本發(fā)明涉及一種肽及其應(yīng)用，特別是涉及一種抑制癌細(xì)胞活性的短肽治療劑及含有它的醫(yī)藥組合物，以抑制癌細(xì)胞的活動。

背景技術(shù)：

針對已轉(zhuǎn)移或是無法手術(shù)根除的惡性腫瘤的癌癥患者，在手術(shù)切除腫瘤原發(fā)部位后，會進(jìn)一步接受化療，以抑制潛在癌細(xì)胞的增生及轉(zhuǎn)移。然而，即使是宣稱化療成功的癌癥患者，仍無法排除癌癥復(fù)發(fā)甚或發(fā)展成抗藥性癌癥的可能性。癌癥復(fù)發(fā)的患者，尤其是化療過程中產(chǎn)生抗藥性的癌癥患者，往往因?yàn)閺?fù)發(fā)的癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移更快速，使得危險性劇增。

以腫瘤(carcinoma)為例，目前已知癌細(xì)胞會刺激腫瘤周邊微環(huán)境產(chǎn)生各種發(fā)炎因子、白血球、血管過度增生及蛋白酶等，而癌癥的慢性發(fā)炎反應(yīng)也與癌細(xì)胞的生長、轉(zhuǎn)移與侵襲有關(guān)，然而其形成原因及詳細(xì)機(jī)制，仍有諸多未明之處。

腫瘤微環(huán)境除了與發(fā)炎反應(yīng)有關(guān)之外，其它研究也指出，腫瘤微環(huán)境與腫瘤轉(zhuǎn)移及化療抗藥性亦息息相關(guān)。腫瘤微環(huán)境是由多種基質(zhì)細(xì)胞及其它不同型態(tài)的細(xì)胞所構(gòu)成，不僅可保護(hù)腫瘤，使腫瘤細(xì)胞得以逃脫和抵抗免疫細(xì)胞，而造成腫瘤細(xì)胞的抗藥性。

此外，本發(fā)明人過去研究顯示，當(dāng)癌細(xì)胞的一種轉(zhuǎn)錄因子CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白(CCAAT/enhancer binding protein delta；CEBPD)減少時，也有助于推動其進(jìn)一步癌化，顯示CEBPD表達(dá)的再活化，有可能抑制癌細(xì)胞的生長。

在腫瘤周邊基質(zhì)組織中的纖維母細(xì)胞及巨噬細(xì)胞受到CEBPD活化后，會誘導(dǎo)產(chǎn)生分泌型因子-正五聚蛋白相關(guān)蛋白(pentraxin-related protein；PTX3)，其具有促進(jìn)血管新生的活性，且可增加乳癌細(xì)胞、肺癌細(xì)胞及鼻咽癌細(xì)胞的移行及侵入組織(或稱侵襲)的能力。另外，本發(fā)明人亦已證實(shí)，癌 周邊組織細(xì)胞中CEBPD受到活化，亦可能促使癌轉(zhuǎn)移，甚至促使在化療過程中產(chǎn)生抗藥性癌細(xì)胞，這些抗藥性癌細(xì)胞會生長得更快并且更容易轉(zhuǎn)移。

目前市面上雖有一些小分子抗癌藥物，例如順-雙氨雙氯鉑(cis-diammine dichloroplatinum(II)；CDDP；商品名順鉑(Cisplatin))、太平洋紫杉醇(paclitaxel；商品名Taxol)以及5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil；5-FU)等，然而最近的研究發(fā)現(xiàn)，上述小分子抗癌藥物不僅活化癌細(xì)胞中的CEBPD表達(dá)，還可活化巨噬細(xì)胞及纖維母細(xì)胞內(nèi)CEBPD的表達(dá)，反而促使癌細(xì)胞產(chǎn)生抗藥性并快速轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致癌癥治療效果不佳。

有鑒于此，亟需開發(fā)一種小分子抗癌藥物，以克服已知的小分子抗癌藥物會產(chǎn)生腫瘤細(xì)胞的抗藥性及快速轉(zhuǎn)移等問題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的一個方面是提供一種短肽治療劑，其包括至少一短肽，且短肽中任一個包括不超過40個氨基酸殘基。

本發(fā)明的另一方面是提供一種醫(yī)藥組合物，其包含短肽治療劑及醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑，其中短肽治療劑為活性成分，且包含至少一短肽。

本發(fā)明的又一方面是提供一種短肽治療劑用于制備抑制癌細(xì)胞活性的醫(yī)藥組合物的應(yīng)用，其中醫(yī)藥組合物包含短肽治療劑及醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑，短肽治療劑為活性成分且包含至少一短肽，以抑制癌細(xì)胞的活動。

根據(jù)本發(fā)明的上述方面，提出一種短肽治療劑。在一實(shí)施例中，此短肽治療劑可包含如SEQ ID NO:1及SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的至少一短肽，且短肽中任一個包括不超過40個氨基酸殘基。

根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提出一種醫(yī)藥組合物。在一實(shí)施例中，此醫(yī)藥組合物包含短肽治療劑及醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑，其中短肽治療劑為活性成分，且包含如SEQ ID NO:1及SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列中至少之一，且該短肽治療劑的任一短肽包括不超過40個氨基酸殘基。

根據(jù)本發(fā)明的又一方面，提出一種短肽治療劑用于制備抑制癌細(xì)胞活性的醫(yī)藥組合物的應(yīng)用，其中醫(yī)藥組合物包含短肽治療劑及醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑，短肽治療劑為活性成分。在一實(shí)施例中，前述短肽治療劑包含如SEQ ID NO:1及SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列中至少一短肽，且短肽中任一個 包括不超過40個氨基酸殘基，以于體外專一性抑制癌細(xì)胞的活動。

依據(jù)本發(fā)明一實(shí)施例，上述醫(yī)藥組合物可經(jīng)由皮下注射、腫瘤內(nèi)注射、靜脈注射或口服途徑給予。

依據(jù)本發(fā)明一實(shí)施例，上述癌細(xì)胞可包括但不限于乳癌、肺癌、鼻咽癌、上皮癌及其任意組合。

依據(jù)本發(fā)明一實(shí)施例，上述活動包括增生(proliferation)、癌干原細(xì)胞性(cancer stemness)、移行(migration)、侵襲(invasion)、轉(zhuǎn)移(metastasis)或抗藥性(drug resistance)。

應(yīng)用本發(fā)明的抑制癌細(xì)胞的短肽治療劑及含有它的醫(yī)藥組合物，其包括至少一短肽，且此短肽中任一個包括不超過40個氨基酸殘基，以抑制PTX3的活性，進(jìn)而專一性抑制癌細(xì)胞的增生、癌干原細(xì)胞性、移行、侵襲、轉(zhuǎn)移或抗藥性等活動。

附圖說明

為了使本發(fā)明的上述和其它目的、特征、優(yōu)點(diǎn)與實(shí)施例能更明顯易懂，提供附圖，其詳細(xì)說明如下：

圖1A繪示根據(jù)本發(fā)明數(shù)個實(shí)施例的短肽的氨基酸序列設(shè)計圖。

圖1B繪示于體外利用本發(fā)明實(shí)施例一的數(shù)個短肽與乳癌細(xì)胞MB231共同培養(yǎng)24小時(上圖)或48小時(下圖)后的細(xì)胞存活率(％)柱形圖。

圖1C示出于體外利用本發(fā)明實(shí)施例一的數(shù)個短肽培養(yǎng)乳癌細(xì)胞MB231達(dá)2周后形成細(xì)胞球團(tuán)的影像(左圖)及細(xì)胞球團(tuán)數(shù)柱形圖(右圖)(放大倍率為100倍)。

圖1D繪示實(shí)施例二的乳癌細(xì)胞MB231利用本發(fā)明實(shí)施例一的數(shù)個短肽培養(yǎng)一周后，對CDDP(左圖)或5-FU(右圖)的抗藥性的細(xì)胞存活率(％)柱形圖。

圖1E繪示實(shí)施例二的抗藥性乳癌細(xì)胞MB231R(MBR)利用本發(fā)明實(shí)施例一的數(shù)個短肽培養(yǎng)后的移行細(xì)胞數(shù)柱形圖(左圖)或侵襲細(xì)胞數(shù)柱形圖(右圖)。

圖2A示出于體外利用本發(fā)明實(shí)施例一的數(shù)個短肽培養(yǎng)肺癌細(xì)胞A549達(dá)2周后形成細(xì)胞球團(tuán)的影像(左圖)及細(xì)胞球團(tuán)數(shù)柱形圖(右圖)(放大倍率為 100倍)。

圖2B繪示實(shí)施例二的肺癌細(xì)胞A549利用本發(fā)明實(shí)施例一的數(shù)個短肽培養(yǎng)一周后，對CDDP(左圖)或5-FU(右圖)的抗藥性的細(xì)胞存活率(％)柱形圖。

圖2C繪示實(shí)施例二的肺癌細(xì)胞A549利用本發(fā)明實(shí)施例一的數(shù)個短肽培養(yǎng)后的移行細(xì)胞數(shù)柱形圖(左圖)或侵襲細(xì)胞數(shù)柱形圖(右圖)。

圖3A示出于體外利用本發(fā)明實(shí)施例一的數(shù)個短肽培養(yǎng)鼻咽癌細(xì)胞HONE1達(dá)2周后形成細(xì)胞球團(tuán)的影像(左圖)及細(xì)胞球團(tuán)數(shù)柱形圖(右圖)(放大倍率為100倍)。

圖3B繪示繪示實(shí)施例二的鼻咽癌HONE1細(xì)胞利用本發(fā)明實(shí)施例一的數(shù)個短肽培養(yǎng)一周后，對CDDP(左圖)或5-FU(右圖)的抗藥性的細(xì)胞存活率(％)柱形圖。

圖3C繪示實(shí)施例二的鼻咽癌HONE1細(xì)胞利用本發(fā)明實(shí)施例一的數(shù)個短肽培養(yǎng)后的移行細(xì)胞數(shù)柱形圖(左圖)或侵襲細(xì)胞數(shù)柱形圖(右圖)。

圖4A繪示于活體內(nèi)利用本發(fā)明實(shí)施例一的數(shù)個短肽(左圖)或并用CDDP(右圖)減緩抗藥性乳癌細(xì)胞4T1R產(chǎn)生的腫瘤大小的曲線圖。

圖4B繪示圖4A的活體內(nèi)每個肺中轉(zhuǎn)移性結(jié)節(jié)數(shù)(左圖)以及腫瘤重(右圖)的柱形圖。

圖4C示出圖4A的活體內(nèi)不同器官的腫瘤影像及其落射熒光輻射效率。

圖4D繪示于活體內(nèi)利用本發(fā)明實(shí)施例一的數(shù)個短肽(左圖)或并用CDDP(右圖)減緩抗藥性乳癌細(xì)胞MB231R(MBR)產(chǎn)生的腫瘤大小的曲線圖。

圖4E繪示圖4D的活體內(nèi)每個肺中轉(zhuǎn)移性結(jié)節(jié)數(shù)(左圖)以及腫瘤重(右圖)的柱形圖。

圖4F顯示圖4D的活體內(nèi)不同器官的腫瘤影像及其落射熒光輻射效率。

圖5A繪示根據(jù)數(shù)個實(shí)施例的短肽的氨基酸序列設(shè)計圖。

圖5B繪示于體外利用本發(fā)明數(shù)個實(shí)施例的短肽與多肽減緩euPTX3誘發(fā)乳癌細(xì)胞MB231的移行細(xì)胞數(shù)(左圖)或侵襲細(xì)胞數(shù)(右圖)的細(xì)胞數(shù)柱形 圖。

具體實(shí)施方式

承前所述，本發(fā)明提供一種短肽治療劑，其包括至少一短肽，且短肽中任一個包括不超過40個氨基酸殘基，以專一性抑制正五聚蛋白相關(guān)蛋白(pentraxin-related protein；PTX3)的活性。

本發(fā)明此處所稱的「短肽」是指氨基酸殘基總數(shù)不超過40個的短鏈多肽。在一實(shí)施例中，此短肽治療劑可包含如SEQ ID NO:1及SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列中至少一短肽，其中如SEQ ID NO:1及SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列參見Genbank編號NP_002843.2的序列，在此一并列為本申請的參考文獻(xiàn)。在另一實(shí)施例中，此短肽治療劑可同時并用如SEQ ID NO:1及SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的二短肽。在此說明的是，倘若多肽的氨基酸殘基總數(shù)超過40個(例如同時包含SEQ ID NO:1及SEQ ID NO:2的多肽)，則由此所得的多肽因分子量較大而難以提高有效劑量，而且也因含有無效的肽片段，而有礙于后續(xù)應(yīng)用至短肽治療劑。

在一實(shí)施例中，如SEQ ID NO:1及SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的短肽可以利用任何已知方式，例如人工合成肽、或利用重組基因于表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)而得的重組蛋白。有關(guān)人工合成肽或重組蛋白的制造方法，應(yīng)為本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域中任何普通技術(shù)人員所熟知，在此不另贅述。

本發(fā)明此處所稱的「專一性抑制PTX3受體與PTX3結(jié)合」是指短肽治療劑利用消耗性抑制或競爭性抑制的方式，進(jìn)而專一性抑制PTX3受體與內(nèi)生性PTX3結(jié)合。

在一例示中，前述PTX3是作為可溶性受體，而短肽治療劑可例如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，利用「競爭式抑制」的方式，由此降低內(nèi)生性(或全長)PTX3被活化或與內(nèi)生性PTX3競爭與其受體結(jié)合的機(jī)會，進(jìn)而抑制癌細(xì)胞的活動。

在又一例示中，短肽治療劑可并用SEQ ID NO:1及SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的二種短肽，以進(jìn)一步抑制癌細(xì)胞的活動。在此說明的是，SEQ ID NO:1及SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的短肽必需是未經(jīng)糖化的。倘若短肽預(yù)先被糖化，其本身就相當(dāng)于具有與內(nèi)生性PTX3相當(dāng)或相仿的生物活 性，則無法通過消耗性抑制或競爭性抑制的方式抑制內(nèi)生性PTX3的活性。

本發(fā)明此處所稱的「癌細(xì)胞」可包括但不限于乳癌、肺癌、鼻咽癌、上皮癌或上述的任意組合。本發(fā)明此處所稱的抑制癌細(xì)胞的「活動」是指使用本發(fā)明的短肽治療劑處理癌細(xì)胞后，可以顯著地抑制癌細(xì)胞的細(xì)胞增生、癌干原細(xì)胞性、細(xì)胞移行、細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移或抗藥性等。

本發(fā)明另提供一種醫(yī)藥組合物，其包含短肽治療劑及醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑，其中短肽治療劑如上所述，以作為活性成分。

在應(yīng)用時，本發(fā)明的短肽治療劑是以一有效劑量以及醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑合并給予。此處所稱的「有效劑量」是指以例如5mg/mL至20mg/mL的劑量一周三次給予。在另一例示中，前述有效劑量為5mg/mL至15mg/mL。在此說明的是，倘若短肽的有效劑量低于5mg/mL，則無法于預(yù)設(shè)時間內(nèi)有效減少或抑制PTX3受體與PTX3結(jié)合。

本發(fā)明此處所稱的「醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑」是指本身非活性成分，而是用以將活性成分傳遞至個體的載劑、稀釋劑、佐劑及/或媒劑，或添加至上述組合物中以改善組合物的處理或儲存性質(zhì)，或允許或有助于組合物的劑量單位形成適于醫(yī)藥組合物并方便給予的賦形劑或任何物質(zhì)。前述醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑不應(yīng)破壞活性成分的藥理學(xué)活性，且在傳遞足夠治療劑量的活性成分時應(yīng)無毒性。

前述適用的醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑可為一般熟悉制造醫(yī)藥組合物的普通技術(shù)人員所熟知，且包括但不限于緩沖劑、稀釋劑、崩解劑、黏合劑、黏著劑、濕潤劑、聚合物、潤滑劑、滑動劑、為遮蔽或抵消不良味道或氣味而添加的物質(zhì)、染料、芳香劑及為改善組合物的外觀而添加的物質(zhì)。前述醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑的體例可包括但不限于檸檬酸鹽緩沖劑、磷酸鹽緩沖劑、乙酸鹽緩沖劑、碳酸氫鹽緩沖劑、硬脂酸、硬脂酸鎂、氧化鎂、磷酸及硫酸的鈉鹽及鈣鹽、碳酸鎂、滑石、明膠、阿拉伯膠、海藻酸鈉、果膠、糊精、甘露糖醇、山梨糖醇、乳糖、蔗糖、淀粉、明膠、纖維素物質(zhì)(諸如烷酸的纖維素酯及纖維素烷基酯)、低熔點(diǎn)蠟、可可脂、氨基酸、尿素、醇類、抗壞血酸、磷脂、蛋白質(zhì)(例如血清白蛋白)、乙二胺四乙酸(EDTA)、二甲亞砜(DMSO)、氯化鈉或其它鹽、脂質(zhì)體、甘露糖醇、山梨糖醇、甘油或粉末、聚合物(諸如聚乙烯吡咯啶酮、聚乙烯醇及聚乙二醇)及其它醫(yī)藥學(xué)上可接受 的物質(zhì)。

在應(yīng)用時，上述短肽治療劑及含有它的醫(yī)藥組合物可經(jīng)由皮下注射、腫瘤內(nèi)注射、靜脈注射或口服途徑給予，由此專一性抑制PTX3活性，以抑制癌細(xì)胞的活動。具體而言，經(jīng)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)與活體內(nèi)動物試驗(yàn)證實(shí)，本發(fā)明的短肽治療劑及含有它的醫(yī)藥組合物經(jīng)使用達(dá)預(yù)設(shè)時間，例如4周至10周后，即可抑制癌細(xì)胞的活動，例如抑制癌細(xì)胞的增生、癌干原細(xì)胞性、移行、侵襲或抗藥性。

由于本發(fā)明的短肽治療劑，其包括至少一短肽，且此短肽中任一個包括不超過40個氨基酸殘基，不僅可抑制PTX3的活性，又可專一性抑制癌細(xì)胞的增生、癌干原細(xì)胞性、移行、侵襲、轉(zhuǎn)移或抗藥性等活動，因此短肽治療劑可應(yīng)用于制備專一性抑制PTX3活性的醫(yī)藥組合物。

以下利用數(shù)個實(shí)施例以說明本發(fā)明的應(yīng)用，然而其并非用以限定本發(fā)明，本發(fā)明技術(shù)領(lǐng)域中普通技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)，可作各種修飾與改變。

實(shí)施例一：制備短肽治療劑

在此實(shí)施例中，分別使用人工合成的短肽RI37(具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列)、短肽GI40(具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列)以及短肽KT44(具有SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列)作為短肽治療劑，并以多肽pPTX3/C(具有SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列)作為對照組。有關(guān)短肽RI37、短肽GI40以及短肽KT44、多肽euPTX3的序列設(shè)計如圖1A所示，而短肽RI37、短肽GI40、多肽pPTX3/C以及多肽euPTX3的序列設(shè)計則如圖5A所示。

上述短肽RI37、短肽GI40以及短肽KT44可委托例如科羅耐國際科技有限公司(臺北，臺灣)進(jìn)行合成。上述pPTX3/C則為本發(fā)明人自行利用已知的原核表達(dá)系統(tǒng)(大腸桿菌)表達(dá)并純化的重組蛋白。上述多肽euPTX3可例如純化自小鼠骨髓瘤細(xì)胞的PTX3市售商品(R&D system Inc.)。

實(shí)施例二：建立細(xì)胞試驗(yàn)?zāi)Ｊ?/p>

此實(shí)施例利用人類乳癌細(xì)胞株(MDA-MB231，其保藏于臺灣新竹食品 工業(yè)發(fā)展研究所(FIRDI，臺灣300新竹市食品路331號)的生物資源保存及研究中心(BCRC)，保藏編號：BCRC 60425，此細(xì)胞株也保藏于美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC，P.O.Box1549，Manassas，VA 20108，USA)，保藏編號：ATCC HTB-26；以下簡稱MB231)或?qū)樸K具抗藥性乳癌細(xì)胞株(CDDP-resistant MDA-MB231，MDA-MB231R；以下簡稱MBR)、人類肺癌細(xì)胞株A549(保藏編號：BCRC 60074；ATCC CCL-185)、人類鼻咽癌細(xì)胞株HONE1(Int.J.Cancer.1990Jan 15；45(1):83-9；Proc.Natl.Acad.Sci.USA,Vol.86,pp.9524-9528,December 1989)等，評估實(shí)施例一的短肽治療劑對于癌細(xì)胞活動的抑制效果。

上述細(xì)胞可使用其專用的細(xì)胞培養(yǎng)與繼代方式進(jìn)行培養(yǎng)，舉例而言，MDA-MB231細(xì)胞、MBR細(xì)胞、4T1細(xì)胞、4T1R細(xì)胞及A549細(xì)胞是于含10％胎牛血清蛋白(Fetal Bovine Serum；FBS)以及抗生素(50-100μg/mL鏈霉素及50-100U/mL的青霉素)的杜貝可氏改良的伊格氏培養(yǎng)基(Dulbecco’s modified Eagle medium，DMEM；Gibco Co.)細(xì)胞培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)，HONE1細(xì)胞是于含10％FBS以及抗生素的RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)，在37℃保持濕度的5％二氧化碳濃度下培養(yǎng)，此為本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域中任何普通技術(shù)人員所知，故不另贅述。

實(shí)施例三：短肽治療劑對癌細(xì)胞活動的抑制

以下將實(shí)施例一的短肽治療劑分別添加至實(shí)施例二的細(xì)胞進(jìn)行共同培養(yǎng)后，根據(jù)下述方式進(jìn)行相關(guān)評估。

1.評估短肽對癌細(xì)胞增生的影響

將實(shí)施例一的短肽RI37、短肽GI40以及短肽KT44，與實(shí)施例二的乳癌細(xì)胞MB231共同培養(yǎng)24小時或48小時后，利用MTT[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenol tetrazolium bomide](Sigma)，進(jìn)行細(xì)胞毒性的測試。MTT為四唑鹽(tetrazolium salt)，經(jīng)活細(xì)胞內(nèi)線粒體去氫酶分解后，由透明無色產(chǎn)生藍(lán)色甲臜(formazan)晶體，以未添加實(shí)施例一的短肽的細(xì)胞存活率作為100％，由此判斷實(shí)施例一的短肽對實(shí)施例二的乳癌細(xì)胞MB231增生的影響。

參閱圖1B，其中圖1B繪示于體外利用本發(fā)明實(shí)施例一的數(shù)個短肽與乳癌細(xì)胞MB231共同培養(yǎng)24小時(圖1B上圖)或48小時(圖1B下圖)后的細(xì)胞存活率(％)柱形圖，其中橫軸下方的圖號「－」代表細(xì)胞培養(yǎng)時未添加特定的短肽，三角形則代表特定的短肽的添加量遞增。由圖1B的結(jié)果可知，本發(fā)明實(shí)施例一的短肽RI37、短肽GI40以及短肽KT44，分別與乳癌細(xì)胞MB231共同培養(yǎng)24小時或48小時后，對于細(xì)胞存活率并無顯著性的影響。

2.評估短肽對癌細(xì)胞的癌干原細(xì)胞性的影響

乳癌細(xì)胞MB231、肺癌細(xì)胞A549及鼻咽癌細(xì)胞HONE1具有癌干原細(xì)胞性，添加多肽euPTX3可引起前述癌細(xì)胞形成細(xì)胞球團(tuán)(sphere)。以下利用實(shí)施例一的短肽RI37、短肽GI40、短肽KT44以及多肽euPTX3，與前述癌細(xì)胞共同培養(yǎng)，以實(shí)施例一的數(shù)個短肽對癌細(xì)胞的癌干原細(xì)胞性的影響。

將實(shí)施例一的短肽RI37、短肽GI40、短肽KT44(短肽皆為10μg/mL，225nM)以及多肽euPTX3(2.5μg/mL)，分別與細(xì)胞密度5×10³細(xì)胞/孔的乳癌細(xì)胞MB231、肺癌細(xì)胞A549及鼻咽癌細(xì)胞HONE1，于超低吸附表面多孔培養(yǎng)皿(multi-well plate with ultra-low attachment surface；Corning Inc.)中，以不含血清(serum-free)的細(xì)胞培養(yǎng)基DMEM/F12(Gibco)[含B27(Invitrogen)、20ng/mL的表皮生長因子(epidermal growth factor，EGF；Abcam)以及10ng/mL的堿性纖維母細(xì)胞生長因子(basic Fibroblast Growth Factor，bFGF；Peprotech)]，進(jìn)行共同培養(yǎng)。經(jīng)培養(yǎng)2周后，以光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞球團(tuán)數(shù)。

參閱圖1C、圖2A及圖3A。圖1C示出于體外利用本發(fā)明實(shí)施例一的數(shù)個短肽培養(yǎng)乳癌細(xì)胞MB231達(dá)2周后形成細(xì)胞球團(tuán)的影像(左圖)及細(xì)胞球團(tuán)數(shù)柱形圖(右圖)。圖2A示出于體外利用本發(fā)明實(shí)施例一的數(shù)個短肽培養(yǎng)肺癌細(xì)胞A549達(dá)2周后形成細(xì)胞球團(tuán)的影像(左圖)及細(xì)胞球團(tuán)數(shù)柱形圖(右圖)。圖3A示出于體外利用本發(fā)明實(shí)施例一的數(shù)個短肽培養(yǎng)鼻咽癌細(xì)胞HONE1達(dá)2周后形成細(xì)胞球團(tuán)的影像(左圖)及細(xì)胞球團(tuán)數(shù)柱形圖(右圖)。圖1C、圖2A及圖3A的放大倍率皆為100倍，其橫軸下方的圖號「－」代表細(xì)胞培養(yǎng)時未添加特定的短肽。

由圖1C、圖2A及圖3A的結(jié)果可知，相較于只添加多肽euPTX3的組別， 本發(fā)明實(shí)施例一的短肽RI37、短肽GI40與多肽euPTX3與乳癌細(xì)胞MB231、肺癌細(xì)胞A549及鼻咽癌細(xì)胞HONE1共同培養(yǎng)后，添加短肽RI37、短肽GI40的組別確實(shí)可抑制多肽euPTX3引起的細(xì)胞球團(tuán)數(shù)，且此項(xiàng)差異具有統(tǒng)計顯著性。然而，添加短肽KT44并不能抑制多肽euPTX3引起的細(xì)胞球團(tuán)數(shù)。

3.評估短肽對癌細(xì)胞的抗藥性的影響

乳癌細(xì)胞MB231、肺癌細(xì)胞A549及鼻咽癌細(xì)胞HONE1具有抗藥性，添加多肽euPTX3可促使前述癌細(xì)胞產(chǎn)生抗藥性。以下利用實(shí)施例一的短肽RI37、短肽GI40、短肽KT44以及多肽euPTX3，與前述癌細(xì)胞共同培養(yǎng)，以實(shí)施例一的數(shù)個短肽對癌細(xì)胞的抗藥性的影響。

將實(shí)施例一的短肽RI37、短肽GI40以及短肽KT44(皆為10μg/mL，225nM)，分別與1×10⁴個細(xì)胞數(shù)的乳癌細(xì)胞MB231、肺癌細(xì)胞A549及鼻咽癌細(xì)胞HONE1進(jìn)行共同培養(yǎng)。經(jīng)培養(yǎng)1周后，分別添加40μM的順鉑(CDDP)或100μM的5-氟尿嘧啶(5-FU)后，再培養(yǎng)48小時。以只添加實(shí)施例一的多肽euPTX3(2.5μg/mL)的細(xì)胞存活率作為100％，利用前述MTT分析法，評估實(shí)施例一的短肽對實(shí)施例二的癌細(xì)胞抗藥性的影響。

參閱圖1D、圖2B及圖3B。圖1D繪示實(shí)施例二的乳癌細(xì)胞MB231利用本發(fā)明實(shí)施例一的數(shù)個短肽培養(yǎng)一周后，對CDDP(左圖)或5-FU(右圖)的抗藥性的細(xì)胞存活率(％)柱形圖。圖2B顯示實(shí)施例二的肺癌細(xì)胞A549利用本發(fā)明實(shí)施例一的數(shù)個短肽培養(yǎng)一周后，對CDDP(左圖)或5-FU(右圖)的抗藥性的細(xì)胞存活率(％)柱形圖。圖3B是實(shí)施例二的鼻咽癌HONE1細(xì)胞利用本發(fā)明實(shí)施例一的數(shù)個短肽培養(yǎng)一周后，對CDDP(左圖)或5-FU(右圖)的抗藥性的細(xì)胞存活率(％)柱形圖。圖1D、圖2B及圖3B的橫軸下方的圖號「－」代表細(xì)胞培養(yǎng)時未添加特定的短肽。

由圖1D、圖2B及圖3B的結(jié)果可知，相較于未添加多肽euPTX3的組別，只添加多肽euPTX3的組別可以增加乳癌細(xì)胞MB231、肺癌細(xì)胞A549及鼻咽癌細(xì)胞HONE1對CDDP或5-FU的抗藥性，提高癌細(xì)胞存活率(％)。

然而，添加短肽RI37及短肽GI40的組別確實(shí)可抑制多肽euPTX3引起的抗藥性，且此項(xiàng)差異具有統(tǒng)計顯著性，其中又以短肽RI37的抑制效果較佳，短肽GI40次之，而添加短肽KT44并不能抑制多肽euPTX3引起的抗藥性。

4.評估短肽對癌細(xì)胞移行的影響

乳癌細(xì)胞MB231、肺癌細(xì)胞A549及鼻咽癌細(xì)胞HONE1可以移行(migration)，添加多肽euPTX3可促進(jìn)前述癌細(xì)胞移行。以下利用實(shí)施例一的短肽RI37、短肽GI40、短肽KT44、多肽euPTX3以及多肽pPTX3/C，與前述癌細(xì)胞共同培養(yǎng)，以實(shí)施例一的數(shù)個短肽對癌細(xì)胞的移行的影響。

將實(shí)施例一的短肽RI37、短肽GI40以及短肽KT44，分別將乳癌細(xì)胞MB231、肺癌細(xì)胞A549及鼻咽癌細(xì)胞HONE1，以5×10⁴細(xì)胞/孔的細(xì)胞密度接種于24孔細(xì)胞培養(yǎng)皿的上層(含有孔徑8μm的微孔)中達(dá)19個小時，由此判斷實(shí)施例一的數(shù)個短肽對實(shí)施例二的癌細(xì)胞移行的影響。

將5×10⁴細(xì)胞/孔的細(xì)胞密度的乳癌細(xì)胞MB231、肺癌細(xì)胞A549或鼻咽癌細(xì)胞HONE1，以5×10⁴細(xì)胞/孔的細(xì)胞密度接種于博登細(xì)胞移行器(Boyden chamber)的上層，并培養(yǎng)3小時。

接著，將上層的細(xì)胞培養(yǎng)液更換為不含血清的細(xì)胞培養(yǎng)液，并于下層的不含血清的細(xì)胞培養(yǎng)基中添加實(shí)施例一的短肽RI37、短肽GI40、短肽KT44、多肽euPTX3以及多肽pPTX3/C。在培養(yǎng)16小時后，以棉棒刮除上層內(nèi)側(cè)的細(xì)胞，利用4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(4’,6-diamidino-2-phenylindole，DAPI；Invitrogen)進(jìn)行染色，并于熒光顯微鏡的放大倍率200倍的視野下，計算移動至上層底部外側(cè)的細(xì)胞數(shù)。

參閱圖1E左圖、圖2C左圖、圖3C左圖以及圖5B左圖。圖1E左圖繪示實(shí)施例二的抗藥性乳癌細(xì)胞MB231R(MBR)利用本發(fā)明實(shí)施例一的數(shù)個短肽培養(yǎng)后的移行細(xì)胞數(shù)柱形圖。圖2C左圖繪示實(shí)施例二的肺癌細(xì)胞A549利用本發(fā)明實(shí)施例一的數(shù)個短肽培養(yǎng)后的移行細(xì)胞數(shù)柱形圖。圖3C左圖繪示實(shí)施例二的鼻咽癌HONE1細(xì)胞利用本發(fā)明實(shí)施例一的數(shù)個短肽培養(yǎng)后的移行細(xì)胞數(shù)柱形圖。其中，圖1E左圖、圖2C左圖、圖3C左圖的多肽euPTX3的添加量為2.5μg/mL，短肽RI37、短肽GI40及KT44的添加量為10μg/mL。

圖5B左圖繪示實(shí)施例二的乳癌細(xì)胞MB231利用本發(fā)明實(shí)施例一的數(shù)個短肽與多肽培養(yǎng)后的移行細(xì)胞數(shù)柱形圖，其中多肽euPTX3的添加量為2.5μg/mL，短肽RI37的添加量3.7μg/mL，短肽GI40的添加量4μg/ml)，多肽pPTX3/C的添加量10μg/mL，使多肽euPTX3、短肽RI37、短肽GI40以及多 肽pPTX3/C的分子數(shù)相同。前述圖1E左圖、圖2C左圖、圖3C左圖以及圖5B左圖的橫軸下方的圖號「－」代表細(xì)胞培養(yǎng)時未添加特定的短肽。

由圖1E左圖、圖2C左圖、圖3C左圖以及圖5B左圖的結(jié)果可知，相較于未添加多肽euPTX3的組別，只添加多肽euPTX3的組別可以增加抗藥性乳癌細(xì)胞MB231R、肺癌細(xì)胞A549及鼻咽癌細(xì)胞HONE1的移行細(xì)胞數(shù)。然而，添加短肽RI37及短肽GI40的組別確實(shí)可抑制多肽euPTX3引起的移行細(xì)胞數(shù)，且此項(xiàng)差異具有統(tǒng)計顯著性，但添加短肽KT44則不能顯著抑制多肽euPTX3引起的移行細(xì)胞數(shù)。

補(bǔ)充說明的是，圖5B左圖進(jìn)一步證實(shí)，相較于只添加短肽RI37或短肽GI40的組別，同時添加短肽RI37及短肽GI40的組別更進(jìn)一步抑制多肽euPTX3引起的移行細(xì)胞數(shù)。雖然添加多肽pPTX3/C可以進(jìn)一步抑制多肽euPTX3引起的移行細(xì)胞數(shù)，但是多肽pPTX3/C分子較大，又同時含有短肽RI37、短肽KT44及短肽GI40的片段，有礙于后續(xù)應(yīng)用至短肽治療劑，而且也因分子量較大而難以提高有效劑量。其次，利用E.coli制備的pPTX3/C雖無活化糖基的引入，但考慮由E.coli產(chǎn)生的多肽容易有內(nèi)毒素(例如LPS)污染的問題，直接使用于治療時會有較大的風(fēng)險，故以人工的方式直接化學(xué)合成短肽RI37、短肽KT44及短肽GI40，其優(yōu)勢除了分子量較小，也解決了內(nèi)毒素污染的問題。

5.評估短肽對癌細(xì)胞的侵襲能力的影響

乳癌細(xì)胞MB231、肺癌細(xì)胞A549及鼻咽癌細(xì)胞HONE1可以侵襲，添加多肽euPTX3可促進(jìn)前述癌細(xì)胞侵襲。以下利用實(shí)施例一的短肽RI37、短肽GI40、短肽KT44、多肽euPTX3以及多肽pPTX3/C，與前述癌細(xì)胞共同培養(yǎng)，以評估實(shí)施例一的數(shù)個短肽對癌細(xì)胞的侵襲的影響。

將5×10⁴細(xì)胞/孔的細(xì)胞密度的乳癌細(xì)胞MB231、肺癌細(xì)胞A549或鼻咽癌細(xì)胞HONE1，以5×10⁴細(xì)胞/孔的細(xì)胞密度接種于博登細(xì)胞移行器(Boyden chamber)的上層，而上層與下層之間預(yù)先以基底膜基質(zhì)(matrigel，購自BD Bioscience)涂覆的聚對苯二甲酸乙二酯膜(polyethelene terephthalate membrane)分隔，并培養(yǎng)3小時。

接著，將上層的細(xì)胞培養(yǎng)液更換為不含血清的細(xì)胞培養(yǎng)液，并于下層的 不含血清的細(xì)胞培養(yǎng)基中添加實(shí)施例一的短肽RI37、短肽GI40、短肽KT44、多肽euPTX3以及多肽pPTX3/C。在培養(yǎng)16小時后，以棉棒刮除上層內(nèi)側(cè)的細(xì)胞，利用4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI；Invitrogen)進(jìn)行染色，并于熒光顯微鏡的放大倍率200倍的視野下，計算移動至上層底部外側(cè)的細(xì)胞數(shù)。

參閱圖1E右圖、圖2C右圖、圖3C右圖以及圖5B右圖。圖1E右圖繪示實(shí)施例二的抗藥性乳癌細(xì)胞MB231R(MBR)利用本發(fā)明實(shí)施例一的數(shù)個短肽培養(yǎng)后的侵襲細(xì)胞數(shù)柱形圖。圖2C右圖繪示實(shí)施例二的肺癌細(xì)胞A549利用本發(fā)明實(shí)施例一的數(shù)個短肽培養(yǎng)后的侵襲細(xì)胞數(shù)柱形圖。圖3C右圖繪示實(shí)施例二的鼻咽癌HONE1細(xì)胞利用本發(fā)明實(shí)施例一的數(shù)個短肽培養(yǎng)后的侵襲細(xì)胞數(shù)柱形圖。其中，圖1E右圖、圖2C右圖及圖3C右圖的多肽euPTX3的添加量為2.5μg/mL，短肽RI37、短肽GI40及KT44的添加量為10μg/mL。

圖5B右圖繪示實(shí)施例二的乳癌細(xì)胞MB231利用本發(fā)明實(shí)施例一的數(shù)個短肽與多肽培養(yǎng)后的侵襲細(xì)胞數(shù)柱形圖，其中圖5B右圖的多肽euPTX3的添加量為2.5μg/mL，短肽RI37的添加量3.7μg/mL，短肽GI40的添加量4μg/ml)，多肽pPTX3/C的添加量10μg/mL，使多肽euPTX3、短肽RI37、短肽GI40以及多肽pPTX3/C的分子數(shù)相同。前述圖1E右圖、圖2C右圖、圖3C右圖以及圖5B右圖的橫軸下方的圖號「－」代表細(xì)胞培養(yǎng)時未添加特定的短肽。

由圖1E右圖、圖2C右圖、圖3C右圖以及圖5B右圖的結(jié)果可知，相較于未添加多肽euPTX3的組別，只添加多肽euPTX3的組別可以增加抗藥性乳癌細(xì)胞MB231R(MBR)、肺癌細(xì)胞A549及鼻咽癌細(xì)胞HONE1的侵襲細(xì)胞數(shù)。然而，添加短肽RI37及短肽GI40的組別確實(shí)可抑制多肽euPTX3引起的侵襲細(xì)胞數(shù)，且此項(xiàng)差異具有統(tǒng)計顯著性，但添加短肽KT44則不能顯著抑制多肽euPTX3引起的侵襲細(xì)胞數(shù)。

補(bǔ)充說明的是，圖5B右圖進(jìn)一步證實(shí)，相較于只添加短肽RI37或短肽GI40的組別，同時添加短肽RI37及短肽GI40的組別更進(jìn)一步抑制多肽euPTX3引起的侵襲細(xì)胞數(shù)。雖然添加多肽pPTX3/C可以進(jìn)一步抑制多肽euPTX3引起的細(xì)胞侵襲數(shù)，但是多肽pPTX3/C分子較大，又同時含有短肽RI37、短肽KT44及短肽GI40的片段，有礙于后續(xù)應(yīng)用至短肽治療劑，而且 也因分子量較大而難以提高有效劑量。其次，利用E.coli制備的pPTX3/C雖無活化糖基的引入，但考慮由E.coli產(chǎn)生的多肽容易有內(nèi)毒素(例如LPS)污染的問題，直接使用于治療時會有較大的風(fēng)險，故以人工的方式直接化學(xué)合成短肽RI37、短肽KT44及短肽GI40，其優(yōu)勢除了分子量較小，也解決了內(nèi)毒素污染的問題。

實(shí)施例四：利用動物試驗(yàn)?zāi)Ｊ皆u估短肽對腫瘤的影響

1.建立動物試驗(yàn)?zāi)Ｊ?/p>

此實(shí)施例是將1×10⁶的mCherry紅熒光蛋白標(biāo)記的小鼠抗藥性乳癌細(xì)胞株[mCherry fluorescent CDDP-resistant mouse 4T1(ATCC CRL-2539)，4T1R]，皮下接種至6至8周齡的BALB/c雌性小鼠(購自臺灣成功大學(xué)動物中心)的背部后側(cè)。接種1周后，小鼠每周以腹腔注射1次5mg/kg的CDDP(溶于1％(w/v)DMSO)或只有1％(w/v)DMSO，并于腫瘤內(nèi)不注射或每周注射3次實(shí)施例一的短肽RI37、短肽KT44及短肽GI40(皆為50μg)，小鼠于接種癌細(xì)胞6周后犧牲，取出脾、腎、肺及肝，測量其腫瘤重量(每組6重復(fù))，并利用IVIS光譜成像系統(tǒng)(IVIS Spectrum Imaging System 200，Caliper)判斷癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移活性以及各臟器的轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)(number of metastatic nodules per organ)。腫瘤大小通過市售的外部測徑器測量，并利用下式(I)計算腫瘤體積(V)：

V＝(w×l²)×0.52 (I)

在式(I)中，w為腫瘤寬度，l為腫瘤長度。每一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件至少重復(fù)三次。

另外，將1×10⁶的mCherry紅熒光蛋白標(biāo)記的人類抗藥性乳癌細(xì)胞株(mCherry fluorescent CDDP-resistant MDA-MB-231，MB231R)，皮下接種至6至8周齡的NOD-SCID雌性免疫缺陷小鼠(購自臺灣成功大學(xué)動物中心)的背部后側(cè)。接種1周后，小鼠每周以腹腔注射1次5mg/kg的CDDP(溶于1％(w/v)DMSO)或只有1％(w/v)DMSO，并于腫瘤內(nèi)不注射或每周注射3次實(shí)施例一的短肽RI37、短肽KT44及短肽GI40(皆為50μg)，小鼠于接種癌細(xì)胞10周后處死，取出脾、腎、肺及肝，測量其腫瘤重量(每組3重復(fù))，并利用IVIS光譜成像系統(tǒng)判斷癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移活性以及各臟器的轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)。腫瘤大 小是通過市售的外部測徑器量測，并利用上式(I)計算腫瘤體積(V)。每一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件至少重復(fù)三次。

2.評估短肽對同種移植腫瘤的影響

參閱圖4A，其繪示于活體內(nèi)利用本發(fā)明實(shí)施例一的數(shù)個短肽(左圖)或并用CDDP(右圖)減緩4T1R抗藥性乳癌腫瘤大小的曲線圖。由圖4A的結(jié)果可知，本發(fā)明實(shí)施例一的短肽RI37及短肽GI40皆可抑制腫瘤的成長，并降低抗藥性乳癌細(xì)胞4T1R產(chǎn)生的腫瘤的抗藥性，其中又以短肽RI37的抑制效果較佳，短肽GI40次之，而短肽KT44并無顯著抑制效果。

參閱圖4B，其繪示圖4A的活體內(nèi)每個肺中轉(zhuǎn)移性結(jié)節(jié)數(shù)(左圖)以及腫瘤重(右圖)的柱形圖。由圖4B的結(jié)果可知，本發(fā)明實(shí)施例一的短肽RI37及短肽GI40皆可抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移及成長，其中又以短肽RI37的抑制效果較佳，短肽GI40次之，而短肽KT44并無顯著抑制效果。

參閱圖4C，其示出圖4A的活體內(nèi)不同器官的腫瘤影像及其落射熒光(epifluorescence)輻射效率。由圖4C的結(jié)果可知，本發(fā)明實(shí)施例一的短肽RI37及短肽GI40皆可抑制活體內(nèi)腫瘤的轉(zhuǎn)移及成長，而短肽KT44并無顯著抑制效果，在肺臟可發(fā)現(xiàn)有癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的結(jié)節(jié)。

3.評估短肽對異種移植腫瘤的影響

參閱圖4D，其繪示于活體內(nèi)利用本發(fā)明實(shí)施例一的數(shù)個短肽(左圖)或并用CDDP(右圖)減緩MB231R(MBR)抗藥性乳癌腫瘤大小的曲線圖。由圖4D的結(jié)果可知，本發(fā)明實(shí)施例一的短肽RI37及短肽GI40皆可抑制腫瘤的成長，并降低抗藥性乳癌細(xì)胞MB231R(MBR)產(chǎn)生的腫瘤的抗藥性，其中又以短肽RI37的抑制效果較佳，短肽GI40次之，而短肽KT44并無顯著抑制效果。

參閱圖4E，其繪示圖4D的活體內(nèi)每個肺中轉(zhuǎn)移性結(jié)節(jié)數(shù)(左圖)以及腫瘤重(右圖)的柱形圖。由圖4E的結(jié)果可知，本發(fā)明實(shí)施例一的短肽RI37及短肽GI40皆可抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移及成長，其中又以短肽RI37的抑制效果較佳，短肽GI40次之，而短肽KT44并無顯著抑制效果。

參閱圖4F，其示出圖4D的活體內(nèi)不同器官的腫瘤影像及其落射熒光輻 射效率。由圖4F的結(jié)果可知，本發(fā)明實(shí)施例一的短肽RI37及短肽GI40皆可抑制活體內(nèi)腫瘤的轉(zhuǎn)移及成長，而短肽KT44并無顯著抑制效果，在肺臟可發(fā)現(xiàn)有癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的結(jié)節(jié)。

上述實(shí)施例的數(shù)據(jù)皆是將每一時間點(diǎn)及每一樣品的三個重復(fù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，正負(fù)其平均標(biāo)準(zhǔn)差而獲得，所有的值皆通過單因子變異數(shù)分析(one wayANOVA)而分析。上述實(shí)施例的圖號＊代表具有統(tǒng)計顯著性(p＜0.05)的數(shù)據(jù)，圖號＊＊代表具有統(tǒng)計顯著性(p＜0.01)的數(shù)據(jù)，圖號＊＊＊代表具有統(tǒng)計顯著性(p＜0.001)的數(shù)據(jù)。

綜上所述，由上述數(shù)個實(shí)施例證實(shí)，使用本發(fā)明實(shí)施例一氨基酸殘基不超過40個的短肽RI37和/或短肽GI40，可有效抑制內(nèi)生性PTX3的活性，進(jìn)而專一性抑制癌細(xì)胞的增生、癌干原細(xì)胞性、移行、侵襲、轉(zhuǎn)移或抗藥性等活動。因此，本發(fā)明實(shí)施例一的短肽可作為短肽治療劑，應(yīng)用于制備專一性抑制PTX3活性的醫(yī)藥組合物。

需補(bǔ)充的是，本發(fā)明雖以特定范圍的短肽、特定的工藝、特定的分析方法或特定儀器作為例示，說明本發(fā)明抑制正五聚蛋白相關(guān)蛋白活性的短肽治療劑及含有它的醫(yī)藥組合物，但本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域中任何普通技術(shù)人員可知，本發(fā)明并不限于此，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)，本發(fā)明的短肽治療劑及含有它的醫(yī)藥組合物亦可使用更短的短肽、其它工藝、其它分析方法或其它儀器進(jìn)行。

由上述實(shí)施例可知，本發(fā)明的短肽治療劑及含有它的醫(yī)藥組合物，其優(yōu)點(diǎn)在于使用氨基酸殘基不超過40個的短肽RI37和/或短肽GI40，可有效抑制內(nèi)生性PTX3的活性，進(jìn)而專一性抑制癌細(xì)胞的增生、癌干原細(xì)胞性、移行、侵襲、轉(zhuǎn)移或抗藥性等活動。

雖然本發(fā)明已以數(shù)個實(shí)施例揭露如上，然而其并非用以限定本發(fā)明，本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域中任何普通技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)，可作各種修改與改變，因此本發(fā)明的保護(hù)范圍以所附權(quán)利要求書中所界定為準(zhǔn)。