本發(fā)明涉及一種新的胸腺嘧啶衍生物及其作為藥物對(duì)熱休克蛋白hsp27(hspb1)的選擇性抑制的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：以細(xì)胞生長抑制劑的治療方式對(duì)于某些癌癥，從一開始就無法得到治療效果，即使是患者所患為輕易可治愈癌癥類型，以細(xì)胞生長抑制劑的治療方式可能會(huì)在一段時(shí)間后失效，一個(gè)可能的原因?yàn)榭剐缘漠a(chǎn)生，腫瘤細(xì)胞因此而對(duì)細(xì)胞生長抑制劑漸不敏感，其背后的生物過程為已知的。由此可知，以細(xì)胞生長抑制劑對(duì)于各種腫瘤細(xì)胞系的治療導(dǎo)致了細(xì)胞蛋白質(zhì)表達(dá)量的增加，而這對(duì)于受體、酶和細(xì)胞結(jié)構(gòu)蛋白的正確折疊的保護(hù)和穩(wěn)定等影響重大。熱休克蛋白為一種進(jìn)化高度保守的蛋白質(zhì)，由細(xì)胞在亞致死脅迫條件下形成。熱休克蛋白是分子伴侶利用其自然天性，通過熱或化學(xué)制品將變性蛋白質(zhì)再次還原到初始功能狀態(tài)，或是防止蛋白質(zhì)變性。通過該運(yùn)作方式，熱休克蛋白過度表達(dá)在多種癌細(xì)胞，因此近年來，熱休克蛋白已成為具希望的、用于癌癥治療的靶蛋白。熱休克蛋白hsp27(hspb1)參與于多種細(xì)胞過程，例如：細(xì)胞凋亡(程序性細(xì)胞死亡)、dna修復(fù)和重組等。hsp27過表達(dá)在各種癌癥，例如：前列腺癌，結(jié)腸癌，肝癌和乳腺癌等，并影響疾病的進(jìn)展。人們發(fā)現(xiàn)，hsp27伴隨化療時(shí)，對(duì)於例如吉西他濱(2′，2′-difluordesoxycytidin)或硼替佐米(velcade)等細(xì)胞生長抑制劑，其表達(dá)增加且抗性增加。由于hsp27對(duì)化療的不利影響，hsp27被認(rèn)為是癌癥治療中具希望的額外攻擊點(diǎn)，特別是用于抑制化療耐藥的形成。在日本專利jp2010215669a或美國專利us2012/294846a1中描述一種可能治療方法，其原理為：通過直接干預(yù)翻譯或干預(yù)轉(zhuǎn)錄，并藉由反義寡核苷酸的胞內(nèi)應(yīng)用或借由雙鏈小干擾rna(sirna)，來抑制hsp27的基因表達(dá)。其中，核苷酸類抑制劑與dna或rna結(jié)合，從而具體防止hsp27在細(xì)胞的形成。對(duì)此，歐洲專利wo2013114339a1公開了一種用于癌癥的聯(lián)合治療方法，其根基于核苷酸酶抑制劑的協(xié)同效果，用于抑制hsp27的表達(dá)，并針對(duì)該蛋白egfr(表皮生長因子受體)而與一抑制劑結(jié)合，例如厄洛替尼，或抗葉酸如培美曲塞。該核苷酸酶抑制劑優(yōu)選為一反義寡核苷酸或一雙鏈sirna。然而，核苷酸酶抑制劑的使用缺點(diǎn)為產(chǎn)生過量負(fù)電荷和相關(guān)藥物分子的強(qiáng)極性，使其生物利用度顯著降低，更大問題則為核苷酸酶抑制劑的化學(xué)不穩(wěn)定性，尤其是rna抑制劑的化學(xué)不穩(wěn)定性。更多的缺點(diǎn)為核苷酸酶抑制劑的轉(zhuǎn)染過程(亦即，將外源性寡核苷酸帶入真核細(xì)胞內(nèi))極為復(fù)雜且部分效率極低。此外，短核苷酸抑制劑具有潛在免疫原性的缺點(diǎn)，例如通過分泌也可作用于非轉(zhuǎn)染細(xì)胞(如巨噬細(xì)胞)，因而促使在生物體內(nèi)產(chǎn)生一強(qiáng)大且對(duì)于患者有害的免疫應(yīng)答。另一種用來替代核苷酸酶抑制劑的方法為使用低分子量的有機(jī)化合物，因其通常在生物系統(tǒng)中具有高度穩(wěn)定性，并同時(shí)具有良好的生物利用度，尤其是在高度特異性化合物的條件下，不會(huì)發(fā)生像在其他方法中發(fā)生的典型“脫靶效應(yīng)”(例如通過其它必要的轉(zhuǎn)染)。于此，德國專利de102008035299a1描述了一種方法：低分子有機(jī)化合物-溴乙烯基脫氧尿嘧啶(e)-5-(2-bromovinyl)-2′-deoxyuridine(bvdu)，其可以直接與蛋白hsp27相互作用，而抑制hsp27的功能。bvdu作為一種hsp27的弱抑制劑，可增加細(xì)胞生長抑制劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的敏感性，從而使胰腺癌患者通過口服bvdu而提高其生存優(yōu)勢。胰腺癌患者在晚期臨床研究顯示，500毫克/天的bvdu劑量為安全有效劑量，然而當(dāng)bvdu劑量提高為760毫克/天時(shí)，則不利于體重較輕的患者。上述bvdu化合物及其衍生物為德國專利de102008035299a1中唯一已知的hsp27小分子抑制劑，而該現(xiàn)有的活性物質(zhì)在結(jié)合親和力上，尚有極大改善空間。歐洲專利wo2009/156182a2中公開-尿嘧啶衍生物的通式i：其在細(xì)胞抑制治療中與一細(xì)胞生長抑制劑一起使用，以抑制或降低其抗性發(fā)展。歐洲專利wo2009/156182a2中并沒有顯示出對(duì)這些化合物所做假設(shè)實(shí)驗(yàn)的驗(yàn)證方法，因此該公開文件既沒有可資參考的抑菌濃度數(shù)值也沒有可資參考的各該化合物活性物質(zhì)濃度數(shù)值。因此，在高效的hsp27抑制劑上具有巨大需求，因其可在相關(guān)多因子聯(lián)合治療的應(yīng)用中選擇和直接抑制蛋白hsp27，特別是用于癌癥治療。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一些化學(xué)化合物，其可以特別是在癌癥治療中盡其可能，選擇性地和有效地抑制熱休克蛋白hsp27。本發(fā)明的目的尤其是在于提供一些化學(xué)化合物，其相較于現(xiàn)有技術(shù)的已知化合物，其在癌癥化療的細(xì)胞抑制處理中具有顯著延緩或抑制抗性發(fā)展的作用。為實(shí)現(xiàn)該些目的，該些特別是用于癌癥或囊性纖維病治療的嘌呤衍生物，所根據(jù)的公式(i)或(ii)如下：其中：-rn選自氫(h)，其中，代表共價(jià)連接到通式(i)或(ii)，其中各變量具有如下定義：u選自氧(o)、一任選支鏈的和/或oh官能化的c1-c4烷基基團(tuán)以及任選取代的乙烯基團(tuán)，特別是以鹵素取代，特別優(yōu)選為f、cl、i，u優(yōu)選為o或是一任選oh官能化的c1-c4烷基基團(tuán)；w為任選取代的亞甲基(-ch2-)、亞乙基(-ch2ch2-)、乙氧基(-o-ch2ch2-)或乙烯-1，2-二基-基團(tuán)(-ch＝ch-)，且其中所述取代基優(yōu)選選自-ch3、-ch2oh、-cooch3、-ch2-(po3h)0-oh，其中0＝0、1、2或3、-ch2-磷酸；v選自h、-oh、一氨基酸-as，其中該氨基酸特別是選自蛋白原氨基酸與其相應(yīng)的β-as群組，且其中的as通過羧基共價(jià)連接至w；另外v為任選取代的雜環(huán)，特別是一六元環(huán)氮雜環(huán)，如吡啶、二嗪、哌啶或哌嗪等，且其中所述取代基優(yōu)選選自-oh、任選取代的和/或多環(huán)的芳基基團(tuán)，尤其是苯基、萘、喹啉、萘啶，且其中所述芳基基團(tuán)的取代基，優(yōu)選選自-cf3、-f、-cl、-i、-oh、-nh2、＝o、-cooh、-och3、-r；a1和a2各自為-ch2-、-chor、-chf-或-choc(＝o)r；g為ch2、-ch2o-或o；y為o、s、nr、羧基、羰基或酰胺；其中r為-h或一任選oh官能化的c1-c8烷基基團(tuán)，-該取代基ry為h、oh、任選取代的c1-c7烷基基團(tuán)、任選取代的環(huán)狀芳基基團(tuán)和/或多環(huán)芳基基團(tuán)或任選的多環(huán)氮雜環(huán)，特別是任選取代的苯基基團(tuán)、萘基團(tuán)、聯(lián)苯基團(tuán)、菲基團(tuán)、苯并芘基團(tuán)、吡啶基團(tuán)、二嗪基團(tuán)、三唑基團(tuán)、哌啶基團(tuán)、聯(lián)哌啶基團(tuán)、哌嗪基團(tuán)、呫噸基團(tuán)、咔唑基團(tuán)、9，10-二氫菲、吩噻嗪、三苯甲烷基團(tuán)或上述的組合，其中取代基選自f、-nh2、r或六元氮雜環(huán)基團(tuán)，特別是吡啶、1，2-二嗪、1，3-二嗪、哌啶、哌嗪或聯(lián)哌啶，或上述彼此對(duì)位橋連、二到三個(gè)序列的取代基；替選地，ry為-c＝o或選自-crarbrc，其中ra、rb，、rc分別選自h和環(huán)狀基團(tuán)。本發(fā)明的目的是通過進(jìn)一步的胸腺嘧啶衍生物的通式(vi)或(vii)而實(shí)現(xiàn)：其中，各變量具有如下定義：-該取代基a為-h、-ch3或一任選取代的c2-c4乙烯基團(tuán)或c2-c4炔基基團(tuán)，特別是被鹵素取代，特別優(yōu)選為f、cl、i；替選地，a為鹵素、-no2、-c＝o、苯基或噻吩基團(tuán)，優(yōu)選為鹵素，選自i和br；-優(yōu)選地，該連接體l用來限制構(gòu)象的靈活性(即，減少熵)，并選自任選取代的苯基基團(tuán)、芐基基團(tuán)、吡啶基團(tuán)，特別是以-ch3、-cf3、鹵素取代，更優(yōu)選地，以-cf3和f取代，其中：代表共價(jià)連接到通式(vi)或(vii)或y；取代基b1和b2各自為-h、-ch3、-cf3、-f或-cl；a1為-ch2-、-chor、-chf-或-choc(＝o)r；a3為-ch2-、-chor、-chf-、-choc(＝o)r或-chk-，其中k為任選取代的五元氮雜環(huán)，特別是三唑、二唑或咪唑，其中該五元氮雜環(huán)優(yōu)選為通過一氮原子共價(jià)連接到a3；g為ch2、-ch2o-或o；-替選地，該連接體l選自一任選取代的c1-c6烷基基團(tuán)，或其中g(shù)和a1選自如上述，a4為-ch2-或-chor，t為ch，和/或t和g或g和a4一起形成一環(huán)丙基；-y為o、s、nr、羧基、羰基或酰胺，其中r為h或一任選取代的和/或支鏈的c1-c8烷基基團(tuán)；-該取代基ry為如上或如下定義的h、oh、一任選取代的環(huán)狀芳基基團(tuán)和/或多環(huán)芳基基團(tuán)，或任選取代的氧雜環(huán)或氮雜環(huán)，其中該取代基選自-f、-nh2、r和六元氮雜環(huán)基團(tuán)，特別是吡啶、1，2-二嗪、1，3-二嗪、哌啶、哌嗪或聯(lián)哌啶，或上述彼此對(duì)位橋連、二到三個(gè)序列的取代基；-替選地，ry為-c＝o或選自-crarbrc，其中ra、rb，、rc分別選自h和環(huán)狀基團(tuán)，優(yōu)選為選自一任選取代的環(huán)狀芳基基團(tuán)或多環(huán)芳基基團(tuán)，和任選取代的雜環(huán)，特別優(yōu)選為h、苯基、萘基、聯(lián)苯基。優(yōu)選地，至少一個(gè)的ra、rb，和rc基團(tuán)為h，且至少一個(gè)的基團(tuán)為環(huán)狀基團(tuán)，其優(yōu)選選自如上所述；-在通式(iv)中該取代基rn為h或苯甲酰基團(tuán)。有利的是，該通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物或是通式(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)的胸腺嘧啶衍生物的取代基ry，于考慮空間位阻情況下如此配合著活性物質(zhì)結(jié)合袋，而使取代基ry是為一平面體系。在此，該平面體系不一定必須為一共軛體系；優(yōu)選地，該根據(jù)通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物或根據(jù)通式(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)的胸腺嘧啶衍生物的取代基ry為一任選取代的環(huán)狀芳基基團(tuán)和/或多環(huán)芳基基團(tuán)或一氮雜環(huán)，特別是選自任選取代的苯基基團(tuán)、萘基團(tuán)、聯(lián)苯基團(tuán)、菲基團(tuán)、苯并芘基團(tuán)、吡啶基團(tuán)、二嗪基團(tuán)、氧雜蒽基團(tuán)、咔唑基團(tuán)、吩噻嗪基團(tuán)、三苯基甲烷基團(tuán)、哌啶基團(tuán)、聯(lián)哌啶基團(tuán)、哌嗪基團(tuán)以及它們的組合。優(yōu)選地，在考慮到空間位阻效應(yīng)的情況下，該環(huán)狀或多環(huán)芳基基團(tuán)或氮雜環(huán)的取代基具有-i和/或-m效果，使通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物以及通式(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)的胸腺嘧啶衍生物有利地對(duì)于hsp27蛋白的活性物質(zhì)結(jié)合袋具有較高結(jié)合親和力。優(yōu)選地，該些環(huán)狀芳基基團(tuán)和/或多環(huán)芳基基團(tuán)或氮雜環(huán)的取代基選自-鹵素、-no2、-cn、-n(r)2、-sr、-or、-coor、-cor、r，其中r如上述定義為h或c1-c8烷基基團(tuán)。特別優(yōu)選地，該些環(huán)狀芳基基團(tuán)和/或多環(huán)芳基基團(tuán)或氮雜環(huán)的取代基分別各自具有-i和/或-m效果、并選自h、-no2、-cf3、-f、-cl、-br、-oh、-cooh、-och3和-cor，最優(yōu)選地，該些取代基分別選自h、-no2、-cf3、-oh、-cooh和f。替選或另外地，k優(yōu)選為獨(dú)立于ry而選自如上述ry所用的相同基團(tuán)，這特別適用于當(dāng)ry為h或oh時(shí)。該根據(jù)通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物，除了具有嘌呤基本結(jié)構(gòu)外，尚優(yōu)選具有至少一任選取代的環(huán)狀芳基基團(tuán)和/或多環(huán)芳基基團(tuán)，或是rn或ry具有任選取代的氮雜環(huán)。該根據(jù)通式(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)的胸腺嘧啶衍生物，除了具有胸腺嘧啶基本結(jié)構(gòu)外，尚具有至少一任選取代的脂族環(huán)狀或多環(huán)基團(tuán)(優(yōu)選地在l)，或一任選取代的環(huán)狀芳基基團(tuán)和/或多環(huán)芳基基團(tuán)，或一任選取代的氧雜環(huán)或氮雜環(huán)(優(yōu)選地在k或ry)，優(yōu)選地，該氮雜環(huán)被進(jìn)一步取代，更優(yōu)選地，該氮雜環(huán)為一三唑環(huán)，其優(yōu)選地在1位上被連接至y或被連接至ch基團(tuán)的chk，并且優(yōu)選地在三唑環(huán)的4位上被取代。優(yōu)選取代基具有通式-rt-e，其中rt選自一單鍵和c1-c5烷基，e則選自環(huán)狀基團(tuán)。e中的環(huán)狀基團(tuán)優(yōu)選為單環(huán)基團(tuán)，特別優(yōu)選為選自環(huán)戊基、吡啶和苯基，以及單或多鹵素(優(yōu)選為br、cl或f)取代的苯基。根據(jù)本發(fā)明一個(gè)特別有利的實(shí)施例，該連接體l為一任選取代的苯基基團(tuán)、芐基基團(tuán)、吡啶基基團(tuán)，特別是以-ch3、-cf3、鹵素取代，更優(yōu)選是以-cf3和-f取代。其中該取代基b1和b2各自為-h、-ch3、-cf3、-f或-cl；a1和a2各自為-ch2-、-chor、-chf-或-choc(＝o)r，而g為ch2或o；該根據(jù)通式(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)的胸腺嘧啶衍生物的配體選自如上述列舉，該些胸腺嘧啶衍生物對(duì)hsp27蛋白的活性物質(zhì)結(jié)合袋具有較高結(jié)合親和力(即，減少熵)。構(gòu)象靈活性的限制(即，減少熵)，在本發(fā)明中意味著，雖然分子中盡可能的構(gòu)象數(shù)目以及用于該分子構(gòu)象靈活性的能量勢壘受到嚴(yán)重限制，在此情況下仍能保留分子中的一些構(gòu)象靈活性?！叭芜x取代的”一詞，是指未取代或取代的基團(tuán)?！岸喹h(huán)芳基基團(tuán)”一詞，在本發(fā)明中是指一共軛體系，其含有至少兩個(gè)直接相連的亞芳基基團(tuán)，亦即彼此共軛。亞芳基基團(tuán)也可以通過一電子給體(例如：氮、氧、ch)直接彼此互連，從而導(dǎo)致系統(tǒng)的平面性，例如：呫噸、咔唑、吩噻嗪或三苯甲烷。有利地，該根據(jù)通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物和根據(jù)通式(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)的胸腺嘧啶衍生物，通過一特定的hsp27蛋白活性物質(zhì)結(jié)合袋而相互作用。該根據(jù)通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物和根據(jù)通式(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)的胸腺嘧啶衍生物，用于治療癌癥的優(yōu)點(diǎn)在于，其中的這些化合物對(duì)hsp27的選擇性抑制具有比目前已知化合物50倍大或50倍以上更高的活性。特別有利地，該根據(jù)通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物和根據(jù)通式(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)的胸腺嘧啶衍生物，其在低微摩爾和亞微摩爾的藥物濃度范圍內(nèi)對(duì)于hsp27已經(jīng)具有活性。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，該根據(jù)通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物和根據(jù)通式(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)的胸腺嘧啶衍生物，或根據(jù)通式(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)的胸腺嘧啶衍生物，其活性物質(zhì)濃度在1納摩爾/升至1000微摩爾/升的范圍，優(yōu)選在10納摩爾/升至750微摩爾/升的范圍，更優(yōu)選在100納摩爾/升至500微摩爾/升或在10納摩爾/升至100微摩爾/升的范圍，特別優(yōu)選在100納摩爾/升至10微摩爾/升的范圍。“hsp27的抑制”在本發(fā)明中意味著，該hsp27與低分子化合物相互作用，優(yōu)選為與根據(jù)通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物和與根據(jù)通式(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)的胸腺嘧啶衍生物或與根據(jù)通式(v)的吩噻嗪衍生物相互作用，而失去與致癌結(jié)合配偶體(如蛋白質(zhì))互動(dòng)的能力，且同時(shí)有利地誘導(dǎo)凋亡啟動(dòng)(例如通過刺激胱天蛋白酶的活性)，其中該胱天蛋白酶為使動(dòng)物細(xì)胞凋亡(程序性細(xì)胞死亡)的最重要的酶。本發(fā)明奠基于最新知識(shí)，該在許多癌癥中過度表達(dá)并對(duì)疾病形成不利影響的hsp27，具有一用于低分子有機(jī)化合物的活性物質(zhì)結(jié)合袋，其中該結(jié)合袋為hsp27蛋白的功能性(例如，連接到客戶蛋白質(zhì)，以及可能還連接到低聚合)與活性的中心；該活性物質(zhì)結(jié)合袋的功能是根據(jù)兩個(gè)在蛋白質(zhì)氨基酸序列的位置29和33(phe29和phe33)上的苯丙氨酸基團(tuán)而定，可能顯示出其中缺乏相應(yīng)苯丙氨酸基團(tuán)的突變體不能夠與根據(jù)通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物相互作用。由于hsp27蛋白的相應(yīng)晶體結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)不存在，該hsp27的活性物質(zhì)結(jié)合袋采用各種計(jì)算機(jī)化方法模擬之。本發(fā)明中該hsp27蛋白的活性物質(zhì)結(jié)合袋為一限制區(qū)域(局部三級(jí)結(jié)構(gòu))，其由氨基酸序列的空間排列形成，并且具有苯丙氨酸基團(tuán)phe29和phe33(相應(yīng)hsp27主結(jié)構(gòu))。該hsp27的活性物質(zhì)結(jié)合袋可以與一具有低分子量的有機(jī)化合物相互作用，優(yōu)選為協(xié)調(diào)的相互作用，從而使hsp27蛋白失去其功能性(低聚合能力以及與客戶蛋白的交互作用)；客戶蛋白為一作為分子伴侶而作用于hsp27的底物，優(yōu)選為一蛋白質(zhì)；在此，結(jié)合親和力為一結(jié)合伴侶(在此為低分子有機(jī)化合物)和靶蛋白之間結(jié)合強(qiáng)度的一種度量，結(jié)合伴侶和靶蛋白之間的結(jié)合親和力越大，則解離常數(shù)(kd)越低；該濃度被稱為結(jié)合伴侶的抑制濃度(ki)，濃度內(nèi)存在靶蛋白的完全抑制作用，可以理解的是，ki越低則結(jié)合親和力越大。藉由對(duì)hsp27的活性物質(zhì)結(jié)合袋的三級(jí)結(jié)構(gòu)的徹底理解，可以通過虛擬篩選而事先計(jì)算出該些低分子有機(jī)化合物，其相較于習(xí)用已知化合物，可與hsp27的活性物質(zhì)結(jié)合袋發(fā)生明確具體的相互作用。虛擬篩選的概念，為本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的藥物研發(fā)過程，其藉由計(jì)算機(jī)化方法(即計(jì)算機(jī)實(shí)驗(yàn))來找到新的活性物質(zhì)分子，其中，這些可能抑制劑的結(jié)合親和力(ki)并非如傳統(tǒng)篩選方式經(jīng)由濕化學(xué)實(shí)驗(yàn)計(jì)算出，而是通過計(jì)算機(jī)化方法預(yù)測。藉由低分子有機(jī)化合物或抑制劑與hsp27活性物質(zhì)結(jié)合袋的結(jié)合/相互作用，可使該hsp27蛋白的結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，通常這些變化被限制為側(cè)鏈，然而氨基酸全組及其肽骨架也可移動(dòng)。有利地，通過虛擬篩選，只有少數(shù)低分子有機(jī)化合物必須進(jìn)行體外(即在生物體外側(cè))、原位(即在細(xì)胞中，優(yōu)選在細(xì)胞培養(yǎng)物中)和/或體內(nèi)(即在生物體體內(nèi))的實(shí)驗(yàn)，以測試其對(duì)hsp27活性物質(zhì)結(jié)合袋的理化親和力，借此可提高特定hsp27抑制劑的判定效率，這種用來判定與hsp27活性物質(zhì)結(jié)合袋的親和力的體外試驗(yàn)，例如通過結(jié)合測定而進(jìn)行，其中測量兩個(gè)未標(biāo)記的結(jié)合配偶體的關(guān)系(例如：生物薄膜干涉技術(shù)方法檢測)。對(duì)于hsp27也可以在聚合試驗(yàn)中進(jìn)行靶蛋白功能或其抑制性的定量檢測。在體外實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，根據(jù)本發(fā)明通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物和通式(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)的胸腺嘧啶衍生物，對(duì)于hsp27蛋白具有在10納摩爾/升至1000微摩爾/升范圍內(nèi)的解離常數(shù)(kd)，優(yōu)選為在100納摩爾/升至800微摩爾/升范圍內(nèi)。該些預(yù)先確定的低分子有機(jī)化合物在原位實(shí)驗(yàn)中對(duì)hsp27蛋白功能性的抑制作用，優(yōu)選為在hsp27表達(dá)的細(xì)胞中進(jìn)行測量；優(yōu)選地，在原位方法中，使用通用、容易培養(yǎng)的細(xì)胞系來進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，其中結(jié)合配偶體會(huì)在細(xì)胞系中被表達(dá)出；以癌細(xì)胞系為例，合適的細(xì)胞系為u-937和rpmi-8226，以囊性纖維化細(xì)胞系為例，合適的細(xì)胞系為ccd-186sk。在此，低分子有機(jī)化合物的有效性檢測，優(yōu)選為，通過測量其相對(duì)于細(xì)胞生長抑制劑的抗性發(fā)展或是判定hsp27與其結(jié)合配偶體之間的相互作用(例如：通過測量胱天蛋白酶-3的活性)。本發(fā)明中的低分子有機(jī)化合物，是指主要由碳、氫、氧和氮分子等元素構(gòu)建而成的化合物，并優(yōu)選具有在100至900克/摩爾范圍內(nèi)的分子量，特別是在150至750克/摩爾范圍內(nèi)，尤其是在200至600克/摩爾范圍內(nèi)。相較于大分子(例如：核苷酸為基礎(chǔ)的抑制劑，諸如反義寡核苷酸或rna寡核苷酸)，低分子有機(jī)化合物擁有顯著優(yōu)勢，其具有在生理?xiàng)l件下更好的操作性和穩(wěn)定性；此外，低分子有機(jī)化合物大多具有細(xì)胞滲透性，也因此更容易應(yīng)用于細(xì)胞或生物上。令人驚奇的是，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，尤其是根據(jù)通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物和根據(jù)通式(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)的胸腺嘧啶衍生物，其作為低分子有機(jī)化合物可選擇性地結(jié)合至hsp27蛋白的活性物質(zhì)結(jié)合袋，且已經(jīng)可以在低微摩爾和亞微摩爾濃度范圍內(nèi)抑制著hsp27蛋白的功能性。優(yōu)選地，該取代基ry為一任選取代的環(huán)狀芳基基團(tuán)和/或多環(huán)芳基基團(tuán)，或任選取代的氧雜環(huán)或氮雜環(huán)，或任選的多環(huán)和/或取代的氮雜環(huán)，其特別是選自苯基基團(tuán)、萘基團(tuán)、聯(lián)苯基團(tuán)、菲基團(tuán)、苯并芘基團(tuán)、吡啶基團(tuán)、二嗪基團(tuán)、三唑基團(tuán)、哌啶基團(tuán)、聯(lián)哌啶基團(tuán)、哌嗪基團(tuán)、呫噸基團(tuán)、咔唑基團(tuán)、吩噻嗪、9，10-二氫菲、三苯甲烷基團(tuán)或上述的組合。優(yōu)選地，該六元氮雜環(huán)通過氮原子共價(jià)結(jié)合至通式(i)或(ii)。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)替代優(yōu)選實(shí)施例中，根據(jù)通式(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)的胸腺嘧啶衍生物的取代基ry選自苯基基團(tuán)、三唑基團(tuán)、哌嗪基團(tuán)、二嗪基團(tuán)和三苯甲烷基團(tuán)，其特別是可以被一六元氮雜環(huán)取代，特別是吡啶、1，2-二嗪、1，3-二嗪、哌啶、哌嗪或聯(lián)哌啶，或上述彼此對(duì)位橋連、二到三個(gè)序列的取代基。任選地，根據(jù)通式(vi)或(vii)的胸腺嘧啶衍生物的取代基ry為h或oh，亦即，其為一空間位阻小的基團(tuán)，其中a3特別優(yōu)選為-chk-，亦即，其為一空間位阻大的基團(tuán)，其中k為任選取代的五元氮雜環(huán)，特別是三唑、二唑或咪唑，其中五元氮雜環(huán)優(yōu)選為通過氮原子共價(jià)結(jié)合到a3。在此，五元氮雜環(huán)的取代基特別是選自苯基基團(tuán)、吡啶基團(tuán)和二嗪基團(tuán)。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，根據(jù)通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物和根據(jù)通式(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)的胸腺嘧啶衍生物，為配合該活性物質(zhì)結(jié)合袋，ry選自h、通式(iii)或通式(iv)：其中：-代表共價(jià)連接到通式(i)、(ii)或(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)；-x為n或ch；-z為單鍵、ch2、o、c(＝o)、s或nrx，特別優(yōu)選為ch2、o、s或nrx；-rx為任選取代的和/或支鏈的c1-c4烷基基團(tuán)；-r1、r2、r3和r4各自為-h、-鹵素、-no2、-cn、-nr2、和-sr、-or、-coor、-cor、-r，或任選取代的c1-c4乙烯基團(tuán)或任選取代的芳基基團(tuán)，其中r為如上所定義的h或c1-c8烷基基團(tuán)。替選地，ry優(yōu)選選自-crarbrc，其中ra、rb和rc分別選自h和環(huán)狀基團(tuán)，優(yōu)選選自任選取代的環(huán)狀或多環(huán)芳基基團(tuán)以及任選取代的雜環(huán)，特別優(yōu)選地選自h、苯基、萘基、聯(lián)苯基。優(yōu)選地，至少一個(gè)的ra、rb和rc基團(tuán)為h，且至少一個(gè)的基團(tuán)為環(huán)狀基團(tuán)，其優(yōu)選為如上述所選。藉由該結(jié)構(gòu)與蛋白質(zhì)的活性物質(zhì)結(jié)合袋的配合，該根據(jù)通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物或該根據(jù)通式(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)的胸腺嘧啶衍生物，有利地，在低微摩爾和亞微摩爾，更優(yōu)選地在納摩爾濃度范圍內(nèi)具有活性。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，取代基r1至r4在考慮到空間位阻下具有-i和/或-m效果，使該根據(jù)通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物或該根據(jù)通式(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)的胸腺嘧啶衍生物，有利地，對(duì)于hsp27蛋白活性物質(zhì)結(jié)合袋具有高結(jié)合親和力(即低ki和低kd)。該些取代基r1至r4優(yōu)選為各自具有-i和/或-m效果的取代基，并選自h、-no2、-cf3、-f、-cl、-br、-oh、-cooh、-och3和-cor；特別優(yōu)選地，該些取代基分別選自h、-no2、-cf3、-oh、-cooh和f；在本發(fā)明的一個(gè)最優(yōu)選實(shí)施例中，該些取代基r1至r4其中的兩個(gè)，特別優(yōu)選為只有其中的一個(gè)，具有一個(gè)不是h的取代基。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)替代優(yōu)選實(shí)施例，該些取代基r1至r4中的一個(gè)，最優(yōu)選為r3，為任選取代的芳基基團(tuán)，其具有明顯的+m效果，優(yōu)選為苯基基團(tuán)或六元氮雜環(huán)，并選自吡啶、噠嗪、嘧啶或吡嗪。更特別優(yōu)選地，該些取代基r1至r4中的一個(gè)，為任選取代的六元氮雜環(huán)。根據(jù)通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物對(duì)hsp27蛋白活性物質(zhì)結(jié)合袋的結(jié)合親和力，特別是由取代基rn的性質(zhì)決定；優(yōu)選地，rn為對(duì)空間位阻要求不高、小的取代基，并選自h、一任選支鏈的c1-c4烷基基團(tuán)或醚基團(tuán)、一任選取代的五元或六元氧雜環(huán)，其中v為h或oh。尤其是，該根據(jù)通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物顯示出對(duì)于hsp27蛋白的活性物質(zhì)結(jié)合袋具有特別高的結(jié)合親和性(即，低ki和低kd)，其中通式中的rn為h、任選oh官能化的甲基基團(tuán)、乙基基團(tuán)、正丙基基團(tuán)、異丙基基團(tuán)、正丁基基團(tuán)、異丁基基團(tuán)、叔丁基基團(tuán)，或是一通過c1′取代的、任選取代的五元氧雜環(huán)，特別是呋喃、核糖、脫氧核糖或雙脫氧核糖。優(yōu)選地，這類根據(jù)通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物，其中的rn如上述所定義，在10納摩爾/升至5毫摩爾/升范圍中對(duì)于hsp27具有-ki，特別優(yōu)選為在50納摩爾/升至5毫摩爾/升范圍中；替選地，該取代基rn基本上由兩部分組成，其中第一部分為u和w，第二部分為v；優(yōu)選地，該第一部分(u和w)為被取代的、任選支鏈的c1-c4烷基基團(tuán)或醚基團(tuán)，而第二部分(v)為取代的六元氮雜環(huán)，如吡啶、二嗪、哌啶或哌嗪等；且其中該六元氮雜環(huán)的取代基，優(yōu)選選自-oh和一任選取代的和/或多環(huán)的芳基基團(tuán)，特別是苯基、萘、喹啉、萘啶；且其中芳基基團(tuán)上的取代基，優(yōu)選選自-cf3、-f、-oh、-nh2、＝o、-cooh、-och3和-c1-c3烷基基團(tuán)。優(yōu)選地，這類根據(jù)通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物，其中的rn如上述所定義，其在至少在低微摩爾和亞微摩爾范圍內(nèi)對(duì)于hsp27具有-ki，更優(yōu)選地在納摩爾范圍內(nèi)，特別優(yōu)選地在10納摩爾/升至200納摩爾/升的范圍內(nèi)。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，取代基rn為其中v為氨基酸as，其通過自身羧基基團(tuán)共價(jià)鍵合到w。優(yōu)選地，該氨基酸選自蛋白氨基酸和其相應(yīng)β-as群組，as特別優(yōu)選選自疏水性(等于非極性)蛋白氨基酸和其相應(yīng)的β-as群組，例如：丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸或色氨酸，有利地，該根據(jù)通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物對(duì)hsp27蛋白活性物質(zhì)結(jié)合袋的結(jié)合親和性可借此進(jìn)一步被提升。優(yōu)選地，該根據(jù)通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物或該根據(jù)通式(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)的胸腺嘧啶衍生物，其中該些根據(jù)通式(iii)的取代基rn中，z為-o-、-c(＝o)-或-s-，而x為n或ch；其中當(dāng)z為-o-或-c(＝o)以及x為ch時(shí)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該嘌呤衍生物特別可做為hsp27的選擇性抑制劑，亦即，其對(duì)于hsp27蛋白活性物質(zhì)結(jié)合袋具有較高的結(jié)合親和力(即，低ki和低kd)。優(yōu)選地，該根據(jù)通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物或該根據(jù)通式(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)的胸腺嘧啶衍生物(其中y為o、nr)為一六元氮雜環(huán)，特別是吡啶、二嗪、哌啶或哌嗪，或是一酰胺基團(tuán)(-nh-c(＝o)-)，其中y特別優(yōu)選為nr或吡啶、二嗪、哌啶或哌嗪。當(dāng)y是酰胺基團(tuán)時(shí)，該酰胺基團(tuán)優(yōu)選定向成，將c(＝o)-基團(tuán)根據(jù)通式(iii)或(iv)直接連接到該些取代基ry。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施例中，該些根據(jù)通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物或根據(jù)通式(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)的胸腺嘧啶衍生物上的取代基ry中的r1、r3和任選r4為h，在這種情況下顯示出其對(duì)hsp27蛋白活性物質(zhì)結(jié)合袋具有特別高的結(jié)合親和力，在其中該根據(jù)通式(iv)的苯環(huán)僅具有在間位的取代基r2，而r1和r3為h。在本發(fā)明的一個(gè)最優(yōu)選的實(shí)施例中，該根據(jù)通式(iv)的取代基ry中，r1和r3為h，而r2為任選取代的苯基基團(tuán)。替代優(yōu)選地，根據(jù)通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物或根據(jù)通式(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)的胸腺嘧啶衍生物，僅具有根據(jù)通式(iv)在苯環(huán)鄰位上的取代基r1和/或在對(duì)位上的r3，其中，在間位上的r2為h。在本發(fā)明的一個(gè)最優(yōu)選的實(shí)施例中，根據(jù)通式(iv)的取代基r中，r1和r2為h，而r3為任選取代的苯基基團(tuán)。在本發(fā)明的一個(gè)最優(yōu)選的實(shí)施例中，根據(jù)通式(iv)的取代基ry中，r1為h，而r1和r3各自為r或一任選取代的c1-c4乙烯基團(tuán)，其中r為h或一任選oh官能化的c1-c5烷基基團(tuán)。在本發(fā)明的一個(gè)最優(yōu)選的實(shí)施例中，根據(jù)通式(iii)的取代基ry中，r1、r3、和r4為h，而r2為h、-鹵素、-cor或一任選取代的苯基團(tuán)。本發(fā)明中的hp27抑制劑，特別是選自通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物，選自通式(vi)的胸腺嘧啶衍生物和/或選自通式(v)的吩噻嗪衍生物，其用于在癌癥治療中抑制化療耐藥的形成，以及用于囊性纖維病的治療。囊性纖維病是一種遺傳性疾病，在大多數(shù)的囊性纖維病中，由于508位的蛋白質(zhì)cftr(cysticfibrosistransmembraneconductanceregulator)在cftr編碼的dna序列中缺失三個(gè)核苷酸，而丟失氨基酸苯丙氨酸(phe508)。該蛋白質(zhì)cftr為一跨膜蛋白，可調(diào)節(jié)水和鹽在上皮細(xì)胞質(zhì)膜的運(yùn)輸。由此產(chǎn)生的蛋白質(zhì)缺失突變體δf508在其形成時(shí)沒有被完全正確地折疊，也因此不能通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)被輸送至細(xì)胞膜，而是在hsp27的參與影響下被隔離降解。商業(yè)上已知的囊性纖維病治療方法，只是一些針對(duì)與病癥相關(guān)、不同癥狀的治療。令人驚奇的發(fā)現(xiàn)是，通過hsp27蛋白的抑制、通過hsp27活性物質(zhì)結(jié)合袋與低分子化合物的特別相互作用，特別是與根據(jù)通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物、與根據(jù)通式(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)的胸腺嘧啶衍生物和/或與根據(jù)通式(v)的吩噻嗪衍生物的相互作用，該缺失突變體δf508可于降解之前被保留下來。有利的是，該可將功能整合至細(xì)胞膜的缺失突變體δf508在此可以發(fā)揮其天性作為camp調(diào)節(jié)的氯離子通道。根據(jù)本發(fā)明進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施例中，根據(jù)通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物、根據(jù)通式(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)的胸腺嘧啶衍生物以及根據(jù)通式(v)的吩噻嗪衍生物，特別適合作為癌癥治療的藥物，且特別適合用于化療耐藥的壓制，以及特別適合用于囊性纖維病的治療。本發(fā)明也將這些化合物用于藥物制造，優(yōu)選用于癌癥治療，特別是用于抑制化療耐藥形成，以及用于囊性纖維病的治療。本發(fā)明也包括例如：可藥用鹽、前藥、對(duì)映體，非對(duì)映體，外消旋混合物，結(jié)晶形式，無定形形式和溶劑化物等等的化合物，其具有一根據(jù)通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物或一根據(jù)通式(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)的胸腺嘧啶衍生物，并作為癌癥治療的藥物，特別是用于化療耐藥的壓制，以及用于囊性纖維病的治療。本發(fā)明中的可藥用鹽是指根據(jù)通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物或根據(jù)通式(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)的胸腺嘧啶衍生物的帶正或負(fù)電離子的化合物，其依據(jù)嘌呤衍生物的取代基而取得，例如：通過使用一微弱的可藥用酸或堿來處理而取得。前藥是指無活性或低活性的藥物物質(zhì)，其首先在生理?xiàng)l件下通過一化學(xué)修飾(即，通過代謝或新陳代謝)，于生物體中被轉(zhuǎn)移成一根據(jù)通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物或根據(jù)通式(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)的胸腺嘧啶衍生物的藥理活性形式；前藥或也可以通過化學(xué)或生物化學(xué)方法于一離體環(huán)境中，被轉(zhuǎn)移成一根據(jù)通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物或一根據(jù)通式(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)的胸腺嘧啶衍生物的藥理活性形式。包含一根據(jù)通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物和/或包含一根據(jù)通式(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)的胸腺嘧啶衍生物的一化合物，其在生物體中的應(yīng)用可能性取決于該化合物的結(jié)構(gòu)。相較于一般習(xí)用核苷酸類抑制劑，本發(fā)明根據(jù)通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物和根據(jù)通式(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)的胸腺嘧啶衍生物的一個(gè)特別有利的特征在于，其為低分子有機(jī)化合物，因而在本發(fā)明中具有很大程度上不受影響的生物利用度，例如：不受胃液ph值影響的生物利用度。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施例中，含有根據(jù)通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物和/或含有根據(jù)通式(vi)或(vii)的胸腺嘧啶衍生物的化合物，通過口服或腸胃外給藥并經(jīng)由粘膜而被有機(jī)體吸收。對(duì)于口服給藥而言，適合的方式為藥物制劑，例如：片劑、膠囊或液體形式或直腸栓劑的形式。本發(fā)明中的生物實(shí)例優(yōu)選選自哺乳動(dòng)物群組，其中該根據(jù)通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物和/或該根據(jù)通式(vi)或(vii)的胸腺嘧啶衍生物，特別優(yōu)選地可以應(yīng)用于人類。本發(fā)明的另一部分，涉及一種用于癌癥治療或用于囊性纖維病治療的藥物制劑，其包含至少一根據(jù)通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物和/或一根據(jù)通式(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)的胸腺嘧啶衍生物，在此，該些根據(jù)通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物和/或該些根據(jù)通式(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)的胸腺嘧啶衍生物，可以在藥物制劑中作為唯一的藥理活性劑，或者以與至少一種細(xì)胞生長抑制劑結(jié)合的組合方式被使用，并借此擴(kuò)大其活性譜或阻止抗性的發(fā)展，在許多情況下可得到累加或協(xié)同效果，亦即，所述混合物的活性超過個(gè)別成分的活性。已知的是，不論是何種應(yīng)用且使用至少一種細(xì)胞生長抑制劑的情況下，當(dāng)細(xì)胞中hsp27蛋白已經(jīng)活性下降時(shí)，會(huì)將長期穩(wěn)定的狀態(tài)導(dǎo)向癌細(xì)胞退變，并從而使腫瘤生長顯著減少[參見：straume斯特勞梅等人，2012]。在此背景下，根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，本發(fā)明的藥物制劑只具有一活性劑，其以根據(jù)通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物或根據(jù)通式(vi)或(vii)的胸腺嘧啶衍生物的形式出現(xiàn)。然而，特別優(yōu)選的是一根據(jù)本發(fā)明、含有根據(jù)通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物和/或含有根據(jù)通式(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)的胸腺嘧啶衍生物的藥物制劑，其與至少一種細(xì)胞生長抑制劑的組合。這樣一種根據(jù)本發(fā)明的藥物制劑具有可在抑制細(xì)胞生長治療中防止或至少顯著延遲抗性發(fā)展的特殊優(yōu)點(diǎn)，該細(xì)胞生長抑制劑例如：葉酸拮抗劑(如：甲氨蝶呤、培美曲塞)、嘧啶類似物(如：5-氟尿嘧啶、吉西他濱)、嘌呤類似物(如：噴司他丁、硫唑嘌呤)和n-或c-末端保護(hù)的寡肽(如：硼替佐米)。如上所述，該通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物和/或該通式(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)的胸腺嘧啶衍生物，可以以片劑、膠囊、液體或糖漿或直腸栓劑的形式給藥。此中令人驚訝的發(fā)現(xiàn)為根據(jù)通式(v)的吩噻嗪衍生物：其中：-x、n和z為s；-rx為任選取代的和/或支鏈的c1-c4烷基、烯基基團(tuán)或炔基基團(tuán)；-該些取代基r1和r2于鄰位、間位或?qū)ξ簧细髯詾?h、-or、-c(＝o)r、-cf3、-鹵素、脂族或芳族雜環(huán)；-y為n或一酰胺基(-nr-c(＝o)-)；-n和m各自為0至3的整數(shù)；-r5和r6各自為h、任選取代的哌嗪基團(tuán)、苯基基團(tuán)(-c6h5)、羥基苯基(-oc6h5)、亞苯基基團(tuán)(-c6h4-)；其還能夠選擇性地結(jié)合至hsp27蛋白的活性物質(zhì)結(jié)合袋，并由此抑制hsp27蛋白的功能性，從而使噻嗪衍生物適合用于癌癥治療或用于囊性纖維病的治療。根據(jù)通式(v)的吩噻嗪衍生物的典型例子為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知，例子如下(mw＝分子量)：cas號(hào)碼吩噻嗪衍生物分子式mw[克/摩爾]61-00-7乙酰丙嗪c19h22n2os326.4650-53-3氯丙嗪c17h19cin2s318.8660-99-1左美丙嗪c19h24n2os328.4758-40-2丙嗪c17h20n2s284.4260-87-7異丙嗪c17h20n2s284.42146-54-3三氟丙嗪c18h19f3n2s352.4284-97-9培拉嗪c20h25n3s339.5058-39-9奮乃靜c21h26cin3os403.9769-23-8氟奮乃靜c22h26f3n3os437.52根據(jù)通式(v)的吩噻嗪衍生物的替代例子如下(依據(jù)所算出的各hsp27相關(guān)抑制濃度-ki)：在醫(yī)藥中，根據(jù)通式(v)的吩噻嗪衍生物以已知方式作為抗精神病藥使用，優(yōu)選用藥劑量為每公斤生物體體重使用1.0至3.0毫克的濃度。依據(jù)癌癥治療種類，在hsp27蛋白的選擇性抑制中，一根據(jù)通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物和/或一根據(jù)通式(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)的胸腺嘧啶衍生物和一根據(jù)通式(v)的吩噻嗪衍生物的組合，可以有利地導(dǎo)致超加效果(“協(xié)同效應(yīng)”)；因此，可以例如擁有下述超越實(shí)際可預(yù)料的效果：降低使用濃度和/或擴(kuò)大活性譜和/或增加單個(gè)化合物(即，活性成分)和藥物制劑的功效；因此，在本發(fā)明一優(yōu)選實(shí)施例中，根據(jù)本發(fā)明的藥物制劑具有該根據(jù)通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物和/或該根據(jù)通式(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)的胸腺嘧啶衍生物與一或多種根據(jù)通式(v)的吩噻嗪衍生物的組合。氯丙嗪在濕化學(xué)測試中顯示出，其與熱休克蛋白hsp27的相互作用僅具有極低的親和力，因此，在癌癥或囊性纖維病的治療中，其并非為優(yōu)選的根據(jù)通式(v)的吩噻嗪衍生物。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，根據(jù)通式(v)的吩噻嗪衍生物，單獨(dú)或其混合物皆可以作為癌癥或囊性纖維病治療的藥物使用。因此，本發(fā)明還包括了根據(jù)通式(v)的吩噻嗪衍生物或其混合物，其作為癌癥或囊性纖維病治療的藥物制劑的使用。優(yōu)選地，根據(jù)通式(v)的吩噻嗪衍生物，每天服用劑量為0.1至50毫克/(體重)公斤的，優(yōu)選約0.1至30毫克/公斤，而理想為0.5至20毫克/公斤，更優(yōu)選為0.5至15毫克/公斤或0.3微摩爾/公斤至150微摩爾/公斤，以及理想地1.5微摩爾/公斤至60微摩爾/公斤的每天服用劑量。本領(lǐng)域技術(shù)人員將可理解的是，如果使用另一結(jié)合時(shí)，例如：與一根據(jù)通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物進(jìn)行結(jié)合和/或與一根據(jù)通式(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)的胸腺嘧啶衍生物進(jìn)行結(jié)合時(shí)，正確的劑量既可以通過檢測在細(xì)胞增殖試驗(yàn)中的化合物功效，也可以通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中(最終為在人體中)的毒性測量而被確定出。本發(fā)明還包括一在細(xì)胞或生物體內(nèi)用于降低hsp27蛋白功能性的方法，其包括根據(jù)通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物或根據(jù)通式(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)的胸腺嘧啶衍生物在一生理學(xué)上有效濃度下對(duì)于hsp27蛋白的抑制應(yīng)用，其中該嘌呤衍生物與hsp27蛋白的活性物質(zhì)結(jié)合袋相互作用。本發(fā)明還包括一應(yīng)用，一根據(jù)通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物或一根據(jù)通式(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)的胸腺嘧啶衍生物和/或根據(jù)通式(v)的吩噻嗪衍生物，其在治療癌癥以及囊性纖維病等疾病狀態(tài)的應(yīng)用，其中，該些疾病狀態(tài)伴隨有hsp27信號(hào)增加。本發(fā)明還包括一方法，其通過一hsp27抑制劑的有效劑量的施用，用來治療囊性纖維病或預(yù)防癌癥化療耐藥的形成，其中該hsp27抑制劑特別是一根據(jù)通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物或一根據(jù)通式(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)的胸腺嘧啶衍生物和/或根據(jù)通式(v)的吩噻嗪衍生物。在此，該治療方法包括一藥物制劑的應(yīng)用，其在生理學(xué)上有效濃度下含有至少一種根據(jù)通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物、一種根據(jù)通式(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)的胸腺嘧啶衍生物和/或一種根據(jù)通式(v)的吩噻嗪衍生物。根據(jù)本發(fā)明的一優(yōu)選實(shí)施例中，特別是應(yīng)用于預(yù)防癌癥化療耐藥形成以及應(yīng)用于治療囊性纖維病，該應(yīng)用的藥物制劑為固態(tài)或液態(tài)，例如：以片劑、膠囊或液體形式或以栓劑形式出現(xiàn)，使該藥物制劑可以通過口服或腸胃外給藥施用，并通過粘膜而被生物體吸收。優(yōu)選地，該些根據(jù)通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物、根據(jù)通式(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)的胸腺嘧啶衍生物和/或根據(jù)通式(v)的吩噻嗪衍生物，每天服用劑量為約0.1至30毫克/公斤，而理想為0.5至15毫克/公斤的每天服用劑量施用；優(yōu)選地，劑量為0.1至500微摩爾，特別是0.5至200微摩爾，特別優(yōu)選為1至50微摩爾每公斤的每天服用劑量。適合這種治療的生物體例如哺乳動(dòng)物，如人類；優(yōu)選地，該些根據(jù)通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物、根據(jù)通式(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)的胸腺嘧啶衍生物和/或一根據(jù)通式(v)的吩噻嗪衍生物，在無細(xì)胞毒性濃度下被置入使用。本發(fā)明中，根據(jù)通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物、一根據(jù)通式(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)的胸腺嘧啶衍生物和/或一根據(jù)通式(v)的吩噻嗪衍生物，或它們的混合物，被用作為藥物使用，特別是用于癌癥或囊性纖維病的治療。因此，根據(jù)本發(fā)明的一優(yōu)選實(shí)施例中，根據(jù)通式(i)和/或(ii)的嘌呤衍生物、根據(jù)通式(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)的胸腺嘧啶衍生物和/或根據(jù)通式(v)的吩噻嗪衍生物，或它們的混合物，被用來生產(chǎn)藥物制劑，該藥物制劑特別是用于癌癥或囊性纖維病的治療。通式(v)的吩噻嗪衍生物和/或通式(i)和/或(ii)的嘌呤衍生物和/或通式(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)的胸腺嘧啶衍生物的施用劑量取決于各種因素，例如：給藥方法、年齡、體重和健康狀況等，其中包括受治療的生物體類型。根據(jù)通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物的典型例子如下(依據(jù)所算出的各hsp27相關(guān)抑制濃度-ki)：特別優(yōu)選為具有可能最低ki的化合物；優(yōu)選地，該些化合物具有最大100微摩爾/升的ki值，特別是最大為10微摩爾/升，特別優(yōu)選為最大為500納摩爾/升。根據(jù)通式(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)的胸腺嘧啶衍生物的典型例子如下(依據(jù)所算出的各hsp27相關(guān)抑制濃度-ki)：擁有最低ki值的化合物為特別優(yōu)選，優(yōu)選為具有最大ki值為100微摩爾/升的化合物，特別是最多為10微摩爾/升，更優(yōu)選為最多為500納摩爾/升。本發(fā)明還包括根據(jù)通式(i)和/或(ii)的嘌呤衍生物，和/或根據(jù)通式(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)的胸腺嘧啶衍生物和/或根據(jù)通式(v)的吩噻嗪衍生物，其用于制備藥物制劑的應(yīng)用，特別是用于癌癥或囊性纖維病的治療。本發(fā)明還提供了一根據(jù)通式(i)、(ii)的嘌呤衍生物，一根據(jù)通式(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)的胸腺嘧啶衍生物和/或根據(jù)通式(v)的吩噻嗪衍生物，其與化學(xué)治療、放射治療和/或腫瘤免疫治療等用于癌癥治療方法的結(jié)合使用，其中有利地，抗性發(fā)展(即，腫瘤或腫瘤細(xì)胞相對(duì)于所使用治療方法所產(chǎn)生的抗性)于治療方法中相對(duì)下降，尤其是被抑制住。用于治療某些癌癥的傳統(tǒng)方法，例如：手術(shù)切除腫瘤(切除)、化療和放療，其中經(jīng)常在一個(gè)有機(jī)體中同時(shí)使用兩個(gè)治療方法，或甚至同時(shí)使用所有三種治療方法。腫瘤免疫治療方法有主動(dòng)和被動(dòng)免疫的區(qū)別，在主動(dòng)免疫治療中患者被施予可在其免疫系統(tǒng)內(nèi)引發(fā)免疫應(yīng)答的物質(zhì)，在被動(dòng)免疫治療中則使用抗體或抗體片段。在過繼免疫療法中，從患者身上取出白細(xì)胞、體外培養(yǎng)，然后重新注入到病人體內(nèi)。在治療過程中，如果腫瘤的所有細(xì)胞和其轉(zhuǎn)移瘤沒有全被破壞，則抗性發(fā)展會(huì)嚴(yán)重阻礙該癌癥的后續(xù)治療。因此，一根據(jù)通式(i)、(ii)的嘌呤衍生物，一根據(jù)通式(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)的胸腺嘧啶衍生物和/或一根據(jù)通式(v)的吩噻嗪衍生物，提供了下述特別的優(yōu)點(diǎn)：其可以在化療、放療、癌癥免疫治療，尤其是抑制細(xì)胞生長的治療中，防止或至少顯著延遲抗性的形成與發(fā)展。細(xì)胞毒性藥物的例子為：葉酸拮抗劑(例如：甲氨蝶呤、培美曲塞)、嘧啶類似物(例如：5-氟尿嘧啶，吉西他濱)、嘌呤類似物(例如：噴司他丁，硫唑嘌呤)和n-或c-末端保護(hù)的寡肽(例如硼替佐米)。優(yōu)選地，至少一種根據(jù)通式(i)、(ii)的嘌呤衍生物，至少一種根據(jù)通式(vi)、(vi′)、(vii)或(viii)的胸腺嘧啶衍生物和/或至少一種根據(jù)通式(v)的吩噻嗪衍生物，與細(xì)胞生長抑制劑(優(yōu)選選自上述列表)結(jié)合而用于癌癥治療。在一個(gè)優(yōu)選的治療方案中，該嘌呤衍生物，胸腺嘧啶衍生物和/或吩噻嗪衍生物在化療、放療和/或腫瘤免疫治療開始之前即已使用，并在上述細(xì)胞毒性治療(化療、放療和/或腫瘤免疫治療)中繼續(xù)施給該嘌呤衍生物，胸腺嘧啶衍生物和/或吩噻嗪衍生物，以抑制抗性發(fā)展。優(yōu)選地，該嘌呤衍生物，胸腺嘧啶衍生物和/或吩噻嗪衍生物，于細(xì)胞毒性治療開始的15分鐘至4小時(shí)之前施用。本發(fā)明進(jìn)一步的特征和優(yōu)點(diǎn)，將茲舉實(shí)施例配合圖式于下述進(jìn)行更詳細(xì)的描述，然而本發(fā)明并不局限于此。附圖說明圖1示出一分光光度法蛋白質(zhì)聚集測定結(jié)果，其中分別為使用14和28微摩爾/升的2-(3-氯乙烯基-苯基氨基)-1，9-二氫嘌呤-6-酮(cs+hsp+第二號(hào)試驗(yàn)物)、使用750微摩爾/升的bvdu(cs+hsp+bvdu)，以及無使用(cs+hsp；基準(zhǔn))。測定相關(guān)條件如下：43℃、波長500nm與蛋白質(zhì)濃度：1.44微摩爾/升的檸檬酸合酶(cs)與481納摩爾/升的hsp27(熱休克蛋白)于40毫摩爾/升的hepes緩沖液(ph7.4)中。圖2示出以細(xì)胞生長抑制劑硼替佐米(0.1至0.5納克/毫升)治療的u-937細(xì)胞的治療天數(shù)與其細(xì)胞數(shù)量關(guān)系，其分別結(jié)合使用hsp27抑制劑乙酰丙嗪(加上1微摩爾ace)、結(jié)合使用bvdu(加上30微摩爾的bvdu)以及無使用hsp27抑制劑。圖3示出以細(xì)胞生長抑制劑硼替佐米(0.2至0.4納克/毫升)治療的u-937細(xì)胞的治療天數(shù)與其細(xì)胞數(shù)量關(guān)系，其分別結(jié)合使用hsp27抑制劑乙酰丙嗪(加上1微摩爾的ace)、結(jié)合使用bvdu(加上30微摩爾的bvdu)以及無使用hsp27抑制劑。圖4示出使用乙酰丙嗪抑制腫瘤細(xì)胞系rpmi-8226的抗性發(fā)展。圖4a示出以細(xì)胞生長抑制劑硼替佐米0.2至0.4納克/毫升(a)以及以硼替佐米加上0.75微摩爾的乙酰丙嗪的聯(lián)合用藥(b)以及以硼替佐米加上30微摩爾的bvdu的聯(lián)合用藥(c)對(duì)于腫瘤細(xì)胞系rpmi-8226的治療。圖4b示出不使用細(xì)胞生長抑制劑的控制情形：未經(jīng)治療的rpmi-8226細(xì)胞(a)、單獨(dú)使用0.75微摩爾的乙酰丙嗪(b)以及單獨(dú)使用30微摩爾的bvdu(c)。圖5示出使用氯丙嗪抑制腫瘤細(xì)胞系rpmi-8226的抗性發(fā)展。圖5a示出以細(xì)胞生長抑制劑硼替佐米0.2至0.4納克/毫升(a)以及以硼替佐米加上0.5微摩爾的氯丙嗪的聯(lián)合用藥(b)以及以硼替佐米加上30微摩爾的bvdu的聯(lián)合用藥(c)對(duì)于腫瘤細(xì)胞系rpmi-8226的治療。圖5b示出不使用細(xì)胞生長抑制劑的控制情形：未經(jīng)治療的rpmi-8226細(xì)胞(a)、單獨(dú)使用0.5微摩爾的氯丙嗪(b)以及單獨(dú)使用30微摩爾的bvdu(c)。圖6示出使用2-(4-丁基-苯基氨基)-9-(2-羥基-乙氧基甲基)-1，9-二氫嘌呤-6-酮抑制腫瘤細(xì)胞系rpmi-8226的抗性發(fā)展。圖6a示出以細(xì)胞生長抑制劑硼替佐米0.1至0.3納克/毫升(a)以及以硼替佐米加上1微摩爾的2-(4-丁基-苯基氨基)-9-(2-羥基-乙氧基甲基)-1，9-二氫嘌呤-6-酮的聯(lián)合用藥(b)以及以硼替佐米加上30微摩爾的bvdu的聯(lián)合用藥(c)對(duì)于腫瘤細(xì)胞系rpmi-8226的治療。圖6b示出不使用細(xì)胞生長抑制劑的控制情形：未經(jīng)治療的rpmi-8226細(xì)胞(a)、單獨(dú)使用1微摩爾的2-(4-丁基-苯基氨基)-9-(2-羥基-乙氧基甲基)-1，9-二氫嘌呤-6-酮(b)以及單獨(dú)使用30微摩爾的bvdu(c)。圖7示出使用2-(3-氯乙烯基-苯基氨基)-1，9-二氫嘌呤-6-酮抑制腫瘤細(xì)胞系rpmi-8226的抗性發(fā)展。圖7a示出以細(xì)胞生長抑制劑硼替佐米0.1至0.3納克/毫升(a)以及以硼替佐米加上1微摩爾的2-(3-氯乙烯基-苯基氨基)-1，9-二氫嘌呤-6-酮的聯(lián)合用藥(b)以及以硼替佐米加上30微摩爾的bvdu的聯(lián)合用藥(c)對(duì)于腫瘤細(xì)胞系rpmi-8226的治療。圖7b示出不使用細(xì)胞生長抑制劑的控制情形：未經(jīng)治療的rpmi-8226細(xì)胞(a)、單獨(dú)使用1微摩爾的2-(3-氯乙烯基-苯基氨基)-1，9-二氫嘌呤-6-酮(b)以及單獨(dú)使用30微摩爾的bvdu(c)。圖8示出使用9h-呫噸-9-羧酸[4-(5-甲基-2，4-二氧代-3，4-二氫-2h-嘧啶-1-基)-丁-2-烯基]-酰胺抑制腫瘤細(xì)胞系rpmi-8226的抗性發(fā)展。圖8a示出以細(xì)胞生長抑制劑硼替佐米0.075至0.275納克/毫升(a)以及以硼替佐米加上1微摩爾的9h-呫噸-9-羧酸[4-(5-甲基-2，4-二氧代-3，4-二氫-2h-嘧啶-1-基)-丁-2-烯基]-酰胺的聯(lián)合用藥(b)以及以硼替佐米加上30微摩爾的bvdu的聯(lián)合用藥(c)對(duì)于腫瘤細(xì)胞系rpmi-8226的治療。圖8b示出不使用細(xì)胞生長抑制劑的控制情形：未經(jīng)治療的rpmi-8226細(xì)胞(a)、單獨(dú)使用1微摩爾的9h-呫噸-9-羧酸[4-(5-甲基-2，4-二氧代-3，4-二氫-2h-嘧啶-1-基)-丁-2-烯基]-酰胺(b)以及單獨(dú)使用30微摩爾的bvdu(c)。圖9示出使用2-聯(lián)苯-4-基-n-[4-(5-甲基-2，4-二氧代-3，4-二氫-2h-嘧啶-1-基)-丁-2-烯基]-乙酰胺抑制腫瘤細(xì)胞系rpmi-8226的抗性發(fā)展。圖9a示出以細(xì)胞生長抑制劑硼替佐米0.075至0.275納克/毫升(a)以及以硼替佐米加上1微摩爾的2-聯(lián)苯-4-基-n-[4-(5-甲基-2，4-二氧代-3，4-二氫-2h-嘧啶-1-基)-丁-2-烯基]-乙酰胺的聯(lián)合用藥(b)以及以硼替佐米加上30微摩爾的bvdu的聯(lián)合用藥(c)對(duì)于腫瘤細(xì)胞系rpmi-8226的治療。圖9b示出不使用細(xì)胞生長抑制劑的控制情形：未經(jīng)治療的rpmi-8226細(xì)胞(a)、單獨(dú)使用1微摩爾的2-聯(lián)苯-4-基-n-[4-(5-甲基-2，4-二氧代-3，4-二氫-2h-嘧啶-1-基)-丁-2-烯基]-乙酰胺(b)以及單獨(dú)使用30微摩爾的bvdu(c)。圖10示出使用乙酰丙嗪抑制腫瘤細(xì)胞系u-937的抗性發(fā)展。圖10a示出以細(xì)胞生長抑制劑硼替佐米0.1至0.5納克/毫升(a)以及以硼替佐米加上0.75微摩爾的乙酰丙嗪的聯(lián)合用藥(b)以及以硼替佐米加上30微摩爾的bvdu的聯(lián)合用藥(c)對(duì)于腫瘤細(xì)胞系u-937的治療。圖11b示出不使用細(xì)胞生長抑制劑的控制情形：未經(jīng)治療的u-937細(xì)胞(a)、單獨(dú)使用0.75微摩爾的乙酰丙嗪(b)以及單獨(dú)使用30微摩爾的bvdu(c)。圖11示出使用2-(4-丁基-苯基氨基)-9-(2-羥基-乙氧基甲基)-1，9-二氫嘌呤-6-酮抑制腫瘤細(xì)胞系u-937的抗性發(fā)展。圖11a示出以細(xì)胞生長抑制劑硼替佐米0.1至0.5納克/毫升(a)以及以硼替佐米加上0.75微摩爾的2-(4-丁基-苯基氨基)-9-(2-羥基-乙氧基甲基)-1，9-二氫嘌呤-6-酮的聯(lián)合用藥(b)以及以硼替佐米加上30微摩爾的bvdu的聯(lián)合用藥(c)對(duì)于腫瘤細(xì)胞系u-937的治療。圖11b示出不使用細(xì)胞生長抑制劑的控制情形：未經(jīng)治療的u-937細(xì)胞(a)、單獨(dú)使用0.75微摩爾的2-(4-丁基-苯基氨基)-9-(2-羥基-乙氧基甲基)-1，9-二氫嘌呤-6-酮(b)以及單獨(dú)使用30微摩爾的bvdu(c)。例1-嘌呤衍生物的“speedscreen檢測法”測試以計(jì)算機(jī)化方法預(yù)測并判定具潛力可作為hsp27抑制劑的低分子化合物，并采用凝膠過濾法對(duì)于該些低分子化合物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。該用于檢測分子鍵并使用凝膠過濾法的方法，于2004年被稱為“speedscreen檢測法”[參見：muckenschnabel等，2004]，該方法的使用根據(jù)本發(fā)明需求而進(jìn)行調(diào)整配合，該分離法中，較大的分子如蛋白質(zhì)等可以通過葡聚糖凝膠sephadexg-25的基質(zhì)，而低分子化合物(小分子)則滲入基質(zhì)內(nèi)而不能通過。其中該分離法使用了ge醫(yī)療集團(tuán)的pdspintrapg-25。于800g離心2min下(按照說明書)，該些柱可讓大于/等于5000克/摩爾的分子量通過，而較小的分子則被保留在基質(zhì)中。靶蛋白hsp27具有27000克/摩爾的分子量，因此得以穿過上述基質(zhì)。根據(jù)本發(fā)明通式(i)的hsp27抑制劑為低分子化合物，其只能事先結(jié)合至靶蛋白hsp27，并以結(jié)合型態(tài)才能通過該葡聚糖凝膠g-25的基質(zhì)，未事先結(jié)合的低分子化合物會(huì)被保留在基質(zhì)中，已通過基質(zhì)的分子則可以繼續(xù)以質(zhì)譜法進(jìn)行檢測，借此可以區(qū)分出“結(jié)合”和“非結(jié)合”。結(jié)果：以“speedscreen檢測法”測試、根據(jù)通式(i)的嘌呤衍生物的測試代表：2-(3-氯乙烯基-苯基氨基)-1，9-二氫嘌呤-6-酮2-(4-丁基-苯基氨基)-9-(2-羥基-乙氧基甲基)-1，9-二氫嘌呤-6-酮2-(3-羥甲基-苯基氨基)-3，7-二氫嘌呤-6-酮此外，乙酰丙嗪(如：馬來酸乙酰丙嗪)作為吩噻嗪衍生物的測試代表，并以“speedscreen檢測法”測試，檢測結(jié)果呈陽性，該三個(gè)嘌呤衍生物穿過葡聚糖g-25基質(zhì)，并于穿越后在介質(zhì)中進(jìn)行檢測。該吩噻嗪衍生物乙酰丙嗪(如：馬來酸乙酰丙嗪)以及氯丙嗪和hsp27的結(jié)合，也可以采用生物薄膜干涉技術(shù)方法檢測，并在kd＝72微摩爾/升或770微摩爾/升下，而檢測出陽性。例2-胸腺嘧啶衍生物的“speedscreen檢測法”測試以計(jì)算機(jī)化方法預(yù)測并判定具潛力可作為hsp27抑制劑的低分子化合物，并采用凝膠過濾法對(duì)于該些低分子化合物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。該用于檢測分子鍵并使用凝膠過濾法的方法，于2004年被稱為“speedscreen檢測法”[參見：muckenschnabel等，2004]，該方法的使用根據(jù)本發(fā)明需求而進(jìn)行調(diào)整配合，該分離法中，較大的分子如蛋白質(zhì)等可以通過葡聚糖凝膠sephadexg-25的基質(zhì)，而低分子化合物(小分子)則滲入基質(zhì)內(nèi)而不能通過。其中該分離法使用了ge醫(yī)療集團(tuán)的pdspintrapg-25。于800g離心2min下(按照說明書)，該些柱可讓大于/等于5000克/摩爾的分子量通過，而較小的分子則被保留在基質(zhì)中。靶蛋白hsp27具有27000克/摩爾的分子量，因此得以穿過上述基質(zhì)。根據(jù)本發(fā)明通式(i)的hsp27抑制劑為低分子化合物，其只能事先結(jié)合至靶蛋白hsp27，并以結(jié)合型態(tài)才能通過該葡聚糖凝膠g-25的基質(zhì)，未事先結(jié)合的低分子化合物會(huì)被保留在基質(zhì)中，已通過基質(zhì)的分子則可以繼續(xù)以質(zhì)譜法進(jìn)行檢測，借此可以區(qū)分出“結(jié)合”和“非結(jié)合”。結(jié)果：以“speedscreen檢測法”測試、根據(jù)通式(vi)的胸腺嘧啶衍生物的測試代表：9h-呫噸-9-羧酸[4-(5-甲基-2，4-二氧代-3，4-二氫-2h-嘧啶-1-基)-丁-2-烯基]-酰胺2-聯(lián)苯-4-基-n-[4-(5-甲基-2，4-二氧代-3，4-二氫-2h-嘧啶-1-基)-丁-2-烯基]-乙酰胺該二胸腺嘧啶衍生物穿過葡聚糖g-25基質(zhì)，并于穿越后在介質(zhì)中進(jìn)行檢測。該吩噻嗪衍生物乙酰丙嗪(如：馬來酸乙酰丙嗪)以及氯丙嗪和hsp27的結(jié)合，也可以采用生物薄膜干涉技術(shù)方法檢測，并在kd＝72微摩爾/升或770微摩爾/升下，檢測出陽性。例3-采用生物薄膜干涉技術(shù)檢測到的結(jié)合生物薄膜干涉技術(shù)用于檢測生物分子之間的相互作用，它是一種測量由兩個(gè)表面反射白光的光學(xué)干涉分析技術(shù)，一個(gè)表面由在生物傳感器前端的固定靶蛋白的一個(gè)層和一個(gè)內(nèi)部參照表面共同組成。配體與靶蛋白的結(jié)合改變了干涉圖案，并且可以實(shí)時(shí)地被檢測出。檢測使用了工具fortebiooctetred384，靶蛋白hsp27被生物素化，并結(jié)合至相應(yīng)傳感器(ssa)。這種分析方法的主要優(yōu)點(diǎn)在于，既不須固定也不須標(biāo)注分析物。該以計(jì)算機(jī)化方法預(yù)先判定、根據(jù)通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物以濃度范圍(kd)333微摩爾/升和10納摩爾/升進(jìn)行該些檢測。利用生物薄膜干涉技術(shù)方法進(jìn)行該嘌呤衍生物2-(4-丁基-苯基氨基)-9-(2-羥基-乙氧基甲基)-1，9-二氫嘌呤-6-酮的檢測，檢測結(jié)果為陽性，該低分子化合物可與hsp27結(jié)合并具有kd＝15微摩爾/升。該吩噻嗪衍生物乙酰丙嗪(如：馬來酸乙酰丙嗪)以及氯丙嗪和hsp27的結(jié)合，也可以采用生物薄膜干涉技術(shù)方法檢測，并在kd＝72微摩爾/升或770微摩爾/升下，檢測出陽性。例4-分光光度法蛋白質(zhì)聚集測定為了檢測本發(fā)明嘌呤衍生物的有效性，進(jìn)行了具代表性的hsp27蛋白分子伴侶功能實(shí)驗(yàn)。一個(gè)眾所周知的hsp27客戶蛋白(＝基質(zhì)，hsp27作為分子伴侶而作用于其上)是檸檬酸合成酶，當(dāng)溫度升高到43℃時(shí)，該檸檬酸合成酶會(huì)變性，而這種熱變性會(huì)因hsp27的存在而被阻止或延遲[參見：jakobu，1993]。通過添加新的成分可因此檢測出其利用hsp27分子伴侶功能抑制的有效性。2-(3-氯乙烯基-苯基氨基)-1，9-二氫嘌呤-6-酮的活性判定(即，對(duì)熱溫育后的檸檬酸合成酶(cs)的聚集行為的影響)，其與bvdu的比較，提供了四種不同的做法，該些做法使用1.44微摩爾/升的cs、481納摩爾/升的hsp27(熱休克蛋白)在40毫摩爾/升的hepes緩沖液(ph7.4)中；并將bvdu(750微摩爾/升)或?qū)⒏鞣N濃度的2-(3-氯乙烯基-苯基氨基)-1，9-二氫嘌呤-6-酮(14微摩爾/升；28微摩爾/升)加入，接著將樣品溫育至43℃，并在一光譜儀上(perkinelmerls55，perkinelmer公司)以500nm波長追蹤cs的聚集行為。圖1揭示了該蛋白質(zhì)檸檬酸合成酶(圖中只以cs表示)通過將溫度提高至43℃而變性，并形成聚集，光譜儀在500nm處測得該聚集(通過蛋白聚集體的光散射)。hsp27(熱休克蛋白)的存在使聚合發(fā)生了相反轉(zhuǎn)(參見圖示：cs+hsp)。因加入測試物質(zhì)(bvdu和2-(3-氯乙烯基-苯基氨基)-1，9-二氫嘌呤-6-酮)而抑制了hsp27的分子伴侶功能，因此通過測量cs的聚集行為可以判定出各測試物質(zhì)的活性?？梢源_知的是，cs獨(dú)自迅速形成聚集，然后該cs聚集體沉淀在樣品槽里，使得紅色曲線達(dá)到峰值后再次下降。在此顯示，可以藉由hsp27的存在而在一小時(shí)期間內(nèi)阻止cs的聚合；在750微摩爾/升的bvdu濃度下，bvdu可以提高部分hsp27的分子伴侶功能；該測試物質(zhì)2-(3-氯乙烯基-苯基氨基)-1，9-二氫嘌呤-6-酮顯示出，在14微摩爾/升的濃度下已經(jīng)可以看出其差別，而在28微摩爾/升的濃度下則顯示出強(qiáng)烈的作用。hsp27的抑制與低分子有機(jī)化合物和hsp27活性物質(zhì)結(jié)合袋的結(jié)合強(qiáng)度密切相關(guān)，該與hsp27相互作用的低分子有機(jī)化合物的有效濃度可以通過bvdu在當(dāng)量bvdu的活性而轉(zhuǎn)換計(jì)算出，其等于在bvdu毫克中的hsp27抑制劑量。以100毫克的bvdu為基準(zhǔn)，該測試物質(zhì)2-(3-氯乙烯基-苯基氨基)-1，9-二氫嘌呤-6-酮具有小于1.9毫克的bvdu當(dāng)量劑量。例5-具嘌呤衍生物的cs蛋白質(zhì)沉淀物的毛細(xì)管電泳分離由于例1的檸檬酸合成酶的熱變性蛋白聚集體不溶于水在室溫下以16,000×g通過離心分離，為時(shí)10分鐘，從上清液中完全被分離出來。使用毛細(xì)管可使分離析出物的組合物被顯示出來，并且被量化。該析出檸檬酸合成酶的蛋白相對(duì)量可以作為測試物質(zhì)的有效性量度。分別使用481納摩爾/升hsp27和1.44微摩爾/升的檸檬酸合成酶于ph值7.4、40毫摩爾/升的hepes緩沖液中，每一沉淀檸檬酸合成酶的蛋白質(zhì)相對(duì)量是以一定義bsa量歸一化作為內(nèi)標(biāo)；使用750微摩爾/升的bvdu條件下所沉淀的蛋白質(zhì)相對(duì)量被設(shè)定為等于1，其它測試物質(zhì)(兩個(gè)根據(jù)通式(v)的吩噻嗪衍生物測試代表；兩個(gè)根據(jù)通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物測試代表)則分別使用10微摩爾/升的濃度。下列表格1示出，在測試樣品以43℃、120分鐘熱處理后，檸檬酸合成酶的熱變性蛋白聚集體的毛細(xì)管電泳分離的結(jié)果。測試結(jié)果概述：四個(gè)測試物質(zhì)被證明分別于10微摩爾/升的施用濃度下相較作為對(duì)照物質(zhì)的bvdu更為有效，且因此可在53至79倍之間的范圍內(nèi)使用較低的劑量即可具有與習(xí)用bvdu相較量的效果。具體地，該嘌呤衍生物2-(4-丁基-苯基氨基)-9-(2-羥基-乙氧基甲基)-1，9-二氫嘌呤-6-酮顯示出，用于hsp27蛋白的抑制方面，其具有相較bvdu(bvdu等效劑量為1.4毫克)69倍的活性，而該嘌呤衍生物2-(3-氯乙烯基-苯基氨基)-1，9-二氫嘌呤-6-酮?jiǎng)t顯示出具有相較bvdu，53倍的活性，其等同少于1.9毫克的bvdu等效劑量。例6-hsp27抑制劑在癌細(xì)胞中的測試當(dāng)癌細(xì)胞使用細(xì)胞毒性藥物治療時(shí)，癌細(xì)胞會(huì)非?？焖侔l(fā)展出抗性，這也是無數(shù)次化療失敗的原因。hsp27通過例如在相互作用中發(fā)生凋亡抑制蛋白并從而防止癌細(xì)胞靶細(xì)胞的死亡，而藉此促進(jìn)耐藥的發(fā)展。特別是對(duì)于硼替佐米(萬珂)這種現(xiàn)代細(xì)胞生長抑制劑(蛋白酶抑制劑)，該hsp27帶動(dòng)的抗性發(fā)展有據(jù)可查[參見：chauhand，2004]。在此所描述的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)顯示出，相對(duì)于細(xì)胞生長抑制劑硼替佐米，如何通過施用新的hsp27抑制劑而阻止u-937細(xì)胞中的抗性發(fā)展。在此，與bvdu做比較而進(jìn)行乙酰丙嗪的測試。u-937細(xì)胞(組織細(xì)胞淋巴瘤)，以37℃、5％co2飽和濕度條件下，被培養(yǎng)在dmem培養(yǎng)基(+10％fcs)。播種100,000個(gè)細(xì)胞/毫升，并與細(xì)胞生長抑制劑硼替佐米(0.1納克/毫升)和相應(yīng)測試物質(zhì)一起孵育(目前測試用量：1微摩爾/升的乙酰丙嗪)；在30微摩爾/升的濃度下置入該對(duì)照物質(zhì)bvdu，在細(xì)胞數(shù)到達(dá)1.000.000細(xì)胞/毫升之前分別進(jìn)行細(xì)胞傳代，每一傳代時(shí)又接種100.000個(gè)細(xì)胞/毫升，以及逐步增加該細(xì)胞生長抑制劑硼替佐米的劑量(0.1納克/毫升和0.05納克/毫升)。測試物質(zhì)的濃度保持不變，通過逐步增加細(xì)胞生長抑制劑的劑量使得u-937細(xì)胞發(fā)生抗性發(fā)展，在hsp27抑制劑呈陽性結(jié)果的測試中，該抗性的發(fā)展得以被阻止或妨礙。由圖2可以看出，以乙酰丙嗪(+1微摩爾ace)處理u-937細(xì)胞沒有發(fā)生抗性發(fā)展，因此結(jié)束后沒有檢測到活細(xì)胞；另一方面，以bvdu處理u-937細(xì)胞(+30微摩爾bvdu)則檢測到最終細(xì)胞數(shù)量為430.000個(gè)細(xì)胞/毫升，而最終的細(xì)胞數(shù)量，在未添加hsp27抑制劑的培養(yǎng)中，將達(dá)790.000個(gè)細(xì)胞/毫升。為達(dá)控制目的，將u-937細(xì)胞分別與相應(yīng)測試物質(zhì)單獨(dú)處理。在相同的劑量下，該些測試物質(zhì)不單獨(dú)影響細(xì)胞生長，因?yàn)樵跊]有細(xì)胞生長抑制劑壓力下，癌細(xì)胞對(duì)于hsp27并無大量的需求。hsp27于抗性發(fā)展對(duì)于患者的有害影響只在合用細(xì)胞生長抑制劑時(shí)才明顯表現(xiàn)出來。例7-hsp27抑制劑在癌細(xì)胞中的測試在此相應(yīng)重復(fù)進(jìn)行例6的測試，其中，u-937細(xì)胞(組織細(xì)胞淋巴瘤)，以37℃、5％co2飽和濕度條件下，被培養(yǎng)在dmem培養(yǎng)基(+10％fcs)，播種100,000個(gè)細(xì)胞/毫升，并用0.2納克/毫升的細(xì)胞生長抑制劑硼替佐米的初始濃度，以及分別在沒有使用抑制劑以及并用乙酰丙嗪作為hsp27抑制劑的情況下，以1微摩爾/升的濃度培養(yǎng)；在30微摩爾/升的濃度下置入該對(duì)照物質(zhì)bvdu，在細(xì)胞數(shù)到達(dá)1.000.000細(xì)胞/毫升之前分別進(jìn)行細(xì)胞傳代，每一傳代時(shí)又接種100.000個(gè)細(xì)胞/毫升，以及以0.1納克/毫升逐步增加該細(xì)胞生長抑制劑硼替佐米的劑量，測試物質(zhì)和參照物質(zhì)的濃度保持恒定不變，通過逐步增加細(xì)胞生長抑制劑的劑量使得u-937細(xì)胞發(fā)生抗性發(fā)展，在hsp27抑制劑呈陽性結(jié)果的測試中，該抗性的發(fā)展得以被阻止或妨礙。由圖3可以看出，以乙酰丙嗪(+1微摩爾ace)處理u-937細(xì)胞沒有發(fā)生抗性發(fā)展，因此結(jié)束后沒有檢測到活細(xì)胞；另一方面，以bvdu處理u-937細(xì)胞(+30微摩爾bvdu)則檢測到最終細(xì)胞數(shù)量為60.000個(gè)細(xì)胞/毫升，而最終的細(xì)胞數(shù)量，在未添加hsp27抑制劑的培養(yǎng)中，將達(dá)230.000個(gè)細(xì)胞/毫升。為達(dá)控制目的，將u-937細(xì)胞分別與相應(yīng)測試物質(zhì)單獨(dú)處理。在相同的劑量下，該測試物質(zhì)不單獨(dú)影響細(xì)胞生長，因?yàn)樵跊]有細(xì)胞生長抑制劑壓力下，癌細(xì)胞對(duì)于hsp27并無大量的需求。hsp27于抗性發(fā)展對(duì)于患者的有害影響只在合用細(xì)胞生長抑制劑時(shí)才明顯表現(xiàn)出來。例8-具胸腺嘧啶衍生物的cs蛋白質(zhì)沉淀物的毛細(xì)管電泳分離由于例2的檸檬酸合成酶的熱變性蛋白聚集體不溶于水，在室溫下以16,000×g通過離心分離，為時(shí)10分鐘，從上清液中完全被分離出來。使用毛細(xì)管可使分離析出物的組合物被顯示出來，并且被量化。該析出檸檬酸合成酶的蛋白相對(duì)量可以作為測試物質(zhì)的有效性量度。分別使用481納摩爾/升hsp27和1.44微摩爾/升的檸檬酸合成酶于ph值7.4、40毫摩爾/升的hepes緩沖液中，每一沉淀檸檬酸合成酶的蛋白質(zhì)相對(duì)量是以一定義bsa量歸一化作為內(nèi)標(biāo)；使用750微摩爾/升的bvdu條件下所沉淀的蛋白質(zhì)相對(duì)量被設(shè)定為等于1，其它測試物質(zhì)(兩個(gè)根據(jù)通式(v)的吩噻嗪衍生物測試代表；兩個(gè)根據(jù)通式(i)或(ii)的嘌呤衍生物測試代表)則分別使用10微摩爾/升的濃度。下列表格2示出，在測試樣品以43℃、120分鐘熱處理后，檸檬酸合成酶的熱變性蛋白聚集體的毛細(xì)管電泳分離的結(jié)果。測試結(jié)果概述：四個(gè)測試物質(zhì)被證明分別于10微摩爾/升的施用濃度下相較作為對(duì)照物質(zhì)的bvdu更為有效，且因此可在49至79倍之間的范圍內(nèi)使用較低的劑量即可具有與習(xí)用bvdu相較量的效果。具體地，該胸腺嘧啶衍生物2-聯(lián)苯-4-基-n-[4-(5-甲基-2，4-二氧代-3，4-二氫-2h-嘧啶-1-基)-丁-2-烯基]-乙酰胺顯示出，用于hsp27蛋白的抑制方面，其具有相較bvdu(bvdu等效劑量為1.6毫克)61倍的活性，而該胸腺嘧啶衍生物9h-呫噸-9-羧酸[4-(5-甲基-2，4-二氧代-3，4-二氫-2h-嘧啶-1-基)-丁-2-烯基]-酰胺則顯示出具有相較bvdu，49倍的活性，其等同少于2毫克的bvdu等效劑量。進(jìn)一步的測試結(jié)果下列表格3示出，在更多的胸腺嘧啶衍生物以43℃、70分鐘熱處理后，檸檬酸合成酶的熱變性蛋白聚集體的毛細(xì)管電泳分離的結(jié)果。本測試其他方面則以如上所述條件進(jìn)行：例9-囊性纖維病的治療為了確定將功能整合到膜的缺失突變體δf508cftr的濃度的影響，使用了囊性纖維化細(xì)胞系ccd-186sk(crl-1563tm)。囊性纖維化細(xì)胞系ccd-186sk攜帶涉及cftr基因的純合子δf508-突變，苯丙氨酸在cftr基因的508位置的缺失常見于該疾病，70％以上的患者有此現(xiàn)象。由于該缺失，所得的cftr蛋白折疊不完全正確，且基于這個(gè)原因，其被提供到細(xì)胞降解，而非如同健康蛋白質(zhì)被運(yùn)送到細(xì)胞膜而被引入作為跨膜蛋白。在δf508-cftr蛋白的分離至降解中，hsp27起著至關(guān)重要的作用。實(shí)驗(yàn)證實(shí)下述假設(shè)：該生成時(shí)不直接被分離和被降解的δf508-cftr蛋白，被運(yùn)送至細(xì)胞膜，并在該處充當(dāng)一跨膜蛋白而得以通過細(xì)胞質(zhì)膜調(diào)節(jié)水與鹽的運(yùn)輸。為此，該ccd186sk細(xì)胞以100,000個(gè)細(xì)胞/毫升的密度接種，并用：2-(3-氯乙烯基-苯基氨基)-1，9-二氫嘌呤-6-酮2-(4-丁基-苯基氨基)-9-(2-羥基-乙氧基甲基)-1，9-二氫嘌呤-6-酮2-(3-羥甲基-苯基氨基)-3，7-二氫嘌呤-6-酮作為嘌呤衍生物的代表而于各自濃度溫育，每隔24小時(shí)采集細(xì)胞，并檢查是否被處理的細(xì)胞比未經(jīng)處理的細(xì)胞，在其細(xì)胞表面上存在更多的cftr。為了檢測細(xì)胞表面的cftr蛋白而使用一抗體，該抗體可以專門標(biāo)記出cftr蛋白的胞外環(huán)(氨基酸103-117)，該抗體用熒光染料fitc標(biāo)記，并使用流式細(xì)胞儀檢測。例10-生物薄膜干涉技術(shù)方法使用生物薄膜干涉技術(shù)方法的檢測，首先將生物素化的hsp27蛋白結(jié)合至超級(jí)鏈霉親和素傳感器(ssa，fa.fortebio)；接著，將加載的傳感器加入生物胞素溫育(“猝滅”)，作為參考對(duì)照則使用不加載的ssa傳感器加入生物胞素溫育。在特定待檢測分析物與hsp27結(jié)合的情況下，加載的hsp27傳感器相較伴隨參考傳感器產(chǎn)生了更強(qiáng)的信號(hào)(響應(yīng))；通過使用反應(yīng)緩沖液(pbst0.1％tween20加3％dmso)溫育而設(shè)立“基線”后，接著實(shí)時(shí)測量各該分析物的關(guān)聯(lián)和相應(yīng)解離，該分析物分別以升序濃度測量：1.23-3.7-11.11-33.33-100-300微摩爾/升。結(jié)果：物質(zhì)解離常數(shù)kd氯丙嗪770乙酰丙嗪725-苯基-2′-脫氧尿苷602-(3-羥甲基-苯基氨基)-3，7-二氫嘌呤-6-酮7102-(4-丁基-苯基氨基)-9-(2-羥基-乙氧基甲基)-1，9-二氫嘌呤-6-酮159h-呫噸-9-羧酸[4-(5-甲基-2，4-二氧代-3，4-二氫-2h-嘧啶-1-基)-丁-2-烯基]-酰胺2672-聯(lián)苯-4-基-n-[4-(5-甲基2l4二氧代-3，4-二氫-2h-嘧啶-1-基)-丁-2-烯基]-乙酰胺424例11-使用乙酰丙嗪抑制腫瘤細(xì)胞系rpmi-8226的抗性發(fā)展細(xì)胞系rpmi-8226(dmsz402)是一個(gè)“多發(fā)性骨髓瘤”細(xì)胞系，因?yàn)榕鹛孀裘妆挥脕碜鳛槎喟l(fā)性骨髓瘤的標(biāo)準(zhǔn)治療而被選用，rpmi-8226細(xì)胞響應(yīng)硼替佐米，表達(dá)hsp27，且可相對(duì)于萬珂發(fā)展抗性。rpmi-8226細(xì)胞，分別以100,000個(gè)細(xì)胞/毫升的細(xì)胞數(shù)量接種，并定期傳代。圖4a示出，相比于使用細(xì)胞生長抑制劑硼替佐米，使用0.75微摩爾/升的乙酰丙嗪處理，其抗性發(fā)展被顯著抑制了，且測試結(jié)束時(shí)只有檢測出每毫升30.000個(gè)培養(yǎng)基的活細(xì)胞。相比之下，以30微摩爾/升的bvdu處理的rpmi-8226細(xì)胞則被檢測出160.000個(gè)細(xì)胞/毫升的最終細(xì)胞數(shù)量，而最終的細(xì)胞數(shù)量，在未添加hsp27抑制劑的培養(yǎng)中，將達(dá)350.000個(gè)細(xì)胞/毫升。為達(dá)控制目的，將rpmi-8226細(xì)胞分別與相應(yīng)測試物質(zhì)單獨(dú)處理，參見圖4b。在相同的劑量下，該測試物質(zhì)不單獨(dú)影響細(xì)胞生長，因?yàn)樵跊]有細(xì)胞生長抑制劑壓力下，癌細(xì)胞對(duì)于hsp27并無大量的需求。例12-使用氯丙嗪抑制腫瘤細(xì)胞系rpmi-8226的抗性發(fā)展rpmi-8226細(xì)胞，分別以100,000個(gè)細(xì)胞/毫升的細(xì)胞數(shù)量接種，并定期傳代。圖5a示出，相比于使用細(xì)胞生長抑制劑硼替佐米，使用0.5微摩爾/升的氯丙嗪處理，其抗性發(fā)展被顯著抑制了，且測試結(jié)束時(shí)只有檢測出每毫升70.000個(gè)培養(yǎng)基的活細(xì)胞。相比之下，以30微摩爾/升的bvdu處理的rpmi-8226細(xì)胞則被檢測出160.000個(gè)細(xì)胞/毫升的最終細(xì)胞數(shù)量，而最終的細(xì)胞數(shù)量，在未添加hsp27抑制劑的培養(yǎng)中，將達(dá)350.000個(gè)細(xì)胞/毫升。為達(dá)控制目的，將rpmi-8226細(xì)胞分別與相應(yīng)測試物質(zhì)單獨(dú)處理，參見圖5b。在相同的劑量下，該測試物質(zhì)不單獨(dú)影響細(xì)胞生長。例13-使用2-(4-丁基-苯基氨基)-9-(2-羥基-乙氧基甲基)-1，9-二氫嘌呤-6-酮抑制腫瘤細(xì)胞系rpmi-8226的抗性發(fā)展rpmi-8226細(xì)胞，分別以100,000個(gè)細(xì)胞/毫升的細(xì)胞數(shù)量接種，并定期傳代。圖6a示出，相比于使用細(xì)胞生長抑制劑硼替佐米，使用1微摩爾/升的2-(4-丁基-苯基氨基)-9-(2-羥基-乙氧基甲基)-1，9-二氫嘌呤-6-酮處理，其抗性發(fā)展被顯著抑制了，且測試結(jié)束時(shí)只有檢測出每毫升240.000個(gè)培養(yǎng)基的活細(xì)胞。相比之下，以30微摩爾/升的bvdu處理的rpmi-8226細(xì)胞則被檢測出290.000個(gè)細(xì)胞/毫升的最終細(xì)胞數(shù)量，而最終的細(xì)胞數(shù)量，在未添加hsp27抑制劑的培養(yǎng)中，將達(dá)950.000個(gè)細(xì)胞/毫升。為達(dá)控制目的，將rpmi-8226細(xì)胞分別與相應(yīng)測試物質(zhì)單獨(dú)處理，參見圖6b。在相同的劑量下，該測試物質(zhì)不單獨(dú)影響細(xì)胞生長。例14-使用2-(3-氯乙烯基-苯基氨基)-1，9-二氫嘌呤-6-酮抑制腫瘤細(xì)胞系rpmi-8226的抗性發(fā)展rpmi-8226細(xì)胞，分別以100,000個(gè)細(xì)胞/毫升的細(xì)胞數(shù)量接種，并定期傳代。圖7a示出，相比于使用細(xì)胞生長抑制劑硼替佐米，使用1微摩爾/升的2-(3-氯乙烯基-苯基氨基)-1，9-二氫嘌呤-6-酮處理，其抗性發(fā)展被顯著抑制了，且測試結(jié)束時(shí)只有檢測出每毫升270.000個(gè)培養(yǎng)基的活細(xì)胞。相比之下，以30微摩爾/升的bvdu處理的rpmi-8226細(xì)胞則被檢測出290.000個(gè)細(xì)胞/毫升的最終細(xì)胞數(shù)量，而最終的細(xì)胞數(shù)量，在未添加hsp27抑制劑的培養(yǎng)中，將達(dá)950.000個(gè)細(xì)胞/毫升。為達(dá)控制目的，將rpmi-8226細(xì)胞分別與相應(yīng)測試物質(zhì)單獨(dú)處理，參見圖7b。在相同的劑量下，該測試物質(zhì)不單獨(dú)影響細(xì)胞生長。例15-使用9h-呫噸-9-羧酸[4-(5-甲基-2，4-二氧代-3，4-二氫-2h-嘧啶-1-基)-丁-2-烯基]-酰胺抑制腫瘤細(xì)胞系rpmi-8226的抗性發(fā)展rpmi-8226細(xì)胞，分別以100,000個(gè)細(xì)胞/毫升的細(xì)胞數(shù)量接種，并定期傳代。圖8a示出，相比于使用細(xì)胞生長抑制劑硼替佐米，使用1微摩爾/升的9h-呫噸-9-羧酸[4-(5-甲基-2，4-二氧代-3，4-二氫-2h-嘧啶-1-基)-丁-2-烯基]-酰胺處理，其抗性發(fā)展被顯著抑制了，且測試結(jié)束時(shí)只有檢測出每毫升290.000個(gè)培養(yǎng)基的活細(xì)胞。相比之下，以30微摩爾/升的bvdu處理的rpmi-8226細(xì)胞則被檢測出340.000個(gè)細(xì)胞/毫升的最終細(xì)胞數(shù)量，而最終的細(xì)胞數(shù)量，在未添加hsp27抑制劑的培養(yǎng)中，將達(dá)510.000個(gè)細(xì)胞/毫升。為達(dá)控制目的，將rpmi-8226細(xì)胞分別與相應(yīng)測試物質(zhì)單獨(dú)處理，參見圖8b。在相同的劑量下，該測試物質(zhì)不單獨(dú)影響細(xì)胞生長。例16-使用2-聯(lián)苯-4-基-n-[4-(5-甲基-2，4-二氧代-3，4-二氫-2h-嘧啶-1-基)-丁-2-烯基]-乙酰胺抑制腫瘤細(xì)胞系rpmi-8226的抗性發(fā)展rpmi-8226細(xì)胞，分別以100,000個(gè)細(xì)胞/毫升的細(xì)胞數(shù)量接種，并定期傳代。圖9a示出，相比于使用細(xì)胞生長抑制劑硼替佐米，使用1微摩爾/升的2-聯(lián)苯-4-基-n-[4-(5-甲基-2，4-二氧代-3，4-二氫-2h-嘧啶-1-基)-丁-2-烯基]-乙酰胺處理，其抗性發(fā)展被顯著抑制了，且測試結(jié)束時(shí)只有檢測出每毫升380.000個(gè)培養(yǎng)基的活細(xì)胞。相比之下，以30微摩爾/升的bvdu處理則被檢測出340.000個(gè)細(xì)胞/毫升的最終細(xì)胞數(shù)量，而最終的細(xì)胞數(shù)量，在未添加hsp27抑制劑的培養(yǎng)中，將達(dá)510.000個(gè)細(xì)胞/毫升。為達(dá)控制目的，將rpmi-8226細(xì)胞分別與相應(yīng)測試物質(zhì)單獨(dú)處理，參見圖9b。在相同的劑量下，該測試物質(zhì)不單獨(dú)影響細(xì)胞生長。例17-使用乙酰丙嗪抑制腫瘤細(xì)胞系u-937的抗性發(fā)展細(xì)胞系u-937是一種組織細(xì)胞淋巴瘤(dsmzacc5)，該細(xì)胞系也響應(yīng)硼替佐米治療、表達(dá)hsp27并對(duì)于硼替佐米產(chǎn)生抗性，硼替佐米并非該淋巴瘤的標(biāo)準(zhǔn)治療，但可作為極有潛力的治療方式來討論。u-937細(xì)胞，分別以100,000個(gè)細(xì)胞/毫升的細(xì)胞數(shù)量接種，并定期傳代。圖10a示出，相比于使用細(xì)胞生長抑制劑硼替佐米，使用0.75微摩爾/升的乙酰丙嗪處理，其抗性發(fā)展被顯著抑制了，且測試結(jié)束時(shí)只有檢測出每毫升70.000個(gè)培養(yǎng)基的活細(xì)胞。相比之下，以30微摩爾/升的bvdu處理則被檢測出250.000個(gè)細(xì)胞/毫升的最終細(xì)胞數(shù)量，而最終的細(xì)胞數(shù)量，在未添加hsp27抑制劑的培養(yǎng)中，將達(dá)450.000個(gè)細(xì)胞/毫升。為達(dá)控制目的，將u-937細(xì)胞分別與相應(yīng)測試物質(zhì)單獨(dú)處理，參見圖10b。在相同的劑量下，該測試物質(zhì)不單獨(dú)影響細(xì)胞生長。例18-使用2-(4-丁基-苯基氨基)-9-(2-羥基-乙氧基甲基)-1，9-二氫嘌呤-6-酮抑制腫瘤細(xì)胞系u-937的抗性發(fā)展u-937細(xì)胞，分別以100,000個(gè)細(xì)胞/毫升的細(xì)胞數(shù)量接種，并定期傳代。圖11a示出，相比于使用細(xì)胞生長抑制劑硼替佐米，使用0.75微摩爾/升的2-(4-丁基-苯基氨基)-9-(2-羥基-乙氧基甲基)-1，9-二氫嘌呤-6-酮處理，其抗性發(fā)展被顯著抑制了，且測試結(jié)束時(shí)只有檢測出每毫升30.000個(gè)培養(yǎng)基的活細(xì)胞。相比之下，以30微摩爾/升的bvdu處理則被檢測出250.000個(gè)細(xì)胞/毫升的最終細(xì)胞數(shù)量，而最終的細(xì)胞數(shù)量，在未添加hsp27抑制劑的培養(yǎng)中，將達(dá)450.000個(gè)細(xì)胞/毫升。為達(dá)控制目的，將u-937細(xì)胞分別與相應(yīng)測試物質(zhì)單獨(dú)處理，參見圖11b。在相同的劑量下，該測試物質(zhì)不單獨(dú)影響細(xì)胞生長。參考書目straumeo，shimamurat，lampamj，carreteroj，0yanam，jiad，borgmancl，soucher-aym，downingsr，shortsm，kangsy，wangs，chenl，collettk，bachmanni，wongkk，shapirogl，kailandkh，folkmanj，watnickrs，akslenla，naumovgn.(2012)suppres-sionofheatshockprotein27induceslong-termdormancyinhumanbreastcancer.procnatlacadseiusa.2012may29；109(22)：8699-704.jakobu，gaestelm，engelk，andbuchnerj.(1993)smaiiheatshockproteinsaremolecu-larchaperones.jbiolchem268(3)：1517-1520.muckenschnabeli，falchettor，mayrlm，filipuzzil.(2004)speedscreen：label-freeliquidchromatography-massspectrometry-basedhigh-throughputscreeningforthediscoveryoforphanproteinligands.analbiochem.2004jan15；324(2)：241-9.chauhand，lig，auclaird，hideshimat，podark，mitsiadesn，mitsiadesc，chenlb，munshin，saxenas，andersonkc.(2004)2-methoxyestardiolandbortezomib/proteasome-inhibitorovercomedexamethasone-resistanceinmultiplemyelomacellsbymodulatingheatshockprotein-27.apoptosis.2004mar；9(2)：149-55.當(dāng)前第1頁12