專利名稱：一種肝素鈉及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物藥品技術(shù)領(lǐng)域，特別是一種肝素鈉生物藥品及其它的制備方法。
背景技術(shù)：
肝素是一種天然抗凝血藥物，具有抗凝血和防止血栓形成的作用，對腎病患者的滲血、急性心肌梗塞、輸血時(shí)預(yù)防血液凝固等方面的臨床價(jià)值極高。近年肝素在治療腦血管疾病、爆發(fā)性流腦敗血疹等疾病均有極好的療效。然而，這種肝素廣泛分布于動(dòng)物器官的組織中，如腸粘膜，十二指腸，肺、肝、胰臟、胎盤和血液中。肝素和大多數(shù)粘多糖一樣，在體內(nèi)作為蛋白質(zhì)結(jié)合的復(fù)合物存在，這種復(fù)合物的抗凝性隨著其蛋白活性的去除而增加。顯然，肝素制備工藝的水平直接影響肝素產(chǎn)品的質(zhì)量。目前，傳統(tǒng)的肝素鈉制備工藝大部分是從牛肺中提取，不僅制備的成本高，而且產(chǎn)率低，肝素質(zhì)量也不夠穩(wěn)定。即使有的采用在腸粘膜中提取肝素的制備工藝，但工序復(fù)雜，也達(dá)不到工業(yè)化生產(chǎn)的要求。椐統(tǒng)計(jì)，提取1公斤肝素鈉往往需要2500～3000根豬小腸粘膜，而且在生產(chǎn)過程中產(chǎn)生大量的廢水污染環(huán)境。

發(fā)明內(nèi)容
為了克服目前在制備肝素鈉方面存在的不足，本發(fā)明提供一種產(chǎn)品質(zhì)量高、工序簡化、有利于提高工業(yè)化生產(chǎn)能力、無環(huán)境污染的肝素鈉及其制備方法。
本發(fā)明解決其技術(shù)問題是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的(1)按照1∶2～4的重量比向豬小腸粘膜中加入純水，用30～40％的氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH值8.5～10，升溫到40～55℃后再按每公斤豬小腸粘膜為1.2克的比例加入2709蛋白酶，保溫?cái)嚢?～2小時(shí)后，按每公斤豬小腸粘膜加入0.10～0.20千克的粗鹽升溫到70～90℃，停止攪拌，保溫20～30分種，用布袋過濾得濾液；(2)按每公斤豬小腸粘膜所得到的濾液加0.1～0.15的D254強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂，攪拌吸附2～3小時(shí)，棄除樹脂，得到交換后的樹脂；(3)以浸沒交換后的樹脂為量，用濃度為每升0.03～0.05摩爾的氯化鈉溶液和0.3～0.5摩爾的氯化鈉溶液分別洗滌攪拌10～15分種，分離母液得到洗滌后的樹脂；(4)先后兩次以浸沒洗滌后的樹脂為量，加入每升2～4摩爾的氯化鈉溶液反應(yīng)30～40分種，分離樹脂，收集合并兩次反應(yīng)的洗脫液；(5)用每升2摩爾的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值至10～12，升溫到65～85℃后過濾，濾液在攪拌下加入0.8～0.9倍(體積)量濃度為85～98％的乙醇，在室溫下靜置2～4小時(shí)，分離液體，得到沉淀物；(6)按重量比1∶2的比例，將沉淀物用濃度為95～98％的乙醇脫水3～4次，在60～85℃真空干燥箱內(nèi)得到肝素鈉粗品；(7)將粗品溶解于10～15倍(體積)量1％的氯化鈉溶液中完全溶解，再加入鹽酸調(diào)PH值1.0～2.5使其酸化，在5～10℃條件下濾出清液，調(diào)PH值9.0～11.0；(8)保持清液在25℃常溫下加入1.5～2.5％的過氧化氫，保溫24小時(shí)后，過濾并用0.8～0.9倍(體積)量95～99％的乙醇沉淀；(9)去除上清液，沉淀物用8～10倍量1％的氯化鈉溶液充分溶解，冷卻到10℃以下，調(diào)PH值9.0～11.0，再加入0.5～1.5％H2O2升溫到25℃，保溫24小時(shí)，過濾調(diào)PH值4.0～6.0，加0.7倍(體積)量95～99％乙醇靜置沉淀；(10)6～8小時(shí)后去除上層酒精清液，沉淀物溶解于粗品重量5～10倍的1％的氯化鈉溶液中，溶解后，冷至10℃以下，濾膜過濾后在清液中加入0.5～0.7倍(體積)量95～99％乙醇再次靜置沉淀；(11)去除回收廢酒精，沉淀物用95％的乙醇洗滌1～3次后，在60～85℃真空干燥箱內(nèi)干燥20～30小時(shí)，磨碎后得肝素鈉精品。
通過上述制備方法獲得的肝素鈉，其單位效價(jià)在140～150iu/nm之間，產(chǎn)品為無菌、無熱原產(chǎn)品。
在上述的制備方案中，豬小腸粘膜通過2709蛋白酶酶解后，加入氯化鈉并升高溫度后使豬小腸粘膜中的動(dòng)物蛋白凝聚，使生成的肝素鈉容易進(jìn)行離子交換；采用稀氯化鈉溶液洗滌后的強(qiáng)堿性離子交換樹脂再采用高濃度的氯化鈉溶液洗脫，洗脫后的肝素鈉在酒精溶液中沉淀、干燥制得肝素鈉粗品；然后將肝素鈉粗品進(jìn)行酸化去除酸性雜蛋白，再進(jìn)行兩次氧化。通過這些工序制得的產(chǎn)品，單位效價(jià)在每毫克140～150國際單位以上，而且產(chǎn)品為無菌、無熱原產(chǎn)品。特別是在制備過程中沒有廢水污染環(huán)境。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1(1)在300公斤豬小腸粘膜中加入700公斤水，用35％的氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH值9，升溫到50℃后再按每公斤豬小腸粘膜為1.2克的比例加入360公斤2709蛋白酶，保溫?cái)嚢?.5小時(shí)后，加入45公斤的粗鹽，升溫到85℃，停止攪拌，保溫25分種，用布袋過濾得濾液；(2)在濾液中加入30公斤的D254強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂，攪拌吸附2.5小時(shí)，分離母液得到交換后的樹脂；(3)以浸沒交換后的樹脂為量，用濃度為每升0.04摩爾的氯化鈉溶液和0.4摩爾的氯化鈉溶液分別洗滌攪拌15分種，棄去洗滌液，得到洗滌后的樹脂；(4)先后兩次以浸沒洗滌后的樹脂為量，加入每升3摩爾的氯化鈉溶液反應(yīng)35分種，分離樹脂，收集合并兩次反應(yīng)的洗脫液；(5)用每升2摩爾的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值至12，升溫到70℃后過濾，濾液在攪拌下加入0.8倍(體積)量濃度為95％的乙醇，在室溫下靜置3小時(shí)，分離液體，得到沉淀物；(6)按重量比1∶2的比例，將沉淀物用濃度為98％的乙醇脫水3次，在80℃真空干燥箱內(nèi)得到肝素鈉粗品；(7)將粗品溶解于13倍(體積)量1％的氯化鈉溶液中完全溶解，再加入鹽酸調(diào)PH值1.5使其酸化，在8℃條件下濾出清液，調(diào)PH值10.0；(8)保持清液在25℃常溫下加入1.5％的過氧化氫，保溫24小時(shí)后，過濾并用0.8倍量95％的乙醇沉淀；(9)去除上清液，沉淀物用8倍量1％的氯化鈉溶液充分溶解，冷卻到10℃以下，用5N氯化鈉調(diào)PH值10.0，再加入1.0％H2O2升溫到25℃，保溫24小時(shí)，過濾調(diào)PH值5.0，加0.7倍(體積)量95％乙醇靜置沉淀；(10)6～8小時(shí)后去除上層酒精清液，沉淀物溶解于粗品重量7倍的1％的氯化鈉溶液中，溶解后，冷至10℃以下，濾膜過濾后在清液中加入0.65倍(體積)量95％乙醇再次靜置沉淀；
(11)去除回收廢酒精，沉淀物用95％的乙醇洗滌3次后，在70℃真空干燥箱內(nèi)干燥25小時(shí)，磨碎后得肝素鈉精品。
實(shí)施例2(1)在200公斤豬小腸粘膜中加入600公斤水，用30％的氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH值9.5，升溫到55℃后再按每公斤豬小腸粘膜為1.2克的比例加入240公斤2709蛋白酶，保溫?cái)嚢?.5小時(shí)后，加入30公斤的粗鹽，升溫到80℃，停止攪拌，保溫30分種，用布袋過濾得濾液；(2)在濾液中加入26公斤的D254強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂，攪拌吸附3小時(shí)，分離母液得到交換后的樹脂；(3)以浸沒交換后的樹脂為量，用濃度為每升0.05摩爾的氯化鈉溶液和0.5摩爾的氯化鈉溶液分別洗滌攪拌13分種，棄去洗滌液，得到洗滌后的樹脂；(4)先后兩次以浸沒洗滌后的樹脂為量，加入每升3.5摩爾的氯化鈉溶液反應(yīng)30分種，分離樹脂，收集合并兩次反應(yīng)的洗脫液；(5)用每升2摩爾的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值至11，升溫到80℃后過濾，濾液在攪拌下加入0.9倍(體積)量濃度為95％的乙醇，在室溫下靜置3.5小時(shí)，分離液體，得到沉淀物；(6)按重量比1∶2的比例，將沉淀物用濃度為96％的乙醇脫水2次，在75℃真空干燥箱內(nèi)得到肝素鈉粗品；(7)將粗品溶解于10倍(體積)量1％的氯化鈉溶液中完全溶解，再加入鹽酸調(diào)PH值1.9使其酸化，在10℃條件下濾出清液，調(diào)PH值9.5；(8)保持清液在25℃常溫下加入2.0％的過氧化氫，保溫24小時(shí)后，過濾并用0.9倍量95％的乙醇沉淀；(9)去除上清液，沉淀物用9倍量1％的氯化鈉溶液充分溶解，冷卻到10℃以下，用5N氯化鈉調(diào)PH值9.0，再加入1.5％H2O2升溫到25℃，保溫24小時(shí)，過濾調(diào)PH值5.5，加0.7倍(體積)量97％乙醇靜置沉淀；(10)6～8小時(shí)后去除上層酒精清液，沉淀物溶解于粗品重量8倍的1％的氯化鈉溶液中，溶解后，冷至10℃以下，濾膜過濾后在清液中加入0.6倍(體積)量95％乙醇再次靜置沉淀；(11)去除回收廢酒精，沉淀物用95％的乙醇洗滌3次后，在80℃真空干燥箱內(nèi)干燥28小時(shí)，磨碎后得肝素鈉精品。
權(quán)利要求
1.一種肝素鈉的制備方法，其特征在于按以下工藝流程進(jìn)行(1)按照1∶2～4的重量比向豬小腸粘膜中加入純水，用30～40％的氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH值8.5～10，升溫到40～55℃后再按每公斤豬小腸粘膜為1.2克的比例加入2709蛋白酶，保溫?cái)嚢?～2小時(shí)后，按每公斤豬小腸粘膜加入0.10～0.20千克的粗鹽升溫到70～90℃，停止攪拌，保溫20～30分種，用布袋過濾得濾液；(2)按每公斤豬小腸粘膜所得到的濾液加0.1～0.15的D254強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂，攪拌吸附2～3小時(shí)，棄除樹脂，得到交換后的樹脂；(3)以浸沒交換后的樹脂為量，用濃度為每升0.03～0.05摩爾的氯化鈉溶液和0.3～0.5摩爾的氯化鈉溶液分別洗滌攪拌10～15分種，分離母液得到洗滌后的樹脂；(4)先后兩次以浸沒洗滌后的樹脂為量，加入每升2～4摩爾的氯化鈉溶液反應(yīng)30～40分種，分離樹脂，收集合并洗脫液；(5)用每升2摩爾的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值至10～12，升溫到65～85℃后過濾，濾液在攪拌下加入0.8～0.9倍(體積)量濃度為85～98％的乙醇，在室溫下靜置2～4小時(shí)，分離液體，得到沉淀物；(6)按重量比1∶2的比例，將沉淀物用濃度為95～98％的乙醇脫水3～4次，在60～85℃真空干燥箱內(nèi)得到肝素鈉粗品；(7)將粗品溶解于10～15倍(體積)量1％的氯化鈉溶液中完全溶解，再加入鹽酸調(diào)PH值1.0～2.5使其酸化，在5～10℃條件下濾出清液，調(diào)PH值9.0～11.0；(8)保持清液在25℃常溫下加入1.5～2.5％的過氧化氫，保溫24小時(shí)后，過濾并用0.8～0.9倍(體積)量95～99％的乙醇沉淀；(9)去除上清液，沉淀物用8～10倍量1％的氯化鈉溶液充分溶解，冷卻到10℃以下，調(diào)PH值9.0～11.0，再加入0.5～1.5％H2O2升溫到25℃，保溫24小時(shí)，過濾調(diào)PH值4.0～6.0，加0.7倍(體積)量95～99％乙醇靜置沉淀；(10)6～8小時(shí)后去除上層酒精清液，沉淀物溶解于粗品重量5～10倍的1％的氯化鈉溶液中，溶解后，冷至10℃以下，濾膜過濾后在清液中加入0.5～0.7倍(體積)量95～99％乙醇再次靜置沉淀；(11)去除回收廢酒精，沉淀物用95％的乙醇洗滌1～3次后，在60～85℃真空干燥箱內(nèi)干燥20～30小時(shí)，磨碎后得肝素鈉精品。
2.一種由上述權(quán)利要求肝素鈉制備方法獲得的肝素鈉，其特征在于單位效價(jià)在120～140iu/nm之間，產(chǎn)品為無菌、無熱原產(chǎn)品。
全文摘要
本發(fā)明為一種肝素鈉及其制備方法，肝素鈉的提取來源于豬小腸粘膜，通過2709蛋白酶酶解后得到肝素溶液，再加入氯化鈉并升高溫度后使豬小腸粘膜中的動(dòng)物蛋白凝聚，使生成的肝素鈉容易進(jìn)行離子交換；采用稀氯化鈉溶液洗滌后的強(qiáng)堿性離子交換樹脂再用高濃度的氯化鈉溶液洗脫，洗脫后的肝素鈉在酒精溶液中沉淀、干燥制得肝素鈉粗品；再將肝素鈉粗品進(jìn)行酸化去除酸性雜蛋白，再進(jìn)行兩次氧化的精制操作，制得產(chǎn)品的單位效價(jià)在每毫克140～150國際單位以上，而且產(chǎn)品為無菌、無熱原產(chǎn)品，特別是在制備過程中沒有廢水污染環(huán)境。
文檔編號C08B37/00GK1566162SQ0311248
公開日2005年1月19日 申請日期2003年7月7日 優(yōu)先權(quán)日2003年7月7日
發(fā)明者張國良 申請人:張國良