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生產(chǎn)具有改性糖基化重組糖蛋白的方法與流程

文檔序號(hào):12070524閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種基因工程宿主動(dòng)物細(xì)胞,其表達(dá)巖藻糖苷酶、糖苷內(nèi)切酶或二者,其特征在于,所述基因工程宿主動(dòng)物細(xì)胞生產(chǎn)具有改性糖基化的糖蛋白。

2.如權(quán)利要求1所述的基因工程宿主動(dòng)物細(xì)胞,其特征在于,所述巖藻糖苷酶為哺乳動(dòng)物巖藻糖苷酶或細(xì)菌巖藻糖苷酶。

3.如權(quán)利要求1或2所述的基因工程宿主動(dòng)物細(xì)胞,其特征在于,所述糖苷內(nèi)切酶是Endo S酶。

4.如權(quán)利要求1-3中任一所述的基因工程宿主動(dòng)物細(xì)胞,其特征在于,所述基因工程宿主動(dòng)物細(xì)胞還表達(dá)糖蛋白。

5.如權(quán)利要求4所述的基因工程宿主動(dòng)物細(xì)胞,其特征在于,所述糖蛋白是外源性的。

6.如權(quán)利要求4或5所述的基因工程宿主動(dòng)物細(xì)胞,其特征在于,所述糖蛋白為抗體、Fc融合蛋白、細(xì)胞因子、激素、生長(zhǎng)因子或酶。

7.如權(quán)利要求6所述的基因工程宿主動(dòng)物細(xì)胞,其特征在于,所述糖蛋白為抗體。

8.如權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)所述的基因工程宿主動(dòng)物細(xì)胞,其特征在于,所述動(dòng)物細(xì)胞為哺乳動(dòng)物細(xì)胞。

9.如權(quán)利要求8所述的基因工程宿主動(dòng)物細(xì)胞,其特征在于,所述哺乳動(dòng)物細(xì)胞為中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(CHO)細(xì)胞、大鼠骨髓瘤細(xì)胞、幼倉(cāng)鼠腎(BHK)細(xì)胞、雜交瘤細(xì)胞、拿馬瓦細(xì)胞、胚胎干細(xì)胞或受精卵。

10.如權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)所述的基因工程宿主動(dòng)物細(xì)胞,其特征在于,所述基因工程宿主動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)巖藻糖苷酶和糖苷內(nèi)切酶二者。

11.如權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)所述的基因工程宿主動(dòng)物細(xì)胞,其特征在于,所述基因工程宿主動(dòng)物細(xì)胞表達(dá):(i)人類FUCA1、人類FUCA2、灰倉(cāng)鼠(Cricetulus griseus)巖藻糖苷酶α-L-1、腦膜膿毒性金黃桿菌(Chryseobacterium meningosepticum)α-1,6-巖藻糖苷酶、或細(xì)菌巖藻糖苷酶BF3242;和(i i)EndoS。

12.一種生產(chǎn)去巖藻糖基化糖蛋白的方法,包括:

提供基因工程宿主動(dòng)物細(xì)胞,其表達(dá)(a)糖蛋白,以及(b)巖藻糖苷酶、糖苷內(nèi)切酶或二者;

培養(yǎng)所述宿主動(dòng)物細(xì)胞,在容許生產(chǎn)所述糖蛋白以及所述巖藻糖苷酶、糖苷內(nèi)切酶或二者的條件下進(jìn)行;以及

收集所述宿主動(dòng)物細(xì)胞或培養(yǎng)上清液以分離所述糖蛋白。

13.如權(quán)利要求12所述的方法,其特征在于,所述巖藻糖苷酶為哺乳動(dòng)物巖藻糖苷酶或細(xì)菌巖藻糖苷酶。

14.如權(quán)利要求12或13所述的方法,其特征在于,所述糖苷內(nèi)切酶是Endo S酶。

15.如權(quán)利要求11-14中任一項(xiàng)所述的方法,其特征在于,所述糖蛋白是外源性的。

16.如權(quán)利要求15所述的方法,其特征在于,所述糖蛋白為抗體、Fc融合蛋白、細(xì)胞因子、激素、生長(zhǎng)因子或酶。

17.如權(quán)利要求16所述的方法,其特征在于,所述糖蛋白為抗體。

18.如權(quán)利要求12-17中任一項(xiàng)所述的方法,其特征在于,所述基因工程宿主細(xì)胞為哺乳動(dòng)物細(xì)胞。

19.如權(quán)利要求18所述的方法,其特征在于,所述哺乳動(dòng)物細(xì)胞為中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(CHO)細(xì)胞、大鼠骨髓瘤細(xì)胞、幼倉(cāng)鼠腎(BHK)細(xì)胞、雜交瘤細(xì)胞、拿馬瓦細(xì)胞、胚胎干細(xì)胞或受精卵。

20.如權(quán)利要求12-19中任一項(xiàng)所述的方法,其特征在于,所述基因工程宿主細(xì)胞表達(dá)巖藻糖苷酶和糖苷內(nèi)切酶二者。

21.如權(quán)利要求12-20中任一項(xiàng)所述的方法,其特征在于,所述方法還包括分離所述糖蛋白。

22.如權(quán)利要求12-21中任一項(xiàng)所述的方法,其特征在于,所述方法還包括分析所述糖蛋白的糖基化模式。

23.一種制備權(quán)利要求1所述基因工程宿主動(dòng)物細(xì)胞的方法,包括將同時(shí)編碼巖藻糖苷酶、糖苷內(nèi)切酶或兩者的一種或多種表達(dá)載體導(dǎo)入所述動(dòng)物細(xì)胞。

24.如權(quán)利要求23所述的方法,其特征在于,所述方法還包括將編碼糖蛋白的表達(dá)載體導(dǎo)入所述動(dòng)物細(xì)胞。

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