一種從海參中提取海參多糖的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種從海參中提取海參多糖的方法，包括下述步驟:原料處理、酶解、脫色、除蛋白、干燥即得成品。相比現(xiàn)有的三氯乙酸沉淀法及savage法等，海參多糖的收率高、含量高。
【專利說明】一種從海參中提取海參多糖的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種多糖的制備方法，具體涉及一種從海參中提取海參多糖的方法?！颈尘凹夹g(shù)】
[0002]海參(Holothurian, sea cucumber)為棘皮動物門海參綱動物的泛稱。明朝萬歷年間謝肇制著的《五雜俎》中因記載:“海參在遼東海濱有之，其性溫補(bǔ)，足敵人參，故曰海參”，被認(rèn)為是海參名稱的緣由。海參的生存歷史十分驚人，它出現(xiàn)比原始魚類還早，在六億多年前的前寒武紀(jì)就開始存在了。海參分布于全球各大洋，大部分生活在熱帶海區(qū)數(shù)米至數(shù)千米深的海底，全球約有海參1100多種，我國約有140種，可以食用的海參全球約有40種，我國有21種。
[0003]在我國，海參作為養(yǎng)生珍品的歷史源遠(yuǎn)流長，海參具有極高的營養(yǎng)及藥用價值，其肉質(zhì)柔嫩、有彈性，味道鮮美爽滑，既是美食珍饈，又是名貴的滋補(bǔ)養(yǎng)生的佳品，深受名家推崇，被列為海產(chǎn)“八珍”之首。明姚可成的《食物本草》就指出海參有主補(bǔ)元氣、滋益五臟六腑和祛虛損的養(yǎng)生功能；清吳儀洛《本草從新》、趙學(xué)敏《本草綱目拾遺》等中藥典籍也將海參列為補(bǔ)益藥物；認(rèn)為海參“性溫味甘咸，入心腎經(jīng)。有生百脈血、補(bǔ)腎益精、壯陽療萎、除勞祛癥、滋陰利水、補(bǔ)正軟堅和通腸潤燥”的功能。在諸如《不藥良方》、《食物宜忌》、《五雜俎》和《隨息居飲食譜》等養(yǎng)生古籍中，海參均被推崇為養(yǎng)生佳品。海參可用于腎虛引起的陽痿早泄、遺精；血虛引起的貧血、萎黃；陰虛引起的便秘、煩渴；脾虛引起的乏力、四肢困倦等。對于陰虛內(nèi)熱癥候的糖尿病、肺結(jié)核、咯血等也適合用海參食療和調(diào)補(bǔ)。
[0004]在過去的數(shù)百年來以海參單用或組方治療腫瘤、再生障礙性貧血和糖尿病取得良好效果。而在輔佐諸如癲癇、胃及十二指腸潰瘍、慢性乙型肝炎、慢性腎炎、高血壓、肺結(jié)核、神經(jīng)衰弱、靜脈血栓、痔瘡、脫肛和便秘等常見病治療，以及為病后或產(chǎn)后康復(fù)過程的藥膳或食療中，海參都得到了廣泛的應(yīng)用和認(rèn)同。現(xiàn)代藥理研究表明:海參體壁真皮結(jié)締組織、體腔、內(nèi)腺管及內(nèi)臟均含有海參多糖，海參多糖主要為海參糖胺聚糖或粘多糖(Holothurian Glycosaminoglycan, HG)其在組織中的含量之高和多糖的硫酸化程度之大在動物類中極為罕見，與傳統(tǒng)中藥補(bǔ)膠阿膠、鹿角膠、龜板膠和鱉甲膠中的總硫酸多糖含量僅占0.2%相比，海參高達(dá)6%。其藥理作用綜述如下:1、抗凝血、抗血栓:HG具有抗血栓的作用，在體外有明顯的抑制血小板解聚作用，由于它使血小板聚集體不能通過臟器和組織中的毛細(xì)血管而被扣下出現(xiàn)血小板減少。藥理研究表明，家兔注射HG后，血循環(huán)中血小板數(shù)量明顯減少，而血小板數(shù)量減少是由于HG聚集性增高，導(dǎo)致血小板聚集體增多所致。由于血小板的粘附聚集在早期凝血過程中的重要作用，所以血循環(huán)中血小板數(shù)量的大量消耗造成動物早期凝血功能異常。主要是影響血液凝結(jié)的內(nèi)在通路，粘多糖在抗血栓的作用是依靠加速血纖維蛋白酶的活力，以防止單位血纖維蛋白的聚合，并改變血纖維蛋白的構(gòu)筑。HG對血小板的凝集作用并不引起血小板的活化和代謝，也不發(fā)生形態(tài)上的變化和功能，從而達(dá)到抗凝血和抗血栓的目的。2、抗腫瘤作用:刺海參中的HG能顯著提高機(jī)體的免疫力，抑制癌細(xì)胞的生長，HG對抗多種實驗動物腫瘤的生長，對MA — 737乳腺癌和T795肺癌生長抑制率分別高達(dá)7960 %以上，同時還能抑制M737乳腺癌的人工肺轉(zhuǎn)移和Lewis肺自然轉(zhuǎn)移這種粘多糖可促進(jìn)骨髓造血機(jī)制，增加癌瘤細(xì)胞的血流量，提高藥物在癌瘤組織中的濃度；海參所含豐富的海參素和微量元素等具有很好的防癌作用。3、調(diào)節(jié)免疫功能:HG能使人的白細(xì)胞懸浮物中的E花環(huán)數(shù)量增加，EAC花環(huán)和Smlg的表達(dá)，因此推知它有增強(qiáng)細(xì)胞免疫作用。HG也能提高機(jī)體的細(xì)胞免疫功能，促進(jìn)淋巴細(xì)胞增值，增加脾、胸腺指數(shù)，增強(qiáng)細(xì)胞免疫，具有較強(qiáng)免疫活性?？筛纳剖褂盟幬镆鸬臋C(jī)體免疫功能低下。4、降血脂、預(yù)防動脈粥樣硬化，冠心病的發(fā)生:研究HG時發(fā)現(xiàn)；給已服了膽甾醇的小鼠喂了粘多糖1%的膽甾醇會顯著的增加等離子總膽留醇和LDL-膽留醇，當(dāng)已服了粘多糖果后，總膽留醇和LDL-膽甾醇的小鼠又服了粘多糖后，總膽甾醇和LDL-膽甾醇會增加。HG在防止動脈粥樣硬化疾病方面有著廣闊的發(fā)展前景。5、預(yù)防病原菌感染作用可抑制多種霉素和粘蛋白，使致癌性真菌、黃曲霉素被抑制、阻斷致癌活性，其高鈣含量對防癌有功效，可阻斷癌細(xì)胞繁殖周期，提高機(jī)體免疫力。6、延緩衰老、增強(qiáng)記憶力作用氧自由基的增多是導(dǎo)致機(jī)體衰老有主要原因，而超氧物歧化酶(SOD)通過清除氧自由基起到了延緩衰老的作用。藥理研究表明花刺能(Stichopus ranegates Semper)提取物能顯著提高小鼠紅細(xì)胞SOD活性,具有延緩衰老的作用。綜上所述，海參粘多糖具有多方面的生物活性，在醫(yī)學(xué)中有廣泛的應(yīng)用前景，隨著研究的逐步深入，海參能很有可能成為開發(fā)新型藥物的資源。[0005]目前，已有一些海參多糖提取的文獻(xiàn)或報道，如CN102002110B，采用三氯乙酸沉淀法，但都存在一些不足，公開了一種海參多糖的制備方法，采取氫氧化鈉提取，酶解后用三氯乙酸除蛋白，乙醇重結(jié)晶。目前，海參多糖的制備，脫除多糖中蛋白的方法有三氯乙酸沉淀法及savage法等,利用三氯乙酸沉淀蛋白，多糖收率較高,但常伴有糖鏈降解；savage法采用氯仿及戊醇等有機(jī)試劑使蛋白變性、沉淀，其處理條件溫和，能較好的避免多糖降解，但處理效率低，多糖損失嚴(yán)重?，F(xiàn)有方法均存在不足，這在一定程度上制約了海參多糖的精深加工與應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明提供了一種工藝可靠、便于生產(chǎn)的從海參中提取海參多糖的方法。
[0007]本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的:
[0008]一種從海參中提取海參多糖的方法，包括下述步驟:
[0009]a.原料處理:取新鮮海參，去除內(nèi)臟后，清洗干凈，100°C漂燙，磨漿，調(diào)節(jié)漿液的pH 值至 1.5-8.5 ；
[0010]b.酶解:加入漿液重量1.5-2.5%的胰蛋白酶，攪拌均勻，35-45°C酶解l_3h，調(diào)pH值至3.0-5.0，再加入漿液重量1.5-2.5%的胃蛋白酶，攪拌均勻，35-45°C酶解l_3h，然后沸水浴10-20分鐘，過濾，收集濾液；
[0011]C.脫色:向步驟b得到的濾液中加入相當(dāng)于濾液重量2倍的質(zhì)量濃度為95%的乙醇，4°C靜置4h，過濾，濾液中加入濾液重量0.5%的活性碳，80°C保溫25_35min進(jìn)行脫色，抽濾，收集濾液；
[0012]d.除蛋白:向步驟c得到的濾液中加入相當(dāng)于濾液重量2倍的質(zhì)量濃度為95%的乙醇，4°C靜置4h，過濾，向濾液中緩緩加入醋酸鉀稀溶液至終濃度2mol/L，4°C靜置過夜，離心10-15min,沉淀進(jìn)行冷凍干燥得成品。[0013]優(yōu)選的,步驟a中漂燙4_6min。
[0014]優(yōu)選的，步驟a中漿液的pH值調(diào)至8.0。
[0015]優(yōu)選的，步驟b中胰蛋白酶或胃蛋白酶的酶解溫度為40°C。
[0016]優(yōu)選的，步驟b中胰蛋白酶或胃蛋白酶的酶解時間為2h。
[0017]優(yōu)選的，步驟b中胰蛋白酶或胃蛋白酶的用量為2.0%。
[0018]優(yōu)選的，步驟c中，向步驟b得到的濾液中加入相當(dāng)于濾液重量2倍的質(zhì)量濃度為95%的乙醇，4°C靜置4h，過濾，沉淀加入步驟b中，再次酶解。
[0019]優(yōu)選的，步驟d中，離心為5000r/min。
[0020]采用本發(fā)明的方法得到的海參多糖，具有如下性狀:
[0021]白色粉末，無臭，無味，有吸濕性，易溶于水，尤易溶于熱水，不溶于高濃度乙醇、丙酮、乙酸乙酯、正丁醇等有機(jī)溶劑。
[0022]采用本發(fā)明的方法以海參為原料提取海參多糖，與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點。[0023]1、本發(fā)明方法將蛋白酶解、醇沉、離心、冷凍干燥等先進(jìn)技術(shù)綜合使用來制備海參多糖，工藝成熟、可靠。
[0024]2、本發(fā)明在原料處理上，采取高溫漂燙后磨漿再酶解，能很好地保持多糖蛋白的性狀，而不使用長時間高溫加熱，會造成原料膠化，多糖蛋白的變性。
[0025]3、使用雙酶分解海參多糖，先采用磨漿處理后，再加入復(fù)合酶時便能對海參多糖蛋白進(jìn)行徹底酶解，無需進(jìn)行原料的超微粉碎及納米粉碎，同時，本發(fā)明中，酶解脫色后的濾渣再次進(jìn)行酶解，從而節(jié)約成本和有效保證產(chǎn)品的色澤。
[0026]4、采用醋酸鉀進(jìn)行除蛋白，安全性高且易回收再利用，去除蛋白率高反應(yīng)條件易控制，避免了傳統(tǒng)Sevage法去除蛋白中高毒性有機(jī)溶劑氯仿的使用，也避免了采用雙氧水除蛋自而造成的目標(biāo)產(chǎn)物結(jié)構(gòu)異構(gòu)化導(dǎo)致海參多糖含量下降，生產(chǎn)相對較安全，產(chǎn)品含量較聞。
[0027]5、采用冷凍干燥來干燥海參多糖，得到的產(chǎn)品晶形較好、產(chǎn)品的含量可高達(dá)98.5%以上、色澤好。
【具體實施方式】
[0028]下面以實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但本發(fā)明并不局限于這些實施例。
[0029]實施例1:
[0030]一種從海參中提取海參多糖的方法，包括下述步驟:
[0031]a.原料處理:取新鮮海參10kg，去除內(nèi)臟后，清洗干凈，100°C漂燙4min，磨漿，調(diào)節(jié)漿液的PH值至7.5 ;
[0032]b.酶解:加入漿液重量1.5%的胰蛋白酶，攪拌均勻，45°C酶解lh，調(diào)pH值至3.0，再加入漿液重量2.5%的胃蛋白酶，攪拌均勻，35°C酶解3h，然后沸水浴10分鐘，過濾，收集濾液；
[0033]c.脫色:向步驟b得到的濾液中加入相當(dāng)于濾液重量2倍的質(zhì)量濃度為95%的乙醇，4°C靜置4h，過濾，濾液中加入濾液重量0.5%的活性碳，80°C保溫25min進(jìn)行脫色，抽濾，收集濾液；[0034]d.除蛋白:向步驟c得到的濾液中加入相當(dāng)于濾液重量2倍的質(zhì)量濃度為95%的乙醇，4°C靜置4h，過濾，向濾液中緩緩加入醋酸鉀稀溶液至終濃度2mol/L，4°C靜置過夜，離心，5000r/min，10min，沉淀進(jìn)行冷凍干燥得海參多糖1.14kg，海參多糖含量98.55%。
[0035]實施例2:
[0036]一種從海參中提取海參多糖的方法，包括下述步驟:
[0037]a.原料處理:取新鮮海參10kg，去除內(nèi)臟后，清洗干凈，100°C漂燙6min，磨漿，調(diào)節(jié)漿液的PH值至8.5 ;
[0038]b.酶解:加入漿液重量2.5%的胰蛋白酶，攪拌均勻，35°C酶解3h，調(diào)pH值至5.0，再加入漿液重量1.5%的胃蛋白酶，攪拌均勻，45°C酶解lh，然后沸水浴20分鐘，過濾，收集濾液；
[0039]c.脫色:向步驟b得到的濾液中加入相當(dāng)于濾液重量2倍的質(zhì)量濃度為95%的乙醇，4°C靜置4h，過濾，濾液中加入濾液重量0.5%的活性碳，80°C保溫35min進(jìn)行脫色，抽濾，收集濾液；
[0040]d.除蛋白:向步驟c得到的濾液中加入相當(dāng)于濾液重量2倍的質(zhì)量濃度為95%的乙醇，4°C靜置4h，過濾，向濾液中緩緩加入醋酸鉀稀溶液至終濃度2mol/L，4°C靜置過夜，離心，5000r/min，15min，沉淀進(jìn)行冷凍干燥得海參多糖1.15kg，海參多糖含量98.82%。
[0041]實施例3:
[0042]一種從海參中提取海參多糖的方法，包括下述步驟:
[0043]a.原料處理:取新鮮海參10kg，去除內(nèi)臟后，清洗干凈，100°C漂燙5min，磨漿，調(diào)節(jié)漿液的PH值至8.0 ;
[0044]b.酶解:加入漿液重量2.0%的胰蛋白酶，攪拌均勻，40°C酶解2h，調(diào)pH值至4.0，再加入漿液重量2.0%的胃蛋白酶，攪拌均勻，40°C酶解2h，然后沸水浴15分鐘，過濾，收集濾液；
[0045]c.脫色:向步驟b得到的濾液中加入相當(dāng)于濾液重量2倍的質(zhì)量濃度為95%的乙醇,4°C靜置4h，過濾，濾液中加入濾液重量0.5%的活性碳，80°C保溫30min進(jìn)行脫色，抽濾，收集濾液，濾渣返回步驟b再次酶解； [0046]d.除蛋白:向步驟c得到的濾液中加入相當(dāng)于濾液重量2倍的質(zhì)量濃度為95%的乙醇，4°C靜置4h，過濾，向濾液中緩緩加入醋酸鉀稀溶液至終濃度2mol/L，4°C靜置過夜，離心，5000r/min，12min，沉淀進(jìn)行冷凍干燥得海參多糖1.18kg，海參多糖含量99.05%。
【權(quán)利要求】
1.一種從海參中提取海參多糖的方法，包括下述步驟: a.原料處理:取新鮮海參，去除內(nèi)臟后，清洗干凈，100°C漂燙，磨漿，調(diào)節(jié)漿液的pH值至 7.5-8.5 ； b.酶解:加入漿液重量1.5-2.5%的胰蛋白酶，攪拌均勻，35-45°C酶解l_3h，調(diào)pH值至3.0-5.0，再加入漿液重量1.5-2.5%的胃蛋白酶，攪拌均勻，35-45°C酶解l_3h，然后沸水浴10-20分鐘，過濾，收集濾液； c.脫色:向步驟b得到的濾液中加入相當(dāng)于濾液重量2倍的質(zhì)量濃度為95%的乙醇，4°C靜置4h，過濾，濾液中加入濾液重量0.5%的活性碳，80°C保溫25-35min進(jìn)行脫色，抽濾，收集濾液； d.除蛋白:向步驟c得到的濾液中加入相當(dāng)于濾液重量2倍的質(zhì)量濃度為95%的乙醇，4°C靜置4h，過濾，向濾液中緩緩加入醋酸鉀稀溶液至終濃度2mol/L，4°C靜置過夜，離心10-15min,沉淀進(jìn)行冷凍干燥得成品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從海參中提取海參多糖的方法，其特征在于:步驟a中漂燙4-6min。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從海參中提取海參多糖的方法，其特征在于:步驟a中漿液的pH值調(diào)至8.0。
4.根據(jù)權(quán)利要求 1所述的從海參中提取海參多糖的方法，其特征在于:步驟b中胰蛋白酶或胃蛋白酶的酶解溫度為40°C。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從海參中提取海參多糖的方法，其特征在于:步驟b中胰蛋白酶或胃蛋白酶的酶解時間為2h。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從海參中提取海參多糖的方法，其特征在于:步驟b中胰蛋白酶或胃蛋白酶的用量為2.0%。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從海參中提取海參多糖的方法，其特征在于:步驟c中，向步驟b得到的濾液中加入相當(dāng)于濾液重量2倍的質(zhì)量濃度為95%的乙醇，4°C靜置4h，過濾，沉淀加入步驟b中，再次酶解。
【文檔編號】C08B37/00GK103951759SQ201410162005
【公開日】2014年7月30日 申請日期:2014年4月22日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月22日
【發(fā)明者】歸三岷 申請人:欽州市山海生物科技有限公司