專利名稱：海參多糖的制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及保健品技術領域，尤其是海參多糖的制備方法。
背景技術：
海參屬棘皮動物門，海參綱。海參又名刺參，在南海、黃海分布極廣。海參作為養(yǎng) 生食品淵源流長，據《本草綱目拾遺》記載海參，味甘成、補腎經、攝小便、壯陽療萎，其性溫 補，足敵人參，故名曰海參。目前研究發(fā)現(xiàn)海參營養(yǎng)豐富，蛋白質含量達52. 2%，海參多糖 等活性物質約占15%，主要為粘多糖和海參糖氨聚糖，具有抗癌防癌、增強免疫力、抗血栓、 延緩衰老、抗病毒等功效。目前雖有海參多糖的相關提取工藝專利及文獻，但皆存在以下缺點一、生產周期 較長，如中國專利申請CN101451157A，至少需要28小時；二、產品得率及純度較低，得率不 及1 %、純度也低于80% ；三、有機溶劑使用量大，大量使用氯仿，既污染環(huán)境，同時對最終產 品也有影響。

發(fā)明內容
本發(fā)明針對以上不足，提出一種海參多糖的制備方法，生產周期短、目標產物得率 及純度較高，且避免了有機溶劑的大量使用，其生產工藝簡單可行，符合大生產條件。為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術方案一種海參多糖的制備方法，包 括以下步驟①、提取取新鮮海參或干海參絞碎，加入2 4倍重量的2%氫氧化鈉溶液；室溫 攪拌2 4小時，過濾，調濾液的pH值至7. 0 9. 0 ；②、酶解向步驟①濾液中加入濾液重量1. 0 % 3. 0 %的胰蛋白酶，攪拌均勻， 35°C 50°C酶解1 4h，調pH值至3. 5 6. 0 ；再加入濾液重量1.0% 3.0%的胃蛋白 酶，攪拌均勻，35°C 50°C酶解1 4h，在100°C沸水中保溫5 15分鐘；③、除蛋白攪拌步驟②酶解后的溶液，同時加入10%的三氯乙酸至pH至3.0 ；于 4°C靜置4h，離心取上清液，加上清液2倍體積的95%乙醇于4°C靜置4h，離心沉淀，沉淀物 真空干燥。優(yōu)選的，向步驟①過濾后的濾渣中加入2 4倍濾渣重量的2%氫氧化鈉溶液中， 室溫攪拌2 4小時，過濾，合并濾液。優(yōu)選的，步驟①中濾液的PH值調至8. 0。優(yōu)選的，步驟②中胰蛋白酶或胃蛋白酶的酶解溫度為40°C。優(yōu)選的，步驟②中胰蛋白酶或胃蛋白酶的酶解時間為2h。優(yōu)選的，步驟②中胰蛋白酶或胃蛋白酶的用量為2.0%。與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明采用堿提雙酶水解法提取海參多糖，避免了原料加熱膠 化(70 130°C )造成多糖蛋白變性，影響酶解反應的效價，同時采用2%氫氧化鈉溶液提 取的優(yōu)點在于(1)強堿環(huán)境抑制海參自溶酶活性，保留目標產物；(2)能更大程度的提取海參酸性粘多糖。先采用堿液處理提取之后，海參多糖蛋白結構改變，當加入復合酶時便能對海參 多糖蛋白進行徹底酶解，無需進行原料的超微粉碎及納米粉碎，從而節(jié)約成本和有效防止 產品的二次污染。酶解液于100°c鈍化，主要是為了使其過量的酶失活，以免造成海參多糖 含量的降低及損失。采用三氯乙酸進行除蛋白，使用量極低(約為酶解液重量0. 2%左右)，且易回收 再利用，去除蛋白率高反應條件易控制，避免了傳統(tǒng)Sevage法除蛋白中高毒性有機溶劑氯 仿的使用，也避免了采用雙氧水除蛋白而造成的目標產物結構異構化導致海參多糖含量下 降，生產相對較安全，產品純度相應較高。采用高濃度乙醇進行重結晶海參多糖，產品晶型較好，能使海參多糖純度達到 98%以上，無需進行反復脫色、脫蛋白，從而大大縮短生產周期，僅需要19h左右。
具體實施例方式下面結合具體實施例對本發(fā)明進行詳細描述，本部分的描述僅是示范性和解釋 性，不應對本發(fā)明的保護范圍有任何的限制作用。實施例1取干海參絞碎1. 0kg，加入2倍重量2%氫氧化鈉溶液2L，室溫攪拌提取2小時， 共提取2次，過濾，合并得3. 82L濾液，濾液冷卻至室溫，采用1 %鹽酸溶液調pH值至8. 0， 加入2%的胰蛋白酶20ml (酶液濃度lmg/ml)充分攪勻，于40°C酶解2小時，后將酶解液用 1 %鹽酸調PH值至4. 0，再添加2%的胃蛋白酶20mL(酶液濃度lmg/ml)，同樣于40°C酶解 2h后，再于100°C沸水中進行酶解鈍化5min。酶解完畢后，用三氯乙酸除蛋白，將10%的三 氯乙酸IOml直接加到酶解液中調pH至3. 0，邊加邊攪即產生沉淀，然后4°C放置4h，離心取 上清液3. 06L，加2倍體積的95%乙醇于4°C靜置4h，離心沉淀并減壓回收乙醇，沉淀真空 干燥即得海參多糖110. 2g ；約耗時18h。實施例2取新鮮海參絞碎1. 5kg，加入4倍重量2%氫氧化鈉溶液，室溫攪拌提取3小時， 過濾；濾渣加入3倍重量2%氫氧化鈉溶液，室溫攪拌提取4小時，過濾；合并兩次濾液，得
4.13L濾液，濾液冷卻至室溫，采用調節(jié)0. 5%硫酸溶液調pH值至7. 2，加入的胰蛋白酶 30ml (酶液濃度1. 5mg/ml)充分攪勻，于36°C酶解3小時，后將酶解液用0. 5%硫酸調pH值 至5. 0，再添加1. 5%的胃蛋白酶30mL(酶液濃度1. 4mg/ml)，于42°C酶解Ih后，再于100°C 沸水中進行酶解鈍化15min。酶解完畢后，用三氯乙酸除蛋白，將10%的三氯乙酸約15ml直 接加到酶解液中調PH至3. 0，邊加邊攪即產生沉淀，然后4°C放置4h，離心取上清液3. 56L， 加2倍體積的95%乙醇于4°C靜置4h，離心沉淀并減壓回收乙醇，沉淀真空干燥即得海參多 糖108. 4g ；約耗時20h。實施例3取新鮮海參絞碎2. Okg,加入3倍重量2%氫氧化鈉溶液，室溫攪拌提取4小時， 過濾；濾渣加入4倍重量2%氫氧化鈉溶液，室溫攪拌提取2小時，過濾；合并兩次濾液，得
5.25L濾液，濾液冷卻至室溫，采用調節(jié)鹽酸溶液調pH值至9. 0，加入3%的胰蛋白酶 20ml (酶液濃度1.5mg/ml)充分攪勻，于50°C酶解4小時，后將酶解液用鹽酸調pH值至6. 0，再添加3%的胃蛋白酶20mL(酶液濃度1. 4mg/ml)，于50°C酶解Ih后，再于100°C沸水 中進行酶解鈍化lOmin。酶解完畢后，用三氯乙酸除蛋白，將10%的三氯乙酸約15ml直接 加到酶解液中調PH至3. 0，邊加邊攪即產生沉淀，然后4°C放置4h，離心取上清液3. 56L，加 2倍體積的95%乙醇于4°C靜置4h，離心沉淀并減壓回收乙醇，沉淀真空干燥即得海參多糖 124. 3g ；約耗時 20h。根據以上實施例得到的三批樣品，按含量測定方法依法測定海參多糖含量。結果 見下表1 表1樣品中海參多糖含量測定結果
權利要求
1.一種海參多糖的制備方法，包括以下步驟①、提取取新鮮海參或干海參絞碎，加入2 4倍重量的2%氫氧化鈉溶液；室溫攪拌 2 4小時，過濾，調濾液的pH值至7. 0 9. 0 ；②、酶解向步驟①濾液中加入濾液重量1.0% 3.0%的胰蛋白酶，攪拌均勻，35°C 50°C酶解1 4h，調pH值至3. 5 6.0 ；再加入濾液重量1. 0% 3. 0%的胃蛋白酶，攪拌 均勻，35°C 50°C酶解1 4h，在100°C沸水中保溫5 15分鐘；③、除蛋白攪拌步驟②酶解后的溶液，同時加入10%的三氯乙酸至pH至3.0 ；于4°C 靜置4h，離心取上清液，加上清液2倍體積的95%乙醇于4°C靜置4h，離心沉淀，沉淀物真 空干燥。
2.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于向步驟①過濾后的濾渣中加入2 4倍 濾渣重量的2%氫氧化鈉溶液中，室溫攪拌2 4小時，過濾，合并濾液。
3.如權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于步驟①中濾液的pH值調至8.0。
4.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟②中胰蛋白酶或胃蛋白酶的酶解 溫度為40°C。
5.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟②中胰蛋白酶或胃蛋白酶的酶解 時間為2h。
6.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟②中胰蛋白酶或胃蛋白酶的用量 為 2. 0%。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種海參多糖的制備方法，包括以下步驟①提取用2％氫氧化鈉溶液提取新鮮海參或干海參；②酶解向提取液中采用胰蛋白酶和胃蛋白酶兩步酶解過程；③除蛋白采用三氯乙酸來去除蛋白，再使用高濃度的乙醇重結晶海參多糖。本發(fā)明制備的海參多糖得率平均為11.27％，純度平均為98.4％，生產周期約19小時左右，比現(xiàn)有的工藝制得的產品有很大的改善。
文檔編號C08B37/00GK102002110SQ20101055920
公開日2011年4月6日 申請日期2010年11月24日 優(yōu)先權日2010年11月24日
發(fā)明者劉全勝, 周海妹, 展學孔 申請人:劉全勝