病的療效有關(guān)。在表1中給出了示例性式i化合物的cd69hubloodfacsic70值。

式i化合物的抗炎作用也可以通過(guò)小鼠或大鼠的膠原蛋白誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎(cia)試驗(yàn)測(cè)試(williamro(2004)methodsofmol.med.98:207－216)。膠原蛋白誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(ra)的動(dòng)物模型，其被廣泛用于解決疾病發(fā)病機(jī)理的問(wèn)題并驗(yàn)證治療靶點(diǎn)。關(guān)節(jié)炎通常通過(guò)在輔助劑中采用自體或異源ii型膠原蛋白進(jìn)行免疫作用在小鼠或大鼠中誘導(dǎo)產(chǎn)生。對(duì)膠原蛋白誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎的易感性與主要組織相容性復(fù)合物ii型基因密切相關(guān)，關(guān)節(jié)炎的發(fā)展伴隨著健康t-和b-細(xì)胞對(duì)ii型膠原蛋白的響應(yīng)。cia的主要病理性特征包括具有多形核和單核細(xì)胞滲透、關(guān)節(jié)翳形成、軟骨退化、骨侵蝕和纖維化的增生性滑膜炎。在ra中，促炎性細(xì)胞因子(例如腫瘤壞死因子α(tnfα)和白介素(il)-1β)在cia小鼠的患關(guān)節(jié)炎的關(guān)節(jié)中大量表達(dá)，這些分子的阻斷導(dǎo)致了疾病嚴(yán)重程度的降低。采用式i化合物的制劑注入試驗(yàn)對(duì)象的尾端，通過(guò)全身性給予在不完全佐劑(incompletefreundadjuvant)中的膠原蛋白使得關(guān)節(jié)炎的發(fā)作同步發(fā)生(升高)。爪子和肢體關(guān)節(jié)的炎癥采用包括爪子評(píng)價(jià)的計(jì)分系統(tǒng)量化。

式i的示例性化合物的細(xì)胞毒性或細(xì)胞抑制活性可以如下測(cè)定：在細(xì)胞培養(yǎng)基中建立增生的哺乳動(dòng)物腫瘤細(xì)胞系，加入式i化合物，將細(xì)胞培養(yǎng)約6小時(shí)至約5天；和測(cè)定細(xì)胞存活力(實(shí)施例908)。基于細(xì)胞的體外測(cè)定用于測(cè)定存活力，即增生(ic50)、細(xì)胞毒性(ec50)和細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)(半胱天冬酶激活)，其可以用于預(yù)測(cè)對(duì)血液惡性腫瘤和實(shí)體瘤的臨床療效。

式i化合物與化療藥物的組合的體外效能可以通過(guò)實(shí)施例908的細(xì)胞增生試驗(yàn)測(cè)定；發(fā)光細(xì)胞存活力試驗(yàn),購(gòu)自promegacorp.,madison,wi。該均相試驗(yàn)方法基于鞘翅目縈光素酶的重組表達(dá)(us5583024；us5674713；us5700670)，基于存在的atp(一種代謝活化的細(xì)胞的指示劑)量化方法測(cè)定培養(yǎng)基中存活細(xì)胞數(shù)(crouch等(1993)j.immunol.meth.160:81－88；us6602677)。試驗(yàn)以96或384孔模式進(jìn)行，使其適合于進(jìn)行自動(dòng)化高通量篩選(hts)(cree等(1995)anticancerdrugs6:398－404)。該均相試驗(yàn)方法包括直接向補(bǔ)充有血清的介質(zhì)中培養(yǎng)的細(xì)胞中加入單一試劑(reagent)。無(wú)需細(xì)胞洗滌、介質(zhì)除去以及多次移液步驟。加入試劑并混合后，10分鐘系統(tǒng)檢測(cè)384孔模式中的少至15個(gè)細(xì)胞/孔。

均相“加入-混合-檢測(cè)”模式導(dǎo)致細(xì)胞裂解，發(fā)光信號(hào)的產(chǎn)生與存在的atp量成比例。atp的量與培養(yǎng)基中存在的細(xì)胞數(shù)成正比。試驗(yàn)產(chǎn)生了“光暈型”發(fā)光信號(hào)，由縈光素酶反應(yīng)產(chǎn)生，其半衰期通常大于5小時(shí)，這取決于細(xì)胞類型和使用的介質(zhì)。存活細(xì)胞體現(xiàn)為相對(duì)發(fā)光單位(rlu)。底物(beetle縈光素)通過(guò)重組螢火蟲(chóng)縈光素酶氧化脫羧，同時(shí)atp轉(zhuǎn)化為amp并產(chǎn)生光子。半衰期的延長(zhǎng)不再需要使用試劑注射器，提供了多個(gè)板的連續(xù)的或批模式處理的靈活性。該細(xì)胞增生試驗(yàn)可以采用各種多孔模式進(jìn)行，例如96或384孔模式。通過(guò)光度計(jì)或ccd像機(jī)成像設(shè)備記錄數(shù)據(jù)。發(fā)光輸出表示為隨時(shí)間變化的相對(duì)光度單位(rlu)。

式i的示例性化合物及其與化療藥物的組合的抗增生性效能可以通過(guò)對(duì)抗某些血液學(xué)腫瘤細(xì)胞系的試驗(yàn)(實(shí)施例908)測(cè)定。確定試驗(yàn)化合物和組合產(chǎn)品的ec50值。

根據(jù)本發(fā)明的方法制備、表征表1中的典型式i化合物并測(cè)試其btk的抑制，其具有下列結(jié)構(gòu)及相應(yīng)的名稱(chemdrawultra,version11.0.1,和chembiodraw,version11.0,cambridgesoftcorp.,cambridgema)。當(dāng)式i化合物或中間體具有一個(gè)以上的名稱時(shí)，則用化學(xué)結(jié)構(gòu)定義該化合物。

在與btk結(jié)合中以及在cd69全血試驗(yàn)中，表1中的示例性式i化合物顯示了與對(duì)抗某些b細(xì)胞疾病療效有關(guān)的令人驚奇的和出乎意料的特性。

表1.

式i化合物的給藥

本發(fā)明化合物可通過(guò)適合于待治療的病癥的任何途徑給藥。適當(dāng)?shù)耐緩桨诜?、腸胃外(包括皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、皮內(nèi)、鞘內(nèi)和硬膜外)、透皮、直腸、鼻、局部(包括口腔和舌下)、陰道、腹膜內(nèi)、肺內(nèi)和鼻內(nèi)。對(duì)于局部免疫抑制治療而言，該化合物可通過(guò)病灶內(nèi)給藥，包括灌注或在移植前采用抑制劑以其它方式與移植物接觸。應(yīng)當(dāng)理解，優(yōu)選的途徑可以例如根據(jù)接收者的條件而改變。當(dāng)該化合物口服給藥時(shí)，它可以與可藥用的載體或賦形劑一起配制成丸劑、膠囊劑、片劑等。當(dāng)化合物腸胃外給藥時(shí)，其可以與可藥用的腸胃外載體一起以單位劑量可注射形式配制，如下文詳述。

治療人類患者的劑量范圍為約10mg至約1000mg的式i化合物。典型劑量可以為約100mg至約300mg的化合物。劑量可以為每日一次(qid)給藥，每天兩次(bid)給藥或更頻繁給藥，這取決于藥物代謝動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué)性質(zhì)，包括具體化合物的吸收、分布、代謝和排泄。此外，毒性因素可能影響劑量和給藥方案。當(dāng)口服給藥時(shí)，丸劑、膠囊或片劑可每日攝入或者在指定的時(shí)間段內(nèi)較不頻繁地?cái)z入。該方案可以重復(fù)多個(gè)治療周期。

式i化合物的治療方法

本發(fā)明的式i化合物可以用于治療患有由與btk的相關(guān)的異常細(xì)胞生長(zhǎng)、功能或行為引發(fā)的疾病或病癥的人或動(dòng)物患者，因此，例如免疫疾病、心血管疾病、病毒感染、炎癥、代謝/內(nèi)分泌疾病或神經(jīng)性疾病也可以通過(guò)包括給予如上文所定義的本發(fā)明化合物的方法進(jìn)行治療?；加邪┌Y的人類或動(dòng)物患者也可以通過(guò)包括給予如上文所定義的本發(fā)明化合物的方法進(jìn)行治療。患者的病癥由此可以提高或改善。

式i化合物可以在體外、原位和體內(nèi)用于診斷或治療哺乳動(dòng)物細(xì)胞、器官或相關(guān)病理學(xué)病癥，例如全身和局部炎癥、免疫-炎性疾病如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、免疫抑制、器官移植排斥、過(guò)敏、潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩病、皮炎、哮喘、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、干燥綜合征、多發(fā)性硬化、硬皮病/系統(tǒng)性硬化、特發(fā)性血小板減少性紫癜(itp)、抗中性粒細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)抗體(anca)血管炎、慢性阻塞性肺病(copd)、銀屑病和用于一般關(guān)節(jié)保護(hù)作用。

本發(fā)明的方法也包括治療此類疾病，例如關(guān)節(jié)炎疾病，如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、單關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎、脊椎炎；behcet?。粩⊙Y、敗血性休克、內(nèi)毒素性休克、革蘭氏陰性敗血癥、革蘭氏陽(yáng)性敗血癥、中毒性休克綜合征；繼發(fā)于敗血癥的多器官損傷綜合征、創(chuàng)傷或出血；眼部疾病，例如過(guò)敏性結(jié)膜炎、春季結(jié)膜炎、葡萄膜炎和甲狀腺相關(guān)眼?。皇人嵝匀庋磕[；肺或呼吸道病癥，例如哮喘、慢性支氣管炎、過(guò)敏性鼻炎、ards、慢性肺部炎性疾病(例如慢性阻塞性肺病)、矽肺、肺結(jié)節(jié)病、胸膜炎、肺泡炎、脈管炎、肺氣腫、肺炎、支氣管擴(kuò)張和肺氧中毒；心肌、腦或四肢的再灌注損傷；纖維化，例如囊性纖維化；瘢痕疙瘩形成或瘢痕組織形成；動(dòng)脈粥樣硬化；自身免疫疾病，例如系統(tǒng)性紅斑狼瘡(sle)、自身免疫性甲狀腺炎、多發(fā)性硬化、某些形式的糖尿病和雷諾氏綜合征；移植排斥疾病，例如gvhd和異種移植排斥反應(yīng)；慢性腎小球腎炎；炎性腸病，例如慢性炎癥性腸病(cibd)、克羅恩氏病、潰瘍性結(jié)腸炎和壞死性小腸結(jié)腸炎；炎性皮膚病，例如接觸性皮炎、特應(yīng)性皮炎、牛皮癬或蕁麻疹；發(fā)熱和由于感染導(dǎo)致的肌痛；中樞或外周神經(jīng)系統(tǒng)的炎性病癥，例如腦膜炎、腦炎、由于微小創(chuàng)傷導(dǎo)致的腦或脊髓損傷；干燥綜合征；涉及白細(xì)胞滲出的疾?。痪凭愿窝?；細(xì)菌性肺炎；抗原-抗體復(fù)合物介導(dǎo)的疾??；低血容量性休克；i型糖尿??；急性和遲發(fā)性超敏反應(yīng)；由于白細(xì)胞失調(diào)和轉(zhuǎn)移導(dǎo)致的疾病狀態(tài)；熱損傷；粒細(xì)胞輸血相關(guān)綜合癥；細(xì)胞因子誘導(dǎo)的毒性。

本發(fā)明的方法還包括治療選自下列的癌癥：乳腺癌、卵巢癌、宮頸癌、前列腺癌、睪丸癌、生殖泌尿道癌、食道癌、喉癌、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、胃癌、皮膚癌、角化棘皮瘤、肺癌、鱗狀細(xì)胞癌、大細(xì)胞癌、非小細(xì)胞肺癌(nsclc)、小細(xì)胞癌、肺腺癌、骨癌、結(jié)腸癌、腺瘤、胰腺癌、腺癌、甲狀腺癌、濾泡癌、未分化癌、乳頭狀癌、精原細(xì)胞瘤、黑素瘤、肉瘤、膀胱癌、肝癌和膽道癌、腎癌、胰腺癌、骨髓疾病、淋巴瘤、毛細(xì)胞癌、口腔癌、鼻咽癌、咽癌、唇癌、舌癌、口癌、小腸癌、結(jié)腸-直腸癌、大腸癌、直腸癌、腦和中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌、霍奇金病、白血病、支氣管癌、甲狀腺癌、肝和肝內(nèi)膽管癌、肝細(xì)胞癌、胃癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤/成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、子宮內(nèi)膜癌、黑色素瘤、腎和腎盂癌、膀胱癌、子宮體癌、子宮頸癌、多發(fā)性骨髓瘤、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、淋巴細(xì)胞性白血病、慢性淋巴性白血病(cll)、骨髓性白血病、口腔和咽癌、非霍奇金淋巴瘤、黑素瘤和絨毛狀結(jié)腸腺瘤。

本發(fā)明的方法可以有效地用于治療患有或可能患有再灌注損傷的個(gè)體，即其中組織或器官經(jīng)歷一段時(shí)間局部缺血隨后再灌注的情況下產(chǎn)生的傷害。術(shù)語(yǔ)“缺血”是指由于動(dòng)脈血流入阻塞導(dǎo)致的局部組織貧血。再灌注后短暫性局部缺血通過(guò)受影響部位血管內(nèi)皮細(xì)胞特征性地導(dǎo)致中性粒細(xì)胞活化和遷移。然后活化的中性粒細(xì)胞的集聚又導(dǎo)致了反應(yīng)性氧代謝物的產(chǎn)生，這損壞了相關(guān)組織或器官的組成成分?！霸俟嘧p傷”的這種現(xiàn)象通常與下列病癥有關(guān)：例如血管性中風(fēng)(包括全身性和局部缺血)、失血性休克、心肌缺血或梗塞、器官移植和腦血管痙攣。舉例說(shuō)明，一旦心臟無(wú)法接收血液，那么當(dāng)開(kāi)始心臟再灌注時(shí)，再灌注損傷就會(huì)發(fā)生在心臟搭橋手術(shù)終止時(shí)或在心臟驟停期間。預(yù)期btk活性的抑制可以導(dǎo)致在這種情況下減少再灌注損傷的量。

藥物制劑

為了使用本發(fā)明化合物對(duì)哺乳動(dòng)物(包括人)進(jìn)行治療性治療，通常將其按照標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)實(shí)踐配制為藥物組合物。根據(jù)本發(fā)明的這一方面，提供了藥用組合物，其包含本發(fā)明化合物以及與之結(jié)合的可藥用的稀釋劑或載體。

典型的制劑可以通過(guò)將本發(fā)明化合物與載體、稀釋劑或賦形劑混合來(lái)制備。適當(dāng)?shù)妮d體、稀釋劑和賦形劑是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，包括下列材料：如碳水化合物、蠟類、水溶性和/或可溶脹聚合物、親水性或疏水性材料、明膠、油、溶劑、水等。使用的具體的載體、稀釋劑或賦形劑取決于應(yīng)用本發(fā)明化合物的方式和目的。溶劑通常選擇本領(lǐng)域技術(shù)人員公認(rèn)為可以安全(gras)給藥于哺乳動(dòng)物的溶劑。在一般情況下，安全的溶劑是無(wú)毒的水性溶劑，例如水和其它可在水中溶解或混溶的無(wú)毒溶劑。適當(dāng)?shù)乃匀軇┌ㄋ⒁掖?、丙二醇、聚乙二?例如peg400、peg300)等以及它們的混合物。該制劑還可以包含一種或多種緩沖劑、穩(wěn)定劑、表面活性劑、潤(rùn)濕劑、潤(rùn)滑劑、乳化劑、懸浮劑、防腐劑、抗氧化劑、遮光劑、助流劑、加工助劑、著色劑、甜味劑、芳香劑、矯味劑和其它已知的添加劑，從而可以提供具有良好外觀的藥物(即本發(fā)明化合物或其藥物組合物)或用于生產(chǎn)藥用產(chǎn)品(即藥物)的輔料。

所述制劑可以使用常規(guī)的溶解和混合方法來(lái)制備。例如，在一種或多種的上述輔料存在下，將批量藥物(即本發(fā)明化合物或穩(wěn)定形式的該化合物(例如，與環(huán)糊精衍生物或其它已知的絡(luò)合劑的復(fù)合物))溶解在適當(dāng)?shù)娜軇┲?。本發(fā)明化合物通常配制成藥物劑型，以提供藥物的容易控制的劑量并且使得患者順應(yīng)處方的治療方案。

應(yīng)用的藥物組合物(或制劑)可以包裝成各種形式，這取決于給藥的方法。一般而言，用于配送的物品包括以適當(dāng)?shù)男问皆谄渲惺⒎潘幬镏苿┑娜萜?。適當(dāng)?shù)娜萜魇潜绢I(lǐng)域技術(shù)人員公知的，包括例如瓶(塑料和玻璃)、小袋、安瓿、塑料袋、金屬圓筒等。容器還可以包括防干擾(tamper-proof)配備，以防止對(duì)包裝內(nèi)容物的不慎接觸。此外，在該容器上有描述容器的內(nèi)含物的標(biāo)簽。標(biāo)簽還可以包括適當(dāng)?shù)木嬗谜Z(yǔ)。

本發(fā)明化合物的藥物制劑可以制備用于各種途徑和類型的給藥備。例如，具有期望純度的式i化合物可任選與可藥用的稀釋劑、載體、賦形劑或穩(wěn)定劑(雷明頓藥物科學(xué)(remington'spharmaceuticalsciences)(1980)第16版,osol,a.ed.)混合，制成凍干制劑形式、研磨的粉末或水溶液。在環(huán)境溫度下、在適當(dāng)?shù)膒h值下、以需要的純度，制劑可以通過(guò)與生理學(xué)可接受的載體混合進(jìn)行，即在使用的劑量和濃度下對(duì)接受者是無(wú)毒的載體。所述制劑的ph主要取決于具體用途和化合物的濃度，但其范圍可為約3至約8。適當(dāng)?shù)膶?shí)施方案是在ph5的乙酸鹽緩沖液中的制劑。

化合物通常可以存儲(chǔ)為固體組合物、凍干制劑或水溶液。

本發(fā)明的藥用組合物可以根據(jù)良好醫(yī)療實(shí)踐的方式配制、給藥和施用，即給藥的量、濃度、方案、周期、載體和途徑。在此背景下考慮的因素包括特定待治療的病癥、待治療的具體哺乳動(dòng)物、個(gè)體患者的臨床狀況、病癥的起因、遞送藥劑的部位、施藥的方法、施藥方案以及醫(yī)師公知的其它因素。待給藥的化合物的“治療有效量”取決于此類多種因素，并且是改善或治療過(guò)度增生性疾病所必需的最小量。

作為一般建議，每次非胃腸道給藥的抑制劑的初始藥物有效量的范圍為約0.01－100mg/kg，即約0.1至20mg/kg患者體重，使用的化合物的典型初始劑量范圍為0.3至15mg/kg/天。

可接受的稀釋劑、載體、賦形劑和穩(wěn)定劑在使用的劑量和濃度下對(duì)接受者是無(wú)毒的，包括緩沖劑，例如磷酸鹽、檸檬酸鹽和其它有機(jī)酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸和甲硫氨酸；防腐劑(如十八烷基二甲基芐基氯化銨；氯化六甲雙銨；苯扎氯銨、芐索氯銨；苯酚，丁基或芐基醇；對(duì)羥基苯甲酸烷基酯，例如對(duì)羥基苯甲酸甲基或丙基酯；兒茶酚；間苯二酚；環(huán)己醇；3-戊醇；和間甲酚)；低分子量(低于約10個(gè)殘基)多肽；蛋白質(zhì)，如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、組氨酸、精氨酸或賴氨酸；單糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，如edta；糖，如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成鹽反離子，如鈉；金屬絡(luò)合物(例如zn-蛋白質(zhì)復(fù)合物)；和/或非離子表面活性劑，例如tween^tm、pluronics^tm或聚乙二醇(peg)。在膠體藥物傳遞系統(tǒng)(例如脂質(zhì)體、白蛋白微球、微乳、納米顆粒和納米膠囊)或在大珠滴乳液(macroemulsions)中，活性藥物成分也可以包封在制備的微囊中，例如通過(guò)凝聚技術(shù)或通過(guò)界面聚合技術(shù)制備，分別例如羥甲基纖維素或明膠微囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微囊。此類技術(shù)公開(kāi)于《雷明頓藥物科學(xué)》，第16版,osol,a.ed.(1980)。

可以制備式i化合物的緩釋制劑。緩釋制劑的適當(dāng)?shù)氖纠ê惺絠化合物的固體疏水聚合物的半滲透基質(zhì)，該基質(zhì)是成形制品，例如薄膜或微囊形式。緩釋基質(zhì)的示例包括聚酯、水凝膠(例如聚(2-羥乙基-甲基丙烯酸酯)或聚(乙烯醇))、聚乳酸(us3773919)、l-谷氨酸和γ-乙基l-谷氨酸酯的共聚物、不可降解的乙烯-乙酸乙烯酯、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物例如luprondepot^tm(由乳酸-乙醇酸共聚物和醋酸亮丙瑞林組成的注射用微球)和聚-d-(-)-3-羥基丁酸。

所述制劑包括適合于本文中詳述的給藥途徑的那些制劑。所述制劑可以方便地以單位劑型存在，可以通過(guò)藥學(xué)領(lǐng)域中公知的任何方法來(lái)制備。技術(shù)和制劑通常可以發(fā)現(xiàn)于《雷明頓藥物科學(xué)》(remington'spharmaceuticalsciences)(mackpublishingco.,easton,pa)。此類方法包括將活性成分與由一種或多種輔料成分組成的載體一起混合的步驟。一般而言，制劑可以通過(guò)如下方法制備：使得活性成分與液體載體或細(xì)粉固體載體或它們兩者均勻地和緊密地結(jié)合，然后，如果需要的話，使產(chǎn)物成形。

適于口服給藥的式i化合物的制劑可以制備為離散的單位，例如丸劑、膠囊劑、扁囊劑或片劑，其各自含有預(yù)定量的式i化合物。壓制片劑可以通過(guò)在適當(dāng)?shù)臋C(jī)器中將自由流動(dòng)形式(如粉末或顆粒)的活性成分壓縮來(lái)制備，上述成分可以任選與粘合劑、潤(rùn)滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、表面活性劑或分散劑混合。模制片劑可以通過(guò)在適當(dāng)?shù)臋C(jī)器中將用惰性液體稀釋劑潤(rùn)濕的粉末狀活性成分的混合物模制來(lái)制備。所述片劑可以任選進(jìn)行包衣或刻痕，任選進(jìn)行配制以提供活性成分的緩慢或控制釋放?？梢灾苽溆糜诳诜钠瑒?、錠劑、水性或油性混懸劑、可分散粉末或顆粒劑、乳劑、硬或軟膠囊例如明膠膠囊、糖漿劑或酏劑。用于口服使用的式i化合物的制劑可根據(jù)本領(lǐng)域已知的用于生產(chǎn)藥物組合物的任何方法制備，此類組合物可以含有一種或多種成分，包括甜味劑、矯味劑、著色劑和防腐劑，以便于提供適口的制劑。含有活性成分以及與之混合的適合于生產(chǎn)片劑的無(wú)毒的可藥用賦形劑的片劑是可以接受的。這些賦形劑可以是例如惰性稀釋劑，如碳酸鈣或碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉；成粒劑和崩解劑，如玉米淀粉或海藻酸；結(jié)合劑，如淀粉、明膠或阿拉伯膠；潤(rùn)滑劑，如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石粉。片劑可以是未包衣的，或者可以通過(guò)已知技術(shù)進(jìn)行包衣(包括微囊化)以延遲在胃腸道中的崩解和吸收，從而提供較長(zhǎng)時(shí)間的持續(xù)作用。例如，可以采用延時(shí)材料，例如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯單獨(dú)使用，或者與蠟類一起使用。

對(duì)于治療眼睛或其它外部組織而言，例如口腔和皮膚，制劑優(yōu)選采用含有活性成分的局部軟膏劑或乳膏，所述活性成分的量為0.075至20％w/w。當(dāng)在軟膏劑中配制時(shí)，活性成分可以與石蠟或水可混溶的軟膏基質(zhì)一起使用?；蛘?，活性成分可以與水包油乳膏基質(zhì)一起配制成乳膏。如果需要，乳膏基質(zhì)的水相可以包括多元醇，即具有兩個(gè)或多個(gè)羥基的醇，例如丙二醇、丁-1,3-二醇、甘露醇、山梨醇、甘油和聚乙二醇(包括peg400)以及它們的混合物。外用制劑最好可以包含能夠促進(jìn)活性成分通過(guò)皮膚或其它受影響部位的吸收或滲透的化合物。此類皮膚滲透促進(jìn)劑的示例包括二甲基亞砜及其相關(guān)類似物。本發(fā)明的乳劑的油相可以通過(guò)已知的方式由已知成分構(gòu)成。當(dāng)相僅包含一種乳化劑時(shí)，其最好包含至少一種乳化劑與脂肪或油或者與脂肪和油兩者一起的混合物。優(yōu)選，同時(shí)包含親水性乳化劑與作為穩(wěn)定劑的親脂性乳化劑。還優(yōu)選同時(shí)包含油和脂肪。含有或不含有穩(wěn)定劑的乳化劑組成了所謂的乳化蠟，該蠟與油和脂肪一起組成所謂的乳化軟膏基質(zhì)，其形成乳膏制劑的油分散相。適用于本發(fā)明的制劑使用的乳化劑和乳劑穩(wěn)定劑包括60、80、鯨蠟硬脂醇、芐醇、肉豆蔻醇、單硬脂酸甘油酯和月桂基硫酸鈉。

式i化合物的水性混懸液含有活性物質(zhì)以及與之混合的適于制備水性混懸液的賦形劑。此類賦形劑包括助懸劑，如羧甲基纖維素鈉、交聯(lián)羧甲基纖維素、聚維酮、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮、黃蓍膠和阿拉伯膠；分散劑或潤(rùn)濕劑，如天然存在的磷脂(例如卵磷脂)，環(huán)氧烷烴與脂肪酸的縮合產(chǎn)物(如聚氧乙烯硬脂酸酯)、環(huán)氧乙烷與長(zhǎng)鏈脂族醇(例如十七乙烯氧基鯨蠟醇(heptadecaethyleneoxycetanol))的縮合產(chǎn)物、環(huán)氧乙烷與衍生自脂肪酸和己糖醇酐的部分酯的縮合產(chǎn)物(如聚氧乙烯山梨醇單油酸酯)。水性懸浮液還可以含有一種或多種防腐劑(例如乙基或正丙基對(duì)羥基苯甲酸酯)、一種或多種著色劑、一種或多種調(diào)味劑和一種或多種甜味劑(例如蔗糖或糖精)。

式i化合物的藥用組合物可以是無(wú)菌注射制劑的形式，例如無(wú)菌可注射水性或油性混懸液。該混懸液可以根據(jù)本領(lǐng)域中已知的方法采用如上所述的那些適當(dāng)?shù)姆稚┗驖駶?rùn)劑和助懸劑制備。無(wú)菌可注射制劑還可以是在無(wú)毒的腸胃外可接受的稀釋劑或溶劑中的無(wú)菌注射溶液或混懸液，例如在1,3-丁二醇中的溶液，或作為凍干粉末制備?？梢允褂玫目山邮艿慕橘|(zhì)和溶劑包括水、林格氏溶液和等滲氯化鈉溶液。此外，無(wú)菌固定油可以常規(guī)地用作溶劑或混懸介質(zhì)。為此目的，任何溫和的固定油都可以使用，包括合成的單或二甘油酯。此外，脂肪酸(如油酸)同樣可用于制備注射劑。

可與載體物質(zhì)結(jié)合以產(chǎn)生單一劑型的活性成分的量取決于所治療的宿主和具體的給藥模式。例如，預(yù)期用于口服給藥于人類的定時(shí)釋放制劑可含有約1－1000mg的活性物質(zhì)，其與適當(dāng)和方便量的載體材料結(jié)合，該載體材料為組合物總重量的約5至約95％(重量:重量)。該藥物組合物可以制備以提供容易測(cè)定的給藥量。例如，用于靜脈內(nèi)輸注的水溶液每毫升可以含有約3－500μg活性成分以便于以約30ml/hr的速度輸注適當(dāng)?shù)捏w積。

適用于腸胃外給藥的制劑包括水性和非水性無(wú)菌注射溶液，其可含有抗氧化劑、緩沖劑、抑菌劑和使得制劑能夠與預(yù)期接受者的血液等滲的溶質(zhì)；還包括水性和非水性無(wú)菌混懸液，其可包括助懸劑和增稠劑。

適用于局部給藥至眼睛的制劑還包括滴眼劑，其中活性成分溶解或懸浮于合適的載體中，尤其是用于活性成分的水性溶劑。所述活性成分優(yōu)選以約0.5－20％w/w的濃度存在于此類制劑中，例如約0.5－10％w/w，例如約1.5％w/w。

適用于在口腔中局部給藥的制劑包括：錠劑，其含有在調(diào)味基質(zhì)(通常為蔗糖和阿拉伯膠或黃蓍膠)中的活性成分；軟錠劑，其包含在惰性基(例如明膠和甘油或者蔗糖和阿拉伯膠)中的活性成分；漱口劑，其包含在適當(dāng)?shù)囊后w載體中的活性成分。

適用于直腸給藥的制劑可以為栓劑，其包含適當(dāng)?shù)亩栊曰|(zhì)，例如可可脂或水楊酸酯。

適用于肺內(nèi)或鼻腔給藥的制劑的粒徑范圍為例如0.1－500微米(包括增量為微米例如0.5、1、30微米、35微米的粒徑范圍在0.1－500微米)，其可以通過(guò)鼻腔通道快速吸入給藥，或者通過(guò)口腔吸入給藥，以便于到達(dá)肺泡小囊。適當(dāng)?shù)闹苿┌ɑ钚猿煞值乃曰蛴托匀芤?。適用于氣霧劑或干粉給藥的制劑可以根據(jù)常規(guī)方法制備，可以與其它治療藥物一起傳遞，例如目前用于治療或預(yù)防下面所述疾病的化合物。

適用于陰道給藥的制劑可以為陰道栓劑、棉塞、霜?jiǎng)⒛z劑、糊劑、泡沫劑或噴霧劑，除活性成分外其含有如本領(lǐng)域中已知的適當(dāng)?shù)妮d體。

所述制劑可以包裝在單劑量或多劑量容器中，例如密封的安瓿和小瓶，可以以冷凍干燥(凍干)狀態(tài)存儲(chǔ)，在即將使用之前僅需要加入無(wú)菌液體載體(例如水)用于注射。即時(shí)注射溶液和混懸液可以制備自先前描述種類的無(wú)菌粉末、顆粒和片劑。優(yōu)選的單位劑量制劑是含有如本文上述或其適當(dāng)部分的日劑量或單位每日亞劑量的活性成分的那些制劑。

本發(fā)明還提供了獸用組合物，其包含至少一種如上所定義的活性成分以及獸用載體。獸用載體是用于施用所述組合物的材料，其可以是固體、液體或氣體材料，這些材料是惰性的或在獸醫(yī)領(lǐng)域中是可接受的，并且與活性成分相容。這些獸用組合物可以通過(guò)腸胃外給藥、口服給藥或通過(guò)任何其它期望的途徑給藥。

組合療法

式i化合物可以單獨(dú)使用，或者與用于治療本文中所述疾病或病癥的其它治療藥物組合使用，例如炎癥或過(guò)度增生性疾病(例如癌癥)。在某些實(shí)施方案中，式i化合物可以在藥物組合產(chǎn)品中或給藥方案中與其它第二種治療化合物組合，所述第二種治療化合物具有抗炎或抗增生性質(zhì)，或者其可以用于治療炎癥、免疫應(yīng)答疾病或過(guò)度增生性疾病(例如癌癥)。所述其它治療藥可以是bcl-2抑制劑、jak抑制劑、抗炎藥、免疫調(diào)節(jié)劑、化療藥、細(xì)胞凋亡增強(qiáng)劑、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、用于治療心血管疾病的藥物、用于治療肝病的藥物、抗病毒藥物、用于治療血液疾病的藥物、用于治療糖尿病的藥物和用于治療免疫缺陷疾病的藥物。第二種治療藥物可以是nsaid抗炎藥。第二治療藥物可以是化學(xué)治療劑。藥物組合制劑或給藥方案的第二種化合物優(yōu)選對(duì)式i化合物具有互補(bǔ)活性，如此可以使得它們不會(huì)不利地彼此影響。此類化合物合適地存在于組合產(chǎn)品中的量應(yīng)當(dāng)能夠有效地用于預(yù)期目的。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物包含式i化合物或其立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、溶劑化物、代謝物或其藥學(xué)上可接受的鹽或其前藥的它們的化合物，其與治療藥物組合，例如nsaid。

所述組合治療可以作為同時(shí)或序貫方案施用。當(dāng)順序給藥時(shí)，所述組合可以以兩次或兩次以上的給藥施用。組合給藥包括使用不同制劑或者單一的藥物制劑的共同給藥，以及以任意順序的連續(xù)給藥，其中優(yōu)選在一段時(shí)間內(nèi)兩種(或所有)活性藥物能夠同時(shí)發(fā)揮其生物學(xué)活性。

任何上述共同給藥的藥物的適當(dāng)?shù)膭┝渴悄切┠壳八褂玫膭┝浚搫┝坑捎谛轮付ǖ乃幬锖推渌委熕幬锘虔煼ǖ慕M合作用(協(xié)同作用)可能有所降低。

組合治療可以提供“協(xié)同作用”并被證明是“協(xié)同的”，即，當(dāng)活性成分一起使用時(shí)所獲得的作用大于分別使用這些化合物產(chǎn)生的作用的總和。當(dāng)活性成分是：(1)共同配制并在一個(gè)組合的單位劑量制劑中同時(shí)施用或遞送；(2)作為單獨(dú)的制劑通過(guò)交替或平行遞送；或(3)通過(guò)一些其它給藥方案，可以獲得協(xié)同作用。當(dāng)以交替療法遞送時(shí)，當(dāng)化合物以不同的注射器通過(guò)不同的注射劑、通過(guò)不同的丸劑或膠囊劑或者通過(guò)不同的輸液按順序給藥或遞送時(shí)，可以獲得協(xié)同作用。一般而言，在交替治療期間，各種活性成分的有效劑量可以按順序給予，即連續(xù)地給予，而在組合療法中，兩種或多種活性成分的有效劑量可以一起給予。

在治療的一個(gè)具體的實(shí)施方案中，式i化合物或其立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、溶劑化物、代謝物或其藥學(xué)上可接受的鹽或其前藥可以與其它治療性、激素類或抗體藥物(例如那些本文描述的藥物)組合，也可以與手術(shù)治療和放療組合應(yīng)用。因此，本發(fā)明的組合療法包括至少一種式i化合物或其立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、溶劑化物、代謝物或藥學(xué)上可接受的鹽或前藥的給藥，還包括至少一種其它癌癥治療方法的使用。式i化合物和其它藥物活性治療成分的量和給藥的相對(duì)時(shí)間根據(jù)實(shí)現(xiàn)所需的組合治療效果進(jìn)行選擇。

式i化合物的代謝物

本文所述的式i的體內(nèi)代謝產(chǎn)物均包含在本發(fā)明的范圍內(nèi)。此類產(chǎn)物可能產(chǎn)生自例如給予的化合物的氧化、還原、水解、酰胺化、脫酰胺化、酯化、脫酯化、酶裂解等。因此，本發(fā)明包括式i化合物的代謝物，包括通過(guò)以下過(guò)程中產(chǎn)生的化合物：使得本發(fā)明的化合物與哺乳動(dòng)物接觸一段時(shí)間，該時(shí)間足以獲得其代謝產(chǎn)物。

代謝物產(chǎn)物通常是通過(guò)下列方法鑒別：制備放射性同位素(例如¹⁴c或³h)標(biāo)記的本發(fā)明化合物，以可檢測(cè)劑量經(jīng)胃腸外給予(例如，大于約0.5mg/kg)動(dòng)物，例如大鼠、小鼠、豚鼠、猴或人，允許足夠的時(shí)間以發(fā)生代謝(通常約30秒至30小時(shí))，自尿、血液或其它生物樣品中分離其轉(zhuǎn)化產(chǎn)物。因?yàn)樗鼈兪潜粯?biāo)記的，因此這些產(chǎn)物容易分離(其它的可以通過(guò)使用能夠結(jié)合存在于代謝物中的表位的抗體進(jìn)行分離)。代謝物結(jié)構(gòu)可以通過(guò)常規(guī)方法確定，例如通過(guò)ms、lc/ms或nmr分析。一般而言，代謝物的分析以本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的常規(guī)藥物代謝研究相同的方法完成。只要它們不以其它方式在體內(nèi)發(fā)現(xiàn)，所述代謝產(chǎn)物就可以用于診斷分析，用于確定本發(fā)明化合物的治療劑量。

制品

在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了含有用于治療上述疾病和病癥的原料的制品或“套盒”。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述套盒包括容器，其包含包含式i化合物或其立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、溶劑化物、代謝物或藥學(xué)上可接受的鹽或前藥的容器。所述套盒還可以包括容器上的或與容器關(guān)聯(lián)的標(biāo)簽或包裝說(shuō)明書(shū)。術(shù)語(yǔ)“包裝說(shuō)明書(shū)”是指通常包括在治療產(chǎn)品的商業(yè)包裝中的說(shuō)明書(shū)，其包括關(guān)于使用此類治療產(chǎn)品的關(guān)于適應(yīng)癥、用法、劑量、給藥、禁忌癥和/或警告的信息。適當(dāng)?shù)娜萜靼ɡ缙孔?、小瓶、注射器、泡罩包裝等。所述容器可以由各種材料例如玻璃或塑料制成。該容器可以保存有效地治療疾病的式i化合物或其制劑，其可以具有無(wú)菌接口(例如，所述容器可以是靜脈注射液袋，或者是具有可被皮下注射針頭刺穿的塞子的小瓶)。該組合物中至少一種活性成分為式i化合物。所述標(biāo)簽或包裝說(shuō)明書(shū)表明了該組合物用于治療選擇的病癥，例如癌癥。此外，所述標(biāo)簽或包裝說(shuō)明書(shū)表明了待治療的患者是患有下列疾病的患者：例如過(guò)度增生性疾病、神經(jīng)變性、心臟肥大、疼痛、偏頭痛或神經(jīng)創(chuàng)傷性疾病或事件。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述標(biāo)簽或包裝說(shuō)明書(shū)表明了含有式i化合物的組合物可以用于治療由異常細(xì)胞生長(zhǎng)導(dǎo)致的疾病。所述標(biāo)簽或包裝說(shuō)明書(shū)也表明了所述組合物可以用于治療其它疾病?；蛘?，該制品還可以包含第二種容器，其包含可藥用的緩沖液,例如抑菌性注射用水(bwfi)、磷酸鹽-緩沖的生理鹽水、林格氏液和葡萄糖溶液。它還包括從商業(yè)和用戶立場(chǎng)上講所需的其它原料，包括其它緩沖液、稀釋劑、濾器、針頭和注射器。

所述套盒還可以包含式i化合物給藥的說(shuō)明書(shū)和可能存在的第二種藥物制劑。例如，如果套盒包含含有式i化合物的第一種組合物以及第二種藥物制劑，則該套盒還可以包含將第一種和第二種藥用組合物同時(shí)、連續(xù)或分別給予需要的患者的說(shuō)明書(shū)。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，套盒適用于傳遞固體口服形式的式i化合物，如片劑或膠囊劑。此類套盒優(yōu)選包括多個(gè)單位劑量。此類套盒可以包括具有根據(jù)其預(yù)期使用的順序而指導(dǎo)劑量的卡片。此類套盒的示例是“泡罩包裝”。泡罩包裝在包裝工業(yè)中是眾所周知的，可以廣泛用于包裝藥物單位劑型。如果需要的話，可以提供記憶輔助工具，例如以數(shù)字、字母或其它標(biāo)記的形式，或者具有日歷插頁(yè)，指明了其中給予劑量的治療方案的天數(shù)。

根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，套盒可以包括：(a)其中包含式i化合物的第一容器；和任選的(b)其中包含第二種藥物制劑的第二容器，其中所述第二種藥物制劑含有具有抗過(guò)度增生活性的第二種化合物。或者，所述套盒還可以包括第三種容器，其包含藥學(xué)上可接受的緩沖液，例如抑菌性注射用水(bwfi)、磷酸鹽緩沖鹽水、林格氏溶液和葡萄糖溶液。它還可以包括從商業(yè)和用戶立場(chǎng)上講所需的其它物質(zhì)，包括其它緩沖劑、稀釋劑、濾器、針頭和注射器。

在某些其它實(shí)施方案中，其中所述套盒包含式i的組合物和第二種治療藥物，該套盒可以包括用于容納不同組合物的容器，如分開(kāi)的瓶或分開(kāi)的鋁箔袋，然而，不同的組合物也可包含在單個(gè)、未分開(kāi)的容器中。典型的套盒包括用于不同組分給藥的說(shuō)明書(shū)。當(dāng)不同組分優(yōu)選以不同的劑型(例如，口服和腸胃外)施用、以不同的劑量間隔施用或者當(dāng)組合的單個(gè)組分的滴定是處方醫(yī)師所期望施用的時(shí)，套盒形式是特別有益的。

式i化合物的制備

式i化合物可以通過(guò)合成路線合成，所述路線包括與化學(xué)領(lǐng)域中公知的路線類似的路線，特別是可以參考本文中說(shuō)明書(shū)，還可以參考下面文獻(xiàn)中所述的那些其它雜環(huán)類的路線：comprehensiveheterocyclicchemistry(雜環(huán)化學(xué)概覽)ii,editorskatritzky和rees,elsevier,1997,例如第3卷；liebigsannalenderchemie,(9):1910－16,(1985)；helveticachimicaacta,41:1052－60,(1958)；arzneimittel-forschung,40(12):1328－31,(1990)，它們每一個(gè)均可以明確地引入本文作為參考。原料通?？梢垣@自商業(yè)途徑，例如aldrichchemicals(milwaukee,wi)，或者可以采用本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的方法容易地制備(例如，通過(guò)文獻(xiàn)中描述的通用方法制備：louisf.fieser和maryfieser,reagentsfororganicsynthesis(有機(jī)合成試劑),第1－23卷,wiley,n.y.(1967－2006ed.)或beilsteinshandbuchderorganischenchemie,4,aufl.ed.springer-verlag,berlin,包括增補(bǔ)版(還可以通過(guò)beilstein在線數(shù)據(jù)庫(kù)獲取)。

在合成式i化合物和必要的原料和中間體中使用的化學(xué)合成轉(zhuǎn)化方法和保護(hù)基團(tuán)方法(保護(hù)和脫保護(hù))在本領(lǐng)域是已知的，包括例如描述于下列文獻(xiàn)中的方法：r.larock,comprehensiveorganictransformations(有機(jī)轉(zhuǎn)化概覽),vchpublishers(1989)；t.w.greeneandp.g.m.wuts,protectivegroupsinorganicsynthesis(有機(jī)合成中的保護(hù)基團(tuán)),第3版,johnwileyandsons(1999)；l.paquette,ed.,encyclopediaofreagentsfororganicsynthesis(有機(jī)合成試劑百科全書(shū)),johnwileyandsons(1995)及其后續(xù)版本。

式i化合物可以單獨(dú)制備，或作為化合物庫(kù)制備，其包含至少2種化合物，例如5至1000種化合物，或10至100種化合物。式i化合物庫(kù)可以通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法，通過(guò)組合的‘分裂和混合’方法制備，或者通過(guò)使用液相或固相化學(xué)的多個(gè)平行合成方法制備。因此，根據(jù)另一方面，本發(fā)明提供了包含至少2種化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的化合物庫(kù)。

實(shí)施例提供了制備式i化合物的典型方法。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，其它合成路線也可以用于合成式i化合物。盡管具體的原料和試劑在附圖和實(shí)施例中已有描述和討論，但是其它原料和試劑可以容易地替代以提供各種衍生物和/或反應(yīng)條件。此外，通過(guò)本文描述的方法制備的許多示例性化合物可以根據(jù)本申請(qǐng)公開(kāi)的內(nèi)容采用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的常規(guī)化學(xué)進(jìn)一步修飾。

在式化合物i的制備中，中間體的遠(yuǎn)端官能團(tuán)(例如伯胺或仲胺)的保護(hù)可能是必須的。是否需要此類保護(hù)應(yīng)當(dāng)取決于遠(yuǎn)端官能團(tuán)的性質(zhì)以及制備方法的條件。適當(dāng)?shù)陌被?保護(hù)基團(tuán)包括乙酰基、三氟乙?；?、叔-丁氧基羰基(boc)、芐氧基羰基(cbz)和9-芴基亞甲基氧基羰基(fmoc)。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以容易地確定是否需要此類保護(hù)。保護(hù)基團(tuán)及其應(yīng)用的通用描述參見(jiàn)t.w.greene,protectivegroupsinorganicsynthesis(有機(jī)合成中的保護(hù)基團(tuán)),johnwiley&sons,newyork,1991t。

用于制備式i化合物的有用的試驗(yàn)方法、中間體和試劑可以參考wo2011/140488；us2012/0010191；wo2013/067274；us2013/0116235；wo2013/067277；us2013/0116245；wo2013/067260；us2013/0116262；wo2013/067264；us2013/0116246，它們以其整體內(nèi)容引入本文作為參考。

式i化合物101-146的示例性實(shí)施方案更充分地描述于下面的實(shí)施例中，可以用于制備其它式i化合物。

各種低價(jià)pd(ii)和pd(0)鈀催化劑、預(yù)催化劑和配體可以在suzuki或suzuki/miyaura偶合步驟中使用(miyaura,n.(2002)top.curr.chem.,219:11－59；kotha,s.等(2002)tetrahedron,58:9633－9695；bellina,f.等(2004)synthesis,15:2419－2440；hassan,j.等(2002)chem.rev.102:1359－1470；littke,a.f.等(2002)angew.chem.,int.ed.41:4176－4211；barder,t.e.等(2005)j.am.chem.soc.,127:4685－4696；walker,s.d.等(2004)angew.chem.,int.ed.,43:1871-1876；yin,j.等(2002)j.am.chem.soc.,124:1162-1163)，包括pdcl2{ptbu2(p-r-ph)}2(guram等(2006)organicletters8(9):1787－1789)、pdcl2(pph3)2、pd(t-bu)3、pdcl2dppfch2cl2、pd(pph3)4、pd(oac)2/pph3、cl2pd[(pet3)]2、pd(diphos)2、cl2pd(bipy)、[pdcl(ph2pch2pph2)]2、cl2pd[p(o-tol)3]2、pd2(dba)3/p(o-tol)3、pd2(dba)/p(呋喃基)3、cl2pd[p(呋喃基)3]2、cl2pd(pmeph2)2、cl2pd[p(4-f-ph)3]2、cl2pd[p(c6f6)3]2、cl2pd[p(2-cooh-ph)(ph)2]2、cl2pd[p(4-cooh-ph)(ph)2]2和包封的催化劑pdencat^tm30、pdencat^tmtpp30和pd(ii)encat^tmbinap30(us2004/0254066)。

低價(jià)pd(ii)和pd(0)鈀催化劑、預(yù)催化劑和配體的示例性實(shí)施方案為"buchwald"催化劑、鈀環(huán)(palladacycles)和配體，包括2-二環(huán)己基膦基-2,4,6-三異丙基聯(lián)苯(x-phos,casreg.no.564483-18-7)和氯代(2-二環(huán)己基膦基-2′,4′,6′-三異丙基-1,1′-聯(lián)苯基)[2-(2′-氨基-1,1′-聯(lián)苯基)]鈀(ii)(x-phos氨基聯(lián)苯基氯化鈀預(yù)催化劑,casreg.no.1310584-14-5),可以獲自商業(yè)(johnsonmatthey,westdeptford,nj；sigma-aldrichfinechemicals和其它供應(yīng)商)。參見(jiàn)us7223879、us6395916、us6307087。

分離方法

在式i化合物的制備方法中，將反應(yīng)產(chǎn)物彼此之間和/或與原料之間進(jìn)行分離是有益的。根據(jù)本領(lǐng)域中的常規(guī)技術(shù)可以將各個(gè)步驟或系列步驟的需要的產(chǎn)物分離和/或純化至需要的純度(homogeneity)。典型的此類分離技術(shù)包括多相萃取、自溶劑或溶劑混合物中結(jié)晶、蒸餾、升華或色譜方法。色譜方法可以包括多種方法，例如反相和正相；體積排阻；離子交換；高、中和低壓液相色譜方法和設(shè)備；小批量分析(smallscaleanalytical)；模擬移動(dòng)床(smb)和制備性薄層或厚層色譜以及小批量薄層和快速色譜技術(shù)。

其它類型的分離方法包括采用選擇的試劑處理混合物，所述試劑能夠與需要的產(chǎn)物、未反應(yīng)的原料、副產(chǎn)物等結(jié)合或使其分離。此類試劑包括吸附劑或吸收劑，例如活性炭、分子篩、離子交換介質(zhì)等。或者，所述試劑在堿性材料情況下可以是酸；在酸性材料情況下可以是堿；結(jié)合劑，例如抗體、結(jié)合蛋白；選擇性螯合劑，例如冠醚；液體/液體離子提取試劑(ionextractionreagents)(lix)等。適當(dāng)?shù)姆蛛x方法的選擇取決于所涉及材料的性質(zhì)，例如蒸餾和升華中的沸點(diǎn)和分子量，色譜分析中是否存在極性官能團(tuán)，多相萃取中酸性和堿性介質(zhì)中材料的穩(wěn)定性等。

非對(duì)映異構(gòu)混合物可以根據(jù)其物理化學(xué)性質(zhì)的差異通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法分離為它們各自的非對(duì)映異構(gòu)體，例如通過(guò)色譜和/或分步結(jié)晶的方法。通過(guò)與適當(dāng)?shù)墓鈱W(xué)活性化合物(例如手性輔助物，如手性醇或mosher酰氯)的反應(yīng)，通過(guò)對(duì)映體混合物轉(zhuǎn)化為非對(duì)映體混合物，分離該非對(duì)映體并將各個(gè)非對(duì)映體轉(zhuǎn)化(例如水解)為相應(yīng)的純對(duì)映體，如此可以分離對(duì)映體。并且，某些本發(fā)明化合物也可以是阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體(例如，取代的聯(lián)芳基化合物)，它們被視為是本發(fā)明的一部分。對(duì)映體也可以通過(guò)手性hplc柱分離。

單一立體異構(gòu)體(例如基本上不含其立體異構(gòu)體的對(duì)映體)可以通過(guò)外消旋混合物的拆分而獲得，采用的方法為例如使用光學(xué)活性的拆分試劑形成非對(duì)映異構(gòu)體(eliel,e.和wilen,s.“有機(jī)化合物的立體化學(xué)(stereochemistryoforganiccompounds),”johnwiley&sons,inc.,newyork,1994；lochmuller,c.h.,(1975)j.chromatogr.,113(3):283－302)。本發(fā)明的手性化合物的外消旋混合物可以通過(guò)適當(dāng)?shù)姆椒ǚ蛛x，包括：(1)采用手性化合物形成離子非對(duì)映異構(gòu)體鹽，通過(guò)分步結(jié)晶或其它方法分離，(2)采用手性衍生化試劑形成非對(duì)映異構(gòu)體化合物，分離該非對(duì)映異構(gòu)體，轉(zhuǎn)化為純立體異構(gòu)體，和(3)直接在手性條件下分離基本上純的或富含的立體異構(gòu)體。參見(jiàn)“drugstereochemistry,analyticalmethodsandpharmacology(藥物立體化學(xué)、分析方法和藥理學(xué)),”irvingw.wainer,ed.,marceldekker,inc.,newyork(1993)。

在方法(1)中，非對(duì)映異構(gòu)體鹽可以通過(guò)光學(xué)純的手性堿(例如馬錢子堿、奎寧、麻黃堿、番木鱉堿、α-甲基-β-苯基乙基胺(安非他明)等)與攜有酸性官能團(tuán)的不對(duì)稱化合物(例如羧酸和磺酸)的反應(yīng)形成。非對(duì)映異構(gòu)體鹽可以通過(guò)分步結(jié)晶或離子色譜方法分離。對(duì)于氨基化合物的光學(xué)異構(gòu)體的分離而言，加入手性羧酸或磺酸(例如樟腦磺酸、酒石酸、扁桃酸或乳酸)可以形成非對(duì)映異構(gòu)體鹽。

或者，通過(guò)方法(2)，待拆分的底物可以與手性化合物的一種對(duì)映體反應(yīng)，形成非對(duì)映異構(gòu)體對(duì)(e.和wilen,s.“有機(jī)化合物的立體化學(xué)(stereochemistryoforganiccompounds)”,johnwiley&sons,inc.,1994,p.322)。非對(duì)映異構(gòu)體化合物如下形成：通過(guò)使得不對(duì)稱化合物與光學(xué)純的手性衍生化試劑(例如薄荷基衍生物)反應(yīng)，隨后分離非對(duì)映異構(gòu)體并水解，獲得純的或富含的對(duì)映體。確定光學(xué)純度的方法包括：在外消旋混合物的堿或mosher酯α-甲氧基-α-(三氟甲基)苯基乙酸酯(jacobiii.j.org.chem.(1982)47:4165)存在下，制備手性酯(例如薄荷基酯，如(-)薄荷基氯代甲酸酯)，分析兩種阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體或非對(duì)映異構(gòu)體的¹hnmr光譜。根據(jù)用于分離阻轉(zhuǎn)異構(gòu)的萘基-異喹啉的方法(wo96/15111)，阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體化合物的穩(wěn)定的非對(duì)映異構(gòu)體可以通過(guò)正相和反相色譜分離。在方法(3)中，兩種對(duì)映體的外消旋混合物可以通過(guò)使用手性固定相的色譜分離(“chiralliquidchromatography(手性液相色譜)”(1989)w.j.lough,ed.,chapman和hall,newyork；okamoto,j.chromatogr.,(1990)513:375－378)。富含或純化的對(duì)映體可以通過(guò)用于區(qū)分其它具有不對(duì)稱碳原子的手性分子的方法加以區(qū)別，例如旋光和圓二色光譜。

實(shí)施例

實(shí)施例1三環(huán)酰胺,4,4-二甲基-1,10-二氮雜三環(huán)并[6.4.0.02,6]十二-2(6),7-二烯-9-酮1e的制備

下面的兩個(gè)方法改編自organicpreparationsandproceduresint.,29(4):471－498。還根據(jù)us8716274中實(shí)施例107的方法，向配備磁力攪拌器和氮?dú)馊肟诘?00-ml單頸圓底燒瓶中加入2-氯代-4,4-二甲基環(huán)戊-1-烯甲醛(38g,240mmol)的苯(240ml)溶液。向該溶液中加入乙氧基羰基亞甲基三苯膦(84g,240mmol)。將混合物攪拌14h。然后，蒸發(fā)溶劑，將殘留物用己烷(2l)研磨，將產(chǎn)物自pph3副產(chǎn)物中萃取出來(lái)。有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥并真空濃縮。殘留物通過(guò)柱色譜純化，采用100％己烷-1:1己烷/乙酸乙酯梯度洗脫，獲得37％收率(20g)的(e)-3-(2-氯代-4,4-二甲基環(huán)戊-1-烯基)丙烯酸乙酯1a。

向配備磁力攪拌器和氮?dú)馊肟诘?50-ml單頸圓底燒瓶中加入1a(17g,74mmol)的dmso(100ml)溶液。向該溶液中加入疊氮化鈉(9.6g,150mmol)。然后將混合物加熱至75℃，攪拌8h。冷卻至室溫后，加入h2o(100ml)和ch2cl2(200ml)，分離有機(jī)層。水層用ch2cl2(50ml)萃取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并真空濃縮。殘留物通過(guò)柱色譜純化，采用100％己烷-1:1己烷/乙酸乙酯梯度洗脫，獲得37％收率(5.7g)的5,5-二甲基-1,4,5,6-四氫環(huán)戊二烯并[b]吡咯-2-甲酸乙酯1b。

向配備磁力攪拌器和氮?dú)馊肟诘?50-ml單頸圓底燒瓶中加入1b(6.2g,30mmol)的dmf(57ml)溶液。向該溶液中加入nah(80％的礦物油分散液,1.26g,42.1mmol)。將獲得的混合物于室溫下攪拌90min。然后，加入溴乙腈(2.94ml,42mmol)。將混合物攪拌14h。然后，加入水(100ml)和乙酸乙酯(200ml)，分離有機(jī)層。水層用乙酸乙酯萃取(2×50ml)。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并真空濃縮。殘留物通過(guò)柱色譜純化，獲得95％收率(7g)的1-(氰基甲基)-5,5-二甲基-1,4,5,6-四氫環(huán)戊二烯并[b]吡咯-2-甲酸乙酯1c。

向500-mlparr反應(yīng)瓶中充入氮，加入10％披鈀炭(50％濕的,2.0g干重)、1c(4.5g,18mmol)、12％鹽酸(9.2ml,37mmol)、乙酸乙酯(80ml)和乙醇(52ml)。將反應(yīng)瓶與parr氫化器連接，排空，充入氫氣使得壓力達(dá)到50psi，振搖6h。然后，排空氫氣，向反應(yīng)瓶中充入氮?dú)狻＜尤?imgfile="bda0001257169210000572.gif"wi="288"he="55"img-content="drawing"img-format="gif"orientation="portrait"inline="no"/>521(10.0g)，將混合物通過(guò)521墊過(guò)濾。濾餅用乙醇洗滌(2×50ml)，將合并的濾液減壓濃縮至干。粗品殘留物1-(2-氨基乙基)-5,5-二甲基-1,4,5,6-四氫環(huán)戊二烯并[b]吡咯-2-甲酸乙酯鹽酸鹽1d無(wú)需進(jìn)一步純化可以直接用于下一步驟。

向配備磁力攪拌器和氮?dú)馊肟诘?00-ml單頸圓底燒瓶中充入氮?dú)?，加入粗?-(2-氨基乙基)-5,5-二甲基-1,4,5,6-四氫環(huán)戊二烯并[b]吡咯-2-甲酸乙酯鹽酸鹽1d(～18mmol)、乙醇鈉(6.2g,92mmol)和乙醇(120ml)。將混合物于55℃攪拌過(guò)夜。然后，將反應(yīng)混合物減壓濃縮，將殘留物在乙酸乙酯(200ml)和水(100ml)之間分配。將溶液過(guò)濾。固體用乙酸乙酯(15ml)洗滌，獲得850mg需要的產(chǎn)物107e。分離有機(jī)層，水層用乙酸乙酯萃取(2×100ml)。合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥并減壓濃縮近干。過(guò)濾溶液，固體(1.44g)用乙酸乙酯(15ml)洗滌。將合并的固體真空干燥，獲得61％收率(2.3g)的4,4-二甲基-1,10-二氮雜三環(huán)并[6.4.0.02,6]十二-2(6),7-二烯-9-酮1e(casreg.no.1346674-23-4)：¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ1.23(6h,s),2.47(2h,s),2.5(2h,s),3.65(2h,s),3.93-3.96(2h,m),5.82(1h,s),6.703(1h,s)；ms-esi[m+h]⁺＝205.0。

實(shí)施例23-(苯基氨基)-1h-吡唑-4-甲腈2的制備

步驟1:3-氨基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡唑-4-甲腈2a和5-氨基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡唑-4-甲腈2b

于0℃向化合物3-氨基-1h-吡唑-4-甲腈的dmf(100ml)的溶液中一次性加入nah(60％,7.4g,185mmol)。將反應(yīng)混合物于0℃攪拌30min，滴加semcl(2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯(sigma-aldrichcatalog#238902,casreg.no.76513-69-4,17.1g,92.5mmol)。將反應(yīng)混合物于室溫下攪拌18h，用dcm稀釋，有機(jī)層用飽和的氯化銨溶液洗滌。有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾，減壓濃縮。殘留物經(jīng)快速色譜純化(biotage,80g正相硅膠,uv254,pe/etoac＝20/1-3/2)，獲得2a和2b的1:1混合物(4.8g,22％)，為白色固體。

步驟2:3-(苯基氨基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡唑-4-甲腈2c和5-(苯基氨基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡唑-4-甲腈2d

將獲自上面的2a和2b(1g,4.2mmol)、溴代苯(655mg,4.2mmol)、pd2(dba)3(193mg,0.21mmol)、x-phos(200mg,0.42mmol)和cs2co3(4.1g,12.6mmol)在二氧六環(huán)(5ml)中的混合物在手套式操作箱中于100℃加熱18h。反應(yīng)混合物用etoac稀釋，用水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并濃縮。殘留物經(jīng)快速色譜純化(biotage,40g正相硅膠,uv254檢測(cè)并收集,pe/etoac＝10/1)，獲得為異構(gòu)體混合物的2c和2d(1g,75％)。ms-esi[m+h]⁺＝315.0。

步驟3:向2c和2d(1g,3.18mmol)的etoh(10ml)混合物中加入aq.hcl(2n,10ml)。將反應(yīng)混合物于80℃攪拌18h，冷卻至0℃，用aq.naoh溶液(1n)中和，然后用etoac萃取。合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并減壓濃縮。殘留物經(jīng)快速色譜純化(biotage,40g正相硅膠,uv254,dcm/meoh＝30/1)，獲得3-(苯基氨基)-1h-吡唑-4-甲腈2(0.3g,50％)，為黃色固體。ms-esi[m+h]⁺＝185.0。

實(shí)施例32-(1-羥基-1,3-二氫-[1,2]氧雜硼雜環(huán)戊并[4,3-c]吡啶-4-基)-7,7-二甲基-2,3,4,6,7,8-六氫-1h-環(huán)戊二烯并[4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-1-酮3的制備

步驟1:3b的制備

向醛3a(500mg,1.46mmol)的meoh(8ml)和dcm(20ml)的混合物中一次性加入nabh4(110mg,3mmol)。將反應(yīng)混合物于室溫下攪拌2h，然后用水驟冷，減壓濃縮。殘留物經(jīng)快速色譜純化(biotage,40g正相硅膠,uv254,dcm/meoh＝20/1)，獲得醇3b(500mg,99％)，為白色固體。ms-esi[m+h]⁺＝346.0。

步驟2:將3b(500mg,1.45mmol)、四羥基二硼(387mg,4.35mmol)、xphos-pd-g2(12mg,0.015mmol)、x-phos(14mg,0.03mmol)和koac(426mg,4.35mmol)的etoh(20ml)混合物在手套式操作箱中于80℃加熱2h。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫(rt)，濃縮。將殘留物在dcm和水之間分配。分離有機(jī)層，用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并濃縮。將殘留物溶于甲苯，于室溫下放置2h。收集獲得的沉淀物，干燥，獲得2-(1-羥基-1,3-二氫-[1,2]氧雜硼雜環(huán)戊并[4,3-c]吡啶-4-基)-7,7-二甲基-2,3,4,6,7,8-六氫-1h-環(huán)戊二烯并[4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-1-酮3(320mg,65％)，為白色固體。ms-esi[m+h]⁺＝338.1。

實(shí)施例4(s)-5-(2-甲基-4-(氧雜環(huán)丁烷-3-基)哌嗪-1-基)吡啶-2-胺4的制備

步驟1:(s)-3-甲基-4-(6-硝基吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔-丁基酯4a的制備

向5-溴-2-硝基吡啶(5.0g,24.63mmol)、(s)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔-丁基酯(4.9g,24.63mmol)、碳酸銫(24.1g,73.89mmol)和binap(1.5g,2.46mmol)的1,4-二氧六環(huán)(50ml)的溶液中加入三(二亞芐基丙酮)二鈀(0)(1.1g,1.23mmol)。將混合物于100℃、氮?dú)猸h(huán)境中攪拌16小時(shí)。將混合物冷卻至18℃，用水(50ml)稀釋，用乙酸乙酯萃取(100ml×3)。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌(80ml)，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮。殘留物經(jīng)硅膠色譜純化，采用石油醚:乙酸乙酯＝1:1洗脫，獲得4a(3.0g,38％)，為棕色固體。

步驟2:(s)-2-甲基-1-(6-硝基吡啶-3-基)哌嗪4b的制備

向4a(2.5g,7.76mmol)的二氯甲烷(60ml)混合物中加入三氟乙酸(30ml)。將混合物于18℃攪拌2小時(shí)。將混合物濃縮至殘留物，將其用乙酸乙酯(15ml)研磨，過(guò)濾，真空干燥，獲得8b(2.2g,粗品)，為棕色固體。

步驟3:(s)-2-甲基-1-(6-硝基吡啶-3-基)-4-(氧雜環(huán)丁烷-3-基)哌嗪4c的制備

向4b(2.2g,9.90mmol)和氧雜環(huán)丁烷-3-酮(49.50mmol,2.9ml)的甲醇(30ml)混合物中加入氰基硼氫化鈉(3.1g49.50mmol)。將反應(yīng)混合物于50℃、氮?dú)猸h(huán)境中攪拌18小時(shí)。將獲得的混合物用飽和的氯化銨溶液(100ml)稀釋，用乙酸乙酯萃取(100ml×3)。合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并濃縮。殘留物經(jīng)硅膠色譜純化，采用乙酸乙酯洗脫，獲得4c(1.2g,40％)，為黃色固體。

步驟4:向4c(1.2g,4.31mmol)和鈀(在活性炭上的10wt％,500mg)的甲醇(50ml)混合物中充入氫氣，于18℃攪拌3小時(shí)。將混合物通過(guò)(imerysmineralscalifornia,inc.,sigma-aldrichco.)墊過(guò)濾，濃縮濾液，獲得為固體的(s)-5-(2-甲基-4-(氧雜環(huán)丁烷-3-基)哌嗪-1-基)吡啶-2-胺4(700mg,65％)。ms-esi[m+h]⁺＝249.1。

實(shí)施例51-[2-(7,7-二甲基-4-氧代-1,2,6,8-四氫環(huán)戊二烯并[3,4]吡咯并[3,5-b]吡嗪-3-基)-3-(羥基甲基)吡啶-4-基)-3-碘-1h-吡唑-4-甲腈5的制備

步驟1:3-碘-1h-吡唑-4-甲腈5a的制備

于-10℃，30分鐘內(nèi)向3-氨基-1h-吡唑-4-甲腈(6.6g,61.1mmol)的ch2i2(90ml)的溶液中滴加亞硝酸異戊酯(55.5ml)。將反應(yīng)混合物加熱至100℃2h，濃縮。殘留物經(jīng)硅膠色譜純化(pe/ea＝4/1)，獲得3-碘-1h-吡唑-4-甲腈5a(6.7g,50％)，為黃色固體。ms-esi[m+h]⁺＝220.0。

步驟2：將2-(1-羥基-1,3-二氫-[1,2]氧雜硼雜環(huán)戊并[4,3-c]吡啶-4-基)-7,7-二甲基-2,3,4,6,7,8-六氫-1h-環(huán)戊二烯并[4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-1-酮3(100mg,0.3mmol)、5a(65mg,0.3mmol)、cu(oac)2(65mg,0.36mmol)、吡啶(28mg,0.36mmol)、et3n(36mg,0.36mmol)和分子篩在無(wú)水dcm(20ml)中的混合物于25℃攪拌18h。反應(yīng)混合物用dcm稀釋，過(guò)濾。濾液用飽和的氯化銨水溶液洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾，減壓濃縮。殘留物通過(guò)prep-tlc純化(正相硅膠,uv254,dcm/meoh＝20/1)，獲得1-[2-(7,7-二甲基-4-氧代-1,2,6,8-四氫環(huán)戊二烯并[3,4]吡咯并[3,5-b]吡嗪-3-基)-3-(羥基甲基)吡啶-4-基)-3-碘-1h-吡唑-4-甲腈5(62mg,39％)，為白色固體。ms-esi[m+h]⁺＝529.0.

實(shí)施例1013-苯胺基-1-[2-(7,7-二甲基-4-氧代-1,2,6,8-四氫環(huán)戊二烯并[3,4]吡咯并[3,5-b]吡嗪-3-基)-3-(羥基甲基)-4-吡啶基]吡唑-4-甲酰胺101

步驟1:101a的制備

將獲自實(shí)施例2的3-(苯基氨基)-1h-吡唑-4-甲腈2(60mg,0.33mmol)、獲自實(shí)施例3的2-(1-羥基-1,3-二氫-[1,2]氧雜硼雜環(huán)戊并[4,3-c]吡啶-4-基)-7,7-二甲基-2,3,4,6,7,8-六氫-1h-環(huán)戊二烯并[4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-1-酮3(122mg,0.36mmol)、cu(oac)2(119mg,0.66mmol)、吡啶(52mg,0.66mmol)、et3n(67mg,0.66mmol)和分子篩的無(wú)水dcm(20ml)溶液的混合物于30℃攪拌18h。反應(yīng)混合物用dcm稀釋，過(guò)濾。濾液用飽和的氯化銨水溶液洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并減壓濃縮.殘留物通過(guò)制備性tlc純化(正相硅膠,uv254,dcm/meoh＝30/1)，獲得101a(30mg,18％)，為黃色固體。ms-esi[m+h]⁺＝494.1。

步驟2:將101a(100mg,0.2mmol)、濃氫氧化銨(18mnh4oh,21ml)、30％過(guò)氧化氫(h2o2,1.2ml)和h2o(6ml)的meoh(15ml)混合物于室溫下攪拌2天。濃縮反應(yīng)混合物。殘留物通過(guò)制備性tlc純化(正相硅膠,uv254,dcm/meoh＝20/1)，獲得101(43mg,42％)，為白色固體。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.25(s,1h),8.81(s,1h),8.55(d,j＝5.6hz,1h),7.89(s,1h),7.64(d,j＝5.2hz,1h),7.58(d,j＝8.8hz,2h),7.37(bs,1h),7.30(t,j＝8hz,2h),6.88(t,j＝3.2hz,1h),6.59(s,1h),4.94(t,j＝5.6hz,1h),4.74(m,1h),4.46(m,1h),4.22(m,3h),3.94(d,j＝13.6hz,1h),2.58(d,j＝7.2hz,2h),),2.43(s,2h),1.22(s,6h)；ms-esi[m+h]⁺＝512.1.

實(shí)施例1021-[3-(7,7-二甲基-4-氧代-1,2,6,8-四氫環(huán)戊二烯并[3,4]吡咯并[3,5-b]吡嗪-3-基)-2-(羥基甲基)苯基]-3-(2-吡啶基氨基)吡唑-4-甲酰胺102

步驟1:102a和102b的制備

將4,4-二甲基-1,10-二氮雜三環(huán)并[6.4.0.02,6]十二-2(6),7-二烯-9-酮1e(1g,4.9mmol)、2-溴-6-碘芐基乙酸酯(4.3g,12.3mmol)、cui(468mg,2.45mmol)、cs2co3(3.2g,9.8mmol)的二氧六環(huán)(20ml)混合物加熱至105℃，攪拌16h。反應(yīng)混合物用水處理，用etoac萃取。合并的萃取液經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并減壓濃縮。殘留物經(jīng)快速色譜純化(biotage,40g柱,硅膠,uv254,dcm/etoac＝10:1)，獲得102a和102b的混合物(1.4g,60％)，其無(wú)需分離可以直接用于下一步驟。ms-esi[m+h]⁺＝431.0和479.0。

步驟2:102c和102d的制備

將102a和102b(1.4g,3.25mmol)和氫氧化鈉(520mg,12.99mmol)在二氧六環(huán)(20ml)和水(20ml)中的混合物于25℃攪拌16h。反應(yīng)混合物用etoac萃取。合并的萃取液經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并濃縮。殘留物經(jīng)快速色譜純化(biotage,40g柱,硅膠,uv254,dcm/etoac＝10:1)，獲得102c和102d的混合物(1.2g,95％)，為黃色固體。ms-esi[m+h]⁺＝389.9/390.9和436.9。

步驟3:102e的制備

將化合物102c和102d(1.2g,3.1mmol)、四羥基二硼(824mg,9.25mmol),xphos-pd-g2(25mg,0.031mmol)、x-phos(30mg,0.062mmol)、koac(910mg,9.25mmol)的etoh(20ml)混合物在氮?dú)猸h(huán)境中加熱至80℃2hr。反應(yīng)混合物用水(20ml)處理，用dcm萃取。合并的萃取液經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并減壓濃縮。殘留物經(jīng)快速色譜純化(biotage,40g柱,硅膠,uv254,dcm/meoh＝20/1)，獲得102e(1g,90％)，為黃色固體。ms-esi[m+h]⁺＝337。

步驟4：102f的制備

向102e(600mg,1.79mmol)、3-碘-1h-吡唑-4-甲腈(390mg,1.79mmol)、et3n(361mg,3.57mmol)、吡啶(283mg,3.57mmol)、cu(oac)2(389mg,2.15mmol)的dcm(10ml)混合物中充入o2(2x)，于室溫下攪拌16h。將混合物過(guò)濾，濾餅用dcm(10ml)洗滌。濃縮合并的濾液，殘留物經(jīng)快速色譜純化(biotage,40g柱,硅膠,uv254,dcm/meoh＝25/1)，獲得1-[3-(7,7-二甲基-4-氧代-1,2,6,8-四氫環(huán)戊二烯并[3,4]吡咯并[3,5-b]吡嗪-3-基)-2-(羥基甲基)苯基]-3-碘-1h-吡唑-4-甲腈102f(400mg,23％)，為黃色固體。ms-esi[m+h]⁺＝528.0。

步驟5:102g的制備

將102f(150mg,0.28mmol)、吡啶-2-胺(40mg,0.43mmol)。pd2(dba)3(26mg,0.028mmol)、xantphos(29mg,0.056mmol)、cs2co3(228mg,0.7mmol)的二氧六環(huán)(10ml)混合物加熱至100℃，攪拌16h。過(guò)濾反應(yīng)混合物，濾餅用meoh洗滌。濃縮合并的濾液，殘留物通過(guò)prep-tlc純化(dcm:meoh＝25:1)，獲得102g(30mg,20％)，為黃色固體。

步驟6:根據(jù)實(shí)施例101(步驟2)的方法，制備102。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.71(s,1h),8.59(s,1h),8.20(s,1h),7.90(d,j＝6.0hz,1h),7.71(s,1h),7.48-7.61(m,3h),6.88(t,j＝5.2hz,1h),6.52(s,1h),4.98(t,j＝6.0hz,1h),4.38(m,3h),4.02-4.01(m,3h),3.88(m,1h),3.29(s,1h),2.56(s,2h),2.42(s,2h),1.21(s,6h)；ms-esi[m+h]⁺＝512.2。

實(shí)施例1031-[2-(7,7-二甲基-4-氧代-1,2,6,8-四氫環(huán)戊二烯并[3,4]吡咯[3,5-b]吡嗪-3-基)-3-(羥基甲基)-4-吡啶基]-3-(2-吡啶基氨基)吡唑-4-甲酰胺103

步驟1:103a的制備

將1-[2-(7,7-二甲基-4-氧代-1,2,6,8-四氫環(huán)戊二烯并[3,4]吡咯并[3,5-b]吡嗪-3-基)-3-(羥基甲基)吡啶-4-基)-3-碘-1h-吡唑-4-甲腈5(230mg,0.43mmol)、吡啶-2-胺(60mg,0.64mmol)、pd2(dba)3(39mg,0.043mmol)、xantphos(49mg,0.086mmol)和cs2co3(259mg,1.1mmol)的無(wú)水二氧六環(huán)(10ml)混合物在手套式操作箱中加熱至90℃18h。將反應(yīng)混合物冷卻至rt，過(guò)濾。濃縮濾液，殘留物通過(guò)制備性tlc純化(正相硅膠,uv254,dcm/meoh＝25/1)，獲得103a(130mg,61％)，為黃色固體；ms-esi[m+h]⁺＝495.1。

步驟2:根據(jù)實(shí)施例101步驟2的方法，將103a的腈基團(tuán)水解，獲得103:¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.76(s,1h),8.85(s,1h),8.57(d,j＝5.6hz,1h),8.22(d,j＝3.6hz,1h),8.04(d,j＝8.0hz,1h),7.77(t,j＝8.0hz,1h),7.61(m,1h),7.43(s,1h),6.92(t,j＝5.2hz,1h),6.59(s,1h),4.98(t,j＝6.0hz,1h),4.73(m,1h),4.46(m,1h),4.27(m,1h),3.95(m,1h),2.59(d,j＝14.4hz,1h),2.43(s,2h),1.21(s,6h)；ms-esi[m+h]⁺＝513.1.

實(shí)施例1041-[3-(7,7-二甲基-4-氧代-1,2,6,8-四氫環(huán)戊二烯并[3,4]吡咯[3,5-b]吡嗪-3-基)-2-(羥基甲基)苯基]-3-(嘧啶-4-基氨基)吡唑-4-甲酰胺104

根據(jù)實(shí)施例102的方法，使得嘧啶-4-胺與102f反應(yīng)，獲得104:¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.5(s,1h),8.69(s,1h),8.63(s,1h),8.51(d,j＝10.4hz,1h),7.94(m,2h),7.49-7.59(m,4h),6.52(s,1h),4.97(t,j＝4.8hz,1h),4.36(d,j＝4.4hz,2h),4.21-4.16(m,3h),3.88(t,j＝0.8hz,1h),2.57(s,2h),2.42(s,2h),1.22(s,6h)；ms-esi[m+h]⁺＝513.2.

實(shí)施例1051-[3-(7,7-二甲基-4-氧代-1,2,6,8-四氫環(huán)戊二烯并[3,4]吡咯[3,5-b]吡嗪-3-基)-2-(羥基甲基)苯基]-3-[(1-甲基三唑-4-基)氨基]吡唑-4-甲酰胺105

根據(jù)實(shí)施例102的方法，采用1-甲基-1h-1,2,3-三唑-4-胺作為原料，制備105。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.10(s,1h),8.52(s,1h),7.93(s,1h),7.76(brs,1h),7.54(m,3h),7.31(s,1h),6.51(s,1h),4.97(t,j＝4.8hz1h),4.35(d,j＝4.8hz,2h),4.20(m,3h),3.99(s,3h),3.87(m,1h),2.57(s,2h),2.42(s,2h),1.22(s,6h)；ms-esi[m+h]⁺＝516.2

實(shí)施例1061-[2-(6-叔-丁基-8-氟-1-氧代-酞嗪-2-基)-3-(羥基甲基)-4-吡啶基]-3-(2-吡啶基氨基)吡唑-4-甲酰胺106

根據(jù)實(shí)施例103的方法，采用1-(2-(6-叔-丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1h)-基)-3-(羥基甲基)吡啶-4-基)-3-碘-1h-吡唑-4-甲腈106a作為原料，制備106。¹hnmr(400mhz,cd3od):δ8.84(s,1h),8.70(d,j＝5.2hz,1h),8.54(d,j＝2.8hz,1h),8.20(d,j＝4.0hz,1h),7.90(m,3h),7.75(m,2h),6.95(t,j＝6.8hz,1h),4.74(s,2h),1.49(s,9h)；ms-esi[m+h]⁺＝529.2

實(shí)施例1073-(環(huán)丙烷羰基氨基)-1-[2-(7,7-二甲基-4-氧代-1,2,6,8-四氫環(huán)戊二烯并[3,4]吡咯并[3,5-b]吡嗪-3-基)-3-(羥基甲基)-4-吡啶基]吡唑-4-甲酰胺107

步驟1:n-(4-氰基l-1h-吡唑-3-基)環(huán)丙烷甲酰胺107a的制備

將3-氨基-1h-吡唑-4-甲腈(100mg,0.93mmol)、cpca(8.5μl,1.02mmol)、hbtu(421.0mg,1.11mmol)、diea(2.1ml,0.44m)和dmf(10ml)混合，于室溫下攪拌。72h后，將反應(yīng)物用飽和的碳酸氫鈉水溶液稀釋，用etoac萃取(3×)。合并的有機(jī)萃取物用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮，直接使用。ms-esi[m+h]⁺＝177.0。

步驟2:根據(jù)實(shí)施例109步驟2和3的方法，使得107a與2-(1-羥基-1,3-二氫-[1,2]氧雜硼雜環(huán)戊并[4,3-c]吡啶-4-基)-7,7-二甲基-2,3,4,6,7,8-六氫-1h-環(huán)戊二烯并[4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-1-酮3反應(yīng)，獲得107，為灰白色固體。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.34(s,1h),8.82(s,1h),8.57(d,j＝5.3hz,1h),7.83(s,1h),7.54(d,j＝5.4hz,1h),7.45(s,1h),6.57(s,1h),5.11(s,1h),4.58(d,j＝12.7hz,1h),4.40(d,j＝7.7hz,1h),4.21(m,3h),3.93(d,j＝11.8hz,1h),2.65-2.51(m,2h),2.43(s,2h),1.23(d,j＝5.2hz,6h),0.88-0.81(m,4h)；ms-esi[m+h]⁺＝504.4。

實(shí)施例1081-[2-(7,7-二甲基-4-氧代-1,2,6,8-四氫環(huán)戊二烯并[3,4]吡咯并[3,5-b]吡嗪-3-基)-3-(羥基甲基)-4-吡啶基]吲唑-3-甲酰胺108

步驟1:1-(2-(7,7-二甲基-1-氧代-3,4,7,8-四氫-1h-環(huán)戊二烯并[4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(6h)-基)-3-(羥基甲基)吡啶-4-基)-1h-吲唑-3-甲酸甲酯108a的制備

將2-(1-羥基-1,3-二氫-[1,2]氧雜硼雜環(huán)戊并[4,3-c]吡啶-4-基)-7,7-二甲基-2,3,4,6,7,8-六氫-1h-環(huán)戊二烯并[4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-1-酮3(200mg,0.6mmol)、1h-吲唑-3-甲酸甲酯(158mg,0.9mmol)、乙酸銅(ii)(163mg,0.9mmol)和吡啶(95mg,1.2mmol)的n,n-二甲基甲酰胺(20ml)混合物于20℃、空氣中攪拌16小時(shí)。將獲得的混合物倒入水(100ml)中，用乙酸乙酯萃取(50ml×3)。合并的有機(jī)層經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾并濃縮。殘留物通過(guò)prep-tlc純化(二氯甲烷:甲醇＝20:1)，獲得108a(50mg,17％)，為白色固體。ms-esi[m+h]⁺＝486.1。

步驟2:將108a(50mg,0.103mmol)的nh3-meoh(20ml)混合物在密封的試管中于100℃攪拌16小時(shí)。冷卻反應(yīng)物，濃縮揮發(fā)性溶劑。殘留物通過(guò)prep-tlc純化(二氯甲烷:甲醇＝20:1)，獲得108(27.3mg,57％)，為白色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3):δ8.63(d,j＝5.2hz,1h),8.45(d,j＝8.4hz,1h),7.51-7.49(m,2h),7.40-7.39(m,2h),6.91(s,1h),6.82(s,1h),5.50(s,1h),4.58-4.57(m,2h),4.18(m,4h),3.55(m,1h),2.56(s,2h),2.50(s,2h),1.26(s,6h)；ms-esi[m+h]⁺＝471.2。

實(shí)施例1094-(環(huán)丙烷羰基氨基)-1-[2-(7,7-二甲基-4-氧代-1,2,6,8-四氫環(huán)戊二烯并[3,4]吡咯并[3,5-b]吡嗪-3-基)-3-(羥基甲基)-4-吡啶基]吡唑-3-甲酰胺109

步驟1:n-(3-氰基-1h-吡唑-4-基)環(huán)丙烷甲酰胺109a的制備

向4-氨基-1h-吡唑-3-甲腈(270mg,2.4977mmol)的dmf的溶液中加入環(huán)丙烷甲酸(1.1equiv.,2.7475mmol)、hbtu(1.2equiv.,2.9972mmol)和diea(10equiv.,24.977mmol)。反應(yīng)完成后，將反應(yīng)物用飽和的碳酸氫鈉水溶液稀釋，用乙酸乙酯萃取。真空濃縮有機(jī)層，通過(guò)快速柱色譜在硅膠上純化，獲得109a。ms-esi[m+h]⁺＝177.1。

步驟2:n-(3-氰基-1-(2-(7,7-二甲基-1-氧代-3,4,7,8-四氫-1h-環(huán)戊二烯并[4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(6h)-基)-3-甲?；拎?4-基)-1h-吡唑-4-基)環(huán)丙烷甲酰胺109b的制備

使得109a(190mg,1.0784mmol)的dmso(4ml,56mmol)溶液與2-(1-羥基-1,3-二氫-[1,2]氧雜硼雜環(huán)戊并[4,3-c]吡啶-4-基)-7,7-二甲基-2,3,4,6,7,8-六氫-1h-環(huán)戊二烯并[4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-1-酮3和叔丁醇鉀(183.4mg,1.6177mmol)反應(yīng)，在微波中于130℃加熱90分鐘。將反應(yīng)物用水稀釋，用乙酸乙酯萃取。濃縮有機(jī)相，通過(guò)柱色譜純化(洗脫液：0－70％乙酸乙酯的庚烷溶液；0－4％甲醇的dcm溶液)，獲得109b。ms-esi[m+h]⁺＝484.5。

步驟3:于0℃，向109b(78.6mg,0.163mmol)的甲醇(2.0ml,49mmol)溶液中加入硼氫化鈉(6.2mg,0.163mmol，2.5hr后，第二次加入硼氫化鈉(6.2mg,0.163mmol)。1h后，將反應(yīng)物溫?zé)嶂潦覝?hr，用dcm稀釋，用飽和的碳酸氫鈉水溶液萃取。有機(jī)相用鹽水洗滌，濃縮，通過(guò)柱色譜純化(洗脫液：0－5％甲醇的dcm溶液)，直接使用。將粗品產(chǎn)物溶于乙醇和水(2:1；3ml)的混合物中，加入二(二甲基膦基氧基)鉑二甲基膦酸(3.4mg,0.008mmol)。將獲得的混合物加熱至90℃2.5h，使其冷卻至室溫16h。真空濃縮反應(yīng)物，通過(guò)hplc純化，獲得109:ms-esi[m+h]⁺＝503.6。

實(shí)施例1101-[2-(7,7-二甲基-4-氧代-1,2,6,8-四氫環(huán)戊二烯并[3,4]吡咯并[3,5-b]吡嗪-3-基)-3-(羥基甲基)-4-吡啶基]吡唑并[3,4-b]吡啶-3-甲酰胺110

根據(jù)實(shí)施例108的方法，采用1h-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-甲酸甲基酯作為原料，制備110:¹hnmr(400mhz,cdcl3):δ8.80(d,j＝8.0hz,1h),8.64(d,j＝5.2hz,1h),8.61-8.60(m,1h),7.56(d,j＝5.2hz,1h),7.40(dd,j＝8.0,4.4hz,1h),7.10(s,1h),6.80(s,1h),5.60(s,1h),4.59(s,2h),4.36-4.18(m,4h),3.48(s,1h),2.56(s,2h),2.49(s,2h),1.26(s,6h)；ms-esi[m+h]⁺＝472.3。

實(shí)施例1111-[2-(6-叔-丁基-8-氟-1-氧代-酞嗪-2-基)-3-(羥基甲基)-4-吡啶基]-3-[(1-甲基三唑-4-基)氨基]吡唑-4-甲酰胺111

步驟1：1-(2-(6-叔-丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1h)-基)-3-(羥基甲基)吡啶-4-基)-3-碘-1h-吡唑-4-甲腈111a的制備

根據(jù)實(shí)施例3和5的方法，采用2-(7-叔-丁基-5-氟-4-氧代吡啶并[4,3-d]噠嗪-3(4h)-基)-4-氯代吡啶甲醛作為原料，制備111a。ms-esi[m+h]⁺＝545.8。

步驟2：根據(jù)實(shí)施例105的方法，使得111a和1-甲基-1h-1,2,3-三唑-4-胺反應(yīng)獲得111：¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.16(s,1h),8.79(s,1h),8.68(d,j＝7.0hz,1h),8.58(d,j＝3.0hz,1h),8.07(s,1h),7.92-7.87(m,overlap,3h),7.80(d,j＝16.5hz,1h),7.48(s,1h),5.12(t,j＝6.5hz,1h),4.60-4.56(m,2h),4.03(s,3h),1.39(s,9h)；ms-esi[m+h]⁺＝533.0。

實(shí)施例1121-[2-(7,7-二甲基-4-氧代-1,2,6,8-四氫環(huán)戊二烯并[3,4]吡咯并[3,5-b]吡嗪-3-基)-3-(羥基甲基)-4-吡啶基]-3-[(2-氟環(huán)丙烷羰基)氨基]吡唑-4-甲酰胺112

根據(jù)實(shí)施例109的方法，采用n-(4-氰基-1h-吡唑-3-基)-2-氟-環(huán)丙烷甲酰胺作為原料，制備112。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.40(s,1h),8.84(s,1h),8.57(d,j＝5.3hz,1h),7.85(s,1h),7.56(d,j＝5.4hz,1h),7.47(s,1h),6.58(d,j＝3.7hz,1h),5.08-4.88(m,2h),4.58(m,1h),4.41(m,1h),4.32-4.12(m,3h),3.93(d,j＝11.9hz,1h),2.58(d,j＝4.6hz,2h),2.43(s,2h),1.62(d,j＝23.3hz,1h),1.22(s,6h)；ms-esi[m+h]⁺＝522.2。

實(shí)施例1131-[2-(7,7-二甲基-4-氧代-1,2,6,8-四氫環(huán)戊二烯并[3,4]吡咯并[3,5-b]吡嗪-3-基)-3-(羥基甲基)-4-吡啶基]吡唑-4-甲酰胺113

根據(jù)實(shí)施例109步驟2和3的方法，采用1h-吡唑-4-甲腈(2.0equiv.,1.745mmol)作為原料，制備113：¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.79(d,j＝0.7hz,1h),8.58(d,j＝5.3hz,1h),8.20(d,j＝0.6hz,1h),7.77(s,1h),7.59(d,j＝5.3hz,1h),7.22(s,1h),6.59(s,1h),5.03(t,j＝5.6hz,1h),4.52(d,j＝10.8hz,1h),4.41(d,j＝6.3hz,1h),4.27(d,j＝11.3hz,1h)；ms-esi[m+h]⁺＝421.2。

實(shí)施例1141-[2-(6-叔-丁基-8-氟-1-氧代-酞嗪-2-基)-3-(羥基甲基)-4-吡啶基]-3-苯基-吡唑-4-甲酰胺114

步驟1:1-(2-(6-(叔-丁基)-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1h)-基)-3-(羥基甲基)吡啶-4-基)-3-苯基-1h-吡唑-4-甲腈114a的制備

將碳酸銫(3equiv.,0.2756mmol)、5(50mg,0.09mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-苯基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷(28.1mg,0.14mmol)和二(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(ii)(7.1mg,0.01mmol)在1,4-二氧六環(huán)(0.9ml)和水(0.1ml)中的混合物在微波中加熱至110℃15min。加入4,4,5,5-四甲基-2-苯基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷(28.1mg,0.14mmol)，將反應(yīng)物在微波中加熱至110℃20min，隨后加入4,4,5,5-四甲基-2-苯基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷(56.2mg,0.28mmol)，在微波中于110℃加熱20min。將反應(yīng)物用水稀釋，用乙酸乙酯萃取。有機(jī)相用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，過(guò)濾，真空濃縮通過(guò)柱色譜純化(洗脫液：0－80％乙酸乙酯的庚烷溶液；0－3％甲醇的dcm溶液)，獲得目標(biāo)產(chǎn)物。ms-esi[m+h]⁺＝495.4。

步驟2：將114a(25.7mg,0.05mmol)置于乙醇(1.0ml,17mmol)和水(0.5ml,30mmol)中，采用二(二甲基膦基氧基)鉑二甲基膦酸(1.1mg,0.003mmol)在氮?dú)猸h(huán)境中處理。將反應(yīng)物加熱至90℃21h，濃縮，通過(guò)hplc純化，獲得114：¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.82(s,1h),8.72(d,j＝5.4hz,1h),8.57(d,j＝2.5hz,1h),7.92(d,j＝1.8hz,1h),7.89-7.82(m,4h),7.79(dd,j＝13.1,1.7hz,1h),7.72(s,1h),7.47-7.40(m,3h),7.32(s,1h),5.15(s,1h),4.56(d,j＝18.7hz,2h),1.40(s,9h),1.16(s,2h)；ms-esi[m+h]⁺＝513.2。

實(shí)施例1151-[2-(6-叔-丁基-8-氟-1-氧代-酞嗪-2-基)-3-(羥基甲基)-4-吡啶基]-3-(1-甲基吡唑-4-基)吡唑-4-甲酰胺115

步驟1：1-(2-(6-叔-丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1h)-基)-3-(羥基甲基)吡啶-4-基)-1'-甲基-1h,1'h-3,4'-聯(lián)吡唑-4-甲腈115a的制備

向小瓶中加入1-(2-(6-叔-丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1h)-基)-3-(羥基甲基)吡啶-4-基)-3-碘-1h-吡唑-4-甲腈111a(100mg,0.184mmol)、1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷-2-基)吡唑(76.5mg,0.367mmol)、碳酸銫(179.6mg,0.55mmol)和pd(dppf)cl2(14.2mg,0.018mmol)。加入脫氣的1,4-二氧六環(huán)(3.7ml)和水(1ml)。將反應(yīng)混合物抽真空/再充入n2(3×)。將小瓶加蓋，將反應(yīng)混合物于90℃攪拌2h。將粗品反應(yīng)物通過(guò)硅藻土墊過(guò)濾，濾墊用etoac充分沖洗(3×20ml)。濾液用水和鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，減壓濃縮。殘留物通過(guò)硅膠柱色譜純化(etoac:meoh梯度洗脫)，獲得75.7mg(82.7％)的115a。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.21(s,1h),8.77(d,j＝5.3hz,1h),8.36(d,j＝2.5hz,1h),8.09(s,2h),7.92(d,j＝5.4hz,1h),7.57(d,j＝11.4hz,2h),4.58-4.41(m,3h),4.00(s,3h),1.44(s,9h)；ms-esi[m+h]⁺＝499.3。

步驟2：向溶于etoh(7.6ml)和h2o(2.2ml)的115a(75.7mg,0.15mmol)的攪拌溶液中加入二(二甲基膦基氧基)鉑二甲基膦酸(5.2mg,0.012mmol)，將反應(yīng)混合物于90℃空氣中攪拌4h。將反應(yīng)物在dcm中稀釋。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，減壓濃縮。粗品混合物通過(guò)制備性hplc純化，獲得為固體的115(50.3mg,64.1％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.80(s,1h),8.71(d,j＝5.3hz,1h),8.57(d,j＝2.6hz,1h),8.38(s,1h),7.98(d,j＝0.8hz,1h),7.92(d,j＝1.7hz,1h),7.82(d,j＝5.3hz,1h),7.79(dd,j＝13.1,1.7hz,1h),7.68(brs,1h),7.23(brs,1h),5.08(t,j＝5.5hz,1h),4.65-4.44(m,2h),3.89(s,3h),1.39(s,9h)；ms-esi[m+h]⁺＝517.2。

實(shí)施例1161-[2-(6-叔-丁基-8-氟-1-氧代-酞嗪-2-基)-3-(羥基甲基)-4-吡啶基]-3-[(5-氯代-2-吡啶基)氨基]吡唑-4-甲酰胺116

步驟1:1-(2-(6-叔-丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1h)-基)-3-(羥基甲基)吡啶-4-基)-3-(5-氯代吡啶-2-基氨基)-1h-吡唑-4-甲腈116a的制備

向小瓶中加入1-(2-(6-叔-丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1h)-基)-3-(羥基甲基)吡啶-4-基)-3-碘-1h-吡唑-4-甲腈111a(40.0mg,0.073mmol)、5-氯代吡啶-2-胺(12.3mg,0.095mmol)、xantphos(10.6mg,0.018mmol)、碳酸銫(71.8mg,0.22mmol)和三(二亞芐基丙酮)二鈀(0)(9.0mg,0.009mmol)。加入脫氣的1,4-二氧六環(huán)(1.4ml)，將反應(yīng)混合物抽真空/再充入n2(3×)。將小瓶加蓋，將反應(yīng)混合物于95℃攪拌2.5h。將粗品反應(yīng)物通過(guò)硅藻土墊過(guò)濾，濾墊用etoac充分洗滌(3×20ml)。濾液用水和鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，減壓濃縮。殘留物通過(guò)硅膠柱色譜純化(etoac:meoh梯度洗脫)，獲得15.9mg(39.7％)的116a。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.19(s,1h),8.77(d,j＝5.4hz,1h),8.37(t,j＝2.3hz,1h),8.25(d,j＝2.5hz,1h),7.95(d,j＝8.9hz,1h),7.90(d,j＝5.3hz,1h),7.68(dd,j＝8.9,2.6hz,1h),7.59(s,2h),7.33(s,1h),4.60-4.44(m,3h),1.44(s,9h)；ms-esi[m+h]⁺＝545.3。

步驟2:根據(jù)實(shí)施例115步驟2的方法，采用116a作為原料，制備116。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.87(s,1h),8.84(s,1h),8.70(d,j＝5.4hz,1h),8.57(d,j＝2.6hz,1h),8.26(dd,j＝2.6,0.8hz,1h),8.04(dd,j＝8.8,0.7hz,1h),7.93(brs,1h),7.92(d,j＝1.7hz,1h),7.89(dd,j＝9.0,2.7hz,1h),7.84(d,j＝5.3hz,1h),7.79(dd,j＝13.1,1.7hz,1h),7.52(brs,1h),5.12(t,j＝5.1hz,1h),4.58(d,j＝23.5hz,2h),1.40(s,9h)；ms-esi[m+h]⁺＝563.2。

實(shí)施例1173-氨基-1-[2-(7,7-二甲基-4-氧代-1,2,6,8-四氫環(huán)戊二烯并[3,4]吡咯并[3,5-b]吡嗪-3-基)-3-(羥基甲基)-4-吡啶基]吡唑-4-甲酰胺117

根據(jù)實(shí)施例114步驟2的方法，將3-氨基-1-[2-(7,7-二甲基-4-氧代-1,2,6,8-四氫環(huán)戊二烯并[3,4]吡咯并[3,5-b]吡嗪-3-基)-3-(羥基甲基)-4-吡啶基]吡唑-4-甲腈117a轉(zhuǎn)化為117：¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.61(s,1h),8.48(d,j＝5.4hz,1h),7.61-7.53(m,1h),7.49(d,j＝5.4hz,1h),7.03(s,1h),6.57(d,j＝0.6hz,1h),5.81(s,2h),5.01(t,j＝5.9hz,1h),4.64(dd,j＝13.0,4.9hz,1h),4.42(dd,j＝13.0,6.6hz,1h),4.28-4.15(m,2h),3.91(d,j＝12.1hz,1h),2.58(d,j＝6.3hz,2h),2.43(s,2h),1.22(s,6h)；ms-esi[m+h]⁺＝436.2。

實(shí)施例1181-[2-(6-叔-丁基-8-氟-1-氧代-酞嗪-2-基)-3-(羥基甲基)-4-吡啶基]-3-[(5-哌嗪-1-基-2-吡啶基)氨基]吡唑-4-甲酰胺118

步驟1:4-(6-(1-(2-(6-叔-丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1h)-基)-3-(羥基-甲基)吡啶-4-基)-4-氨基甲酰基-1h-吡唑-3-基氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔-丁基酯118a的制備

根據(jù)實(shí)施例116的方法，使得作為原料的4-(6-氨基-3-吡啶基)哌嗪-1-甲酸叔-丁基酯與1-(2-(6-叔-丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1h)-基)-3-(羥基甲基)吡啶-4-基)-3-碘-1h-吡唑-4-甲腈111a反應(yīng)，獲得118a：ms-esi[m+h]⁺＝713.4。

步驟2:向118a(36mg,0.05mmol)的meoh(1ml)和dcm(1ml)溶液中加入hcl(4m)的1,4-二氧六環(huán)(0.6ml)溶液，將反應(yīng)混合物于40℃攪拌1.5h，然后減壓濃縮。粗品產(chǎn)物通過(guò)制備性hplc純化，獲得為固體的118(5.6mg,17.0％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.45(s,1h),8.81(s,1h),8.68(d,j＝5.3hz,1h),8.57(d,j＝2.6hz,1h),7.92(d,j＝1.9hz,2h),7.87(t,j＝7.9hz,2h),7.84-7.76(m,2h),7.44(dd,j＝9.2,3.0hz,2h),5.14(t,j＝5.5hz,1h),4.63(brs,1h),4.55(brs,1h),2.99(brs,4h),2.87(brs,4h),1.40(s,9h),1hnotseen；ms-esi[m+h]⁺＝613.3。

實(shí)施例1191-[2-(7,7-二甲基-4-氧代-1,2,6,8-四氫環(huán)戊二烯并[3,4]吡咯并[3,5-b]吡嗪-3-基)-3-(羥基甲基)-4-吡啶基]-3-[(1-甲基三唑-4-基)氨基]吡唑-4-甲酰胺119

根據(jù)實(shí)施例115的方法，采用1-甲基三唑-4-胺作為原料，制備119。ms-esi[m+h]⁺＝517.2.

實(shí)施例1201-[2-(6-叔-丁基-8-氟-1-氧代-酞嗪-2-基)-3-(羥基甲基)-4-吡啶基]-3-[[5-[(2s)-2-甲基-4-(氧雜環(huán)丁烷-3-基)哌嗪-1-基]-2-吡啶基]氨基]吡唑-4-甲酰胺120

根據(jù)實(shí)施例116的方法，采用5-[(2s)-2-甲基-4-(氧雜環(huán)丁烷-3-基)哌嗪-1-基]吡啶-2-胺作為原料，制備120。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.49(s,1h),8.82(s,1h),8.68(d,j＝5.4hz,1h),8.57(d,j＝2.6hz,1h),7.95-7.88(m,3h),7.87(brs,1h),7.82(d,j＝5.3hz,1h),7.79(dd,j＝13.1,1.7hz,1h),7.48(dd,j＝9.0,2.9hz,1h),7.43(brs,1h),5.16(t,j＝5.6hz,1h),4.63(brs,1h),4.56(td,j＝6.4,3.2hz,3h),4.48(t,j＝6.0hz,1h),4.43(t,j＝6.0hz,1h),3.76-3.67(m,1h),3.41(p,j＝6.3hz,1h),3.17-3.09(m,1h),3.03-2.94(m,1h),2.60-2.54(m,1h),2.39-2.30(m,2h),2.25-2.17(m,1h),1.40(s,9h),0.96(d,j＝6.4hz,3h)；ms-esi[m+h]⁺＝683.3。

實(shí)施例1211-[2-(6-叔-丁基-8-氟-1-氧代-酞嗪-2-基)-3-(羥基甲基)-4-吡啶基]-3-[1-(二氟甲基)吡唑-4-基]吡唑-4-甲酰胺121

根據(jù)實(shí)施例115的方法，采用1-(二氟甲基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷-2-基)吡唑作為原料，制備121。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.95(d,j＝0.6hz,1h),8.87(s,1h),8.73(d,j＝5.3hz,1h),8.57(d,j＝2.5hz,1h),8.32(s,1h),7.99-7.89(m,2h),7.84(d,j＝5.3hz,1h),7.82-7.75(m,2h),7.33(brs,1h),5.10-5.02(m,1h),4.58(brs,1h),4.52(brs,1h),1.39(s,9h)；ms-esi[m+h]⁺＝553.2。

實(shí)施例1221-[2-(6-叔-丁基-8-氟-1-氧代-酞嗪-2-基)-3-(羥基甲基)-4-吡啶基]-3-(1,3-二甲基吡唑-4-基)吡唑-4-甲酰胺122

根據(jù)實(shí)施例115的方法，采用1,3-二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷-2-基)吡唑作為原料，制備122。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.80(s,1h),8.70(d,j＝5.4hz,1h),8.56(d,j＝2.6hz,1h),8.28(s,1h),7.91(d,j＝1.7hz,1h),7.83(d,j＝5.4hz,1h),7.79(dd,j＝13.1,1.7hz,1h),7.62(s,1h),7.22(s,1h),5.09(s,1h),4.57(d,j＝17.1hz,2h),3.80(s,3h),2.36(s,3h),1.39(s,9h)；ms-esi[m+h]⁺＝531.2。

實(shí)施例1231-[2-(7,7-二甲基-4-氧代-1,2,6,8-四氫環(huán)戊二烯并[3,4]吡咯并[3,5-b]吡嗪-3-基)-3-(羥基甲基)-4-吡啶基]-3-(丙?；被?吡唑-4-甲酰胺123

步驟1:1-(2-(7,7-二甲基-1-氧代-3,4,7,8-四氫-1h-環(huán)戊二烯并[4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(6h)-基)-3-(羥基甲基)吡啶-4-基)-4-(三苯甲基氨基)-1h-吡唑-3-甲腈123a的制備

根據(jù)實(shí)施例5的方法，采用3-(三苯甲基氨基)-1h-吡唑-4-甲腈作為原料，制備123a。ms-esi[m+h]⁺＝660.6。

步驟2:4-氨基-1-(2-(7,7-二甲基-1-氧代-3,4,7,8-四氫-1h-環(huán)戊二烯并[4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(6h)-基)-3-(羥基甲基)吡啶-4-基)-1h-吡唑-3-甲腈123b的制備

于0℃，將123a(400mg,0.6ammol)在乙醚(30ml,287mmol)中的攪拌混合物采用hcl(4m)的1,4-二氧六環(huán)(3.0ml,12mmol)溶液處理，隨后采用dcm(12ml)處理，將反應(yīng)物逐漸溫?zé)嶂潦覝亍?.5h后，反應(yīng)物用dcm稀釋，采用mp-碳酸鹽樹(shù)脂處理30分鐘，過(guò)濾并真空濃縮。粗品產(chǎn)物通過(guò)硅膠快速色譜純化(洗脫液：0－20％甲醇的dcm溶液)，獲得123b，為白色固體。ms-esi[m+h]⁺＝418.4。

步驟3:將二異丙基乙胺(diea,25μl,0.14mmol)和丙酸(5μl,0.07mmol)加至123b(20mg,0.04790mmol)的dmf(1ml,12.9mmol)溶液中。將反應(yīng)物冷卻至0℃，攪拌10min。加入hatu(27.9mg,0.07mmol)，將反應(yīng)物攪拌同時(shí)溫?zé)嶂?0℃8h。加入另一份丙酸(7.5μl,0.11mmol)、diea(25μl,0.14mmol)和hatu(27.9mg,0.07mmol)，將反應(yīng)物于90℃攪拌4h，隨后于60℃攪拌72h。加入水，將反應(yīng)物用乙酸乙酯萃取。有機(jī)相用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，過(guò)濾，真空濃縮，通過(guò)柱色譜純化(洗脫液：0－3％甲醇的dcm溶液)。然后將產(chǎn)物置于乙醇(2ml,34.3mmol)和水(1.0ml,56mmol)中，加入二(二甲基膦基氧基)鉑二甲基膦酸(0.05equiv.,0.002395mmol)。將反應(yīng)物在密封瓶中于90℃攪拌16h，濃縮，通過(guò)hplc純化，獲得123。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.56-8.49(m,2h),7.43(d,j＝5.4hz,1h),6.59(s,1h),5.73(s,2h),3.33(s,5h),2.61-2.50(m,2h),2.43(s,3h),2.01-1.91(m,2h),1.22(s,6h),0.79(t,j＝7.5hz,3h)；ms-esi[m+h]⁺＝492.2。

實(shí)施例1243-乙酰氨基-1-[2-(7,7-二甲基-4-氧代-1,2,6,8-四氫環(huán)戊二烯并[3,4]吡咯并[3,5-b]吡嗪-3-基)-3-(羥基甲基)-4-吡啶基]吡唑-4-甲酰胺124

根據(jù)實(shí)施例123的方法，采用乙酸作為原料，制備124。¹hnmr(400mhz,cd3od):δ8.47(d,j＝5.3hz,1h),7.92(s,1h),7.38(d,j＝5.3hz,1h),6.79(s,1h),5.63-5.04(m,1h),4.99(s,2h),4.52-4.47(m,1h),4.31-4.00(m,3h),2.56(d,j＝4.4hz,2h),2.51(s,1h),2.49(s,2h),1.79(s,3h),1.27(s,1h),1.26(s,6h)；ms-esi[m+h]⁺＝478.2。

實(shí)施例1251-[2-(7,7-二甲基-4-氧代-1,2,6,8-四氫環(huán)戊二烯并[3,4]吡咯并[3,5-b]吡嗪-3-基)-3-(羥基甲基)-4-吡啶基]-3-[[5-[(2s)-2-甲基-4-(氧雜環(huán)丁烷-3-基)哌嗪-1-基]-2-吡啶基]氨基]吡唑-4-甲酰胺125

步驟1:(s)-1-(2-(7,7-二甲基-1-氧代-3,4,7,8-四氫-1h-環(huán)戊二烯并[4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(6h)-基)-3-(羥基甲基)吡啶-4-基)-3-((5-(2-甲基-4-(氧雜環(huán)丁烷-3-基)哌嗪-1-基)吡啶-2-基)氨基)-1h-吡唑-4-甲腈125a的制備

向獲自實(shí)施例5的1-[2-(7,7-二甲基-4-氧代-1,2,6,8-四氫環(huán)戊二烯并[3,4]吡咯并[3,5-b]吡嗪-3-基)-3-(羥基甲基)吡啶-4-基)-3-碘-1h-吡唑-4-甲腈5(40mg,0.08mmol)、獲自實(shí)施例4的(s)-5-(2-甲基-4-(氧雜環(huán)丁烷-3-基)哌嗪-1-基)吡啶-2-胺4(30mg,0.12mmol)和碳酸銫(52mg,0.16mmol)的1,4-二氧六環(huán)(10ml)混合物中加入brettphos(4.3mg,0.008mmol)和ruphos預(yù)催化劑(3mg,0.004mmol)。將混合物于100℃、氮?dú)猸h(huán)境中攪拌3小時(shí)。將獲得的混合物倒入水(100ml)中，用乙酸乙酯萃取(50ml×3)。合并的有機(jī)層經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾并濃縮。殘留物通過(guò)prep-tlc純化(二氯甲烷:甲醇＝20:1)，獲得125a(10mg,20％)，為白色固體。ms-esi[m+h]⁺＝649.3。

步驟2:根據(jù)實(shí)施例115步驟2的方法，采用125a作為原料，制備125。¹hnmr(400mhz,cd3od):δ8.82(s,1h),8.57(d,j＝5.2hz,1h),7.93-7.90(m,2h),7.70(d,j＝5.6hz,1h),7.60(d,j＝7.2hz,1h),6.74(s,1h),4.72-4.60(m,6h),4.40-4.35(m,1h),4.26-4.25(m,2h),4.01-3.98(m,1h),3.58(m,2h),3.12(m,2h),2.61-2.48(m,7h),2.32(m,1h),1.25(s,6h),1.00(d,j＝6.4hz,1h)；ms-esi[m+h]⁺＝667.3。

實(shí)施例1261-[2-(7,7-二甲基-4-氧代-1,2,6,8-四氫環(huán)戊二烯并[3,4]吡咯并[3,5-b]吡嗪-3-基)-3-(羥基甲基)-4-吡啶基]-4-[[5-[(2s)-2-甲基-4-(氧雜環(huán)丁烷-3-基)哌嗪-1-基]-2-吡啶基]氨基]吡唑-3-甲酰胺126

步驟1:4-溴-1-(2-(7,7-二甲基-1-氧代-3,4,7,8-四氫-1h-環(huán)戊二烯并[4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(6h)-基)-3-(羥基甲基)吡啶-4-基)-1h-吡唑-3-甲酸甲酯126a的制備

向獲自實(shí)施例3的2-(1-羥基-1,3-二氫-[1,2]氧雜硼雜環(huán)戊并[4,3-c]吡啶-4-基)-7,7-二甲基-2,3,4,6,7,8-六氫-1h-環(huán)戊二烯并[4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-1-酮3(300mg,0.89mmol)、4-溴-1h-吡唑-3-甲酸甲酯(182mg,0.89mmol)、乙酸銅(ii)(194mg,1.07mmol)和三乙胺(108mg,1.07mmol)的二氯甲烷(5ml)混合物中加入吡啶(85mg,1.02mmol)。將混合物于60℃、氧氣環(huán)境中攪拌1小時(shí)。加入水，有機(jī)層經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，濃縮。殘留物通過(guò)prep-tlc純化(二氯甲烷:甲醇＝30:1)，獲得126a(100mg,22％)，為黃色固體。ms-esi[m+na]⁺＝536.1/538.1。

步驟2:(s)-1-(2-(7,7-二甲基-1-氧代-3,4,7,8-四氫-1h-環(huán)戊二烯并[4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(6h)-基)-3-(羥基甲基)吡啶-4-基)-4-((5-(2-甲基-4-(氧雜環(huán)丁烷-3-基)哌嗪-1-基)吡啶-2-基)氨基)-1h-吡唑-3-甲酸甲酯126b的制備

將126a(70mg,0.14mmol)、8(34mg,0.14mmol)、brettphos(7.3mg,0.014mmol)、碳酸銫(89mg,0.27mmol)和brettphos預(yù)催化劑g3(6.2mg,0.007mmol)的1,4-二氧六環(huán)(2ml)混合物于100℃、氮?dú)猸h(huán)境中攪拌1小時(shí)。將獲得的混合物用水(5ml)稀釋，用乙酸乙酯萃取(20ml×3)。合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮。殘留物通過(guò)prep-tlc純化(二氯甲烷:甲醇＝30:1)，獲得126b(20mg,22％)，為黃色固體。ms-esi[m+h]⁺＝682.2。

步驟3:將126b(20mg,0.03mmol)在氨-四氫呋喃(50ml)中的混合物在密封試管中于100℃攪拌16小時(shí)。將獲得的混合物濃縮，殘留物通過(guò)prep-tlc純化(二氯甲烷:甲醇＝30:1)，獲得為固體的126(4.4mg,23％)：¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.52(s,1h),8.62(s,1h),8.54(d,j＝5.2hz,1h),8.03(s,1h),7.58(d,j＝5.6hz,1h),7.32-7.30(m,2h),6.86(s,1h),6.80(s,1h),6.75(d,j＝8.8hz,1h),5.43(s,1h),4.81-4.78(m,1h),4.71-4.65(m,6h),4.23-4.14(m,2h),3.61-3.49(m,2h),3.40-3.38(m,1h),3.07(m,2h),2.58-2.40(m,7h),2.20-2.10(m,1h),1.28(s,6h),0.96(d,j＝6.4hz,3h)；ms-esi[m+h]⁺＝667.2。

實(shí)施例1271-[3-(6-叔-丁基-8-氟-1-氧代-酞嗪-2-基)-5-氟-2-(羥基甲基)苯基]-3-(1-甲基吡唑-4-基)吡唑-4-甲酰胺127

步驟1：1-(3-(6-叔-丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1h)-基)-5-氟-2-(羥基甲基)苯基)-3-碘-1h-吡唑-4-甲腈127a

根據(jù)實(shí)施例115的方法，使得2-溴-6-(6-叔-丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1h)-基)-4-氟苯甲醛和1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷-2-基)吡唑在鈀催化下反應(yīng)，形成127a：ms-esi[m+h]⁺＝561.9。

步驟2：根據(jù)實(shí)施例115的方法，將127a轉(zhuǎn)化為127：¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.72(s,1h),8.32(d,j＝2.4hz,1h),8.19(s,1h),8.01(s,1h),7.59-7.57(m,2h),7.50(dd,j＝8.8,2.4hz,1h),7.23-7.20(m,1h),4.48(s,1h),4.32(s,2h),3.96(s,3h),1.44(s,9h)；ms-esi[m+h]⁺＝534.1。

實(shí)施例1283-(丁?；被?-1-[2-(7,7-二甲基-4-氧代-1,2,6,8-四氫環(huán)戊二烯并[3,4]吡咯并[3,5-b]吡嗪-3-基)-3-(羥基甲基)-4-吡啶基]吡唑-4-甲酰胺128

根據(jù)實(shí)施例123的方法，將4-氨基-1-(2-(7,7-二甲基-1-氧代-3,4,7,8-四氫-1h-環(huán)戊二烯并[4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(6h)-基)-3-(羥基甲基)吡啶-4-基)-1h-吡唑-3-甲腈123b和丁酸偶合，形成128：¹hnmr(400mhz,cd3od):δ8.46(d,j＝5.3hz,1h),7.96(s,1h),7.39(d,j＝5.3hz,1h),6.78(s,1h),5.51(d,j＝13.8hz,3h),5.05(d,j＝47.8hz,3h),4.57-4.43(m,1h),4.18(d,j＝46.8hz,3h),2.55(d,j＝5.2hz,2h),2.49(s,2h),2.00(t,j＝7.5hz,2h),1.41(h,j＝7.4hz,2h),1.26(s,6h),0.79(t,j＝7.4hz,3h)；ms-esi[m+h]⁺＝506.4。

實(shí)施例1293-(5-氨基吡嗪-2-基)-1-[2-(6-叔-丁基-8-氟-1-氧代-酞嗪-2-基)-3-(羥基甲基)-4-吡啶基]吡唑-4-甲酰胺129

根據(jù)實(shí)施例130的方法，將1-(2-(6-叔-丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1h)-基)-3-(羥基甲基)吡啶-4-基)-3-碘-1h-吡唑-4-甲腈111a轉(zhuǎn)化為129：ms-esi[m+h]⁺＝530.2。

實(shí)施例1301-[2-(6-叔-丁基-8-氟-1-氧代-酞嗪-2-基)-3-(羥基甲基)-4-吡啶基]-3-[3-[2-(二甲基氨基)乙基氨基甲?；鵠苯基]吡唑-4-甲酰胺130

步驟1:3-(1-(2-(6-叔-丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1h)-基)-3-(羥基甲基)吡啶-4-基)-4-氰基-1h-吡唑-3-基)-n-(2-(二甲基氨基)乙基)苯甲酰胺130a的制備

向1-(2-(6-叔-丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1h)-基)-3-(羥基甲基)吡啶-4-基)-3-碘-1h-吡唑-4-甲腈111a(40mg,0.073mmol)的無(wú)水a(chǎn)cn(1ml)的溶液中加入[3-(2-二甲基氨基乙基氨基甲?；?苯基]硼酸(26.4mg,0.112mmol)、pd(dppf)cl2與dcm的復(fù)合物(9mg,0.0112mmol)和1m碳酸鉀的水(1ml)溶液。將反應(yīng)混合物抽真空/再充入n2(3x)。將反應(yīng)混合物于110℃攪拌1h。粗品反應(yīng)物用etoac(2ml)和飽和的nh4cl水溶液(2ml)稀釋。分離各層。將有機(jī)層通過(guò)硅藻土墊過(guò)濾，經(jīng)硫酸鎂干燥，減壓濃縮，獲得粗品130a，其無(wú)需純化可以直接用于步驟2。

步驟2：向溶于thf(0.5ml)的粗品130a(0.07mmol)中加入etoh(0.5ml)、二(二甲基膦基氧基)鉑二甲基膦酸(3.0mg,0.007mmol)和h2o(1ml)，將反應(yīng)混合物于90℃、空氣中攪拌2h。將反應(yīng)物在dcm中稀釋。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾，減壓濃縮。粗品產(chǎn)物通過(guò)制備性hplc純化，獲得為固體的130(5.1mg,11.1％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.85(s,1h),8.74(d,j＝5.3hz,1h),8.57(d,j＝2.5hz,1h),8.47(t,j＝5.6hz,1h),8.26(t,j＝1.7hz,1h),8.01-7.71(m,6h),7.52(t,j＝7.7hz,1h),7.32(s,1h),5.13(t,j＝5.4hz,1h),4.56(d,j＝18.2hz,2h),3.44-3.34(m,2h),2.61-2.52(m,1h),2.47(d,j＝8.2hz,1h),2.25(s,6h),1.40(s,9h)；ms-esi[m+h]⁺＝627.3

實(shí)施例1311-[2-(6-叔-丁基-8-氟-1-氧代-酞嗪-2-基)-3-(羥基甲基)-4-吡啶基]-3-[4-(4-甲基哌嗪-1-羰基)苯基]吡唑-4-甲酰胺131

根據(jù)實(shí)施例130的方法，使得(4-甲基哌嗪-1-基)-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷-2-基)苯基]甲酮和111a反應(yīng)，形成131：¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.84(s,1h),8.73(d,j＝5.3hz,1h),8.57(d,j＝2.5hz,1h),7.97-7.84(m,4h),7.84-7.74(m,2h),7.52-7.41(m,2h),7.35(s,1h),5.12(t,j＝5.4hz,1h),4.56(d,j＝21.4hz,2h),3.62(s,2h),2.38-2.28(m,5h),2.20(s,3h),1.39(d,j＝3.6hz,9h)；ms-esi[m+h]⁺＝639.3。

實(shí)施例1321-[2-(6-叔-丁基-8-氟-1-氧代-酞嗪-2-基)-3-(羥基甲基)-4-吡啶基]-3-(1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)吡唑-4-甲酰胺132

根據(jù)實(shí)施例130的方法，使得5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷-2-基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶和111a反應(yīng)，形成132：¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.75(s,1h),8.86(s,1h),8.73(d,j＝5.3hz,1h),8.65(d,j＝2.0hz,1h),8.57(d,j＝2.5hz,1h),8.41(d,j＝2.0hz,1h),7.98-7.87(m,2h),7.79(dd,j＝13.1,1.8hz,1h),7.72(s,1h),7.51(dd,j＝3.4,2.4hz,1h),7.31(s,1h),6.56-6.48(m,1h),5.14(t,j＝5.4hz,1h),4.59(d,j＝21.7hz,2h),1.40(s,9h)；ms-esi[m+h]⁺＝553.2。

實(shí)施例1333-[4-(氨基甲基)苯基]-1-[2-(6-叔-丁基-8-氟-1-氧代-酞嗪-2-基)-3-(羥基甲基)-4-吡啶基]吡唑-4-甲酰胺133

根據(jù)實(shí)施例130的方法，將1-(2-(6-叔-丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1h)-基)-3-(羥基甲基)吡啶-4-基)-3-碘-1h-吡唑-4-甲腈111a轉(zhuǎn)化為133：ms-esi[m+h]⁺＝542.2。

實(shí)施例1341-[2-(6-叔-丁基-8-氟-1-氧代-酞嗪-2-基)-3-(羥基甲基)-4-吡啶基]-3-(1-異丁基吡唑-4-基)吡唑-4-甲酰胺134

根據(jù)實(shí)施例130的方法，將1-(2-(6-叔-丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1h)-基)-3-(羥基甲基)吡啶-4-基)-3-碘-1h-吡唑-4-甲腈111a轉(zhuǎn)化為134：ms-esi[m+h]⁺＝559.3。

實(shí)施例1351-[2-(6-叔-丁基-8-氟-1-氧代-酞嗪-2-基)-3-(羥基甲基)-4-吡啶基]-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-3-吡啶基]吡唑-4-甲酰胺135

根據(jù)實(shí)施例130的方法，使得1-甲基-4-(5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷-2-基)吡啶-2-基)哌嗪和111a反應(yīng)，形成135：¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.82(s,1h),8.71(d,j＝5.3hz,1h),8.58(dd,j＝11.8,2.5hz,2h),8.00(dd,j＝8.9,2.4hz,1h),7.92(d,j＝1.8hz,1h),7.90-7.75(m,2h),7.70(s,1h),7.29(s,1h),6.89(d,j＝9.0hz,1h),5.11(t,j＝5.4hz,1h),4.55(d,j＝20.5hz,2h),3.60-3.52(m,4h),2.43(q,j＝5.5,4.9hz,4h),2.24(s,3h),1.39(s,9h)；ms-esi[m+h]⁺＝612.3。

實(shí)施例1361-[2-(6-叔-丁基-8-氟-1-氧代-酞嗪-2-基)-3-(羥基甲基)-4-吡啶基]-3-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-吡啶基]吡唑-4-甲酰胺136

根據(jù)實(shí)施例130的方法，使得5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環(huán)戊硼烷-2-基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶和111a反應(yīng)，形成136：¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.83(s,1h),8.74(d,j＝5.3hz,1h),8.57(d,j＝2.5hz,1h),8.16(d,j＝5.2hz,1h),7.96-7.84(m,2h),7.83-7.72(m,2h),7.41(s,2h),7.09(dd,j＝5.1,1.2hz,1h),6.52(s,0h),5.13(t,j＝5.4hz,1h),4.53(d,j＝17.6hz,2h),3.50(t,j＝4.9hz,4h),2.41(t,j＝5.0hz,4h),2.22(s,3h),1.39(s,9h)；ms-esi[m+h]⁺＝612.3。

實(shí)施例1373-(6-乙酰氨基-3-吡啶基)-1-[2-(6-叔-丁基-8-氟-1-氧代-酞嗪-2-基)-3-(羥基甲基)-4-吡啶基]吡唑-4-甲酰胺137

根據(jù)實(shí)施例130的方法，將1-(2-(6-叔-丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1h)-基)-3-(羥基甲基)吡啶-4-基)-3-碘-1h-吡唑-4-甲腈111a轉(zhuǎn)化為137：ms-esi[m+h]⁺＝571.2。

實(shí)施例1381-[2-(6-叔-丁基-8-氟-1-氧代-酞嗪-2-基)-3-(羥基甲基)-4-吡啶基]-3-(6-羥基-3-吡啶基)吡唑-4-甲酰胺138

根據(jù)實(shí)施例130的方法，將1-(2-(6-叔-丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1h)-基)-3-(羥基甲基)吡啶-4-基)-3-碘-1h-吡唑-4-甲腈111a轉(zhuǎn)化為138：ms-esi[m+h]⁺＝530.2。

實(shí)施例1391-[2-(6-叔-丁基-8-氟-1-氧代-酞嗪-2-基)-3-(羥基甲基)-4-吡啶基]-3-(5-甲基磺?；?3-吡啶基)吡唑-4-甲酰胺139

根據(jù)實(shí)施例130的方法，將1-(2-(6-叔-丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1h)-基)-3-(羥基甲基)吡啶-4-基)-3-碘-1h-吡唑-4-甲腈111a轉(zhuǎn)化為139：ms-esi[m+h]⁺＝592.2。

實(shí)施例1401-[2-(6-叔-丁基-8-氟-1-氧代-酞嗪-2-基)-3-(羥基甲基)-4-吡啶基]-3-(3-喹啉基)吡唑-4-甲酰胺140

根據(jù)實(shí)施例130的方法，將1-(2-(6-叔-丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1h)-基)-3-(羥基甲基)吡啶-4-基)-3-碘-1h-吡唑-4-甲腈111a轉(zhuǎn)化為140：ms-esi[m+h]⁺＝564.2。

實(shí)施例1411-[2-(6-叔-丁基-8-氟-1-氧代-酞嗪-2-基)-3-(羥基甲基)-4-吡啶基]-3-[4-(羥基甲基)苯基]吡唑-4-甲酰胺141

根據(jù)實(shí)施例130的方法，使得[4-(羥基甲基)苯基]硼酸和111a反應(yīng)，形成141：¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.80(s,1h),8.72(d,j＝5.3hz,1h),8.57(d,j＝2.5hz,1h),7.98-7.75(m,5h),7.68(s,1h),7.41-7.34(m,2h),7.31(s,1h),5.23(t,j＝5.7hz,1h),5.13(t,j＝5.4hz,1h),4.55(d,j＝5.8hz,2h),2.59-2.52(m,2h),1.40(s,9h)；ms-esi[m+h]⁺＝543.2。

實(shí)施例1421-[2-(6-叔-丁基-8-氟-1-氧代-酞嗪-2-基)-3-(羥基甲基)-4-吡啶基]-3-嘧啶-5-基-吡唑-4-甲酰胺142

根據(jù)實(shí)施例130的方法，將1-(2-(6-叔-丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1h)-基)-3-(羥基甲基)吡啶-4-基)-3-碘-1h-吡唑-4-甲腈111a轉(zhuǎn)化為142：ms-esi[m+h]⁺＝515.2。

實(shí)施例1431-[2-(6-叔-丁基-8-氟-1-氧代-酞嗪-2-基)-3-(羥基甲基)-4-吡啶基]-3-(4-吡啶基)吡唑-4-甲酰胺143

根據(jù)實(shí)施例130的方法，將1-(2-(6-叔-丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1h)-基)-3-(羥基甲基)吡啶-4-基)-3-碘-1h-吡唑-4-甲腈111a轉(zhuǎn)化為143：ms-esi[m+h]⁺＝514.2。

實(shí)施例1441-[2-(6-叔-丁基-8-氟-1-氧代-酞嗪-2-基)-3-(羥基甲基)-4-吡啶基]-3-(3-吡啶基)吡唑-4-甲酰胺144

根據(jù)實(shí)施例130的方法，將1-(2-(6-叔-丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2(1h)-基)-3-(羥基甲基)吡啶-4-基)-3-碘-1h-吡唑-4-甲腈111a轉(zhuǎn)化為144：ms-esi[m+h]⁺＝514.2。

實(shí)施例1451-[3-(7,7-二甲基-4-氧代-1,2,6,8-四氫環(huán)戊二烯并[3,4]吡咯并[3,5-b]吡嗪-3-基)-5-氟-2-(羥基甲基)苯基]-3-[[5-[(2s)-2-甲基-4-(氧雜環(huán)丁烷-3-基)哌嗪-1-基]-2-吡啶基]氨基]吡唑-4-甲酰胺145

步驟1：1-(3-(7,7-二甲基-1-氧代-3,4,7,8-四氫-1h-環(huán)戊二烯并[4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(6h)-基)-5-氟-2-(羥基甲基)苯基)-3-碘-1h-吡唑-4-甲腈145a的制備

根據(jù)實(shí)施例111的方法，采用2-溴-6-(7,7-二甲基-4-氧代-1,2,6,8-四氫環(huán)戊二烯并[3,4]吡咯并[3,5-b]吡嗪-3-基)-4-氟-苯甲醛作為原料，制備145a。ms-esi[m+h]⁺＝545.8。

步驟2：根據(jù)實(shí)施例125的方法,將145a轉(zhuǎn)化為145：¹hnmr(400mhz,cdcl3):δ9.39(s,1h),8.72(s,1h),8.00(s,1h),7.34-7.27(m,1h),7.22-7.20(m,1h),6.97-6.93(m,2h),6.75(s,1h),6.25(brs,2h),4.70-4.63(m,6h),4.57-4.46(m,4h),3.53-3.49(m,3h),3.08(s,2h),2.59-2.53(m,5h),2.46(s,2h),2.21-2.16(m,1h),1.29(s,6h),0.98-0.94(m,3h)；ms-esi[m+h]⁺＝684.3。

實(shí)施例146(s)-1-(5-氟-2-(羥基甲基)-3-(1-氧代-3,4,6,7,8,9-六氫吡啶并[[3,4-b]吲嗪-2(1h)-基)苯基)-3-((5-(2-甲基-4-(氧雜環(huán)丁烷-3-基)哌嗪-1-基)吡啶-2-基)氨基)-1h-吡唑-4-甲酰胺146

步驟1:1-(5-氟-2-(羥基甲基)-3-(1-氧代-3,4,6,7,8,9-六氫吡啶并[[3,4-b]吲嗪-2(1h)-基)苯基)-3-碘-1h-吡唑-4-甲腈146a的制備

向2-(6-氟-1-羥基-1,3-二氫苯并[c][1,2]氧雜環(huán)戊硼烷-4-基)-3,4,6,7,8,9-六氫吡啶并[[3,4-b]吲嗪-1(2h)-酮(80mg,0.23mmol)和3-碘-1h-吡唑-4-甲腈(51.5mg,0.23mmol)的二氯甲烷(2ml)混合物中加入ms(80mg)、乙酸銅(51.4mg,0.28mmol)和三乙胺(28.3mg,0.28mmol)。在氧氣環(huán)境下、于50℃攪拌1小時(shí)后，將反應(yīng)物用水(10ml)驟冷，用乙酸乙酯萃取(15ml×3)。合并的有機(jī)萃取物用鹽水洗滌(10ml×2),經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，濃縮。殘留物通過(guò)柱色譜純化(石油醚:乙酸乙酯＝10:1－1:1)，獲得146a(45mg,36％)，為淺黃色固體。ms-esi[m+h]⁺＝532.1。

步驟2:(s)-1-(5-氟-2-(羥基甲基)-3-(1-氧代-3,4,6,7,8,9-六氫吡啶并[[3,4-b]吲嗪-2(1h)-基)苯基)-3-((5-(2-甲基-4-(氧雜環(huán)丁烷-3-基)哌嗪-1-基)吡啶-2-基)氨基)-1h-吡唑-4-甲腈146b

向1-(5-氟-2-(羥基甲基)-3-(1-氧代-3,4,6,7,8,9-六氫吡啶并[[3,4-b]吲嗪-2(1h)-基)苯基)-3-碘-1h-吡唑-4-甲腈146a(45mg,0.085mmol)和(s)-5-(2-甲基-4-(氧雜環(huán)丁烷-3-基)哌嗪-1-基)吡啶-2-胺4(32mg,0.13mmol)的1,4-二氧六環(huán)(3ml)混合物中加入brettphos-pd-g3(8mg,0.0085mmol)、碳酸銫(56mg,0.17mmol)，隨后加入brettphos(9mg,0.017mmol)。在氮?dú)猸h(huán)境下、于110℃攪拌6小時(shí)后，將反應(yīng)混合物用水稀釋，用乙酸乙酯萃取(20ml×3)。合并的有機(jī)層經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，濃縮。殘留物經(jīng)硅膠色譜純化(二氯甲烷:甲醇＝20:1)，獲得146b(9mg,16％)，為黃色固體。ms-esi[m+h]⁺＝652.3。

步驟3:將(s)-1-(5-氟-2-(羥基甲基)-3-(1-氧代-3,4,6,7,8,9-六氫吡啶并[[3,4-b]吲嗪-2(1h)-基)苯基)-3-((5-(2-甲基-4-(氧雜環(huán)丁烷-3-基)哌嗪-1-基)吡啶-2-基)氨基)-1h-吡唑-4-甲腈146b(9mg,0.0138mmol)和氫化(二甲基膦酸-kp)[氫二(二甲基磷-kp]]鉑(hydrido(dimethylphosphinousacid-kp)[hydrogenbis(dimethylphosphinito-kp]]platinum(ii))(ii)(1mg,0.00138mmol)在乙醇(1ml)和水(0.5ml)中的混合物在氮?dú)猸h(huán)境下、于90℃攪拌2小時(shí)。將其用二氯甲烷(20ml)稀釋，用水(10ml)洗滌。有機(jī)層經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，濃縮。殘留物經(jīng)硅膠色譜純化(二氯甲烷:甲醇＝20:1)，獲得146(2.7mg,29％)，為黃色固體。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.39(s,1h),8.71(s,1h),8.02(d,j＝2.0hz,1h),7.47-7.43(m,1h),7.37-7.34(m,1h),7.11-7.09(m,1h),6.98(dd,j＝8.6,2.6hz,1h),6.25(s,1h),4.72-4.62(m,4h),4.53(d,j＝12.0hz,1h),4.38(d,j＝12.4hz,1h),4.06-4.05(m,2h),3.94-3.83(m,2h),3.54-3.42(m,1h),3.40(brs,1h),3.17-3.08(m,3h),2.97-2.90(m,1h),2.85-2.82(m,2h),2.58-2.55(m,1h),2.42-2.46(m,2h),2.23-2.14(m,1h),2.06-2.03(m,3h),1.89-1.86(m,3h),1.70(brs,1h),0.96(m,3h)；ms-esi[m+h]⁺＝670.3。

實(shí)施例901生物化學(xué)btk試驗(yàn)

可以采用標(biāo)準(zhǔn)生物化學(xué)btk-激酶試驗(yàn)的通用方法如下測(cè)試式i化合物。制備不含btk酶的主混合物(mastermixminusbtk酶)，其含有1×細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)激酶緩沖液(25mmtris-hcl,ph7.5、5mmβ-甘油磷酸酯，2mm二硫蘇糖醇,0.1mmna3vo4、1mmmgcl2)、0.5μmpromegaptk生物素化的肽底物2和0.01％bsa。制備含有btk酶的主混合物，其含有1×細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)激酶緩沖液、0.5μm(微摩爾濃度)ptk生物素化的肽底物2、0.01％bsa和100ng/孔(0.06mu/孔)btk酶。btk酶如下制備：將具有c末端v5和6×his標(biāo)記的全長(zhǎng)人野生型btk(編號(hào)nm-000061)亞克隆到載體(invitrogen/lifetechnologies)，用于制備攜帶桿狀病毒的這種表位標(biāo)記的btk。桿狀病毒的傳代(generation)是根據(jù)invitrogen在其關(guān)于“bac-to-bacbaculovirusexpressionsystems(bac-to-bac桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng))公開(kāi)的方案中詳細(xì)描述的方法進(jìn)行的(invitrogen/lifetechnologies,cat.nos.10359-016和10608-016)。第3代病毒用于感染sf9細(xì)胞以過(guò)度表達(dá)重組btk蛋白。然后，btk蛋白采用ni-nta柱純化至均質(zhì)。根據(jù)敏感sypro-ruby染色分析，最終蛋白制劑的純度高于95％。在水中制備200μm的atp溶液，用1nnaoh調(diào)節(jié)至ph7.4。將在5％dmso中的1.25μl(微升)的化合物轉(zhuǎn)移到96孔1/2面積的costar聚苯乙烯板中?；衔锟梢詥为?dú)測(cè)試，采用11-點(diǎn)劑量-響應(yīng)曲線(起始濃度為10μμ；1:2稀釋)。將18.75μl的不含酶主混合物(作為陰性對(duì)照)和含酶主混合物轉(zhuǎn)移至96孔1/2面積的costar聚苯乙烯板的適當(dāng)孔中。5μl的200μμatp加入到96孔1/2面積costar聚苯乙烯板的混合物中，使得atp的終濃度為40μμ。將反應(yīng)物在室溫下溫育1小時(shí)。采用含有30mmedta、20nmsa-apc和1nmpt66ab的perkinelmer1×檢測(cè)緩沖液終止反應(yīng)。采用使用激發(fā)濾光片330nm、發(fā)射濾光片665nm和第二個(gè)發(fā)射濾光片615nm的perkinelmerenvision，采用時(shí)間分辨縈光讀取該板。隨后計(jì)算ic50值?；蛘撸梢圆捎胠anthascreen試驗(yàn)通過(guò)其磷酸化的肽產(chǎn)物的定量測(cè)定評(píng)價(jià)btk活性。在肽產(chǎn)物上的縈光素和檢測(cè)抗體上的鋱之間產(chǎn)生的fret(縈光共振能量轉(zhuǎn)移)隨著能夠減少肽磷酸化的btk抑制劑的加入而降低。在25μl(微升)的最終反應(yīng)體積中，將btk(h)(0.1ng/25μl反應(yīng)物)與50mmhepesph7.5、10mmmgcl2、2mmmncl2、2mmdtt、0.2mmnavo4、0.01％bsa和0.4um縈光素poly-gat一起溫育。于室溫下溫育60分鐘后，通過(guò)于室溫下30分鐘內(nèi)加入在60mmedta中的終濃度為2nm的tb-py20檢測(cè)抗體終止反應(yīng)。采用于340nm激發(fā)以及495nm和520nm發(fā)射采用perkinelmerenvision進(jìn)行測(cè)定。示例性btk抑制ic70值如表1所示。

實(shí)施例902ramos細(xì)胞btk試驗(yàn)

可以用于測(cè)試式i化合物活性的標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞btk-激酶試驗(yàn)的通用方法如下。在試驗(yàn)化合物存在下，將ramos細(xì)胞以0.5×10⁷個(gè)細(xì)胞/ml的密度于37℃培養(yǎng)1hr。然后將細(xì)胞通過(guò)與10μg/ml抗人類igmf(ab)2一起于37℃培養(yǎng)5分鐘進(jìn)行刺激。使細(xì)胞沉淀，裂解，對(duì)澄清的裂解液進(jìn)行蛋白分析。每個(gè)樣品的相同蛋白量采用抗-phosphobtk(tyr223)抗體(cellsignalingtechnology#3531；epitomics,cat.#2207-1)或phosphobtk(tyr551)抗體(bdtransductionlabs#558034)進(jìn)行sds-page和免疫印跡法評(píng)價(jià)btk自磷酸化，或者采用抗-btk抗體(bdtransductionlabs#611116)控制每種裂解液的btk總量。

實(shí)施例903b-細(xì)胞增生試驗(yàn)

可以用于測(cè)試式i化合物活性的標(biāo)準(zhǔn)b-細(xì)胞增生試驗(yàn)的通用方法如下。采用b-細(xì)胞分離試劑盒(miltenyibiotech,cat#130-090-862)，自8－16周齡balb/c小鼠的脾純化b-細(xì)胞。將試驗(yàn)化合物在0.25％dmso中稀釋，與2.5×10⁵個(gè)純化的小鼠脾b-細(xì)胞一起溫育30分鐘，然后加入10μg/ml抗小鼠igm抗體(southernbiotechnologyassociatescat#1022-01)，最終體積為100μl。24hr溫育后，加入1μci³h-胸苷(1微居里的氚化胸苷)，將板再溫育36hr，然后采用spa[³h]胸苷攝取分析系統(tǒng)(amershambiosciences#rpnq0130)根據(jù)生產(chǎn)商的方案收獲。spa珠縈光采用液體閃爍/發(fā)光計(jì)數(shù)儀(microbeta)(wallacetriplex1450,perkinelmer)計(jì)數(shù)。

實(shí)施例904t細(xì)胞增生試驗(yàn)

可以用于測(cè)試式i化合物的活性的標(biāo)準(zhǔn)t細(xì)胞增生試驗(yàn)的通用方法如下。采用pant細(xì)胞分離試劑盒(miltenyibiotech,cat#130-090-861)，自8－16周齡balb/c小鼠的脾純化t細(xì)胞。將試驗(yàn)化合物在0.25％dmso中稀釋，在采用10μg/ml抗-cd3(bd#553057)和抗-cd28(bd#553294)抗體預(yù)涂布的平底透明板中，與2.5×10⁵個(gè)純化的小鼠脾t細(xì)胞一起在100μl的最終體積下于37℃溫育90分鐘。24hr溫育后，加入1μci³h-胸苷，將板再溫育36hr，然后采用spa[³h]胸苷攝取分析系統(tǒng)(amershambiosciences#rpnq0130)生產(chǎn)商方案收集。spa-珠類縈光采用microbeta計(jì)數(shù)儀(wallacetriplex1450,perkinelmer)計(jì)數(shù)。

實(shí)施例905cd86抑制試驗(yàn)

可以采用用于b細(xì)胞活性抑制的標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)的通用方法如下測(cè)試式i化合物。通過(guò)紅血細(xì)胞裂解(bdpharmingen#555899)自8－16周齡balb/c小鼠的脾臟純化全部小鼠脾細(xì)胞。將試驗(yàn)化合物采用0.5％dmso稀釋，與1.25×10⁶個(gè)脾細(xì)胞一起在200μl最終體積中在平底透明板(falcon353072)中于37℃一起溫育60分鐘。然后通過(guò)加入15μg/mligm(jacksonimmunoresearch115-006-020)刺激細(xì)胞，于37℃、5％co2環(huán)境下溫育24hr。溫育24hr后，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至錐底透明的96-孔板中，通過(guò)以1200×g×5min離心沉淀。將細(xì)胞通過(guò)cd16/cd32(bdpharmingen#553142)預(yù)封閉(preblocked),隨后采用cd19-fitc(bdpharmingen#553785)、cd86-pe(bdpharmingen#553692)和7aad(bdpharmingen#51-68981e)三重染色。將細(xì)胞在bd流式細(xì)胞儀(bdbiosciences,sanjose,ca)上分選，對(duì)cd19⁺/7aad-群設(shè)門。測(cè)定分選的群上cd86表面表達(dá)水平與試驗(yàn)化合物濃度的關(guān)系。

實(shí)施例906b-all細(xì)胞存活試驗(yàn)

下面是用于標(biāo)準(zhǔn)b-all(急性淋巴母細(xì)胞白血病)細(xì)胞存活研究的方法，采用xtt讀數(shù)測(cè)定存活細(xì)胞的數(shù)目?？梢圆捎迷撛囼?yàn)測(cè)試式i化合物在培養(yǎng)基中抑制b-all細(xì)胞存活的能力?？梢允褂玫囊环N人b-細(xì)胞急性淋巴母細(xì)胞白血病系為sup-b15,人pre-b-細(xì)胞all系可以獲自atcc。

將在100μl的iscove培養(yǎng)基+20％fbs中的sup-b15pre-b-all細(xì)胞以5×10⁵細(xì)胞/ml的濃度涂布在多個(gè)96-孔微量板上。然后加入試驗(yàn)化合物，終濃度為0.4％的dmso溶液。將細(xì)胞于37℃、5％co2環(huán)境中培養(yǎng)至多3天。3天后，將細(xì)胞以1:3分配到含有試驗(yàn)化合物的新的96-孔板中，使其再生長(zhǎng)至多3天。每個(gè)24h的周期后，向雙份的96孔板之一加入50μl的xtt溶液，于2、4和20小時(shí)根據(jù)生產(chǎn)商的說(shuō)明讀取吸光度讀數(shù)。然后采集試驗(yàn)線性范圍(0.5－1.5)內(nèi)僅用dmso處理的細(xì)胞的od讀數(shù)，測(cè)定相對(duì)于僅用dmso處理細(xì)胞，用化合物處理的孔中存活細(xì)胞百分比。

實(shí)施例907cd69全血試驗(yàn)

人血獲自健康志愿者，其設(shè)定條件如下：1周不服藥，不吸煙。通過(guò)靜脈穿刺將血(對(duì)于8個(gè)試驗(yàn)化合物約20ml)收集到含有肝素鈉的(becton,dickinson和co.)試管中。

dmso中的10mm式i化合物溶液以1:10在100％dmso中稀釋，然后在100％dmso中以三倍系列稀釋，用于10點(diǎn)劑量-響應(yīng)曲線。然后將化合物以1:10在pbs中稀釋，隨后向2ml的96-孔板中一式兩份加入等份的5.5μl的各個(gè)化合物；加入5.5μl的10％dmso的pbs溶液作為對(duì)照和無(wú)刺激孔。向每個(gè)孔中加入人全血-hwb(100μl)?；旌虾?，將板于37℃、5％co2、100％濕度溫育30分鐘。向每個(gè)孔(不包括無(wú)刺激孔)中加入山羊f(ab’)2抗-人igm(10μl的500μg/ml溶液，最終為50μg/ml)，混合，將板再溫育20小時(shí)。在20小時(shí)溫育結(jié)束時(shí)，將樣品與縈光標(biāo)記的抗體一起于37℃、5％co2、100％濕度溫育30分鐘。用于補(bǔ)償調(diào)節(jié)和起始電壓設(shè)定包括感應(yīng)控制(inducedcontrol)、未染色和單染色。然后根據(jù)生產(chǎn)商說(shuō)明書(shū)采用pharmlyse^tm(bdbiosciencespharmingen)裂解樣品。然后將樣品轉(zhuǎn)移至在lsrii設(shè)備的bdbioscienceshts96孔系統(tǒng)上運(yùn)行的96孔板中。獲取數(shù)據(jù)，平均縈光強(qiáng)度值采用bdbiosciencesdiva軟件獲得。結(jié)果首先通過(guò)facs分析軟件(flowjo)進(jìn)行分析。試驗(yàn)化合物的抑制濃度(ic50、ic70、ic90等)定義為cd69細(xì)胞陽(yáng)性(也就是抗-igm刺激的cd20陽(yáng)性)百分比降低例如50％的濃度(減去無(wú)刺激背景的8個(gè)孔的平均值后8個(gè)對(duì)照孔的平均值)。ic70值通過(guò)prism第5版的方法計(jì)算，采用非線性回歸曲線擬合，如表1所示。

實(shí)施例908體外細(xì)胞增生試驗(yàn)

采用下列方案(mendoza等(2002)cancerres.62:5485－5488)，通過(guò)細(xì)胞增生試驗(yàn)測(cè)定式i化合物的效能。發(fā)光細(xì)胞存活性試驗(yàn)(包括試劑和方案)獲自商業(yè)(promegacorp.,madison,wi,technicalbulletintb288)。該試驗(yàn)評(píng)價(jià)了化合物加入細(xì)胞和抑制細(xì)胞增生的能力。試驗(yàn)原理是基于通過(guò)在勻相試驗(yàn)中定量測(cè)定存在的atp而測(cè)定存在的存活細(xì)胞的數(shù)目，在所述勻相試驗(yàn)中加入cell-titerglo試劑導(dǎo)致細(xì)胞裂解，通過(guò)縈光素酶反應(yīng)產(chǎn)生縈光信號(hào)?？M光信號(hào)與存在的atp的量成正比。

將在正常生長(zhǎng)培養(yǎng)基中的一組b-細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系(bjab,sudhl-4,tmd8,oci-ly10,oci-ly3,wsu-dlcl2)涂布到384-孔板中，向每個(gè)孔中加入系列稀釋的btk抑制劑或僅加入dmso。96小時(shí)培養(yǎng)后通過(guò)(promega)測(cè)定細(xì)胞活性。數(shù)據(jù)表示為相對(duì)于dmso處理的對(duì)照細(xì)胞的btk抑制劑處理的細(xì)胞的相對(duì)細(xì)胞存活性。數(shù)據(jù)點(diǎn)是每個(gè)劑量水平的4次重復(fù)試驗(yàn)的平均值。誤差條表示平均值的sd。

步驟：第1天-接種細(xì)胞板(384-孔，黑色，透明底，microclear，帶蓋tc板，獲自falcon#353962)，收集細(xì)胞，以每孔1000個(gè)細(xì)胞的密度、54μl的體積在384孔的各孔中接種細(xì)胞，3天測(cè)試。細(xì)胞培養(yǎng)基：rpmi或dmem高葡萄糖，10％胎牛血清，2mml-谷氨酰胺，p/s。于37℃、5％co2培養(yǎng)o/n。

第二天-向細(xì)胞中加入藥物，化合物稀釋液，dmso板(1:2系列，用于9個(gè)點(diǎn))，在96孔板的第二列中加入20μl的10mm化合物。采用precision以1:2系列加入板(10μl+20μl100％dmso)，總共9個(gè)點(diǎn)。培養(yǎng)板為96-孔錐底聚丙烯板，獲自nunc(cat.#249946)(1:50稀釋)，向所有孔中加入147μl的培養(yǎng)基。采用rapidplate自dmso板的每個(gè)孔中轉(zhuǎn)移3μl的dmso+化合物到培養(yǎng)板的每個(gè)相應(yīng)的孔中。

向細(xì)胞中加入藥物，細(xì)胞板(1:10稀釋)，直接向細(xì)胞(在細(xì)胞上已經(jīng)有54μl的培養(yǎng)基)中加入6μl的培養(yǎng)基+化合物。在不經(jīng)常打開(kāi)的培養(yǎng)箱中于37℃、5％co2培養(yǎng)3天。

第5天-發(fā)色板，于室溫下使得celltiterglo緩沖液融化。于37℃移出細(xì)胞板，約30分鐘內(nèi)平衡至室溫。將celltiterglo緩沖液加至celltiterglo底物(瓶到瓶)。向每個(gè)細(xì)胞孔中加入30μlcelltiterglo試劑(promegacat.#g7572)。置于板振動(dòng)器上約30分鐘。在analystht讀板儀(halfsecondperwell)上讀取發(fā)光。

細(xì)胞存活性試驗(yàn)和結(jié)合試驗(yàn)：將細(xì)胞以1000－2000個(gè)細(xì)胞/孔接種到384-孔板16h。在第二天，在96孔板中在dmso中制備9個(gè)1:2系列化合物稀釋液。然后采用機(jī)器人(zymarkcorp.,hopkinton,ma)將化合物稀釋到生長(zhǎng)培養(yǎng)基中。然后將稀釋的化合物以一式四份加入384孔細(xì)胞板中，于37℃、5％co2培養(yǎng)。4天后，根據(jù)cell-titerglo(promega)生產(chǎn)商說(shuō)明書(shū)通過(guò)發(fā)光測(cè)定存活細(xì)胞的相對(duì)數(shù)目，在wallacmultilabel(perkinelmer,fostercity)上讀數(shù)。ec50值采用4.0軟件(graphpad,sandiego)計(jì)算。在所有的試驗(yàn)中，式i化合物和化療藥可以同時(shí)加入，或者間隔4小時(shí)加入(一個(gè)接一個(gè)按順序)。

另一個(gè)典型的體外細(xì)胞增生試驗(yàn)包括下列步驟：

1.將在培養(yǎng)基中含有約10⁴個(gè)細(xì)胞的等份的100μl細(xì)胞培養(yǎng)物加至384孔不透明壁板的每個(gè)孔中。

2.制備含有培養(yǎng)基但不含細(xì)胞的對(duì)照孔。

3.將化合物加至試驗(yàn)孔中，培養(yǎng)3－5天。

4.將板平衡至室溫約30分鐘。

5.celltiter-glo試劑的體積等于每個(gè)孔中加入的細(xì)胞培養(yǎng)基的體積。

6.將內(nèi)容物在定軌振蕩器上混合2分鐘誘導(dǎo)細(xì)胞裂解。

7.將板于室溫下培養(yǎng)10分鐘使得縈光信號(hào)穩(wěn)定。

8.記錄縈光，在曲線圖中以rlu＝相對(duì)縈光單位表示。

盡管為了便于清楚地理解。在上面通過(guò)舉例說(shuō)明和實(shí)施例的方式對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了相當(dāng)詳細(xì)地描述，但是這些描述和實(shí)施例不應(yīng)當(dāng)被視為限定本發(fā)明的范圍。因此，所有適當(dāng)?shù)男薷暮偷韧桨笐?yīng)當(dāng)被視為也包含在隨附權(quán)利要求所定義的本發(fā)明的范圍內(nèi)。本文中引用的所有專利和科學(xué)文獻(xiàn)的公開(kāi)明確地以其全部?jī)?nèi)容引入本文作為參考。