本發(fā)明涉及竹葉青酒中的生物活性成分和保健作用，特別的涉及竹葉青酒中具有免疫調(diào)節(jié)活性、抗氧化、抗炎、保護(hù)肝臟損傷的生物活性成分。

背景技術(shù)：
竹葉青酒是我國傳統(tǒng)歷史名酒，也是中國載譽(yù)最高且最多的保健酒。它是以中國清香型名酒——汾酒為基酒，以竹葉、當(dāng)歸、陳皮、梔子、砂仁、檀香、丁香等十余味名貴中藥材的浸泡液和冰糖配制而成的一種露酒。該酒具備有養(yǎng)血、和胃、消食、除煩等功效。常年適量飲用，可以調(diào)和臟腑、疏氣養(yǎng)血、消火消痰、解毒利尿、健脾滋肝。不僅可以保健身體，還可以防治關(guān)節(jié)炎、高血壓、高血脂等疾病。近年來，隨著消費(fèi)者健康保健意識的不斷增強(qiáng)，對于保健食品的特殊功效成分及其保健作用，也越來越引起人們的關(guān)注。因此，對竹葉青酒中生物活性成分進(jìn)行系統(tǒng)深入的研究，嘗試發(fā)掘、探討其特有的保健功能作用，具有重要的理論意義和實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的：系統(tǒng)科學(xué)的研究竹葉青酒中的化學(xué)成分，尋找新的活性單體化合物。發(fā)明的實(shí)現(xiàn)過程如下：運(yùn)用各種分離手段包括硅膠柱色譜、大孔吸附樹脂、聚酰胺、葡聚糖凝膠LH-20柱色譜和制備型高效液相色譜法等，從竹葉青酒中分離得到96個(gè)化合物，其中16個(gè)萜類化合物，10個(gè)環(huán)烯醚萜類化合物，25個(gè)黃酮及黃酮苷類化合物，3個(gè)色原酮類化合物，15個(gè)酚酸及酚苷類化合物，14個(gè)芳香類化合物，1個(gè)奎尼酸類，2個(gè)香豆素類，2個(gè)木脂素類，3個(gè)甾體類，2個(gè)長鏈脂肪酸類，2個(gè)糠醛類，1個(gè)呋喃酮類。其中化合物1、2、3、4、5、14、16、53為新的化學(xué)成分。這些化合物其化學(xué)名稱及結(jié)構(gòu)式如下：化合物1：(1R,10S,11R)-10,11-二甲基-4-醛基-2,9-二氧代-二環(huán)[5.4.0]十一-4,6-二烯-3-酮，[(1R,10S,11R)-10,11-dimethyl-4-formyl-2,9-dioxa-bicyclo[5.4.0]undeca-4,6-dien-3-one]，具有結(jié)構(gòu)式1所示結(jié)構(gòu)?；衔?：6-(6-(3,4-二甲氧基)苯丙烯酰基-β-D-葡萄糖基)-O-β-D-葡萄糖甲苷[methyl-6-(6-(3,4-dimethoxy)-benzalacryloyl-β-D-glucosyl)-O-β-D-glucopyranoside]，具有結(jié)構(gòu)式2所示結(jié)構(gòu)?；衔?：(4-羥基-2,6,6-三甲基)-環(huán)己烯甲酸-4-羥基-(苯甲酸)酯[Picrocrocinicester]，具有結(jié)構(gòu)式3所示結(jié)構(gòu)?；衔?：(7R)-6’-O-(3”-甲氧基-4”-羥基-苯丙烯?；?-β-D-葡萄糖-1’-O-7-羥甲基-(6-羥甲基-1,1-二甲基環(huán)己-4-烯-3-酮)苷[6'-O-(3-methoxyl-4-hydroxyl-coumaroyl)-epijasminosideB]，具有結(jié)構(gòu)式4所示結(jié)構(gòu)?；衔?：(4R)-3-羥甲基-4-羥甲基-5,5-二甲基環(huán)己-2-烯酮-β-D-葡萄糖苷[epijasminosideB]，具有結(jié)構(gòu)式5所示結(jié)構(gòu)。化合物14：(5R)-(2E)-5-羥基-2-甲基-戊-2-烯-1,6-二酮[(5R)-(2E)-5-hydroxy-2-methyl-hepta-2-ene-1,6-dione]，具有結(jié)構(gòu)式6所示結(jié)構(gòu)。化合物16：6″-O-反式-對-甲氧基-苯丙烯基京尼平龍膽二糖苷[6″-O-trans-p-methoxyl-coumaroylgenipingentiobioside]，具有結(jié)構(gòu)式7所示結(jié)構(gòu)。化合物53：7-甲氧基-異雙花母草素[7-methoxyl-isobiflorin]，具有結(jié)構(gòu)式8所示結(jié)構(gòu)。本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供本發(fā)明所涉及的竹葉青酒，從竹葉青酒中分離得到的化合物的醫(yī)藥用途。本發(fā)明經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn)，竹葉青酒，從竹葉青酒中分離得到的化合物具有抗氧化，抗炎，免疫增強(qiáng)，保護(hù)肝臟作用?？梢杂糜谥苽漕A(yù)防和治療具有上述功效的藥物或保健食品。本發(fā)明還提供含有竹葉青酒或從竹葉青酒中分離得到的化合物的藥物或保健食品組合物，以適合應(yīng)用。所述的藥物組合物其適合的形式包括任何一種適宜服用的制劑形式，如本發(fā)明的藥物組合物，在使用時(shí)可以根據(jù)需要制備成藥物制劑形式，如口服制劑形式，注射劑形式，外用制劑形式，栓劑形式等。所述保健食品組合物，包括但不限于以下食品形式：飲料、乳制品、面包、糕點(diǎn)、糖果等。優(yōu)選的，本發(fā)明提供上述8種化合物，它們的制備，以及它們在制備藥物或保健食品中的應(yīng)用。本發(fā)明經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn)，竹葉青酒具有抗氧化，抗炎，免疫增強(qiáng)，保護(hù)肝臟作用，其中萜類，環(huán)烯醚萜類，黃酮類及酚酸類化合物為其主要有效成分。生物活性研究表明，化合物1-98中任一化合物具有抗氧化、抗炎、清除自由基、抗膽堿酯酶、免疫增強(qiáng)、保護(hù)肝臟作用，是竹葉青酒發(fā)揮保健功能的物質(zhì)基礎(chǔ)。發(fā)明的實(shí)現(xiàn)過程如下：建立不同損傷機(jī)制的急性肝損傷模型(化學(xué)性肝損傷模型、免疫性肝損傷模型、酒精性肝損傷模型、藥物性肝損傷模型)，對竹葉青酒進(jìn)行了肝保護(hù)作用的研究。建立免疫力低下模型，研究竹葉青酒的免疫調(diào)節(jié)活性。采用酒精誘導(dǎo)HepaG2細(xì)胞損傷，篩選肝細(xì)胞保護(hù)成分。采用LPS誘導(dǎo)RAW264.7研究竹葉青酒中化合物的抗炎活性。對竹葉青酒中分得化合物進(jìn)行膽堿酯酶活性的篩選。附圖說明圖1化合物1的CD和UV圖譜圖2化合物2的CD和UV圖譜圖3化合物3的CD和UV圖譜圖4化合物4的CD和UV圖譜圖5化合物7的CD和UV圖譜圖6CCl4所致的小鼠急性肝損傷的肝組織病理變化HE染色(100×).(A)正常組；(B)CCl4模型組；(C)-(F)分別為竹葉青母液A-D劑量組圖7TAA所致的小鼠急性肝損傷的肝組織病理變化HE染色(100×).(A)正常組；(B)TAA模型組；(C)-(F)分別為竹葉青母液A-D劑量組；(G)復(fù)方益肝靈組(200mg/kg)圖8酒精所致的小鼠急性肝損傷的肝組織病理變化HE染色(×100).(A)正常組；(B)酒精模型組；(C)-(F)分別為竹葉青酒母液A-D劑量組；(G)為聯(lián)苯雙酯組(150mg/kg)圖9酒精所致的小鼠急性肝損傷肝組織TNF-α表達(dá)(×200).(A)正常組；(B)酒精模型組；(C)-(F)分別為竹葉青酒母液A-D劑量組；(G)為聯(lián)苯雙酯組(150mg/kg)圖10酒精所致的小鼠急性肝損傷肝組織Fas表達(dá)(×200).(A)正常組；(B)酒精模型組；(C)-(F)分別為竹葉青酒母液A-D劑量組；(G)為聯(lián)苯雙酯組(150mg/kg)圖11酒精所致的小鼠急性肝損傷肝組織FasL表達(dá)(×200).(A)正常組；(B)酒精模型組；(C)-(F)分別為竹葉青酒母液A-D劑量組；(G)為聯(lián)苯雙酯組(150mg/kg)圖12酒精所致的小鼠急性肝損傷肝組織Bcl-2表達(dá)(×200).(A)正常組；(B)酒精模型組；(C)-(F)分別為竹葉青酒母液A-D劑量組；(G)為聯(lián)苯雙酯組(150mg/kg)圖13酒精所致的小鼠急性肝損傷肝組織Bax表達(dá)(×200).(A)正常組；(B)酒精模型組；(C)-(F)分別為竹葉青酒母液A-D劑量組；(G)為聯(lián)苯雙酯組(150mg/kg)圖14竹葉青酒的提取流程圖圖15竹葉青酒HPD10060％乙醇洗脫部分分離流程圖圖16竹葉青酒氯仿和乙酸乙酯萃取部分分離流程圖圖17化合物1的HMBC相關(guān)圖圖18A化合物1的相對構(gòu)型圖，圖18B化合物1的相對構(gòu)型圖圖19A化合物2的HMBC圖，圖19B化合物2的NOEs圖圖20，A為化合物3的HMBC相關(guān)圖，B為化合物3的HMBC相關(guān)圖，C為化合物3的HMBC相關(guān)圖圖21，A為化合物4的HMBC相關(guān)圖，B為化合物4的HMBC相關(guān)圖圖22，A為化合物5的HMBC相關(guān)圖，B為化合物5的HMBC相關(guān)圖圖23化合物14的HMBC相關(guān)圖圖24化合物16的HMBC相關(guān)圖具體實(shí)施方式以下通過實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明，但不作為對本發(fā)明的限制。實(shí)施例1：化合物的分離取竹葉青酒母液，濃縮揮去醇后，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取，分別萃取5遍，回收各萃取層溶劑，得各萃取層浸膏：石油醚層100g，氯仿層56g，乙酸乙酯層100g。萃取后的水層用HPD100大孔吸附樹脂進(jìn)行處理，依次用水、60％乙醇、95％乙醇進(jìn)行洗脫，其中水洗部分棄掉，分別回收60％乙醇、95％乙醇洗脫部分得浸膏：60％乙醇洗脫部分200g，95％乙醇洗脫部分20g。提取分離流程見圖14。將氯仿層、乙酸乙酯層樣品合并，取合并后樣品100g，利用反復(fù)硅膠柱色譜、聚酰胺、SephadexLH-20、和HPLC等手段分離共得到50個(gè)化合物；取HPD100大孔吸附樹脂60％EtOH洗脫部分樣品100g，利用硅膠柱色譜、開放ODS和HPLC等手段分離得到48個(gè)化合物。分離流程見圖15,16。其中本發(fā)明的8個(gè)新化合物，化合物1、2、3、4、5、14、16、53具體的分離方法描述如下：乙酸乙酯萃取部位(100g)以石油醚/丙酮(100:0-0:100)為洗脫溶劑進(jìn)行硅膠柱層析(350g，200-300目，9×160cm)，得洗脫流份A-O。流份I(石油醚/丙酮,100:15，2.3g)及流份M(石油醚/丙酮，100:50，3.0g)合并進(jìn)行半制備HPLC分離(乙腈/水，15/85)得化合物3(18mg)。60％乙醇洗脫部位(100g)以氯仿/甲醇(100:0-0:100)為洗脫溶劑進(jìn)行硅膠柱層析(350g，200-300目，9×160cm)，得洗脫流份a-m。流份b(氯仿/甲醇，100:0.5，70mg)以石油醚/丙酮進(jìn)行硅膠柱層析，得流份b1-b3。流份b2進(jìn)行半制備HPLC分離(甲醇/水，4/96)得化合物6(3.0mg)。流份c(氯仿/甲醇，100:2，2.0g)進(jìn)行半制備HPLC分離(乙腈/水，6/94)得化合物1(5.1mg)。流份e(氯仿/甲醇，100:3及100:5)以甲醇/水(15:85-40:60，v/v)進(jìn)行ODS梯度洗脫得五個(gè)部分，e1-e5。流份e1(甲醇/水，15:85，38.9mg)進(jìn)行半制備HPLC分離(乙腈/水，20/80)得化合物2(3.5mg)。流份f(氯仿/甲醇，100:8，3.0g)以甲醇/水(5:95-50:50，v/v)進(jìn)行ODS梯度洗脫得六個(gè)部分f1-f6。流份f2(甲醇/水，10:90，52.6mg)進(jìn)行半制備HPLC分離(乙腈/水，5/95)得化合物4(4.2mg)，化合物5(3.0mg)和化合物8(8.5mg)。流份g(氯仿/甲醇，100:12)以氯仿/甲醇為洗脫溶劑進(jìn)行硅膠柱層析得三個(gè)流份g1-g3。流份g2進(jìn)行半制備HPLC分離(乙腈/水，21/79)得化合物7(4.5mg)。實(shí)施例2：化學(xué)結(jié)構(gòu)鑒定利用1維、2維核磁共振譜(1D,2D-NMR)、質(zhì)譜(MS)、圓二色譜(CD)等光譜手段以及其他物理化學(xué)方法確定了分離得到的96個(gè)化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)。其中包括的8個(gè)新化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)和鑒定手段如表1：表1竹葉青酒中的96個(gè)化合物(其中包括8個(gè)新化合物)的結(jié)構(gòu)及其鑒定方法*為新化合物實(shí)施例3：化合物1的化學(xué)結(jié)構(gòu)鑒定黃色透明固體(甲醇)，溶于甲醇。HR-ESI-TOF-MS譜給出高分辨準(zhǔn)分子離子峰m/z223.0973[M+H]+(Calcd.223.0970,1.3ppm)。結(jié)合其NMR數(shù)據(jù)，確定其分子式C12H14O4，并計(jì)算出該化合物含有6個(gè)不飽和度。1HNMR譜(600MHz,CD3OD)，低場區(qū)給出2個(gè)烯氫質(zhì)子信號δ6.35(1H,d,J＝4.2Hz)，7.15(1H,d,J＝4.2Hz)；1個(gè)活潑氫質(zhì)子信號δ9.33(1H,s)。高場區(qū)給出2個(gè)連氧叔碳質(zhì)子信號δ5.23(1H,d,J＝11.4Hz)，4.34(1H,dq,J＝3.0,6.0Hz)；1個(gè)連氧仲碳質(zhì)子信號δ4.65(2H,s)；1叔碳質(zhì)子信號δ2.65(1H,m)，兩個(gè)甲基質(zhì)子信號δ1.13(3H,d,J＝6.0Hz)，1.55(3H,d,J＝6.0Hz)。13CNMR譜(150MHz,CD3OD)中給出12個(gè)碳信號，低場區(qū)給出6個(gè)sp2雜化的碳信號，其中δ180.5處給出一醛基碳信號，δ174.6處為一成酯的羰基碳信號。δ111.9，128.3，133.4，146.3處給出兩個(gè)雙鍵碳信號。高場區(qū)δ82.3，63.8處給出兩個(gè)連氧次甲基碳信號，δ56.8處給出1個(gè)連氧亞甲基碳信號，δ45.3處給出1個(gè)次甲基碳信號，δ14.7，18.8處給出兩個(gè)甲基碳信號。在HMBC譜中(圖17)，由δ1.13(3H,d,J＝6.0Hz)，1.55(3H,d,J＝6.0Hz)分別與δ45.3，63.8，82.3存在相關(guān)，δ4.34(1H,dt,J＝3.0,6.6Hz)與δ14.7相關(guān)，δ2.65(1H,m)與δ14.7，18.8，63.8，82.3相關(guān)，說明14.7的甲基連在82.3的連氧叔碳上，18.8的甲基連在45.3的叔碳上。由δ4.65(2H,s)與δ111.9，146.3有遠(yuǎn)程相關(guān)，δ5.23(1H,d,J＝11.4Hz)與δ14.7，45.3，133.4，146.3，174.6相關(guān)，δ6.35(1H,d,J＝4.2Hz)與δ56.8，128.3，133.4，146.3相關(guān)，δ7.15(1H,d,J＝4.2Hz)與δ111.9，133.4，146.3，180.5相關(guān)，可得出該化合物的平面結(jié)構(gòu)如圖1。另外，根據(jù)H-10/H-11的偶合常數(shù)為J＝11.4Hz，H10/H-9的偶合常數(shù)為J＝3.0Hz，并利用計(jì)算機(jī)模擬結(jié)構(gòu)最小能量(CSChem3DProVersion8.0,MM2minimizeenergycaculate)計(jì)算，可得出該化合物的相對構(gòu)型如圖18,命名為10,11-二甲基-4-醛基-2,9-二氧代-二環(huán)[5.4.0]十一-4,6-二烯-3-酮。在CD譜(見附圖1)中，根據(jù)不飽和內(nèi)酯的螺旋規(guī)則，化合物1在306nm處呈現(xiàn)正cotton效應(yīng)，260nm處呈現(xiàn)負(fù)cotton效應(yīng)，可判斷符合P-螺旋，故判斷1位為R型，確定化合物1的絕對構(gòu)型為(1R,10S,11R)。經(jīng)系統(tǒng)文獻(xiàn)檢索，為未見文獻(xiàn)報(bào)道的新化合物，其結(jié)構(gòu)為(1R,10S,11R)-10,11-二甲基-4-醛基-2,9-二氧代-二環(huán)[5.4.0]十一-4,6-二烯-3-酮。表2化合物1的1HNMR(600MHzinCD3OD),13CNMR(150MHzinCD3OD)及HMBC數(shù)據(jù)實(shí)施例4：化合物2的化學(xué)結(jié)構(gòu)鑒定白色粉末(甲醇)，易溶于甲醇，不溶于石油醚，乙酸乙酯，氯仿。HR-ESI-TOF-MS譜給出高分辨準(zhǔn)分子離子峰m/z545.1877[M-H]-(Calcd.545.1870,0.5ppm)。結(jié)合其NMR數(shù)據(jù)，確定其分子式為C24H34O14，并計(jì)算出該化合物含有8個(gè)不飽和度。1HNMR譜(400MHz,CD3OD)中給出1組1″′,3″′,4″′-三取代苯環(huán)質(zhì)子信號δ6.90(2H,s,H-2″′,6″′)、δ7.48(1H,s,H-5″′)，2個(gè)與羧基共軛的反式雙鍵質(zhì)子信號δ6.38(1H,d,J＝16.0Hz,H-α)、δ7.59(1H,d,J＝16.0Hz,H-β)，3個(gè)甲氧基質(zhì)子信號δ3.71(3H,s)，δ3.88(3H,s)，δ3.86(3H,s)，由β-D-葡萄糖端基質(zhì)子信號δ4.98(1H,d,J＝8.0Hz,glc-1)和?；钠咸烟?位質(zhì)子信號δ4.26(1H,br.d,J＝14.4Hz,glc-6)，δ4.18(1H,br.d,J＝14.4Hz,glc-6)及由另一個(gè)β-D-葡萄糖端基質(zhì)子信號δ4.71(1H,d,J＝8.0Hz,glc-1)和向低場位移的葡萄糖6位質(zhì)子信號δ4.47(1H,dd,J＝11.2,6.0Hz,glc-6)，δ4.39(1H,dd,J＝11.2,2.4Hz,glc-6)，推測該葡萄糖6位被葡萄糖基取代，并且形成甲苷。13CNMR譜(100MHz,CD3OD)中給出共有24個(gè)碳信號，低場顯示9個(gè)sp2雜化的碳信號，其中δC168.9為羰基碳信號。結(jié)合1HNMR譜推測其中11個(gè)碳信號顯示為3″′,4″′-二甲氧基苯丙烯酰結(jié)構(gòu)骨架，其余13個(gè)碳信號顯示為兩個(gè)β-D-葡萄糖上的碳信號和一個(gè)甲氧基的碳信號。由HSQC光譜可知δC51.9(C-1)，57.0(C-3″′)，57.0(C-4″′)為三個(gè)甲氧基碳信號，δC61.9(C-6″)，64.2(C-6')兩個(gè)仲碳信號分別為兩個(gè)β-D-葡萄糖上的六位碳信號，δC100.6(C-1'),99.4(C-1″)兩個(gè)叔碳信號分別為兩個(gè)β-D-葡萄糖上的端基碳信號，δC145.0(C-β),115.8(C-α)分別為與羧基共軛的反式雙鍵上的碳信號，δC128.5(C-1″′)，149.5(C-3″′)，149.4(C-4″′)為苯環(huán)上取代的季碳信號，δC106.9(C-2″′,6″′)，112.4(C-5″′)為3″′,4″′-二甲氧基苯丙烯酰結(jié)構(gòu)骨架中的三個(gè)未取代碳信號。在HMBC光譜中(圖19)，甲氧基質(zhì)子δH3.65與δC100.6(C-1')相關(guān)，推斷C-1連接在β-D-葡萄糖的端基上，形成甲苷。甲氧基質(zhì)子δH3.86和3.88分別與δC149.4(C-4″′)，149.5(C-3″′)存在遠(yuǎn)程相關(guān)，說明這兩個(gè)甲氧基分別連接在苯環(huán)C-4″′，C-3″′位上。葡萄糖6位質(zhì)子信號δH4.39與δC99.4(C-1″)有相關(guān)，表明此葡萄糖的6位與另一β-D-葡萄糖的1位相連。另一β-D-葡萄糖的6位質(zhì)子信號δH4.26與δC168.9(C-9″′)，115.8(C-8″′)相關(guān)，即說明此葡萄糖6位連接在苯丙烯?；稀Ａ硗?，苯環(huán)質(zhì)子信號δH6.90與δC128.5(C-1″′)，149.5(C-3″′)，149.4(C-4″′)，145.0(C-7″′)存在遠(yuǎn)程相關(guān)。在NOESY光譜中(圖19)，H-1/H-1'相關(guān)，可知β-D-葡萄糖的端基被甲基取代，形成甲苷。H-6'/H-1″相關(guān)，說明此β-D-葡萄糖的6位與另一葡萄糖的端基相連。H-6″/H-8″′，H-6″/H-2″′相關(guān)，顯示此葡萄糖6位與苯丙烯酰基相連。另外，H-8″′/H-2″′，H-7″′/H-6″′相關(guān)，NOESY效應(yīng)同時(shí)可以結(jié)合1HNMR的偶合常數(shù)判斷C-α，C-β雙鍵為反式雙鍵。因此，綜上分析，可判定該化合物為6-(6-(3,4-二甲氧基)苯丙烯酰基-β-D-葡萄糖基)-O-β-D-葡萄糖甲苷。表3化合物2的1HNMR(400MHzinCD3OD),13CNMR(100MHzinCD3OD),HMBC,NOESY譜實(shí)施例5：化合物3的化學(xué)結(jié)構(gòu)鑒定黃色粉末(甲醇)，溶于甲醇。HR-ESI-TOF-MS譜給出高分辨準(zhǔn)分子離子峰m/z303.1225[M-H]-(Calcd.303.1232,-1.9ppm)。結(jié)合其NMR數(shù)據(jù)，確定其分子式為C17H20O5，并計(jì)算出該化合物含有8個(gè)不飽和度。1HNMR譜(600MHz,CD3OD)中，低場區(qū)給出一組AA'BB'偶合系統(tǒng)的苯環(huán)質(zhì)子信號δ6.84(2H,dd,J＝2.4,8.4Hz)，6.84(2H,dd,J＝2.4,8.4Hz)。高場區(qū)給出3個(gè)甲基質(zhì)子信號δ1.09(3H,s)，1.21(3H,s)，1.72(3H,s)。兩個(gè)亞甲基質(zhì)子信號δ1.74(1H,m)，1.40(1H,m)，1.95(1H,m)，2.33(1H,m)。13CNMR譜(150MHz,CD3OD)中給出17個(gè)碳信號，低場區(qū)給出10個(gè)sp2雜化的碳信號，其中δ174.6處為一成酯的羰基碳信號，δ170.3處為一羧基碳信號δ131.8，136.9處為一雙鍵碳信號。δ116.2，116.2，122.9，133.1，133.1，163.5處為一苯環(huán)碳信號。高場區(qū)δ65.2處給出一連氧的碳信號，δ21.4，29.2，29.9給出三個(gè)甲基碳信號。在HMBC譜中(圖20)，δ1.09(3H,s)，1.21(3H,s)與δ29.9，36.6，48.4，136.9存在相關(guān)，說明這兩個(gè)甲基連接在δ36.6的季碳上。δ1.72(3H,s)與δ41.6，131.8，136.9有遠(yuǎn)程相關(guān)，說明此甲基鏈接在δ131.8的雙鍵碳上。由δ1.95(1H,m)與δ65.2，131.8，136.9相關(guān)，δ2.33(1H,m)與δ21.4，48.4，65.2，131.8，136.9相關(guān)，δ1.40(1H,m)與δ29.2，36.6，41.6，65.2存在遠(yuǎn)程相關(guān)，δ1.74(1H,m)與δ36.6，65.2存在相關(guān)，可得出結(jié)構(gòu)片段A。由δ6.84(2H,dd,J＝2.4,8.4Hz)與δ116.2，122.9，133.1存在相關(guān)，δ7.90(2H,dd,J＝2.4,8.4Hz)與δ116.2，133.1，163.5，170.3存在相關(guān)，可得出結(jié)構(gòu)片段B。另外，由向高場位移的羰基碳信號可知，該羰基碳已成酯。故，由A、B片段可得出結(jié)構(gòu)C。綜上分析，可判定該化合物結(jié)構(gòu)為(4-羥基-2,6,6-三甲基)-環(huán)己烯甲酸-4-羥基-(苯甲酸)酯。在CD譜(見附圖2)中，根據(jù)不飽和內(nèi)酯的螺旋規(guī)則，化合物2在233nm處呈現(xiàn)負(fù)cotton效應(yīng)，可判斷4位為R型，這與化合物picrocrocinicacid的構(gòu)型一致[1]，故確定該化合物為(4-羥基-2,6,6-三甲基)-環(huán)己烯甲酸-4-羥基-(苯甲酸)酯。經(jīng)系統(tǒng)文獻(xiàn)檢索，為未見文獻(xiàn)報(bào)道的新化合物。表4化合物3的1H-(600MHzinCD3OD)，13C-NMR(150MHzinCD3OD)及HMBC數(shù)據(jù)實(shí)施例6：化合物4的化學(xué)結(jié)構(gòu)鑒定白色粉末(甲醇)，溶于甲醇，Molisch反應(yīng)陽性。HR-ESI-TOF-MS譜給出高分辨準(zhǔn)分子離子峰m/z521.2018[M-H]-(Calcd.521.2023,-0.9ppm)。結(jié)合其NMR數(shù)據(jù)，確定其分子式為C26H34O11，并計(jì)算出該化合物含有10個(gè)不飽和度。1HNMR譜(400MHz,CD3OD)中低場區(qū)給出1組1,3,4-三取代苯環(huán)質(zhì)子信號δ6.90(1H,br.s,H-2″)，6.96(1H,br.d,J＝8.0Hz,H-5″)，6.43(1H,br.d,J＝8.0Hz,H-6″)，2個(gè)反式雙鍵質(zhì)子信號δ6.41(1H,d,J＝16.0Hz,H-8″)、δ7.63(1H,d,J＝16.0Hz,H-7″)，1個(gè)烯氫質(zhì)子信號δ6.25(1H,s,H-4)。高場區(qū)給出1甲氧基質(zhì)子信號δ3.87(3H,s)，2個(gè)甲基質(zhì)子信號δ1.01(3H,s)，1.11(3H,s)。由β-D-葡萄糖端基質(zhì)子信號δ4.44(1H,d,J＝8.0Hz,glc-1)和6位質(zhì)子信號δ4.32(1H,br.d,J＝11.6Hz)，4.51(1H,br.d,J＝11.6Hz)可知，該分子結(jié)構(gòu)中存在一葡萄糖分子，而且6位被?；?位被取代。13CNMR譜(100MHz,CD3OD)中給出26個(gè)碳信號，低場區(qū)給出12個(gè)sp2雜化的碳信號，其中δ202.9處顯示為一羰基碳信號。δ104.7處碳信號為葡萄糖端基碳信號。δ57.0處為一甲氧基碳信號，另高場區(qū)給出兩個(gè)甲基碳信號δ27.6，29.5。由HMBC譜可知(圖21)，δ6.41(1H,d,J＝16.0Hz,H-8″)與δ125.7，147.5，169.1存在遠(yuǎn)程相關(guān)，δ7.63(1H,d,J＝16.0Hz,H-7″)與δ107.1，125.7，169.1存在遠(yuǎn)程相關(guān)，可得出一苯丙烯?；Y(jié)構(gòu)片段。δ4.32(1H,br.d,J＝11.6Hz,glc-6)，4.51(1H,br.d,J＝11.6Hz,glc-6)與δ169.1存在遠(yuǎn)程相關(guān)，說明該葡糖糖6位被?；?，與苯丙烯?；噙B。由δ4.47，4.53與δ164.1，125.6存在相關(guān)，δ3.83與δ36.4，50.7，164.1有遠(yuǎn)程相關(guān)，δ2.01，2.72與δ202.9，36.4，50.7相關(guān)，δ1.01，1.11與δ36.4，50.2，50.7相關(guān)，可得出結(jié)構(gòu)片段A。δ4.44(1H,d,J＝8.0Hz,glc-1)與δ72.2存在遠(yuǎn)程相關(guān)，可推斷該葡萄糖1位與上述結(jié)構(gòu)片段中10位羥甲基相連。綜上分析，可得出該化合物的相對構(gòu)型為6'-O-(3″-甲氧基-4″-羥基-苯丙烯?；?-β-D-葡萄糖-1'-O-7-甲基-(6-羥甲基-1,1-二甲基環(huán)己-4-烯-3-酮)苷。由CD譜(附圖4)可看出，235nm、224nm和207nm處呈現(xiàn)正的Cotton效應(yīng)，251nm處呈現(xiàn)負(fù)的Cotton效應(yīng)?？芍狢-7連氧亞甲基和C-2其中一個(gè)亞甲基質(zhì)子(δ2.72)為β-構(gòu)型，所以判斷該化合物的絕對構(gòu)型為R構(gòu)型[3]。綜上可斷定該化合物為(7R)-6’-O-(3″-甲氧基-4″-羥基-苯丙烯?；?-β-D-葡萄糖-1’-O-7-羥甲基-(6-羥甲基-1,1-二甲基環(huán)己-4-烯-3-酮)苷。表5化合物4的1H-(400MHzinCD3OD)，13C-NMR(100MHzinCD3OD)及HMBC數(shù)據(jù)實(shí)施例7：化合物5的化學(xué)結(jié)構(gòu)鑒定淡黃色不定型粉末(甲醇)，溶于甲醇，Molisch反應(yīng)陽性。HR-ESI-TOF-MS譜給出高分辨準(zhǔn)分子離子峰m/z345.1540[M-H]-(Calcd.345.1549,1.2ppm)。結(jié)合其NMR數(shù)據(jù)，確定其分子式為C16H26O8，并計(jì)算出該化合物含有4個(gè)不飽和度。1HNMR譜(400MHz,CD3OD)中低場區(qū)1個(gè)烯氫質(zhì)子信號δ6.23(1H,br.s,H-4)。高場區(qū)給出2個(gè)甲基質(zhì)子信號δ1.01(3H,s)，1.11(3H,s)。由β-D-葡萄糖端基質(zhì)子信號δ4.25(1H,d,J＝7.8Hz,glc-1)和6位質(zhì)子信號δ3.67(1H,dd,J＝12.0,5.2Hz)，3.86(1H,dd,J＝12.0,1.6Hz)可知，該分子結(jié)構(gòu)中存在一葡萄糖分子。13CNMR譜(100MHz,CD3OD)中給出16個(gè)碳信號，低場區(qū)給出3個(gè)sp2雜化的碳信號，其中δ202.9處顯示為一羰基碳信號。δ104.6處碳信號為葡萄糖端基碳信號。另高場區(qū)給出兩個(gè)甲基碳信號δ27.6，29.5。由HMBC譜可知(圖22)，由δ4.43，4.57與δ164.0，125.5存在相關(guān)，δ3.83與δ36.5，50.7，164.0有遠(yuǎn)程相關(guān)，δ2.00，2.71與δ202.9，36.5，50.7相關(guān)，δ1.01，1.11與δ36.5，50.1，50.7相關(guān)，可得出結(jié)構(gòu)片段A。δ4.25(1H,d,J＝7.8Hz,glc-1)與δ72.2存在遠(yuǎn)程相關(guān)，可推斷該葡萄糖1位與上述結(jié)構(gòu)片段中10位羥甲基相連。綜上分析，可得出該化合物的相對構(gòu)型為3-羥甲基-4-羥甲基-5,5-二甲基環(huán)己-2-烯酮-β-D-葡萄糖苷。由CD譜(附圖3)可看出，233nm和208nm處呈現(xiàn)正的Cotton效應(yīng)，329nm處呈現(xiàn)負(fù)的Cotton效應(yīng)。可知C-7連氧亞甲基和C-2其中一個(gè)亞甲基質(zhì)子(δ2.71)為β-構(gòu)型，所以判斷該化合物的絕對構(gòu)型為R構(gòu)型。綜上可斷定該化合物為(4R)-3-羥甲基-4-羥甲基-5,5-二甲基環(huán)己-2-烯酮-β-D-葡萄糖苷。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[2]對比，可知該化合物與jasminosideB互為同分異構(gòu)體。表6化合物5的1H-(400MHzinCD3OD)，13C-NMR(100MHzinCD3OD)及HMBC數(shù)據(jù)實(shí)施例8：化合物14的化學(xué)結(jié)構(gòu)鑒定淡黃色固體(甲醇)，HR-ESI-TOF-MS譜給出高分辨準(zhǔn)分子離子峰m/z156.0796[M+H]+(Calcd.156.0786,2.3ppm)。結(jié)合其NMR數(shù)據(jù)，確定其分子式為C8H12O3，并計(jì)算出該化合物含有3個(gè)不飽和度。1HNMR和13CNMR(600MHz,CD3OD)譜中給出一反式雙鍵信號δH7.29(1H,t,J＝1.5Hz,H-3),δC130.8(C-2),151.2(C-3)，一醛基信號δH9.75(1H,s,-CHO),δC176.3(C-1)，一羰基碳信號δC207(C-6)，兩個(gè)甲基碳信號δH2.18(3H,s,H-7),1.87(3H,s,2-CH3),δC30.3(C-7),10.6(2-CH3)，一個(gè)亞甲基碳信號δH2.87(2H,m,H-4),δC46.9(C-4)和一個(gè)連氧叔碳信號δH5.32(1H,m,H-5),δC78.9(C-5)。HMBC譜(圖23)提示，δH1.87(3H,s,2-CH3)和C-1,C-2,C-3相關(guān)，H-3與C-1，C-2，C-4相關(guān)，H-4和C-3，C-5，C-6相關(guān)，H-7與C-4呈W相關(guān)，H-7與C-5，C-6相關(guān)?？傻贸鲈摶衔锝Y(jié)構(gòu)為(E)-5-羥基-2-甲基-庚-2-烯-1,6-二酮。表7化合物14的1HNMR(600MHz),13CNMR(150MHz)數(shù)據(jù)實(shí)施例9：化合物16的化學(xué)結(jié)構(gòu)鑒定黃色無定型粉末(甲醇)，溶于甲醇，Molisch反應(yīng)陽性。HR-ESI-TOF-MS譜給出準(zhǔn)分子離子峰m/z711.2508[M+H]+(Calcd.711.2500,1.8ppm)。并結(jié)合其NMR數(shù)據(jù)，推測其分子式為C33H42O17，并計(jì)算出該化合物含有13個(gè)不飽和度。1HNMR譜(400MHz,CD3OD)及13CNMR譜(100MHz,CD3OD)中給出四個(gè)雙鍵質(zhì)子信號和六個(gè)雙鍵碳信號，其中包含一反式雙鍵信號δH7.63(1H,d,J＝16.0Hz,H-7″′)，6.44(1H,d,J＝16.0Hz,H-8″′)，δC147.4(C-7″′)，115.7(C-8″′)。δH7.23(2H,dd,J＝2.0,8.0Hz,H-2″′,6″′)，6.80(2H,dd,J＝2.0,8.0Hz,H-3″′,5″′)，3.87(3H,s,4″′-OCH3)處質(zhì)子信號與δC126.6(C-1″′)，159.6(C-4″′)，126.4(C-2″′,6″′)，115.3(C-3″′,5″′)，56.9(4″′-OCH3)處碳信號提示結(jié)構(gòu)中含有一個(gè)1,4-二取代的苯環(huán)。HMBC譜中(圖24)，H-7″′與C-1″′，C-2″′，6″′，C-9″′相關(guān)，4″′-OCH3與C-4″′相關(guān)，H-8″′與C-9″′，C-1″′相關(guān)，提示存在一反式對-甲氧基苯丙烯酸基團(tuán)。另外，δH4.40(1H,d,J＝8.0Hz,H-1″)，4.53(1H,br.d,J＝10.8Hz,H-6″)，4.22(1H,dd,J＝2.0,10.8Hz,H-6″)及δH4.71(1H,d,J＝8.0Hz,H-1′)，4.09(1H,dd,J＝12.0,2.4Hz,H-6′)，3.75(1H,dd,J＝12.0,2.4Hz,H-6′)提示結(jié)構(gòu)中存在兩分子葡萄糖，由端基質(zhì)子偶合常數(shù)(8.0Hz)可知，該葡萄糖為β-構(gòu)型。H-6′與C-1″及H-1″與C-6′相關(guān)，提示兩葡萄糖的連接為其余1H、13CNMR信號與京尼平苷相似[8]。H-1與C-1′及H-1′與C-1相關(guān)，說明葡萄糖1位與京尼平1位相連。由H-6″與C-9″′相關(guān)，及向低場位移的C-6″信號可知，對-甲氧基苯丙烯酸基連接在另一葡萄糖的6位。1HNMR譜(400MHz,CD3OD)及13CNMR譜數(shù)據(jù)與6″-O-反式-對-羥基-苯丙烯基-京尼平-龍膽二糖苷對比，基本一致[4]，故判斷該化合物為6″-O-反式-對-甲氧基-苯丙烯基-京尼平-龍膽二糖苷。表8化合物16的1H-(400MHzinCD3OD)及13C-NMR(100MHzinCD3OD)數(shù)據(jù)實(shí)施例10：化合物53的化學(xué)結(jié)構(gòu)鑒定黃色粉末(甲醇)，三氯化鐵-鐵氰化鉀反應(yīng)陽性，表明有酚羥基存在。UV(MeOH)λmax(logε):204(3.82),254(3.79),294(2.93)，HR-ESI-TOF-MS譜給出準(zhǔn)分子離子峰m/z369.1175[M+H]+(Calcd.369.1186,-2.6ppm)，結(jié)合13CNMR、1HNMR譜，推測其分子式為C17H20O9。1HNMR譜(400MHz,CD3OD)中低場區(qū)給出2個(gè)芳香質(zhì)子信號δ6.09(1H,s,H-3)、δ6.24(1H,s,H-6)。高場區(qū)顯示1個(gè)甲氧基質(zhì)子信號δ3.97(3H,s,7-OCH3)，1個(gè)甲基質(zhì)子信號δ2.40(3H,s,2-CH3)，另δ4.39(1H,d,J＝7.6Hz,glc-1’)處為葡萄糖端基質(zhì)子信號。13CNMR譜(100MHz,CD3OD)中給出的17個(gè)碳信號，其中低場區(qū)給出9個(gè)sp2雜化的碳信號，其中δ184.5處為一羰基碳信號。高場區(qū)δ56.8處為一甲氧基碳信號，δ20.4處為一甲基碳信號，另δ82.4，80.0，74.9，72.8，71.7，62.9處給出一組向高場位移的葡萄糖碳信號，由此可判定該葡萄糖與母核形成碳苷。綜合以上信息將1HNMR,13CNMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]進(jìn)行比對，可見δ105.2(C-8)向低場移動(dòng)，可判斷甲氧基連在7位，故可推斷該化合物為7-methoxyl-5-hydroxy-2-methylchromone-8-C-β-D-glucopyranoside，即7-甲氧基-異雙花母草素。表9化合物53的1H-(400MHzinCD3OD)及13C-NMR(100MHzinCD3OD)數(shù)據(jù)實(shí)施例11：藥效學(xué)研究竹葉青酒進(jìn)行不同損傷類型的小鼠急性肝損傷保護(hù)作用研究及對正常及免疫力低下小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用研究。其保護(hù)肝損傷及免疫增強(qiáng)的數(shù)據(jù)如下，說明竹葉青酒中發(fā)揮保護(hù)肝損傷及免疫增強(qiáng)作用的有效成分為現(xiàn)有技術(shù)中的有效成分：萜類，環(huán)烯醚萜類，黃酮及黃酮苷類，色原酮類化合物，酚酸及酚苷類，芳香類，奎尼酸類，香豆素類，木脂素類，甾體類，生物堿類，呋喃酮類，糠醛類，長鏈脂肪酸類化合物中的任意一類。四氯化碳致小鼠化學(xué)性肝損傷保護(hù)作用研究其保護(hù)四氯化碳所致肝損傷的數(shù)據(jù)如下表：1對CCl4致肝損傷小鼠臟器系數(shù)的影響與正常組比較，模型組肝損傷小鼠的肝臟系數(shù)、脾臟系數(shù)及腎臟系數(shù)均有升高，但無顯著性差異。與模型組相比，竹葉青酒A-D組的肝臟系數(shù)、脾臟系數(shù)及腎臟系數(shù)均有所降低，但無顯著性差異。表10竹葉青酒母液對CCl4致肝損傷小鼠肝臟系數(shù)、脾臟系數(shù)及腎臟系數(shù)的影響(X±s,n＝10)注：*與模型組對比，P＜0.05；#與空白組對比，P＜0.052對血清AST、ALT、NO的影響CCl4模型組與正常組相比，血清ALT、AST水平顯著升高(P＜0.01)，血清NO含量顯著升高(P＜0.01)。表明本試驗(yàn)造模成功；與模型組相比，竹葉青酒母液A-C組表現(xiàn)出較好的活性(P＜0.01，P＜0.05)，尤以B組較佳。D組血清AST、ALT水平與模型組相比有所減低，但無顯著性差異。與模型組比較，A-D組血清NO含量顯著性降低(P＜0.01，P＜0.05)，F(xiàn)組無顯著性差異。以上結(jié)果表明竹葉青酒母液對CCl4所導(dǎo)致的小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用可能是基于降酶，抗炎方面。結(jié)果見表11。表11竹葉青酒母液對CCl4致肝損傷小鼠血清ALT、AST、NO的影響()注：**與模型組對比，P＜0.01，*與模型組對比，P＜0.05；##為與空白組對比，P＜0.013對肝組織中T-AOC、GSH-PX的影響CCl4模型組與正常組比較，肝組織T-AOC、GSH-PX含量顯著降低(P＜0.01)，表明本試驗(yàn)造模成功；與模型組相比，竹葉青酒母液A-D組肝組織GSH-PX含量均顯著升高(P＜0.01,P＜0.05)；竹葉青酒母液B組中肝組織T-AOC含量顯著升高(P＜0.05)。表明竹葉青酒母液可提高CCl4致肝損傷小鼠的抗氧化能力。結(jié)果見表12。表12竹葉青酒母液對CCl4致肝損傷小鼠肝組織中T-AOC、GSH-PX的影響()注：**與模型組對比，P＜0.01，*與模型組對比，P＜0.05；##為與空白組對比，P＜0.01,#為與空白組對比，P＜0.05.4對肝組織中SOD、MDA的影響CCl4模型組與正常組比較，肝組織SOD活性顯著降低(P＜0.01)，脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA含量顯著升高(P＜0.05)，表明本試驗(yàn)造模成功。與模型組相比，竹葉青酒母液A-D組肝組織SOD活性均顯著升高(P＜0.01,P＜0.05)；B、C組脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA含量顯著下降(P＜0.05)。表明竹葉青酒母液可降低CCl4所致小鼠的脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物，具有一定的保護(hù)作用。結(jié)果見表13。表2-413竹葉青酒母液對CCl4致肝損傷小鼠肝組織中SOD、MDA的影響()注：**與模型組對比，P＜0.01，*與模型組對比，P＜0.05；##為與空白組對比，P＜0.01,#為與空白組對比，P＜0.05.5對肝組織病理變化的影響由組織病理學(xué)變化可知，正常對照組肝細(xì)胞以中央靜脈為中心呈放射狀排列，結(jié)構(gòu)正常；而CCl4模型組能觀察到嚴(yán)重的病理組織變化，例如：肝中心小葉壞死、巨噬細(xì)胞、氣球樣變形和大量的炎性細(xì)胞浸潤；復(fù)方益肝靈組和竹葉青母液A-D劑量組能顯著改善這種肝組織病理變化，結(jié)果見圖6。硫代乙酰胺致小鼠化學(xué)性肝損傷保護(hù)作用研究1竹葉青酒母液對硫代乙酰胺致肝損傷小鼠臟器系數(shù)的影響與正常組比較，TAA模型組肝損傷小鼠的胸腺系數(shù)顯著性降低(P＜0.01)，肝臟系數(shù)有所升高，但無顯著性差異，脾臟系數(shù)、腎臟系數(shù)無顯著性差異。與模型組相比，竹葉青酒母液A-D各劑量組的胸腺系數(shù)及脾臟系數(shù)均無顯著性差異，竹葉青酒母液C組的肝臟系數(shù)顯著性降低(P＜0.05)，各劑量組的腎臟系數(shù)無顯著性差異。陽性藥益肝靈組與模型組比較，胸腺系數(shù)、脾臟系數(shù)、肝臟系數(shù)、腎臟系數(shù)均無顯著性差異。結(jié)果見表14。表14竹葉青酒母液對TAA致肝損傷小鼠胸腺系數(shù)、脾臟系數(shù)、肝臟系數(shù)、腎臟系數(shù)的影響()注：**與模型組對比，P＜0.01，*與模型組對比，P＜0.05；##為與空白組對比，P＜0.01.2對血清AST、ALT、TBIL的影響TAA模型組與正常組相比，血清ALT、AST、TBIL水平顯著升高(P＜0.01)。表明本試驗(yàn)造模成功；與模型組相比，竹葉青酒母液B-D組ALT水平顯著性降低(P＜0.01，P＜0.05)。A-D各劑量組AST、TBIL水平顯著性降低(P＜0.05，P＜0.01)。表明竹葉青酒母液對TAA所導(dǎo)致的小鼠肝損傷具有一定的保護(hù)作用。陽性藥益肝靈組與模型組比較血清ALT、TBIL水平均顯著性降低(P＜0.05，P＜0.01)，結(jié)果見表15。表15竹葉青酒母液對TAA致肝損傷小鼠血清ALT、AST、TBIL的影響()注：**與模型組對比，P＜0.01，*與模型組對比，P＜0.05；##為與空白組對比，P＜0.01.3對肝組織中GSH、T-AOC的影響TAA模型組與正常組比較，肝組織GSH、T-AOC含量均顯著降低(P＜0.01)，肝組織SOD活性顯著降低(P＜0.01)，脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA含量顯著升高(P＜0.01)，表明本試驗(yàn)造模成功；與模型組相比，竹葉青酒母液A-D組肝組織GSH含量均顯著升高(P＜0.01，P＜0.05)，SOD活性均顯著升高(P＜0.01，P＜0.05)；B-D各劑量組脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA含量顯著下降(P＜0.01，P＜0.05)，T-AOC含量顯著升高(P＜0.01，P＜0.05)。表明竹葉青酒母液可提高TAA致肝損傷小鼠的抗氧化能力。結(jié)果見表16。表16竹葉青酒母液對TAA致肝損傷小鼠肝組織中GSH、T-AOC、SOD、MDA的影響()注：**與模型組對比，P＜0.01，*與模型組對比，P＜0.05；##為與空白組對比，P＜0.01.4病理組織學(xué)結(jié)果病理組織結(jié)果分析，正常對照組：肝細(xì)胞以中央靜脈為中心呈放射狀排列，肝小葉、肝板結(jié)構(gòu)正常，無明顯炎細(xì)胞浸潤，肝細(xì)胞無變性、壞死等形態(tài)學(xué)改變。模型對照組：以中心靜脈為中心，周圍肝組織出現(xiàn)片灶狀壞死，平均每個(gè)高倍視野14個(gè)，壞死部位有不同程度的炎細(xì)胞浸潤，大片肝組織肝細(xì)胞腫大，胞漿疏松化，部分肝竇擴(kuò)張，匯管區(qū)有少量細(xì)胞浸潤。竹葉青酒母液A-D組：與模型組相比，肝組織壞死灶仍為片灶狀壞死，但面積變小，呈點(diǎn)、小片灶狀壞死，壞死部位有不同程度的炎細(xì)胞浸潤，部分肝組織肝肝細(xì)胞腫大，胞漿疏松化，肝竇未見明顯擴(kuò)張，匯管區(qū)有少量炎細(xì)胞浸潤，B、D組改善病變較為明顯。復(fù)方益肝靈組：部分血管周圍肝組織出現(xiàn)點(diǎn)狀壞死，平均每個(gè)高倍視野3個(gè)，壞死灶可見炎細(xì)胞浸潤，被膜下肝組織肝細(xì)胞腫大，胞漿疏松化，肝竇未見明顯擴(kuò)張，匯管區(qū)有少量炎細(xì)胞浸潤，見圖7。乙醇致小鼠酒精性肝損傷保護(hù)作用研究1動(dòng)物行為觀察所有小鼠在灌胃酒精前，均正常飲食飲水，皮毛光澤柔順，健康活潑，體重有不同程度增加。模型組和各藥物組灌胃酒精后，大都站立不穩(wěn)，行走歪斜，不久醉臥，幾小時(shí)后自動(dòng)醒轉(zhuǎn)，但飲食和飲水量都有所減少，皮毛失去光澤，精神萎靡不振，大便呈黑色，有惡臭，體重下降。藥物組的動(dòng)物狀態(tài)優(yōu)于模型組。2對酒精所致急性肝損傷小鼠臟器系數(shù)的影響與正常組相比，模型組的肝臟系數(shù)明顯增大，各藥物治療組都可以顯著降低肝臟系數(shù)，且呈劑量依賴性，其中竹葉青酒母液C、D兩組可顯著降低肝臟的腫大(P＜0.01，P＜0.05)，推測藥物組可以減輕肝臟的水腫和充血。模型組的脾臟系數(shù)相比于正常組，有一定的增加，提示酒精性引起的肝損傷中脾臟也可能出現(xiàn)了水腫和充血，導(dǎo)致質(zhì)量增加，各藥物治療組和聯(lián)苯雙酯組可以不同程度的降低脾臟系數(shù)，但沒有顯著性差異。具體數(shù)據(jù)見表17。表17竹葉青酒母液對酒精致肝損傷小鼠胸腺系數(shù)、脾臟系數(shù)、肝臟系數(shù)和腎臟系數(shù)的影響()注：**與模型組對比，P＜0.01，*與模型組對比，P＜0.05；##為與空白組對比，P＜0.01.3對血清AST、ALT、TBIL的影響酒精模型組與正常組相比，血清ALT、AST、TBIL水平顯著升高(P＜0.01)。表明本試驗(yàn)造模成功；與模型組相比，竹葉青酒母液A-D組表現(xiàn)出較好的活性(P＜0.01，P＜0.05)，尤以B組較佳。表明竹葉青酒母液對酒精所導(dǎo)致的小鼠急性肝損傷血清轉(zhuǎn)氨酶的升高具有一定的降低作用。結(jié)果見表18。表18竹葉青酒母液對酒精致肝損傷小鼠血清ALT、AST、TBIL的影響()注：**與模型組對比，P＜0.01；##為與空白組對比，P＜0.01.4對肝組織中GSH、T-AOC、SOD、MDA的影響酒精模型組與正常組比較，肝組織T-AOC、SOD、GSH含量顯著降低(P＜0.01，P＜0.05)，脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA的含量顯著升高(P＜0.01)，表明本試驗(yàn)造模成功；與模型組相比，竹葉青酒母液B、C組肝組織GSH含量均顯著升高(P＜0.01，P＜0.05)；C組肝組織T-AOC含量均顯著升高(P＜0.05)；竹葉青酒母液A-D組中肝組織SOD含量顯著升高(P＜0.01，P＜0.05)；A-D組脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA含量顯著降低，表明竹葉青酒母液可提高酒精致肝損傷小鼠的抗氧化能力，降低脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物的含量。結(jié)果見表19。表19竹葉青酒母液對酒精致肝損傷小鼠肝組織中GSH、T-AOC、SOD、MDA的影響()注：**與模型組對比，P＜0.01，*與模型組對比，P＜0.05；##為與空白組對比，P＜0.01,#為與空白組對比，P＜0.05.5對肝組織病理變化的影響從病理組織切片結(jié)果來看，正常對照組肝小葉結(jié)構(gòu)正常，無炎細(xì)胞浸潤，肝細(xì)胞以中央靜脈為中心呈放射狀排列，肝細(xì)胞無變性、壞死等形態(tài)學(xué)改變。模型對照組中心靜脈周圍肝組織出現(xiàn)片灶狀壞死，壞死部位有不同程度的炎細(xì)胞浸潤，大片肝組織肝細(xì)胞腫大，胞漿疏松化，部分肝竇擴(kuò)張，匯管區(qū)有少量細(xì)胞浸潤。竹葉青酒母液A-D組，與模型組相比，肝組織壞死灶面積縮小，呈點(diǎn)、小片灶狀壞死，壞死部位有不同程度的炎細(xì)胞浸潤，部分肝組織肝肝細(xì)胞腫大，胞漿疏松化，肝竇未見明顯擴(kuò)張，匯管區(qū)有少量炎細(xì)胞浸潤，C組改善病變較為明顯。聯(lián)苯雙酯陽性對照組，部分血管周圍肝組織出現(xiàn)點(diǎn)狀壞死，壞死灶可見炎細(xì)胞浸潤，被膜下肝組織肝細(xì)胞腫大，胞漿疏松化，肝竇未見明顯擴(kuò)張，匯管區(qū)有少量炎細(xì)胞浸潤，見圖8。6對TNF-α表達(dá)的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，正常對照組肝細(xì)胞胞漿中無TNF-α的表達(dá)，模型組小鼠肝組織匯管區(qū)及肝竇旁肝細(xì)胞胞漿中表達(dá)顯著增強(qiáng)。各劑量竹葉青酒母液組具有明顯減少TNF-α在肝組織表達(dá)的作用，與模型組比較，C、D組小鼠肝組織TNF-α表達(dá)差異均有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見圖9。7對Fas和FasL表達(dá)的影響研究表明，F(xiàn)as系統(tǒng)介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡是肝病發(fā)生發(fā)展的重要機(jī)制之一。肝病病毒在肝細(xì)胞表面表達(dá)可能一方面刺激肝細(xì)胞大量表達(dá)Fas。另一方面激活肝內(nèi)細(xì)胞毒性T細(xì)胞CTL大量表達(dá)FasL，兩者結(jié)合導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。正常的肝臟一般沒有Fas/FasL的表達(dá)，或有少量Fas表達(dá)。Fas陽性表達(dá)主要在胞漿、部分在胞膜表達(dá)，陽性肝細(xì)胞主要存在于小葉周圍碎屑樣壞死區(qū)，F(xiàn)as表達(dá)與炎癥活動(dòng)度相關(guān)聯(lián)。本研究用免疫組織化學(xué)染色發(fā)現(xiàn)，正常小鼠肝臟無Fas和FasL的表達(dá)；模型組肝組織Fas、FasL表達(dá)均明顯增高，呈廣泛彌漫性表達(dá)，在淋巴細(xì)胞浸潤區(qū)周圍明顯。Fas抗原主要表達(dá)于肝細(xì)胞漿內(nèi)，棕黃色顆粒，彌漫而不規(guī)則，肝細(xì)胞表面及肝竇內(nèi)皮細(xì)胞表面也有表達(dá)：FasL表達(dá)主要以胞漿為主，少數(shù)以胞膜為主，主要集中于中央靜脈周圍，同時(shí)在肝小葉中也有大量分布。經(jīng)竹葉青酒母液預(yù)處理后，小鼠肝組織損傷減輕，F(xiàn)as及FasL抗原陽性細(xì)胞數(shù)均減少，其中C組效果最為明顯，與模型組比較有極顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，提示竹葉青酒母液可通過抑制Fas/FasL的表達(dá)，達(dá)到阻斷CTL對肝細(xì)胞的殺傷，阻斷酒精誘導(dǎo)的肝細(xì)胞凋亡，見圖10，圖11。8對Bcl-2/Bax表達(dá)的影響B(tài)cl-2與Bax免疫組織化學(xué)表達(dá)結(jié)果顯示，Bcl-2在正常組高表達(dá)，模型組低表達(dá)，Bax與之相反，在正常組低表達(dá)，模型組高表達(dá)。而竹葉青酒母液及陽性對照組Bcl-2表達(dá)較模型組增強(qiáng)，Bax表達(dá)較模型組減弱，提示藥物可通過上調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2及下調(diào)促凋亡蛋白Bax的表達(dá)來發(fā)揮抗凋亡作用的，見圖12，圖13。醋氨酚致小鼠藥物性肝損傷保護(hù)作用研究1對醋氨酚致肝損傷小鼠臟器系數(shù)的影響與正常組比較，AP模型組肝損傷小鼠的胸腺系數(shù)顯著性降低(P＜0.01)，肝損傷小鼠的肝臟系數(shù)顯著升高(P＜0.05)，脾臟系數(shù)顯著性升高(P＜0.01)，腎臟系數(shù)無顯著性差異。與模型組相比，竹葉青酒母液A-D各劑量組的胸腺系數(shù)有所升高，但無顯著差異；竹葉青酒母液B、C組的肝臟系數(shù)顯著性降低(P＜0.05)；竹葉青酒母液A-D組的脾臟系數(shù)均顯著性降低(P＜0.01)；各劑量組的腎臟系數(shù)無顯著性差異。陽性藥聯(lián)苯雙酯組與模型組比較，胸腺系數(shù)有所升高，但無顯著性差異，脾臟系數(shù)顯著性降低(P＜0.01)。結(jié)果見表20。表20竹葉青酒母液對醋氨酚致肝損傷小鼠胸腺系數(shù)、脾臟系數(shù)、肝臟系數(shù)及腎臟系數(shù)的影響()注：**與模型組對比，P＜0.01，*與模型組對比，P＜0.05；##為與空白組對比，P＜0.01.2對血清AST、ALT、TBIL的影響AP模型組與正常組相比，血清ALT、AST、TBIL水平顯著升高(P＜0.01)。表明本試驗(yàn)造模成功；與模型組相比，竹葉青酒母液B、C劑量組的ALT水平顯著降低(P＜0.05，P＜0.01)，竹葉青酒母液A-D各劑量組的AST、TBIL水平均顯著降低(P＜0.01)，表明竹葉青酒母液對AP所導(dǎo)致的小鼠藥物性肝損傷具有保護(hù)作用。陽性藥聯(lián)苯雙酯組與模型組比較，血清AST、TBIL水平顯著降低(P＜0.01)，結(jié)果見表21。表21竹葉青酒母液對AP致肝損傷小鼠血清ALT、AST、TBIL的影響()注：**與模型組對比，P＜0.01，*與模型組對比，P＜0.05；##為與空白組對比，P＜0.01.3對肝組織中GSH、T-AOC、SOD、MDA的影響AP模型組與正常組比較，肝組織GSH、T-AOC含量顯著降低(P＜0.01)，肝組織SOD活性顯著降低(P＜0.01)，脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA含量顯著升高(P＜0.01)，表明本試驗(yàn)造模成功。與模型組相比，竹葉青酒母液B-D各劑量組肝組織GSH、T-AOC含量均顯著升高(P＜0.05、P＜0.01)，竹葉青酒母液A-D各劑量組肝組織SOD活性均顯著升高(P＜0.01)，脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA含量顯著下降(P＜0.05、P＜0.01)，表明竹葉青酒母液可提高AP致肝損傷小鼠的抗氧化能力，清除肝損傷過程中產(chǎn)生的脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA，對藥物性肝損傷具有一定的保護(hù)作用。陽性藥聯(lián)苯雙酯組與模型組比較，肝組織中GSH、T-AOC含量顯著升高(P＜0.05，P＜0.01)，SOD活性均顯著升高(P＜0.01)，脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA含量顯著下降(P＜0.01)。結(jié)果見表22。表22竹葉青酒母液對醋氨酚致肝損傷小鼠肝組織中GSH、T-AOC、SOD、MDA的影響()注：**與模型組對比，P＜0.01，*與模型組對比，P＜0.05；##為與空白組對比，P＜0.01.ConA致小鼠免疫性肝損傷保護(hù)作用研究1試驗(yàn)動(dòng)物一般狀況用ConA成功誘導(dǎo)ICR小鼠建立急性肝損傷模型。模型組小鼠尾靜脈注射ConA(20mg/kg)4h后，自主活動(dòng)明顯減少，無反抗，精神萎靡，蜷縮于籠內(nèi)，對外界聲光刺激不靈敏，覓食較少，尿液黃，個(gè)別小鼠毛發(fā)直立，但8h內(nèi)無死亡。2對ConA致肝損傷小鼠臟器系數(shù)的影響與正常組比較，ConA模型組肝損傷小鼠的胸腺系數(shù)顯著性降低(P＜0.01)，脾臟系數(shù)、肝臟系數(shù)顯著性升高(P＜0.01)，腎臟系數(shù)無顯著性差異。與模型組相比，竹葉青酒母液B、C兩組的胸腺系數(shù)顯著性升高(P＜0.01)，竹葉青酒母液A-D組的脾臟系數(shù)均顯著性降低(P＜0.01)；竹葉青酒母液A-D各劑量組的肝臟系數(shù)均顯著性降低(P＜0.01)，各劑量組的腎臟系數(shù)無顯著性差異。陽性藥聯(lián)苯雙酯組與模型組比較，胸腺系數(shù)有所升高，但無顯著性差異，脾臟系數(shù)顯著性降低(P＜0.01)。結(jié)果見表23。表23竹葉青酒母液對ConA致肝損傷小鼠胸腺系數(shù)、脾臟系數(shù)、肝臟系數(shù)及腎臟系數(shù)的影響()注：**與模型組對比，P＜0.01；##為與空白組對比，P＜0.01.3對血清AST、ALT、TBIL的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，尾靜脈注射ConA8小時(shí)后與正常組相比，ConA模型組血清ALT、AST、TBIL水平顯著升高(P＜0.01)，表明本試驗(yàn)造模成功。與模型組相比，竹葉青酒母液B、C兩組的ALT水平顯著性降低組(P＜0.05，P＜0.01)，A、D兩組的ALT水平無顯著性差異；竹葉青酒母液A-D組的AST、TBIL水平均顯著性降低(P＜0.01)，試驗(yàn)結(jié)果表明竹葉青酒母液對ConA所導(dǎo)致的小鼠肝損傷具有保護(hù)作用。與模型組比較，陽性藥組血清AST、TBIL水平顯著降低(P＜0.05，P＜0.01)，結(jié)果見表24。表24竹葉青酒母液對ConA致肝損傷小鼠血清ALT、AST、TBIL的影響()注：**與模型組對比，P＜0.01，*與模型組對比，P＜0.05；##為與空白組對比，P＜0.01.4對肝組織中GSH、T-AOC、SOD、MDA的影響ConA模型組與正常組比較，肝組織GSH、T-AOC含量均顯著降低(P＜0.01)，肝組織SOD活性顯著降低(P＜0.01)，脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA含量顯著升高(P＜0.01)，表明本試驗(yàn)?zāi)Ｐ统晒?。與模型組相比，竹葉青酒母液A-D組肝組織GSH、T-AOC含量均顯著升高(P＜0.05，P＜0.01)，SOD活性均顯著升高(P＜0.01)；肝組織脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA含量顯著下降(P＜0.01)，表明竹葉青酒母液對ConA所致小鼠免疫性肝損傷具有一定的保護(hù)作用。陽性藥組與模型組比較，GSH、T-AOC含量顯著升高(P＜0.01)，SOD活性均顯著升高(P＜0.01)；脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA含量顯著下降(P＜0.01)。結(jié)果見表25。表25竹葉青酒母液對ConA致肝損傷小鼠肝組織中GSH、T-AOC、SOD、MDA的影響()注：**與模型組對比，P＜0.01，*與模型組對比，P＜0.05；##為與空白組對比，P＜0.01.免疫增強(qiáng)活性研究1對正常及免疫力低下的小鼠體重、胸腺系數(shù)及脾臟系數(shù)的影響與正常組相比，模型組小鼠的體重、胸腺系數(shù)及脾臟系數(shù)均明顯降低(P＜0.01,P＜0.05)，尤其胸腺系數(shù)降低最為顯著(P＜0.01)，提示環(huán)磷酰胺所致免疫力低下模型造模成功。與正常組相比，正常小鼠在給予竹葉青母液后，各組小鼠的體重、胸腺系數(shù)及脾臟系數(shù)并沒有顯著性差異。與模型組相比，竹葉青酒A-F組的免疫力低下小鼠的胸腺系數(shù)顯著升高(P＜0.01,P＜0.05)；A、B兩組的脾臟系數(shù)顯著升高(P＜0.05)；而免疫力低下小鼠的體重與模型組比較無顯著性差異，結(jié)果見表26。表26竹葉青酒母液對正常及免疫力低下小鼠體重、胸腺系數(shù)及脾臟系數(shù)的影響()注：**與模型組對比，P＜0.01，*與模型組對比，P＜0.05；##為與空白組對比，P＜0.01，#為與空白組對比，P＜0.05.2對正常及免疫力低下的小鼠肝臟系數(shù)及腎臟系數(shù)的影響與正常組相比，模型組小鼠肝臟系數(shù)升高，但無顯著性差異；腎臟系數(shù)升高呈現(xiàn)顯著性差異(P＜0.05)。正常小鼠給予竹葉青酒母液后，其肝臟、腎臟系數(shù)與正常組比較無顯著性差異。與模型組相比，免疫力低下小鼠的肝臟、腎臟系數(shù)均顯著降低(P＜0.01,P＜0.05)，結(jié)果見表27。表27竹葉青酒母液對正常及免疫力低下小鼠肝臟、腎臟系數(shù)的影響()注：**與模型組對比，P＜0.01，*與模型組對比，P＜0.05；#為與空白組對比，P＜0.05.3對血清IFN-γ、IL-6及LSZ的影響模型組與正常組比較，血清中IL-6、IFN-γ含量顯著下降(P＜0.01)，說明本試驗(yàn)造模成功。正常小鼠在給予A-F劑量組的竹葉青酒母液后，與正常組比較，除E、F組外，其余各劑量組血清IL-6、IFN-γ含量均有所升高。其中，竹葉青酒母液A、B組的IL-6含量升高較為顯著(P＜0.01)，其余組無顯著性差異。此外，環(huán)磷酰胺致免疫力低下小鼠在給予A-F劑量組的竹葉青酒母液后，與模型組比較，各劑量組血清IL-6、IFN-γ含量均有所升高。其中，A-D劑量組血清IL-6、IFN-γ含量與模型組比較具有顯著性差異(P＜0.01)。以上數(shù)據(jù)說明竹葉青酒母液可增強(qiáng)正常及免疫力低下小鼠的細(xì)胞因子IL-6、IFN-γ的分泌，從而增強(qiáng)自身免疫力，結(jié)果見表3-3。另外，血清溶菌酶是由巨噬細(xì)胞合成并能迅速釋放到細(xì)胞外的一種重要水解酶，是機(jī)體防御的一種重要的非特異性免疫因子。本實(shí)驗(yàn)評價(jià)了ZYQL對小鼠血清溶菌酶活性的影響，結(jié)果見表28，與正常組相比，小鼠單獨(dú)灌胃竹葉青酒母液200mg/kg和400mg/kg，血清溶菌酶活力有不同程度的提高，具有顯著性差異(P<0.05，P<0.01)，而單獨(dú)給予竹葉青酒母液50mg/kg和100mg/kg劑量時(shí)，血清溶菌酶活力無顯著性差異；腹腔注射Cy后，與正常對照組相比，血清溶菌酶活力顯著降低(P<0.01)；與Cy組相比，ZYQL+Cy各劑量組血清溶菌酶活力均有不同程度的提升(P<0.05，P<0.01)，其中200mg/kg的竹葉青酒母液配合Cy的作用極顯著(P<0.01)。表28竹葉青酒母液對正常及免疫力低下小鼠血清中IFN-γ、IL-6及LSZ含量的影響()注：**與模型組對比，P＜0.01，*與模型組對比，P＜0.05；##為與空白組對比，P＜0.014對脾組織中SOD、GSH-PX、CAT的影響模型組與正常組比較，脾組織中GSH-PX、CAT含量及SOD的活性，均顯著降低(P＜0.01)，說明本試驗(yàn)免疫低下模型造模成功。正常小鼠在灌胃給于不同濃度的竹葉青酒母液(A-F組)后，脾組織中，GSH-PX、CAT含量及SOD的活性顯著升高(P＜0.01,P＜0.05)，說明竹葉青酒能提高正常小鼠體內(nèi)氧化抗氧化酶活性，從而增強(qiáng)小鼠機(jī)體免疫力。由表29可知，竹葉青母液B、C組較其他組別效果明顯。另外，竹葉青酒母液亦能夠提高環(huán)磷酰胺所致免疫力低下小鼠體內(nèi)的GSH-PX、CAT含量及SOD的活性，與模型組相比，具有顯著性差異(P＜0.01,P＜0.05)，結(jié)果見表29。表29竹葉青酒母液對正常及免疫力低下小鼠脾組織中SOD、GSH-PX、CAT的影響()注：**與模型組對比，P＜0.01，*與模型組對比，P＜0.05；##為與空白組對比，P＜0.01，#為與空白組對比，P＜0.05.5竹葉青酒母液對小鼠單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)吞噬功能的影響(碳粒廓清)注射Cy(100mg/kg)后，Cy組與正常對照組相比，小鼠碳粒廓清指數(shù)顯著降低。與正常組比較，單獨(dú)給予400mg/kg的竹葉青酒母液，可使小鼠碳粒廓清指數(shù)升高(P<0.05)。與模型組相比，100mg/kg、200mg/kg、400mg/kg的竹葉青酒母液均可對抗Cy造成的免疫抑制，可顯著提高碳粒廓清指數(shù)(P<0.05，P<0.01)，結(jié)果見表30。表30竹葉青酒母液對小鼠單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)吞噬功能的影響(n＝10)注：**與模型組對比，P＜0.01，*與模型組對比，P＜0.05；#為與空白組對比，P＜0.05.實(shí)施例12：生物活性研究本發(fā)明中有效單體化學(xué)成分化合物1-78中任意一種化合物進(jìn)行抗炎、抗膽堿酯酶、體外肝細(xì)胞保護(hù)作用研究。研究結(jié)果表明，竹葉青酒中發(fā)揮抗炎、抗膽堿酯酶、體外肝細(xì)胞保護(hù)作用的有效成分為本發(fā)明中所涉及的化合物1-78中的任意一種。其抗炎、抗膽堿酯酶、體外肝細(xì)胞保護(hù)作用結(jié)果如下表31：表31各單體化合物體外抗炎、抗膽堿酯酶以及體外肝細(xì)胞保護(hù)活性a各單體化合物濃度為50μΜ.b肝保護(hù)活性陽性對照組.c抗炎活性陽性對照組.d抗AChE活性對照組.參考文獻(xiàn)[1]Straubinger,M.,Bau,B.,Eckstein,S.,Fink,M.,Winterhalter,P..IdentificationofnovelglycosidicaromaprecursorsinSaffron(CrocussativusL.).JAgricFoodChem.1998,46,3238-3243.[2]QuanChengChen,UiJoungYoun,Byung-SunMin,andKiHwanBae,PyronaneMonoterpenoidsfromtheFruitofGardeniajasminoides,J.Nat.Prod.2008,71,995-999.[3]Kai,N.K..ShinJikkenKagakuKoza13,Yukikozo(Ⅱ),Maruzen,Tokyo,1977,pp.821-830.[4]Yu,Y.,Xie,Z.L.,Gao,H.,Ma,W.W.,Dai,Y.,Wang,Y.,ZhongY.,Yao,X.S.,BioactiveIridoidGlucosidesfromtheFruitofGardeniajasminoides.JournalofNaturalProducts2009,72,1459-1464.[5]Okamurα,N.,Hine,N.,Tateyamα,Y.,Nakazawα,M.,Fujiokα,T.,Mihashi,K.,Yagi,A.,FivechromonesfromAloeVeraleaves,Phytochemistry,1998,49,219-223.