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核酸提取方法和核酸提取筒與流程

文檔序號(hào):12796166閱讀:378來源:國(guó)知局
核酸提取方法和核酸提取筒與流程
核酸提取方法和核酸提取筒背景一般而言,本公開內(nèi)容涉及核酸提取方法和核酸提取筒(cartridge)。更具體而言,本公開內(nèi)容涉及用于從樣品中提取核酸的方法,所述方法是通過對(duì)樣品實(shí)施超聲處理、從樣品中吸附外源物質(zhì)等的處理,在同一通道中對(duì)核酸進(jìn)行電泳處理;還涉及適用于所述方法的核酸提取筒。核酸擴(kuò)增反應(yīng)方法例如PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))方法和LAMP(環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增)方法適用于生物技術(shù)的多個(gè)領(lǐng)域。例如,在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域進(jìn)行的基于DNA和/或RNA堿基序列的診斷,而DNA評(píng)估(如鑒別遺傳改造的植物)則在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域得以實(shí)際應(yīng)用。在核酸擴(kuò)增反應(yīng)中,為了能夠檢測(cè)核酸,以高效率擴(kuò)增樣品中極小量的核酸。如果包含在樣品中的核酸的量非常小,則在一些情況下,所述量可能小于檢測(cè)下限。此外,如果包含在樣品中的核酸濃度非常低,則在一些情況下不能檢測(cè)到核酸,因?yàn)榫哂锌蓪?dǎo)入到反應(yīng)區(qū)域中的量的樣品中未含有足以擴(kuò)增的核酸。可以通過使用下文描述的有效方法,解決在此情況下產(chǎn)生的問題。核酸在導(dǎo)入反應(yīng)區(qū)域前,是經(jīng)過精制、濃縮和提取的。如普遍已知的,過去由于提取核酸的方法包括使用酚、氯仿或乙醇的方法,使用柱或過濾器的方法,以及使用磁性二氧化硅珠的方法。柱子和過濾器是用于吸附核酸的。例如,日本專利公開號(hào)2005-080555公開了用于濃縮核酸的方法,通過使用能夠吸附核酸的多孔載體。此外,用于在毛細(xì)管電泳現(xiàn)象中濃縮核酸的方法公開在“On-linesamplepreconcentrationincapillaryelectrophoresis:Fundamentalsandapplications.”JournalofChromatographyA.第1184期(2008)第504-541頁中。概述在過去的方法中使用酚、氯仿或乙醇,但是必須利用有害的有機(jī)溶劑,花費(fèi)大量精力進(jìn)行離心分離處理等。此外,在使用用于吸附核酸的柱或過濾器的方法中,柱或過濾器對(duì)阻塞狀態(tài)是敏感的,導(dǎo)致了操作不便,該操作不便會(huì)產(chǎn)生問題。理想的是提供這樣的核酸提取方法,所述方法允許進(jìn)行簡(jiǎn)單的操作,并且能夠在短時(shí)間內(nèi)從樣品中高效提取核酸。為了解決上述問題,本公開內(nèi)容提供了用于在同一區(qū)室(cell)中執(zhí)行下列步驟的核酸提取方法,所述步驟包括:對(duì)含有核酸的樣品實(shí)施超聲波處理;通過使用吸附載體吸附所述樣品中包含的物質(zhì);和通過攔截(damming)在電泳現(xiàn)象中移動(dòng)的所述核酸來濃縮所述核酸。如上所述,核酸提取方法能夠在同一區(qū)室中執(zhí)行超聲波處理、吸附處理和電泳處理。超聲波核酸提取方法允許消除針對(duì)每一步處理的將樣品從區(qū)室內(nèi)轉(zhuǎn)移(translocate)到另一個(gè)區(qū)室的操作。此外,理想的是使用陽離子交換樹脂或沸石作為吸附載體。此外,理想的是使用強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂作為陽離子交換樹脂。此外,理想的是在樣品摻混珠狀顆粒之后進(jìn)行超聲波處理。此外,理想的是所述物質(zhì)均為除核酸以外的各種外源物質(zhì)(foreignsubstance)。此外,理想的是對(duì)樣品實(shí)施超聲波處理的步驟是在使用緩沖溶液稀釋樣品后,對(duì)樣品實(shí)施超聲波處理的步驟,和所述緩沖溶液的pH具有在4.0至8.0范圍內(nèi)的值。此外,理想的是緩沖溶液含有增稠劑。此外,理想的是增稠劑含有聚乙二醇和/或羥乙基纖維素。應(yīng)注意的是,上述區(qū)室主要表示后文描述的用于提取核酸的筒。此外,上述外源物質(zhì)主要表示在分析樣品所含的核酸時(shí)檢測(cè)到的具體物質(zhì)。具體物質(zhì)包括各種非必需蛋白質(zhì)、肽、糖、鹽和金屬離子等。此外,為了解決上述問題,本公開內(nèi)容還提供了核酸提取筒,包括:通道,所述通道允許含有核酸的樣品導(dǎo)入到所述通道中;分別位于所述通道每一端的電極;攔截部分,其構(gòu)造將所述通道分為負(fù)極側(cè)區(qū)域和正極側(cè)區(qū)域,并攔截所述核酸;設(shè)置在所述負(fù)極側(cè)區(qū)域中的吸附載體,其吸附包含在所述樣品中的物質(zhì);和超聲波產(chǎn)生部分,其構(gòu)造為用于對(duì)所述樣品進(jìn)行超聲波處理。此外,上述超聲波產(chǎn)生部分是作為與所述電極之一相同的構(gòu)件(member)而構(gòu)成的。此外,理想的是攔截部分是透析膜或聚合物凝膠(polymergel)。此外,理想的是超聲波產(chǎn)生部分是超聲波探針(ultrasonicprobe)或超聲波喇叭(ultrasonichorn)。如上所述,本公開內(nèi)容提供了這樣的核酸提取方法,所述方法允許簡(jiǎn)單地進(jìn)行操作,并且能夠在短時(shí)間內(nèi)從樣品中高效地提取核酸。附圖簡(jiǎn)介圖1是解釋性的模式圖,顯示了根據(jù)本公開內(nèi)容的第一個(gè)實(shí)施方案的核酸提取筒的構(gòu)造。圖2A至2D是解釋性的模式圖,涉及對(duì)根據(jù)本公開內(nèi)容的第一個(gè)實(shí)施方案的核酸提取方法步驟的描述。圖3是解釋性的模式圖,顯示了根據(jù)本公開內(nèi)容的第一個(gè)實(shí)施方案的修改方式的核酸提取筒的構(gòu)造。圖4顯示的圖分別表示沸石對(duì)樣品的吸附率。圖5顯示的圖分別表示強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂對(duì)樣品的吸附率。和圖6顯示的圖表示樣品的LAMP反應(yīng)的結(jié)果。具體實(shí)施方案的詳述本公開內(nèi)容的優(yōu)選實(shí)施方案解釋如下。應(yīng)注意,下述待描述的作為本公開內(nèi)容的實(shí)施方案的實(shí)施方案只是本公開內(nèi)容的典型實(shí)施方式,不視為縮小本公開內(nèi)容范圍的限制。實(shí)施方案按下列順序描述。1、根據(jù)本公開內(nèi)容的第一個(gè)實(shí)施方案的核酸提取筒,針對(duì)所述筒的核酸提取方法,和用于生產(chǎn)所述核酸提取筒的方法。(1)核酸提取筒(2)核酸提取方法(3)生產(chǎn)核酸提取筒的方法2、根據(jù)本公開內(nèi)容的第一個(gè)實(shí)施方案的修改方式的核酸提取筒,針對(duì)所述筒的核酸提取方法,和用于生產(chǎn)所述核酸提取筒的方法1、根據(jù)本公開內(nèi)容的第一個(gè)實(shí)施方案的核酸提取筒,針對(duì)所述筒的核酸提取方法,和用于生產(chǎn)所述核酸提取筒的方法(1)核酸提取筒圖1是解釋性的模式圖,顯示了根據(jù)本公開內(nèi)容的第一個(gè)實(shí)施方案的核酸提取筒1的構(gòu)造。由圖1的參考編號(hào)1所表示的核酸提取筒具有形成于基體材料中的通道11、正極12和負(fù)極13。正極12和負(fù)極13分別位于通道11兩端的一側(cè)??梢詫悠穼?dǎo)入到通道11的內(nèi)部。在通道11的正極12和通道11的負(fù)極13之間提供了透析膜14。透析膜14位于正極12和負(fù)極13之間,將通道11的內(nèi)部分為正極側(cè)區(qū)域112和負(fù)極側(cè)區(qū)域113。此外。正極12和負(fù)極13連接在構(gòu)造中的電源V上,允許向?qū)胪ǖ?1內(nèi)部的樣品上施加電壓或去除電壓。在上部,吸附載體容納在通道11的負(fù)極側(cè)區(qū)域113內(nèi)。此外,超聲波喇叭(horn)15也位于負(fù)極側(cè)區(qū)域113內(nèi)。基體材料的特征可以與玻璃或各種類型的塑料相同,如聚丙烯、聚碳酸酯、環(huán)烯聚合物和聚二甲基硅氧烷。如上所述,透析膜14將通道11內(nèi)部分為正極側(cè)區(qū)域112和負(fù)極側(cè)區(qū)域113。根據(jù)本公開內(nèi)容的核酸提取方法作為利用核酸提取筒1的方法,在電泳移動(dòng)中,核酸從負(fù)極側(cè)13向正極側(cè)12遷移,并被透析膜14攔截。出于該原因,將樣品導(dǎo)入到通道11的負(fù)極側(cè)區(qū)域113中。沒有具體描述通道11的形狀。但是負(fù)極側(cè)區(qū)域113的形狀一般可類似于圖1所示的形狀。如圖所示,負(fù)極側(cè)區(qū)域113的形狀按從負(fù)極13至透析膜14的方向逐漸壓低。在負(fù)極側(cè)區(qū)域113中容納了吸附載體。對(duì)吸附載體沒有特殊描述。換言之,吸附載體可以是任何載體,只要所述載體能夠吸附樣品中除核酸以外的物質(zhì)。吸附載體的典型的恰當(dāng)例子是陽離子交換樹脂或沸石。根據(jù)本公開內(nèi)容提供的核酸提取方法,通過在吸附處理中,將此類吸附載體容納在上述負(fù)極側(cè)區(qū)域113中,可以在樣品的電泳處理前,排除包含在負(fù)極側(cè)區(qū)域113中的樣品中的預(yù)定物質(zhì)。預(yù)定物質(zhì)主要是樣品中含有的除核酸以外的物質(zhì)。此外,理想的是在負(fù)極側(cè)區(qū)域113中容納珠狀顆粒(beadparticle)。根據(jù)本公開內(nèi)容提供的核酸提取方法,通過在負(fù)極側(cè)區(qū)域113中容納珠狀顆粒,可以如后文所述,以更高的精確度進(jìn)行樣品的超聲波處理。正極12和負(fù)極13分別由恰當(dāng)?shù)暮?Au)或鉑的材料制成,所述金或鉑是在電鍍工藝、濺射工藝或蒸發(fā)工藝中添加至其中的。作為備選,正極12和負(fù)極13分別由防腐蝕的材料制成,例如石墨、鈦或不銹鋼。透析膜14是典型的根據(jù)本公開內(nèi)容的攔截部分。對(duì)攔截部分沒有特殊的描述。換言之,攔截部分可以是任何構(gòu)件,只要所述構(gòu)件能夠在電泳處理中攔截包含在樣品中的核酸。此外,攔截部分不必須是透析膜14。相反,攔截部分還可以是多孔膜,例如反滲透膜、半透膜、離子交換膜等。作為備選,攔截部分還可以是由纖維素、聚丙烯腈、陶瓷、沸石、聚砜、聚亞酰胺、鈀等。此外,還可以使用聚合物凝膠替代透析膜14。聚合物凝膠由聚丙烯酰胺恰當(dāng)?shù)闹瞥伞@硐氲氖蔷酆衔锬z由含有陰離子官能團(tuán)的聚丙烯酰胺制成。甚至更理想的是聚合物凝膠由含有酸性解離常數(shù)(pKa)在1至5的范圍內(nèi)的陰離子官能團(tuán)的聚丙烯酰胺制成。應(yīng)注意的是,在該實(shí)施方案中,聚丙烯酰胺表示丙烯酰胺或甲基丙烯酰胺(metaacrylicamide)。對(duì)陰離子官能團(tuán)未作特殊描述。陰離子官能團(tuán)的典型例子是羧酸例如乙酸、丙酸或丁酸;多元酸例如草酸或鄰苯二甲酸;羥酸例如檸檬酸、二醇酸(glycolacid)或乳酸;不飽和多元酸或不飽和酸例如丙烯酸或甲基丙烯酸;氨基酸例如甘氨酸;磷酸的偏酯;硫酸的偏酯;膦酸酯和磺酸。具體而言,典型的羧酸的例子是脂肪族單羧酸、脂肪族或芳香族二元羧酸、不飽和羧酸、取代的苯甲酸類和多元羧酸(poly-carboxylicacid),及其衍生物。典型的脂肪族單羧酸的例子是pKa為3.55的甲酸、pKa為4.56的乙酸、pKa為4.67的丙酸、pKa為4.63的丁酸、pKa為4.68的戊酸、pKa為4.63的己酸、pKa為4.66的庚酸、pKa為4.64的棕櫚酸和pKa為4.69的硬脂酸。典型的脂肪族或芳香族二元羧酸的例子是具有pKa1為4.00和pKa2為5.24的琥珀酸、具有pKa1為4.13和pKa2為5.03的戊二酸、具有pKa1為4.26和pKa2為5.03的己二酸、具有pKa1為4.31和pKa2為5.08的庚二酸、具有pKa1為4.35和pKa2為5.10的辛二酸、具有pKa1為4.39和pKa2為5.12的壬二酸、具有pKa1為3.24和pKa2為4.71的蘋果酸,和具有pKa1為3.54和pKa2為4.46的對(duì)苯二甲酸。典型的不飽和羧酸的例子是具有pKa為4.69的巴豆酸、具有pKa為4.26的丙烯酸和具有pKa為4.66的甲基丙烯酸。包括在取代的苯甲酸類中的酸是具有pKa為4.09的茴香酸、具有pKa1為3.12和pKa2為4.74的間氨基苯甲酸、具有pKa1為3.82和pKa2為3.99的間氯和對(duì)氯苯甲酸、和具有pKa1為4.08和pKa2為9.96的羥基苯甲酸。多元羧酸的典型例子是具有pKa1為2.87、pKa2為4.35和pKa3為5.69的檸檬酸。作為含有陰離子官能團(tuán)的丙烯酰胺單體,丙烯酰胺烷磺酸(acrylicamidealkanesulfoneacid)是特別理想的?;撬崾蔷哂芯酆系牟伙柡妥杂苫幕撬帷>哂芯酆系牟伙柡妥杂苫幕撬岬牡湫屠邮蔷哂衟Ka為-2.8的苯乙烯磺酸、具有pKa為3.74的間苯胺磺酸、具有pKa為3.23的對(duì)苯胺磺酸、2-(甲基)丙烯酰胺-2-烷基(碳數(shù)為1至4)丙烷磺酸,或更具體而言,具有pKa為-1.7的2-丙烯酰胺-2-甲基丙烷磺酸。聚丙烯酰胺凝膠中的陰離子官能團(tuán)的濃度理想的是具有0至30%的范圍內(nèi)的值。在此情況下,濃度定義為以%表示的相對(duì)質(zhì)量(relativemass)。超聲波喇叭15是本公開內(nèi)容提供的對(duì)樣品進(jìn)行超聲波處理的部分發(fā)揮作用的超聲波產(chǎn)生部分的典型例子。對(duì)作為超聲波產(chǎn)生部分發(fā)揮作用的超聲波喇叭15的形狀(和其他屬性)沒有進(jìn)行特殊的描述。換言之,超聲波產(chǎn)生部分可具有任何屬性(包括形狀),只要所述超聲波產(chǎn)生部分能夠根據(jù)本公開內(nèi)容提供的核酸提取方法對(duì)樣品進(jìn)行超聲波處理。例如,作為超聲波產(chǎn)生部分,還可以使用超聲波探頭等取代超聲波喇叭15。在大部分下文給出的描述中,在本公開內(nèi)容的第一個(gè)實(shí)施方案和第一個(gè)實(shí)施方案的修改方式的情況下,都是假設(shè)以超聲波喇叭15作為根據(jù)本公開內(nèi)容的超聲波產(chǎn)生部分發(fā)揮作用。(2)核酸提取方法之后,參考圖2A至2D解釋根據(jù)本公開內(nèi)容的核酸提取方法的步驟如下。在解釋根據(jù)本公開內(nèi)容的核酸提取方法之前,首先下列說明解釋了基于下述技術(shù)的核酸提取方法,所述技術(shù)與本公開內(nèi)容提供的技術(shù)相關(guān)?;谙嚓P(guān)技術(shù)的核酸提取方法的典型例子是AGPC(酸性硫氰酸胍-苯酚-氯仿提取)方法。根據(jù)AGPC方法,首先,對(duì)作為摻入堿化劑所獲得的經(jīng)堿化樣品進(jìn)行熱處理。然后,使用酶(例如蛋白酶)溶解蛋白質(zhì)材料。之后,通過應(yīng)用苯酚-氯仿提取方法,去除蛋白質(zhì)材料、糖和親脂性物質(zhì)。但是,該方法在安全性和快速性能的方面需要改進(jìn)。例如,使用的樣品類型和用于多分析物的處理的適應(yīng)性仍需要改善。此外,還提供了這樣的方法,所述方法在二氧化硅等的顆粒表面,將DNA、RNA等核酸物理地或化學(xué)地連接在一起(或吸附在表面上),從而將DNA、RNA等從樣品中物理地或化學(xué)地分離(參考文件例如日本專利公開號(hào)Hei7-51065)。但是,根據(jù)該方法,如果將懸浮在溶液中的磁性二氧化硅顆粒從樣品容器分散到小管中,則理想的是在為了分散顆粒而攪拌顆粒液體溶液的時(shí)期結(jié)束時(shí)完成分散。此外,上述分散溶液的濃度難以均勻,而顆粒的濃度傾向于根據(jù)分散的時(shí)間而變化。因此,為了定量分析,需要改進(jìn)該方法。在上述基礎(chǔ)上,對(duì)于用于分離核酸的顆粒,還提供了根據(jù)使用磁力回收核酸的方法。例如,還提供了這樣的方法,根據(jù)所述方法,在由超順磁性氧化鐵制成的中心核微粒的表面使用形成有目標(biāo)膜的磁性二氧化硅顆粒,所述目標(biāo)膜由核酸等能夠共價(jià)鍵合的聚合性硅氧烷構(gòu)成(參考文件例如日本專利公開號(hào)Hei9-19292)。此外,在基因測(cè)試工業(yè)中,還提供了這樣的方法,根據(jù)所述方法,二氧化硅形成了過濾膜的形狀,并整合到離心柱(spincolumn)中,然后進(jìn)行吸濾處理或離心過濾處理。此外,還有使用聚合物多孔膜替代二氧化硅膜過濾器的方法(參考文件例如日本專利公開號(hào)2003-128691)。但是,這些方法需要大量處理過程、大量清潔液和諸如泵或離心機(jī)一類的裝置。因此,增加了整個(gè)裝置的大小。為了解決上述問題,本公開內(nèi)容詳細(xì)提供了下述核酸提取方法,作為本公開內(nèi)容的發(fā)明人認(rèn)真努力的結(jié)果。所述核酸提取方法允許簡(jiǎn)單地進(jìn)行操作,并且能夠在短時(shí)間內(nèi)高效的從樣品中提取核酸。根據(jù)本公開內(nèi)容提供的核酸提取方法,首先,如圖2A所示,將含有核酸的樣品導(dǎo)入到位于放置在通道11的透析膜14和負(fù)極13之間的負(fù)極側(cè)區(qū)域113中。此時(shí),通道11充滿了用于稀釋將進(jìn)行電泳處理的樣品的緩沖溶液。導(dǎo)入到負(fù)極側(cè)區(qū)域113中的樣品是由生物學(xué)材料制成的液體。由生物學(xué)材料制成的液體的典型例子是拭子(swab)、口腔拭子、唾液、全血、血清、血漿、外周血單核細(xì)胞、腦脊髓液、糞便、尿液、汗、精液、細(xì)菌發(fā)酵液、培養(yǎng)的細(xì)胞和活體切片組織(biopsytissue)。此外,由生物學(xué)材料制成的液體的另一個(gè)典型例子是液體,例如包含在食物、水、土壤基質(zhì)、海水、湖水和河水中的液體。因此,在一些情況下,樣品液體還包含干擾核酸擴(kuò)增反應(yīng)的物質(zhì)。在下列描述中,此類物質(zhì)被稱為核酸分析中不需要的外源物質(zhì)。外源物質(zhì)的典型例子是各種蛋白質(zhì)、糖和金屬離子。之后,如圖2B所示,超聲波喇叭15對(duì)樣品進(jìn)行超聲波處理。如上所述,使用各種類型的由生物學(xué)材料制成的液體作為樣品。因此,對(duì)樣品進(jìn)行超聲波處理可以破碎樣品中結(jié)實(shí)的膜。結(jié)實(shí)的膜的典型例子是細(xì)胞膜,這是糖、脂質(zhì)膜和肽聚糖層??梢愿鶕?jù)包括樣品的類型在內(nèi)的因素恰當(dāng)?shù)脑O(shè)置超聲波處理的屬性。屬性包括頻率和持續(xù)時(shí)間。為了高度精確的破碎真菌、病毒等,例如理想的是設(shè)置超聲波處理的頻率為在10kHz至3MHz范圍內(nèi)的值,設(shè)置超聲波處理的持續(xù)時(shí)間為在5秒至10分鐘的范圍內(nèi)的值。甚至更理想的是設(shè)置超聲波處理的頻率為30kHz或更高的值。此外,為了提高進(jìn)行超聲波處理破碎上述膜的操作,理想的是預(yù)先在負(fù)極側(cè)區(qū)域113中設(shè)置珠狀顆粒。對(duì)珠狀顆粒的屬性沒有特殊描述。在此情況下,所述屬性包括珠狀顆粒的大小和顆粒的類型。換言之,可以根據(jù)使用的樣品恰當(dāng)?shù)倪x擇珠狀顆粒的屬性。但是,可以使用無機(jī)顆?;蛴袡C(jī)顆粒。無機(jī)顆粒可以是氧化鋯顆粒、二氧化硅顆粒、沸石顆粒等,而有機(jī)顆??梢允请x子交換樹脂顆粒等。相比其他顆粒,使用直徑約0.1mm的氧化鋯珠子是理想的。此外,珠狀顆粒可以與將樣品導(dǎo)入到通道11中同時(shí)放入負(fù)極側(cè)區(qū)域113中。作為備選,還可以在將樣品導(dǎo)入到負(fù)極側(cè)區(qū)域113中之前,將珠狀顆粒放入到負(fù)極側(cè)區(qū)域113中。此外,為了進(jìn)一步提高進(jìn)行超聲波處理破碎上述膜的操作,理想的是預(yù)先在樣品中含有中性或陰離子表面活性劑??梢愿鶕?jù)樣品類型恰當(dāng)?shù)倪x擇表面活性劑。表面活性劑的典型例子是SDS(十二烷基硫酸鈉)、Triton-X100、Tween20和Brij35。此外,理想的是使用在4.0至8.0范圍內(nèi)的pH值的區(qū)域內(nèi)具有緩沖能力的緩沖溶液作為稀釋樣品的緩沖溶液。具體而言,理想的是使用甘氨酸鹽酸緩沖溶液、檸檬酸緩沖溶液、醋酸緩沖溶液、檸檬酸/磷酸緩沖溶液、磷酸緩沖溶液、tris-鹽酸緩沖溶液、具有pKa為6.2的MES、具有pKa為6.5的Bis-Tris、具有pKa為6.6的ADA、具有pKa為6.8的PIPES、具有pKa為6.9的ACES、具有pKa為6.95的MOPSO、具有pKa為7.15的BES或具有pKa為7.2的MOPS。但是,用于稀釋樣品的緩沖溶液不限于此。此外,在負(fù)極側(cè)區(qū)域113中進(jìn)行超聲波處理。但是,也不是必須在負(fù)極側(cè)區(qū)域113中進(jìn)行超聲波處理。例如,還可以在與負(fù)極側(cè)區(qū)域113相鄰的區(qū)域中進(jìn)行超聲波處理。在此情況下,將完成超聲波處理的樣品通過管子等注射到負(fù)極側(cè)區(qū)域113中。然后,如圖2C所示,吸附載體吸附樣品中包含的物質(zhì)。包含在樣品中的物質(zhì)主要是除上述核酸之外的外源物質(zhì)。因此,外源物質(zhì)被從樣品中去除并吸附于吸附載體上。結(jié)果,包含在樣品中的核酸可以選擇性地進(jìn)行后述的高度精確的電泳移動(dòng)。在此情況下,理想的是通過應(yīng)用疏水性結(jié)合技術(shù)或靜電力技術(shù),吸附外源物質(zhì)。出于該原因,使用特別具有疏水表面或負(fù)電荷表面的吸附載體是較好的。例如,理想的是使用沸石、陽離子交換樹脂等。更理想的是,沸石是高二氧化硅質(zhì)子型沸石,而陽離子交換樹脂是強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂。此外,甚至更理想的是,陽離子交換樹脂是質(zhì)子型強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂。通過使用此類吸附載體,可以降低樣品的pH,并將樣品脫礦物化。理想的是強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂是具有磺酸自由基質(zhì)子型(-SO3H)或磺酸自由基鈉離子型(-SO3Na)作為交換基團(tuán)的樹脂。對(duì)吸附外源物質(zhì)的方法沒有特殊描述。但是,根據(jù)典型的外源物質(zhì)吸附方法,是通過將充滿吸附載體的過濾器插入到負(fù)極側(cè)區(qū)域113中,并將處于液體狀態(tài)的、完成超聲波處理破碎操作的樣品通過濾器,來吸附外源物質(zhì)。此外,根據(jù)備選的方法,在對(duì)上述樣品進(jìn)行超聲波處理之前,預(yù)先將吸附載體放入負(fù)極側(cè)區(qū)域113中,在超聲波處理的同時(shí)吸附外源物質(zhì)。然后,樣品進(jìn)行如圖2D所示的電泳移動(dòng)。帶負(fù)電荷的核酸按朝向正極12的方向,通過通道11進(jìn)行電泳移動(dòng)。同時(shí),透析膜14阻斷了核酸的電泳移動(dòng)并攔截核酸,使得核酸在透析膜14的界面上和界面附近濃縮。根據(jù)通道11的大小,將電泳移動(dòng)的持續(xù)時(shí)間設(shè)置為恰當(dāng)?shù)闹?。例如,將電泳移?dòng)的持續(xù)時(shí)間恰當(dāng)?shù)脑O(shè)置為在10秒至10分鐘范圍內(nèi)的典型值是較好的。應(yīng)注意,透析膜14的界面是在透析膜14和充滿負(fù)極側(cè)區(qū)域113側(cè)空間的緩沖溶液之間的接觸表面。此外,上述緩沖溶液還可以摻雜用于增加緩沖溶液粘度的增稠劑。對(duì)增稠劑沒有特殊的描述。但理想的是,緩沖溶液是能夠通過調(diào)節(jié)緩沖溶液的粘度來控制電泳移動(dòng)速度的溶液。理想的緩沖溶液的典型例子包括聚乙二醇和羥乙基纖維素。作為備選,還可以通過摻混上述典型的例子來制備緩沖溶液。此外,通過調(diào)節(jié)緩沖溶液的粘度,還可以降低核酸的再分散。由于在電泳移動(dòng)過程中產(chǎn)生焦耳熱(Joule’sheat)所引發(fā)的熱對(duì)流,核酸的這一再分散發(fā)生在濃縮部分。此外,在緩沖溶液吸入到負(fù)極側(cè)區(qū)域113的透析膜14附近的過程中,在正極12和負(fù)極13之間短時(shí)間使用反向電壓也是增加核酸回收量的有效技術(shù)。通過在回收核酸的過程中,在正極12和負(fù)極13之間短時(shí)間使用反向電壓,可以將存在于透析膜14的界面上的核酸轉(zhuǎn)移到負(fù)極側(cè)區(qū)域113的透析膜14附近,使得可以通過使用微量移液器吸取和回收核酸。根據(jù)通道11的大小,將在正極12和負(fù)極13之間施用向電壓的持續(xù)時(shí)間設(shè)置為恰當(dāng)?shù)闹怠@?,將在正極12和負(fù)極13之間施用反向電壓的持續(xù)時(shí)間恰當(dāng)?shù)脑O(shè)置為1至10秒是較好的。最后,為了回收濃縮的核酸,使用微量移液器吸取在負(fù)極側(cè)區(qū)域113的透析膜14附近的緩沖溶液。如上所述,根據(jù)本公開內(nèi)容提供的核酸提取方法,在將樣品導(dǎo)入到負(fù)極側(cè)區(qū)域113中之后,進(jìn)行超聲波處理和實(shí)施使用吸附載體從樣品中吸附外源物質(zhì)的處理。然后,進(jìn)行電泳處理濃縮核酸。以該方式,可以進(jìn)行核酸擴(kuò)增反應(yīng)濃縮和提取核酸。應(yīng)注意,可以彼此獨(dú)立的,或者通過組合任何處理(包括超聲波處理、吸附處理和電泳處理)進(jìn)行對(duì)樣品的處理。例如,在超聲波處理和吸附處理同時(shí)進(jìn)行之后,實(shí)施電泳處理。作為備選,在進(jìn)行了超聲波處理后,同時(shí)實(shí)施吸附處理和電泳處理。作為另一種備選,同時(shí)進(jìn)行超聲波處理、吸附處理和電泳處理。此外,用于本公開內(nèi)容提供的核酸提取方法中的吸附載體的功能可以是在執(zhí)行核酸的電泳處理之前,通過沉淀(settling)或過濾來去除外源物質(zhì)。可以選擇多種典型方法之一作為沉淀方法。多種典型方法包括天然沉淀方法和使用離心力的沉淀方法。此外,作為過濾方法,可以應(yīng)用這樣的方法,所述方法是根據(jù)吸附載體的類型等,一般使用預(yù)先確定具有恰當(dāng)形狀的多孔膜的方法。理想的是用于由本公開內(nèi)容提供的核酸提取方法中的樣品能夠提高在超聲波處理中破碎上述膜的操作,并具有在4.0至8.0的范圍內(nèi)的pH,使得可以更順利的進(jìn)行電泳處理。根據(jù)上述由本公開內(nèi)容提供的核酸提取方法,可以在同一區(qū)室中,執(zhí)行對(duì)樣品進(jìn)行的超聲波處理,實(shí)施使用吸附載體從樣品中吸附外源物質(zhì)的處理,和通過按一系列步驟進(jìn)行電泳處理來濃縮核酸。換言之,可以在同一區(qū)室中,執(zhí)行超聲波處理、吸附處理和電泳處理。即,可以消除為了每步處理而將樣品從一個(gè)區(qū)室轉(zhuǎn)移到另一個(gè)區(qū)室所進(jìn)行的操作。因此,可以非常簡(jiǎn)單地進(jìn)行提取核酸的處理。此外,可以在短時(shí)間內(nèi)高效地進(jìn)行從樣品提取核酸的處理。此外,根據(jù)上述由本公開內(nèi)容提供的核酸提取方法,在同一區(qū)室中執(zhí)行所有的處理,因此,不必將樣品從區(qū)室轉(zhuǎn)移到另一個(gè)裝置中。其結(jié)果是,當(dāng)將檢驗(yàn)的感染目標(biāo)作為樣品處理時(shí),可以降低操作員的被檢驗(yàn)?zāi)繕?biāo)感染的風(fēng)險(xiǎn)。此外,當(dāng)使用血液標(biāo)本作為樣品時(shí),可以直接進(jìn)行從將樣品導(dǎo)入到核酸提取筒1的同一區(qū)域至提取核酸的處理。此外,根據(jù)上述由本公開內(nèi)容提供的核酸提取方法,通過進(jìn)行超聲波處理,可以用超聲波破碎結(jié)實(shí)的膜,例如細(xì)胞膜、糖、脂質(zhì)膜和肽聚糖層。因此,可以在不使用胍鹽、強(qiáng)堿等的條件下,進(jìn)行根據(jù)上述由本公開內(nèi)容提供的核酸提取方法的處理。胍鹽是干擾核酸擴(kuò)增反應(yīng)的離液離子(chaotropicion)。此外,在上述由本公開內(nèi)容提供的核酸提取方法,在不使用強(qiáng)堿、酶等的條件下,可以在超聲波處理中破碎革蘭氏陽性細(xì)菌的細(xì)胞膜、囊膜(envelopingmembrane)和肽聚糖層。因此,在通常檢驗(yàn)咳出的痰中結(jié)核病細(xì)菌時(shí),可以排除基于還原劑的分析物處理等。其結(jié)果是,可以簡(jiǎn)單高精確度地從樣品中提取核酸。此外,在不實(shí)施使用特定有機(jī)溶劑的化學(xué)處理等的條件下進(jìn)行超聲波處理。因此,可以以高度的安全性破碎上述膜,并且同時(shí)防止樣品變質(zhì)(deteriorating)。在此基礎(chǔ)上,由于可以在不使用強(qiáng)堿的條件下提取核酸,所以可以提取RNA,同時(shí)避免由堿導(dǎo)致的RNA降解。此外,根據(jù)上述由本公開內(nèi)容提供的核酸提取方法,不需要加熱處理。因此,可以提取RNA,同時(shí)避免由加熱處理導(dǎo)致的RNA降解。在此基礎(chǔ)上,將緩沖溶液的pH設(shè)置為在4.0至8.0的范圍內(nèi)的值,并在酸性條件下對(duì)樣品進(jìn)行超聲波處理。因此,可以抑制RNA酶的作用。此外,根據(jù)上述由本公開內(nèi)容提供的核酸提取方法,可以使用吸附載體去除外源物質(zhì)。因此,在電泳處理中,只高效地濃縮核酸。其結(jié)果是,當(dāng)具有低濃度的核酸時(shí),可以精確的檢測(cè)包含在分析物中的靶核酸。此外,根據(jù)上述由本公開內(nèi)容提供的核酸提取方法,可以在不實(shí)施樣品清潔處理的條件下,進(jìn)行核酸提取處理。因此,可以設(shè)計(jì)核酸提取筒1用于在不提供液體切割泵、離心機(jī)、復(fù)雜的溶液發(fā)送機(jī)構(gòu)等的核酸提取方法。其結(jié)果是,可以簡(jiǎn)化核酸提取筒1的裝置構(gòu)造,并可以減小核酸提取筒1的大小,如圖1所示。在此基礎(chǔ)上,根據(jù)上述由本公開內(nèi)容提供的核酸提取方法,可以在不實(shí)施樣品清潔處理的條件下,進(jìn)行核酸提取處理。因此,可以從小量的樣品中提取核酸。(3)生產(chǎn)核酸提取筒的方法如下生產(chǎn)根據(jù)本公開內(nèi)容的第一個(gè)實(shí)施方案的核酸提取筒1。將透析膜14插入到在形成基體材料中的通道11中,透析膜14將通道11分為正極側(cè)區(qū)域112和負(fù)極側(cè)區(qū)域113。吸附載體容納在負(fù)極側(cè)區(qū)域113中,并且還在負(fù)極側(cè)區(qū)域113中提供超聲波喇叭15。通道11是在基體材料(是玻璃基體材料)的內(nèi)部形成的,一般通過對(duì)基體材料進(jìn)行濕蝕刻處理或干蝕刻處理來進(jìn)行。作為備選,還可以通過對(duì)塑料基體材料進(jìn)行切割處理等在基體材料內(nèi)部形成通道11。應(yīng)注意,可以在核酸提取筒1內(nèi)形成一條、兩條或多條通道。理想的是通過進(jìn)行濺射處理或蒸發(fā)處理制造金(Au)或鉑(Pt)的每個(gè)正極12和負(fù)極13。在這一方面,在根據(jù)相關(guān)技術(shù)的核酸提取筒內(nèi),在某些構(gòu)型中以鉑絲作為電極。在此情況下,每次進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí),必須將鉑絲放入核酸提取筒中。此外,鉑絲的價(jià)格昂貴??紤]到這些因素,核酸提取筒不能做成一次性的。另一方面,如上所述,在根據(jù)本實(shí)施方案的核酸提取筒1的情況下,通過進(jìn)行濺射處理或蒸發(fā)處理用金(Au)制造每個(gè)正極12和負(fù)極13,從而預(yù)先在核酸提取筒1內(nèi)形成正極12和負(fù)極13。因此,可以簡(jiǎn)單地操作根據(jù)本實(shí)施方案的核酸提取筒1。此外,相比根據(jù)相關(guān)技術(shù)的核酸提取筒,根據(jù)本實(shí)施方案的核酸提取筒1還可以制成一次性的。因此,在根據(jù)本實(shí)施方案的核酸提取筒1的情況下,可以防止樣品污染。超聲波喇叭15可以恰當(dāng)?shù)脑O(shè)計(jì)成任何構(gòu)造,只要所述構(gòu)造允許對(duì)樣品進(jìn)行超聲波處理。例如,超聲波喇叭15可以嵌入到基體材料中。2、根據(jù)本公開內(nèi)容的第一個(gè)實(shí)施方案修改方式的核酸提取筒,針對(duì)所述筒的核酸提取方法,和用于生產(chǎn)所述核酸提取筒的方法之后,參考圖3,下列說明解釋了根據(jù)本公開內(nèi)容的第一個(gè)實(shí)施方案的修改方式的核酸提取筒101。圖3是解釋性的模式圖,顯示了根據(jù)本公開內(nèi)容的第一個(gè)實(shí)施方案的修改方式的核酸提取筒101的構(gòu)造。應(yīng)注意,在上述實(shí)施方案的修改方式中,每個(gè)具有與上述實(shí)施方案中使用的對(duì)應(yīng)物具有基本相同的功能構(gòu)造的元件都用與對(duì)應(yīng)物用相同的參考編號(hào)標(biāo)示,為了避免重復(fù)說明,省略了對(duì)此類相同元件的解釋。用于根據(jù)上述實(shí)施方案的修改方式的核酸提取筒101中的通道11、正極12、負(fù)極13和透析膜14分別具有與用于根據(jù)上述實(shí)施方案的核酸提取筒1中的通道11、正極12、負(fù)極13和透析膜14相同的功能構(gòu)造。除了在根據(jù)上述實(shí)施方案的修改方式的核酸提取筒101中由相同構(gòu)件——電極/超聲波喇叭25作為負(fù)極13和超聲波喇叭15以外,核酸提取筒101與根據(jù)實(shí)施方案的核酸提取筒1基本相同。出于該原因,下列說明只解釋了執(zhí)行負(fù)極13和超聲波喇叭15的相同構(gòu)件電極/超聲波喇叭25。由上述實(shí)施方案的修改方式提供的核酸提取方法和用于生產(chǎn)根據(jù)修改方式的核酸提取筒101的方法相對(duì)于由上述實(shí)施方案提供的核酸提取方法和用于生產(chǎn)根據(jù)上述實(shí)施方案的核酸提取筒1的方法而言是相同的,除了在根據(jù)修改方式的核酸提取筒101中,負(fù)極13和超聲波喇叭15由相同的構(gòu)件,即電極/超聲波喇叭25構(gòu)成。出于該原因,為了避免重復(fù)說明,省略了對(duì)此類方法的解釋。由于電極/超聲波喇叭25具有與之前解釋的負(fù)極13相同的功能構(gòu)造,因此,電極/超聲波喇叭25可以通過濺射處理或蒸發(fā)處理,由金(Au)或鉑(Pt)恰當(dāng)?shù)闹瞥?。此外,由于電極/超聲波喇叭25具有與前述的超聲波喇叭15相同的功能構(gòu)造,所以對(duì)電極/超聲波喇叭25的屬性不作特殊描述。在此情況下,屬性包括電極/超聲波喇叭25的形狀。換言之,電極/超聲波喇叭25可以是任何構(gòu)件,只要該構(gòu)件能夠根據(jù)核酸提取方法對(duì)樣品進(jìn)行超聲波處理。甚至通常可以使用通常的超聲波探頭替代超聲波喇叭15。應(yīng)注意,本公開內(nèi)容可以按下列執(zhí)行方式實(shí)現(xiàn):(1)用于在同一區(qū)室中進(jìn)行下列步驟的核酸提取方法,步驟包括:對(duì)含有核酸的樣品實(shí)施超聲波處理;通過使用吸附載體吸附所述樣品中包含的物質(zhì);和通過攔截在電泳現(xiàn)象中移動(dòng)的所述核酸來濃縮所述核酸。(2)根據(jù)執(zhí)行方式(1)的核酸提取方法,其中使用陽離子交換樹脂或沸石作為所述吸附載體。(3)根據(jù)執(zhí)行方式(2)的核酸提取方法,其中使用強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂作為所述陽離子交換樹脂。(4)根據(jù)執(zhí)行方式(1)-(3)中的任一項(xiàng)的核酸提取方法,其中所述超聲波處理是在將珠狀顆粒摻入所述樣品中之后進(jìn)行的。(5)根據(jù)執(zhí)行方式(1)-(4)中的任一項(xiàng)的核酸提取方法,其中所述物質(zhì)均為除所述核酸以外的外源物質(zhì)。(6)根據(jù)執(zhí)行方式(1)-(5)中的任一項(xiàng)的核酸提取方法,其中所述對(duì)樣品實(shí)施超聲波處理的步驟是在使用緩沖溶液稀釋樣品后,對(duì)樣品實(shí)施超聲波處理的步驟,和所述緩沖溶液的pH具有在4.0至8.0范圍內(nèi)的值。(7)根據(jù)執(zhí)行方式(1)-(6)中的任一項(xiàng)的核酸提取方法,其中所述緩沖溶液含有增稠劑。(8)根據(jù)執(zhí)行方式(1)-(7)中的任一項(xiàng)的核酸提取方法,其中所述增稠劑含有聚乙二醇和/或羥乙基纖維素。(9)核酸提取筒,包括:通道,所述通道允許含有核酸的樣品導(dǎo)入到所述通道中;分別位于通道每一端的電極;攔截部分,其構(gòu)造將通道分為負(fù)極側(cè)區(qū)域和正極側(cè)區(qū)域,并攔截核酸;設(shè)置在負(fù)極側(cè)區(qū)域中的吸附載體,其吸附包含在樣品中的物質(zhì);和超聲波產(chǎn)生部分,其構(gòu)造為用于對(duì)樣品進(jìn)行超聲波處理。(10)根據(jù)執(zhí)行方式(9)的核酸提取筒,其中所述超聲波產(chǎn)生部分是作為與所述電極之一相同的構(gòu)件而構(gòu)成的。(11)根據(jù)執(zhí)行方式(9)或(10)的核酸提取筒,其中攔截部分是透析膜或聚合物凝膠。(12)根據(jù)執(zhí)行方式(9)-(11)中的任一項(xiàng)的核酸提取筒,其中超聲波產(chǎn)生部分是超聲波探針或超聲波喇叭。實(shí)施例1、驗(yàn)證樣品的吸附載體的吸附量(1-1、沸石的核酸精制能力)將100mg的質(zhì)子型沸石放入離心過濾柱(Ultrafree-M,0.45μm)中。然后,調(diào)節(jié)含有0.5%SDS并具有pH5的50mMMES緩沖液,并向其中加入BSA至0.5%。此外,向其中添加Cy3修飾的20mer寡聚DNA至5μM。在常溫下充分?jǐn)嚢栌蓳胶显摰鞍踪|(zhì)與核酸獲得的混合液體后,將200μl量的液體滴至沸石裝填的離心柱上,并充分?jǐn)嚢?。然后,?2,000G進(jìn)行2分鐘的離心處理,使混合液體離心沉降。之后,在Nanodrop水平對(duì)沉降的液體進(jìn)行吸光值測(cè)量。根據(jù)沸石處理前的吸光度和沸石處理后的吸光度之間的差異,評(píng)估核酸精制能力。在蛋白質(zhì)A280模式下評(píng)估BSA吸光度,而在微陣列模式下按Cy3吸光度評(píng)估核酸的吸光度。評(píng)估結(jié)果顯示在圖4中。如圖4所示,根據(jù)從沸石處理前的吸光度至沸石處理后的吸光度的BSA濃度的降低,發(fā)現(xiàn)沸石的吸附量約為70%。另一方面,發(fā)現(xiàn)對(duì)核酸的非特異性吸附量約為45%?;谏鲜霈F(xiàn)象,可以證實(shí)通過進(jìn)行沸石處理,即使在混合蛋白質(zhì)與核酸而獲得的混合體系中,也可以提高DNA存在比例(參考圖4)。(1-2、通過強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂的核酸精制能力)將100mg的強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂(NuviaS,由BioRad公司生產(chǎn))放入離心過濾柱(Ultrafree-M,0.45μm)中。然后,調(diào)節(jié)具有pH5的50mMMES緩沖液,并向其中加入BSA至0.5%。此外,向其中添加Cy3修飾的20mer寡聚DNA至5μM。在常溫下充分?jǐn)嚢栌蓳胶显摰鞍踪|(zhì)與核酸獲得的混合液體后,將200μl量的液體滴至強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂裝填的離心柱上,并充分?jǐn)嚢琛H缓?,?2,000G進(jìn)行2分鐘的離心處理,使混合液體離心沉降。之后,在Nanodrop水平對(duì)沉降的液體進(jìn)行吸光值測(cè)量。根據(jù)強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂處理前的吸光度和強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂處理后的吸光度之間的差異,評(píng)估核酸精制能力。在蛋白質(zhì)A280模式下評(píng)估BSA吸光度,而在微陣列模式下按Cy3吸光度評(píng)估核酸的吸光度。評(píng)估結(jié)果顯示在圖5中。如圖5所示,根據(jù)從強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂處理前的吸光度至強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂處理后的吸光度的BSA濃度的降低,發(fā)現(xiàn)強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂的吸附量約為85%。另一方面,發(fā)現(xiàn)對(duì)核酸的非特異性吸附量約為28%?;谏鲜霈F(xiàn)象,可以證實(shí)通過進(jìn)行強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂處理,即使在混合蛋白質(zhì)與核酸而獲得的混合體系中,也可以提高DNA存在比例(參考圖5)。2、LAMP反應(yīng)和RT-LAMP反應(yīng)(第一個(gè)實(shí)施例)<超聲波處理>向EDTA抽血的牛全血中添加雙歧桿菌,使得達(dá)到1,000細(xì)菌/μL的濃度。然后,將總量1mL的雙歧桿菌與血液注射到容量為2mL的聚丙烯管中。之后,浸入超聲波喇叭,在40kHz的振動(dòng)頻率進(jìn)行破碎處理2分鐘。<吸附處理>然后,將100mg的質(zhì)子型沸石放入離心過濾柱(Ultrafree-M,0.45μm)中。然后,在常溫下充分?jǐn)嚢栌蓳胶系鞍踪|(zhì)與核酸獲得的混合液體后,將200μl量的液體滴至沸石裝填的離心柱上,并充分?jǐn)嚢琛?lt;電泳>然后,在核酸提取筒1的電極12和13之間施加20分鐘的100VDC電壓,從而對(duì)樣品進(jìn)行電泳。<LAMP反應(yīng)>之后,將樣品、酶、熒光異硫氰酸鹽、核酸單體、緩沖液、用于靶核酸鏈?zhǔn)綌U(kuò)增的引物對(duì)和用于實(shí)時(shí)測(cè)量的探針彼此組合,制備LAMP-反應(yīng)液。使用由美國(guó)公司BioRad制造的熱循環(huán)儀Chromo4作為能夠進(jìn)行實(shí)時(shí)測(cè)量的循環(huán)儀,測(cè)量LAMP反應(yīng)。使用的探針是QP探針,QP探針是淬滅探針,使得可以觀察到核酸的擴(kuò)增和熒光強(qiáng)度的減少。關(guān)于稱為J-bio21的QP探針的更多信息,參考標(biāo)注日期為2011年7月19日的日本網(wǎng)站http://www.j-bio21.co.jp/tech/qpmethod.htm,具有標(biāo)題“QP方法”。(結(jié)果)圖6是顯示從預(yù)處理過程中提取的結(jié)果的示意圖,作為L(zhǎng)AMP反應(yīng)的評(píng)估結(jié)果。圖中標(biāo)注為“超聲波”的結(jié)果是在樣品完成了只使用超聲波破碎處理的情況下,靶核酸鏈?zhǔn)綌U(kuò)增量的實(shí)時(shí)測(cè)量結(jié)果。此外,圖中標(biāo)注為“超聲波+沸石”的結(jié)果是樣品完成了使用超聲波破碎處理和使用吸附處理的情況下,靶核酸鏈?zhǔn)綌U(kuò)增量的實(shí)時(shí)測(cè)量結(jié)果。在此基礎(chǔ)上,圖中標(biāo)注為“超聲波+沸石+電泳濃縮”的結(jié)果是樣品完成了使用超聲波破碎處理、使用吸附處理和電泳濃縮處理的情況下,靶核酸鏈?zhǔn)綌U(kuò)增量的實(shí)時(shí)測(cè)量結(jié)果。如圖6所示,只完成了超聲波破碎處理的樣品沒有檢測(cè)到核酸的擴(kuò)增反應(yīng)。另一方面,在完成了沸石處理的樣品的情況下,可以驗(yàn)證熒光淬滅。此外,在樣品完成了超聲波破碎處理、沸石處理和電泳濃縮處理的情況下,可以驗(yàn)證淬滅開始的時(shí)間提前這一事實(shí)。換言之,很明顯沸石處理消除了反應(yīng)干擾物質(zhì)和外源性物質(zhì),電泳處理允許濃縮靶核酸。本公開內(nèi)容提供的核酸提取方法允許簡(jiǎn)單地操作,并且能夠在短時(shí)間內(nèi)高效的從樣品中提取核酸。因此,所述核酸提取方法可用于核酸擴(kuò)增反應(yīng)的核酸提取處理,其中所述核酸擴(kuò)增反應(yīng)可以是根據(jù)PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))方法或LAMP(環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增)方法。此外,所述核酸提取方法還可以適用于從只含有少量或非常低濃度的核酸的樣品中檢測(cè)核酸。本公開內(nèi)容包括涉及在2011年7月20日提交的日本優(yōu)先權(quán)專利申請(qǐng)JP2011-158991中公開的主題,其通過引用整合到本文中。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解,只要設(shè)計(jì)要求和其他因素落入所附權(quán)利要求或其等價(jià)形式的范圍內(nèi),就可以根據(jù)其產(chǎn)生各種修飾、組合、亞組合和改變。
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