黃精提取物及其制備方法與應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及黃精提取物與提取物及其制備方法與應用，所述黃精提取物是由下述方法制備得到的：黃精乙醇熱提后，將提取液減壓回流得到總浸膏；加蒸餾水混懸，依次用等體積石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，減壓回收溶劑，得乙酸乙酯萃取部位；所述黃精提取物具有AGEs抑制作用，可進一步將其應用于抗糖尿病及其并發(fā)癥藥物的制備，具有重要的臨床應用價值。
【專利說明】黃精提取物及其制備方法與應用

【技術領域】
[0001 ] 本發(fā)明涉及一種植物提取物及其制備方法與應用，尤其是黃精提取物與提取物及其制備方法與應用。

【背景技術】
[0002]根據(jù)2013年9月4日《美國醫(yī)學會雜志》報告中國糖尿病病人數(shù)量超過I億，屬于疾病譜中的重大疾病之一。糖尿病血管并發(fā)癥是導致糖尿病人截肢、失明、死亡等病癥的主要原因，而晚期糖基化終產(chǎn)物(Advanced Glycosylat1n End-products, AGEs)是糖尿病血管并發(fā)癥重要病因之一。AGEs是由蛋白質(zhì)與還原糖經(jīng)過一系列反應形成的不可逆聚合物，能誘發(fā)血管內(nèi)皮功能紊亂、腎小球基底膜增厚等病變從而導致糖尿病并發(fā)癥發(fā)生。因此，AGEs抑制劑對預防和治療糖尿病并發(fā)癥具有重要意義，研發(fā)AGEs抑制劑(AGESI)的常用方法是體外篩選體系。
[0003]AGEs的檢測方法分為色譜分析法、酶聯(lián)免疫法、熒光光譜法、免疫組織化學法、放射免疫分析法及放射受體分析法等。色譜分析法其標準物很難找到；酶聯(lián)免疫法及免疫組化法成本過高，多用于動物實驗；放射免疫法及放射受體分析法對條件要求苛刻，使用受到限制。相比而言，熒光光譜法簡便易行，實用性強。因此本實驗采用熒光光譜法進行AGEs生成抑制率的測定。此方法為篩選AGEs形成抑制劑常用方法，且體外實驗與體內(nèi)實驗結果相關。
[0004]黃精為百合科黃精屬植物黃精(Polygonatum sibiricum Red.)的干燥根莖,為上好的藥食兩用中藥。中醫(yī)理論認為黃精具有滋陰補氣功效，常用于治療內(nèi)熱消渴?，F(xiàn)代醫(yī)學臨床中常用于糖尿病及其并發(fā)癥治療。前期報道發(fā)現(xiàn)黃精多糖和黃精皂苷均具有降低血糖效果，且黃精多糖能夠降低AGEs受體(RAGE)基因的表達，由此提示黃精治療糖尿病及其并發(fā)癥可能通過多種途徑實現(xiàn)，包括降糖和抑制AGEs機制，但黃精及其組分對抑制AGEs的生成至今尚未見報道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明所要解決的技術問題在于提供一種黃精提取物。
[0006]本發(fā)明所要解決的另一技術問題在于提供上述黃精提取物的制備方法。
[0007]本發(fā)明所要解決的另一技術問題在于提供上述黃精提取物的應用。
[0008]為解決上述技術問題，本發(fā)明的技術方案是:
[0009]一種黃精提取物，是由下述方法制備得到的:黃精乙醇熱提后，將提取液減壓回流得到總浸膏；加蒸餾水混懸，依次用等體積石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，減壓回收溶劑，得乙酸乙酯萃取部位。
[0010]優(yōu)選的，上述黃精提取物，其物理化學和波譜性質(zhì):深棕色粘稠狀浸膏，1H-NMR譜:δ 1.23、0.85 (飽和脂肪酸的末端甲基和長鏈亞甲基信號)，δ 1.02~1.16 (留體皂苷類成分角甲基信號區(qū))，δ3.25~4.37(糖區(qū))，δ 6.03~8.01、8.38~12.19 (芳香質(zhì)子和酚羥基質(zhì)子信號區(qū))，δ 9.54、7.49、6.60、4.50 (5-羥甲基糠醛特征信號峰)。
[0011]優(yōu)選的，上述黃精提取物，1H-NMR譜的信號峰主要分布在δ 0.6~13之間，主要分為飽和脂肪區(qū)δ 0.6~3.0、糖區(qū)δ 3.0~5.5和芳香區(qū)δ 5.5~10 ;其中，信號較強的是糖區(qū)和飽和脂肪區(qū)；在δ 9.55和δ 12.18處有較明顯的醛基氫和羧基氫信號；δ 9.54,7.49、
6.60和4.50為5-羥甲基糠醛的特征信號峰，提示提取物中主要含5-羥甲基糠醛、留體皂苷和酚酸類(木脂素等)成分。
[0012]上述黃精提取物的制備方法，具體步驟如下:
[0013](I)黃精乙醇熱提后，將提取液減壓回流得到總浸膏；
[0014](2)加蒸餾水混懸，依次用等體積石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，減壓回收溶劑，取乙酸乙酯萃取部位，即得。
[0015]優(yōu)選的，上述黃精提取物的制備方法，具體步驟如下:
[0016](I)黃精用8倍量70%乙醇熱提3次，每次2h，將提取液減壓回流得到總浸膏；
[0017](2)加蒸餾水混懸，依次用等體積石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，減壓回收溶劑，取乙酸乙酯萃取部位，即得。
[0018]上述黃精提取物在制備AGEs抑制劑藥物方面的應用。
[0019]優(yōu)選的，上述黃精提取物在制備抗糖尿病及其并發(fā)癥藥物方面的應用。
[0020]具有上述提取物的藥物組合物，包含治療和/或預防有效量的提取物以及任選的藥學可接受的賦形劑。
[0021]上述藥學可接受的賦形劑可以是藥物制劑領域中任何常規(guī)的賦形劑，特定賦形劑的選擇將取決于用于治療特定患者的給藥方式或疾病類型和狀態(tài)，用于特定給藥模式的合適藥物組合物的制備方法完全在藥物領域技術人員的知識范圍內(nèi)。例如，可以作為藥學可接受的賦形劑包括藥學領域常規(guī)的稀釋劑、載體、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體和潤滑劑等，必要時，還可以在藥物組合物中加入香味劑、防腐劑和甜味劑等。
[0022]上述組合物可以制成片劑、粉劑、顆粒劑、膠囊、口服液、膏劑、霜劑、注射乳劑、注射用無菌粉針等多種形式。上述各種劑型的藥物均可以按照藥學領域的常規(guī)方法制備。
[0023]本發(fā)明的有益效果是:
[0024]上述黃精提取物由植物黃精乙醇提取、乙酸乙酯萃取而得，具有AGEs抑制作用，可進一步將其應用于抗糖尿病及其并發(fā)癥藥物的制備，具有重要的臨床應用價值。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0025]圖1是活性組分I的1H-NMR圖譜；
[0026]圖2是活性組分2的IH-NMR圖譜；
[0027] 圖3是黃精不同樣品在不同濃度下對AGEs形成的抑制率，其中樣品I為活性組分1，樣品3為活性組分2。

【具體實施方式】
[0028]為了使本領域的技術人員更好的理解本發(fā)明的技術方案，下面結合【具體實施方式】對本發(fā)明所述技術方案作進一步的詳細說明。
[0029]實施例1
[0030]活性組分的制備
[0031]實驗儀器:BRUKER AV III核磁共振波譜儀(400MHz，瑞士 fcuker公司)，METTLERTOLEDO萬分之一天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)，SHZ-D (III)循環(huán)水式多用真空泵，DLSB-5/25型低溫冷卻液循環(huán)泵，RE-52A旋轉蒸發(fā)儀(鞏義市英峪予華儀器廠)。
[0032]實驗材料:反相C18柱層析硅膠0DS-A-HG(日本YMC公司)，DlOl大孔吸附樹脂(天津市海光化工有限公司)，所用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、95%乙醇均為分析純。本研究所用藥材購自河北安國藥材市場，經(jīng)天津中醫(yī)藥大學中藥學院李天祥副教授鑒定為百合科黃精屬植物黃精(Polygonatum sibiricum Red.)的干燥根莖,標本存放于天津中醫(yī)藥大學中藥新藥研發(fā)中心中藥化學與分析部(N0.B20704484)。
[0033]黃精19kg，8倍量70%乙醇熱提3次(每次2h)，合并提取液，減壓回流得到總浸膏。加適量蒸餾水混懸，依次用等體積石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，減壓回收溶劑，得石油醚萃取部位65g、乙酸乙酯萃取部位155g(樣品1，活性組分I)、正丁醇萃取部位968g(樣品2)。萃取后水層經(jīng)70%乙醇醇沉，所得上清液濃縮再通過DlOl大孔吸附樹脂柱乙醇-水洗脫，經(jīng)HPLC和IH-NMR分析檢識合并得醇洗脫部位(樣品3，活性組分2)。
[0034]取活性組分樣品少許，溶解于DMS0-d6后，轉移至7mm核磁管中加封，進行1H-NMR(400.13MHz)測試。測試采用德國Bruker公司的Topspin2.0軟件系統(tǒng)進行操控，并在所有樣品測試中使用統(tǒng)一的試驗參數(shù)。以DMS0-d6為內(nèi)標(δ 2.50)，試驗溫度為299.1K ；主要參數(shù):譜寬(Sff H) 8223.7Hz，掃描次數(shù)(NS) 16次，延遲時間(Dl) ls，接受增益(RG) 57。核磁譜圖應用MestReNova軟件進行分段積分處理。
[0035]如圖1可見，活性組分1(樣品I)中成分比較復雜，信號峰主要分布在δθ.6~13之間(圖1Q)。根據(jù)化合物的特征信號峰，主要可以分為飽和脂肪區(qū)(δ 0.6~3.0)、糖區(qū)(δ 3.0~5.5)和芳香區(qū)(δ 5.5~10)。其中，信號較強的是糖區(qū)和脂肪區(qū)(圖la，圖lb，圖lc)，推測其主要來源于樣品中的留體皂苷以及少量脂肪酸類成分；芳香區(qū)的信號則相對較弱，但放大之后其譜線清晰可辨(圖1d)，推測其主要來源于木脂素等酚酸類成分。在δ 9.55和δ 12.18處出現(xiàn)了較明顯的醛基氫和羧基氫信號；δ 9.54,7.49,6.60和4.50 (圖1e)通過與文獻比對推測為5-羥甲基糠醛的特征信號峰見表1。
[0036]表1活性組分I核磁共振氫譜特征
[0037]

【權利要求】
1.一種黃精提取物，其特征在于:是由下述方法制備得到的:黃精乙醇熱提后，將提取液減壓回流得到總浸膏；加蒸餾水混懸，依次用等體積石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，減壓回收溶劑，得乙酸乙酯萃取部位。
2.根據(jù)權利要求1所述的黃精提取物，其特征在于:其物理化學和波譜性質(zhì):深棕色粘稠狀浸膏，1H-NMR譜:δ 1.23、0.85(飽和脂肪酸的末端甲基和長鏈亞甲基信號)，δ 1.02~.1.16 (甾體皂苷類成分角甲基信號區(qū))，δ 3.25~4.37(糖區(qū))，δ 6.03~8.01、8.38~.12.19 (芳香質(zhì)子和酚羥基質(zhì)子信號區(qū))，δ 9.54,7.49,6.60,4.50 (5-羥甲基糠醛特征信號峰)。
3.根據(jù)權利要求1所述的黃精提取物，其特征在于:其物理化學和波譜性質(zhì):深棕色粘稠狀浸膏，1H-NMR譜的信號峰主要分布在δ 0.6~13之間，主要分為飽和脂肪區(qū)δ 0.6~.3.0、糖區(qū)δ 3.0~5.5和芳香區(qū)δ 5.5~10;其中，信號較強的是糖區(qū)和飽和脂肪區(qū)；在δ9.55和δ 12.18處有較明顯的醛基氫和羧基氫信號；δ 9.54、7.49、6.60和4.50為5-羥甲基糠醛的特征信號峰，提示提取物中主要含5-羥甲基糠醛、留體皂苷和酚酸類(木脂素等)成分。
4.權利要求1-3之一所述的黃精提取物的制備方法，其特征在于:具體步驟如下: (1)黃精乙醇熱提后，將提取液減壓回流得到總浸膏； (2)加蒸餾水混懸，依次用等體積石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，減壓回收溶劑，取乙酸乙酯萃取部位，即得。
5.根據(jù)權利要求4所述的黃精提取物的制備方法，其特征在于:具體步驟如下: (1)黃精用8倍量70%乙醇熱提3次，每次2h，將提取液減壓回流得到總浸膏； (2)加蒸餾水混懸，依次用等體積石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，減壓回收溶劑，取乙酸乙酯萃取部位，即得。
6.權利要求1-3之一所述的黃精提取物在制備AGEs抑制劑藥物方面的應用。
7.權利要求6所述的黃精提取物在制備抗糖尿病及其并發(fā)癥藥物方面的應用。
8.具有權利要求1-3之一所述的提取物的藥物組合物，其特征在于:包含治療和/或預防有效量的提取物以及任選的藥學可接受的賦形劑。
【文檔編號】A61K36/8969GK104069348SQ201410306492
【公開日】2014年10月1日 申請日期:2014年6月30日 優(yōu)先權日:2014年6月30日
【發(fā)明者】吳紅華, 徐硯通, 劉東巖, 汪娟, 朱彥, 張鵬, 董鵬志, 劉二偉 申請人:天津中醫(yī)藥大學