本發(fā)明涉及一種生產賴氨酸的方法。
背景技術：
：賴氨酸是人體必需氨基酸之一，能促進人體發(fā)育、增強免疫功能，并有提高中樞神經組織功能的作用。賴氨酸為堿性必需氨基酸。由于谷物食品中的賴氨酸含量甚低，且在加工過程中易被破壞而缺乏，故稱為第一限制性氨基酸。2012年全球賴氨酸產能(折合98.5％)約276萬噸，同比增長36.49％，其中中國約142萬噸，同比增長51.56％，中國占全球賴氨酸產能的比重不斷增加，是全球最大的賴氨酸生產國。2012年，中國賴氨酸供應廠家由原來的8家增加到12家。2013年全球98.5％賴氨酸產能約349萬噸，同比增長26.42％。而我國擁有賴氨酸產能的廠家從12家增加至17家，98.5％賴氨酸產能約205萬噸，同比增長45.21％，占全球比重為59％，份額增加了8個百分點。目前賴氨酸行業(yè)仍一直在處于快速的發(fā)展階段。目前我國賴氨酸發(fā)酵均采用間歇發(fā)酵的方法，發(fā)酵采用每罐按照一定的比例投入發(fā)酵培養(yǎng)基并接入一定的賴氨酸發(fā)酵菌種，在流加碳源和流加氮源的條件下，進行發(fā)酵培養(yǎng)。但采用現有方法得到的發(fā)酵培養(yǎng)液中賴氨酸的酸度較低，并且糖酸轉化率也較低。技術實現要素：本發(fā)明的目的是為了克服上述缺陷，提供一種能夠提高賴氨酸的酸度以及糖酸轉化率的生產賴氨酸的方法。本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現，在進行賴氨酸發(fā)酵的過程中，通過在賴氨酸發(fā)酵培養(yǎng)液中添加醋酸，能夠有效的提高賴氨酸的產量以及糖酸轉化率?；诖耍景l(fā)明提供了一種生產賴氨酸的方法，該方法包括，將賴氨酸發(fā)酵菌種接入賴氨酸發(fā)酵培養(yǎng)液中，在流加碳源和流加氮源的條件下，進行發(fā)酵培養(yǎng)，其中，該方法還包括，在發(fā)酵培養(yǎng)的過程中，向所述賴氨酸發(fā)酵培養(yǎng)液中添加醋酸。通過上述技術方案，有效地提高了發(fā)酵終點的酸度以及糖酸轉化率，以實施例1為例，通過在培養(yǎng)基中添加醋酸，酸度可由原來的16.5％提高至17％，糖酸轉化率可由原來的60.5％提高至61.5％。以目前的賴氨酸產量來看，本申請能夠產生可觀的經濟效益。本發(fā)明的其他特征和優(yōu)點將在隨后的具體實施方式部分予以詳細說明。具體實施方式以下對本發(fā)明的具體實施方式進行詳細說明。應當理解的是，此處所描述的具體實施方式僅用于說明和解釋本發(fā)明，并不用于限制本發(fā)明。本發(fā)明提供了一種生產賴氨酸的方法，該方法包括，將賴氨酸發(fā)酵菌種接入賴氨酸發(fā)酵培養(yǎng)液中，在流加碳源和流加氮源的條件下，進行發(fā)酵培養(yǎng)，其中，該方法還包括，在發(fā)酵培養(yǎng)的過程中，向所述賴氨酸發(fā)酵培養(yǎng)液中添加醋酸。本發(fā)明對醋酸的添加方式沒有特別的限制，例如，可以在培養(yǎng)基的配制時一次性加入，也可以在發(fā)酵培養(yǎng)的過程中單獨以流加的方式加入，還可以與流加的營養(yǎng)物質(例如碳源)混合在一起以流加的方式加入。綜合考慮發(fā)酵效果以及操作的繁瑣性，優(yōu)選將將醋酸與流加的碳源混合，并以混合液的形式流加入所述賴氨酸發(fā)酵培養(yǎng)液中。盡管只要在發(fā)酵培養(yǎng)基中添加醋酸即可實現本發(fā)明的目的，但本發(fā)明的 發(fā)明人發(fā)現，當醋酸單獨流加時，以每升賴氨酸發(fā)酵培養(yǎng)液為基準，醋酸的流速為0.3-0.5克/小時，或者，當在所述混合液流加時中，以所述混合液的總量為基準，醋酸的含量在0.2-1.5體積％，優(yōu)選0.5-1體積％的情況下，發(fā)酵終點的酸度以及糖酸轉化率會得到進一步提高。根據本發(fā)明，當醋酸和流加的碳源作為混合液流加時，醋酸的添加時機與碳源的流加時機相同，優(yōu)選地，當發(fā)酵菌種的OD值達到0.3-0.5時，開始向所述賴氨酸發(fā)酵培養(yǎng)液中流加所述混合液。另外，當醋酸不以所述混合液的形式添加時，由于發(fā)酵菌種的OD值在達到0.3-0.5之前處于生長的調整期，這段時間內其一般不進行賴氨酸的合成或合成很少，所以，也可以在當發(fā)酵菌種的OD值達到0.3-0.5時，再單獨添加醋酸。另外，根據本發(fā)明的發(fā)明人的實際經驗，發(fā)酵菌種的OD值達到0.3-0.5時的發(fā)酵培養(yǎng)時間一般為3-6小時，因此，本領域技術人員也可以根據實際經驗選擇合適的時間點添加醋酸，例如，在發(fā)酵培養(yǎng)的6-9小時。本發(fā)明中，以接種后且流加碳源和流加氮源之前的發(fā)酵培養(yǎng)基為基準，賴氨酸發(fā)酵菌種的接種量為12-18體積％。本領域技術人員應該理解的是，賴氨酸發(fā)酵菌種在被接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中之前，采用常規(guī)方法將賴氨酸發(fā)酵菌種經過種子罐培養(yǎng)，在種子罐培養(yǎng)的培養(yǎng)程度可以通過取樣顯微鏡鏡檢、OD(opticaldensity)值測定對產賴氨酸微生物的生長進行觀察，當通過上述方法觀察菌體形態(tài)正常、測定OD值達到0.75以上時停止培養(yǎng)，將此時種子罐中的種子液稱為成熟種子液。然后再將成熟種子液接入發(fā)酵培養(yǎng)基中。因此，本發(fā)明中，賴氨酸發(fā)酵菌種的接種量為12-18體積％，指的是接入發(fā)酵培養(yǎng)基中的成熟種子液的體積占接入成熟種子液后發(fā)酵培養(yǎng)基體積的12-18％。種子罐培養(yǎng)可以采用一級種子罐培養(yǎng)也可以采用二級種子罐培養(yǎng)，一級 種子罐培養(yǎng)即將賴氨酸發(fā)酵菌種在一個種子罐中一直培養(yǎng)到所需的培養(yǎng)程度；二級種子罐培養(yǎng)即先將賴氨酸發(fā)酵菌種在一個種子罐中培養(yǎng)一段時間后再轉入另一個種子罐繼續(xù)培養(yǎng)，培養(yǎng)到所需的培養(yǎng)程度。二級種子罐培養(yǎng)在各個種子罐的培養(yǎng)時間沒有具體限定，只要最終能培養(yǎng)到所需的培養(yǎng)程度即可。為了操作方便，本發(fā)明的種子罐培養(yǎng)優(yōu)選采用一級種子罐培養(yǎng)。本發(fā)明中，對于種子罐培養(yǎng)基的成分無特殊要求，可以采用本領域常用的種子罐培養(yǎng)基，例如，可以用淀粉質原料糖化清液、玉米漿、磷酸氫二鉀、硫酸鎂、硫酸銨、蘇氨酸和蛋氨酸等配制種子罐培養(yǎng)基。根據本發(fā)明，每升種子罐培養(yǎng)基中各原料的用量可以在很大范圍內改變，優(yōu)選情況下，每升種子罐培養(yǎng)基中，淀粉質原料糖化清液的用量可以為30-40克，玉米漿(干重為20-50重量％)的用量可以為70-90克，磷酸氫二鉀的用量可以為0.5-1.5克，硫酸鎂的用量可以為0.4-1.1克，硫酸銨的用量可以為5-15克，蘇氨酸的用量可以為0.1-0.6克，蛋氨酸的用量可以為0.1-0.3克。本發(fā)明中，流加醋酸和碳源的混合液的量使發(fā)酵培養(yǎng)液中還原性糖的濃度控制在5-10克/升，流加氮源的量使發(fā)酵培養(yǎng)液中氮源的濃度控制在0.35-0.8克/升。此處“流加醋酸和碳源的混合液的量使發(fā)酵培養(yǎng)液中還原性糖的濃度控制在5-10克/升，流加氮源的量使發(fā)酵培養(yǎng)液中氮的濃度控制在0.35-0.8克/升”是指通過控制流加醋酸和碳源的混合液以及流加氮源的速度來使在整個發(fā)酵培養(yǎng)過程中發(fā)酵培養(yǎng)液中還原性糖的濃度維持在5-10克/升，使發(fā)酵培養(yǎng)液中氮的濃度維持在0.35-0.8克/升。本發(fā)明的發(fā)明人在實驗中發(fā)現，對于醋酸和碳源的混合液以及氮源的流加，連續(xù)流加比間歇流加的發(fā)酵效果好，因此，本發(fā)明中的流加優(yōu)選為連續(xù)流加。本發(fā)明中，發(fā)酵培養(yǎng)在發(fā)酵罐中進行，為了有效利用發(fā)酵罐的產能，接種后且流加醋酸和碳源的混合液以及流加氮源之前發(fā)酵罐中的培養(yǎng)基的體 積優(yōu)選為發(fā)酵罐體積的40-60％，隨著流加醋酸和碳源的混合液以及流加氮源，發(fā)酵罐中的培養(yǎng)基的體積逐漸增大，為了保證發(fā)酵罐中的空氣量，優(yōu)選為流加醋酸和碳源的混合液以及流加氮源至發(fā)酵罐體積的70-80％時放料，為了保證放料后發(fā)酵罐中的菌種數量，不影響放料后發(fā)酵罐中的發(fā)酵培養(yǎng)，放料體積優(yōu)選為放料前發(fā)酵罐中培養(yǎng)基體積的5-10％?，F有技術中，將賴氨酸發(fā)酵菌種接入賴氨酸發(fā)酵培養(yǎng)基中，在流加醋酸和碳源的混合液以及流加氮源的條件下，進行發(fā)酵培養(yǎng)，隨著發(fā)酵的進行，賴氨酸酸度逐漸提高，營養(yǎng)物質逐漸降低，發(fā)酵產酸速率呈下降趨勢，當營養(yǎng)物質降低到一定程度后，發(fā)酵產酸速率降低到一定程度即判斷為發(fā)酵終點，達到發(fā)酵終點即放罐，放罐是指將發(fā)酵罐中的培養(yǎng)基全部從發(fā)酵罐中放出，即停止發(fā)酵。一般發(fā)酵培養(yǎng)40-55小時后放罐。本領域技術人員應該理解的是，為了得到純度較高的賴氨酸產品，本發(fā)明方法還包括從放料或放罐的溶液中提取賴氨酸。對于提取賴氨酸的方法無特殊要求，可以采用本領域常用的各種方法，例如，采用連續(xù)離子交換分離提取方法，向放料或放罐的溶液中加入大量的濃硫酸調pH至2.0-3.0進行酸化，酸化后經過金屬膜或陶瓷膜過濾除去菌體，得到賴氨酸膜濾液即賴氨酸清液，或將酸化后的賴氨酸發(fā)酵培養(yǎng)液經絮凝過濾除菌體后得到賴氨酸清液，除菌體后的賴氨酸清液采用強酸型陽離子交換樹脂進行吸附交換，樹脂吸附飽和后用稀氨水進行洗脫，洗脫下來的賴氨酸經濃縮、鹽酸調節(jié)pH值、結晶、固液分離、烘干，得到賴氨酸鹽酸鹽成品；或者在放料或放罐的溶液中加入酸，使賴氨酸發(fā)酵培養(yǎng)液酸化，經過濾或離心等方法除去菌體。在除去菌體后的賴氨酸清液中加入氫氧化鈣調節(jié)pH值至8.0-11.5，使賴氨酸清液中的鹽、膠體等雜質生成不溶物，經固液分離后得到賴氨酸溶液，將賴氨酸溶液濃縮至每毫升賴氨酸溶液中賴氨酸的含量為0.6-0.8g，再經過過濾可以得到高純度的賴氨酸溶液，然后經濃縮、鹽酸調節(jié)pH值、結晶、固液分離、 烘干，得到賴氨酸鹽酸鹽成品。本發(fā)明中，對發(fā)酵培養(yǎng)的條件無特殊要求，可以采用本領域常用的條件，例如，溫度為35-38℃，壓力為0.05-0.1MPa，pH值為6.7-7.0，通氣量為0.5-1.2立方米空氣/立方米的培養(yǎng)基/分鐘，通氣量優(yōu)選為0.7-1.0立方米空氣/立方米的培養(yǎng)基/分鐘。本發(fā)明中，對賴氨酸發(fā)酵菌種的種類無特殊要求，可以采用本領域常用的菌種，優(yōu)選為谷氨酸棒桿菌、大腸桿菌和黃色短桿菌中的至少一種。本發(fā)明中，碳源優(yōu)選為淀粉質原料糖化清液。本發(fā)明中，淀粉質原料糖化清液既可以采用干法制糖工藝制備，也可以采用濕法制糖工藝制備。從工藝簡單、設備投資少，生產成本較低的方面考慮，優(yōu)選通過干法制糖工藝制備。干法制糖工藝是指淀粉質原料不經浸泡直接進行破碎和酶解。干法制糖工藝可以包括：將淀粉質原料粉碎，將淀粉質原料粉碎后的產物調漿，并加入淀粉酶對淀粉進行第一次水解；對第一次水解產物進行固液分離，并在得到的液相組分中加入糖化酶進行第二次水解，得到淀粉質原料糖化清液。優(yōu)選地，粉碎使淀粉質原料過30目篩的通過率大于75％，更優(yōu)選過30目篩的通過率為100％。調漿的方法為本領域技術人員所熟知，但優(yōu)選地，調漿的方法可以包括將淀粉質原料粉碎后的產物加入到水中混合均勻，水的加入量使得到的漿液的波美度可以為9-17Bé°。術語“波美度”是表示溶液濃度的一種方法，是通過波美比重計檢測溶液得到的度數。根據本發(fā)明，在第一次水解中，以每克粉碎后的產物的干重計，淀粉酶的用量可以為10-30酶活力單位，酶解的溫度可以為88-92℃，酶解的時間可以為90-120分鐘，酶解的pH值可以為5.5-6.0。固液分離的條件沒有特別的限定，優(yōu)選地，固液分離的條件使得到的液相組分中的固含量為19-22重量％，更優(yōu)選為20-21重量％。根據本發(fā)明，在第二次水解中，以每克液相組分計，糖化酶的用量可以為110-130酶活力單位，酶解的溫度可以為55-65℃，酶解的時間可以為420-600分鐘，酶解的pH值可以為4.0-4.5。本發(fā)明酶活力單位的定義為：在pH值為6.0、溫度為70℃的條件下，1分鐘將1毫克淀粉轉化為還原性糖所需的酶量為一個酶活力單位。淀粉酶是指能夠分解淀粉糖苷鍵的一類酶的總稱，所述淀粉酶一般包括α-淀粉酶、β-淀粉酶。α-淀粉酶又稱淀粉1,4-糊精酶，它能夠任意地、不規(guī)則地切開淀粉鏈內部的α-1,4-糖苷鍵，將淀粉水解為麥芽糖、含有6個葡萄糖單位的寡糖和帶有支鏈的寡糖。生產此酶的微生物主要有枯草桿菌、黑曲霉、米曲霉和根霉。β-淀粉酶又稱淀粉1,4-麥芽糖苷酶，能夠從淀粉分子非還原性末端切開1,4-糖苷鍵，生成麥芽糖。此酶作用于淀粉的產物是麥芽糖與極限糊精。此酶主要由曲霉、根霉和內孢霉產生。根據本發(fā)明，所述淀粉酶優(yōu)選為α-淀粉酶。根據本發(fā)明，糖化酶優(yōu)選為α-1,4-葡萄糖水解酶。按照本發(fā)明，淀粉質原料可以為本領域公知的各種可以用于酶解、發(fā)酵制備賴氨酸的含有淀粉的原料，例如，可以選自玉米、薯類(如木薯)和小麥中的一種或幾種。本發(fā)明中，氮源的種類為本領域技術人員所公知，例如，可以為銨鹽。當氮源為銨鹽時，培養(yǎng)基中氮的濃度以銨根離子的濃度表示，氮的濃度控制在0.35-0.8克/升，則銨根離子的濃度控制在0.5-1.0克/升。本發(fā)明中，發(fā)酵培養(yǎng)基的成分無特殊要求，可以采用本領域常用的賴氨酸發(fā)酵培養(yǎng)基，例如，可以用淀粉質原料糖化清液、糖蜜、玉米漿、硫酸銨、磷酸氫二鉀、硫酸鎂、蘇氨酸、蛋氨酸和谷氨酸等配制發(fā)酵培養(yǎng)基。根據本發(fā)明，每升發(fā)酵培養(yǎng)基中各原料的用量可以在很大范圍內改變，優(yōu)選情況下， 每升發(fā)酵培養(yǎng)基中，淀粉質原料糖化清液的用量可以為40-60克，糖蜜的用量可以為30-50克，玉米漿(干重為20-50重量％)的用量可以為20-40克，硫酸銨的用量可以為20-40克，磷酸氫二鉀的用量可以為0.5-1.5克，硫酸鎂的用量可以為0.4-0.6克，蘇氨酸的用量可以為0.1-0.3克，蛋氨酸的用量可以為0.1-0.3克，谷氨酸的用量可以為0.2-0.4克。另外，本領域技術人員應該理解的是，接入種子罐進行培養(yǎng)的菌種為經過活化后進行增殖培養(yǎng)后的菌種。活化和增殖培養(yǎng)為本領域的公知常識，在此不再贅述。以下的實施例將對本發(fā)明作進一步的說明，但并不因此限制本發(fā)明。在下述實施例和對比例中：OD值測定：將取樣的發(fā)酵培養(yǎng)液進行26倍稀釋，采用722N可見光分光光度計，在波長562納米可見光下測定吸光值。按照GB/T5009.7-2008的方法測定發(fā)酵培養(yǎng)液中還原性糖的濃度。按照GB3595-83的方法測定發(fā)酵培養(yǎng)液中銨根離子的濃度。按照GB10794-89標準檢測培養(yǎng)基中的賴氨酸濃度(以賴氨酸鹽酸鹽計)。單罐供酸量＝(放罐的賴氨酸濃度×放罐體積+中間放料賴氨酸濃度×中間放料體積)。轉化率(％)＝單罐供酸量/總糖的重量×100％，其中總糖的重量包括種子罐用糖重量和發(fā)酵罐用糖重量。實施例1本實施例用于說明本發(fā)明提供的賴氨酸的生產方法。(1)將收獲的100重量份玉米通過機械加工將玉米顆粒粉碎，使玉米 粉過30目篩的通過率為80％。(2)將粉碎后的產物加水調漿至12Bé°，相對于每克粉碎產物的干重，加入20個酶活力單位的淀粉酶(諾維信公司，α-淀粉酶)，在90℃、pH為5.5的條件下酶解100分鐘，得到酶解產物。其中，將酶解產物通過用液壓式板框壓濾機進行壓濾，分離出酶解清液(固含量為20重量％)；之后加入115個酶活力單位的糖化酶(α-1,4-葡萄糖水解酶，諾維信公司)，在60℃、pH為4.5的條件下酶解420分鐘，得到淀粉質原料糖化清液。(3)使用步驟(2)得到的淀粉質原料糖化清液配制種子罐培養(yǎng)基，具體組成為：相對于每升的培養(yǎng)基，淀粉質原料糖化清液的用量為35克，玉米漿(干重為35重量％)的用量為80克，磷酸氫二鉀的用量為1.0克，硫酸鎂的用量為0.5克，硫酸銨的用量為10克，蘇氨酸的用量為0.2克，蛋氨酸的用量為0.2克。將培養(yǎng)基加熱到121℃消毒，維持20分鐘后降溫至37℃并保持恒定。開啟攪拌，調節(jié)罐壓為0.1MPa，按照通風量與培養(yǎng)基1:0.5體積比通入無菌空氣，用氨水調節(jié)pH至6.8并保持恒定。然后將黃色短桿菌菌種(菌株原種FB42購自江南大學)活化和增殖后接入種子罐中進行培養(yǎng)，培養(yǎng)過程中每隔120分鐘取樣鏡檢并測定OD值，當鏡檢菌體形態(tài)正常且OD值達到0.8時停止培養(yǎng)，得到成熟種子液。(4)使用步驟(2)得到的淀粉質原料糖化清液配制發(fā)酵培養(yǎng)基，具體組成為：相對于每升發(fā)酵培養(yǎng)基，淀粉質原料糖化清液的用量為50克，糖蜜(產地新疆)的用量為40克，玉米漿(干重為35重量％)的用量為30克，硫酸銨的用量為30克，磷酸氫二鉀的用量為1.0克，硫酸鎂的用量為0.5克，蘇氨酸的用量為0.2克，蛋氨酸的用量為0.2克，谷氨酸的用量為0.3克。培養(yǎng)基加熱到121℃消毒30分鐘后降溫至37℃并保持恒定，用氨水調節(jié)pH至6.9。(5)在發(fā)酵罐中裝入步驟(4)配制好的發(fā)酵培養(yǎng)基，發(fā)酵培養(yǎng)基體積 為發(fā)酵罐體積的50％。使用步驟(3)所得的成熟種子液，接入發(fā)酵罐的培養(yǎng)基中進行發(fā)酵培養(yǎng)，以接種后的發(fā)酵培養(yǎng)基為基準，步驟(3)所得的成熟種子液的接種量為15體積％。接種后，當發(fā)酵菌種的OD值達到0.4時，連續(xù)流加含有0.7體積％醋酸的步驟(2)得到的淀粉質原料糖化清液和硫酸銨，流加量使發(fā)酵培養(yǎng)液中還原性糖的濃度控制在6-8克/升，流加硫酸銨的量使發(fā)酵培養(yǎng)液中銨根離子的濃度控制在0.6-0.8克/升，將罐壓控制為0.1MPa，發(fā)酵溫度控制為37℃，通氣量為0.7立方米空氣/立方米的培養(yǎng)基/分鐘，并用液氨調節(jié)pH維持在6.9進行發(fā)酵培養(yǎng)。流加含有0.7體積％醋酸的步驟(2)得到的淀粉質原料至發(fā)酵罐體積的75％時放料，放料體積為放料前發(fā)酵罐中培養(yǎng)基體積的8％。發(fā)酵培養(yǎng)52小時后放罐，測定放罐的賴氨酸濃度(即終點賴氨酸含量，下同)和中間放料的賴氨酸濃度，計算發(fā)酵終點的酸度和轉化率見表1。實施例2本實施例用于說明本發(fā)明提供的賴氨酸的生產方法。淀粉質原料糖化清液的制備方法、種子罐培養(yǎng)基配方、種子罐成熟種子液培養(yǎng)方法、發(fā)酵罐培養(yǎng)基配方均與實施例1相同。發(fā)酵罐中的培養(yǎng)基體積為發(fā)酵罐體積的40％。將成熟種子液接入發(fā)酵罐的培養(yǎng)基中進行發(fā)酵培養(yǎng)，以接種后的發(fā)酵培養(yǎng)基為基準，種子液的接種量為12體積％。接種后，當發(fā)酵菌種的OD值達到0.3時，連續(xù)流加制得含有0.6體積％醋酸的淀粉質原料糖化清液和硫酸銨，流加制得含有0.6體積％醋酸的淀粉質原料糖化清液的量使發(fā)酵培養(yǎng)液中還原性糖的濃度控制在5-7克/升，流加硫酸銨的量使發(fā)酵培養(yǎng)液中銨根離子的濃度控制在0.5-0.7克/升，將罐壓控制為0.08MPa，發(fā)酵溫度控制為35℃，通氣量為0.8立方米空氣/立方米的培養(yǎng)基/分鐘，并用液氨調節(jié)pH維持在6.7進行發(fā)酵培養(yǎng)。流加制得含有0.6體積％醋酸的淀粉質原料糖化清液和硫酸銨至發(fā)酵罐體積的70％時放料，放料體積為放料前發(fā)酵罐中培養(yǎng)基體積的5％。發(fā)酵培養(yǎng)52小時后放罐，測定放罐的賴氨酸濃度和中間放料的賴氨酸濃度，計算發(fā)酵終點的酸度和轉化率見表1。實施例3本實施例用于說明本發(fā)明提供的賴氨酸的生產方法。淀粉質原料糖化清液的制備方法、種子罐培養(yǎng)基配方、種子罐成熟種子液培養(yǎng)方法、發(fā)酵罐培養(yǎng)基配方均與實施例1相同。發(fā)酵罐中的培養(yǎng)基體積為發(fā)酵罐體積的60％。將成熟種子液接入發(fā)酵罐的培養(yǎng)基中進行發(fā)酵培養(yǎng)，以接種后的發(fā)酵培養(yǎng)基為基準，種子液的接種量為18體積％。接種后，當發(fā)酵菌種的OD值達到0.5時，連續(xù)流加制得含有1.0體積％醋酸的淀粉質原料糖化清液和硫酸銨，流加制得含有1.0體積％醋酸的淀粉質原料糖化清液的量使發(fā)酵培養(yǎng)液中還原性糖的濃度控制在8-10克/升，流加硫酸銨的量使發(fā)酵培養(yǎng)液中銨根離子的濃度控制在0.35-0.6克/升，將罐壓控制為0.05MPa，發(fā)酵溫度控制為38℃，通氣量為1.0立方米空氣/立方米的培養(yǎng)基/分鐘，并用液氨調節(jié)pH維持在7.0進行發(fā)酵培養(yǎng)。流加制得含有1.0體積％醋酸的淀粉質原料糖化清液至發(fā)酵罐體積的80％時放料，放料體積為放料前發(fā)酵罐中培養(yǎng)基體積的10％。發(fā)酵培養(yǎng)52小時后放罐，測定放罐的賴氨酸濃度和中間放料的賴氨酸濃度，計算發(fā)酵終點的酸度和轉化率見表1。實施例4按照實施例1的方法進行賴氨酸的生產，不同的是，含有醋酸的步驟(2)得到的淀粉質原料糖化清液中醋酸的含量為0.2體積％。發(fā)酵培養(yǎng)52小時后 放罐，測定放罐的賴氨酸濃度和中間放料的賴氨酸濃度，計算發(fā)酵終點的酸度和轉化率見表1。實施例5按照實施例1的方法進行賴氨酸的生產，不同的是，含有醋酸的步驟(2)得到的淀粉質原料糖化清液中醋酸的含量為1.5體積％。發(fā)酵培養(yǎng)52小時后放罐，測定放罐的賴氨酸濃度和中間放料的賴氨酸濃度，計算發(fā)酵終點的酸度和轉化率見表1。對比例1按照實施例1的方法生產賴氨酸，不同的是，不向發(fā)酵罐中添加醋酸。發(fā)酵培養(yǎng)52小時后放罐，測定放罐的賴氨酸濃度和中間放料的賴氨酸濃度，計算單罐供酸量和轉化率見表1。表1終點賴氨酸含量(g/100mL)轉化率(％)實施例118.3563.21實施例218.2062.09實施例318.1262.35實施例417.6861.59實施例517.5261.43對比例116.860.50從表1中可以看出，采用本發(fā)明方法向發(fā)酵罐中添加醋酸發(fā)酵生產賴氨酸，可以明顯提高終點賴氨酸含量和轉化率。以上詳細描述了本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，但是，本發(fā)明并不限于上述實施方式中的具體細節(jié)，在本發(fā)明的技術構思范圍內，可以對本發(fā)明的技術方案進行多種簡單變型，這些簡單變型均屬于本發(fā)明的保護范圍。另外需要說明的是，在上述具體實施方式中所描述的各個具體技術特征，在不矛盾的情況下，可以通過任何合適的方式進行組合。為了避免不必要的重復，本發(fā)明對各種可能的組合方式不再另行說明。此外，本發(fā)明的各種不同的實施方式之間也可以進行任意組合，只要其不違背本發(fā)明的思想，其同樣應當視為本發(fā)明所公開的內容。當前第1頁1 2 3