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一種特異性檢測結(jié)核分枝桿菌感染的蛋白的制作方法

文檔序號:12342385閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種結(jié)核分枝桿菌的特異性蛋白抗原,所述抗原序列如SEQ ID NO.2所示。

2.一種結(jié)核分枝桿菌的特異性蛋白抗原,所述抗原序列與SEQ ID NO.2所示序列之間,有95%以上的同源性。

3.編碼權(quán)利要求1或2所述抗原的核苷酸片段。

4.權(quán)利要求1或2所述的抗原的制備方法,其特征在于,所述方法為:

方法一,

步驟(1)以LREnzyme mix催化Rv0472c的入門載體(美國Craig Ventor Institute下設(shè)的PFGRC所免費(fèi)提供)和pDESTTM17載體重組生成Rv0472c的表達(dá)載體;

步驟(2)將步驟(1)所述Rv0472c的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化目標(biāo)表達(dá)宿主,表達(dá)目標(biāo)Rv0472c蛋白;

步驟(3)破碎細(xì)胞收集蛋白并復(fù)性目標(biāo)蛋白;

方法二,

步驟(1)表達(dá)含有多聚組氨酸標(biāo)簽的目標(biāo)融合蛋白并收集表達(dá)宿主菌體:

步驟(2)收集含有多聚組氨酸標(biāo)簽的目標(biāo)融合蛋白:

步驟(3)純化目標(biāo)融合蛋白。

5.權(quán)利要求1或2所述的抗原作為檢測結(jié)核分枝桿菌的免疫原的應(yīng)用,所述的應(yīng)用包括,

(1)將該蛋白抗原單獨(dú)用于檢測結(jié)核分枝桿菌;

或(2)將該抗原與現(xiàn)有結(jié)核分枝桿菌檢測抗原聯(lián)用,用于檢測結(jié)核分枝桿菌。

6.由權(quán)利要求1或2所述的抗原制備的單一抗原型結(jié)核分枝桿菌檢測試劑盒,所述試劑盒包含,

(1)檢測有效量濃度(優(yōu)選濃度為75ug/ml)的抗原;

(2)必要的檢測試劑及顯色試劑。

7.包含權(quán)利要求1或2所述的抗原的多抗原聯(lián)用型結(jié)核分枝桿菌檢測試劑盒,所述試劑盒包含,

(1)檢測有效量濃度(優(yōu)選濃度為75ug/ml)的強(qiáng)烈要求1或2所述的抗原,以及檢測有效量的現(xiàn)有結(jié)核分枝桿菌檢測抗原;

(2)必要的檢測試劑及顯色試劑。

8.根據(jù)權(quán)利要求5的應(yīng)用,其特征在于,所述的現(xiàn)有結(jié)核分枝桿菌檢測抗原為結(jié)核分枝桿菌來源的ESAT-6抗原、CFP10抗原、PPD抗原、BCG抗原、LAM抗原、ES-31抗原。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的試劑盒,其特征在于,所述的現(xiàn)有結(jié)核分枝桿菌檢測抗原為結(jié)核分枝桿菌來源的ESAT-6抗原、CFP10抗原、PPD抗原、BCG抗原、LAM抗原、ES-31抗原。

10.權(quán)利要求1或2所述的抗原在制備抗結(jié)核分枝桿菌的疫苗中的應(yīng)用。

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