用于調(diào)節(jié)FGFR3的表達(dá)的組合物和方法領(lǐng)域本申請(qǐng)涉及靶向并與編碼3型成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體(fibroblastgrowthfactorreceptortype3，F(xiàn)GFR3)的核酸雜交的寡核苷酸和相關(guān)的藥物組合物，并且涉及使用所述寡核苷酸調(diào)節(jié)FGFR3的表達(dá)的方法。具體地，特定的實(shí)施方案涉及與編碼FGFR3的核酸(如mRNA)雜交的反義寡核苷酸，并且涉及使用所述反義寡核苷酸調(diào)節(jié)FGFR3的表達(dá)的方法。FGFR3的表達(dá)的減少對(duì)于一定范圍的醫(yī)學(xué)病癥(如軟骨發(fā)育不全(achondroplasia))是有益的。背景成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體(FGFR)是針對(duì)成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的高親和力受體。這些因子在細(xì)胞生長(zhǎng)、分化和其他生物學(xué)過(guò)程中具有多樣性的作用，其準(zhǔn)確的功能依賴(lài)于靶細(xì)胞和發(fā)育階段。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)FGFR基因的突變引起多種病癥。例如，在顱縫早閉(craniosynostoses)中發(fā)生FGFR1和FGFR2突變，并且FGFR3中的突變已經(jīng)參與骨骼發(fā)育不良，如軟骨發(fā)育不全，軟骨發(fā)育不良(hypochondroplasia)和致死性發(fā)育不全(thanatophoricdysplasia)(I和II型)。目前用于治療發(fā)育不良(諸如軟骨發(fā)育不全)的療法包括整形外科手術(shù)，如人工髖關(guān)節(jié)替換或腿拉長(zhǎng)和生長(zhǎng)激素療法。腿拉長(zhǎng)包括在十歲以上的年齡削骨，并且用專(zhuān)用的腿拉長(zhǎng)裝置在約六個(gè)月的數(shù)個(gè)療程中逐漸增加身高。然而，這種方法給患者造成巨大的疼痛。生長(zhǎng)激素療法通過(guò)從兒童期開(kāi)始的周期性生長(zhǎng)激素注射而增加身高。然而，當(dāng)停止注射時(shí)，生長(zhǎng)停止。前述療法無(wú)一是治愈性的，從患者生活質(zhì)量的觀點(diǎn)來(lái)看，也無(wú)一被認(rèn)為是理想的。需要進(jìn)一步的開(kāi)發(fā)來(lái)鑒定用于治療軟骨發(fā)育不全的新療法，諸如作為治愈或者至少改善與人中軟骨發(fā)育不全相關(guān)的存活和發(fā)病率的方式的調(diào)節(jié)FGFR3的表達(dá)的治療。概述本申請(qǐng)?zhí)峁┛捎糜谥委熍c異常的FGFR3表達(dá)相關(guān)的疾病(例如，發(fā)育不良，如軟骨發(fā)育不全)的新型寡核苷酸，特別是鎖定核酸(LNA)反義寡核苷酸，和治療干預(yù)。本文公開(kāi)的本發(fā)明涉及發(fā)現(xiàn)用本發(fā)明的寡核苷酸接觸異常表達(dá)FGFR3的細(xì)胞或組織調(diào)節(jié)FGFR3(并且，特別是FGFR3的突變的或天然存在的變體)的表達(dá)。在具體的實(shí)施方案中，例如，調(diào)節(jié)FGFR3的表達(dá)恢復(fù)正常的軟骨細(xì)胞功能。本發(fā)明的寡核苷酸和使用所述寡核苷酸來(lái)調(diào)節(jié)異常的FGFR3表達(dá)的方法提供一種改善或者甚至治愈與FGFR3的異常表達(dá)相關(guān)的(諸如，例如，軟骨發(fā)育不全)存活和發(fā)病率的方式。在一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及長(zhǎng)度約為8至約50個(gè)核苷酸的寡核苷酸，其與FGFR3靶序列，例如，哺乳動(dòng)物FGFR3基因或mRNA序列(例如，天然存在的FGFR3基因或mRNA)雜交。在某些方面中，所述寡核苷酸以充分的穩(wěn)定性(例如，具有充分的雜交強(qiáng)度，并且持續(xù)充分的時(shí)間)與FGFR3靶序列雜交，以抑制FGFR3基因產(chǎn)物(例如，F(xiàn)GFR3蛋白)的表達(dá)。本文描述了特別適于這一目的及其他的寡核苷酸。術(shù)語(yǔ)雜交用作本文中應(yīng)該理解為能夠雜交。在一個(gè)方面中，本發(fā)明提供長(zhǎng)度約為8至約50個(gè)核苷酸(例如，長(zhǎng)度約為8-30，8-20，12-18，或14-16個(gè)核苷酸)的寡核苷酸，其包含與對(duì)應(yīng)于哺乳動(dòng)物FGFR3基因的編碼區(qū)的反向互補(bǔ)物或編碼FGFR3的mRNA的互補(bǔ)物的區(qū)域具有至少80％同一性(例如，至少約85％，90％，95％，96％，97％，98％，99％或100％同一性)的約8至約30個(gè)核苷酸(例如，長(zhǎng)度約為8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29或30個(gè)核苷酸)的連續(xù)的核苷酸序列(第一區(qū)域)。例如，本發(fā)明的寡核苷酸可以包含與編碼FGFR3的核酸序列(例如，例如，F(xiàn)GFR3DNA，前-mRNA或mRNA)的一部分至少80％互補(bǔ)的連續(xù)的核苷酸序列。本文公開(kāi)的寡核苷酸可以包含與突變的FGFR3基因的區(qū)域或與對(duì)應(yīng)的mRNA互補(bǔ)的核酸序列。類(lèi)似地，本文公開(kāi)的寡核苷酸可以包含與FGFR3基因的基因產(chǎn)物(例如，由FGFR3基因編碼的mRNA)或其多形體或天然存在的變體互補(bǔ)的序列，所述多形體或天然存在的變體編碼諸如在FGFR3基因產(chǎn)物的位置380的甘氨酸到精氨酸置換的突變(本文中稱(chēng)為G380R)，例如，由SEQIDNO：4編碼，或其天然存在的變體(例如，SNPID’srs28931614，rs11943863或rs17881656)。具體地，本文所述的寡核苷酸可以與編碼FGFR3基因或mRNA的突變區(qū)域的核酸序列具有至少80％互補(bǔ)性(例如，至少85％，90％，95％，96％，97％，98％，99％以上的互補(bǔ)性)，所述突變區(qū)域諸如編碼G380R突變的區(qū)域和緊接在編碼G380R突變的區(qū)域的上游和/或下游的區(qū)域(例如，在G380R突變位置的上游和/或下游約2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，25，30，35，40，45，50，55，60，65，70，75，80，85，90，95，100，125，150，175，200，225，250以上的核苷酸)。在另一個(gè)方面中，本發(fā)明提供包含約8至約20個(gè)核苷酸的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸與編碼FGFR3的核酸(例如，F(xiàn)GFR3mRNA)的至少8個(gè)核堿基的部分雜交。例如，在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的寡核苷酸與編碼G380R突變的核酸(即，mRNA)雜交，或與直接圍繞和/或鄰近編碼密碼子380的位置1138處的FGFR3G380R突變的核酸的區(qū)域雜交。在一些實(shí)施方案中，所述寡核苷酸與編碼FGFR3的單鏈核酸分子的區(qū)域互補(bǔ)，諸如，例如，具有SEQIDNO：4的一部分的序列的核酸分子或其天然存在的變體(例如，SNPID’srs28931614，rs11943863或rs17881656)的區(qū)域。在一些實(shí)施方案中，所要求的寡核苷酸包含與編碼FGFR3mRNA的DNA序列與其部分互補(bǔ)的序列，或者，備選地，所要求的寡核苷酸與RNA序列(例如，前-mRNA或mRNA)或由其編碼的部分雜交。當(dāng)與靶細(xì)胞或組織(例如，在受軟骨發(fā)育不全影響或折磨的患者的長(zhǎng)骨生長(zhǎng)板中的軟骨細(xì)胞)接觸時(shí)，本文公開(kāi)的寡核苷酸可以選擇性地減少FGFR3(并且特別是突變的或異常表達(dá)的FGFR3)的表達(dá)，由此恢復(fù)正常的軟骨細(xì)胞功能。例如，本發(fā)明的寡核苷酸可以靶向編碼突變的或異常表達(dá)的FGFR3的核酸(例如，mRNA)，諸如，例如，包含或由SEQIDNO：15，SEQIDNO：16，SEQIDNO：17，SEQIDNO：18，SEQIDNO：19和/或SEQIDNO：20編碼的mRNA，或前述任一種的特定部分或區(qū)域(例如，編碼G380R突變的區(qū)域)，并且由此調(diào)節(jié)FGFR3的表達(dá)，以使表達(dá)減少和/或被抑制至少約10％，20％，25％，35％，40％，50％，或優(yōu)選至少60％，65％，70％，75％，85％，90％，95％，99％或100％。在另一方面中，本發(fā)明提供包含諸如本文所述的那些的寡核苷酸的組合物。在一些實(shí)施方案中，所述組合物可以包括藥物組合物，其包含一種或多種本文所述的寡核苷酸連同一種或多種藥用賦形劑、輔藥、或其他促進(jìn)或改善所述組合物的遞送或穩(wěn)定性的分子。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含一種或多種本文所述的寡核苷酸和與所述寡核苷酸連接的(例如，共價(jià)或非共價(jià)連接的)至少一種非核苷酸或非多核苷酸結(jié)構(gòu)部分的綴合物。本文還公開(kāi)了寡核苷酸和包含其的綴合物和藥物組合物，其用作藥物，諸如用于治療與FGFR3的異常表達(dá)相關(guān)的疾病(例如，發(fā)育不良，如軟骨發(fā)育不全)，和通過(guò)向哺乳動(dòng)物受試者(例如，人受試者，如兒科人受試者(出生之前或之后)或成年人受試者)施用本文所述的寡核苷酸、綴合物和/或藥物組合物而治療所述疾病的方法。在另一方面中，本發(fā)明提供寡核苷酸或其綴合物在制備用于治療軟骨發(fā)育不全的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明還提供治療與FGFR3的異常表達(dá)相關(guān)的疾病或病癥(如軟骨發(fā)育不全)的方法，所述方法包括向患有、可能將患有或以除此之外的方式受軟骨發(fā)育不全的影響或折磨的患者(例如，諸如患有或易受軟骨發(fā)育不全影響的人兒科患者或成年人患者)施用有效量的本發(fā)明所述的寡核苷酸、綴合物和/或藥物組合物的步驟。在一些實(shí)施方案中，所述與FGFR3的異常表達(dá)相關(guān)的疾病、病癥或病況涉及FGFR3的過(guò)量表達(dá)，特別是突變的FGFR3(例如，包含G380R錯(cuò)義突變的FGFR3)的過(guò)量表達(dá)。在一些實(shí)施方案中，本文所述的寡核苷酸、綴合物和藥物組合物優(yōu)先調(diào)節(jié)FGFR3突變體或多形體或天然存在的變體的表達(dá)，諸如例如，包含在位置380處的甘氨酸被置換為精氨酸(G380R)的FGFR3突變體、多形體或天然存在的變體(例如，由SEQIDNO：4或SNPID’srs28931614，rs11943863或rs17881656編碼的)。相對(duì)于野生型FGFR3的表達(dá)(例如，由SEQIDNO：1編碼的)，本發(fā)明的寡核苷酸對(duì)FGFR3突變體、多形體或天然存在的變體的表達(dá)的所述優(yōu)先調(diào)節(jié)本質(zhì)上可以是部分或絕對(duì)的。例如，當(dāng)施用給雜合性軟骨發(fā)育不全的患者時(shí)，本發(fā)明的寡核苷酸可以靶向編碼野生型FGFR3的mRNA和編碼突變的FGFR3多形體或天然存在的變體的mRNA，然而，所述寡核苷酸可以以不同的程度調(diào)節(jié)每種靶標(biāo)的表達(dá)，以使，例如，突變的FGFR3多形體或變體的表達(dá)被調(diào)節(jié)的程度大于野生型FGFR3表達(dá)被調(diào)節(jié)的程度。例如，本發(fā)明的寡核苷酸可以靶向并減少包含G380R置換的突變的FGFR3多形體(例如，由SEQIDNO：4或SNPID’srs28931614，rs11943863或rs17881656編碼的)的表達(dá)2倍，4倍，8倍，10倍，15倍，25倍，50倍，75倍，100倍以上；而該寡核苷酸分別減少野生型FGFR3(例如，由SEQIDNO：1編碼的)的表達(dá)1倍，2倍，4倍，5倍，10倍，15倍，25倍，50倍，75倍，100倍以上。類(lèi)似地，例如，本發(fā)明的寡核苷酸靶向并減少包含G380R突變的突變FGFR3多形體或變體(例如，由SEQIDNO：4或SNPID’srs28931614，rs11943863或rs17881656編碼的)的表達(dá)約1％，2.5％，5％，10％，20％，35％，40％，50％，60％，75％，80％，85％，90％，95％，97.5％，99％以上；而該寡核苷酸減少野生型FGFR3(例如，由SEQIDNO：1編碼的)的表達(dá)約1％，2.5％，5％，10％，20％，35％，40％，50％，60％，75％，80％或90％。本文還公開(kāi)的了相對(duì)于編碼功能性或野生型FGFR3的核酸，差別性靶向和/或與編碼突變的FGFR3的核酸雜交的寡核苷酸。例如，在患有雜合性軟骨發(fā)育不全或癌癥(如膀胱癌)的患者中，本發(fā)明的寡核苷酸可以靶向并使突變FGFR3等位基因的表達(dá)相對(duì)于功能性或野生型FGFR3等位基因的表達(dá)減少約1％，2.5％，5％，10％，20％，35％，40％，50％，60％，75％，80％，90％，95％，97.5％，99％以上。備選地，本發(fā)明的寡核苷酸可以增加野生型FGFR3基因產(chǎn)物或mRNA(例如，在受雜合性軟骨發(fā)育不全影響的兒科患者中)的表達(dá)與突變FGFR3基因產(chǎn)物或mRNA的表達(dá)的比率。在一些實(shí)施方案中，所述寡核苷酸、綴合物和藥物組合物減少或以除此之外的方式抑制突變FGFR3的表達(dá)(例如，通過(guò)優(yōu)先靶向并與患有雜合性軟骨發(fā)育不全的患者的等位基因中的編碼FGFR3G380R突變的核酸(例如，mRNA)雜交)，而不影響或?qū)Σ痪幋a所述突變的FGFR3的表達(dá)的影響最小。在一些實(shí)施方案中，本文公開(kāi)的寡核苷酸與FGFR3的基因產(chǎn)物(即，mRNA)雜交，例如，由包含位置380處的甘氨酸被替換為精氨酸的突變的FGFR3多形體或變體編碼的(例如，由SEQIDNO：4編碼的)mRNA基因產(chǎn)物。在其他實(shí)施方案中，所述寡核苷酸與編碼突變的FGFR3多形體或變體的核酸的基因產(chǎn)物(例如，mRNA)雜交，其中所述編碼所述FGFR3多形體的核苷酸包含在密碼子380的位置1394處的鳥(niǎo)嘌呤被轉(zhuǎn)換置換為腺嘌呤。在其他實(shí)施方案中，本發(fā)明的寡核苷酸可以特異性與編碼突變的FGFR3G380R多形體或變體(例如，由SEQIDNO：4編碼的)的核酸的基因產(chǎn)物(即，mRNA)雜交，而該寡核苷酸不與編碼野生型FGFR3的核酸(例如，由SEQIDNO：1編碼的)的基因產(chǎn)物雜交。所述寡核苷酸與編碼突變的FGFR3G380R多形體的優(yōu)先性或差別性雜交可以調(diào)節(jié)該突變體基因產(chǎn)物的表達(dá)，而野生型FGFR3基因產(chǎn)物的表達(dá)得以保持或以除此之外的方式保持不變。例如，本發(fā)明的寡核苷酸可以靶向并優(yōu)先與包含或由包含SEQIDNOS：15-20的核酸(或其片段)編碼的mRNA雜交，以使由所述mRNA編碼的蛋白的表達(dá)減少和/或被抑制至少約10％，20％，25％，35％，40％，50％，或優(yōu)選至少60％，65％，70％，75％，85％，或最優(yōu)選至少90％，95％，99％或100％。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的寡核苷酸與編碼人FGFR3的核酸(例如，mRNA)(例如，由登記號(hào)NM_000142編碼的FGFR3mRNA，包括其任意的變體和多形體)雜交，其中所述寡核苷酸不與編碼其他物種的FGFR3的核酸交叉雜交。例如，本發(fā)明的寡核苷酸可以靶向并與人FGFR3mRNA(例如，由SEQIDNO：1和/或SEQIDNO：4編碼的)雜交并且不與小鼠FGFR3mRNA(例如，由SEQIDNO：7編碼的)或大鼠FGFR3mRNA(例如，由SEQIDNO：8編碼的)雜交。還包括優(yōu)先與包含或由SEQIDNO：15，SEQIDNO：16，SEQIDNO：17，SEQIDNO：18，SEQIDNO：19或SEQIDNO：20編碼的FGFR3mRNA靶序列中的一個(gè)或多個(gè)雜交的寡核苷酸。本發(fā)明的寡核苷酸可以?xún)?yōu)選與編碼G380R突變的人FGFR3mRNA或其片段(例如，由登記號(hào)NM_000142編碼的FGFR3mRNA)雜交，而不與小鼠或大鼠FGFR3基因的FGFR3mRNA交叉雜交，由此調(diào)節(jié)被靶向的人FGFR3的表達(dá)。備選地，該寡核苷酸可以與編碼FGFR3多形體的核酸特異性雜交，所述FGFR3多形體編碼G380R突變，但可以不與編碼編碼人、小鼠或大鼠物種的野生型的核酸雜交，所述野生型缺少或以除此之外的方式在相同或相似的嚴(yán)格條件下不編碼G380R突變。還提供抑制FGFR3的異常表達(dá)的方法，特別是抑制突變的FGFR3基因的基因產(chǎn)物(例如，編碼FGFR3的mRNA)在表達(dá)突變的FGFR3的細(xì)胞(例如，軟骨細(xì)胞或膀胱細(xì)胞)中的異常表達(dá)的方法。在一些實(shí)施方案中，所述方法包括給患者施用本發(fā)明所述的寡核苷酸、綴合物或藥物組合物，或以除此之外的方式使細(xì)胞或組織與所述寡核苷酸、綴合物或藥物組合物接觸，以便抑制FGFR3(例如，包含G380R突變的FGFR3)在所述患者或細(xì)胞中的表達(dá)。還公開(kāi)了約8至50個(gè)單體的寡核苷酸，其包含約8-50個(gè)連續(xù)單體(例如，核苷酸)的第一區(qū)域，其中所述第一區(qū)域的序列與一種或多種所選的靶序列(例如，包含編碼突變的FGFR3的mRNA的靶序列)至少80％相同(例如，至少85％，至少90％，至少95％，至少99％相同)。在一些實(shí)施方案中，所選的靶序列可以包含編碼哺乳動(dòng)物FGFR3的核酸(例如，mRNA)或其片段的區(qū)域。還提供了反義寡核苷酸，例如，長(zhǎng)度為8-50，12-30或12-20個(gè)核苷酸。例如，在一些實(shí)施方案中，所述寡核苷酸包含一個(gè)或多個(gè)鎖定核酸(LNA)殘基或單體單位(例如，SEQIDNO：21，SEQIDNO：22，SEQIDNO：23，SEQIDNO：24或SEQIDNO：25)。在本發(fā)明的寡核苷酸包含兩個(gè)以上的LNA單體單位(例如，兩個(gè)以上的β-D-氧基-LNA單體單位)的情形中，所述LNA單體單位可以相對(duì)彼此的位置是連續(xù)的，或者，備選地，所述LNA單體單位可以相對(duì)彼此的位置不連續(xù)。例如，本文公開(kāi)了包含SEQIDNO：14的反義寡核苷酸，其中所述寡核苷酸調(diào)節(jié)FGFR3的表達(dá)，并且其中所述寡核苷酸在選自由下述組成的組的一個(gè)或多個(gè)位置處包含至少一個(gè)鎖定核酸：(a)位置1的鳥(niǎo)嘌呤核苷酸是氧基-LNA；(b)位置2和3中的一個(gè)或多個(gè)位置的腺嘌呤核苷酸是氧基-LNA；(c)位置10和11中的一個(gè)或多個(gè)位置的胞嘧啶核苷酸是氧基-LNA；和(d)位置12的胸腺嘧啶核苷酸是氧基-LNA。任選地，所述鎖定反義寡核苷酸可以包含一個(gè)或多個(gè)糖取代，諸如例如，2′-O-甲氧基乙基糖取代。本文還提供包含本發(fā)明所述的寡核苷酸中的一種或多種的綴合物，其中所述寡核苷酸包含至少一個(gè)與本發(fā)明的寡核苷酸共價(jià)連接的非核苷酸或非多核苷酸結(jié)構(gòu)部分。還提供藥物組合物，其包含本發(fā)明所述的寡核苷酸或綴合物中的一種或多種，以及藥用稀釋劑、載體、溶劑、鹽或輔藥。還提供包含本發(fā)明的寡核苷酸中的一種或多種的藥物組合物。例如，所述藥物組合物可以通過(guò)直接注射或輸注到靶作用部位進(jìn)行腸胃外施用，或者可以通過(guò)吸入、腹膜、局部或口服而施用。進(jìn)一步提供下調(diào)細(xì)胞或組織中異常表達(dá)的FGFR3的表達(dá)(例如，在mRNA水平上)、特別是下調(diào)FGFR3的突變體或天然存在的變體(例如，G380R，或癌癥(如膀胱癌)特有的突變)的表達(dá)的方法。所述方法包括在體外或體內(nèi)使所述細(xì)胞或組織與有效量的本發(fā)明的寡核苷酸、綴合物或組合物中的一種或多種接觸。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的寡核苷酸和組合物能夠下調(diào)哺乳動(dòng)物(例如，在患有或以除此之外的方式受癌癥(如膀胱癌)或雜合性軟骨發(fā)育不全影響的人患者)中突變的或異常表達(dá)的FGFR3的表達(dá)，而不調(diào)節(jié)或以除此之外的方式影響正常作用或野生型等位基因的表達(dá)。還公開(kāi)了治療懷疑患有、或易受與FGFR3的異常表達(dá)或過(guò)表達(dá)相關(guān)的疾病或病況的動(dòng)物(例如，非人動(dòng)物或人)的方法，所述方法通過(guò)給所述動(dòng)物施用治療或預(yù)防有效量的本文所述的寡核苷酸、綴合物或藥物組合物中的一種或多種。此外，本文提供使用寡核苷酸來(lái)抑制突變的或異常表達(dá)的FGFR3(例如，突變的或天然存在的FGFR3變體)的表達(dá)的方法，和用于治療與FGFR3的異常表達(dá)或活性相關(guān)的疾病的方法。還提供治療與FGFR3的異常表達(dá)相關(guān)的病況(例如，癌癥或發(fā)育不良，如軟骨發(fā)育不全)的方法。還提供恢復(fù)軟骨細(xì)胞功能的方法，所述方法包括給異常表達(dá)FGFR3的軟骨細(xì)胞遞送本發(fā)明的寡核苷酸中的一種或多種或者使所述軟骨細(xì)胞與本發(fā)明的寡核苷酸中的一種或多種接觸。所要求的方法向軟骨細(xì)胞中引入所述寡核苷酸的條件足以使所述軟骨細(xì)胞中異常的FGFR3表達(dá)減少，并且由此恢復(fù)正常的細(xì)胞功能。在一些實(shí)施方案中，所述方法優(yōu)先在mRNA水平上減少FGFR3突變體、多形體或天然存在的變體的表達(dá)，所述突變體、多形體或天然存在的變體在密碼子380的位置1138處(其對(duì)應(yīng)于SEQIDNO：4編碼的序列的核苷酸位置1394)包含鳥(niǎo)嘌呤轉(zhuǎn)換置換為腺嘌呤。本發(fā)明提供治療疾病的方法，所述疾病如癌癥，諸如膀胱癌，或軟骨發(fā)育不全，所述方法包括給有此需要的患者(例如，受軟骨發(fā)育不全影響的人兒科患者)施用有效量的一種或多種寡核苷酸、其綴合物或藥物組合物。本發(fā)明提供抑制(例如，通過(guò)下調(diào))細(xì)胞或組織中突變的或異常表達(dá)的FGFR3的表達(dá)的方法，所述方法包括使所述細(xì)胞或組織與有效量的本文公開(kāi)的一種或多種寡核苷酸或其綴合物或藥物組合物接觸的步驟，由此下調(diào)所述突變的或異常表達(dá)的FGFR3的表達(dá)(例如，在mRNA水平上)。通過(guò)結(jié)合附上的實(shí)施例參考下述本發(fā)明的詳細(xì)描述，本發(fā)明上述討論的以及多種其他特征和伴隨的優(yōu)點(diǎn)將變得更好理解。附圖簡(jiǎn)述圖1A和1B示例轉(zhuǎn)染了與包含并且在編碼FGFR3G380R突變的核酸周?chē)膮^(qū)域的部分互補(bǔ)的21種不同的寡核苷酸的A549細(xì)胞中flag-標(biāo)記的野生型(WT)和突變體(MUT)報(bào)道子水平。人A549細(xì)胞共轉(zhuǎn)染每種寡核苷酸和WT或MUT報(bào)道子構(gòu)建體。然后，在轉(zhuǎn)染后24小時(shí)收集細(xì)胞，并且使用報(bào)道子特異性的定量PCR測(cè)定確定所述flag-標(biāo)記的報(bào)道子轉(zhuǎn)錄物的水平。結(jié)果報(bào)道為每種寡核苷酸三次獨(dú)立的研究的平均值，并且誤差條表示標(biāo)準(zhǔn)偏差，如圖1A和1B所示，相對(duì)于WT報(bào)道子構(gòu)建體，21種測(cè)試寡核苷酸中的每一種都表現(xiàn)出減少的MUT報(bào)道子構(gòu)建體的表達(dá)和優(yōu)先靶向MUT報(bào)道子構(gòu)建體。圖2A和2B示例在已經(jīng)用于包含并且在編碼FGFR3G380R突變的核酸周?chē)膮^(qū)域的部分互補(bǔ)的寡核苷酸進(jìn)行了48小時(shí)的剝裸處理(gymnotictreatment)的人A549細(xì)胞中的flag-標(biāo)記的野生型(WT)和突變體(MUT)報(bào)道子構(gòu)建體水平。在用所述寡核苷酸剝裸治療后，將所述人A549細(xì)胞轉(zhuǎn)染W(wǎng)T或MUT報(bào)道子構(gòu)建體。然后，在轉(zhuǎn)染后24小時(shí)收集所述細(xì)胞，并且使用報(bào)道子特異性的定量PCR測(cè)定確定所述flag-標(biāo)記的報(bào)道子轉(zhuǎn)錄物的水平。結(jié)果報(bào)道為模擬治療的樣品的百分?jǐn)?shù)，并且報(bào)道為每種寡核苷酸三次獨(dú)立的研究的平均值。圖示的誤差條表示標(biāo)準(zhǔn)偏差。如圖2A和2B所示，相對(duì)于WT報(bào)道子，21種測(cè)試寡核苷酸表現(xiàn)出以顯著的劑量反應(yīng)對(duì)MUT報(bào)道子構(gòu)建體的強(qiáng)有力的敲低作用。圖3示例在用十種寡核苷酸中的每一種轉(zhuǎn)染的Hela細(xì)胞中flag-標(biāo)記的野生型(WT)和突變體(MUT)報(bào)道子水平，所述寡核苷酸與包含并且在FGFR3G380突變周?chē)膮^(qū)域的不同部分互補(bǔ)。所述寡核苷酸在0.2nM，1.0nM和5.0nM的初始篩選濃度進(jìn)行評(píng)價(jià)。HeLa細(xì)胞共轉(zhuǎn)染寡核苷酸與WT或MUT報(bào)道子構(gòu)建體。然后，在轉(zhuǎn)染后24小時(shí)收集細(xì)胞，并且使用報(bào)道子特異性的定量PCR測(cè)定確定報(bào)道子構(gòu)建體的水平。結(jié)果報(bào)道為每種寡核苷酸三次獨(dú)立的研究的平均值，并且誤差條表示標(biāo)準(zhǔn)偏差。如圖3所示，相對(duì)于WT報(bào)道子構(gòu)建體，發(fā)現(xiàn)所有十種寡核苷酸在所評(píng)價(jià)的濃度范圍內(nèi)產(chǎn)生劑量依賴(lài)性的MUT報(bào)道子構(gòu)建體敲低。圖4示例所選的寡核苷酸的半最大抑制濃度(IC50)曲線(xiàn)，所述寡核苷酸設(shè)計(jì)與包含并且在編碼FGFR3G380突變的核苷酸周?chē)膮^(qū)域的部分互補(bǔ)。flag-標(biāo)記的野生型(WT)或突變體(MUT)報(bào)道子構(gòu)建體與十種寡核苷酸中的一種共轉(zhuǎn)染到人A549細(xì)胞中。然后，在轉(zhuǎn)染后24小時(shí)收集所述細(xì)胞，并且提取RNA用于報(bào)道子特異性的定量PCR。繪制的數(shù)據(jù)點(diǎn)表示三次獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)的平均報(bào)道子信號(hào)，并且誤差條表示標(biāo)準(zhǔn)偏差?；疑€(xiàn)表示W(wǎng)T報(bào)道子的擬合反應(yīng)曲線(xiàn)，黑色曲線(xiàn)表示MUT報(bào)道子的擬合反應(yīng)曲線(xiàn)。每條曲線(xiàn)的對(duì)應(yīng)的IC50值顯示在每幅圖上，并且還顯示在表2中。圖5A和5B示例與包含并且在編碼FGFR3G380突變的核酸周?chē)膮^(qū)域的部分互補(bǔ)的十種寡核苷酸中的每一種分別針對(duì)不相關(guān)的SCA3和PTEN靶標(biāo)的特異性。通過(guò)轉(zhuǎn)染將十種寡核苷酸中每一種遞送至人A549細(xì)胞中。然后，收集人A549細(xì)胞，并且通過(guò)定量PCR檢測(cè)SCA3或PTENmRNA的敲低。結(jié)果表示為每種前導(dǎo)(pre-lead)寡核苷酸的三次獨(dú)立的研究的平均值。誤差條表示每種寡核苷酸的三次研究的標(biāo)準(zhǔn)偏差。如在圖5A和5B中所示，十種寡核苷酸中的每一種對(duì)非特異性SCA3和PTEN靶標(biāo)的作用顯著低于對(duì)FGFR3靶標(biāo)的作用。圖6示例與包含并且在編碼FGFR3G380突變的核苷酸周?chē)膮^(qū)域的部分互補(bǔ)的十種寡核苷酸中的每一種的血漿穩(wěn)定性。將十種寡核苷酸中的每一種在37℃在小鼠血漿中溫育多至96小時(shí)。每24小時(shí)采集樣品并且通過(guò)PAGE分析。發(fā)現(xiàn)十種寡核苷酸中的每一種的血漿穩(wěn)定性充分在預(yù)測(cè)的范圍內(nèi)，并且特別地，發(fā)現(xiàn)所有十種寡核苷酸具有大于96小時(shí)的整體半衰期。如圖6所示，十種寡核苷酸中的大部分不產(chǎn)生任何可測(cè)量的降解產(chǎn)物。圖7示例16天的體內(nèi)耐受性研究的結(jié)果，其中對(duì)小鼠每3天施用與包含并且在編碼FGFR3G380突變的核苷酸周?chē)膮^(qū)域的部分互補(bǔ)的寡核苷酸，直到第14天。在第16天處死小鼠并且進(jìn)行評(píng)價(jià)。包括的對(duì)照小鼠施用鹽水對(duì)照。五種所選的寡核苷酸(SH02，SH13，SH19，SH20和SH21，其分別對(duì)應(yīng)于SEQIDNOS：21，22，23，24和25)導(dǎo)致肝臟酶丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)和天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)的可接受的升高。詳細(xì)描述本文所述的寡核苷酸提供能夠調(diào)節(jié)FGFR3表的的特異性的治療工具。在一些實(shí)施方案中，本文所述的短的(例如，長(zhǎng)度通常少于約50，40，30，20，18，17，16，15，14，13，12，10，8個(gè)以下的核苷酸)單鏈合成的寡核苷酸具有與FGFR3RNA靶序列(例如，前-mRNA或mRNA)互補(bǔ)的堿基序列，并且通過(guò)氫鍵鍵合的堿基配對(duì)形成雜化的雙鏈體。例如，在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的寡核苷酸可以靶向或與編碼FGFR3的核酸(例如，編碼FGFR3的mRNA)或其片段(例如，SEQIDNOS：5或6)互補(bǔ)，并且由此調(diào)節(jié)FGFR3的表達(dá)。在其他實(shí)施方案中，本發(fā)明的寡核苷酸通?？梢酝ㄟ^(guò)切割作用模式或空間阻礙參與前-mRNA加工或mRNA翻譯的酶起作用。預(yù)測(cè)這種雜交能夠防止表達(dá)(即，靶mRNA密碼翻譯為其蛋白產(chǎn)物)，并且因此排除所述蛋白產(chǎn)物的后續(xù)作用。因此，本文所述的寡核苷酸和方法可以用于減輕或治療一種或多種與FGFR3的異常表達(dá)相關(guān)的病況(例如，疾病或綜合征)，例如，癌癥，如膀胱癌，骨骼發(fā)育不良，如軟骨發(fā)育不全，軟骨發(fā)育不良和致死性發(fā)育不全(I和II型)。軟骨發(fā)育不全是人侏儒癥(dwarfism)的最常見(jiàn)的形式，其由FGFR3基因的跨膜結(jié)構(gòu)域中的點(diǎn)突變引起。軟骨發(fā)育不良和致死性發(fā)育不全(I和II型)也是由于FGFR3基因中的單個(gè)突變引起。在受影響的患者中，身體比例和身體特征在出生時(shí)是正常的，在大部分情形中，這形成通常在出生時(shí)或在出生后不久的診斷基礎(chǔ)。侏儒癥的體征隨著年齡穩(wěn)定地變得更明顯。整體上，大部分患者具有相對(duì)正常的生活，心血管并發(fā)癥、脊髓閉塞和上呼吸道閉塞成為最嚴(yán)重的影響。軟骨發(fā)育不全的發(fā)病率大約為1/110,000至1/130,000例活產(chǎn)。雜合性軟骨發(fā)育不全的臨床特征在患者中是非常一致的，并且包括末端的近端縮短，面中部發(fā)育不全，脊柱狹窄和相對(duì)的巨頭。最終的軟骨發(fā)育不全成年人的高度在112-145cm的范圍內(nèi)。在組織學(xué)上，軟骨發(fā)育不全患者的骨骺和生長(zhǎng)板軟骨是正常的。然而，所述患者的形態(tài)測(cè)定檢查已經(jīng)揭示生長(zhǎng)板短于正常的，并且在純合性中的縮短大于在雜合性軟骨發(fā)育不全中的縮短，這表明基因劑量作用。軟骨發(fā)育不全患者的脊柱間基質(zhì)比正常人更豐富，并且在一些病例中已經(jīng)觀察到軟骨的血管形成和橫向隧道(transversetunneling)(血管內(nèi)生長(zhǎng))的病灶。另外，已經(jīng)觀察到顯著的膜化骨形成。相信軟骨發(fā)育不全的基礎(chǔ)機(jī)制是長(zhǎng)骨生長(zhǎng)板軟骨細(xì)胞的成熟的缺陷。FGFR3基因在生長(zhǎng)板中的作用似乎是對(duì)固有的生長(zhǎng)率的負(fù)調(diào)節(jié)。具體地，對(duì)FGFR3空等位基因純合(例如，通過(guò)基因敲除)的小鼠表現(xiàn)出脊柱后凸(kyphosis)，脊柱側(cè)凸(scoliosis)，長(zhǎng)骨生長(zhǎng)過(guò)度和生長(zhǎng)板的肥大區(qū)增大。這一現(xiàn)象與FGFR3在調(diào)節(jié)管狀長(zhǎng)骨的生長(zhǎng)板處和在頭蓋骨的縫隙處的軟骨細(xì)胞增生(上部肥大細(xì)胞)和最終分化(下部肥大細(xì)胞)中的作用一致。軟骨發(fā)育不全以常染色體顯性方式遺傳，并且可以由FGFR3表達(dá)的功能獲得性突變引起。報(bào)道已經(jīng)表明軟骨發(fā)育不全的患者可能具有位于染色體4p16.3的FGFR3突變。已經(jīng)表明FGFR3基因中的突變中的兩種引起超過(guò)99％的軟骨發(fā)育不全病例。這兩種突變中，約97％涉及FGFR3基因外顯子8中的G1138A突變，約2.5％涉及FGFR3基因外顯子8中的G1138C突變。當(dāng)繪制在當(dāng)前關(guān)于FGFR3NM_000142.4(SEQIDNO：1)的genbank條目上時(shí)，所述G1138A突變還稱(chēng)為1394G＞A突變，或者當(dāng)繪制在已廢棄的genbank條目NM_000142.1上時(shí)，稱(chēng)為1138G＞A。后一命名，盡管已經(jīng)廢棄了，但是仍保留在大量的參考文獻(xiàn)中，包括現(xiàn)在的公布文件。位置1394和1138在本文中可互換使用。G1138A和G1138C突變都可以導(dǎo)致FGFR3氨基酸序列中密碼子380位置的氨基酸甘氨酸變?yōu)榫彼?有時(shí)稱(chēng)為“G380R”突變)。FGFR3中其他引起疾病的突變包括位于FGFR3的跨膜結(jié)構(gòu)域中的Gly375突變?yōu)镃ys，和在FGFR3的Ig3-TM接頭區(qū)域中的Gly346突變?yōu)镚lu。除了軟骨發(fā)育不全之外，已經(jīng)表明FGFR3表達(dá)水平的突變和變化與膀胱癌強(qiáng)烈相關(guān)。已經(jīng)表明約75％的低級(jí)、非肌肉侵入性乳突膀胱瘤包含F(xiàn)GFR3中的激活突變。在肌肉侵入性腫瘤中，盡管FGFR3中激活突變的普遍性較低(20％)，在50％的腫瘤中，F(xiàn)GFR3的表達(dá)水平增加，導(dǎo)致更高的FGFR3活性。激活突變或增加的FGFR3表達(dá)水平與腫瘤形成之間的相關(guān)性支持這樣的模型：其中癌細(xì)胞的增殖由FGFR3活性的增加而驅(qū)動(dòng)。這得到體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的支持，其中在體外膀胱癌模型中，小分子抑制劑和針對(duì)FGFR3的抗體能夠減少細(xì)胞增殖，并且在嚙齒動(dòng)物膀胱癌模型中，顯著減小腫瘤的尺寸。目前，膀胱癌的治療是基于腫瘤的切除，這是一種受高復(fù)發(fā)率困擾的方法，導(dǎo)致癌癥的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移。切除之后通常是化療，并且如果癌癥變成肌肉侵入性的，要摘除膀胱。通過(guò)FGFR3-針對(duì)性治療進(jìn)行的囊泡內(nèi)癌癥治療可以減少或消除對(duì)腫瘤切除的需求，并且減少癌癥進(jìn)展和轉(zhuǎn)移的速度。已經(jīng)在臨床膀胱癌分離物中鑒定了多種特異性的FGFR3突變，如下表中所示的那些。通常，這些突變是激活突變，其影響FGFR3的二聚體化、激活或通過(guò)FGFR3信號(hào)傳導(dǎo)，并且通常導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的配體不依賴(lài)性生長(zhǎng)。針對(duì)FGFR3的反義寡核苷酸可以用于針對(duì)所述特異性的突變，以將由于失去野生型FGFR3功能介導(dǎo)的副作用減至最小，或者可以用于針對(duì)轉(zhuǎn)錄物中遠(yuǎn)離所述突變的位點(diǎn)，允許對(duì)于其中所述突變使得癌癥耐受小分子或抗體的癌癥的治療。表：人膀胱瘤中已知的核苷酸和氨基酸變化。核苷酸和氨基酸繪制在NM_000142.1序列上。括號(hào)中的氨基酸指在參考文獻(xiàn)中報(bào)道的但是繪制在之前的轉(zhuǎn)錄物版本(長(zhǎng)度上差兩個(gè)氨基酸)上的相同的氨基酸變化。核苷酸變化氨基酸變化742C＞TR248C746C＞GS249C1114G＞TG372C1117A＞TS373C1124A＞GY375C1138G＞CG380R(G382R)1138G＞AG380E(G382E)1156T＞CF384L(F386L)1172C＞AA391E1948A＞GK650E(K652E)1948A＞CK650Q(K652Q)1949A＞TK650M(K652M)本文所述的寡核苷酸、藥物組合物和方法可以用于減輕或治療癌癥，如膀胱癌，或骨骼發(fā)育不良，如軟骨發(fā)育不全，例如，通過(guò)減少異常的FGFR3核酸分子的表達(dá)或功能來(lái)進(jìn)行。寡核苷酸在一些實(shí)施方案中，本文所述的寡核苷酸靶向編碼異常表達(dá)的FGFR3的核酸(如SEQIDNO：4提供的編碼FGFR3的mRNA和/或如SEQIDNO：5和SEQIDNO：6提供的其片段)以及所述核酸的天然存在的變體，并且由此調(diào)節(jié)FGFR3的表達(dá)。用于本文時(shí)，術(shù)語(yǔ)“寡核苷酸”是指通過(guò)共價(jià)連接兩種以上的核苷酸形成的分子。術(shù)語(yǔ)寡核苷酸通常包括寡核苷、寡核苷酸類(lèi)似物、寡核苷酸模擬物和這些的嵌合組合。在本發(fā)明的情形中，單一核苷酸單位還可以是指一個(gè)單體或單位。在一些實(shí)施方案中，術(shù)語(yǔ)“核苷”、“核苷酸”、“單位”和“單體”可互換使用。應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，當(dāng)指核苷酸或單體序列時(shí)，其所指的是堿基序列，諸如，例如，A，T(或U)，G或C的序列。在一些實(shí)施方案中，本文公開(kāi)的寡核苷酸可用于通過(guò)反義作用機(jī)制調(diào)節(jié)核酸分子的表達(dá)(例如，調(diào)節(jié)異常表達(dá)的FGFR3的表達(dá))。例如，這種調(diào)節(jié)可以通過(guò)提供與一種或多種靶核酸分子(如mRNA(例如，SEQIDNO：4))互補(bǔ)和/或與其雜交的寡核苷酸而實(shí)現(xiàn)。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的寡核苷酸與靶核酸的特定區(qū)域(例如，F(xiàn)GFR3mRNA編碼G380R突變的區(qū)域)互補(bǔ)。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的寡核苷酸能夠與靶核酸的特定區(qū)域(例如，F(xiàn)GFR3mRNA編碼G380R突變的區(qū)域)雜交。用于本文時(shí)，短語(yǔ)“靶核酸”意欲包括DNA和由所述DNA轉(zhuǎn)錄的RNA(包括前-mRNA和mRNA或其部分)，以及來(lái)源于所述RNA的cDNA。例如，在一些實(shí)施方案中，短語(yǔ)“靶核酸”用來(lái)指編碼FGFR3的核酸(例如，mRNA)，或特別是編碼突變的或異常表達(dá)的FGFR3的核酸。用于本文時(shí)，術(shù)語(yǔ)“基因產(chǎn)物”是指由基因或核酸(例如，DNA或RNA)的表達(dá)產(chǎn)生的任意生化物質(zhì)，并且包括，但不限于，mRNA，RNA和/或蛋白。例如，在一些實(shí)施方案中，當(dāng)關(guān)于FGFR3基因使用時(shí)，短語(yǔ)基因產(chǎn)物是指由FGFR3編碼的mRNA。在某些實(shí)施方案中，靶核酸包含選自由下述組成的組的核酸序列：SEQIDNO：1，SEQIDNO：2，SEQIDNO：3，SEQIDNO：4，SEQIDNO：15，SEQIDNO：16，SEQIDNO：17，SEQIDNO：18，SEQIDNO：19和SEQIDNO：20。在其他實(shí)施方案中，本文公開(kāi)的寡核苷酸與包含下述中的一種或多種的核酸序列互補(bǔ)和/或與其雜交：SEQIDNO：1，SEQIDNO：2，SEQIDNO：3，SEQIDNO：4，SEQIDNO：15，SEQIDNO：16，SEQIDNO：17，SEQIDNO：18，SEQIDNO：19和/或SEQIDNO：20。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的寡核苷酸化合物與一種或多種靶核酸(例如，編碼FGFR3的mRNA)互補(bǔ)，并且干擾所靶向的核酸的正常功能(例如，通過(guò)反義作用機(jī)制)。這種本發(fā)明的與靶核酸特異性雜交的寡核苷酸對(duì)靶核酸功能的干擾或調(diào)節(jié)通常稱(chēng)為是“反義的”。要被干擾的DNA的功能可以包括復(fù)制和轉(zhuǎn)錄。要被干擾的RNA的功能可以包括這樣的功能，諸如例如，RNA易位到蛋白翻譯位點(diǎn)，從RNA的蛋白翻譯，RNA剪接以產(chǎn)生一種或多種mRNA種類(lèi)，以及可以被RNA參與或促進(jìn)的催化活性。在一些實(shí)施方案中，干擾靶核酸功能的整體作用調(diào)節(jié)所述靶核酸的產(chǎn)物(例如，F(xiàn)GFR3)的表達(dá)。當(dāng)所述短語(yǔ)用于本文時(shí)，“反義化合物”或“反義寡核苷酸”指與核酸分子(特別是編碼異常表達(dá)的蛋白或酶的靶核酸，如mRNA)的區(qū)域至少部分互補(bǔ)(例如，100％，約99％，98％，97.5％，95％，90％，85％，80％，75％，70％，65％，60％，55％，或50％互補(bǔ))的寡核苷酸。在一些實(shí)施方案中，所述反義化合物或反義寡核苷酸能夠與靶核酸雜交，由此調(diào)節(jié)其表達(dá)。由此，盡管所有的反義化合物都可以認(rèn)為是寡核苷酸，但是，并不是所有的寡核苷酸都是反義化合物。本發(fā)明的寡核苷酸由長(zhǎng)度為約8-50個(gè)核苷酸(如例如長(zhǎng)度為8-30個(gè)核苷酸)的連續(xù)核苷酸序列組成或包含這樣的序列。在不同的實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物不包含RNA單位或單體，而是相反，例如，包含DNA單位或單體，和/或在一些情形中，包含LNA單位或單體。優(yōu)選地，本發(fā)明所述的化合物是線(xiàn)性分子或作為線(xiàn)性分子合成。在一些實(shí)施方案中，所述寡核苷酸是單鏈分子，并且，例如，優(yōu)選地不包括與該寡核苷酸內(nèi)等價(jià)區(qū)域互補(bǔ)的至少3、4或5個(gè)連續(xù)核苷酸的短區(qū)域(即，雙鏈體)。在這一方面，所述寡核苷酸不是實(shí)質(zhì)上雙鏈的。靶序列在某些實(shí)施方案中，本文所述的寡核苷酸能夠調(diào)節(jié)，或者在一些實(shí)施方案中能夠下調(diào)(例如，減少或消除)FGFR3的表達(dá)(例如，在mRNA水平上下調(diào)異常表達(dá)的FGFR3)。在這一方面，本發(fā)明的寡核苷酸可以影響典型地在哺乳動(dòng)物細(xì)胞(如人細(xì)胞(例如，A549細(xì)胞，HeLa細(xì)胞，膀胱細(xì)胞或軟骨細(xì)胞))中的FGFR3的抑制。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的寡核苷酸與靶核酸(例如，突變的或異常表達(dá)的FGFR3mRNA)雜交，并且，與正常的表達(dá)水平(例如，諸如在不存在所述寡核苷酸或綴合物時(shí)的表達(dá)水平)相比，影響至少10％或20％的表達(dá)的抑制或減少。例如，與在攜帶FGFR3突變體等位基因的個(gè)體中觀察到的FGFR3的正常表達(dá)水平相比，本文所公開(kāi)的寡核苷酸可以影響至少約30％，40％，50％，60％，70％，80％，90％，95％，97.5％，98％，99％或100％的FGFR3表達(dá)的減少或抑制。在一些實(shí)施方案中，當(dāng)將靶細(xì)胞或組織暴露于濃度約為0.04nM-25nM(例如，濃度約為0.8nM-20nM)的本發(fā)明的化合物時(shí)，所述調(diào)節(jié)是明顯的。在相同或不同的實(shí)施方案中，靶核酸(例如，編碼突變的FGFR3的mRNA)表達(dá)的抑制少于100％(例如，諸如少于約98％的抑制，少于約95％的抑制，少于約90％的抑制，少于約80％的抑制或少于約70％的抑制)。在一些實(shí)施方案中，本文公開(kāi)的寡核苷酸能夠在mRNA水平上調(diào)節(jié)FGFR3的表達(dá)(例如，通過(guò)靶向并且與編碼突變的或異常表達(dá)的FGFR3的mRNA雜交)。表達(dá)的調(diào)節(jié)(例如，在mRNA水平上)可以通過(guò)測(cè)量蛋白水平或濃度(例如，通過(guò)SDS-PAGE，然后通過(guò)用針對(duì)靶蛋白的適當(dāng)抗體進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡(Westernblotting))來(lái)確定。備選地，表達(dá)的調(diào)節(jié)(例如，在mRNA水平上)可以通過(guò)測(cè)量mRNA的水平或濃度(例如，通過(guò)RNA印跡(Northernblotting)或定量RT-PCR)來(lái)確定。當(dāng)通過(guò)評(píng)估m(xù)RNA水平或濃度來(lái)測(cè)量表達(dá)時(shí)，相對(duì)于在不存在本發(fā)明的寡核苷酸、綴合物或組合物時(shí)觀察到的正常水平或濃度，使用適當(dāng)?shù)膭┝炕驖舛鹊墓押塑账?例如，約0.04nM-25nM，或約0.8nM-20nM)的下調(diào)程度可以大于約10％，約10-20％，大于約20％，大于約25％，或大于約30％。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語(yǔ)“調(diào)節(jié)”(“modulating”或“modulation”)可以意指基因或基因產(chǎn)物(例如，F(xiàn)GFR3mRNA)的表達(dá)增加(例如，刺激或上調(diào))、基因或基因產(chǎn)物(例如，F(xiàn)GFR3mRNA)的表達(dá)的減少(例如，下調(diào)或抑制)、和兩種以上基因產(chǎn)物之間的相對(duì)表達(dá)中的變化(例如，相對(duì)于野生型FGFR3的表達(dá)，突變體FGFR3表達(dá)減少)中的一種或多種。在本文所述的一些情形中，下調(diào)和抑制是優(yōu)選的調(diào)節(jié)形式，特別是當(dāng)其涉及調(diào)節(jié)突變的FGFR3的表達(dá)時(shí)。在本文所述的一些情形中，術(shù)語(yǔ)“表達(dá)”意指來(lái)自基因或核酸(例如，DNA)的信息用于合成基因產(chǎn)物(例如，mRNA，RNA和/或蛋白的過(guò)程)，并且包括，但不限于，復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和翻譯步驟中的一個(gè)或多個(gè)。可以由本發(fā)明的寡核苷酸調(diào)節(jié)的表達(dá)步驟可以包括，例如，轉(zhuǎn)錄、剪接、翻譯和蛋白的翻譯后修飾。當(dāng)其涉及靶向、調(diào)節(jié)和表達(dá)時(shí)，術(shù)語(yǔ)“FGFR3”可以廣泛地指3型成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體基因或其基因產(chǎn)物(例如，前-mRNA，成熟mRNA，cDNA或蛋白)，并且可以包括突變的和野生型形式、其同種型和變體(例如，編碼人FGFR3和編碼FGFR3蛋白的核酸)。斜體的術(shù)語(yǔ)“FGFR3”用在本文中典型地指FGFR3基因。術(shù)語(yǔ)“野生型”在其描述FGFR3時(shí)是指在受試者或群體中最常觀察到的FGFR3等位基因、核苷酸序列、氨基酸序列或表型。例如，相對(duì)于患有雜合性軟骨發(fā)育不全的患者中的G380R突變FGFR3，術(shù)語(yǔ)“野生型”是指不包含G380R突變的其余的等位基因。術(shù)語(yǔ)“突變的”當(dāng)其描述FGFR3時(shí)是指受試者或群體中改變的等位基因、核苷酸序列、氨基酸序列或表型，例如，導(dǎo)致單堿基核苷酸被遺傳材料(例如，DNA或RNA)的另一個(gè)核苷酸替換的轉(zhuǎn)變和顛換點(diǎn)突變。突變的實(shí)例是在人FGFR3編碼區(qū)位置1138(對(duì)應(yīng)于人FGFR3(NM_000142)的位置1394，并且包括其含有向G到A轉(zhuǎn)換置換的任意變體和多形體)的G到A的轉(zhuǎn)換置換，其導(dǎo)致密碼位置380由GGG(編碼精氨酸或R)變?yōu)锳GG或CGG(c編碼甘氨酸或G)，由此使用引用“G380R”來(lái)描述所述突變。關(guān)于該突變的SNPID是SNPrs28931614。當(dāng)其特別涉及FGFR3時(shí)，短語(yǔ)“調(diào)節(jié)表的”意指FGFR3基因的基因產(chǎn)物(例如，野生型和/或突變的FGFR3的基因產(chǎn)物)的刺激、上調(diào)、下調(diào)和/或抑制。例如，靶向編碼異常表達(dá)的FGFR3的核酸(例如，mRNA)并且與所述核酸(例如，編碼FGFR3的mRNA)特異性雜交的本發(fā)明的寡核苷酸可以調(diào)節(jié)FGFR3的表達(dá)。本文所述的寡核苷酸可以調(diào)節(jié)患有雜合性軟骨發(fā)育不全的患者中野生型和突變的FGFR3二者的表達(dá)。備選地，在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本文所述的寡核苷酸可以?xún)?yōu)先下調(diào)或抑制突變體FGFR3的表達(dá)(例如，本文所述的寡核苷酸可以調(diào)節(jié)患有由FGFR3G380R突變引起的雜合性軟骨發(fā)育不全的患者中G380R突變體FGFR3的表達(dá))。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的寡核苷酸能夠靶向特定的核酸。在本文所述的反義寡核苷酸的情形中，靶向特定的核酸可以是多個(gè)步驟的過(guò)程。所述過(guò)程通常以鑒定功能待調(diào)節(jié)的核酸序列開(kāi)始。例如，這可以是其表達(dá)與特定的病癥或疾病狀態(tài)(例如，軟骨發(fā)育不全)相關(guān)的核酸(例如，mRNA)。在一些實(shí)施方案中，所述靶核酸(例如，mRNA)編碼FGFR3。例如，所述靶核酸可以包含核酸基因編碼G380RFGFR3突變的區(qū)域或片段，并且靶向所述區(qū)域的寡核苷酸與編碼FGFR3mRNA的核酸互補(bǔ)和/或與其雜交。備選地，在一些實(shí)施方案中，所述靶核酸編碼FGFR3基因(或其相對(duì)應(yīng)的mRNA基因產(chǎn)物)編碼G380R突變的特定區(qū)域。靶向過(guò)程還可以包括確定所述靶基因內(nèi)發(fā)生反義相互作用的一個(gè)位點(diǎn)或多位位點(diǎn)，以使能夠引起一種或多種需要的作用。所述一種或多種需要的作用可以包括，例如，調(diào)節(jié)基因產(chǎn)物(例如，野生型和/或突變體mRNA或蛋白)的表達(dá)，相對(duì)于該基因或mRNA或者其他基因或mRNAs上的其他位點(diǎn)對(duì)靶位點(diǎn)的選擇性結(jié)合(例如，增加的結(jié)合親和性)，充分的或增強(qiáng)的向靶標(biāo)的遞送，以及最小或沒(méi)有不需要的副作用。在一些實(shí)施方案中，優(yōu)選的被靶向的核酸或mRNA位點(diǎn)編碼FGFR3G380R突變和/或在所述G380R突變周?chē)蚺c其鄰近的區(qū)域。具體地，優(yōu)選的位點(diǎn)包括在FGFR3密碼子380的位置1138處的鳥(niǎo)嘌呤到腺嘌呤的核苷酸突變。所述G380R突變表示導(dǎo)致發(fā)展軟骨發(fā)育不全的最常見(jiàn)的突變。如上文所述，術(shù)語(yǔ)“G380R”是指導(dǎo)致FGFR3蛋白密碼子380處的甘氨酸(G)被替換為精氨酸(R)。在本發(fā)明的一些情形中，短語(yǔ)“G380R區(qū)域”可以包括G380R突變上游和/或下游的密碼子，例如，在G380R突變上游和/或下游約2，5，10，12，20，30，50，60，75，80，100個(gè)以上的密碼子測(cè)量的區(qū)域。G380R突變(密碼子位置380的GGG變?yōu)锳GG或CGG)在G380R受體蛋白的跨膜結(jié)構(gòu)域內(nèi)發(fā)生，并且導(dǎo)致該受體的過(guò)度激活。FGFR3的延長(zhǎng)的激活導(dǎo)致軟骨細(xì)胞增殖的過(guò)早終止和過(guò)早的軟骨細(xì)胞分化。G380R-突變形式的FGFR3具有引起疾病的獲得性功能，并且因此本文所述的反義寡核苷酸可以選擇性下調(diào)突變的FGFR3的表達(dá)，從而通過(guò)允許剩余的野生型等位基因指導(dǎo)長(zhǎng)骨中生長(zhǎng)板的正確擴(kuò)展而恢復(fù)正常的軟骨細(xì)胞功能。具體地，在患有雜合性軟骨發(fā)育不全的患者中，本文所述的寡核苷酸區(qū)分性或選擇性地靶向并與編碼G380R-突變的FGFR3的核酸(例如，由包含SEQIDNO：4的序列編碼的核酸)(即mRNA)雜交，以使突變的FGFR3等位基因的表達(dá)被下調(diào)或抑制，而該化合物不靶向或與野生型FGFR3(例如，SEQIDNO：1)雜交，或者在較低程度上靶向或雜交，由此保持剩余的野生型等位基因的功能，由此恢復(fù)正常的軟骨細(xì)胞功能并且指導(dǎo)長(zhǎng)骨中生長(zhǎng)板的正確擴(kuò)展。本文所述的寡核苷酸可以被遞送到動(dòng)物、哺乳動(dòng)物、人或細(xì)胞中的一種或多種中。在一些實(shí)施方案中，被靶向的細(xì)胞類(lèi)型可以包括軟骨細(xì)胞、HeLas細(xì)胞或A549細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所用的寡核苷酸的濃度(例如，在A549細(xì)胞中)可以是約0.25nM，0.5nM，1nM，5nM，40nM，100nM，200nM，250nM以上。在一些實(shí)施方案中，所用的寡核苷酸濃度可以是25nM(例如，在軟骨細(xì)胞中)。在一些實(shí)施方案中，所用的寡核苷酸濃度可以是1nM(例如，在軟骨細(xì)胞中)。在不存在轉(zhuǎn)染劑的條件下(例如，使用剝裸遞送(gymnoticdelivery))的條件下，可以使用約1μM-25μM(例如，諸如約5μM)的寡核苷酸濃度來(lái)下調(diào)靶基因。在某些實(shí)施方案中，本文公開(kāi)的寡核苷酸可以以約0.2至約20mg/kg的劑量周期性施用給受試者(例如，每天、每周、每月、每季度、每半年或每年靜脈內(nèi)或皮下施用給人)(例如，以至少約0.2mg/kg，0.25mg/kg，0.5mg/kg，1.0mg/kg，1.5mg/kg，2.0mg/kg，2.5mg/kg，3.0mg/kg，3.5mg/kg，4.0mg/kg，4.5mg/kg，5.0mg/kg，6.0mg/kg，7.5mg/kg，8.0mg/kg，10mg/kg，12.5mg/kg，15mg/kg或20mg/kg的每天或每周劑量施用)。應(yīng)該注意，在一些實(shí)施方案中，用于治療細(xì)胞的適當(dāng)?shù)墓押塑账釢舛鹊拇_定可以使用轉(zhuǎn)染劑(例如，LIPOFECTIN)在體外細(xì)胞測(cè)定中進(jìn)行。在一些實(shí)施方案中，本文所述的寡核苷酸是FGFR3的蛋白抑制劑(即，在使所述細(xì)胞或組織暴露于相對(duì)低濃度的所述寡核苷酸時(shí)，能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞或組織中的FGFR3表達(dá))。在一些實(shí)施方案中，所述寡核苷酸能夠以相對(duì)低濃度的所述寡核苷酸減少或以除此之外的方式抑制FGFR3(例如，突變的FGFR3)的表達(dá)。例如，在一些實(shí)施方案中，寡核苷酸可以以相對(duì)低的濃度(例如，通過(guò)轉(zhuǎn)染測(cè)定確定的小于約5nM的IC50，或小于約4nM的IC50，如小于2nM)抑制細(xì)胞的FGFR3表達(dá)。當(dāng)用于本文時(shí)，術(shù)語(yǔ)“IC50”是指足以抑制目標(biāo)參數(shù)(例如，F(xiàn)GFR3蛋白表達(dá))約百分之五十的寡核苷酸濃度。在某些實(shí)施方案中，本文公開(kāi)的反義寡核苷酸特征在于，相對(duì)于野生型FGFR3蛋白的表達(dá)，選擇性抑制突變體FGFR3蛋白的表達(dá)。由此，寡核苷酸可以特征在于，相對(duì)于抑制野生型FGFR3蛋白表達(dá)所需要的濃度，以較低的濃度(例如，約低兩倍)抑制突變體FGFR3蛋白的表達(dá)。例如，所述反義寡核苷酸對(duì)于突變體和野生型FGFR3蛋白的IC50可以表現(xiàn)出至少兩倍的差異(例如，在患有雜合性軟骨發(fā)育不全的哺乳動(dòng)物中，相對(duì)于正?；蛞吧偷鞍?，抑制FGFR3突變體蛋白的表達(dá)所需要的IC50中至少約2.5-，3-，4-，5-，6-，7-，8-，9-或10-倍的差異)。因此，本發(fā)明提供調(diào)節(jié)(例如，下調(diào)或抑制)異常表達(dá)的FGFR3蛋白和/或FGFR3mRNA、并且特別是由G380R-突變的FGFR3基因編碼的FGFR3mRNA在異常表達(dá)所述FGFR3蛋白和/或mRNA的細(xì)胞(例如，表達(dá)G380R突變體FGFR3蛋白和/或mRNA的軟骨細(xì)胞)中的表達(dá)的方法。所述方法包括向細(xì)胞施用本發(fā)明所述的寡核苷酸或綴合物(或以除此之外的方式使所述細(xì)胞與所述寡核苷酸或綴合物接觸)，以下調(diào)或抑制所述細(xì)胞中FGFR3蛋白和/或mRNA的表達(dá)。在一些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞可以是體外或體內(nèi)哺乳動(dòng)物細(xì)胞，諸如人細(xì)胞。例如，本發(fā)明靶向突變的FGFR3基因并且能夠與其基因產(chǎn)物(例如，突變的FGFR3mRNA)特異性雜交的寡核苷酸可以調(diào)節(jié)突變的FGFR3的表達(dá)。本發(fā)明的寡核苷酸可以調(diào)節(jié)患有雜合性軟骨發(fā)育不全的患者中野生型和/或突變的FGFR3等位基因的表達(dá)。向患者(例如，人或哺乳動(dòng)物)、受試者(例如，人或哺乳動(dòng)物)和/或細(xì)胞(例如，人或哺乳動(dòng)物的)的施用可以在體內(nèi)、離體或在體外發(fā)生。例如，在一些實(shí)施方案中，在藥用制劑和/或在藥用載體或遞送賦形劑中的寡核苷酸可以通過(guò)本文所述的方法直接施用到患者或受試者體內(nèi)。備選地，在一些實(shí)施方案中，所述寡核苷酸可以在細(xì)胞被移除且在所述細(xì)胞回到患者或受試者體內(nèi)之前施用到所述細(xì)胞中。在一些實(shí)施方案中，在細(xì)胞被移除且在所述細(xì)胞回到患者或受試者體內(nèi)之前，所述細(xì)胞可以保持在培養(yǎng)條件下。短語(yǔ)“靶核酸”用在本文中是指編碼哺乳動(dòng)物FGFR3的核酸(例如，mRNA)，且特別是指編碼突變的或異常表達(dá)的FGFR3的核酸(例如，mRNA)。例如，本文公開(kāi)的是編碼G380R-突變的FGFR3的靶核酸(例如，編碼G380R-突變的FGFR3的mRNA，如由SEQIDNO：4編碼的)。適當(dāng)?shù)陌泻怂岚ň幋aFGFR3或其天然存在的變體的核酸，以及來(lái)源于于其的RNA核酸(例如，包含或?qū)?yīng)于SEQIDNOS：15-20的mRNA靶序列)，優(yōu)選mRNA，如前-mRNA，盡管優(yōu)選成熟的mRNA。在一些實(shí)施方案中(例如，當(dāng)用于研究或診斷情形中)，“靶核酸”可以似乎來(lái)源于上述DNA或RNA核酸靶標(biāo)的cDNA或合成的寡核苷酸。本發(fā)明所述的寡核苷酸能夠與靶核酸雜交或與所述靶核酸的基因產(chǎn)物雜交。應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，在一些情形中，所述靶核酸序列是cDNA序列，并且因此對(duì)應(yīng)于成熟的mRNA靶序列，盡管在cDNA序列中，尿嘧啶可以替換為胸腺嘧啶。術(shù)語(yǔ)“其天然存在的變體”是指在定義的分類(lèi)學(xué)組中，如哺乳動(dòng)物，如小鼠、猴，并且優(yōu)選人中天然存在的FGFR3多肽和核酸序列的變體。典型地，當(dāng)涉及多核苷酸的“天然存在的變體”時(shí)，該術(shù)語(yǔ)還可以包括通過(guò)染色體易位或復(fù)制發(fā)現(xiàn)在染色體4p16.3上的編碼FGFR3的基因組DNA、和RNA(如來(lái)源于其的mRNA)的任意等位基因變體。例如，F(xiàn)GFR3的天然存在的變體可以包括由SEQIDNO：4編碼的G380R突變體，或其天然存在的變體(例如，SNPID’srs28931614，rs11943863或rs17881656)。天然存在的變體還可以包括來(lái)源于FGFR3mRNA的可變剪接的變體。當(dāng)提及特定的多肽序列時(shí)，該術(shù)語(yǔ)還包括蛋白的天然存在形式，由此其可以例如通過(guò)共翻譯修飾或翻譯后修飾(例如，信號(hào)肽切割、蛋白水解切割、糖基化等)而進(jìn)行加工。序列在一些實(shí)施方案中，所述寡核苷酸包含或由對(duì)應(yīng)于SEQIDNO：1或SEQIDNO：4的核苷酸序列或SEQIDNO：1或SEQIDNO：4的片段的反向互補(bǔ)物的連續(xù)的核苷酸序列組成。因此，所述寡核苷酸可以包含或由選自由SEQIDNOS：9，10，11，12，13或14組成的組的序列組成，其中所述寡核苷酸(或其連續(xù)的核苷酸部分)可以任選地具有一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)針對(duì)所選的靶序列的錯(cuò)配。在一些實(shí)施方案中，所述寡核苷酸可以包含或由對(duì)應(yīng)于編碼包含G380R突變和在所述突變周?chē)暮塑账岬腇GFR3序列區(qū)域的核苷酸序列的互補(bǔ)物的連續(xù)的核苷酸序列組成。例如，在一些實(shí)施方案中，所述寡核苷酸可以包含表1中鑒定的序列(即，SEQIDNO：9，SEQIDNO：10，SEQIDNO：11，SEQIDNO：12，SEQIDNO：13或SEQIDNO：14)。所述寡核苷酸可以是與編碼包含G380R突變的FGFR3的核酸(例如，mRNA)的區(qū)域(例如，在G380R突變上游和/或下游約1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20個(gè)以上核苷酸的區(qū)域)互補(bǔ)，如表1中鑒定的靶序列。例如，在一些實(shí)施方案中，所述寡核苷酸可以與表1中鑒定的mRNA靶序列(例如，SEQIDNO：15，SEQIDNO：16，SEQIDNO：17，SEQIDNO：18，SEQIDNO：19或SEQIDNO：20)互補(bǔ)。在一些實(shí)施方案中，所述互補(bǔ)寡核苷酸能夠與FGFR3的基因產(chǎn)物(即，F(xiàn)GFR3mRNA)、且特別是編碼G380R突變的FGFR3的基因產(chǎn)物雜交。表1所述寡核苷酸可以包含或由與核酸編碼哺乳動(dòng)物FGFR3的等價(jià)區(qū)域(例如，例如，SEQIDNO：1，SEQIDNO：4或其片段)充分互補(bǔ)(完全互補(bǔ))的連續(xù)的核苷酸序列組成。因此，所述寡核苷酸可以包含或由能夠與編碼FGFR3的核酸(即，F(xiàn)GFR3mRNA)雜交的反義核苷酸序列組成。然而，在一些實(shí)施方案中，當(dāng)與靶序列雜交時(shí)，所述寡核苷酸可以耐受1，2，3或4個(gè)(或更多個(gè))錯(cuò)配，并且仍然與所述靶標(biāo)充分結(jié)合，以顯示出需要的作用(例如，下調(diào)靶mRNA)。例如，錯(cuò)配可以由所述核苷酸序列內(nèi)存在的增加長(zhǎng)度的寡核苷酸序列和/或增加數(shù)量的核苷酸類(lèi)似物(如鎖定核酸(LNA))而得到補(bǔ)償。在一些實(shí)施方案中，當(dāng)與靶序列雜交時(shí)，如與編碼哺乳動(dòng)物FGFR3mRNA的核酸的對(duì)應(yīng)區(qū)域雜交時(shí)，所述連續(xù)的核苷酸序列包含不超過(guò)3個(gè)錯(cuò)配(例如，不超過(guò)1個(gè)或不超過(guò)2個(gè)錯(cuò)配)。在一些實(shí)施方案中，當(dāng)與靶序列雜交時(shí)，如與編碼哺乳動(dòng)物FGFR3mRNA的核酸的對(duì)應(yīng)區(qū)域雜交時(shí)，所述連續(xù)的核苷酸序列包含不超過(guò)一個(gè)錯(cuò)配。本發(fā)明的寡核苷酸的核苷酸序列或連續(xù)的核苷酸序列優(yōu)選地與選自由SEQIDNOS：15，16，17，18，19或20組成的組的序列至少80％互補(bǔ)，諸如至少85％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％，諸如至少100％互補(bǔ)。本發(fā)明的寡核苷酸的核苷酸序列或連續(xù)的核苷酸序列優(yōu)選地與SEQIDNO：4中存在的對(duì)應(yīng)序列的反向互補(bǔ)物至少80％同源，諸如至少85％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％同源，至少97％同源，至少98％同源，至少99％同源，如100％同源(相同)。本發(fā)明的寡核苷酸的核苷酸序列或連續(xù)的核苷酸序列優(yōu)選與SEQIDNO：4中存在的子序列(sub-sequence)至少80％互補(bǔ)，諸如至少85％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％互補(bǔ)，至少97％互補(bǔ)，至少98％互補(bǔ)，至少99％互補(bǔ)，諸如100％互補(bǔ)(完全互補(bǔ))。在一些實(shí)施方案中，所述寡核苷酸(或其連續(xù)的核苷酸部分)選自，或包含，選自由下述組成的組的序列中的一種：SEQIDNOS：9，10，11，12，13或14，或其至少約6-10個(gè)連續(xù)的核苷酸的子序列。在一些實(shí)施方案中，當(dāng)與序列比較時(shí)，所述寡核苷酸(或其連續(xù)的核苷酸部分)可以另外包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)錯(cuò)配。在一些實(shí)施方案中，所述子序列可以由8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28或29個(gè)連續(xù)的核苷酸組成，諸如約12-22個(gè)，諸如約12-18個(gè)核苷酸。適當(dāng)?shù)?，在一些?shí)施方案中，所述子序列與本發(fā)明的寡核苷酸的連續(xù)的核苷酸序列的長(zhǎng)度相同。然而，應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，在一些實(shí)施方案中，所述寡核苷酸的核苷酸序列可以包含另外的5’或3’核苷酸或修飾，諸如，獨(dú)立地1，2，3，4或5個(gè)另外的核苷酸5’和/或3’，其與靶序列不互補(bǔ)。在這一方面，在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的寡核苷酸可以包含在5’和或3’側(cè)連另外的核苷酸的連續(xù)的核苷酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述另外的5’或3’核苷酸是天然存在的核苷酸，諸如DNA或RNA。在一些實(shí)施方案中，所述另外的5’或3’核苷酸可以表示在本文公開(kāi)的gapmer寡核苷酸的情形中所稱(chēng)的區(qū)域W。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明所述的寡核苷酸由SEQIDNOS：9，10，11，12，13或14的核苷酸序列，或其子序列組成或包含這些序列。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明所述的寡核苷酸由SEQIDNO：9的核苷酸序列或其子序列組成或包含這些序列。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明所述的寡核苷酸由SEQIDNO：10的核苷酸序列或其子序列組成或包含這些序列。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明所述的寡核苷酸由SEQIDNO：11的核苷酸序列或其子序列組成或包含這些序列。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明所述的寡核苷酸由SEQIDNO：12的核苷酸序列或其子序列組成或包含這些序列。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明所述的寡核苷酸由SEQIDNO：13的核苷酸序列或其子序列組成或包含這些序列。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明所述的寡核苷酸由SEQIDNO：14的核苷酸序列或其子序列組成或包含這些序列。在確定本發(fā)明的寡核苷酸(或其區(qū)域)與和尚的靶區(qū)域(例如，編碼哺乳動(dòng)物FGFR3蛋白的mRNA)之間的互補(bǔ)性程度時(shí)，互補(bǔ)性(或同源性或同一性)程度表示為所述寡核苷酸序列(或其區(qū)域)同與其最佳比對(duì)的靶區(qū)域的序列(或該靶區(qū)域的反向互補(bǔ)物)之間的百分比同一性(或百分比同源性)。該百分比通過(guò)計(jì)數(shù)這2個(gè)序列之間相同的比對(duì)堿基的數(shù)目除以所述寡核苷酸中連續(xù)的單體的總數(shù)再乘以100計(jì)算得到。在這樣的比較中，如果存在缺口，優(yōu)選地所述缺口僅是錯(cuò)配，而不是缺口內(nèi)的單體數(shù)目在本發(fā)明的寡核苷酸與靶區(qū)域之間不同的區(qū)域。用于本文時(shí)，術(shù)語(yǔ)“同源的”和“同源性”與術(shù)語(yǔ)“同一性”和“相同性”可互換。短語(yǔ)“相對(duì)應(yīng)的”和“對(duì)應(yīng)于”是指寡核苷酸的核苷酸序列(即，核堿基或堿基序列)或連續(xù)的核苷酸序列與另一序列的等價(jià)的連續(xù)的核苷酸序列之間的比較，所述另一序列選自下述：(i)核酸靶標(biāo)的反向互補(bǔ)物的子序列，諸如編碼FGFR3蛋白的mRNA，和/或(ii)本文提供的核苷酸的序列，諸如由SEQIDNOS：15，16，17，18，19或20或其子序列組成的組。核苷酸類(lèi)似物直接與等價(jià)的或?qū)?yīng)的核苷酸進(jìn)行比較。與(i)或(ii)所述的另一序列相對(duì)應(yīng)的第一序列與所述序列在第一序列(諸如連續(xù)的核苷酸序列)的長(zhǎng)度上相同，或者，如本文所述，在一些實(shí)施方案中，可以與相對(duì)應(yīng)的序列至少80％同源，諸如至少85％，至少90％，至少91％，至少92％至少93％，至少94％，至少95％，至少96％同源，如100％同源(相同的)。一旦已經(jīng)鑒定了一個(gè)或多個(gè)靶位點(diǎn)，選擇與靶標(biāo)充分互補(bǔ)(即，非常充分地且以充分的特異性雜交，以給出需要的作用)的寡核苷酸。例如，當(dāng)鑒定FGFR3mRNA針對(duì)靶標(biāo)的區(qū)域時(shí)，可以基于針對(duì)所述mRNA靶標(biāo)或備選地針對(duì)編碼所述mRNA靶標(biāo)的DNA的互補(bǔ)性來(lái)選擇寡核苷酸。在這一情形中，“雜交”意指互補(bǔ)核苷或核苷酸堿基之間的氫鍵鍵合，其可以是Watson-Crick、Hoogsteen或反向Hoogsteen氫鍵鍵合。例如，腺嘌呤(A)和胸腺嘧啶(T)是互補(bǔ)核堿基，其通過(guò)形成氫鍵配對(duì)。“互補(bǔ)的”用在本文中是指兩個(gè)核苷酸之間精確配對(duì)的能力。例如，如果在寡核苷酸特定位置的核苷酸能夠與在DNA或RNA分子同一位置的核苷酸氫鍵鍵合，那么，認(rèn)為所述寡核苷酸與所述DNA或RNA在所述位置彼此互補(bǔ)。當(dāng)每個(gè)分子中足夠數(shù)量的對(duì)應(yīng)位置被可以彼此氫鍵鍵合的核苷酸占據(jù)時(shí)，所述寡核苷酸與所述DNA或RNA彼此是互補(bǔ)的。因此，“可特異性雜交的”和“互補(bǔ)的”是用來(lái)表示足夠程度的互補(bǔ)性或精確的配對(duì)的術(shù)語(yǔ)，以在所述寡核苷酸與所述DNA或RNA靶標(biāo)之間發(fā)生穩(wěn)定的且特異性的結(jié)合。在本領(lǐng)域中應(yīng)該理解，反義化合物的序列不必與其可特異性雜交的靶核心的序列100％互補(bǔ)。例如，反義化合物的序列可以與其可特異性雜交的靶序列的序列約40％，50％，60％，65％，70％，75％，80％，85％，90％，95％，97％，97.5％，99％或100％互補(bǔ)。當(dāng)反義化合物與靶DNA或RNA分子的結(jié)合干擾所述靶DNA或RNA的正常功能以引起功能或應(yīng)用的喪失時(shí)，并且存在充分程度的互補(bǔ)性，以在需要特異性結(jié)合的條件下(例如，在體內(nèi)測(cè)定或治療性治療的生理?xiàng)l件下，和在體外測(cè)定的情形中，在進(jìn)行測(cè)定的條件下)避免所述反義化合物與非靶序列的非特異性結(jié)合時(shí)，所述反義化合物是特異性雜交的。短語(yǔ)“反向互補(bǔ)物”、“反向互補(bǔ)的”和“反向互補(bǔ)性”用在本文中與術(shù)語(yǔ)“互補(bǔ)物”、“互補(bǔ)的”和“互補(bǔ)性”可互換。通過(guò)實(shí)驗(yàn)鑒定本發(fā)明與靶核酸(例如，編碼突變的FGFR3蛋白的mRNA)雜交并且抑制靶核酸的表達(dá)的反義和其他寡核苷酸，并且這些化合物的序列在本文中鑒定為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案(例如，表1中鑒定的序列)。這些優(yōu)選的序列與之互補(bǔ)的靶核酸或位點(diǎn)在本文中稱(chēng)為“活性位點(diǎn)”，并且因此是優(yōu)選的靶向位點(diǎn)(例如，表1中鑒定的靶序列)。本發(fā)明所包括的活性位點(diǎn)的實(shí)例包括在FGFR3密碼子380處甘氨酸到精氨酸突變(諸如例如G380R區(qū)域)周?chē)膮^(qū)域。因此，本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案包括與該活性位點(diǎn)區(qū)域雜交的化合物，其可以包括緊在該活性位點(diǎn)上游和/或下游的核苷酸。例如，所述區(qū)域在G380R突變上游和/或下游約1，2，5，10，12，20，30，50，60，75，80，100個(gè)以上密碼子處測(cè)量。短語(yǔ)“對(duì)應(yīng)的核苷酸類(lèi)似物”和“對(duì)應(yīng)的核苷酸”旨在表示在所述核酸類(lèi)似物中存在的核苷酸與天然存在的核苷酸是相同的。例如，當(dāng)所述核苷酸的2-脫氧核糖單位與腺嘌呤連接時(shí)，對(duì)應(yīng)的核苷酸類(lèi)似物包含與腺嘌呤連接的戊糖單位(與2-脫氧核糖不同)。長(zhǎng)度所述寡核苷酸可以包含或由長(zhǎng)度總共為5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29或30個(gè)連續(xù)的核苷酸的連續(xù)核苷酸序列組成。在一些實(shí)施方案中，所述寡核苷酸包含或由長(zhǎng)度總共約為8-25個(gè)，諸如約10-22個(gè)，諸如約12-18個(gè)，諸如約13-17個(gè)或12-16個(gè)，諸如約13，14，15，16個(gè)連續(xù)的核苷酸的連續(xù)核苷酸序列組成。在一些實(shí)施方案中，所述寡核苷酸包含或由長(zhǎng)度總共為8，9，10，11，12，13或14個(gè)連續(xù)的核苷酸的連續(xù)核苷酸序列組成。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明所述的寡核苷酸由不超過(guò)22個(gè)核苷酸組成，諸如不超過(guò)20個(gè)核苷酸，諸如不超過(guò)18個(gè)核苷酸，諸如15，16或17個(gè)核苷酸。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的寡核苷酸包含少于20個(gè)核苷酸。應(yīng)該理解，當(dāng)對(duì)于寡核苷酸或連續(xù)核苷酸序列長(zhǎng)度給定一個(gè)范圍時(shí)，其包括在該范圍內(nèi)提供的下限和上限長(zhǎng)度，例如，從10到30(或在10和30之間)包括10和30二者。核苷和核苷類(lèi)似物核苷酸類(lèi)似物術(shù)語(yǔ)“核苷酸”用在本文中是指包含糖結(jié)構(gòu)部分、堿基結(jié)構(gòu)部分和共價(jià)連接的基團(tuán)(如磷酸或硫代磷酸核苷酸間連接基團(tuán))的糖苷，并且覆蓋天然存在的核苷酸(如DNA或RNA)和包含修飾的糖和/或堿基結(jié)構(gòu)部分的非天然存在的核苷酸，其在本文中還稱(chēng)為“核苷酸類(lèi)似物”。本文中，單個(gè)核苷酸(單位)還可以稱(chēng)為單體或核酸單位。在生物化學(xué)領(lǐng)域中，術(shù)語(yǔ)“核苷”通常用于指包含糖結(jié)構(gòu)部分和堿基結(jié)構(gòu)部分的糖苷，并且因此可以在提及核苷酸單位時(shí)使用，所述核苷酸單位由寡聚體的核苷酸之間的核苷酸間鍵共價(jià)連接。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，寡核苷酸的5’核苷酸不包含5’核苷酸間連接基團(tuán)，盡管可以或可以不包含5’末端基團(tuán)。非天然存在的核苷酸包括具有修飾的糖結(jié)構(gòu)部分(如二環(huán)核苷酸或2’修飾的核苷酸，如2’取代的核苷酸)的核苷酸?！昂塑账犷?lèi)似物”是天然存在的核苷酸(如DNA或RNA核苷酸)利用在糖和/或堿基結(jié)構(gòu)部分中的修飾產(chǎn)生的變體。在寡核苷酸的情形中，類(lèi)似物在原理上可能僅僅是“沉默的”或等價(jià)于所述天然核苷酸，即，對(duì)所述寡核苷酸起作用抑制靶基因表達(dá)的方式?jīng)]有功能性影響。然而，例如，如果所述“等價(jià)的”類(lèi)似物更容易制備或制備成本更低，或者存儲(chǔ)或制備條件下更穩(wěn)定，或者帶有標(biāo)簽或標(biāo)記，那么，所述“等價(jià)的”類(lèi)似物可能是有用的。然而，優(yōu)選地，所述類(lèi)似物將對(duì)寡聚體起作用抑制表達(dá)的方式具有功能性影響；例如，通過(guò)產(chǎn)生針對(duì)靶標(biāo)的增加的結(jié)合親和力和/或增加的對(duì)細(xì)胞內(nèi)核酸酶的抗性和/或增加的轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞內(nèi)的容易性。例如，核苷類(lèi)似物的具體實(shí)例記述在Freier&Altmann；Nucl.AcidRes.(核酸研究)，1997，25，4429-4443和Uhlmann；Curr.OpinioninDrugDevelopment(現(xiàn)代藥物開(kāi)發(fā)觀點(diǎn))，2000，3(2)，293-213中，并且如下：由此，所述寡聚體可以包含或由天然存在的核苷酸-優(yōu)選2’-脫氧核苷酸(此處通常稱(chēng)為“DNA”)、而且還可能是核糖核苷酸(此處通常稱(chēng)為“RNA”)或所述天然存在存在的核苷酸與一種或多種非天然存在的核苷酸(即，核苷酸類(lèi)似物)的組合的簡(jiǎn)單序列組成。所述核苷酸類(lèi)似物可以適當(dāng)?shù)卦黾铀龉丫垠w對(duì)靶序列的親和力。PCT/DK2006/000512提供了適當(dāng)?shù)暮蛢?yōu)選的核苷酸類(lèi)似物的實(shí)例，或者在其中提及了這樣的實(shí)例。在寡聚體中結(jié)合增加親和力的核苷酸類(lèi)似物，如LNA或2’-取代的糖，可以允許減小特異性結(jié)合的寡聚體的尺寸，并且還可以在發(fā)生非特異性的或異常的結(jié)合之前減小所述寡聚體的尺寸的上限。在一些實(shí)施方案中，所述寡聚體包含至少2個(gè)核苷酸類(lèi)似物。在一些實(shí)施方案中，所述寡聚體包含3-8個(gè)核苷酸類(lèi)似物，例如6或7個(gè)核苷酸類(lèi)似物。在目前最優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述核苷酸類(lèi)似物中的至少一個(gè)是鎖定核酸(LNA)；例如，所述核苷酸類(lèi)似物中的至少3個(gè)或至少4個(gè)，或至少5個(gè)，或至少6個(gè)，或至少7個(gè)，或8個(gè)可以是LNA。在一些實(shí)施方案中，所有的核苷酸類(lèi)似物可以是LNA。應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，當(dāng)提及僅由核苷酸組成的優(yōu)選的核苷酸序列基序或核苷酸序列時(shí)，由所述序列定義的本發(fā)明的寡聚體可以包含取代所述序列中存在的一個(gè)或多個(gè)核苷酸的對(duì)應(yīng)的核苷酸類(lèi)似物，如LNA單位或其他的核苷酸類(lèi)似物，其增加所述寡聚體/靶標(biāo)雙鏈體的雙鏈體穩(wěn)定性/Tm(即，增加親和力的核苷酸類(lèi)似物)。LNA術(shù)語(yǔ)“LNA”是指包含C2*-C4*二基團(tuán)(橋鍵)并且稱(chēng)為“鎖定核酸”或“BNA”的二環(huán)核苷類(lèi)似物(“二環(huán)核酸”或“橋接的核酸”)。其可以指LNA單體，或者，當(dāng)用在“LNA寡核苷酸”的情形中時(shí)，LNA是指包含一個(gè)或多個(gè)所述二環(huán)核苷酸類(lèi)似物的寡核苷酸。在一些方面中，二環(huán)核苷類(lèi)似物是LNA核苷酸，并且這些術(shù)語(yǔ)因此可以互換使用，并且在此類(lèi)實(shí)施方案中，二者特征在于在核糖糖環(huán)的C2’與C4’之間存在接頭基團(tuán)(如橋鍵)。在一些實(shí)施方案中，用在本發(fā)明的寡核苷酸化合物中的LNA優(yōu)選地具有通式A的結(jié)構(gòu)：其中Y選自由-O-，-CH2O-，-S-，-NH-，N(Re)和/或-CH2-組成的組；Z和Z*獨(dú)立地選自核苷酸間鍵，RH，末端基團(tuán)或保護(hù)基團(tuán)；B組成天然的或非天然的核苷酸堿基結(jié)構(gòu)部分(核堿基)，并且RH選自氫和C1-4-烷基；Ra，RbRc，Rd和Re任選獨(dú)立地選自由下述組成的組：氫，任選取代的C1-12-烷基，任選取代的C2-12-烯基，任選取代的C2-12-炔基，羥基，C1-12-烷氧基，C2-12-烷氧基烷基，C2-12-烯氧基，羧基，C1-12-烷氧基羰基，C1-12-烷基羰基，甲酸基，芳基，芳氧基-羰基，芳氧基，芳基羰基，雜芳基，雜芳氧基-羰基，雜芳氧基，雜芳基羰基，氨基，單-和二(C1-6-烷基)氨基，氨甲?；?，單-和二(C1-6-烷基)-氨基-羰基，氨基-C1-6-烷基-氨基羰基，單-和二(C1-6-烷基)氨基-C1-6-烷基-氨基羰基，C1-6-烷基-羰基氨基，脲基，C1-6-烷酰基氧基，砜(sulphono)，C1-6-烷基磺酰氧基，硝基，疊氮基，硫基(sulphanyl)，C1-6-硫代烷基，鹵素，DNA嵌入劑，光化學(xué)活性基團(tuán)，熱化學(xué)活性基團(tuán)，螯合基團(tuán)，報(bào)道子基團(tuán)，和配體，其中芳基和雜芳基可以是任選取代的，并且其中兩個(gè)成對(duì)的取代基Ra和Rb一起可以指定為任選取代的亞甲基(＝CH2)；并且RH選自氫和C1-4-烷基。在一些實(shí)施方案中，Ra，RbRc，Rd和Re任選獨(dú)立地選自由氫和C1-6烷基組成的組，如甲基。對(duì)由所有的手性中心，不對(duì)稱(chēng)的基團(tuán)可以以R或S方向存在，例如，兩個(gè)示例性的立體化學(xué)異構(gòu)體包括β-D和α-L異構(gòu)體，其可以示例如下：具體的示例性的LNA單位顯示如下：術(shù)語(yǔ)“硫代-LNA”包括這樣的鎖定核苷酸，其中上述通式中的Y選自S或-CH2-S-。硫代-LNA可以以β-D和α-L-構(gòu)型。術(shù)語(yǔ)“氨基-LNA”包括這樣的鎖定核苷酸，其中上述通式中的Y選自-N(H)-，N(R)-，CH2-N(H)-和-CH2-N(R)-，其中R選自氫和C1-4-烷基。氨基-LNA可以以β-D和α-L-構(gòu)型。術(shù)語(yǔ)“氧基-LNA”包括這樣的鎖定核苷酸，其中上述通式中的Y表示-O-。氧基-LNA可以以β-D和α-L-構(gòu)型。術(shù)語(yǔ)“ENA”保留這樣的鎖定核苷酸，其中上述通式中的Y是-CH2-O-(其中-CH2-O-的氧原子連接帶相對(duì)于堿基B的2’-位置)。Re是氫或甲基。在一些示例性的實(shí)施方案中，LNA選自β-D-X-LNA或α-L-X-LNA(其中X是氧基、氨基或硫基)，或者是本文公開(kāi)的其他LNAs，其包括，但不限于，(R/S)cET，cMOE或5’-Me-LNA，特別是β-D-氧基-LNA。當(dāng)用在本文中時(shí)，“二環(huán)核苷”是指包含二環(huán)糖結(jié)構(gòu)部分的修飾的核苷。二環(huán)核苷的實(shí)例包括，但不限于，在4′與2′核糖基環(huán)原子之前包含橋鍵的核苷。在一些實(shí)施方案中，本文提供的化合物包含一個(gè)或多個(gè)二環(huán)核苷，其中橋鍵包含4′至2′二環(huán)核苷。所述4′至2′二環(huán)核苷的實(shí)例包括，但不限于，下式中的一種：4′-(CH2)-O-2′(LNA)；4′-(CH2)-S-2′；4’-(CH2)2-O-2′(ENA)；4′-CH(CH3)-O-2′和4′-CH(CH2OCH3)-O-2*，及其類(lèi)似物(參見(jiàn)2008年7月15日授權(quán)的美國(guó)專(zhuān)利7,399,845)；4′-C(CH3)(CH3)-O-2′，及其類(lèi)似物(參見(jiàn)2009年1月8日公開(kāi)的公布的PCT國(guó)際申請(qǐng)WO2009/006478)；4′-CH2-N(OCH3)-2′，及其類(lèi)似物(參見(jiàn)，2008年12月11日公開(kāi)的公布的PCT國(guó)際申請(qǐng)WO2008/150729)；4′-CH2-O-N(CH3)-2′(參見(jiàn)，2004年9月2日公開(kāi)的公布的美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)US2004/0171570)；4′-CH2-N(R)-O-2′，其中R是H，C1-C10烷基，或保護(hù)基團(tuán)(參見(jiàn)2008年9月23日授權(quán)的美國(guó)專(zhuān)利7,427,672)；4′-CH2-C(H)(CH3)-2′(參見(jiàn)Chattopadhyaya等，J.Org.Chem.(有機(jī)化學(xué)雜志)，2009，74，118-134)；和4′-CH2-C(＝CH2)-2′，及其類(lèi)似物(參見(jiàn)2008年12月8日公開(kāi)的公布的PCT國(guó)際申請(qǐng)WO2008/154401)。還參見(jiàn)，例如，Singh等，Chem.Commun.(化學(xué)通訊)，1998，4，455-456；Koshkin等，Tetrahedron(四面體)，1998，54，3607-3630；Wahlestedt等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.(美國(guó)國(guó)家科學(xué)院學(xué)報(bào))，2000，97，5633-5638；Kumar等，Bioorg.Med.Chem.Lett.(生物有機(jī)醫(yī)藥化學(xué)通信)，1998，8，2219-2222；Singh等，J.Org.Chem.(有機(jī)化學(xué)雜志)，1998，63，10035-10039；Srivastava等，J.Am.Chem.Soc(美國(guó)化學(xué)學(xué)會(huì)雜志)，129(26)8362-8379(2007年7月4日)；Elayadi等，Curr.OpinionInvens.Drugs，2001，2，558-561；Braasch等，Chem.Biol(化學(xué)生物學(xué))，2001，8，1-7；Oram等，Curr.OpinionMol.Ther.(現(xiàn)代分子治療觀點(diǎn))，2001，3，239-243；美國(guó)專(zhuān)利號(hào)U.S.6,670,461，7,053,207，6,268,490，6,770,748，6,794,499，7,034,133，6,525,191，7,399,845；公布的PCT國(guó)際申請(qǐng)WO2004/106356，WO94/14226，WO2005/021570和WO2007/134181；美國(guó)專(zhuān)利公布號(hào)US2004/0171570，US2007/0287831和US2008/0039618；和美國(guó)專(zhuān)利系列號(hào)12/129,154，60/989,574，61/026,995，61/026,998，61/056,564，61/086,231，61/097,787，和61/099,844；以及PCT國(guó)際申請(qǐng)?zhí)朠CT/US2008/064591，PCT/US2008/066154和PCT/US2008/068922?？梢灾苽淝笆龆h(huán)核苷中的每一種使其具有一個(gè)或多個(gè)立體化學(xué)糖構(gòu)型，包括，例如，a-L-呋喃核糖和β-D-呋喃核糖(參見(jiàn)1999年3月25日以WO99/14226公開(kāi)的PCT國(guó)際申請(qǐng)PCTDK98/00393)。在一些實(shí)施方案中，二環(huán)糖結(jié)構(gòu)部分核苷包括，但不限于，在戊呋喃糖基(pentofuranosyl)糖結(jié)構(gòu)部分的4′與2′位置之間具有至少一個(gè)橋鍵的化合物，其中所述橋鍵獨(dú)立地包含1個(gè)或2-4個(gè)連接的基團(tuán)，所述連接的基團(tuán)獨(dú)立地選自：-[CiRaXRb)]，，-，-C(Ra)＝C(Rb)-，-C(Ra)＝N-，-C(＝NRa)-，-C(＝O)-，-C(＝S)-，-O-，-Si(Ra)2-，-S(＝O)x-，和-N(Ra)-；其中：x是0，1或2；n是1，2，3或4；每個(gè)Ra和Rb獨(dú)立地是H，保護(hù)基團(tuán)，羥基，C1-C12烷基，取代的C1-C12烷基，C2-Ci2烯基，取代的C2-C12烯基，C2-Ci2炔基，取代的C2-C12炔基，C5-C20芳基，取代的C5-C20芳基，雜環(huán)基團(tuán)，取代的雜環(huán)基團(tuán)，雜芳基，取代的雜芳基，C5-C7脂環(huán)基團(tuán)，取代的C5-C7脂環(huán)基團(tuán)，鹵素，OJ1，NJ1J2，SJ1，N3，COOJ1，酰基(C(＝O)-H)，取代的?；?，CN，磺?；?S(＝O)2-J1)，或次硫酸基(sulfoxyl)(S(＝O)-J1)；并且每個(gè)J1和J2獨(dú)立地是H，C1-C6烷基，取代的C1-C12烷基，C2-C12烯基，取代的C2-C12烯基，C2-C12炔基，取代的C2-C12炔基，C5-C20芳基，取代的C5-C2o芳基，?；?C(＝O)-H)，取代的酰基，雜環(huán)基團(tuán)，取代的雜環(huán)基團(tuán)，C1-C12氨基烷基，取代的C1-C12氨基烷基，或保護(hù)基團(tuán)。在一些實(shí)施方案中，二環(huán)糖結(jié)構(gòu)部分的橋鍵是-[C(Ra)(Rb)]n-，-[C(Ra)(Rb)]n-O-，-C(RaRb)-N(R)-O-或-C(RaRb)-O-N(R)-。在一些實(shí)施方案中，所述橋鍵是4′-CH2-2′，4′-(CH2)2-2′，4′-(CH2)3-2′，4′-CH2-O-2′，4*-(CH2)2-O-2′，4′-CH2-O-N(R)-2′和4′-CH2-N(R)-O-2′-，其中R獨(dú)立地是H，保護(hù)基團(tuán)或C1-C12烷基。在一些實(shí)施方案中，二環(huán)核苷進(jìn)一步由異構(gòu)體構(gòu)型定義。例如，包含4′-2′亞甲基-氧基橋鍵的核苷可以采取a-L-構(gòu)型或采取β-D構(gòu)型。之前，a-L-亞甲基氧基(4′-CH2-O-2′)BNA′s已經(jīng)結(jié)合在表現(xiàn)出反義活性的反義寡核苷酸中(Frieden等，NucleicAcidsResearch(核酸研究)，2003，21，6365-6372)。在一些實(shí)施方案中，二環(huán)核苷包括，但不限于，(A)a-L-亞甲基氧基(4′-CH2-O-2′)BNA，(B)β-D-亞甲基氧基(4′-CH2-O-2′)BNA，(C)亞乙基氧基(4′-(CH2)2-O-2′)BNA，(D)氨基氧基(4′-CH2-O-N(R)-2′)BNA，(E)氧基氨基(4′-CH2-N(R)-O-2′)BNA，(F)，甲基(亞甲基氧基)(4′-CH(CH3)-O-2′)BNA，(G)亞甲基-硫代(4′-CH2-S-2′)BNA，(H)亞甲基-氨基(4′-CH2-N(R)-2′)BNA，(I)甲基碳環(huán)(4′-CH2-CH(CH3)-2′)BNA，和(J)亞丙基碳環(huán)(4′-(CH2)3-2′)BNA，如下所示：其中Bx是堿基結(jié)構(gòu)部分，R獨(dú)立地是H，保護(hù)基團(tuán)或C1-C2烷基。在一些實(shí)施方案中，二環(huán)核苷具有式I：其中：Bx是雜環(huán)堿基結(jié)構(gòu)部分；-Qa-Qb-Qc-是-CH2-N(Rc)-CH2-，-C(＝O)-N(Rc)-CH2-，-CH2-O-N(Rc)-，-CH2-N(Rc)-O-，或-N(Rc)-O-CH2；Rc是C1-C12烷基或氨基保護(hù)基團(tuán)；并且Ta和Tb分別獨(dú)立地是H，羥基保護(hù)基團(tuán)，綴合基團(tuán)，反應(yīng)性磷基團(tuán)，磷結(jié)構(gòu)部分，或與支持物介質(zhì)的共價(jià)連接。在一些實(shí)施方案中，二環(huán)核苷具有式II：其中：Bx是雜環(huán)堿基結(jié)構(gòu)部分；Ta和Tb分別獨(dú)立地是H，羥基保護(hù)基團(tuán)，綴合基團(tuán)，反應(yīng)性磷基團(tuán)，磷結(jié)構(gòu)部分，或與支持物介質(zhì)的共價(jià)連接；Za是C1-C6烷基，C2-C6烯基，C2-C6炔基，取代的C1-C6烷基，取代的C2-C6烯基，取代的C2-C6炔基，?；?，取代的酰基，取代的酰胺，硫醇，或取代的硫基。在一些實(shí)施方案中，每個(gè)取代的基團(tuán)獨(dú)立地是用取代基團(tuán)單取代的或多取代的，所述取代基團(tuán)獨(dú)立地選自鹵素，氧代，羥基，OJc，NJd，SJC，N3，OC(＝X)Jc，和NJeC(＝X)NJcJd，其中Jc，Jd和Je分別獨(dú)立地是H，C1-C6烷基，或取代的C1-C6烷基，并且X是O或NJC。在一些實(shí)施方案中，二環(huán)核苷具有式III：其中：Bx是雜環(huán)堿基結(jié)構(gòu)部分；Ta和Tb分別獨(dú)立地是H，羥基保護(hù)基團(tuán)，綴合基團(tuán)，反應(yīng)性磷基團(tuán)，磷結(jié)構(gòu)部分，或與支持物介質(zhì)的共價(jià)連接；Zb是C1-C6烷基，C2-C6烯基，C2-C6炔基，取代的C1-C6烷基，取代的C2-C6烯基，取代的C2-C6炔基，或取代的?；?C(＝O)-)。在一些實(shí)施方案中，二環(huán)核苷具有式IV：其中：Bx是雜環(huán)堿基結(jié)構(gòu)部分；Ta和Tb分別獨(dú)立地是H，羥基保護(hù)基團(tuán)，綴合基團(tuán)，反應(yīng)性磷基團(tuán)，磷結(jié)構(gòu)部分，或與支持物介質(zhì)的共價(jià)連接；Rd是C1-C6烷基，取代的C1-C6烷基，C2-C6烯基，取代的C2-C6烯基，C2-C6炔基，取代的C2-C6炔基；qb，qc和qd分別獨(dú)立地是H，鹵素，C1-C6烷基，取代的C1-C6烷基，C2-Ce烯基，取代的C2-C6烯基，C2-C6炔基，或取代的C2-C6炔基，C1-C6烷氧基，取代的Q-C6烷氧基，?；?，取代的?；珻1-C6氨基烷基，或取代的C1-C6氨基烷基；在一些實(shí)施方案中，二環(huán)核苷具有式V：其中：Bx是雜環(huán)堿基結(jié)構(gòu)部分；Ta和Tb分別獨(dú)立地是H，羥基保護(hù)基團(tuán)，綴合基團(tuán)，反應(yīng)性磷基團(tuán)，磷結(jié)構(gòu)部分，或與支持物介質(zhì)的共價(jià)連接；qa，qb，qc和qf分別獨(dú)立地是氫，鹵素，C1-C12烷基，取代的C1-C12烷基，C2-C12烯基，取代的C2-C12烯基，C2-C12炔基，取代的C2-C12炔基，C1-C12烷氧基，取代的C1-C12烷氧基，OJj，SJj，SOJj，SO2Jj，NJjJk，N3，CN，C(＝O)OJj，C(＝O)NJjJk，C(＝O)Jj，O-C(＝O)NJjJk，N(H)C(＝NH)NJjJk，N(H)C(＝O)NJjJk或N(H)C(＝S)NJjJk；或qe和qf一起為＝C(qg)(qh)；qg和qh分別獨(dú)立地是H，鹵素，C1-C12烷基或取代的C1-C12烷基。已經(jīng)描述了亞甲基氧基(4′-CH2-O-2′)BNA單體腺嘌呤、胞嘧啶、鳥(niǎo)嘌呤、5-甲基-胞嘧啶、胸腺嘧啶和尿嘧啶的合成與制備，連同其寡聚化，和核酸識(shí)別特征(例如，參見(jiàn)Koshkin等，Tetrahedron(四面體)，1998，54，3607-3630)。BNAs及其制備還記述在WO98/39352和WO99/14226中。還已經(jīng)制備了亞甲基氧基(4′-CH2-O-2′)BNA的類(lèi)似物，亞甲氧基(4′-CH2-O-2′)BNA和2′-硫代-BNAs(例如，參見(jiàn)Kumar等，Bioorg.Med.Chem.Lett.(生物有機(jī)醫(yī)藥化學(xué)通信)，1998，8，2219-2222)。還已經(jīng)記述了包含寡脫氧核糖核苷酸雙鏈體作為核酸聚合酶的底物的鎖定核苷類(lèi)似物的制備(例如，參見(jiàn)Wengel等，WO99/14226)。此外，本領(lǐng)域中已經(jīng)記述了2′-氨基-BNA的合成，其是一種新型的構(gòu)象局限性的高親和性寡核苷酸類(lèi)似物(例如，參見(jiàn)Singh等，J.Org.Chem.(有機(jī)化學(xué)雜志)，1998，63，10035-10039)。另外，已經(jīng)制備了2′-氨基-和2′-甲基氨基-BNA′s，并且之前已經(jīng)報(bào)道了其與互補(bǔ)的RNA和DNA鏈的雙鏈體的熱穩(wěn)定性。在一些實(shí)施方案中，所述二環(huán)核苷具有式VI：其中：Bx是雜環(huán)堿基結(jié)構(gòu)部分；Ta和Tb分別獨(dú)立地是H，羥基保護(hù)基團(tuán)，綴合基團(tuán)，反應(yīng)性磷基團(tuán)，磷結(jié)構(gòu)部分，或與支持物介質(zhì)的共價(jià)連接；qj，qj，qk和ql分別獨(dú)立地是H，鹵素，C1-C12烷基，取代的C1-C12烷基，C2-C12烯基，取代的C2-C12烯基，C2-C12炔基，取代的C2-C12炔基，C1-C12烷氧基，取代的C2-C12烷氧基，OJj，SJj，SOJj，SO2Jj，NJjJk，N3，CN，C(＝O)OJj，C(＝O)NJjJk，C(＝O)Jj，O-C(＝O)NJjJk，N(H)C(＝NH)NJjJk，N(H)C(＝O)NJjJk，或(H)C(＝S)NJjJk；并且qi與qj或ql與qk一起為＝C(qg)(qh)，其中qg和qh分別獨(dú)立地是H，鹵素，C1-C12烷基，或取代的C1-C6烷基。已經(jīng)描述了一種具有4′-(CH2)3-2′橋鍵的碳環(huán)二環(huán)核苷和烯基類(lèi)似物，即橋鍵4′-CH＝CH-CH2-2′(例如，參見(jiàn)，F(xiàn)reier等，NuclieicAcidsResearch(核酸研究)，1997，25(22)，4429-4443和Albaek等，J.Org.Chem.(有機(jī)化學(xué)雜志)，2006，71，7731-77′40)。還已經(jīng)記述了碳環(huán)二環(huán)核苷的合成與制備以及其寡聚化和生物化學(xué)研究(例如，參見(jiàn)Srivastava等，J.Am.Chem.Soc.(美國(guó)化學(xué)學(xué)會(huì)雜志)2007，129(26)，8362-8379)。用于本文時(shí)，“4′-2′二環(huán)核苷”或“4′-2′二環(huán)核苷”是指包含呋喃環(huán)的二環(huán)核苷，所述呋喃環(huán)包含連接2′碳原子和4′碳原子的橋鍵。用于本文時(shí)，“單環(huán)核苷”是指包含不是二環(huán)糖結(jié)構(gòu)部分的修飾的糖結(jié)構(gòu)部分的核苷。在一些實(shí)施方案中，核苷的糖結(jié)構(gòu)部分或糖結(jié)構(gòu)部分類(lèi)似物可以在任意位置被修飾或取代。用于本文時(shí)，“2′-修飾的糖”意指在2′位置修飾的呋喃糖基糖。在一些實(shí)施方案中，所述修飾包括選自下述的取代基：鹵化物，包括，但不限于，取代的和未取代的烷氧基，取代的和未取代的硫代烷基，取代的和未取代的氨基烷基，取代的和未取代的烷基，取代的和未取代的烯丙基，以及取代的和未取代的炔基。在一些實(shí)施方案中，2′修飾選自下述取代基，所述取代基包括，但不限于：O[(CH2)nO]mCH3，O(CH2)，，NH2，O(CH2)，，CH3，O(CH2)，，ONH2，OCH2C(＝O)N(H)CH3，和O(CH2)nON[(CH2)nCH3]2，其中n和m為1-約10。其他2′-取代基基團(tuán)還可以選自：C1-C12烷基；取代的烷基；烯基；炔基；烷芳基；芳烷基；O-烷芳基或O-芳烷基；SH；SCH3；OCN；CI；Br；CN；CF3；OCF3；SOCH3；S02CH3；ONO2；NO2；N3；NH2；雜環(huán)烷基；雜環(huán)烷芳基；氨基烷基氨基；聚烷基氨基；取代的甲硅烷基；R；裂解基團(tuán)；報(bào)道子基團(tuán)；嵌入劑；用于改善藥物代謝動(dòng)力學(xué)特征的基團(tuán)；和用于改善反義化合物的藥效學(xué)特征的基團(tuán)，以及具有相似特性的其他取代基。在一些實(shí)施方案中，修飾的核苷包含2′-MOE側(cè)鏈(例如，參見(jiàn)Baker等，J.Biol.Chem.(生物化學(xué)雜志)，1997，272，11944-12000)。所述2′-MOE取代已經(jīng)描述為，與未修飾的核苷相比較和與其他修飾的核苷(如2′-O-甲基，O-丙基，和O-氨基丙基)相比較，具有提高的結(jié)合親和力。還已經(jīng)表明具有2-MOE取代基的寡核苷酸是基因表達(dá)的反義抑制劑，對(duì)于體內(nèi)應(yīng)用具有有希望的特征(例如，參見(jiàn)Martin，P.，He/v.Chim.Acta，1995，78，486-504；Altmann等，Chimia，1996，50，168-176；Altmann等，Biochem.Soc.Trans.，1996，24，630-637；和Altmann等，NucleosidesNucleotides(核苷與核苷酸)，1997，16，917-926)。用于本文時(shí)，“修飾的四氫吡喃核苷”或“修飾的THP核苷”意指在正常核苷中的戊呋喃糖基殘基被六元的四氫吡喃“糖”取代的核苷(一種糖替代物)。修飾的THP核苷包括，但不限于，在本領(lǐng)域中稱(chēng)為己糖醇核酸(HNA)，anitol核酸(ANA)，甘露醇(manitol)核酸(MNA)(參見(jiàn)Leumann，CJ.Bioorg.andMed.Chem.(生物有機(jī)和醫(yī)藥化學(xué))(2002)10：841-854)，氟代HNA(F-HNA)，或具有式X的那些化合物：式XX其中對(duì)于所述式X的至少一個(gè)四氫吡喃核苷類(lèi)似物中的每一個(gè)獨(dú)立地：Bx是雜環(huán)堿基結(jié)構(gòu)部分；T3和T4分別獨(dú)立地是連接所述四氫吡喃核苷類(lèi)似物與反義化合物的核苷間連接基團(tuán)，或者T3和T4中的一個(gè)是連接所述四氫吡喃核苷類(lèi)似物與反義化合物的核苷間連接基團(tuán)，而T3和T4中的另一個(gè)是是H，羥基保護(hù)基團(tuán)，連接的綴合基團(tuán)，或5′或3′-末端基團(tuán)；q1q2q3q4q5，q6和q7分別獨(dú)立地是H，C1-C6烷基，取代的C1-C6烷基，C2-C6烯基，取代的C2-C6烯基，C2-C6炔基，或取代的C2-C6炔基；并且R1和R2中的一個(gè)是氫，另一個(gè)選自鹵素，取代的或未取代的烷氧基，NJ，J2，SJ，，N3，OC(＝X)J1，OC(＝X)NJ1J2，NJ3C(＝X)NJ1J2，和CN，其中X是O，S，或NJ1，并且J1，J2，和J3分別獨(dú)立地是H或C1-C6烷基。在一些實(shí)施方案中，提供式X的修飾的THP核苷，其中qm，qn，qp，qr，qs，qt和qu分別為H。在一些實(shí)施方案中，qm，qn，qp，qr，qs，qt和qu中的至少一個(gè)不是H。在一些實(shí)施方案中，qm，qn，qp，qr，qs，qt和qu中的至少一個(gè)是甲基。在一些實(shí)施方案中，提供式X的THP核苷，其中R1和R2是F。在一些實(shí)施方案中，R1是氟，并且R2是H，R1是甲氧基，并且R2是H，以及R1是甲氧基乙氧基并且R2是H。用于本文時(shí)，“2′-修飾的”或“2′-取代的”是指包含在2′位置上含有除H或OH之外的取代基的糖的核苷。2′-修飾的核苷包括，但不限于，具有非橋接的2′取代基的核苷，所述非橋接的2′取代基諸如烯丙基，氨基，疊氮基，硫代，O-烯丙基，O-C1-C10烷基，-OCF3，O-(CH2)2-O-CH3，2′-O(CH2)2SCH3，O-(CH2)2-O-N(Rm)(Rn)，或O-CH2-C(＝O)-N(Rm)(Rn)，其中Rm和R，，分別獨(dú)立地是H或取代的或未取代的C1-C10烷基。2′-修飾的核苷可以進(jìn)一步包含其他的修飾，例如，在糖的其他位置和/或在核堿基上。用于本文時(shí)，“2′-F”是指在2′位置包含氟基團(tuán)的糖。用于本文時(shí)，“2′-OMe”或“2′-OCH3”或“2′-O-甲基”分別是指包含在糖環(huán)的2′位置含有-OCH3基團(tuán)的糖的核苷。用于本文時(shí)，“寡核苷酸”是指包含多個(gè)連接的核苷的化合物。在一些實(shí)施方案中，多個(gè)核苷中的一個(gè)或多個(gè)被修飾。在一些實(shí)施方案中，寡核苷酸包含一個(gè)或多個(gè)核糖核苷(RNA)和/或脫氧核糖核苷(DNA)。本領(lǐng)域中還已知可以用于修飾核苷用以結(jié)合到反義化合物中的多種其他二環(huán)和三環(huán)糖替代物環(huán)系統(tǒng)(例如，參見(jiàn)，綜述論文：Leumann，J.C，BioorganicandMedicinalChemistry(生物有機(jī)和醫(yī)藥化學(xué))，2002，10，841-854)。所述環(huán)系統(tǒng)可以進(jìn)行多種另外的取代，以提高活性。制備修飾的糖的方法對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是公知的。在具有修飾的糖結(jié)構(gòu)部分的核苷酸中，保持核堿基結(jié)構(gòu)部分(天然的、修飾的或它們的組合)，以與適當(dāng)?shù)暮怂岚袠?biāo)雜交。在一些實(shí)施方案中，反義化合物包含一個(gè)或多個(gè)具有修飾的糖結(jié)構(gòu)部分的核苷酸。在一些實(shí)施方案中，所述修飾的糖結(jié)構(gòu)部分是2′-MOE。在一些實(shí)施方案中，所述2′-MOE修飾的核苷酸排列在gapmer基序中。在一些實(shí)施方案中，所述修飾的糖結(jié)構(gòu)部分是cEt。在一些實(shí)施方案中，所述cEt修飾的核苷酸排列在gapmer基序的整個(gè)突出端中。在一些實(shí)施方案中，在BNA(LNA)中，R4*和R2*一起稱(chēng)為二基團(tuán)-O-CH(CH2OCH3)-(2’O-甲氧基乙基二環(huán)核酸-Sethatal.，2010，J.Org.Chem(有機(jī)化學(xué)雜志))-采用R-或S-構(gòu)型。在一些實(shí)施方案中，在BNA(LNA)中，R4*和R2*一起稱(chēng)為二基團(tuán)-O-CH(CH2CH3)-(2’O-乙基二環(huán)核酸-Sethatal.，2010，J.Org.Chem(有機(jī)化學(xué)雜志))-采用R-或S-構(gòu)型。在一些實(shí)施方案中，在BNA(LNA)中，R4*和R2*一起稱(chēng)為二基團(tuán)-O-CH(CH3)-.-采用R-或S-構(gòu)型。在一些實(shí)施方案中，R4*和R2*一起稱(chēng)為二基團(tuán)-O-CH2-O-CH2--(Sethatal.，2010，J.Org.Chem(有機(jī)化學(xué)雜志))。在一些實(shí)施方案中，在BNA(LNA)中，R4*和R2*一起稱(chēng)為二基團(tuán)-O-NR-CH3--(Sethatal.，2010，J.Org.Chem(有機(jī)化學(xué)雜志))。在一些實(shí)施方案中，LNA單位具有選自下述組的結(jié)構(gòu)：在寡聚體(如BNA)中結(jié)合增強(qiáng)親和力的核苷酸類(lèi)似物，(例如)LNA或2’-取代的糖，可以允許特異性結(jié)合的寡聚體的尺寸減小，并且還可以在發(fā)生非特異性或異常的結(jié)合之前減小所述寡聚體尺寸的上限。在一些實(shí)施方案中，所述寡聚體包含至少1個(gè)核苷類(lèi)似物。在一些實(shí)施方案中，所述寡聚體包含至少2個(gè)核苷酸類(lèi)似物。在一些實(shí)施方案中，所述寡聚體包含3-8個(gè)核苷酸類(lèi)似物，例如，6或7個(gè)核苷酸類(lèi)似物。在目前最優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述核苷酸類(lèi)似物中的至少一個(gè)是BNA，如鎖定核酸(LNA)；例如所述核苷酸類(lèi)似物中至少3個(gè)或至少4個(gè)，或至少5個(gè)，或至少6個(gè)，或至少7個(gè)，或8個(gè)可以是BNA，如LNA。在一些實(shí)施方案中，所有的核苷酸類(lèi)似物可以是BNA，如LNA。應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，當(dāng)提及僅由核苷酸組成的優(yōu)選的核苷酸序列基序或核苷酸序列時(shí)，由所述序列定義的本發(fā)明的寡聚體可以包含相應(yīng)的核苷酸類(lèi)似物取代在所述序列中存在的一個(gè)或多個(gè)核苷酸，如BNA單位或其他核苷酸類(lèi)似物，其提高所述寡聚體/靶標(biāo)雙鏈體的雙鏈體的穩(wěn)定性/Tm(即，增強(qiáng)親和力的核苷酸類(lèi)似物)。優(yōu)選的核苷酸類(lèi)似物是LNA，如氧基-LNA(如β-D-氧基-LNA，和α-L-氧基-LNA)，和/或氨基-LNA(如β-D-氨基-LNA和α-L-氨基-LNA)和/或硫代-LNA(如β-D-硫代-LNA和α-L-硫代-LNA)和/或ENA(如β-D-ENA和α-L-ENA)。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的寡聚體，如區(qū)域A，可以包含BNA或LNA單位和其他核苷酸類(lèi)似物。在本發(fā)明的寡聚體內(nèi)存在的其他核苷酸類(lèi)似物獨(dú)立地選自，例如：2’-O-烷基-RNA單位，2’-氨基-DNA單位，2’-氟-DNA單位，BNA單位，例如LNA單位，阿糖基核酸(ANA)單位，2’-氟-ANA單位，HNA單位，INA(嵌入核酸-Christensen，2002.Nucl.Acids.Res.(核酸研究)200230：4918-4925，通過(guò)引用結(jié)合于此)單位和2’MOE單位。在一些實(shí)施方案中，上述類(lèi)型的核苷酸類(lèi)似物中僅有一種類(lèi)型存在于本發(fā)明的寡聚體中，諸如其第一區(qū)域，或連續(xù)的核苷酸序列。在一些實(shí)施方案中，因此，本發(fā)明所述的寡聚體(區(qū)域A)可以包含至少一個(gè)BNA，例如鎖定核酸(LNA)單位，如1，2，3，4，5，6，7或8個(gè)BNA/LNA單位，如3-7個(gè)或4-8個(gè)BNA/LNA單位，或3，4，5，6或7個(gè)BNA/LNA單位。在一些實(shí)施方案中，所有的核苷酸類(lèi)似物是BNA，如LNA。在一些實(shí)施方案中，所述寡聚體可以包含β-D-氧基-LNA，和下述LNA單位中的一種或多種：硫代-LNA，氨基-LNA，氧基-LNA，和/或ENA，以β-D或α-L構(gòu)型或它們的組合。在一些實(shí)施方案中，所有的BNA，如LNA，胞嘧啶單位是5’甲基-胞嘧啶。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述寡聚體(諸如第一區(qū)域和任選地第二區(qū)域)可以包含BNA和LNA二者與DNA單位。在一些實(shí)施方案中，LNA和DNA單位的組合的總數(shù)是10-25個(gè)，如10-24個(gè)，優(yōu)選10-20個(gè)，如10-18個(gè)，如12-16個(gè)。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述寡聚體、其第一區(qū)域的核苷酸序列，如連續(xù)的核苷酸序列，由至少一個(gè)BNA(例如LNA)組成，并且其余的核苷酸單位是DNA單位。在一些實(shí)施方案中，所述寡聚體，或其第一區(qū)域，僅包含BNA，例如LNA，核苷酸類(lèi)似物和天然存在的核苷酸(如RNA或DNA，最優(yōu)選DNA核苷酸)，任選地具有修飾的核苷酸間鍵，如硫代磷酸酯。RNA酶招募應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，寡核苷酸可以通過(guò)對(duì)靶mRNA的非RNA酶介導(dǎo)的降解起作用，諸如通過(guò)對(duì)翻譯的空間阻礙，或其他方法起作用，然而，本發(fā)明優(yōu)選的寡核苷酸能夠招募內(nèi)切核酸酶(RNA酶)，如RNA酶H。優(yōu)選地，所述寡核苷酸，或連續(xù)的核苷酸序列，包含至少6個(gè)，如至少7個(gè)連續(xù)的核苷酸單位，如至少8個(gè)或至少9個(gè)連續(xù)的核苷酸單位的區(qū)域，包括7，8，9，10，11，12，13，14，15或16個(gè)連續(xù)的核苷酸的區(qū)域，當(dāng)與互補(bǔ)靶RNA形成雙鏈體時(shí)，其能夠招募RNA酶。能夠招募RNA酶的連續(xù)的序列可以是在本文所述的gapmer的情形中提及的區(qū)域B。在一些實(shí)施方案中，能夠招募RNA酶的連續(xù)序列(如區(qū)域B)的尺寸，可以較高，如10，11，12，13，14，15，16，17，18，19或20個(gè)核苷酸單位。EP1222309提供了確定RNA酶H活性的體外方法，其可以用來(lái)確定招募RNA酶H的能力。如果，當(dāng)提供有互補(bǔ)RNA靶標(biāo)時(shí)，其具有的以pmol/l/min測(cè)量的速率是用僅有DNA的寡核苷酸(具有相同的堿基序列，但是僅含有DNA單體，不具有2’取代，在該寡核苷酸中的所有單體之間具有硫代磷酸酯鍵基團(tuán))使用EP1222309的實(shí)施例91-95提供的方法確定的初始速率的至少1％，如至少5％，如至少10％或大于20％，則認(rèn)為該寡核苷酸能夠招募RNA酶H。在一些實(shí)施方案中，如果，當(dāng)提供有互補(bǔ)RNA靶標(biāo)和RNA酶H時(shí)，以pmol/l/min測(cè)量的RNA酶H初始速率小于用等價(jià)的僅有DNA的寡核苷酸(沒(méi)有2’取代，在該寡核苷酸中的所有核苷酸之間具有硫代磷酸酯鍵基團(tuán))用EP1222309的實(shí)施例91-95提供的方法確定的初始速率的1％，如小于5％，如小于10％或小于20％，則認(rèn)為所述寡核苷酸基本上不能夠招募RNA酶H。在其他實(shí)施方案中，如果，當(dāng)提供提供有互補(bǔ)RNA靶標(biāo)和RNA酶H時(shí)，以pmol/l/min測(cè)量的RNA酶H初始速率是用等價(jià)的僅有DNA的寡核苷酸(沒(méi)有2’取代，在該寡核苷酸中的所有核苷酸之間具有硫代磷酸酯鍵基團(tuán))用EP1222309的實(shí)施例91-95提供的方法確定的初始速率的至少20％，如至少40％，如至少60％，如至少80％，則認(rèn)為所述寡核苷酸能夠招募RNA酶H。典型地，寡核苷酸形成當(dāng)與互補(bǔ)靶RNA形成雙鏈體時(shí)能夠招募RNA酶的連續(xù)的核苷酸單位的區(qū)域由這樣的核苷酸單位組成，所述核苷酸單位與RNA靶標(biāo)形成DNA/RNA樣雙鏈體，并且包含采用α-L構(gòu)型的DNA單位和LNA單位，特別優(yōu)選是α-L-氧基LNA。本發(fā)明的寡核苷酸可以包含這樣的核苷酸序列，所述核苷酸序列包含核苷酸和核苷酸類(lèi)似物二者，并且可以采用gapmer、headmer或mixmer的形式?！癶eadmer”定義為包含區(qū)域X和與其相鄰的區(qū)域Y的寡核苷酸，區(qū)域Y最5’端的單體與區(qū)域X最3’端的單體連接。區(qū)域X包含非RNA酶招募核苷類(lèi)似物的連續(xù)片段，并且區(qū)域Y包含可被所述RNA酶識(shí)別和切割的DNA單體或核苷類(lèi)似物單體的連續(xù)片段(諸如至少7個(gè)連續(xù)的單體)?！皌ailmer”定義為包含區(qū)域X和與其相鄰的區(qū)域Y的寡核苷酸，區(qū)域Y的最5’端的單體與區(qū)域X最3’端的單體連接。區(qū)域X包含可被RNA酶識(shí)別和切割的DNA單體或核苷類(lèi)似物單體的連續(xù)片段(諸如至少7個(gè)連續(xù)的單體)，并且區(qū)域X包含非RNA酶招募核苷酸類(lèi)似物的連續(xù)片段。其他稱(chēng)為“mixmers”的“嵌合”寡核苷酸由下述交替組成：(i)可被RNA酶識(shí)別和切割的DNA單體或核苷類(lèi)似物單體，和(ii)非RNA酶招募核苷類(lèi)似物單體。在一些實(shí)施方案中，除了提高所述寡核苷酸針對(duì)靶區(qū)域的親和力之外，一些核苷類(lèi)似物還調(diào)節(jié)RNA酶(例如，RNA酶H)結(jié)合和裂解。由于α-L-LNA單體在某種程度上招募RNA酶H活性，因此，在一些實(shí)施方案中，含有α-L-LNA單體的寡核苷酸的缺口區(qū)域(例如，在本文中稱(chēng)為區(qū)域Y’)由較少可被RNA酶H識(shí)別和切割的單體組成，并且在mixmer構(gòu)建中引入更多的靈活性。Gapmer設(shè)計(jì)在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的寡聚體，如第一區(qū)域，包含gapmer或是gapmer。gapmer寡聚體是寡聚體，其包含能夠招募RNA酶(如RNA酶H)的核苷酸的連續(xù)片段，如至少6個(gè)或7個(gè)DNA核苷酸的區(qū)域，其在本文中稱(chēng)為區(qū)域Y’(Y’)，其中區(qū)域Y’在5’和3’側(cè)連增加親和力的核苷酸類(lèi)似物，諸如在能夠招募RNA酶的連續(xù)核苷酸片段的5’和3’的1-6個(gè)核苷酸類(lèi)似物-這些區(qū)域分別稱(chēng)作區(qū)域X’(X’)和Z’(Z’)。WO2004/046160，WO2008/113832和WO2007/146511中公開(kāi)了gapmers的實(shí)例。在一些實(shí)施方案中，能夠招募RNA酶的單體選自由下述組成的組：DNA單體，α-L-LNA單體，C4’烷基化的DNA單體(參見(jiàn)PCT/EP2009/050349和Vester等，Bioorg.Med.Chem.Lett.(生物有機(jī)和醫(yī)藥化學(xué)通信)18(2008)2296-2300，通過(guò)引用結(jié)合于此)，和UNA(未連接的核酸)核苷酸(參見(jiàn)Fluiter等，Mol.Biosyst.(分子生物合成)，2009，10，1039，通過(guò)引用結(jié)合于此)。UNA是非鎖定核酸，典型地其中核糖的C2-C3C-C鍵被去除，形成非鎖定的“糖”殘基。優(yōu)選地，所述gapmer包含下式(5’至3’)的(多)核苷酸序列：X’-Y’-Z’，其中：區(qū)域X’(X’)(5’區(qū)域)由下述組成或包含下述：至少一個(gè)核苷酸類(lèi)似物，諸如至少一個(gè)BNA(例如LNA)單位，如1-6個(gè)核苷酸類(lèi)似物，如BNA(例如LNA)單位，并且，區(qū)域Y’(Y’)由下述組成或包含下述：至少五個(gè)連續(xù)的能夠招募RNA酶的核苷酸(當(dāng)與互補(bǔ)RNA分子(如mRNA靶標(biāo))形成雙鏈體時(shí))，如DNA核苷酸，并且區(qū)域Z’(Z’)(3’區(qū)域)由下述組成或包含下述：至少一個(gè)核苷酸類(lèi)似物，如至少一個(gè)BNA(例如LNA單位)，如1-6個(gè)核苷酸類(lèi)似物，如BNA(例如LNA)單位。在一些實(shí)施方案中，區(qū)域X’由1，2，3，4，5或6個(gè)核苷酸類(lèi)似物組成，如BNA(例如LNA)單位，如2-5個(gè)核苷酸類(lèi)似物，如2-5個(gè)LNA單位，如3或4個(gè)核苷酸類(lèi)似物，如3或4個(gè)LNA單位；和/或區(qū)域Z由1，2，3，4，5或6個(gè)核苷酸類(lèi)似物組成，如BNA(例如LNA)單位，如2-5個(gè)核苷酸類(lèi)似物，如2-5個(gè)BNA(例如LNA單位)，如3或4個(gè)核苷酸類(lèi)似物，如3或4個(gè)BNA(例如LNA)單位。在一些實(shí)施方案中，Y’由下述組成或包含下述：5，6，7，8，9，10，11或12個(gè)連續(xù)的能夠招募RNA酶的核苷酸，或6-10個(gè)，或7-9個(gè)，如8個(gè)連續(xù)的能夠招募RNA酶的核苷酸。在一些實(shí)施方案中，區(qū)域Y’由下述組成或包含下述：至少一個(gè)DNA核苷酸單位，如1-12個(gè)DNA單位，優(yōu)選4-12個(gè)DNA單位，更優(yōu)選6-10個(gè)DNA單位，如7-10個(gè)DNA單位，最優(yōu)選8，9或10個(gè)DNA單位。在一些實(shí)施方案中，區(qū)域X’由3或4個(gè)核苷酸類(lèi)似物，如BNA(例如LNA)組成，區(qū)域X’由7，8，9或10個(gè)DNA單位組成，并且區(qū)域Z’由3或4個(gè)核苷酸類(lèi)似物，如BNA(例如LNA)組成。所述設(shè)計(jì)包括(X’-Y’-Z’)3-10-3，3-10-4，4-10-3，3-9-3，3-9-4，4-9-3，3-8-3，3-8-4，4-8-3，3-7-3，3-7-4，4-7-3。WO2004/046160中公開(kāi)了其他的gapmer設(shè)計(jì)，其通過(guò)引用結(jié)合于此。通過(guò)引用結(jié)合在本文中的WO2008/113832要求美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)60/977,409的優(yōu)先權(quán)，其涉及‘shortmer’gapmer寡聚體。在一些實(shí)施方案中，本文所述的寡聚體可以是此類(lèi)shortmergapmers。在一些實(shí)施方案中，所述寡聚體，例如區(qū)域X’，由總共10，11，12，13或14個(gè)核苷酸單位的連續(xù)的核苷酸序列組成，其中所述連續(xù)的核苷酸序列包含或是式(5’-3’)：X’-Y’-Z’，其中，X’由1，2或3個(gè)核苷酸類(lèi)似物單位，如BNA(例如LNA)單位組成；Y’由7，8或9個(gè)連續(xù)的在與互補(bǔ)RNA分子(如mRNA靶標(biāo))形成雙鏈體時(shí)能夠招募RNA酶的核苷酸單位；并且Z’由1，2或3個(gè)核苷酸類(lèi)似物單位，如BNA(例如LNA)單位組成。在一些實(shí)施方案中，X’由1個(gè)BNA(例如LNA)單位組成。在一些實(shí)施方案中，X’由2個(gè)BNA(例如LNA)單位組成。在一些實(shí)施方案中，X’由3個(gè)BNA(例如LNA)單位組成。在一些實(shí)施方案中，Z’由1個(gè)BNA(例如LNA)單位組成。在一些實(shí)施方案中，Z’由2個(gè)BNA(例如LNA)單位組成。在一些實(shí)施方案中，Z’由3個(gè)BNA(例如LNA)單位組成。在一些實(shí)施方案中，Y’由7個(gè)核苷酸單位組成。在一些實(shí)施方案中，Y’由8個(gè)核苷酸單位組成。在一些實(shí)施方案中，Y’由9個(gè)核苷酸單位組成。在某些實(shí)施方案中，區(qū)域Y’由10個(gè)核苷單體組成。在某些實(shí)施方案中，區(qū)域Y’由下述組成或包含下述：1-10個(gè)DNA單體。在一些實(shí)施方案中，Y’包含1-9個(gè)DNA單位，如2，3，4，5，6，7，8或9個(gè)DNA單位。在一些實(shí)施方案中，Y’由DNA單位組成。在一些實(shí)施方案中，Y’包含至少一個(gè)α-L構(gòu)型的BNA單位，如2，3，4，5，6，7，8或9個(gè)α-L構(gòu)型的LNA單位。在一些實(shí)施方案中，Y’包含至少一個(gè)α-L-氧基BNA/LNA單位，或者其中所有α-L構(gòu)型的LNA單位都是α-L-氧基LNA單位。在一些實(shí)施方案中，在X’-Y’-Z’中存在的核苷酸的數(shù)目選自由下述組成的組(核苷酸類(lèi)似物單位-區(qū)域Y’-核苷酸類(lèi)似物單位)：1-8-1，1-8-2，2-8-1，2-8-2，3-8-3，2-8-3，3-8-2，4-8-1，4-8-2，1-8-4，2-8-4，或；1-9-1，1-9-2，2-9-1，2-9-2，2-9-3，3-9-2，1-9-3，3-9-1，4-9-1，1-9-4，或；1-10-1，1-10-2，2-10-1，2-10-2，1-10-3，3-10-1。在一些實(shí)施方案中，X’-Y’-Z’中的核苷酸數(shù)目選自由下述組成的組：2-7-1，1-7-2，2-7-2，3-7-3，2-7-3，3-7-2，3-7-4，和4-7-3。在某些實(shí)施方案中，區(qū)域X’和Y’中的每一個(gè)由三個(gè)BNA(例如LNA)單體組成，并且區(qū)域Y’由8或9或10個(gè)核苷單體，優(yōu)選DNA單體組成。在一些實(shí)施方案中，X’和Z’分別由兩個(gè)BNA(例如LNA)單位組成，并且Y’由8或9個(gè)核苷酸單位，優(yōu)選DN單位組成。在不同的實(shí)施方案中，其他gapmer設(shè)計(jì)包括那些：其中區(qū)域X’和/或Z’由3，4，5或6個(gè)核苷類(lèi)似物，如含有2’-O-甲氧基乙基-核糖糖(2’-MOE)的單體或含有2’-氟-脫氧核糖糖的單體組成，并且區(qū)域Y’由8，9，10，11或12個(gè)核苷，如DNA單體組成，其中區(qū)域X’-Y’-Z’具有3-9-3，3-10-3，5-10-5或4-12-4個(gè)單體。其他的gapmer設(shè)計(jì)公開(kāi)在WO2007/146511A2中，其通過(guò)引用結(jié)合在本文中。核苷酸間連接本文所述的寡核苷酸的單體通過(guò)連接基團(tuán)偶聯(lián)在一起。適當(dāng)?shù)?，每個(gè)單體通過(guò)連接基團(tuán)連接到3’相鄰的單體上。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)該理解，在本發(fā)明的情形中，寡核苷酸末端的5’單體不包含5’連接基團(tuán)，盡管其可以或可以不包含5’端基團(tuán)。短語(yǔ)“連接基團(tuán)”和“核苷酸間連接”旨在意指能夠?qū)蓚€(gè)核苷酸共價(jià)偶聯(lián)在一起的基團(tuán)。具體的和優(yōu)選的實(shí)例包括磷酸酯基團(tuán)和硫代磷酸酯基團(tuán)。在某些實(shí)施方案中，本文公開(kāi)的反義寡核苷酸在每個(gè)核苷酸間連接處具有硫代磷酸酯核苷酸間連接(例如，SEQIDNOS：21，22，23，24和25)。本發(fā)明的寡核苷酸的核苷酸或其連續(xù)的核苷酸序列通過(guò)連接基團(tuán)偶聯(lián)在一起。適當(dāng)?shù)?，每個(gè)核苷酸通過(guò)連接基團(tuán)連接到3’相鄰的核苷酸上。適當(dāng)?shù)暮塑账衢g連接包括國(guó)際申請(qǐng)WO2007/031091中列出的那些，例如，在WO2007/031091第34頁(yè)第一段中列出的核苷酸間連接。在一些實(shí)施方案中，優(yōu)選地將核苷酸間連接由其正常的磷酸二酯修飾為更耐受核酸酶攻擊的形式，諸如硫代磷酸酯或硼代磷酸酯-這兩種可被RNA酶H切割，也允許反義抑制途徑減少靶基因的表達(dá)。本文提供的適當(dāng)?shù)暮?S)核苷酸間連接可能是優(yōu)選的。硫代磷酸酯核苷酸間連接也是優(yōu)選的，特別是對(duì)于gapmers的缺口區(qū)域(Y’)。硫代磷酸酯連接還可以用于側(cè)連區(qū)域(X’和Z’)。然而，區(qū)域X’，Y’和Z’可以包含不同于硫代磷酸酯的核苷酸間連接，如磷酸二酯連接，特別地，例如，當(dāng)使用核苷酸類(lèi)似物來(lái)保護(hù)區(qū)域X’和Z’內(nèi)的核苷酸間連接免受內(nèi)切核酸酶降解時(shí)-諸如當(dāng)區(qū)域X’和Z’包含LNA核苷酸時(shí)。寡核苷酸中的核苷酸間連接可以是磷酸二酯，硫代磷酸酯或硼代磷酸酯，以允許被靶向的RNA的RNA酶H裂解。由于提高的核酸酶耐受性和其他的原因，如制備的容易性，優(yōu)選硫代磷酸酯。在本發(fā)明的寡核苷酸的一個(gè)方面，所述核苷酸和/或核苷酸類(lèi)似物通過(guò)硫代磷酸酯基團(tuán)的方式彼此連接。認(rèn)識(shí)到，在其他硫代磷酸酯寡核苷酸中，特別是在核苷酸類(lèi)似物單位之間或其附近(典型地在區(qū)域X’和或Z’中)，包含磷酸二酯連接，如一個(gè)或多個(gè)連接，可以改變寡核苷酸的生物利用度和/或生物分布-參見(jiàn)國(guó)際申請(qǐng)WO2008/053314。在一些實(shí)施方案中，諸如上文提及的實(shí)施方案，其中適當(dāng)?shù)牟⑶覜](méi)有特別指明，所有其余的連接基團(tuán)是磷酸二酯或硫代磷酸酯，或者它們的混合物。在一些實(shí)施方案中，所有的核苷酸間連接基團(tuán)是硫代磷酸酯。當(dāng)提及特定的gapmer寡核苷酸序列，如本文提供的那些時(shí)，應(yīng)該理解，在不同的實(shí)施方案中，當(dāng)所述連接是硫代磷酸酯連接時(shí)，可以使用替代連接，如本文公開(kāi)的那些，例如，可以使用磷酸酯(磷酸二酯)連接，特別是用于核苷酸類(lèi)似物(如LNA單位)之間的連接。類(lèi)似地，當(dāng)提及具體的gapmer寡核苷酸序列，如本文提供的那些時(shí)，當(dāng)C殘基注釋為5’甲基修飾的胞嘧啶時(shí)，在不同的實(shí)施方案中，所述寡核苷酸中存在的一個(gè)或多個(gè)C可以是未修飾的C殘基。寡核苷酸例如，本發(fā)明的寡核苷酸可以包含選自由SEQIDNOS：9，10，11，12，13和14組成的組的序列。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的寡核苷酸可以包含選自由SEQIDNO：21，SEQIDNO：22，SEQIDNO：23，SEQIDNO：24和SEQIDNO：25組成的組的序列。在一些實(shí)施方案中，例如，本發(fā)明的寡核苷酸可以選自由表1或4中鑒定的序列組成的組。綴合物在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語(yǔ)“綴合物”旨在表示通過(guò)將本文所述的寡核苷酸與一個(gè)或多個(gè)非核苷酸、或非多核苷酸結(jié)構(gòu)部分共價(jià)連接形成的異源分子。非核苷酸或非多核苷酸結(jié)構(gòu)部分的實(shí)例包括大分子劑，如蛋白，脂肪酸鏈，糖殘基，糖蛋白，聚合物，或它們的組合。典型地，蛋白可以是針對(duì)靶蛋白的抗體。典型的聚合物可以是聚乙二醇。因此，在不同的實(shí)施方案中，本發(fā)明的寡核苷酸可以包含典型地由連續(xù)的核苷酸序列組成的多核苷酸區(qū)域與另外的非核苷酸區(qū)域二者。當(dāng)提及本發(fā)明由連續(xù)的核苷酸序列組成的寡核苷酸時(shí)，所述化合物可以包含非核苷酸成分，諸如綴合成分。在本發(fā)明的不同的實(shí)施方案中，所述寡核苷酸與配體/綴合物連接，其可以用來(lái)，例如，增加寡核苷酸的細(xì)胞攝入。國(guó)際申請(qǐng)WO2007/031091提供了適當(dāng)?shù)呐潴w和綴合物。本發(fā)明還提供包含本文所述的本發(fā)明的化合物和與所述化合物共價(jià)連接的至少一個(gè)非核苷酸或非多核苷酸結(jié)構(gòu)部分的綴合物。因此，在不同的實(shí)施方案中，其中本發(fā)明的化合物由指定的本文公開(kāi)的核酸或核苷酸序列組成，所述化合物還可以包含與所述化合物共價(jià)連接的至少一個(gè)非核苷酸或非多核苷酸結(jié)構(gòu)部分(例如，不包含一個(gè)或多個(gè)核苷酸或核苷酸類(lèi)似物。綴合可以增加本發(fā)明的寡核苷酸的活性、細(xì)胞分布或細(xì)胞攝入。所述結(jié)構(gòu)部分包括，但不限于，抗體，多肽，脂質(zhì)結(jié)構(gòu)部分，如膽固醇結(jié)構(gòu)部分，膽酸，硫醚，例如，己基-s-三苯甲基硫醇，硫代膽固醇，脂肪族鏈，例如，十二烷二醇或十一基殘基，磷脂，例如，二-十六烷基-外消旋-甘油或三乙基銨1，2-二-o-十六烷基-外消旋-甘油基-3-h-磷酸酯，聚胺或聚乙二醇鏈，乙酸金剛烷，棕櫚?；Y(jié)構(gòu)部分，十八基胺或己基氨基-羰基-氧基膽固醇結(jié)構(gòu)部分。本發(fā)明的寡核苷酸還可以綴合到活性藥物物質(zhì)上，例如，阿司匹林(aspirin)，布洛芬(ibuprofen)，磺胺藥物，抗糖尿病藥，抗菌藥或抗生素。在某些實(shí)施方案中，所綴合的結(jié)構(gòu)部分是固醇，如膽固醇。在不同的實(shí)施方案中，所綴合的結(jié)構(gòu)部分包含下述或由下述組成：帶正電荷的聚合物，諸如帶正電荷的肽，例如，長(zhǎng)度約1-50個(gè)，如2-20個(gè)，如3-10個(gè)氨基酸殘基的帶正電荷的肽，和/或聚亞烷基氧化物，如聚乙二醇(PEG)或聚丙二醇(例如，參見(jiàn)國(guó)際申請(qǐng)WO2008/034123)。適當(dāng)?shù)?，所述帶正電荷的聚合物，如聚亞烷基氧化物可以通過(guò)接頭連接到本發(fā)明的寡核苷酸上，所述接頭諸如WO2008/034123中所述的可釋放的接頭。例如，下述綴合物結(jié)構(gòu)部分可以用在本發(fā)明的綴合物中：在一些實(shí)施方案中，所述寡聚化合物包含反義寡聚體，如LNA反義寡聚體(其在本文中可以稱(chēng)為區(qū)域A)，任選地可生物裂解的接頭(區(qū)域B)，和碳水化合物綴合物(其在本文中可以稱(chēng)為區(qū)域C)。在一些實(shí)施方案中，區(qū)域B可以是磷酸酯核苷接頭。在一些實(shí)施方案中，區(qū)域B包含1-6個(gè)核苷酸，并且共價(jià)連接到A區(qū)域的5’或3’核苷酸上，如通過(guò)核苷酸間連接基團(tuán)，如磷酸二酯鍵連接。在一些實(shí)施方案中，所述碳水化合物結(jié)構(gòu)部分不是線(xiàn)性的碳水化合物聚合物。然而，所述碳水化合物結(jié)構(gòu)部分可以是多價(jià)的，諸如，例如，2，3，4或4個(gè)相同的或不相同的碳水化合物結(jié)構(gòu)部分可以共價(jià)連接到所述寡聚體上，任選地通過(guò)一個(gè)接頭或多個(gè)接頭連接。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含本發(fā)明的寡聚體和碳水化合物綴合物結(jié)構(gòu)部分的綴合物。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含本發(fā)明的寡聚體和無(wú)唾液酸糖蛋白受體靶向結(jié)構(gòu)部分的綴合物結(jié)構(gòu)部分(如GalNAc結(jié)構(gòu)部分)的綴合物，所述綴合物結(jié)構(gòu)部分可以形成另一區(qū)域(稱(chēng)為區(qū)域C)的一部分?；罨墓押塑账嵊迷诒疚闹?，術(shù)語(yǔ)“活化的寡核苷酸”是指本發(fā)明與至少一個(gè)功能性結(jié)構(gòu)部分共價(jià)連接(即，官能化的)寡核苷酸，所述功能性結(jié)構(gòu)部分允許所述寡核苷酸與一個(gè)或多個(gè)綴合的結(jié)構(gòu)部分(即，本身不是核酸或單體的結(jié)構(gòu)部分)共價(jià)連接，以形成本文所述的綴合物。典型地，功能性結(jié)構(gòu)部分包括能夠通過(guò)例如腺嘌呤堿基的3’-羥基基團(tuán)或環(huán)外的NH2基團(tuán)與所述寡核苷酸共價(jià)結(jié)合的化學(xué)基團(tuán)，能夠結(jié)合綴合的結(jié)構(gòu)部分(例如，氨基，巰基或羥基基團(tuán))的優(yōu)選是親水性的末端基團(tuán)的間隔體。在一些實(shí)施方案中，該末端基團(tuán)不被保護(hù)(例如，NH2基團(tuán))。在其他實(shí)施方案中，該末端基團(tuán)被保護(hù)，例如，通過(guò)適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)基團(tuán)，如TheodoraWGreene和PeterGMWuts，第3版(JohnWiley&Sons，1999)的“ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis(有機(jī)合成中的保護(hù)基團(tuán))”中所述的那些進(jìn)行保護(hù)。適當(dāng)?shù)牧u基保護(hù)基團(tuán)包括酯，如乙酸酯，芳烷基基團(tuán)，如芐基，二苯甲基，或三苯甲基，和四氫吡喃基。適當(dāng)?shù)陌被Ｗo(hù)基團(tuán)的實(shí)例包括芐基，α-甲苯甲基，二苯甲基，三苯甲基，芐氧羰基，叔丁氧羰基，和?；鶊F(tuán)，如三氯乙?；蛉阴；Ｔ谝恍?shí)施方案中，所述功能性結(jié)構(gòu)部分是自切割的。在其他實(shí)施方案中，所述功能性結(jié)構(gòu)部分是可生物降解的(例如，參見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利號(hào)7,087,229)。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的寡核苷酸在5’端官能化，以允許綴合的結(jié)構(gòu)部分共價(jià)連接到所述寡核苷酸的5’端。在其他實(shí)施方案中，本發(fā)明的寡核苷酸可以在3’端官能化。在其他實(shí)施方案中，本發(fā)明的寡核苷酸可以沿著主鏈或在雜環(huán)堿基結(jié)構(gòu)部分上官能化。在其他實(shí)施方案中，本發(fā)明的寡核苷酸可以在多于一個(gè)位置處官能化，所述位置獨(dú)立地選自5’端、3’端、主鏈和堿基。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的活化的寡核苷酸通過(guò)在合成過(guò)程中結(jié)合一個(gè)或多個(gè)與功能性結(jié)構(gòu)部分共價(jià)連接的單體而合成。在其他實(shí)施方案中，本發(fā)明的活化的寡核苷酸用未經(jīng)官能化的單體合成，并且所述寡核苷酸在合成結(jié)束時(shí)被官能化。在一些實(shí)施方案中，所述寡核苷酸用含有氨基烷基接頭的阻礙的酯官能化，其中所述烷基部分具有式(CH2)w，其中w是1-10范圍內(nèi)的整數(shù)，優(yōu)選約為6，其中所述烷基氨基基團(tuán)的烷基部分可以是直鏈的或支鏈的，并且其中所述官能團(tuán)通過(guò)酯基(-O-C(O)-(CH2)wNH)連接到所述寡核苷酸上。在其他實(shí)施方案中，所述寡核苷酸用含有(CH2)w-巰基(SH)接頭的阻礙的酯官能化，其中w是1-10范圍內(nèi)的整數(shù)，優(yōu)選約為6，其中所述烷基氨基基團(tuán)的烷基部分可以是直鏈的或支鏈的，并且其中所述官能團(tuán)通過(guò)酯基(-O-C(O)-(CH2)wSH)連接到所述寡核苷酸上。在一些實(shí)施方案中，巰基-激活的寡核苷酸與聚合物結(jié)構(gòu)部分，如聚乙二醇或肽綴合(通過(guò)形成二硫鍵)。上述包含阻礙的酯的活化的寡核苷酸可以通過(guò)本領(lǐng)域已知的任意方法合成，并且特別是通過(guò)國(guó)際申請(qǐng)WO2008/034122及其中的實(shí)施例中公開(kāi)的方法合成。在其他實(shí)施方案中，通過(guò)以基本上與美國(guó)專(zhuān)利號(hào)4,962,029和4,914,210所述的官能劑(即，基本上線(xiàn)性的試劑，其在一端具有通過(guò)親水間隔體鏈連接到相反一端的亞磷酰胺，所述相反一端包含保護(hù)的和未保護(hù)的巰基、氨基或羥基基團(tuán))的方式向所述寡核苷酸中引入巰基、氨基或羥基基團(tuán)而使本發(fā)明的寡核苷酸官能化。此類(lèi)試劑主要與寡核苷酸的羥基基團(tuán)反應(yīng)。在一些實(shí)施方案中，所述活化的寡核苷酸具有與所述寡核苷酸的5’-羥基基團(tuán)偶聯(lián)的官能劑。在其他實(shí)施方案中，所述活化的寡核苷酸具有與3’-羥基基團(tuán)偶聯(lián)的官能劑。在其他實(shí)施方案中，本發(fā)明的活化的寡核苷酸具有與所述寡核苷酸的主鏈上的羥基基團(tuán)偶聯(lián)的官能劑。在另一些實(shí)施方案中，用美國(guó)專(zhuān)利號(hào)4,962,029和4,914,210中所述的多于一種的官能劑將本發(fā)明的寡核苷酸官能化。合成所述官能劑并將其結(jié)合到單體或寡核苷酸中的方法公開(kāi)在美國(guó)專(zhuān)利號(hào)4,962,029和4,914,210中。在一些實(shí)施方案中，固相結(jié)合的寡核苷酸的5’-端用二烯基亞磷酰胺(dienylphosphoramidite)衍生物官能化，然后通過(guò)Diels-Alder環(huán)加成反應(yīng)將該去保護(hù)的寡核苷酸與例如氨基酸或肽綴合。在不同的實(shí)施方案中，在所述寡核苷酸中結(jié)合含有2’-糖取代的單體，如2’-氨基甲酸酯取代的糖或2′-(O-戊基-N-苯二甲酰亞氨基)-脫氧核糖糖，促進(jìn)綴合的結(jié)構(gòu)部分與所述寡核苷酸的糖的共價(jià)連接。在其他實(shí)施方案中，使用試劑，諸如，例如，5′-二甲氧基三苯甲基-2′-O-(e-苯二甲酰亞氨基氨基戊基)-2′-脫氧腺苷-3′--N，N-二異丙基-氰基乙氧基亞磷酰胺，制備在一個(gè)或多個(gè)單體的2′-位置具有含有氨基的接頭的寡核苷酸。(例如，參見(jiàn)Manoharan，等，TetrahedronLetters(四面體通信)，(1991)34：7171.)在另外一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的寡核苷酸可以在核堿基上具有含有胺的功能性結(jié)構(gòu)部分，包括在N6嘌呤氨基上，在鳥(niǎo)嘌呤的環(huán)外N2上，或者在胞嘧啶的N4或5位置上。在不同的實(shí)施方案中，所述官能化可以通過(guò)使用已經(jīng)在寡核苷酸合成中官能化的商購(gòu)試劑來(lái)實(shí)現(xiàn)。一些功能性結(jié)構(gòu)部分是可商購(gòu)的，例如，異雙功能性和同雙功能性連接結(jié)構(gòu)部分可從PierceCo.(Rockford，Ill.)獲得。其他可商購(gòu)的連接基團(tuán)是5′-氨基-改性劑C6和3′-氨基-改性劑試劑，二者均可以獲自GlenResearchCorporation(Sterling，Va.)。5′-氨基-修飾劑C6還可以氨基連接-2(Aminolink-2)獲自ABI(AppliedBiosystemsInc.，F(xiàn)osterCity，Calif.)，并且3′-氨基-修飾劑還可以獲自ClontechLaboratoriesInc.(PaloAlto，Calif.)。藥物組合物本發(fā)明的寡核苷酸可以用在藥物制劑和組合物中。適當(dāng)?shù)?，所述組合物包含藥用溶劑，諸如水或鹽水，稀釋劑，載體，鹽或輔藥。PCT/DK2006/000512提供了適當(dāng)?shù)那覂?yōu)選的藥用稀釋劑，載體，溶劑和輔藥。PCT/DK2006/000512中還提供了適當(dāng)?shù)膭┝?，制劑，給藥途徑，組合物，劑型，與其他治療劑的組合，前藥制劑。本發(fā)明還包括含有本發(fā)明的寡核苷酸的藥物組合物和制劑。本發(fā)明的藥物組合物可以以多種方式施用，取決于是需要局部治療還是系統(tǒng)治療，以及取決于待治療的區(qū)域。施用可以是局部的(包括眼用的和施用到黏膜上，包括陰道和直腸遞送)，肺部的，例如，通過(guò)吸入或吹入粉劑或氣霧劑，包括通過(guò)噴霧劑吸入；器官內(nèi)，鼻內(nèi)，表皮和經(jīng)皮的，口服或腸胃外的。腸胃外施用包括靜脈內(nèi)，動(dòng)脈內(nèi)，皮下，腹膜內(nèi)或肌內(nèi)注射或輸注；或顱內(nèi)的(例如，鞘內(nèi)的或室內(nèi)施用)。具有至少一個(gè)2′-O-甲氧基乙基取代或修飾的寡核苷酸可以特別用于口服施用。應(yīng)用本發(fā)明的寡核苷酸可以用作研究試劑，例如，用于診斷、治療和預(yù)防。在研究中，所述寡核苷酸可以用于特異性抑制細(xì)胞和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中FGFR3的合成(典型地通過(guò)降解或抑制mRNA，由此防止蛋白形成)，由此促進(jìn)對(duì)靶標(biāo)的功能性分析或?qū)ζ渥鳛橹委煾深A(yù)的靶標(biāo)的有用性的評(píng)估。在診斷劑中，所述寡核苷酸可以用于通過(guò)RNA印跡、原位雜交或相似的技術(shù)來(lái)檢測(cè)并定量細(xì)胞中組織中的FGFR3表達(dá)。對(duì)于治療劑，懷疑患有可以通過(guò)調(diào)節(jié)FGFR3的表達(dá)進(jìn)行治療的疾病或病癥的動(dòng)物或人通過(guò)施用本發(fā)明所述的寡核苷酸進(jìn)行治療。進(jìn)一步提供治療懷疑患有或傾向于患有與FGFR3表達(dá)相關(guān)的疾病或病癥的哺乳動(dòng)物(如治療人)的方法，所述通過(guò)通過(guò)施用治療或預(yù)防有效量的一種或多種本發(fā)明的寡核苷酸或組合物。本發(fā)明所述的寡核苷酸、綴合物或藥物組合物典型地以有效量施用。本發(fā)明還提供本發(fā)明所述的化合物或綴合物在制備用于治療本文提及的病癥的藥物中的應(yīng)用，或用于治療本文提及的病癥的方法中的應(yīng)用。本發(fā)明還提供用于治療本文提及的病癥的方法，所述方法包括給有此需要的患者施用本文所述的本發(fā)明的化合物和/或本發(fā)明的綴合物和/或本發(fā)明的藥物組合物。藥物適應(yīng)證本發(fā)明所述的寡核苷酸和其他組合物可以用于治療與FGFR3的突變版本的過(guò)表達(dá)或表達(dá)相關(guān)的病癥(例如，軟骨發(fā)育不全)。本發(fā)明還提供本發(fā)明的化合物在制備用于治療本文提及的疾病、病癥或病況的藥物中的應(yīng)用。通常述及，本發(fā)明的一個(gè)方面涉及治療患有或容易患有與FGFR3的異常水平或異常表達(dá)(例如，涉及突變的G380RFGFR3的表達(dá))相關(guān)的病癥的哺乳動(dòng)物的方法，所述方法包括給所述哺乳動(dòng)物施用治療有效量的靶向FGFR3突變的或天然存在的變體的基因產(chǎn)物(例如，編碼突變的FGFR3，如G380R突變的mRNA)的寡核苷酸，所述寡核苷酸包含一個(gè)或多個(gè)LNA單位。在一些實(shí)施方案中，本文提及的疾病或病癥可能與FGFR3基因或其蛋白產(chǎn)物與FGFR3相關(guān)或相互作用的基因中的突變有關(guān)。因此，在一些實(shí)施方案中，靶mRNA是突變形式的FGFR3mRNA。本發(fā)明的一個(gè)方面涉及寡核苷酸或綴合物用于制備用于治療本文提及的疾病、病癥或病況的藥物的應(yīng)用。本發(fā)明的方法優(yōu)選地用于治療或預(yù)防由異常水平的FGFR3引起的疾病。備選所述地，在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明還涉及用于治療異常水平的FGFR3的方法，所述方法包括給有此需要的患者施用本發(fā)明的寡核苷酸、或本發(fā)明的綴合物或本發(fā)明的藥物組合物。本發(fā)明還涉及本文定義的寡核苷酸、組合物或綴合物，其用作藥物。本發(fā)明還涉及本文定義的化合物、組合物或綴合物用于制備用于治療FGFR3的異常水平或FGFR3突變形式(諸如等位基因變體，如與本文提及的疾病中的一種有關(guān)的那些)的表達(dá)的藥物。此外，本發(fā)明涉及治療患有諸如本文提及的那些疾病或病癥的受試者的方法。需要治療的患者是患有或可能患有疾病或病癥的患者。在一些實(shí)施方案中，術(shù)語(yǔ)“治療”用在本文中是指已有疾病(例如，本文提及的疾病或病癥)的治療或疾病的防止(即，預(yù)防)。因此，應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，在一些實(shí)施方案中，本文所述的治療可以是預(yù)防性的。本發(fā)明的反義化合物可以用于診斷、治療、預(yù)防和用作研究試劑和試劑盒。對(duì)于治療，懷疑患有可以通過(guò)調(diào)節(jié)FGFR3的表達(dá)進(jìn)行治療的疾病或病癥的動(dòng)物，優(yōu)選人，通過(guò)使用本發(fā)明所述的寡核苷酸進(jìn)行治療。通過(guò)將有效量的寡核苷酸添加到適當(dāng)?shù)乃幱孟♂寗┗蜉d體中，本發(fā)明的寡核苷酸可以用在藥物組合物中。本發(fā)明的反義化合物可用于研究和診斷，原因在于這些化合物與編碼FGFR3的核酸雜交，能夠允許夾心和其他測(cè)定容易進(jìn)行，從而研究這一事實(shí)。本發(fā)明的寡核苷酸與編碼FGFR3的核酸的雜交可以通過(guò)本領(lǐng)域已知的方式檢測(cè)。所述方式可以包括使所述寡核苷酸與酶綴合，放射性標(biāo)記所述寡核苷酸或者任意其他的檢測(cè)方式。還可以制備使用所述檢測(cè)方式來(lái)檢測(cè)樣品中的FGFR3蛋白或mRNA的水平的試劑盒。盡管已經(jīng)按照某些實(shí)施方案具體描述了本發(fā)明的某些化合物、組合物和方法，但是下述實(shí)施例僅作用為舉例說(shuō)明本發(fā)明的化合物，并且不意欲限制本發(fā)明的化合物。其中引用用來(lái)描述本發(fā)明的背景和提供關(guān)于其實(shí)施的另外的詳情的每一篇公布、參考資料、GenBank登記號(hào)等通過(guò)引用完全結(jié)合在本文中。冠詞“一個(gè)”(“a”和“an”)用在本文中在說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求書(shū)中，除非清楚地相反指明，應(yīng)該理解為包括復(fù)數(shù)引用物。如果一個(gè)、多于一個(gè)或所有的組成員存在、用于或以除此之外的方式與給定的產(chǎn)物或方法相關(guān)，則認(rèn)為在一個(gè)或多個(gè)組成員之間包括“或”的權(quán)利要求或描述是滿(mǎn)足的，除非相反指明或者從上下文中另外清楚可見(jiàn)。本發(fā)明包括其中僅一個(gè)組成員存在、用于或以除此之外的方式與給定的產(chǎn)物或方法相關(guān)的實(shí)施方案。本發(fā)明還包括其中多于一個(gè)或所有組成員存在、用于或以除此之外的方式與給定的產(chǎn)物或方法相關(guān)的實(shí)施方案。此外，應(yīng)該理解，本發(fā)明包括所有的變化、組合和改變，其中來(lái)自一個(gè)或多個(gè)所列的權(quán)利要求的一個(gè)或多個(gè)限制、元素、從句、描述性術(shù)語(yǔ)等被引入到從屬于該主權(quán)利要求的另一項(xiàng)權(quán)利要求中(或者，相關(guān)的、任意其他的權(quán)利要求)，除非另外指明或者除非本領(lǐng)域普通技術(shù)人員明顯看出將引起矛盾或不一致。在存在列舉的元素，例如，在馬庫(kù)什組或類(lèi)似的形式中時(shí)，應(yīng)該理解，也公開(kāi)了該元素的每個(gè)亞組，并且可以從該組中去除任意一個(gè)或多個(gè)元素。應(yīng)該理解，通常，當(dāng)提及本發(fā)明或本發(fā)明的方面包括具體的元素、特征等時(shí)，本發(fā)明的某些實(shí)施方案或本發(fā)明的方法由所述元素、特征等組成或基本上由所述元素、特征等組成。為了簡(jiǎn)化的目的，這些實(shí)施方案在每種情形中在本文中沒(méi)有具體地以如此多的語(yǔ)言進(jìn)行描述。還應(yīng)該理解，本發(fā)明的任意實(shí)施方案或方面可以明確地被權(quán)利要求排除在外，而不管說(shuō)明書(shū)中是否引用該具體的排除。本發(fā)明的實(shí)施方案1.與包含SEQIDNO：4的核酸雜交的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸調(diào)節(jié)FGFR3的表達(dá)。2.實(shí)施方案1的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸與SEQIDNO：4的區(qū)域雜交，所述區(qū)域包含SEQIDNO：4的核苷酸位置1394。3.實(shí)施方案1的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸選自由下述組成的組：SEQIDNO：9，SEQIDNO：10，SEQIDNO：11，SEQIDNO：12，SEQIDNO：13，SEQIDNO：14，SEQIDNO：21，SEQIDNO：22，SEQIDNO：23，SEQIDNO：24和SEQIDNO：25。4.實(shí)施方案1的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸與選自由SEQIDNO：9，SEQIDNO：10，SEQIDNO：11，SEQIDNO：12，SEQIDNO：13和SEQIDNO：14組成的組的寡核苷酸至少80％相同。5.實(shí)施方案1的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸長(zhǎng)度為14個(gè)核苷酸。6.實(shí)施方案1的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸長(zhǎng)度為至少15個(gè)核苷酸。7.實(shí)施方案1的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸長(zhǎng)度為至少16個(gè)核苷酸。8.實(shí)施方案1的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸長(zhǎng)度為至少18個(gè)核苷酸。9.實(shí)施方案1的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸與SEQIDNO：4編碼G380R突變的區(qū)域特異性雜交。10.實(shí)施方案1的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸使FGFR3的表達(dá)減少至少約50％。11.實(shí)施方案1的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸使FGFR3的表達(dá)減少至少約75％。12.實(shí)施方案1的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸使FGFR3的表達(dá)減少至少約90％。13.實(shí)施方案1的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸調(diào)節(jié)突變形式的FGFR3的表達(dá)。14.實(shí)施方案1的寡核苷酸，其中，與野生型形式的FGFR3的表達(dá)相比較，所述寡核苷酸優(yōu)先調(diào)節(jié)突變形式的FGFR3的表達(dá)。15.實(shí)施方案1的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸抑制突變形式的FGFR3的表達(dá)。16.實(shí)施方案1的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸下調(diào)突變形式的FGFR3的表達(dá)。17.實(shí)施方案1的寡核苷酸，其中，與突變形式的FGFR3的表達(dá)相比較，所述寡核苷酸上調(diào)野生型形式的FGFR3的表達(dá)。18.實(shí)施方案1的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸不與包含SEQIDNO：1的核酸雜交。19.實(shí)施方案1的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸不與包含SEQIDNO：7或SEQIDNO：8的核酸雜交。20.實(shí)施方案1的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸與包含SEQIDNO：5或SEQIDNO：6的核酸雜交。21.實(shí)施方案1的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸與包含SEQIDNO：4的核酸在密碼子380處雜交。22.實(shí)施方案1的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸與包含SEQIDNO：4的核酸在G380R區(qū)域雜交。23.實(shí)施方案1的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸與包含SEQIDNO：4的核酸在密碼子380的位置1138處雜交。24.實(shí)施方案1的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸是反義寡核苷酸。25.實(shí)施方案23的寡核苷酸，，其中所述寡核苷酸選自由下述組成的組：SEQIDNO：9，SEQIDNO：10，SEQIDNO：11，SEQIDNO：12，SEQIDNO：13，SEQIDNO：14，SEQIDNO：21，SEQIDNO：22，SEQIDNO：23，SEQIDNO：24和SEQIDNO：25。26.實(shí)施方案1的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包含一個(gè)或多個(gè)選自由下述組成的組的核苷酸單位：鎖定核酸(LNA)單位；2’-O-烷基-RNA單位，2’-OMe-RNA單位，2’-氨基-DNA單位，和2’-氟-DNA單位。27.實(shí)施方案1的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包含兩個(gè)以上的LNA單體單位。28.實(shí)施方案27的寡核苷酸，其中所述兩個(gè)以上的LNA單體單位位置彼此相鄰。29.實(shí)施方案27的寡核苷酸，其中所述兩個(gè)以上的LNA單體單位為位置彼此連續(xù)。30.實(shí)施方案1的寡核苷酸，其中對(duì)FGFR3的表達(dá)的調(diào)節(jié)恢復(fù)軟骨細(xì)胞的功能。31.實(shí)施方案1的寡核苷酸用于治療與FGFR3的異常表達(dá)相關(guān)的病癥的應(yīng)用。32.實(shí)施方案1的寡核苷酸用于治療軟骨發(fā)育不全的應(yīng)用。33.包含SEQIDNO：9的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸調(diào)節(jié)FGFR3的表達(dá)。34.包含SEQIDNO：10的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸調(diào)節(jié)FGFR3的表達(dá)。35.包含SEQIDNO：11的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸調(diào)節(jié)FGFR3的表達(dá)。36.包含SEQIDNO：12的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸調(diào)節(jié)FGFR3的表達(dá)。37.包含SEQIDNO：13的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸調(diào)節(jié)FGFR3的表達(dá)。38.與包含SEQIDNO：1的核酸雜交的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包含一個(gè)或多個(gè)LNA單體單位，并且其中所述寡核苷酸調(diào)節(jié)FGFR3的表達(dá)。39.實(shí)施方案38的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸長(zhǎng)度為8個(gè)核苷酸。40.實(shí)施方案38的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸長(zhǎng)度為15個(gè)核苷酸。41.實(shí)施方案38的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸長(zhǎng)度為18個(gè)核苷酸。42.實(shí)施方案38的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸使FGFR3的表達(dá)減少至少約50％。43.實(shí)施方案38的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸使FGFR3的表達(dá)減少至少約75％。44.實(shí)施方案38的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸使FGFR3的表達(dá)減少至少約90％。45.實(shí)施方案38的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸調(diào)節(jié)突變形式的FGFR3的表達(dá)。46.實(shí)施方案38的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸抑制突變形式的FGFR3的表達(dá)。47.實(shí)施方案38的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸下調(diào)突變形式的FGFR3的表達(dá)。48.實(shí)施方案38的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸上調(diào)野生型形式的FGFR3的表達(dá)。49.實(shí)施方案38的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸與包含SEQIDNO：4的核酸雜交。50.實(shí)施方案38的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸與包含SEQIDNO：4的核酸在密碼子380的位置1138處雜交。51.實(shí)施方案38的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸與包含SEQIDNO：4的核酸在G380R區(qū)域雜交。52.實(shí)施方案38的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸是反義寡核苷酸。53.實(shí)施方案38的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包含兩個(gè)以上的LNA單體單位。54.實(shí)施方案53的寡核苷酸，其中所述兩個(gè)以上的LNA單體單位位置彼此相鄰。55.實(shí)施方案53的寡核苷酸，其中所述兩個(gè)以上的LNA單體單位為位置彼此連續(xù)。56.實(shí)施方案38的寡核苷酸，其中對(duì)FGFR3的表達(dá)的調(diào)節(jié)恢復(fù)軟骨細(xì)胞的功能。57.實(shí)施方案38的寡核苷酸用于治療與FGFR3的異常表達(dá)相關(guān)的病癥的應(yīng)用。58.實(shí)施方案38的寡核苷酸用于治療軟骨發(fā)育不全的應(yīng)用。59.用于治療軟骨發(fā)育不全的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸與包含SEQIDNO：1或SEQIDNO：4的核酸雜交，并且其中所述寡核苷酸包含至少一個(gè)LNA單體單位。60.實(shí)施方案59的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸長(zhǎng)度為8個(gè)核苷酸。61.實(shí)施方案59的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸長(zhǎng)度為15個(gè)核苷酸。62.實(shí)施方案59的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸長(zhǎng)度為18個(gè)核苷酸。63.實(shí)施方案59的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸下調(diào)FGFR3的表達(dá)。64.實(shí)施方案59的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸是反義寡核苷酸。65.用于治療癌癥或軟骨發(fā)育不全的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸與包含SEQIDNO：5的核酸的G380R區(qū)域雜交，并且其中所述寡核苷酸包含至少一個(gè)LNA單體單位。66.一種調(diào)節(jié)FGFR3mRNA的表達(dá)的方法，所述方法包括在適于所述FGFR3mRNA與所述寡核苷酸雜交的條件下，向所述FGFR3mRNA遞送實(shí)施方案1的寡核苷酸，由此調(diào)節(jié)FGFR3mRNA的表達(dá)。67.實(shí)施方案66的方法，其中調(diào)節(jié)FGFR3的表達(dá)導(dǎo)致減少的FGFR3表達(dá)。68.一種調(diào)節(jié)FGFR3的表達(dá)的方法，所述方法包括是所述FGFR3與實(shí)施方案1的寡核苷酸在適于所述FGFR3與所述寡核苷酸雜交的條件下接觸，由此調(diào)節(jié)FGFR3的表達(dá)。69.實(shí)施方案68的方法，其中調(diào)節(jié)FGFR3的表達(dá)導(dǎo)致減少的FGFR3表達(dá)。70.一種治療與FGFR3的異常表達(dá)相關(guān)的病癥的方法，所述方法包括選擇診斷患有所述病癥的患者，和給所述患者施用實(shí)施方案1的寡核苷酸。71.一種治療與FGFR3的異常表達(dá)相關(guān)的病癥的方法，所述方法包括選擇診斷患有所述病癥的患者，和給所述患者施用實(shí)施方案38的寡核苷酸。72.與包含SEQIDNO：4的核酸雜交的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包含至少一個(gè)LNA單體單位，并且其中所述寡核苷酸不與包含SEQIDNO：1的核酸雜交。73.用于治療癌癥，如膀胱癌，或軟骨發(fā)育不全的包含寡核苷酸的藥物組合物，其中所述藥物組合物與包含SEQIDNO：1或SEQIDNO：4的核酸雜交，并且其中所述寡核苷酸包含至少一個(gè)LNA單體單位。74.實(shí)施方案73的藥物組合物，其中所述寡核苷酸是反義寡核苷酸。75.實(shí)施方案73的藥物組合物，其中所述組合物配制用于肺部施用。76.實(shí)施方案73的藥物組合物，其中所述組合物配制用于腸胃外施用。77.實(shí)施方案73的藥物組合物，其中所述寡核苷酸通過(guò)與包含SEQIDNO：4的核酸雜交而調(diào)節(jié)FGFR3的表達(dá)。78.實(shí)施方案77的藥物組合物，其中所述寡核苷酸不與包含SEQIDNO：1的核酸雜交。79.實(shí)施方案73的藥物組合物，其中所述寡核苷酸通過(guò)與包含SEQIDNO：1的核酸雜交而調(diào)節(jié)FGFR3的表達(dá)。80.實(shí)施方案79的藥物組合物，其中所述寡核苷酸不與包含SEQIDNO：4的核酸雜交。81.調(diào)節(jié)FGFR3的表達(dá)的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包含至少一個(gè)LNA單體單位。82.長(zhǎng)度約為14-20個(gè)核苷酸的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包含與反向互補(bǔ)的SEQIDNO：4至少80％同源的核苷酸序列或其天然存在的變體。83.實(shí)施方案82的寡核苷酸，其中所述連續(xù)的核苷酸序列包含不超過(guò)一個(gè)與SEQIDNO：4的反向互補(bǔ)物的錯(cuò)配。84.實(shí)施方案82的寡核苷酸，其中所述核苷酸序列包含一個(gè)或多個(gè)核苷酸類(lèi)似物。85.實(shí)施方案84的寡核苷酸，其中，與野生型寡核苷酸中的野生型核苷酸相比，所述一個(gè)或多個(gè)核苷酸類(lèi)似物包含化學(xué)改變的糖結(jié)構(gòu)部分。86.實(shí)施方案85的寡核苷酸，其中所述一個(gè)或多個(gè)核苷酸類(lèi)似物選自由下述組成的組：鎖定核酸(LNA)單位，2’-O-烷基-RNA單位，2’-OMe-RNA單位，2’-氨基-DNA單位和2’-氟-DNA單位。87.實(shí)施方案84的寡核苷酸，其中所述一種或多種核苷酸類(lèi)似物是LNA。88.實(shí)施方案82的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸選自由下述組成的組：SEQIDNO：21，SEQIDNO：22，SEQIDNO：23，SEQIDNO：24和SEQIDNO：25。89.實(shí)施方案82的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸是gapmer。90.實(shí)施方案82的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸抑制表達(dá)FGFR3mRNA的細(xì)胞中的FGFR3mRNA的表達(dá)。91.實(shí)施方案90的寡核苷酸，其中所述FGFR3mRNA包含突變。92.實(shí)施方案91的寡核苷酸，其中所述突變是G380R突變。93.包含實(shí)施方案82的寡核苷酸和與所述寡核苷酸共價(jià)連接的至少一個(gè)非核苷酸結(jié)構(gòu)部分的綴合物。94.包含實(shí)施方案82的寡核苷酸和藥用稀釋劑、載體、溶劑、鹽或輔藥的藥物組合物。95.實(shí)施方案82的寡核苷酸用于治療軟骨發(fā)育不全的應(yīng)用。96.一種治療受癌癥，如膀胱癌，軟骨發(fā)育不全影響的受試者的方法，所述方法包括向所述受試者施用實(shí)施方案82的寡核苷酸的步驟，以改善軟骨發(fā)育不全的一個(gè)或多個(gè)客觀癥狀。97.實(shí)施方案96的方法，其中所述客觀癥狀選自由下述組成的組：增加的肌張力，手臂伸長(zhǎng)，腿伸長(zhǎng)和增加的高度。98.一種減少異常表達(dá)FGFR3的細(xì)胞中的FGFR3的異常表達(dá)的方法，所述方法包括使所述細(xì)胞與實(shí)施方案82的寡核苷酸接觸，以減少FGFR3的表達(dá)。99.實(shí)施方案98的方法，其中所述FGFR3包含G380R突變。100.一種治療患有癌癥，如膀胱癌，軟骨發(fā)育不全的哺乳動(dòng)物的方法，所述方法包括給所述哺乳動(dòng)物施用治療有效量的靶向FGFR3的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包含一個(gè)或多個(gè)LNA單位。101.實(shí)施方案100的方法，其中所述寡核苷酸包含選自由下述組成的組的序列：SEQIDNO：9，SEQIDNO：10，SEQIDNO：11，SEQIDNO：12，SEQIDNO：13，SEQIDNO：14，SEQIDNO：21，SEQIDNO：22，SEQIDNO：23，SEQIDNO：24和SEQIDNO：25。102.實(shí)施方案100的方法，其中所述寡核苷酸腸胃外施用。103.實(shí)施方案100的方法，其中所述寡核苷酸靜脈內(nèi)施用。104.實(shí)施方案100的方法，其中所述寡核苷酸通過(guò)推注注射到靶器官或組織中施用。105.實(shí)施方案100的方法，其中所述寡核苷酸腹膜內(nèi)施用。106.包含SEQIDNO：21的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸調(diào)節(jié)FGFR3的表達(dá)。107.實(shí)施方案106的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸與編碼FGFR3的核酸雜交，以形成具有至少約60℃的解離Tm的雙鏈體結(jié)構(gòu)。108.實(shí)施方案106的寡核苷酸，其中所述FGFR3包含G380R突變，并且其中所述調(diào)節(jié)FGFR3的表達(dá)包括抑制FGFR3的表達(dá)。109.實(shí)施方案108的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸以約0.05至約0.75nM的IC50濃度抑制所述FGFR3的表達(dá)。110.實(shí)施方案106的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸在血漿中在37℃穩(wěn)定至少約96小時(shí)。111.包含SEQIDNO：22的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸調(diào)節(jié)FGFR3的表達(dá)。112.實(shí)施方案111的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸與編碼FGFR3的核酸雜交，以形成具有至少約70℃的解離Tm的雙鏈體結(jié)構(gòu)。113.實(shí)施方案111的寡核苷酸，其中所述FGFR3包含G380R突變，并且其中所述調(diào)節(jié)FGFR3的表達(dá)包括抑制FGFR3的表達(dá)。114.實(shí)施方案113的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸以約0.05至約0.75nM的IC50濃度抑制FGFR3的表達(dá)。115.實(shí)施方案111的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸在血漿中在37℃穩(wěn)定至少約96小時(shí)。116.包含SEQIDNO：23的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸調(diào)節(jié)FGFR3的表達(dá)。117.實(shí)施方案116的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸與編碼FGFR3的核酸雜交，以形成具有至少約70℃的解離Tm的雙鏈體結(jié)構(gòu)。118.實(shí)施方案116的寡核苷酸，其中所述FGFR3包含G380R突變，并且其中所述調(diào)節(jié)FGFR3的表達(dá)包括抑制FGFR3的表達(dá)。119.實(shí)施方案118的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸以約0.05至約0.75nM的IC50濃度抑制FGFR3的表達(dá)。120.實(shí)施方案116的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸在血漿中在37℃穩(wěn)定至少約96小時(shí)。121.包含SEQIDNO：24的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸調(diào)節(jié)FGFR3的表達(dá)。122.實(shí)施方案121的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸與編碼FGFR3的核酸雜交，以形成具有至少約70℃的解離Tm的雙鏈體結(jié)構(gòu)。123.實(shí)施方案121的寡核苷酸，其中所述FGFR3包含G380R突變，并且其中所述調(diào)節(jié)FGFR3的表達(dá)包括抑制FGFR3的表達(dá)。124.實(shí)施方案123的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸以約0.05至約0.75nM的IC50濃度抑制FGFR3的表達(dá)。125.實(shí)施方案121的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸在血漿中在37℃穩(wěn)定至少約96小時(shí)。126.包含SEQIDNO：25的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸調(diào)節(jié)FGFR3的表達(dá)。127.實(shí)施方案126的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸與編碼FGFR3的核酸雜交，以形成具有至少約70℃的解離Tm的雙鏈體結(jié)構(gòu)。128.實(shí)施方案127的寡核苷酸，其中所述FGFR3包含G380R突變，并且其中所述調(diào)節(jié)FGFR3的表達(dá)包括抑制FGFR3的表達(dá)。129.實(shí)施方案128的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸以約0.05至約0.75nM的IC50濃度抑制FGFR3的表達(dá)。130.實(shí)施方案126的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸在血漿中在37℃穩(wěn)定至少約96小時(shí)。131.與包含SEQIDNO：20的核酸雜交的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸調(diào)節(jié)FGFR3的表達(dá)。132.實(shí)施方案131的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包含SEQIDNO：14。133.包含SEQIDNO：14的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸調(diào)節(jié)FGFR3的表達(dá)。134.實(shí)施方案133的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包含至少一個(gè)核苷酸類(lèi)似物，并且其中所述核苷酸類(lèi)似物是鎖定核酸。135.包含SEQIDNO：14的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸調(diào)節(jié)FGFR3的表達(dá)，并且其中所述寡核苷酸在一個(gè)或多個(gè)位置包含至少一個(gè)核苷酸類(lèi)似物，其選自由下述組成的組：(a)位置1的鳥(niǎo)嘌呤核苷酸是氧基-LNA；(b)位置2和3中的一個(gè)或多個(gè)位置的腺嘌呤核苷酸是氧基-LNA；(c)位置10和11中的一個(gè)或多個(gè)位置的胞嘧啶核苷酸是氧基-LNA；和(d)位置12的胸腺嘧啶核苷酸是氧基-LNA。136.實(shí)施方案135的寡核苷酸，其中所述位置11的胞嘧啶核苷酸是C5-甲基胞嘧啶，其中所述C5-甲基胞嘧啶是β-D-氧基-LNA，其中所述位置12的胸腺嘧啶核苷酸是β-D-氧基-LNA，并且其中所有苷酸間連接基團(tuán)是硫代磷酸酯核苷酸間連接基團(tuán)。137.實(shí)施方案135的寡核苷酸，其中所述位置1的鳥(niǎo)嘌呤核苷酸是β-D-氧基-LNA，其中所述位置2和3的腺嘌呤核苷酸是β-D-氧基-LNA，并且其中所有核苷酸間連接基團(tuán)是硫代磷酸酯核苷酸間連接基團(tuán)。138.實(shí)施方案135的寡核苷酸，其中所述位置1的鳥(niǎo)嘌呤核苷酸是β-D-氧基-LNA，其中所述位置10和11的胞嘧啶核苷酸都是C5-甲基胞嘧啶，其中所述C5-甲基胞嘧啶是β-D-氧基-LNA，其中所述位置12的胸腺嘧啶核苷酸是β-D-a氧基-LNA，并且其中所有核苷酸間連接基團(tuán)是硫代磷酸酯核苷酸間連接基團(tuán)。139.實(shí)施方案135的寡核苷酸，其中所述位置10和11的胞嘧啶核苷酸都是C5-甲基胞嘧啶，其中所述C5-甲基胞嘧啶是β-D-氧基-LNA，其中所述位置12的胸腺嘧啶核苷酸是β-D-a氧基-LNA，并且其中所有核苷酸間連接基團(tuán)是硫代磷酸酯核苷酸間連接基團(tuán)。140.實(shí)施方案135的寡核苷酸，其中至少一個(gè)核苷酸是獨(dú)立地選自由下述組成的組的修飾的核堿基：5-甲基胞嘧啶，異胞嘧啶，假異胞嘧啶，5-溴尿嘧啶，5-丙炔基尿嘧啶，6-氨基嘌呤，2-氨基嘌呤，肌苷，二氨基嘌呤和2-氯-6-氨基嘌呤胞嘧啶。141.實(shí)施方案135的寡核苷酸，其中所述在位置10和11的胞嘧啶核苷酸分別是修飾的核堿基。142.實(shí)施方案141的寡核苷酸，其中所述修飾的核堿基是C5-甲基胞嘧啶。143.實(shí)施方案135的寡核苷酸，其中所述氧基-LNA是β-D-氧基LNA。144.實(shí)施方案135的寡核苷酸，其中至少一個(gè)核苷酸間連接基團(tuán)是硫代磷酸酯核苷酸間連接基團(tuán)。145.實(shí)施方案135的寡核苷酸，其中所有核苷酸間連接基團(tuán)是硫代磷酸酯核苷酸間連接基團(tuán)。實(shí)施例下述實(shí)施例描述了幾種靶向突變體FGFR3G380RmRNA轉(zhuǎn)錄物的寡核苷酸以及這些寡核苷酸的多種優(yōu)越特性。具體地，實(shí)施例1證明了21種寡核苷酸敲低突變體G380RFGFR3表達(dá)的功效和這21種寡核苷酸的選擇性(例如，與對(duì)野生型FGFR3表達(dá)的抑制相比，抑制突變體G380RFGFR3的表達(dá))。實(shí)施例2證明了十種寡核苷酸中的每一種抑制突變體G380RFGFR3表達(dá)的強(qiáng)度，所述強(qiáng)度以IC50值測(cè)量，以及與野生型FGFR3表達(dá)相比，抑制突變體G380RFGFR3表達(dá)的強(qiáng)度的區(qū)別。實(shí)施例3描述了通過(guò)比較每種寡核苷酸對(duì)兩種不相關(guān)的靶標(biāo)的抑制作用而對(duì)這十種寡核苷酸的非特異性作用的研究。實(shí)施例4描述了這十種寡核苷酸中的每一種與突變體G380RFGFR3(完全互補(bǔ)的)或野生型FGFR3(在突變位點(diǎn)有一個(gè)互補(bǔ)性錯(cuò)配)之間的結(jié)合能，所述結(jié)合能以解鏈溫度(Tm)進(jìn)行測(cè)量。實(shí)施例5證明了這十種寡核苷酸的核酸酶敏感性，所述核酸酶敏感性以血漿穩(wěn)定性進(jìn)行測(cè)量。實(shí)施例6描述了在標(biāo)準(zhǔn)的16天小鼠研究中所選的寡核苷酸的體內(nèi)耐受性的評(píng)估。實(shí)施例1-檢測(cè)21種寡核苷酸的功效和選擇性總共設(shè)計(jì)21種反義寡核苷酸，分別具有鎖定核酸(LNA)主鏈，用來(lái)選擇性靶向人FGFR3G380R突變和在所述突變周?chē)蜞徑鐾蛔兊膮^(qū)域。具體地，設(shè)計(jì)這21種LNA反義寡核苷酸來(lái)與這樣的區(qū)域雜交，所述區(qū)域包含在FGFR3mRNA的位置1394的“A”(即，在NM_000142.3的位置1394的GGG→AGG錯(cuò)義突變)和位置1394上游和/或下游的核苷酸，即在位置1380-1480范圍內(nèi)。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染含有具有G380R突變的全長(zhǎng)FGFR3和相對(duì)應(yīng)的野生型FGFR3的FLAG-標(biāo)記的序列的載體的人細(xì)胞用于初始表征這21種寡核苷酸中的每一種的功效。由于其相對(duì)低的內(nèi)源性FGFR3表達(dá)，因此選擇人A549細(xì)胞系用于該測(cè)定。設(shè)計(jì)定性PCR(qPCR)測(cè)定，以通過(guò)靶向FLAG序列特異性識(shí)別載體表達(dá)產(chǎn)物。另外，設(shè)計(jì)qPCR測(cè)定，以通過(guò)靶向FGFR3的3’UTR(其不是載體表達(dá)系統(tǒng)的一部分)來(lái)特異性識(shí)別內(nèi)源性表達(dá)產(chǎn)物。通過(guò)用每種寡核苷酸和野生型(WT)或突變體(MUT)FLAG-標(biāo)記的載體構(gòu)建體共轉(zhuǎn)染人A549細(xì)胞來(lái)評(píng)估這21種寡核苷酸中的每一種的功效和選擇性。寡核苷酸濃度在0.25nM，0.5nM和1.0nM測(cè)定。轉(zhuǎn)染后24小時(shí)收集細(xì)胞，并且用報(bào)道子-特異性qPCR測(cè)定來(lái)確定表達(dá)的FLAG-標(biāo)記報(bào)道子的水平。針對(duì)內(nèi)源性GAPDH水平標(biāo)準(zhǔn)化的結(jié)果作為模擬處理的樣品的百分?jǐn)?shù)顯示在圖1A和1B中。這21種寡核苷酸以標(biāo)識(shí)符區(qū)分，每種以“SH”開(kāi)頭，而指定為PCON的寡核苷酸表示陽(yáng)性獨(dú)照，其靶向野生型和突變體FGFR3轉(zhuǎn)錄物二者的不同于1394突變位點(diǎn)的區(qū)域。模擬處理的樣品轉(zhuǎn)染上述FLAG-標(biāo)記的報(bào)道子構(gòu)建體，而不轉(zhuǎn)染測(cè)試寡核苷酸，用水替代它。另外，指定為NCON的隨機(jī)混合的(scrambled)寡核苷酸用作陰性對(duì)照。如圖1A和1B所示，與模擬樣品的FGFR3表達(dá)相比，某些寡核苷酸使野生型FGFR3和/或突變體FGFR3表達(dá)減少80％以下，60％以下，50％以下，40％以下，30％以下，25％以下，20％以下，甚至10％以下，這取決于所述寡核苷酸的濃度(0.25nM，0.5nM或1nM)。此外，與野生型FGFR3表達(dá)相比，某些寡核苷酸實(shí)質(zhì)上并且優(yōu)先減少突變體FGFR3的表達(dá)(即，下調(diào)其表達(dá))。例如，指定為SH13(SEQIDNO：22)的寡核苷酸以0.25nM的濃度使突變體FGFR3水平減少至幾乎是相對(duì)應(yīng)的野生型FGFR3水平的一半。指定為PCON的陽(yáng)性對(duì)照表現(xiàn)出對(duì)突變體和野生型FGFR3水平的實(shí)質(zhì)性抑制，由于其不針對(duì)突變位點(diǎn)，因此表現(xiàn)出很少的特異性至沒(méi)有特異性。還使用剝裸(gymnosis)(即，無(wú)輔助的攝入)作為向A549細(xì)胞中引入寡核苷酸的方式檢測(cè)了這21種寡核苷酸的功效和選擇性。具體地，通過(guò)剝裸遞送所述寡核苷酸48小時(shí)，之后徹底清洗A549細(xì)胞，以消除仍然粘附在細(xì)胞表面上或以除此之外的方式殘留在培養(yǎng)容器中的任意寡核苷酸。然后，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)染遞送突變體或野生型構(gòu)建體，24小時(shí)后，收集A549細(xì)胞，并通過(guò)qPCR測(cè)定。如圖1A和1B中所示的轉(zhuǎn)染數(shù)據(jù)，對(duì)于大部分所檢測(cè)的寡核苷酸觀察到具有顯著劑量反應(yīng)性的強(qiáng)有力的敲低，如圖2A和2B中所示，并且可以建立清楚的排序。事實(shí)上，在轉(zhuǎn)染和剝裸研究中在寡核苷酸的排序之間具有顯著的對(duì)應(yīng)性。然而，相對(duì)于轉(zhuǎn)染研究，在剝裸研究中，突變體與野生型報(bào)道子之間的區(qū)分性較不明顯。在本文所述的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)和剝裸實(shí)驗(yàn)中收集的數(shù)據(jù)之間的排序方面沒(méi)有觀察到顯著差異。轉(zhuǎn)染和剝裸數(shù)據(jù)顯示所述21種寡核苷酸中的每一種都在一種或多種濃度表現(xiàn)出功效和選擇性。從用于確定所評(píng)價(jià)的這21種寡核苷酸的特異性和/或效力的集合數(shù)據(jù)中，鑒定出十種寡核苷酸用于另外的表征。為了證實(shí)這十種所選的寡核苷酸敲低FGFR3表達(dá)的能力，在HeLa細(xì)胞中進(jìn)行與上述在人A549細(xì)胞中相似的共轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。具體地，對(duì)于這十種寡核苷酸中的每一種，用所述寡核苷酸與野生型(WT)或突變體(MUT)報(bào)道子構(gòu)建體共轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞。所評(píng)估的初始篩選濃度為0.2nM，1.0nM和5.0nM。轉(zhuǎn)染后24小時(shí)收集細(xì)胞，并且用報(bào)道子特異性qPCR測(cè)定確定轉(zhuǎn)錄物的水平。結(jié)果針對(duì)內(nèi)源性GAPDH水平標(biāo)準(zhǔn)化，并且表示為模擬處理的樣品的百分?jǐn)?shù)。如圖3所示，所有這十種寡核苷酸在所評(píng)價(jià)的濃度都表現(xiàn)出劑量依賴(lài)性的敲低作用。所述寡核苷酸的作用與在A549細(xì)胞中觀察到的相似，盡管明顯有略微差別。這些差別包括觀察到在A549細(xì)胞中顯著更有效地針對(duì)報(bào)道子靶標(biāo)的陽(yáng)性對(duì)照(指定為PCON)在HeLa細(xì)胞中具有與突變體-特異性寡核苷酸的功效相似的功效。第二、較小的差別是觀察到之前表現(xiàn)最好的寡核苷酸(指定為SH02，并且對(duì)應(yīng)于SEQIDNO：21)在HeLa細(xì)胞中并沒(méi)有比其余的選擇表現(xiàn)出可見(jiàn)的更好。然而，這些次要的觀察沒(méi)有改變本研究的綜合結(jié)論，并且證實(shí)所檢測(cè)的寡核苷酸是有效的，并且在HeLa細(xì)胞和在A549細(xì)胞中都表現(xiàn)出突變體與野生型報(bào)道子構(gòu)建體之間的選擇性。實(shí)施例2-十種寡核苷酸的IC50檢測(cè)按實(shí)施例1所述的研究結(jié)果選出的十種寡核苷酸進(jìn)行進(jìn)一步的評(píng)估，通過(guò)評(píng)估每種寡核苷酸的IC50值來(lái)評(píng)估它們的抑制強(qiáng)度。具體地，將轉(zhuǎn)染的寡核苷酸進(jìn)一步分成具有低于5nM的IC50值的那些和具有大于5nM的IC50值的那些。關(guān)于每種寡核苷酸的第二表征標(biāo)準(zhǔn)是其是否相對(duì)于野生型報(bào)道子在關(guān)于突變體報(bào)道子的IC50值之間表現(xiàn)出大于或小于三倍的差異。為了確定這十種寡核苷酸每一種的IC50值，將每種寡核苷酸與野生型(WT)或突變體(MUT)報(bào)道子構(gòu)建體共轉(zhuǎn)染到A549細(xì)胞中。所述寡核苷酸以2.5nM，1nM，0.4nM，0.16nM，0.064nM和0.0256nM的濃度轉(zhuǎn)染。24小時(shí)后收集細(xì)胞，并且提取RNA用于qPCR。研究重復(fù)三次，并且將值用非線(xiàn)性回歸針對(duì)S型反應(yīng)曲線(xiàn)繪制在GraphpadPrism中。從該回歸圖中，確定報(bào)道子測(cè)定中IC50值的估測(cè)?；貧w曲線(xiàn)顯示在圖4中，并且相對(duì)應(yīng)的IC50值在下表2中列出。表2如表2所示，五種所選的寡核苷酸針對(duì)(完全互補(bǔ)性)突變體G380RFGFR3靶標(biāo)的IC50值低于5nM，并且甚至在0.5nM以下。表現(xiàn)出好于0.2nM的IC50的所選的寡核苷酸是指定為SH02(SEQIDNO：21)的核苷酸，其表現(xiàn)出0.068nM的IC50值。指定為PCON在不同于突變位點(diǎn)的位點(diǎn)靶向于兩者報(bào)道子轉(zhuǎn)錄物的陽(yáng)性對(duì)照對(duì)于突變體和野生型報(bào)道子構(gòu)建體表現(xiàn)出約0.04nM的IC50。關(guān)于與野生型FGFR3報(bào)道子相比，所選的寡核苷酸針對(duì)突變體G380RFGFR3報(bào)道子的選擇性，沒(méi)有寡核苷酸表現(xiàn)出比針對(duì)野生型報(bào)道子好約2.5倍的針對(duì)突變體的選擇性。實(shí)施例3-十種寡核苷酸的靶標(biāo)特異性進(jìn)一步評(píng)估實(shí)施例2所述的十種寡核苷酸，評(píng)估其以25nM的濃度非特異性敲低非靶向轉(zhuǎn)錄物的能力。通過(guò)轉(zhuǎn)染將這十種寡核苷酸中每一種分別遞送到相同的A549細(xì)胞中。收集細(xì)胞，并且通過(guò)qPCR檢測(cè)對(duì)內(nèi)源性SCA3mRNA(圖5A)或PTENmRNA(圖5B)的敲低。所示的結(jié)果針對(duì)內(nèi)源性GAPDH水平標(biāo)準(zhǔn)化，并且表示為模擬處理的樣品的百分?jǐn)?shù)。如圖5A和5B所示，本研究的結(jié)果表明所述寡核苷酸中的一些對(duì)SCA3和PTEN轉(zhuǎn)錄物二者的略微敲低作用，盡管顯著低于上述實(shí)施例1所述的對(duì)FGFR3野生型或突變體轉(zhuǎn)錄物的敲低作用。因此，這十種寡核苷酸中的每一種對(duì)非特異性靶標(biāo)的作用顯著低于其對(duì)特異性FGFR3靶標(biāo)的作用。實(shí)施例4-與野生型或突變體FGFR3退火的十種寡核苷酸的解鏈溫度作為在上述實(shí)施例2和3中所述的寡核苷酸候選物的表征的一部分，評(píng)價(jià)每種寡核苷酸與互補(bǔ)突變體靶RNA(指定為cMUT)的解鏈溫度(Tm)。還針對(duì)表示野生型等位基因的RNA(指定為cWT)檢測(cè)這十種寡核苷酸中的每一種，所述RNA在G380R突變位點(diǎn)包含針對(duì)每種寡核苷酸的單一互補(bǔ)性錯(cuò)配。關(guān)于這十種寡核苷酸中的每一種的Tm值確定兩次，并且Tm變化(ΔTm)表示每種寡核苷酸的解鏈和退火溫度的平均值。表3顯示了表示五種所選的寡核苷酸候選物的Tm數(shù)據(jù)，其中ATm定義為cMUT(完全互補(bǔ)的)與cWT(在突變位點(diǎn)的一個(gè)互補(bǔ)性錯(cuò)配)值之間的差別。表3當(dāng)這十種寡核苷酸靶向FGFR3的WT等位基因時(shí)，單一錯(cuò)配是G-T錯(cuò)配。這一具體的錯(cuò)配在結(jié)合能方面沒(méi)有特別的差異，這是由ATm清楚可見(jiàn)的事實(shí)。ATm在高如4.8℃至低如負(fù)值-1.1℃的范圍內(nèi)；后者表示所述寡核苷酸中的兩種與單一錯(cuò)配的RNA退火比完全互補(bǔ)的RNA更好。這些觀察與從上述實(shí)施例2中所述的這十種寡核苷酸在野生型報(bào)道子和突變體報(bào)道子之間的IC50值所觀察到相對(duì)低程度的差別相一致。實(shí)施例5-十種寡核苷酸中每一種的血漿穩(wěn)定性作為在實(shí)施例2、3和4中所述的表征這十種寡核苷酸的一部分，評(píng)估了這十種寡核苷酸中每一種的核酸酶敏感性。具體地，將這十種寡核苷酸分別在37℃在小鼠血漿中溫育96小時(shí)，每24小時(shí)取出樣品并且分析。通過(guò)凝膠電泳評(píng)價(jià)所述樣品是否失去全長(zhǎng)寡核苷酸和是否出現(xiàn)降解產(chǎn)物。將樣品與不穩(wěn)定的對(duì)照寡核苷酸(指定為Con)進(jìn)行比較。發(fā)現(xiàn)所有寡核苷酸的血漿穩(wěn)定性都在預(yù)測(cè)的范圍內(nèi)。如圖6中所示，發(fā)現(xiàn)所有十種寡核苷酸具有大于96小時(shí)的整體半衰期。實(shí)施例6-十種寡核苷酸中每一種的體內(nèi)耐受性研究在標(biāo)準(zhǔn)的16天小鼠研究中檢測(cè)這十種寡核苷酸中的每一種的體內(nèi)耐受性。在雌性NMRI小鼠中檢測(cè)這十種寡核苷酸中的每一種的體內(nèi)耐受性，主要是評(píng)估對(duì)肝臟的不需要的作用。受試動(dòng)物每3天以15mg/kg靜脈內(nèi)給藥，直至第14天，然后在第16天處死。取樣血清，并且分析丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)和天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)的濃度。如圖7所示，寡核苷酸SH13(SEQIDNO：22)表現(xiàn)出中等的，但是可接受的肝臟酶水平的升高，并且指定為SH02(SEQIDNO：21)，SH19(SEQIDNO：23)，SH20(SEQIDNO：24)和SH21(SEQIDNO：25)的寡核苷酸表現(xiàn)出肝臟酶水平的可忽略的升高。基于實(shí)施例1-6中鑒定的特征，五種寡核苷酸(即，指定為SH02，SH13，SH19，SH20和SH21的寡核苷酸)顯示出具有用于施用給受試者減少(突變體)G380RFGFR3表達(dá)的優(yōu)越特性。如上文所述，與未選擇的寡核苷酸群體相比較，所選的寡核苷酸選擇為是優(yōu)越的。這五種寡核苷酸的序列在下表4中列出，其中β-D-氧基LNA以右側(cè)帶有上標(biāo)“o”的粗體大寫(xiě)字母表示，小寫(xiě)字母表示脫氧核糖，并且‘s’和‘m’分別對(duì)應(yīng)于硫代磷酸酯和C5-甲基胞嘧啶。表4實(shí)施例7-在小鼠軟骨發(fā)育不全模型中證明寡核苷酸的治療益處如下述確定指定為SH02，SH13，SH19，SH20，和SH21(分別對(duì)應(yīng)于SEQIDNOS：21，22，23，24和25)的寡核苷酸減輕與G380R-突變的FGFR3的表達(dá)相關(guān)的疾病病理性。動(dòng)物模型選自一些已知的軟骨發(fā)育不全動(dòng)物模型。優(yōu)先的小鼠模型與人突變FGFR3-G380R相關(guān)。FGFR3-G380R是在大約97％的人軟骨發(fā)育不全患者中發(fā)現(xiàn)的天然存在的突變，并且在小鼠中導(dǎo)致模擬人軟骨發(fā)育不全的表型。實(shí)際應(yīng)用功效的主要終點(diǎn)可以包括，例如，生長(zhǎng)速率，長(zhǎng)骨比例的正?；枉可L(zhǎng)板的過(guò)度增生區(qū)域的組織病理學(xué)評(píng)估。疾病表型和通過(guò)每種寡核苷酸對(duì)其的逆轉(zhuǎn)可以通過(guò)本領(lǐng)域已知的多種方法來(lái)驗(yàn)證，例如，通過(guò)骺生長(zhǎng)板的組織學(xué)檢查進(jìn)行。研究的參數(shù)可以包括，在寡核苷酸治療的G380R小鼠中統(tǒng)計(jì)學(xué)長(zhǎng)于未用寡核苷酸治療的G380R小鼠中的股骨長(zhǎng)度增加，和/或在寡核苷酸治療的G380R小鼠中統(tǒng)計(jì)學(xué)大于未用寡核苷酸治療的G380R小鼠中的過(guò)度增生區(qū)域的厚度的增加，以及其他參數(shù)。本實(shí)施例所述的研究可以提供下述的進(jìn)一步表征：(1)針對(duì)突變體G380RFGFR3的反義-鎖定核酸寡核苷酸作為與G380FGRF3突變相關(guān)的疾病的有效治療，(2)寡核苷酸用于特別是軟骨發(fā)育不全疾病模型，并且用作藥物動(dòng)力學(xué)和毒性學(xué)研究的候選物，和(3)本文所述的寡核苷酸的臨床施用的劑量給藥和給藥方案。