專利名稱：黃精多糖的用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明是屬于一種提取黃精多糖的用途。
多糖具有多種生理功能，因而多糖藥物近年來發(fā)展迅速。目前，從天然產(chǎn)物或發(fā)酵產(chǎn)物中分離制備多糖，國內外多采用物理、化學方法。一般將原藥粉碎、脫脂后，用水、稀酸或堿提取，提取液濃縮后，先用三氯乙酸或氯仿-正丁醇法去除雜蛋白，然后透析去除小分子雜質，濃縮后凍干或用有機溶劑沉淀即獲得多糖產(chǎn)物。多糖的精制多采用離子交換和凝膠過濾方法。上述多糖制備方法存在以下足1、多糖中含有酚型化合物，因而具有較深的黃色、棕色。這些顏色用活性炭無法脫色，用氧化劑則容易使多糖降解；2、提取過程復雜時間長、成本高，規(guī)?；a(chǎn)難度大；3、精制多糖時用離子交換介質多為纖維和葡聚糖凝膠衍生物，本身就是多糖，當受到微生物和某些化學因素作用時，糖制品容易受到介質降解產(chǎn)物的污染。總之，以上方法，不易獲得高純度的多糖。
本發(fā)明目的是開發(fā)以黃精生藥為原料，提取工藝簡單，又能得到高純度黃精多糖的用途。
本發(fā)明是這樣實現(xiàn)黃精多糖的提取方法是將生黃精生切成0.4～2cm3小塊，加放入相當于生黃精重量4～16倍量水，煮沸提取1～4小時，溫度為100℃，提取液過200目尼龍篩網(wǎng)，然后離心，提取液保留，藥渣另加入相當于生黃精重量8～12倍的水，煮沸提取1～2小時，溫度為100℃，提取液過200目尼龍篩網(wǎng)，然后離心，提取液保留，再將藥渣加入相當于生黃精8～12倍的水，煮沸提取1～2小時，溫度為100℃，提取液過200目尼龍篩網(wǎng)，然后離心，提取液保留；將三次提取液合并，離心處理，將上清液減壓-0.03～-0.06mm汞柱、溫度為45～60℃下濃縮至相對密度1.08～1.25，放置至室溫，加入相當于生黃精重量4～8倍的95％(體積/體積)的乙醇液，攪拌靜置12～48小時，分離取沉淀物，加相當于生黃精重量0.5～2倍的去離子水洗滌，收集水洗液減壓至-0.03～-0.06mm汞柱、溫度為45～60℃下濃縮至相對密度1.10～1.35，加入相當于生黃精重量0.5～2倍量的95％(體積/體積)乙醇沉淀，靜置12～48小時，分取沉淀物；以相當于生黃精重量0.5～2倍量的95％(體積/體積)乙醇洗滌三次，棄去醇洗液，沉淀物在壓力0.5～1.5mpa、溫度為40～70℃下真空干燥，取出、粉碎。黃精多糖降脂作用，黃精多糖能降低血清CHO、LDL、LP(a)濃度，但以LDL、LP(a)濃度降低更明顯；黃精多糖降低主動脈內膜泡沫細胞形成。黃精多糖降糖作用，黃精多糖治療后，能降低血糖及血清糖化血紅蛋白的含量。
本發(fā)明黃精多糖的用途，提取方法簡單，能降脂，能降低血糖及血清糖化血紅蛋白的含量。
黃精多糖的提取方法是將生黃精生切成1cm3小塊，加放入相當于生黃精重量8倍量水，煮沸提取2小時，溫度為100℃，提取液過200目尼龍篩網(wǎng)，然后離心，提取液保留，藥渣另加入相當于生黃精重量12倍的水，煮沸提取1小時，溫度為100℃，提取液過200目尼龍篩網(wǎng)，然后離心，提取液保留，再將藥渣加入相當于生黃精12倍的水，煮沸提取1小時，溫度為100℃，提取液過200目尼龍篩網(wǎng)，然后離心，提取液保留；將三次提取液合并，離心處理，將上清液減壓-0.03mm汞柱、溫度為60℃下濃縮至相對密度1.08，放置至室溫，加入相當于生黃精重量8倍的95％(體積/體積)的乙醇液，攪拌靜置48小時，分離取沉淀物，加相當于生黃精重量0.5倍的去離子水洗滌，收集水洗液減壓至-0.06mm汞柱、溫度為60℃下濃縮至相對密度1.10，加入相當于生黃精重量0.5倍量的95％(體積/體積)乙醇沉淀，靜置24小時，分取沉淀物；以相當于生黃精重量1倍量的95％(體積/體積)乙醇洗滌三次，棄去醇洗液，沉淀物在壓力0.5mpa、溫度為50℃下真空干燥，取出、粉碎。
黃精多糖降脂作用1、材料與方法1.1實驗動物 新西蘭純種兔30只，雌雄各半，5月齡，體重2.4±0.2kg，隨機分5組血脂康組、舒降之組、黃精1、2、3組，每組6只。
1.2每毫升含生藥10g的黃精多糖，急性毒性試驗黃精多糖小鼠灌胃給藥的LD50為75ml·kg-1即相當于含生約750g·kg-1。提示治療劑量無毒副作用。
1.3方法1.3.1高脂血癥動物模型的建立用常規(guī)飼料加5％豬油和0.5％膽固醇喂養(yǎng)動物，10天后禁食10小時測定血脂濃度，待形成高血脂癥實驗模型后分別給于常規(guī)降脂藥物及實驗藥物，并維持高脂飲食一個月至實驗結束。
1.3.2給藥方法 血脂康組300mg·kg-1·d-1血脂康加入40ml飲水溶解，分二次于動物進食后喂服；舒降之組5mg·kg-1·d-1舒降之加入20ml飲用水，于動物進食后一次喂服，黃精1、2、3組分別將0.4ml、0.8ml、1.6ml·kg-1·d-1的黃精多糖溶于40ml飲用水，分二次于動物進食后喂服。所有實驗動物給藥時間均為一個月。
1.3.3血脂測定 實驗前隨機選擇12只動物禁食10小時測定其血脂含量，給藥一個月后禁食10小時檢查全部實驗動物血脂含量。測定方法為鐘點法。
1.3.4主動脈形態(tài)及光鏡觀察，實驗后處死全部動物，取其主動脈進行大體形態(tài)觀察，并取其部分主動脈用10％甲醛固定后石臘包埋切片，HE染色和光鏡觀察。
1.4統(tǒng)計處理實驗數(shù)據(jù)以x±S表示，統(tǒng)計分析為配對t檢驗，多個均數(shù)之間兩兩比較用q檢驗，多個標本比較用x2檢驗。
2、結果2.1高膽固醇飲食的動物血脂變化(表1)表1高脂飲食后動物血脂變化n TG(mmol.L)CHO(mmol/L) HDL(mmol/L) LDL(mmol.L)LP(a)(mg/L)高脂飲食前12 0.63±0.201.25±0.34 0.74±0.190.35±0.17 148.9±13.1高脂飲食后30 0.45±0.1110.07±1.58*0.89±0.119.62±1.55*640.8±143.6**P＜0.01從表1可看出，經(jīng)高膽固醇飲食喂養(yǎng)后，試驗動物CHO、LDL、Lp(a)均顯著升高，形成了明顯的高脂血癥。
2.2各組實驗動物用藥前后的血脂變化(表2)表2各實驗組治療前后血脂變化TG CHO HDL LDL LP(a)n 治療前 治療后 治療前 治療后治療前 治療后 治療前 治療后 治療前 治療后血脂康組6 0.34±0.81 0.29±0.09 11.08±1.95 8.20±5.31 0.92±0.17 1.02±0.29 10.04±2.04 7.05±5.06 712.9±100.6 32.4±12.3*舒降之組6 0.44±0.17 0.34±0.12 10.96±1.79 6.06±3.92△0.88±0.09 0.92±0.24 9.754±1.54 4.98±3.87△700.1±180.6 43.3±14.3*黃精1組6 0.45±0.06 0.50±0.14 9.91±0.99 12.13±6.31 0.83±0.09 0.76±0.18 8.84±1.07 11.14±6.22 573.8±151.1 50.8±9.9*黃精2組6 0.49±0.03 0.44±0.25 0.38±1.16 6.76±3.81 0.91±0.11 1.13±0.36 9.30±1.10 5.52±3.76△600.8±150.1 52.9±15.1*黃精3組6 0.52±0.06 0.66±0.33 11.21±191 5.85±1.99*0.92±0.10 1.22±0.51 11.07±1.89 3.35±1.64*640.5±107.8 45.3±14.0*與治療前比較，*P＜0.01，△P＜0.05。
從表2可看出，黃精多糖3組、舒降之組治療后血清CHO、LDL、LP(a)濃度顯著降低，但前者更為顯著；黃精2組治療后血清LDL、LP(a)濃度明顯降低；黃精1組除LP(a)下降外，其余各指標均無明顯變化。
1.3實驗后各組動物血脂變化比較(表3)表3 實驗后各組動物血脂變化比較nTG CHO HDLLDL LP(a)血脂康組6 0.29±0.09 8.20±5.31 1.02±0.29 7.05±5.06 32.4±12.3舒降之 6 0.34±0.12 6.06±3.92 0.92±0.24 4.98±3.87 43.3±14.3黃精1組 6 0.50±0.14 12.13±6.31 0.76±0.18 11.14±6.22 50.8±9.9黃精2組 6 0.44±0.25 6.76±3.81 1.13±0.36 5.52±3.76 52.9±15.1黃精3組 6 0.66±0.33 5.85±1.99 1.22±0.51 4.35±1.64 45.3±14.0P均＞0.05表3表示實驗末各治療組之間血脂濃度的變化無顯著差異。
2.4主動脈粥樣硬化情況2.4.1大體形態(tài)觀察，血脂康組有1例樣本主動脈內膜可見少量脂質條紋形成，其余實驗動物均未見明顯的脂質條紋或粥樣斑塊形成。
2.4.2光鏡觀察實驗動物主動脈內膜見不同程的泡沫細胞形成。
其結果見表4表4主動脈內膜泡沫細胞形成情況檢驗樣本數(shù)分組合計 發(fā)生率有泡沫細胞形成 無泡沫細胞形成血脂康組 60 6 100％舒降之組 33 6 50％黃精1組 24 6 33.3％黃精2組 24 6 33.3％黃精3組 15 6 16.7％**與其它各組比較，P＜0.05從表4可看出，黃精多糖3組主動脈內膜泡沫細胞形成顯著少于血康組和舒降之組(P＜0.05)。
黃精多糖降糖作用。
1、材料與方法1.1實驗動物 用BALB/C小鼠24只，雌雄各半，2月齡，體重23±2g，隨機分4組美吡達組、糖脈康組、黃精多糖1、2組，每組6只。
1.2藥物來源每毫升含生藥10g的黃精多糖，急性毒性試驗黃精多糖小鼠灌胃給藥的LD50為75ml·kg-1即相當于含生藥750g·kg-1提示治療劑量無毒副作用。
1.3方法1.3.1糖尿病動物模型的建立小鼠腹腔注射鏈脲佐菌素40mg·kg-1·d-1連續(xù)5天。10天后禁食6小時剪尾測定其血糖含量，待形成糖尿病模型后給予對照及實驗藥物。
1.3.2給藥方法美吡達組8mg·kg-1·d-1美吡達加入生理鹽水0.5ml溶解，每日一次灌胃給予；糖脈康組12.5g·kg-1·d-1糖脈康加入1ml生理鹽水溶解，分二次灌胃給予；黃精多糖1、2組，分別將1ml、4ml·kg-1·d-1(相當于生藥10g、40g·kg-1·d-1)的黃精多糖溶入生理鹽水1ml，分二次灌胃給予。所有實驗動物給藥時間為6周。
1.3.3檢測方法實驗前每組隨機選擇3只動物禁食6小時后剪尾測定其血糖含量，注射鏈脲佐菌素后同上法檢測實驗動物血糖含量，實驗末(給藥6周后)禁食6小時取眶動脈血測定血糖及糖化血紅蛋白(HbA1C)含量。檢測方法分別為葡萄糖氧化酶法和柱層析法。
1.4統(tǒng)計處理實驗數(shù)據(jù)以x±S表示，統(tǒng)計分析為配對t檢驗和多個均數(shù)之間兩兩比較q檢驗。
2、結果2.1實驗動物注射鏈脲佐菌素后血糖變化(表1)表1實驗性糖尿病動物血糖變化n FBS(mmol/L) P值注射前125.55±0.610.000注射后248.85±0.99從表1可看出，實驗小鼠注射鏈脲佐菌素后空腹血糖(FBS)顯著升高，形成了典型的實驗糖尿病模型。
2.2各組實驗動物治療前后血糖變化(表2)表2各實驗組用藥后血糖變化FBS(mmol/L) P值n治療前治療后美吡達組68.93±0.696.33±1.040.001糖脈康組68.25±0.457.73±2.340.607黃精1組 69.75±0.726.43±1.220.000黃精2組 68.95±0.657.50±0.590.002從表2可看出，經(jīng)黃精多糖及美吡達治療后，F(xiàn)BS降低具有非常顯著性差異(P＜0.01)，糖脈康治療后FBS下降無顯著差異(P＞0.05)。
3.3實驗后各組動物FBS及HbA1C含量的變化(表3)表3實驗后各組FBS、HbA1c含量變化nFBS(mmol/L)HbA1c(％)美吡達組66.33±1.04*3.12±0.42糖脈康組67.73±2.34*3.35±0.2黃精1組 66.43±1.22*2.45±0.36△黃精2組 67.50±0.59*2.06±0.22△*各組間比較，P＞0.05；△與美吡達組及糖脈康組比較，P＜0.01從表3可看出，各治療組的降糖效果比較無顯著性差異(P＞0.05)；但黃精多糖1、2組降低HbA1C作用與美吡達組及糖脈康組比較有非常顯著性差異(P＜0.01)。
權利要求
1.黃精多糖的用途，其特征在于黃精多糖是制備治療主動脈內膜泡沫細胞形成的藥物以及制備治療血清糖化血紅蛋白(HbA1C)的藥物。
全文摘要
本發(fā)明黃精多糖的用途，其特征在于黃精多糖的用途，其特征在于黃精多糖是制備治療主動脈內膜泡沫細胞形成的藥物以及制備治療血清糖化血紅蛋白(HbA
文檔編號C08B37/00GK1494913SQ03143330
公開日2004年5月12日 申請日期2002年1月6日 優(yōu)先權日2002年1月6日
發(fā)明者吳燊榮, 李友元, 肖灑, 吳 榮 申請人:吳燊榮, 李友元, 肖灑, 吳 榮