專利名稱：海參多糖中蛋白的生物脫除方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種多糖中蛋白的脫除方法，具體的說涉及一種海參多糖中蛋白的生 物脫除方法。
背景技術(shù)：
海參多糖是海參體壁的重要組成部分，其占海參體壁干重的5%-10% (質(zhì)量百分 比，下同)。海參多糖包括海參硫酸軟骨素及海參巖藻聚糖硫酸酯兩種，其中海參硫酸軟骨 素被證實(shí)具有抗凝血、抗腫瘤、提高免疫力、降血脂及抗病毒等生理活性，海參巖藻聚糖硫 酸酯亦具有保護(hù)神經(jīng)干細(xì)胞、預(yù)防胃潰瘍等多種功效。海參多糖在功能性食品及藥物開發(fā) 等方面已展現(xiàn)出良好的應(yīng)用前景。
海參多糖在海參體壁中與蛋白相連，屬于糖胺聚糖類化合物。如同硫酸軟骨素、肝 素等其他糖胺聚糖，提取海參多糖時(shí)首先需要通過堿處理或蛋白酶酶解處理切斷蛋白鏈， 然后以醇沉等方式將多糖與蛋白分離，最終得到多糖產(chǎn)物。而由于糖鏈上蛋白難以完全切 除，或切下的蛋白鏈未能與糖鏈充分分離，多糖產(chǎn)物往往仍含有一定量的蛋白，從而影響海 參多糖的純度。因此，如何有效脫除蛋白是制備高品質(zhì)海參多糖的關(guān)鍵之一。
目前，脫除多糖中蛋白的方法有三氯乙酸沉淀法及savage法等。利用三氯乙酸沉 淀蛋白，多糖收率較高，但常伴有糖鏈降解。savage法采用氯仿及戊醇等有機(jī)試劑使蛋白變 性、沉淀，其處理?xiàng)l件溫和，能較好的避免多糖降解，但處理效率低，多糖損失嚴(yán)重?，F(xiàn)有方 法均存在不足，這在一定程度上制約了海參多糖的精深加工與應(yīng)用。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種海參多糖中蛋白的生物脫除方法，能夠克服現(xiàn)有技術(shù) 的上述缺陷。
一種海參多糖中蛋白的生物脫除方法，其特征在于有以下步驟(1)將一種微生 物接入含有海參多糖的液體培養(yǎng)基，并進(jìn)行培養(yǎng)；( 去除所得菌體培養(yǎng)液中的菌體后，收 集該菌體培養(yǎng)液的上清液；C3)對(duì)該上清液進(jìn)行超濾處理，所得截留液經(jīng)干燥得到海參多 糖的脫蛋白產(chǎn)物。
本法優(yōu)點(diǎn)在于(1)蛋白脫除率高；(2)多糖保留率高；(3)對(duì)多糖原始結(jié)構(gòu)無(wú)顯著影響。
具體實(shí)施方式
本發(fā)明的海參多糖中蛋白的生物脫除方法，其實(shí)質(zhì)是利用一種微生物在培養(yǎng)過程 中對(duì)海參多糖蛋白的特異性消耗，實(shí)現(xiàn)多糖中蛋白的有效脫除。該方法有以下步驟(1)將 一種微生物接入含有海參多糖的液體培養(yǎng)基，并進(jìn)行培養(yǎng)；( 去除所得菌體培養(yǎng)液中的 菌體，收集該菌體培養(yǎng)液的上清液；C3)對(duì)該上清液進(jìn)行超濾處理，所得截留液經(jīng)干燥得到 海參多糖的脫蛋白產(chǎn)物，最終完成對(duì)多糖中蛋白的有效脫除。該方法的處理對(duì)象為海參多糖，包括海參多糖粗提物、海參硫酸軟骨素、海參巖藻聚糖硫酸酯、海參硫酸軟骨素與海參 巖藻聚糖硫酸酯的混合物。與現(xiàn)有的蛋白脫除方法如三氯乙酸沉淀法及savage法等相比， 本發(fā)明的方法優(yōu)勢(shì)在于有效脫除蛋白的同時(shí)不影響多糖原始結(jié)構(gòu)，且使多糖得到很好的保&3 甶ο
實(shí)施例一
配制含有海地瓜參硫酸軟骨素的培養(yǎng)基，其中含有0.2%海地瓜參硫酸軟骨素、 0. 01%磷酸氫二鉀、0. 3%硝酸鈉、0. 05%硫酸鎂、0. 01%氯化鈣及0. 001%磷酸鐵，其余為 過膜海水，PH值為7. 5 ；培養(yǎng)基滅菌后接入細(xì)菌Alteromonas macleodii，25°C下振蕩培養(yǎng) 48小時(shí)。所得菌體培養(yǎng)液經(jīng)硅藻土過濾去除菌體，收集該菌體培養(yǎng)液的上清液。所得上清 液以截留分子量50kDa的超濾膜進(jìn)行超濾處理，截留液經(jīng)冷凍干燥得到脫蛋白多糖產(chǎn)物。 經(jīng)上述處理，海地瓜參硫酸軟骨素的蛋白含量由2. 09 士0. 10 %降至0. 33 士0. 06 %，單糖組 成、硫酸根含量及分子量均無(wú)顯著變化，脫蛋白多糖產(chǎn)物得率為93. 8%。
實(shí)施例二
配制含有海地瓜參巖藻聚糖硫酸酯的培養(yǎng)基，其配方為0.2%海地瓜參巖藻聚 糖硫酸酯、0. 01 %磷酸氫二鉀、0. 3 %硝酸鈉、0. 05 %硫酸鎂、0. 01 %氯化鈣及0. 001 %磷 酸鐵，其余為過膜海水，PH值為7.5 ；培養(yǎng)基滅菌后接入細(xì)菌Alteromonas macleodii，在 25°C條件下培養(yǎng)48小時(shí)。所得菌體培養(yǎng)液經(jīng)硅藻土過濾去除菌體，收集該菌體培養(yǎng)液的 上清液。所得上清液以截留分子量50kDa的超濾膜進(jìn)行超濾處理，截留液經(jīng)冷凍干燥得到 脫蛋白多糖產(chǎn)物。經(jīng)上述處理，海地瓜參巖藻聚糖硫酸酯的蛋白含量由3. 58 士 0. %降 至0. 77士0. 03%，單糖組成、硫酸根含量及分子量均無(wú)顯著變化，脫蛋白多糖產(chǎn)物得率為 92. 7%。
除了實(shí)施例中說明的海地瓜參的海參多糖外，本法同樣適用于日本刺參、仿刺參、 梅花參、黑海參、白乳參、冰島刺參的海參多糖；去除菌體的手段可為過濾或離心；培養(yǎng)溫 度可為20-40°C，培養(yǎng)時(shí)間可為2-120h ；超濾處理的截留分子量可為I-IOOkDa ；干燥可為熱 風(fēng)干燥、噴霧干燥。權(quán)利要求
1.一種海參多糖中蛋白的生物脫除方法，其特征在于有以下步驟(1)將一種微生物 接入含有海參多糖的液體培養(yǎng)基，并進(jìn)行培養(yǎng)；( 去除所得菌體培養(yǎng)液中的菌體，收集該 菌體培養(yǎng)液的上清液；C3)對(duì)該上清液進(jìn)行超濾處理，所得截留液經(jīng)干燥得到海參多糖的 脫蛋白產(chǎn)物。
2.按權(quán)利要求1所述的脫除方法，其特征在于所述的海參多糖為海參多糖粗提物、海 參硫酸軟骨素、海參巖藻聚糖硫酸酯或海參巖藻聚糖硫酸酯與海參硫酸軟骨素的混合物。
3.按權(quán)利要求1所述的脫除方法，其特征在于所述的微生物為Alteromonas macleodii ο
4.按權(quán)利要求1所述的脫除方法，其特征在于所述的微生物培養(yǎng)的條件為培養(yǎng)溫度 20-40°C，培養(yǎng)時(shí)間 2-120h。
5.按權(quán)利要求1所述的脫除方法，其特征在于所述的超濾處理的截留分子量為 l-100kDa。
全文摘要
一種海參多糖中蛋白的生物脫除方法，其特征是將一種微生物接入含有海參多糖的液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)后去除所得菌體培養(yǎng)液中的菌體，收集該菌體培養(yǎng)液的上清液，對(duì)該上清液進(jìn)行超濾處理，所得截留液經(jīng)干燥得到海參多糖的脫蛋白產(chǎn)物。所述的海參多糖，為海參多糖粗提物、海參硫酸軟骨素、海參巖藻聚糖硫酸酯、海參硫酸軟骨素與海參巖藻聚糖硫酸酯的混合物。與現(xiàn)有的其它蛋白脫除方法相比，本發(fā)明的方法優(yōu)勢(shì)在于有效脫除蛋白的同時(shí)不影響多糖原始結(jié)構(gòu)，且使多糖得到很好的保留。
文檔編號(hào)A61P35/00GK102040667SQ201010537298
公開日2011年5月4日 申請(qǐng)日期2010年10月30日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月30日
發(fā)明者唐慶娟, 宿瑋, 常耀光, 徐杰, 李兆杰, 王玉明, 薛勇, 薛長(zhǎng)湖 申請(qǐng)人:中國(guó)海洋大學(xué)