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棒狀細(xì)菌轉(zhuǎn)化體及使用該轉(zhuǎn)化體的有機(jī)化合物的制造方法與流程

文檔序號:12509292閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種棒狀細(xì)菌轉(zhuǎn)化體,實(shí)施了下述(A)、(B)、(C)、及(D)的操作而得:

(A)3-脫氧-D-阿拉伯庚酮糖-7-磷酸(DAHP)合成酶活性的強(qiáng)化,

(B)磷酸烯醇丙酮酸-糖磷酸轉(zhuǎn)移酶系統(tǒng)(PTS)介導(dǎo)的糖向細(xì)胞內(nèi)的攝取的消失、阻遏或減少,

(C)與磷酸烯醇丙酮酸-糖磷酸轉(zhuǎn)移酶系統(tǒng)不同的糖轉(zhuǎn)運(yùn)體介導(dǎo)的糖向細(xì)胞內(nèi)的攝取活性、及葡萄糖激酶活性的強(qiáng)化,

(D)甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)活性的強(qiáng)化。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的棒狀細(xì)菌轉(zhuǎn)化體,其中,二羥丙酮磷酸的磷酸酶活性消失、阻遏或減少。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的棒狀細(xì)菌轉(zhuǎn)化體,其中,3-脫氫奎寧酸合成酶活性、3-脫氫奎寧酸脫水酶活性、及莽草酸脫氫酶活性中的任意一種以上得到強(qiáng)化。

4.根據(jù)權(quán)利要求1~3中任一項(xiàng)所述的棒狀細(xì)菌轉(zhuǎn)化體,其中,轉(zhuǎn)酮醇酶活性、及轉(zhuǎn)醛醇酶活性中的任意一種以上得到強(qiáng)化。

5.根據(jù)權(quán)利要求1~4中任一項(xiàng)所述的棒狀細(xì)菌轉(zhuǎn)化體,其中,莽草酸激酶活性、奎寧酸/莽草酸脫氫酶活性、及3-脫氫莽草酸脫水酶活性中的任意一種以上消失、阻遏或減少。

6.根據(jù)權(quán)利要求1~5中任一項(xiàng)所述的棒狀細(xì)菌轉(zhuǎn)化體,其具有葡萄糖和選自由木糖、阿拉伯糖及纖維二糖組成的組中的至少1種糖的利用能力。

7.根據(jù)權(quán)利要求1~6中任一項(xiàng)所述的棒狀細(xì)菌轉(zhuǎn)化體,其中,通過導(dǎo)入下述的(a)或(b)的DNA,3-脫氧-D-阿拉伯庚酮糖-7-磷酸合成酶活性得到強(qiáng)化,

(a)由序列號1中記載的堿基序列組成的DNA,

(b)由與序列號1具有90%以上的同一性的堿基序列組成的、編碼3-脫氧-D-阿拉伯庚酮糖-7-磷酸合成酶的DNA。

8.根據(jù)權(quán)利要求1~7中任一項(xiàng)所述的棒狀細(xì)菌轉(zhuǎn)化體,其中,通過使編碼磷酸烯醇丙酮酸-糖磷酸轉(zhuǎn)移酶系統(tǒng)(PTS)的構(gòu)成因子的基因中、編碼組氨酸-可磷酸化蛋白(Histidine-phosphorylatable protein:HPr)的ptsH、編碼酶I(Enzyme I)的ptsI、及編碼葡萄糖特異性酶II(Enzyme II)的ptsG基因中的一種以上破壞、缺失、或突變,從而PTS介導(dǎo)的糖向細(xì)胞內(nèi)的攝取消失、阻遏、或減少。

9.根據(jù)權(quán)利要求1~8中任一項(xiàng)所述的棒狀細(xì)菌轉(zhuǎn)化體,其中,與磷酸烯醇丙酮酸-糖磷酸轉(zhuǎn)移酶系統(tǒng)(PTS)不同的糖轉(zhuǎn)運(yùn)體為肌醇轉(zhuǎn)運(yùn)體。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的棒狀細(xì)菌轉(zhuǎn)化體,其中,通過導(dǎo)入下述(c)或(d)的DNA,肌醇轉(zhuǎn)運(yùn)體介導(dǎo)的糖向細(xì)胞內(nèi)的攝取活性得到強(qiáng)化,

(c)由序列號2中記載的堿基序列組成的DNA,

(d)由與序列號2具有90%以上的同一性的堿基序列組成的、編碼肌醇轉(zhuǎn)運(yùn)體的DNA。

11.根據(jù)權(quán)利要求1~10中任一項(xiàng)所述的棒狀細(xì)菌轉(zhuǎn)化體,其中,通過導(dǎo)入下述(e)或(f)的DNA,葡萄糖激酶活性得到強(qiáng)化,

(e)由序列號3、4或5中記載的堿基序列組成的DNA,

(f)由與序列號3、4或5具有90%以上的同一性的堿基序列組成的、編碼葡萄糖激酶的DNA。

12.根據(jù)權(quán)利要求1~11中任一項(xiàng)所述的棒狀細(xì)菌轉(zhuǎn)化體,其中,通過導(dǎo)入下述(g)或(h)的DNA,甘油醛-3-磷酸脫氫酶活性得到強(qiáng)化,

(g)由序列號6中記載的堿基序列組成的DNA,

(h)由與序列號6具有90%以上的同一性的堿基序列組成的、編碼甘油醛-3-磷酸脫氫酶的DNA。

13.根據(jù)權(quán)利要求3~12中任一項(xiàng)所述的棒狀細(xì)菌轉(zhuǎn)化體,其中,3-脫氫奎寧酸合成酶活性的強(qiáng)化是通過下述(i)或(j)的DNA的導(dǎo)入而實(shí)現(xiàn)的,3-脫氫奎寧酸脫水酶活性的強(qiáng)化是通過下述(k)或(l)的DNA的導(dǎo)入而實(shí)現(xiàn)的,莽草酸脫氫酶活性的強(qiáng)化是通過下述(m)或(n)的DNA的導(dǎo)入而實(shí)現(xiàn)的,

(i)由序列號7中記載的堿基序列組成的DNA,

(j)由與序列號7具有90%以上的同一性的堿基序列組成的、編碼3-脫氫奎寧酸合成酶的DNA,

(k)由序列號8中記載的堿基序列組成的DNA,

(l)由與序列號8具有90%以上的同一性的堿基序列組成的、編碼3-脫氫奎寧酸脫水酶的DNA,

(m)由序列號9中記載的堿基序列組成的DNA,

(n)由與序列號9具有90%以上的同一性的堿基序列組成的、編碼莽草酸脫氫酶的DNA。

14.根據(jù)權(quán)利要求4~13中任一項(xiàng)所述的棒狀細(xì)菌轉(zhuǎn)化體,其中,轉(zhuǎn)酮醇酶活性的強(qiáng)化是通過下述(o)或(p)的DNA的導(dǎo)入而實(shí)現(xiàn)的,轉(zhuǎn)醛醇酶活性的強(qiáng)化通過下述(q)或(r)的DNA的導(dǎo)入而實(shí)現(xiàn)的,

(o)由序列號10中記載的堿基序列組成的DNA,

(p)由與序列號10具有90%以上的同一性的堿基序列組成的、編碼轉(zhuǎn)酮醇酶的DNA,

(q)由序列號11中記載的堿基序列組成的DNA,

(r)由與序列號11具有90%以上的同一性的堿基序列組成的、編碼轉(zhuǎn)醛醇酶的DNA。

15.根據(jù)權(quán)利要求1~14中任一項(xiàng)所述的棒狀細(xì)菌轉(zhuǎn)化體,其中,棒狀細(xì)菌為谷氨酸棒狀桿菌(Corynebacterium glutamicum)。

16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的棒狀細(xì)菌轉(zhuǎn)化體,其中,對谷氨酸棒狀桿菌R、ATCC13032、或ATCC13869實(shí)施了上述操作,所述谷氨酸棒狀桿菌R的保藏編號為FERM BP-18976。

17.一種谷氨酸棒狀桿菌(Corynebacterium glutamicum)SKM7,其保藏編號為NITE BP-01903。

18.一種有機(jī)化合物的制造方法,其包含下述工序:

在含有糖類的反應(yīng)液中培養(yǎng)權(quán)利要求1~17中任一項(xiàng)所述的棒狀細(xì)菌轉(zhuǎn)化體的工序,以及

回收反應(yīng)液中的選自由莽草酸、3-脫氫莽草酸、3-脫氫奎寧酸、原兒茶酸、分支酸、沒食子酸(gallic acid)、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、鄰氨基苯甲酸、對羥基苯甲酸、對氨基苯甲酸、苯酚、及鄰苯二酚組成的組中的至少1種有機(jī)化合物的工序。

19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法,其中,在有氧且棒狀細(xì)菌轉(zhuǎn)化體不增殖的條件下培養(yǎng)棒狀細(xì)菌轉(zhuǎn)化體。

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