本發(fā)明屬于生物醫(yī)用高分子材料技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種靶向型基因載體材料、制備方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)：
近年來基因治療技術(shù)的發(fā)展使得基因缺陷導(dǎo)致的疾病或癌癥等的根治成為可能，也為外傷、手術(shù)等原因造成的組織缺損的修復(fù)及功能恢復(fù)提供了新的途徑。成功的基因治療需要將目的基因有效的運(yùn)送到細(xì)胞內(nèi)。理想的基因傳遞載體應(yīng)該具有細(xì)胞靶向性、高度穩(wěn)定性、低細(xì)胞毒性及高轉(zhuǎn)染效率；同時(shí)載體應(yīng)簡便易制、可大量生產(chǎn)且使用方便。病毒類載體雖然轉(zhuǎn)染效率高，但存在免疫原性、突變性等安全隱患，且制備方法復(fù)雜，極大地限制了其發(fā)展。非病毒類載體因易于大量制備且不存在病毒類載體的安全隱患等優(yōu)點(diǎn)，開發(fā)應(yīng)用前景廣闊。陽離子聚合物如超支化樹枝狀聚合物、聚乙烯亞胺等，作為非病毒基因載體具有明顯的生物安全性優(yōu)勢(shì)和較高的轉(zhuǎn)染效率，其不足之處在于有細(xì)胞毒性和不可降解。脂質(zhì)體類非病毒基因載體具有較好的穿膜性和高的轉(zhuǎn)染效率，但存在細(xì)胞靶向性低、體內(nèi)穩(wěn)定性差和表達(dá)時(shí)間短等不足。殼聚糖類天然高分子材料具有良好的生物相容性和生物降解性，但普遍缺乏靶向性并且轉(zhuǎn)染效率低。近年來為了增強(qiáng)非病毒載體對(duì)靶向細(xì)胞的特異性識(shí)別，通常采取將具有靶向識(shí)別能力的配體，如半乳糖、葉酸、轉(zhuǎn)鐵蛋白和精氨酸-谷氨酸-天冬氨酸（RGD）三肽等，通過一定化學(xué)鍵偶聯(lián)到載體表面以提高其轉(zhuǎn)染效率。RGD三肽序列能夠與細(xì)胞膜上的整合素發(fā)生特異性相互作用，靶向識(shí)別并粘附到含有其受體的細(xì)胞表面，因此很多研究通過將RGD三肽偶聯(lián)到載體材料上，提高細(xì)胞對(duì)載體的內(nèi)吞作用。但復(fù)雜的化學(xué)修飾過程往往會(huì)在實(shí)際制備中存在困難。因此開發(fā)具有良好生物相容性、生物降解性和高轉(zhuǎn)染效率的新型非病毒基因傳遞載體是十分重要和必要的。蠶絲是一種天然蛋白質(zhì)纖維，作為手術(shù)縫合線在臨床中已應(yīng)用近百年。家蠶絲素蛋白作為家蠶絲的主要成分，具有良好的生物相容性及生物降解性。近年來，將家蠶絲素蛋白應(yīng)用于組織工程支架及藥物控釋載體等生物醫(yī)用材料領(lǐng)域的研究愈來愈多。柞蠶、天蠶等野蠶絲素中含有豐富RGD序列，能特異性識(shí)別、結(jié)合表面大量表達(dá)αvβ3和αvβ5整合素的人類細(xì)胞和哺乳動(dòng)物細(xì)胞，例如新生血管內(nèi)皮細(xì)胞等，有利于細(xì)胞的特異性粘附，因而比家蠶絲素具有更強(qiáng)的生物活性及生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用前景。但因?yàn)榻z素蛋白在中性環(huán)境下帶負(fù)電荷，難以直接包裝、壓縮DNA，所以應(yīng)采取必要的手段，賦予柞蠶絲素包裝、壓縮DNA的能力。魚精蛋白是從成熟雄魚精細(xì)胞中分離出來的一種天然陽離子多肽，由30個(gè)左右氨基酸組成，其中2/3以上為精氨酸，等電點(diǎn)pI為l0～12，可被生物降解。魚精蛋白硫酸鹽注射液已通過FDA批準(zhǔn)用于臨床，具有良好生物安全性。魚精蛋白能夠通過靜電作用力壓縮DNA類物質(zhì)至納米尺寸，并且含有一種核定位短肽，具有一定的核定位功能，能夠協(xié)助DNA靶向進(jìn)入細(xì)胞核。在本發(fā)明之前，公開號(hào)為101225399A的中國發(fā)明專利中提供了一種聚氨基酸材料的非病毒基因載體的制備方法，其原理是利用氨基醇對(duì)低聚氨基酸側(cè)基進(jìn)行開環(huán)后，通過活化氨基醇上的活潑羥基，連接聚乙烯亞胺，獲得聚氨基酸-氨基醇與聚乙烯亞胺的功能性復(fù)合材料。這種方法獲得的新型基因載體轉(zhuǎn)染效率高。但是，高分子量的聚乙烯亞胺不能被生物降解，且反應(yīng)過程中要用到丙酮、二甲基亞砜等有機(jī)試劑，殘留在載體內(nèi)的試劑有細(xì)胞毒性隱患。同時(shí)反應(yīng)過程中涉及避光、通氮?dú)獾炔襟E，制備過程較為復(fù)雜。文獻(xiàn)“AntheraeapernyisilkfibroinfortargetedgenedeliveryofVEGF165-Ang-1withPEI”（Biomed.Mater.9(2014)035015）中，通過靜電自組裝法制備了一種含靶向遮蔽體系的基因傳遞系統(tǒng)，包括富含RGD序列的柞蠶絲素遮蔽體系、聚乙烯亞胺陽離子載體和質(zhì)粒DNA，該具有遮蔽體系的靶向基因載體系統(tǒng)能夠有效靶向識(shí)別細(xì)胞，避免基因載體的非特異性吸附，同時(shí)降低了復(fù)合物的細(xì)胞毒性。但是由于絲素蛋白在中性環(huán)境下帶大量負(fù)電荷，等電點(diǎn)pI約為4.0～4.5，大大降低了帶負(fù)電荷的細(xì)胞表面對(duì)載體的吸附，影響載體與目標(biāo)細(xì)胞的結(jié)合效率，轉(zhuǎn)染效率仍然不高。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中非病毒基因載體存在的不足，提供一種能有效提高載體與目標(biāo)細(xì)胞的結(jié)合效率和轉(zhuǎn)染效率的陽離子化絲素及其與基因的復(fù)合物、制備方法及其應(yīng)用。本發(fā)明通過以下技術(shù)方案的實(shí)施實(shí)現(xiàn)發(fā)明目的：提供一種陽離子化絲素蛋白/基因復(fù)合物的制備方法，將蠶絲脫膠后得到的絲素溶解，經(jīng)透析、過濾得到絲素蛋白溶液，再進(jìn)行如下步驟的加工：1、將硫代琥珀酰亞氨基-4-[N-馬來酰亞胺甲基]-環(huán)己烷-1-羧酸酯（sulfo-SMCC）溶解于PBS緩沖溶液中，將得到的溶液滴加到濃度為1～20mg/ml的絲素蛋白溶液中，按質(zhì)量百分比，sulfo-SMCC為絲素蛋白的0.25～5%；在溫度為0～4℃、攪拌條件下反應(yīng)，再經(jīng)超濾離心處理后，得到截留分子量為9～12kDa的活化絲素蛋白溶液；2、將硫酸魚精蛋白溶解于含5mMEDTA的PBS緩沖溶液中，再加入水溶性2-亞氨基硫雜環(huán)戊烷鹽酸鹽（Trant’s試劑），硫酸魚精蛋白的濃度為1～20mg/ml，魚精蛋白與Trant’s按質(zhì)量比為1:(1～20)；在溫度為0～4℃、攪拌條件下反應(yīng)，得到巰基化魚精蛋白溶液；3、將步驟2得到的巰基化魚精蛋白溶液與步驟1得到的活化絲素蛋白溶液混合，巰基化魚精蛋白與活化絲素蛋白的質(zhì)量比為（0.025～0.1）：1；在溫度為0～4℃的條件下反應(yīng)，得到的反應(yīng)液在去離子水中透析,截留分子量為9～12kDa，再經(jīng)超濾離心處理，得到經(jīng)魚精蛋白改性的陽離子化絲素蛋白溶液；4、在溫度為2～8℃、攪拌步驟3制備的陽離子化絲素蛋白溶液15～30min后將基因物質(zhì)滴加到溶液中，陽離子化絲素蛋白與基因的質(zhì)量比為（2～10）：1；渦旋處理30～45s，升溫至25～37℃，靜置30～45min，得到陽離子化絲素蛋白/基因復(fù)合物。本發(fā)明技術(shù)方案所述的絲素為柞蠶絲素、天蠶絲素，所述絲素蛋白的分子量分布在15～250kDa范圍內(nèi)。所述的硫酸魚精蛋白的分子量分布在4.9～5.1kDa范圍內(nèi)。所述的基因?yàn)橘|(zhì)粒DNA或siRNA。本發(fā)明制備方法得到的陽離子化絲素蛋白的等電點(diǎn)pI為7～8，表面Zeta電位為+12～+20mV。本發(fā)明技術(shù)方案還包括按上述制備方法得到的陽離子化絲素蛋白/基因復(fù)合物。它的表面Zeta電位為+3～+10mV，粒徑為100～260nm。本發(fā)明提供的陽離子化絲素蛋白/基因復(fù)合物的應(yīng)用，將復(fù)合物中攜帶的基因傳遞給靶細(xì)胞，其靶細(xì)胞為細(xì)胞膜表面大量表達(dá)αvβ3和αvβ5整合素的細(xì)胞。所述的靶細(xì)胞為血管內(nèi)皮細(xì)胞、L929成纖維細(xì)胞、Hela人宮頸癌細(xì)胞、HCT116結(jié)腸癌細(xì)胞及U87膠質(zhì)瘤細(xì)胞。本發(fā)明用魚精蛋白對(duì)絲素蛋白進(jìn)行陽離子化改性，構(gòu)建同時(shí)具備細(xì)胞靶向識(shí)別及細(xì)胞核定位功能的安全高效基因傳遞載體，其發(fā)明原理是：陽離子化絲素由水溶性2-亞氨基硫雜環(huán)戊烷鹽酸鹽（2-Iminothiolane?HCl，Traut,sReagent）介導(dǎo)魚精蛋白硫酸鹽（PS）偶聯(lián)經(jīng)硫代琥珀酰亞氨基-4-[N-馬來酰亞胺甲基]-環(huán)己烷-1-羧酸酯(sulfo-SMCC)活化的絲素蛋白(SF)反應(yīng)得到。Traut,sReagent修飾PS上的伯胺產(chǎn)生巰基基團(tuán)，并在巰基基團(tuán)上添加短間隔末梢，保留被修飾的PS上伯胺的電荷。Sulfo-SMCC中的琥珀酰亞胺酯基團(tuán)與絲素蛋白上的賴氨酸殘基反應(yīng)，轉(zhuǎn)化成易反應(yīng)的馬來酰亞胺。在pH值為6.5～7.5時(shí)，馬來酰亞胺與巰基化的魚精蛋白反應(yīng)形成穩(wěn)定的硫醚結(jié)合，用魚精蛋白對(duì)絲素蛋白進(jìn)行陽離子化修飾，其反應(yīng)機(jī)理為：。本發(fā)明是用魚精蛋白對(duì)絲素蛋白進(jìn)行陽離子化改性，利用柞蠶或天蠶絲素自身富含RGD序列及魚精蛋白富含核定位短肽的特性，保證基因載體生物降解性的同時(shí)，提高載體的細(xì)胞膜靶向及細(xì)胞核定位功能。用陽離子化絲素蛋白包裝、壓縮DNA，作為基因傳遞載體，制備陽離子化絲素/基因復(fù)合物。該復(fù)合物能穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞，有效提高基因?qū)?xì)胞的轉(zhuǎn)染效率，不僅能解決基因治療所面臨的轉(zhuǎn)染效率低的問題，而且陽離子化絲素載體無細(xì)胞毒性，可被生物降解。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果在于：1.魚精蛋白改性絲素蛋白的反應(yīng)條件溫和，方法簡單，同時(shí)避免了絲素或魚精蛋白自身的交聯(lián)反應(yīng)，提高了反應(yīng)效率，產(chǎn)物單一，且原材料成本低廉，具有很好的推廣性。2.魚精蛋白陽離子化絲素基因載體可通過改變?cè)牧系耐读媳瓤刂品磻?yīng)的陽離子化改性程度，且產(chǎn)物具有良好生物相容性及生物降解性。3.柞蠶或天蠶絲素上RGD序列與細(xì)胞膜表面整合素特異性結(jié)合作用及魚精蛋白的核定位功能，賦予該載體良好的細(xì)胞膜靶向性和細(xì)胞核定位雙重功效。4.陽離子化絲素基因載體細(xì)胞毒性低，轉(zhuǎn)染效率高，在針對(duì)其靶向細(xì)胞的體內(nèi)外轉(zhuǎn)染中均具有良好的應(yīng)用前景。附圖說明圖1為不同質(zhì)量比改性柞蠶絲素/DNA復(fù)合物的Zeta電位；圖2為不同質(zhì)量比改性柞蠶絲素/DNA復(fù)合物的瓊脂糖凝膠電泳；圖3為不同質(zhì)量比改性柞蠶絲素/DNA復(fù)合物轉(zhuǎn)染E.A細(xì)胞1天的細(xì)胞毒性；圖4改性柞蠶絲素/DNA復(fù)合物轉(zhuǎn)染E.A細(xì)胞1天的激光共聚焦照片。具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)施例和附圖對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步描述。實(shí)施例1魚精蛋白陽離子化絲素的制備，具體步驟如下：(1)將100g柞蠶生絲放入5L質(zhì)量濃度為0.25%的Na2CO3水溶液中，于98～100℃處理45min，重復(fù)3次，使蠶絲脫膠，充分洗滌干燥后得到柞蠶絲素纖維。將柞蠶絲素纖維加入熔融的四水合硝酸鈣中，在105℃攪拌溶解。將所得到的混合溶液裝入透析袋中(截留分子量為9～12KDa)，去離子水中透析4天，去除雜質(zhì)得到純的柞蠶絲素蛋白溶液。調(diào)節(jié)柞蠶絲素溶液濃度到20mg/ml，用0.22μm微孔濾膜過濾；(2)將sulfo-SMCC溶解在PBS溶液（磷酸鹽緩沖液，pH=7.4）中，配置成濃度為1mg/ml的溶液。取1ml的sulfo-SMCC溶液緩慢滴加到20ml步驟(1)得到的絲素溶液中，4℃下磁力攪拌2h，用截留分子量為10kDa的超濾離心管以5000g離心力離心溶液，除去過量的sulfo-SMCC，得到活化的絲素溶液;(3)將硫酸魚精蛋白溶解在含5mMEDTA的PBS（pH=7.4）溶液中，調(diào)節(jié)溶液濃度到10mg/ml，用0.22μm微孔濾膜過濾。將2mg的Trant’s試劑加入1ml的魚精蛋白溶液中，緩慢磁力攪拌，調(diào)節(jié)pH=8，4℃反應(yīng)2h，得到巰基化的魚精蛋白；(4)將步驟(3)得到巰基化的魚精蛋白與步驟(2)得到的活化的柞蠶絲素蛋白溶液混合，4℃下反應(yīng)24h，去離子水中透析3天(截留分子量為9～12KDa)。然后用截留分子量為10kDa的超濾離心管在4℃，以5000g離心力離心溶液，得到經(jīng)陽離子化改性的柞蠶絲素蛋白（AP），記作樣品號(hào)為1。按本實(shí)施例上述的技術(shù)方案，改變柞蠶絲素和sulfo-SMCC的質(zhì)量比，魚精蛋白和Trant’s試劑的質(zhì)量比，可以得到陽離子化程度不同的柞蠶絲素蛋白。參見表1，它是本實(shí)施例中按原料、質(zhì)量比的不同得到的產(chǎn)物的等電點(diǎn)、表面電位的結(jié)果對(duì)比，其產(chǎn)物依次記作樣品號(hào)為2～9。表1。實(shí)施例21、用煮沸的濃度為3.5‰的Na2CO3溶液處理天蠶繭3次，每次30min，使蠶絲脫膠，充分洗滌干燥后得到天蠶絲素纖維。將天蠶絲素纖維加入熔融的四水合硝酸鈣中，在90℃攪拌溶解。將所得到的混合溶液裝入透析袋中(截留分子量為9～12KDa)，用去離子水透析4天，去除雜質(zhì)得到純的天蠶絲素蛋白溶液。調(diào)節(jié)天蠶絲素溶液濃度為20mg/ml，用0.22μm微孔濾膜過濾；2、將sulfo-SMCC溶解在PBS溶液（pH=7.4）中，配置濃度為1mg/ml的溶液。取1ml的sulfo-SMCC溶液緩慢滴加到20ml步驟1得到的天蠶絲素溶液中，4℃下磁力攪拌2h，用截留分子量為10kDa的超濾離心管以5000g離心力離心溶液，除去過量的sulfo-SMCC，得到活化的天蠶絲素溶液;3、將硫酸魚精蛋白溶解在含5mMEDTA的PBS（pH=7.4）溶液中，調(diào)節(jié)溶液濃度到10mg/ml，用0.22μm微孔濾膜過濾。將2mg的Trant’s試劑加入1ml的魚精蛋白溶液中，磁力攪拌，調(diào)節(jié)pH=8，4℃下反應(yīng)2h，得到巰基化的魚精蛋白；4、將步驟3得到巰基化的魚精蛋白與步驟2得到的活化的天蠶絲素溶液混合，4℃下反應(yīng)24h，去離子水中透析3天(截留分子量為9～12KDa)。然后用截留分子量為10kDa的超濾離心管在4℃，以5000g離心力離心溶液，得到經(jīng)陽離子化改性的天蠶絲素蛋白，記作樣品號(hào)為10。按本實(shí)施上述技術(shù)方案，改變天蠶絲素和sulfo-SMCC的質(zhì)量比，魚精蛋白和Trant’s試劑的質(zhì)量比可以得到不同陽離子化的天蠶絲素蛋白。表2為本實(shí)施例提供的不同原料、質(zhì)量比得到產(chǎn)物的表面電位對(duì)比，其產(chǎn)物依次記作樣品號(hào)為11～18。表2。實(shí)施例3陽離子化絲素/基因載體的制備，具體步驟如下：將本發(fā)明實(shí)施例1中得到的樣品號(hào)為1的陽離子化柞蠶絲素溶液調(diào)節(jié)濃度到0.01mg/ml，用0.22μm微孔濾膜過濾，用無菌水將DNA濃度調(diào)節(jié)為0.01mg/ml。在2～8℃下用電動(dòng)攪拌器以60rpm的速度對(duì)含4μg陽離子化絲素的絲素溶液進(jìn)行緩慢攪拌，施加剪切作用力15min后，邊攪拌邊向其中滴加含2μg的DNA溶液，渦旋30s后升溫至25℃，靜置復(fù)合物溶液45min，通過靜電作用自組裝成陽離子化絲素/DNA復(fù)合物，記作樣品19，陽離子化絲素與DNA的質(zhì)量比為2:1。參照上述方法，對(duì)實(shí)施例1得到的樣品號(hào)為2～9的樣品分別以陽離子化絲素與DNA的質(zhì)量比分別為3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1和10:1制備不同質(zhì)量比的陽離子化絲素/DNA復(fù)合物，依次對(duì)應(yīng)記作樣品20～27。將樣品號(hào)為19～27的樣品制備的不同質(zhì)量比的陽離子化絲素/DNA復(fù)合物稀釋于1ml生理鹽水后放入比色皿中，用馬爾文激光粒度分析儀和Zeta電位儀測定復(fù)合物包裹DNA后的有效粒徑和表面電位，分析陽離子化絲素與所包裹基因物質(zhì)的質(zhì)量比對(duì)復(fù)合物粒徑、電位的影響。每個(gè)樣品室溫平衡120s，測試至少30次。結(jié)果如圖1所示，陽離子化絲素/DNA復(fù)合物的表面Zeta電位隨著陽離子化絲素與DNA質(zhì)量比增加而由負(fù)值逐漸向正值轉(zhuǎn)變，并最終穩(wěn)定在+10mV左右。取10μl樣品號(hào)為19～27不同質(zhì)量比的陽離子化絲素/基因復(fù)合物溶液與2μl的10×loadingbuffer充分混合后加入1%的瓊脂糖凝膠中，加入1×TEA電泳緩沖液,調(diào)節(jié)電壓為120V，電泳時(shí)間20min。紫外燈下觀察陽離子化絲素基因載體包裹DNA能力并拍照。圖2所示，泳道1為maker，泳道2為裸DNA，泳道3～11為樣品號(hào)19～27制備的陽離子化絲素/DNA復(fù)合物。裸DNA泳道出現(xiàn)典型的質(zhì)粒條帶，隨著陽離子化絲素與DNA質(zhì)量比的增加，陽離子化絲素對(duì)DNA的延滯能力明顯增強(qiáng)。當(dāng)陽離子化柞蠶絲素與DNA質(zhì)量比大于4時(shí)能完全包裹住DNA，為陽離子化絲素/DNA復(fù)合物轉(zhuǎn)染細(xì)胞提供了前提。實(shí)施例4陽離子化絲素/DNA復(fù)合物的體外細(xì)胞轉(zhuǎn)染，包括以下步驟：(1)將E.A細(xì)胞以1×105細(xì)胞/孔的密度接種到6孔板上，用含有10%胎牛血清(FBS)的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞24h后，吸去培養(yǎng)基，用無血清的DMEM沖洗細(xì)胞2次。每孔加入不同質(zhì)量比的陽離子化絲素/DNA復(fù)合物溶液，每孔含質(zhì)粒DNA質(zhì)量為2μg，陽離子化絲素與DNA質(zhì)量比分別為5/1，7/1和10/1，用無血清的DMEM補(bǔ)足體積到500μl，輕輕混勻后滴加到細(xì)胞表面。37℃孵育4h后，吸去復(fù)合物溶液，用含10%FBS的DMEM培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。(2)采用MTT法檢測陽離子化絲素/DNA復(fù)合物的細(xì)胞毒性，以相同質(zhì)量比的PEI/DNA復(fù)合物作為對(duì)照組。圖3顯示不同質(zhì)量比的陽離子化絲素/DNA復(fù)合物，轉(zhuǎn)染1d后細(xì)胞的存活率達(dá)到90%以上(AP/DNA=5/2為92.87士2.52%，AP/DNA=7/2為93.34士2.14%和AP/DNA=10/2為92.38士2.38%)，細(xì)胞毒性要遠(yuǎn)小于相同質(zhì)量比的PEI/DNA復(fù)合物，且具有顯著性差異(p<0.05)，說明陽離子化絲素基因載體具有較好的生物安全性。(3)采用激光共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞轉(zhuǎn)染絲素/DNA復(fù)合物1d后的熒光表達(dá)情況。圖4表明陽離子化絲素能夠成功介導(dǎo)質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染E.A.細(xì)胞，并在細(xì)胞中表達(dá)綠色熒光蛋白。將細(xì)胞經(jīng)胰酶消化收集后用PBS清洗兩次，離心去除上清液，加入200μl的PBS溶液重懸細(xì)胞，流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率高達(dá)20～25%。(4)采用經(jīng)熒光標(biāo)記的陽離子絲素/DNA復(fù)合物轉(zhuǎn)染E.A.細(xì)胞后繼續(xù)孵育6h，期間激光共聚焦顯微鏡每隔1h觀察細(xì)胞對(duì)該載體的攝取情況，考察絲素上RGD對(duì)細(xì)胞攝取復(fù)合物的影響。細(xì)胞消化后，4%多聚甲醛固定，加入臺(tái)盼蘭淬滅細(xì)胞外熒光，流式細(xì)胞儀定量檢測細(xì)胞攝取的量。用DAPI染細(xì)胞核15min，4%多聚甲醛固定后激光共聚焦顯微鏡動(dòng)態(tài)追蹤觀測陽離子化絲素/DNA復(fù)合物在細(xì)胞中的核定位現(xiàn)象。