專利名稱：作為p38蛋白激酶抑制劑的取代的含氮雜環(huán)的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及參與細胞增殖、細胞死亡和對胞外刺激產(chǎn)生應答的哺乳動物蛋白激酶p38的抑制劑。本發(fā)明還涉及制備這些抑制劑的方法。本發(fā)明還提供包含本發(fā)明抑制劑的藥物組合物以及那些組合物在治療和預防各種疾病中的使用方法。
背景技術：
蛋白激酶參與對胞外信號的各種細胞應答。最近，發(fā)現(xiàn)了一類促有絲分裂劑活化的蛋白激酶(MAPK)。該類酶是通過磷酸化活化其底物的Ser/Thr激酶[B.Stein等藥物化學年鑒，31，pp.289-98(1996)]。MAPKs本身通過各種信號而活化，包括生長因子、細胞因子、UV照射和應激誘導劑。
一種另人尤其感興趣的MAPK為p38。p38還被稱作細胞因子抑制性抗炎藥物結(jié)合蛋白(CSBP)和RK，它是從被脂多糖(LPS)受體CD14轉(zhuǎn)染并被LPS誘導的小鼠前B細胞中分離的。后來分離和測定了人和小鼠中的p38以及編碼它的cDNA的序列。在通過應激，如脂多糖(LPS)處理、UV、茴香霉素或滲壓震擾和通過細胞因子，如IL-1和TNF刺激的細胞中觀察到p38的活化。
p38激酶的抑制導致IL-1和TNF的產(chǎn)生的阻斷。IL-1和TNF刺激其它促炎細胞因子，如IL-6和IL-8的產(chǎn)生，并且涉及急性和慢性炎癥疾病以及絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥[R.B.Kimble等內(nèi)分泌腺學，136，pp.3054-61(1995)]。
根據(jù)這一發(fā)現(xiàn)認為p38與其它MAPKs一起在介導對炎癥刺激的細胞應答中起作用，如白細胞聚集、巨嗜細胞/單核細胞的活化、組織吸收作用、發(fā)燒、急性期反應和嗜中性白細胞增多癥。此外，MAPKs，如p38參與癌癥、凝血酶誘導的血小板聚集、免疫缺陷病、自身免疫疾病、細胞死亡、變態(tài)反應、骨質(zhì)疏松和神經(jīng)變性疾病。p38的抑制劑還通過抑制前列腺素內(nèi)過氧化物合成酶-2的誘導涉及到疼痛治療領域。WO96/21654提出了與IL-1、IL-6、IL-8或TNF過度產(chǎn)生有關的其它疾病。
其它人已開始努力開發(fā)特異性抑制MAPKs的藥物。例如，PCT公開WO95/31451描述了抑制MAPKs，尤其是p38的吡唑化合物。然而，這些抑制劑在體內(nèi)的功效仍在研究中。
因此，仍非常需要開發(fā)其它有效的可用于治療各種與p38的活化相關的疾病的p38特異性抑制劑。
發(fā)明概述本發(fā)明通過提供對p38顯示強的特異性抑制的化合物而解決了這個問題。
這些化合物具有下面的通式

其中Q1和Q2各自獨立地選自5-6元芳香碳環(huán)或雜環(huán)系，或包含芳香碳環(huán)、芳香雜環(huán)或芳香碳環(huán)與芳香雜環(huán)相結(jié)合的8-10元雙環(huán)系。
構(gòu)成Q1的環(huán)被1-4個取代基取代，其中各取代基獨立地選自鹵素；任選被NR’2、OR’、CO2R’或CONR’2取代的C1-C3烷基；任選被NR’2、OR’、CO2R’或CONR’2取代的O-(C1-C3)-烷基；NR'2；OCF3；OCF3；NO2；OO2R’；CONR’；SR’；S(O2)N(R’)2；SCF3；CN；N(R’)C(O)R4；N(R’)C(O)OR4；N(R’)C(O)C(O)R4；N(R’)S(O2)R4；N(R’)R4；N(R4)2；OR4；OC(O)R4；OP(O)3H2；或N＝C-N(R’)2。
構(gòu)成Q2的環(huán)任選被至多4個的取代基取代，其中各取代基獨立地選自鹵素；任選被NR’2、OR’、CO2R’、S(O2)N(R’)2、N＝C-N(R’)2、R3或CONR’2取代的C1-C3直鏈或支鏈烷基；O-(C1-C3)-烷基；任選被NR’2、OR’、CO2R’、S(O2)N(R’)2、N＝C-N(R’)2、R3或CONR’2取代的O-(C1-C3)-烷基；NR’2；OCF3；CF3；NO2；CO2R’；CONR’；R3；OR3；NR3；SR3；C(O)R3；C(O)N(R’)R3；C(O)OR3；SR’；S(O2)N(R’)2；SCF3；N＝C-N(R’)2或CN。
R’選自氫、(C1-C3)-烷基；(C2-C3)-鏈烯基或炔基；苯基或被1-3個獨立地選自鹵素、甲氧基、氰基、硝基、氨基、羥基、甲基或乙基的取代基取代的苯基。
R3選自5-6元芳香碳環(huán)或雜環(huán)系。
R4為任選被N(R’)2、OR’、CO2R’、CON(R’)2或S(O2)N(R2)2取代的(C1-C4)-烷基；或任選被N(R’)2、OR’、CO2R’、CON(R’)2或S(O2)N(R2)2取代的5-6元碳環(huán)或雜環(huán)系。
X選自-S-、-O-、-S(O2)-、-S(O)-、-S(O2)-N(R2)-、-N(R2)-S(O2)-、-N(R2)-C(O)O-、-O-C(O)-N(R2)、-C(O)-、-C(O)O-、-O-C(O)-、-C(O)-N(R2)-、-N(R2)-C(O)-、-N(R2)-、-C(R2)2-或-C(OR2)2-。
每個R獨立地選自氫、-R2、-N(R2)2、-OR2、SR2、-C(O)-N(R2)2、-S(O2)-N(R’)2或-C(O)-OR2，其中兩個相鄰的R任選相互連接并與分別與它們相連的各個Y一起形成4-8元碳環(huán)或雜環(huán)；R2選自氫、(C1-C3)-烷基或(C1-C3)-鏈烯基；其中各個任選被-N(R’)2、-OR’、SR’、-C(O)-N(R’)2、-S(O2)-N(R’)2、-C(O)-OR’或R3取代。
Y為N或C；A如果存在，為N或CR’；n為0或1；R1選自氫、(C1-C3)-烷基、OH或O-(C1-C3)-烷基。
在另一個具體實施方案中，本發(fā)明提供包含本發(fā)明的p38抑制劑的藥物組合物。這些組合物可用于治療或預防各種疾病中，如癌癥、炎癥疾病、自身免疫疾病、破壞性骨病、增生性疾病、感染性疾病、病毒性疾病和神經(jīng)變性疾病。這些組合物還可用于預防細胞死亡和增生的方法中，因此可被用來治療或預防中風中的再灌注/局部缺血、心臟病、器官低氧。組合物還可用于預防凝血酶誘導的血小板凝集的方法中。上述各方法也為本發(fā)明的一部分。發(fā)明詳述本發(fā)明提供具有下面通式的p38抑制劑

其中Q1和Q2各自獨立地選自5-6元芳香碳環(huán)或雜環(huán)系，或包含芳香碳環(huán)、芳香雜環(huán)或芳香碳環(huán)與芳香雜環(huán)相結(jié)合的8-10元雙環(huán)系。
構(gòu)成Q1的環(huán)被1-4個取代基取代，其中各取代基獨立地選自鹵素；任選被NR’2、OR’、CO2R’或CONR’2取代的C1-C3烷基；任選被NR’2、OR’、CO2R’或CONR’2取代的O-(C1-C3)-烷基；NR’2；OCF3；CF3；NO2；CO2R’；CONR’；SR’；S(O2)N(R’)2；SCF3；CN；N(R’)C(O)R4；N(R’)C(O)OR4；N(R’)C(O)C(O)R4；N(R’)S(O2)R4；N(R’)R4；N(R4)2；OR4；OC(O)R4；OP(O)3H2；或N＝C-N(R’)2。
構(gòu)成Q2的環(huán)任選被至多4個的取代基取代，其中各取代基獨立地選自鹵素；任選被NR’2、OR’、CO2R’、S(O2)N(R’)2、N＝C-N(R’)2、R3或CONR’2取代的C1-C3直鏈或支鏈烷基；O-(C1-C3)-烷基；任選被NR’2、OR’、CO2R’、S(O2)N(R’)2、N＝C-N(R’)2、R3或CONR’2取代的O-(C1-C3)-烷基；NR’2；OCF3；CF3；NO2；CO2R’；CONR’；R3；OR3；NR3；SR3；C(O)R3；C(O)N(R’)R3；C(O)OR3；SR’；S(O2)N(R’)2；SCF3；N＝C-N(R’)2或CN。
R’選自氫、(C1-C3)-烷基；(C2-C3)-鏈烯基或炔基；苯基或被1-3個獨立地選自鹵素、甲氧基、氰基、硝基、氨基、羥基、甲基或乙基的取代基取代的苯基。
R3選自5-6元芳香碳環(huán)或雜環(huán)系。
R4為任選被N(R’)2、OR’、CO2R’、CON(R’)2或S(O2)N(R2)2取代的(C1-C4)-烷基；或任選被N(R’)2、OR’、CO2R’、CON(R’)2或S(O2)N(R2)2取代的5-6元碳環(huán)或雜環(huán)系。
X選自-S-、-O-、-S(O2)-、-S(O)-、-S(O2)-N(R2)-、-N(R2)-S(O2)-、-N(R2)-C(O)O-、-O-C(O)-N(R2)、-C(O)-、-C(O)O-、-O-C(O)-、-C(O)-N(R2)-、-N(R2)-C(O)-、-N(R2)-、-C(R2)2-或-C(OR2)2-。
每個R獨立地選自氫、-R2、-N(R2)2、-OR2、SR2、-C(O)-N(R2)2、-S(O2)-N(R2)2或-C(O)-OR2，其中兩個相鄰的R任選相互連接并與分別與它們相連的各個Y一起形成4-8元碳環(huán)或雜環(huán)；當兩個R部分與分別與它們連接的Y部分一起形成環(huán)時，對于本領域技術人員而言從各個未稠合的R部分失去末端氫是顯而易見的。例如，如果通過將兩個R部分連接在一起形成環(huán)結(jié)構(gòu)，其中一個為-NH-CH3，另一個為-CH2-CH3，將失去各個R部分(黑體字所示)中的末端氫。因此，產(chǎn)生的環(huán)結(jié)構(gòu)部分將具有式-NH-CH2-CH2-CH2-結(jié)構(gòu)。
R2選自氫、(C1-C3)-烷基或(C1-C3)-鏈烯基；其中各個任選被-N(R’)2、-OR’、SR2、-C(O)-N(R’)2、-S(O2)-N(R’)2、-C(O)-OR’或R3取代。
Y為N或C；A如果存在，為N或CR’；n為1或1；R1選自氫、(C1-C3)-烷基、OH或O-(C1-C3)-烷基。這對本領域技術人員將是顯而易見的，即如果R1為OH，則產(chǎn)生的抑制劑可互變產(chǎn)生也為本發(fā)明p38抑制劑的下式化合物

根據(jù)另一個優(yōu)選的具體實施方案，Q1選自包含1-3個取代基的苯基或吡啶基，其中至少一個所述取代基是在鄰位，所述取代基獨立地選自氯、氟、溴、-CH3-、-OCH3、-OH、-CF3、-OCF3、-O(CH2)CH3、、NH2、3，4-亞甲二氧基、-N(CH3)2、-NH-S(O)2-苯基、-NH-C(O)O-CH2-4-吡啶、-NH-C(O)CH2-嗎啉、-NH-C(O)CH2-N(CH3)2、-NH-C(O)CH2-哌嗪、-NH-C(O)CH2-吡咯烷酮、-NH-C(O)C(O)-嗎啉、-NH-C(O)C(O)哌嗪、-NH-C(O)C(O)-吡咯烷酮、-O-C(O)CH2-N(CH3)2或-O-(CH2)2-N(CH3)2。
更優(yōu)選的為包含至少2個在鄰位的上述取代基的苯基或吡啶基。
優(yōu)選的Q1的一些具體實例為



最優(yōu)選的，Q1選自2-氟-6-三氟甲基苯基、2，6-二氟苯基、2，6-二氯苯基、2-氯-4-羥基苯基、2-氯-4-氨基苯基、2，6-二氯-4-氨基苯基、2，6-二氯-3-氨基苯基、2，6-二甲基-4-羥基苯基、2-甲氧基-3，5-二氯-4-吡啶基、2-氯-4，5-亞甲二氧基苯基或2-氯-4-(N-2-嗎啉代-乙酰氨基)苯基。
根據(jù)一個優(yōu)選的具體實施方案，Q2為含有0-3個取代基的苯基或吡啶基，其中各取代基獨立地選自氯、氟、溴、甲基、乙基、異丙基、-OCH3、-OH、-NH2、-CF3、-OCF3、-SCH3、-OCH3、-C(O)OH、-C(O)OCH3、-CH2NH2、-N(CH3)2、-CH2-吡咯烷酮和-CH2OH。
優(yōu)選的Q2的一些具體實例為



未取代的2-吡啶基或未取代的苯基。
最優(yōu)選的為其中Q2選自苯基、2-異丙基苯基、3，4-二甲基苯基、2-乙基苯基、3-氟苯基。2-甲基苯基、3-氯-4-氟苯基、3-氯苯基、2-羧甲基苯基、2-羧基苯基、2-甲基-4-氯苯基、2-溴苯基、2-吡啶基、2-亞甲基羥基苯基、4-氟苯基、2-甲基-4-氟苯基、2-氯-4-氟苯基、2，4-二氟苯基、2-羥基-4-氟苯基或2-亞甲基羥基-4-氟苯基的化合物。
根據(jù)另一個優(yōu)選的具體實施方案，X為-S-、-O-、-S(O2)-、-S(O)-、-NR-、-C(R2)-或-C(O)-。X最優(yōu)選為S。
根據(jù)另一個優(yōu)選的具體實施方案，n為1而A為N。
根據(jù)另一個優(yōu)選的具體實施方案，每個Y為C。
根據(jù)一個更優(yōu)選的具體實施方案，每個Y為C，與那些Y部分相連的R選自氫或甲基。
下表提供了本發(fā)明一些具體的抑制劑。
表中cpd#表示化合物號。
表1式Ia和Ib化合物






根據(jù)另一個具體實施方案，本發(fā)明提供制備上述式(Ia)的p38抑制劑的方法。這些方法包括將式II化合物

其中上式中的各個可變量與上面對本發(fā)明抑制劑所定義的相同，與式IIa的離去基團試劑

其中R’如上定義，或式IIb的離去基團試劑反應

其中L1、L2和L3各自獨立地代表離去基團。
以過量或凈量或與共溶劑，如甲苯一起加入反應所用的離去基團試劑。反應在25-150℃溫度下進行。
可用于制備本發(fā)明p38抑制劑的式IIa的離去基團試劑包括二甲基甲酰胺二甲基乙縮醛、二甲基乙酰胺二甲基乙縮醛、原甲酸酯三甲酯、二甲基甲酰胺二乙基乙縮醛和其它相關的試劑。優(yōu)選地，用于制備本發(fā)明抑制劑的式IIa離去基團試劑是二甲基甲酰胺二甲基乙縮醛。
可用于制備本發(fā)明p38抑制劑的式IIb的離去基團試劑包括光氣、羰基二咪唑、碳酸二乙酯和三光氣。
制備本發(fā)明化合物的較優(yōu)選的方法采用式II化合物，其中各個可變基團根據(jù)如上提供的用于本發(fā)明的化合物的較優(yōu)選和最優(yōu)選的選擇來定義。
由于R1的來源為離去基團試劑(C-R’或C＝O)，因此，其性質(zhì)當然取決于該試劑的結(jié)構(gòu)。因此，在R1為OH的化合物中，使用的試劑必須為IIb。類似地，當R1為H或(C1-C3)-烷基時，使用的試劑必須為IIa。為了產(chǎn)生其中R1為O-(C1-C3)-烷基的抑制劑，首先產(chǎn)生其中R1為OH的化合物，接著用標準方法將羥基烷基化，如在DMF、甲基碘和乙基碘中用氫化鈉處理。
本發(fā)明式Ia的抑制劑的瞬間前體(即式II化合物)可通過下述一種合成線路合成線路1

在線路1中，可互換步驟1)和2)的順序。而且，起始的腈可被相應的酸或酯代替。另外，其它熟知可能的羧基或羧酰胺部分可被用來代替腈(參見線路2)。通過使用本領域熟知的隨后的去保護和官能化的方法，可將可變基團如羧酸、羧酸酯、噁唑啉或噁唑烷酮摻入到該線路中。
線路1(和下面的線路2)的第一個步驟中采用的堿選自氫化鈉、氨基鈉、LDA、六甲基二硅氮化(silazide)鋰、六甲基二硅氮化鋰或在位置α對腈去質(zhì)子化的任何其它的非親核堿。
而且，在上述一個步驟中加入HX-Q2可被兩個步驟代替--加入保護或未保護的X衍生物，接著在隨后的步驟中加入Q2衍生物。
線路2

在線路2中，Z選自COOH、COOR’、CON(R’)2、噁唑啉、噁唑烷酮或CN。R’如上定義。
根據(jù)另一個具體實施方案，本發(fā)明提供制備上述式(Ib)的p38抑制劑的方法。這些方法包括將式III化合物

其中上式中的各個可變基團與上面對本發(fā)明抑制劑所定義的相同，與如下所示的式IIa或IIb離去基團試劑反應

本發(fā)明式(Ib)的p38抑制劑的兩個完整的合成線路描述如下。線路3

在線路3中，可將Q1取代的衍生物用堿如氫化鈉、氨基鈉、LDA、六甲基二硅氮化鋰、六甲基二硅氮化鈉或任何其它的非親核堿在對Z基團α的位置進行去質(zhì)子化處理，其代表掩蔽的酰胺部分。或者，Z為羧酸、羧酸酯、噁唑啉或噁唑烷酮。接著在存在鈀催化劑下，將去質(zhì)子化產(chǎn)生的陰離子與包含兩個離去基團或潛在的離去基團的含氮雜環(huán)化合物接觸。該化合物的一個實例可為2，6-二氯吡啶。
在步驟2中，引入Q2環(huán)部分。這可通過使用許多本領域熟知的導致產(chǎn)生聯(lián)芳基化合物的反應來進行。一個實例可為將芳基鋰化合物與步驟1產(chǎn)生的吡啶中間體反應。或者，可在Pd°催化劑存在下，將芳基金屬化合物，如芳基錫或芳基硼酸與吡啶中間體的芳基鹵部分反應。
在步驟3中，Z基團被去保護和/或官能化形成酰胺化合物。當Z為羧酸、羧酸酯、噁唑啉或噁唑烷酮時，可采用本領域熟知的各種去保護和官能化方法產(chǎn)生酰胺。最后在步驟4中，使用純的或在有機溶劑中的試劑，如DMF乙縮醛或類似的試劑，將酰胺化合物環(huán)化成終產(chǎn)物。
線路4

線路4是類似的，除了在與Q1起始物反應之前首先產(chǎn)生聯(lián)芳基中間體。
根據(jù)另一個具體實施方案，本發(fā)明提供類似于上面式Ia和Ib那些的p38抑制劑，但其中含有Q1取代基的環(huán)中的C＝N被還原。這些抑制劑結(jié)構(gòu)式如下

其中A、Q1、Q2、R、R’、X、Y和n以如式Ia和Ib化合物提供的相同方式定義。這些定義適用于各個可變基團的所有具體實施方案(即基本的，優(yōu)選的，較優(yōu)選的和最優(yōu)選的)。R5選自氫、-CR’2OH、-C(O)R4、-C(O)OR4、-CR’2OPO3H2、-PO3H2和-PO3H2的鹽。
當R5不為氫時，期望產(chǎn)生的化合物為在體內(nèi)將被裂解產(chǎn)生其中R5為氫的化合物的前藥形式。
根據(jù)其它優(yōu)選的具體實施方案，在式Ic化合物中，A優(yōu)選為氮，n優(yōu)選為1，X優(yōu)選為硫。在式Ic或Id化合物中，Q1和Q2優(yōu)選為與上面對式Ia和Ib化合物中的那些可變基團所述的相同部分。
可直接從式Ia或Ib化合物制備式Ic和Id化合物，其中式Ia或Ib化合物在R1的位置含有氫、C1-C3烷基或C2-C3鏈烯基或炔基(例如其中R1＝R’)。下面線路5和6描述了這些化合物的合成線路。
線路5

線路6

在這些線路中，通過與過量氫化二異丁基鋁或等量的試劑反應還原式Ia或Ib化合物以分別產(chǎn)生式Ic和Id環(huán)還原化合物。
通過將上述式Ic或Id化合物與一種或多種適宜試劑反應來完成將不為氫的R5部分加入到環(huán)氮上的反應。在下面的實施例部分提供了這些修飾的實施例。
下表提供了式Ic的本發(fā)明的一些具體抑制劑。
表中cpd#表示化合物號。
表2式Ic化合物





根據(jù)另一個具體實施方案，本發(fā)明提供下式的p38抑制劑

其中A、Q1、Q2、R、X、Y和n以如式Ia和Ib化合物提供的相同方式定義。這些定義適用于各個可變基團的所有具體實施方案(即基本的，優(yōu)選的，較優(yōu)選的和最優(yōu)選的)。較優(yōu)選在式Ie化合物中，Q2為未取代的苯基。
Q3為5-6元芳香碳環(huán)或雜環(huán)系，或包含芳香碳環(huán)、芳香雜環(huán)或芳香碳環(huán)和芳香雜環(huán)相結(jié)合的8-10元雙環(huán)系。Q3的環(huán)被1-4個取代基取代，其中各取代基獨立地選自鹵素；任選被NR’2、OR’、CO2R’或CONR’2取代的C1-C3烷基；任選被NR’2、OR'、CO2R’或CONR’2取代的O-(C1-C3)-烷基；NR’2；OCF3；CF3；NO2；CO2R’；CONR’；SR’；S(O2)N(R’)2；SCF3；CN；N(R’)C(O)R4；N(R’)C(O)OR4；N(R’)C(O)C(O)R4；N(R’)S(O2)R4；N(R’)R4；N(R4)2；OR4；OC(O)R4；OP(O)3H2；或N＝C-N(R’)2。
根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選的具體實施方案，Q3被2-4個取代基取代，其中至少一個所述取代基存在于相對于Q3與抑制劑其余部分相連點為鄰位的位置上。當Q3為雙環(huán)時，鄰位上的兩個取代基存在于最接近(即直接相連)抑制劑分子其余部分的環(huán)中。其它兩個任選的取代基可存在于任一環(huán)中。較優(yōu)選這兩個鄰位位置均被一個所述取代基占據(jù)。
根據(jù)另一個優(yōu)選的具體實施方案，Q3為單環(huán)碳環(huán)，其中各鄰位取代基獨立地選自鹵素或甲基。根據(jù)另一個優(yōu)選的具體實施方案，Q3包含1或2個另外的獨立選自NR’2、OR’、CO2R’、CN、N(R’)C(O)R4；N(R’)C(O)OR4；N(R’)C(O)C(O)R4；N(R’)S(O2)R4；N(R’)R4；N(R4)2；OR4；OC(CO)R4；OP(O)3H2；或N＝C-N(R’)2的取代基。
優(yōu)選地，Q3選自任何存在于下面表3提供的Ie化合物中的Q3部分，或任何存在于下面表4提供的Ig化合物中的Q3部分。
技術人員將認識到式Ie化合物為某些本發(fā)明式Ia和式Ic p38抑制劑的直接前體(即其中Q1＝Q3的那些)。技術人員還將認識到式Ig化合物為某些本發(fā)明式Ib和式Id p38抑制劑的前體(即其中Q1＝Q3的那些)。因此，式Ie抑制劑的合成被描述在上面線路1和2中，其中Q1被Q3取代。類似地，式Ig抑制劑的合成被描述在上面線路3和4中，其中Q1被Q3取代。
式If和式Ih抑制劑的合成被描述在下面線路7和8中。
線路7


線路8描述了類型Ih化合物的合成。例如，在堿，如氫化鈉存在下，將起始的二溴衍生物，如2，6-二溴吡啶用胺處理產(chǎn)生2-氨基-6-溴衍生物。在存在鈀催化劑下，將該中間體用苯基硼酸類似物(Q2-硼酸)，如苯基硼酸處理產(chǎn)生可接著被?；癁榻K產(chǎn)物的二取代的衍生物。該合成的前兩個步驟的順序可互換。
不被理論所約束，申請人認為式Ie和Ig抑制劑的Q3環(huán)中的二鄰位取代以及與式If和Ih抑制劑的Q1環(huán)直接相連的氮的存在導致該化合物“平化”，從而使其有效抑制p38。
本發(fā)明優(yōu)選的式Ie抑制劑是其中A為碳，n為1，X為硫，每個Y為碳，每個R為氫，Q3為2，6-二氯苯基而Q2為苯基的化合物，所述化合物被稱為化合物201。本發(fā)明優(yōu)選的式Ig抑制劑是其中Q3為2，6-二氯苯基，Q2為苯基，每個Y為碳，每個R為氫的化合物。該化合物在本文被稱為化合物202。本發(fā)明另一個優(yōu)選的式Ig化合物為下表4列出的那些。
本發(fā)明優(yōu)選的Ih化合物為下表5描述的那些。其它優(yōu)選的Ih化合物是其中Q1為在2和6位被氯或氟獨立地取代的苯基；每個Y為碳；每個R為氫；而Q2為2-甲基苯基、4-氟苯基、2，4-二氟苯基、2-亞甲基羥基-4-氟苯基或2-甲基-4-氟苯基的化合物。
式Ie、Ig和Ih的一些具體的抑制劑描述在下表中。
表3式Ie抑制劑

表4式Ig抑制劑










表5化合物Ih抑制劑


可在體外，體內(nèi)或細胞系中測定本發(fā)明p38抑制劑的活性。體外測定包括確定活化的p38的激酶活性或ATP酶活性的抑制。另一種體外測定定量抑制劑與p38結(jié)合的能力，并可通過結(jié)合前放射性標記抑制劑，分離抑制劑/p38復合物，測定結(jié)合的放射性標記的量或通過進行其中將新的抑制劑與和已知的放射配體結(jié)合的p38一起保溫的競爭實驗來測定。
本發(fā)明化合物的抑制效果的細胞培養(yǎng)物測定可確定與用陰性對照處理的細胞比較，在用抑制劑處理的全血或細胞的細胞級分中產(chǎn)生的TNF、IL-1、IL-6或IL-8的量?？赏ㄟ^使用市場上可獲得的ELISAs確定這些細胞因子的水平。
可用于確定本發(fā)明p38抑制劑的抑制活性的體內(nèi)測定是在患丁酸分枝桿菌誘導的佐劑性關節(jié)炎的大鼠中的后足水腫的抑制。這描述在J.C.Boehm等醫(yī)學化學雜志，39，pp.3929-37(1996)，其公開被本文引作參考。還可在關節(jié)炎、骨吸收、內(nèi)毒素性休克和免疫功能的動物模型中分析本發(fā)明的p38抑制劑，如其公開被本文引作參考的A.M.Badger等，藥物實驗治療雜志，279，pp.1453-61(1996)所描述的。
可將p38抑制劑或其藥用鹽配制成用于對動物或人給藥的藥物組合物。包含有效量的治療和預防p38介導的疾病的38抑制劑和藥物可接受載體的這些藥物組合物為本發(fā)明的另一個具體實施方案。
如本文所使用的術語“p38介導的疾病”指已知其中p38起作用的任何疾病或其它有害病癥。這包括已知由IL-1、TNF、IL-6或IL-8過度產(chǎn)生導致的疾病。這些疾病包括，不限制于炎癥疾病、自身免疫疾病、破壞性骨疾病、增生性疾病、感染性疾病、神經(jīng)變性疾病、變態(tài)反應、中風中的再灌注/局部缺血、心臟病、血管原性疾病、器官缺氧、血管增生、心臟肥大、凝血酶誘導的血小板凝集和與前列腺素內(nèi)過氧化物酶合成酶-2相關的疾病。
可被治療或預防的炎癥疾病包括，但不局限于急性胰腺炎、慢性胰腺炎、哮喘、變態(tài)反應和成人呼吸窘迫癥?？杀恢委熁蝾A防的自身免疫疾病包括，但不局限于腎小球腎炎、類風濕性關節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、硬皮病、慢性甲狀腺炎、格雷夫斯病、自身免疫胃炎、糖尿病、自身免疫溶血性貧血、自身免疫中性白細胞減少癥、血小板減少癥、特應性皮炎、慢性活動性肝炎、重癥肌無力、多發(fā)性硬化、炎性腸疾病、結(jié)腸潰瘍、節(jié)段性回腸炎、牛皮癬或宿主移植疾病。
可被治療或預防的破壞性骨疾病包括，但不局限于骨質(zhì)疏松癥、骨關節(jié)炎和與多發(fā)性骨髓瘤相關的骨疾病。
可被治療或預防的增生性疾病包括，但不局限于急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、轉(zhuǎn)移性黑素瘤、卡波西肉瘤和多發(fā)性骨髓瘤。
可被治療或預防的血管原性疾病包括實體瘤、眼新血管形成、嬰兒期血管瘤。
可被治療或預防的感染性疾病包括，但不局限于膿毒癥、敗血性休克和志賀氏菌病。
可被治療或預防的病毒性疾病包括，但不局限于急性肝炎感染(包括甲型肝炎、乙型肝炎和丙型肝炎)、HIV感染和CMV視網(wǎng)膜炎。
可被本發(fā)明化合物治療或預防的神經(jīng)變性疾病包括，但不局限于阿爾茨海默氏病、帕金森氏病、腦局部缺血、或由創(chuàng)傷導致的神經(jīng)變性疾病。
“p38介導的疾病”還包括中風中的局部缺血和再灌注、心臟病、心肌缺血、器官缺氧、血管增生、心肌肥大和凝血酶誘導的血小板聚集。
此外，本發(fā)明的p38抑制劑還能抑制可誘導的促炎蛋白的表達，如前列腺素內(nèi)過氧化物合成酶-2(PGHS-2)，其還被稱為環(huán)加氧酶-2(COX-2)。因此，其它“p38介導的疾病”為水腫、痛覺缺失、發(fā)燒和疼痛，如神經(jīng)肌肉痛、頭疼、癌癥疼痛、牙疼和關節(jié)疼。
可通過本發(fā)明p38抑制劑治療或預防的疾病還通常通過被認為導致疾病的細胞因子(IL-1、TNF、IL-6、IL-8)來分類。
因此，IL-1介導的疾病或病癥包括類風濕性關節(jié)炎、骨關節(jié)炎、中風、內(nèi)毒素血癥和/或毒性休克綜合癥、由內(nèi)毒素誘導的炎性反應、炎性腸病、結(jié)核病、動脈粥樣硬化、肌肉退化、惡病質(zhì)、牛皮癬性關節(jié)炎、賴特病綜合癥、痛風、創(chuàng)傷性關節(jié)炎、風疹性關節(jié)炎、急性滑膜炎、糖尿病、胰β細胞疾病和阿爾茨海默氏病。
TNF介導的疾病或病癥包括類風濕性關節(jié)炎、類風濕性脊椎炎、骨質(zhì)疏松癥、痛風性關節(jié)炎和其它關節(jié)炎疾病、膿毒癥、敗血性休克、內(nèi)毒素休克、革蘭氏陰性細菌膿毒癥、中毒性休克綜合癥、成人呼吸窘迫癥、腦型瘧、慢性肺炎癥疾病、硅肺、肺肉樣瘤病、骨吸收疾病、再灌注損傷、移植物與宿主的反應、同種移植物排斥反應、由于感染導致的發(fā)燒和肌痛、感染繼發(fā)性惡質(zhì)病、AIDS、ARC或惡性腫瘤、疤痕疙瘩形成、瘢痕組織的形成、節(jié)段性回腸炎、結(jié)腸潰瘍或熱病(pyresis)。TNF介導的疾病還包括病毒感染，如HIV、CMV、流感和皰疹；以及動物病毒感染，如慢病毒感染，包括但不局限于馬感染性貧血癥病毒、羊關節(jié)炎病毒、羊髓鞘脫落病毒或羊肺腺瘤病毒；或逆轉(zhuǎn)錄病毒感染，包括貓免疫缺陷病毒、牛免疫缺陷病毒或狗免疫缺陷病毒。
IL-8介導的疾病或病癥包括特征在于大量嗜中性白細胞浸入的疾病，如牛皮癬、炎性腸疾病、哮喘、心和腎再灌注損傷、成人呼吸窘迫綜合癥、血栓形成和腎小球腎炎。
此外，本發(fā)明的化合物可被局部用于治療或預防由IL-1或TNF導致或加重的疾病。這些疾病包括發(fā)炎的關節(jié)、濕疹、牛皮癬。炎癥性皮膚疾病如曬傷、炎癥性眼病如結(jié)膜炎、熱病、疼痛和與發(fā)炎相關的其它疾病。
除本發(fā)明的化合物外，本發(fā)明化合物的藥物可接受的鹽也可用于組合物中以治療或預防上述疾病。
本發(fā)明化合物藥物可接受的鹽包括從藥物可接受的無機和有機酸和堿產(chǎn)生的那些。適宜酸的鹽的實例包括乙酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、檸檬酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、環(huán)戊基丙酸鹽、二葡糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙基磺酸鹽、甲酸鹽、富馬酸鹽、葡庚酸鹽、甘油磷酸鹽、甘醇酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙基磺酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽、丙二酸鹽、甲磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、煙酸鹽、硝酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、磷酸鹽、苦味酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽、水楊酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽和十一酸鹽。其它的酸，如草酸，雖然其本身不是藥物可接受的，但可被用于可作為在獲得本發(fā)明化合物和其藥物可接受的酸加成鹽中的中間體的鹽的制備中。來自適宜堿的鹽包括堿金屬(例如鈉和鉀)、堿土金屬(例如鎂)、銨和N-(C1-4烷基)4+鹽。本發(fā)明還設想將本文公開的化合物的所有堿性含氮基團進行季銨化作用。通過該季銨化作用可獲得水或油可溶的或可分散的產(chǎn)物。
可用于這些藥物組合物中的藥物可接受的載體包括，但不局限于離子交換劑、礬土、硬脂酸鋁、卵磷脂、血清蛋白如人血清白蛋白、緩沖物質(zhì)，如磷酸鹽、甘氨酸、山梨酸、山梨酸鉀、飽和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、鹽或電解質(zhì)，如硫酸魚精蛋白、磷酸氫二鈉、磷酸氫鉀、氯化鈉、鋅鹽、膠態(tài)硅酸、三硅酸鎂、聚乙烯吡咯烷酮、基于纖維素的物質(zhì)、聚乙二醇、羧甲基纖維素鈉、聚丙烯酸、蠟、聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。
可通過口服、胃腸外、經(jīng)吸入噴霧、局部、直腸、鼻、口腔含化、陰道或通過植入貯器來給藥本發(fā)明的組合物。本文所采用的術語“胃腸外”包括皮下、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、關節(jié)內(nèi)、滑膜內(nèi)、胸骨內(nèi)、胸內(nèi)、肝內(nèi)、損傷內(nèi)部和顱內(nèi)注射或輸注方法。優(yōu)選經(jīng)口服、腹膜內(nèi)或靜脈內(nèi)給藥組合物。
本發(fā)明組合物的無菌可注射形式可為含水或含油懸液?？筛鶕?jù)本領域已知的方法，使用適宜的分散劑或濕潤劑和懸浮劑配制這些懸液。無菌的可注射制劑還可為在無毒胃腸外可接受的稀釋劑或溶劑中的無菌可注射溶液或懸液，例如在1，3-丁二醇中的溶液。其中可采用的可接受的賦形劑和溶劑為水、林格氏溶液和等滲氯化鈉溶液。此外，通常采用無菌固定油作為溶劑或懸浮介質(zhì)。為此目的，可采用包括合成單或二甘油酯的任何刺激性小的固定油。脂肪酸，如油酸和其甘油酯衍生物以及天然藥物可接受的油，如橄欖油或蓖麻油，尤其是其聚氧乙基化的形式可用于注射用的制劑中。這些油溶液或懸液還可包含長鏈醇稀釋劑或分散劑，如羧甲基纖維素或通常用于配制藥物可接受的劑型(包括乳劑和懸浮劑)的類似的分散劑。其它常用的表面活性劑，如吐溫、司盤和其它乳化劑或通常用于制備藥物可接受固體、液體或其它劑型的生物利用率增強劑也可用于配制的目的。
本發(fā)明的藥物組合物可以任何口服可接受的劑型經(jīng)口服給藥，包括但不局限于膠囊劑、片劑、含水懸浮劑或溶液劑。在用于口服用途的片劑的情況下，常用的載體包括乳糖和玉米淀粉。通常還加入潤滑劑，如硬脂酸鎂。對于膠囊劑形式的口服給藥，可使用的稀釋劑包括乳糖和干燥的玉米淀粉。當需要含水懸液用于口服使用時，將活性成分與乳化劑和懸浮劑混合。如果需要，還可加入某些甜味劑、調(diào)味劑或著色劑。
另一方面，可采用用于經(jīng)直腸給藥的栓劑的形式給藥本發(fā)明的藥物組合物。這可通過將活性成分與適宜的無刺激的賦形劑混合來制備，其中該賦形劑在室溫下為固體，但在直腸溫度下為液體，從而在直腸中將熔化釋放藥物。這些物質(zhì)包括可可脂、蜂蠟和聚乙二醇。
還可局部施用的本發(fā)明的藥物組合物，尤其是當治療靶包括局部施用容易到達的區(qū)域或器官，包括眼、皮膚或下部腸道的疾病。很容易制備用于這些區(qū)域或器官的適宜的局部制劑。
可以直腸栓劑制劑(見上文)或在適宜的灌腸制劑來完成用于下部腸道的局部施用。還可使用局部透皮藥貼。
為了局部施用，可將藥物組合物配制成包含懸浮或溶解在一種或多種載體中的活性成分的適宜的軟膏。用于局部施用本發(fā)明化合物的載體包括，但不局限于礦物油、液體凡士林、白凡士林、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蠟和水。另一方面，可將藥物組合物配制成包含懸浮或溶解在一種或多種藥用載體中的活性成分的適宜洗劑或乳膏。適宜的載體包括，但不局限于礦物油、脫水山梨糖醇一硬脂酸酯、縮聚山梨醇油酸酯60、十六烷基酯蠟、十六芳基醇、2-辛基十二烷醇、芐醇和水。
為了對于眼的使用，可將藥物組合物配制成等滲、pH調(diào)節(jié)的無菌鹽溶液中的微粉化的懸液，或優(yōu)選為在等滲、pH調(diào)節(jié)的無菌鹽溶液中的溶液，其中含有或不含防腐劑，如氯化芐基鎓(alkonium)。另一方面，為了眼的施用，可將藥物組合物配制成軟膏，如凡士林軟膏。
還可通過鼻煙霧劑或吸入給藥本發(fā)明的藥物組合物。這些組合物可根據(jù)藥物制劑領域熟知的方法來制備并被配制成鹽溶液的形式，其中采用芐醇或其它適宜的防腐劑、提高生物利用率的吸收促進劑、碳氟化合物和/或其它常規(guī)的增溶劑和分散劑。
可與載體物質(zhì)混合以產(chǎn)生單劑形式的p38抑制劑的量將取決于治療的宿主、具體的給藥方式而變化。優(yōu)選地，配制組合物以致可對服用這些組合物的病人給藥0.01-100mg/kg體重/天的抑制劑的劑量。
還應理解任何特定的病人的具體劑量和治療方案將取決于各種因素，包括采用的具體化合物的活性、年齡、體重、通常的健康狀況、性別、飲食、給藥時間、排泄的速率、聯(lián)合用藥、以及治療醫(yī)生的判斷以及被治療的具體疾病的嚴重性。抑制劑的量還將取決于組合物中的具體化合物。
根據(jù)另一個具體實施方案，本發(fā)明提供了治療或預防p38介導的疾病的方法，包括對病人給藥一種上述藥物組合物的步驟。如本文所采用的，術語“病人”指動物，優(yōu)選為人。
優(yōu)選地，該方法被用來治療或預防選自炎癥疾病、自身免疫疾病、破壞性骨疾病、增生性疾病、感染性疾病、變性疾病、變態(tài)反應、中風中的再灌注/缺血、心臟病、生血管疾病、器官缺氧、血管增生、心臟肥大和凝血酶誘導的血小板凝集等疾病。
根據(jù)另一個具體實施方案，本發(fā)明的抑制劑被用來治療或預防IL-1、IL-6、IL-8或TNF介導的疾病或病癥。上文描述了這些疾病。
取決于治療或預防的具體的p38介導的疾病，可將通常被給藥以治療或預防疾病的其它藥物與本發(fā)明的抑制劑一起給藥。例如，化療劑或其它抗增生劑可與本發(fā)明的p38抑制劑混合以治療增生性疾病。
那些另外的試劑可作為多份劑量方案的一部分與含p38抑制劑的組合物分開給藥。另外，這些試劑可為單劑形式的一部分，并在單一組合物中與p38抑制劑混合在一起。
為了能夠更全面地理解本文公開的本發(fā)明，提供了下面的實施例。應理解這些實施例是僅用于說明的目的而決不被認為是限制本發(fā)明。實施例1p38抑制劑化合物1的合成合成一些式Ia化合物的實例提供在下面4個實施例中。

室溫下，向90％(1.17g，30mmol)氨基鈉的無水四氫呋喃淤漿(20ml)中加入芐基氰(2.92g，25.0ml)的無水四氫呋喃溶液(10ml)。室溫下，將混合物攪拌30分鐘。向反應混合物中加入3，6-二氯噠嗪(3.70g，25.0mmol)無水四氫呋喃(10ml)溶液。攪拌30分鐘后，將反應混合物用飽和碳酸氫鈉水溶液稀釋。接著將反應混合物用乙酸乙酯萃取。分離各層，并將有機層用水、鹽水洗滌，硫酸鎂干燥，過濾并真空濃縮。
將殘留物用硅膠層析(洗脫液30％乙酸乙酯的正己烷溶液)純化以產(chǎn)生3.71g(16.20mmol～54％)白色固體產(chǎn)物。

室溫下，向95％(0.14g，6.0mmol)氫化鈉的無水四氫呋喃淤漿(10mml)中加入苯硫酚(0.66g，6.0ml)。攪拌反應混合物10分鐘。向反應混合物中加入上面步驟A的產(chǎn)物(1.31g，5.72mmol)的無水乙醇溶液(20ml)。接著將反應混合物回流并攪拌1小時。將冷卻的反應化合物真空濃縮。將殘留物用1N氫氧化鈉溶液(10ml)稀釋，接著用二氯甲烷萃取。將有機層用水、鹽水洗滌，硫酸鎂干燥，并真空濃縮。
將殘留物用硅膠層析(洗脫液20％乙酸乙酯的正己烷溶液)純化以產(chǎn)生0.66g(2.19mmol～40％)白色固體產(chǎn)物。

將來自步驟B的產(chǎn)物(0.17g，0.69mmol)與濃硫酸(5ml)的混合物加熱到100℃達1小時。將溶液冷卻并用飽和碳酸氫鈉溶液調(diào)節(jié)至pH8。將反應混合物用二氯甲烷萃取。將有機層用水、鹽水洗滌，硫酸鎂干燥，真空濃縮以產(chǎn)生0.22g(0.69mmol～100％)化合物前體-1的橙色油。1H NMR(500MHz，CD30D)d7.7(d)，7.5(d)，7.4(m)，7.3-7.2(m).

將來自步驟C的前體-1(0.22g，0.69mmol)和N，N-二甲基甲酰胺二甲基乙縮醛(0.18g，1.5mmol)的甲苯溶液(5ml)在100℃加熱1小時。冷卻下，過濾產(chǎn)生的固體并溶解在溫乙酸乙酯中。用滴加二乙醚沉淀產(chǎn)物。接著過濾產(chǎn)物并用二乙基醚洗滌以產(chǎn)生0.038g化合物1(描述在表1中)的黃色固體1H NMR(500MHz，CDCl3)d8.63(s)，7.63-7.21(m)，6.44(d).實施例2p38抑制劑化合物2的合成

以與實施例1A類似的方式，使用4-氟苯基乙腈制備上述第一個中間體以產(chǎn)生1.4g(5.7mmol，～15％)產(chǎn)物。

以與實施例1B類似的方式，制備上面的中間體。這產(chǎn)生0.49g(1.5mmol，56％)產(chǎn)物。

以與實施例1C類似的方式，制備上面的中間體。這產(chǎn)生0.10g(0.29mmol，45％)化合物前體-2。1H NMR(500MHz，CDCl3)d7.65-7.48(m)，7.47-7.30(m)，7.29-7.11(m)，7.06-6.91(m)，5.85(s，br).

以與實施例1D類似的方式由前體2制備化合物2(描述在表1)。這產(chǎn)生0.066g產(chǎn)物。1H NMR(500MHz，CDCl3)d8.60(s)，7.62-7.03，6.44(d).實施例3p38抑制劑化合物6的合成

以與實施例1A類似的方式，使用2，6-二氯苯基乙腈制備用于制備化合物6的第一個中間體，以產(chǎn)生2.49g(8.38，28％)產(chǎn)物。

以與實施例1B類似的方式進行合成化合物6的下一步。這產(chǎn)生2.82g(7.6mmol，91％)產(chǎn)物。

以與實施例1C類似的方式制備最后中間體，前體-6。這產(chǎn)生0.89g(2.3mmol，85％)產(chǎn)物。1H NMR(500MHz，CD30D)d7.5-7.4(dd)，7.4(m)，7.3(d)，7.2(m)，7.05(d)。

以如實施例1D所描述的進行化合物6(描述在表1)合成的最后一步。這產(chǎn)生0.06g產(chǎn)物。1H NMR(500MHz，CDCl3)d8.69(s)，7.65-7.59(d)，7.58-7.36(m)，7.32-7.22(m)，6.79(d)，6.53(d)。實施例4p38抑制劑化合物5的制備

以與實施例1A類似的方式，使用2，4-二氯苯基乙腈制備用于制備化合物5的第一個中間體以產(chǎn)生3.67g(12.36，49％)產(chǎn)物。

以與實施例1B類似的方式制備第二個中間體。這產(chǎn)生3.82g(9.92mmol，92％)產(chǎn)物。

以與實施例1C類似的方式制備最后中間體，前體-5。這產(chǎn)生0.10g(0.24mmol，92％)產(chǎn)物。1H NMR(500MHz，CD30D)d7.9(d)，7.7(d)，7.6-7.5(dd)，7.4-7.3(m)，2.4(s)。

以與實施例1D類似的方式進行化合物5(描述在表1)合成的最后一步。這產(chǎn)生0.06g產(chǎn)物。1H NMR(500MHz，CDCl3)d8.64(s)，7.51-7.42(m)，7.32-7.21(m)，6.85(d)，6.51(d)，2.42(s)。
可以類似的方式，使用適宜的起始物合成本發(fā)明的式Ia的其它化合物。實施例5式Ib的p38抑制劑化合物的制備下面提供了本發(fā)明式Ib的p38抑制劑合成的一個實例。

室溫下，向90％(1.1當量(eq))氨基鈉的無水四氫呋喃淤漿中加入2，6-二氯芐基氰(1.0eq)的無水四氫呋喃溶液。室溫下，將混合物攪拌30分鐘。向反應混合物中加入2，6-二氯吡啶(1eq)的無水四氫呋喃溶液。用TLC監(jiān)測反應，當完成后，將反應混合物用飽和碳酸氫鈉水溶液稀釋。接著將反應混合物用乙酸乙酯萃取。分離各層，并將有機層用水、鹽水洗滌，硫酸鎂干燥，過濾并真空濃縮。將殘留物通過硅膠層析以產(chǎn)生純的產(chǎn)物。

-78℃下，向4-氟-溴苯(1eq)的無水四氫呋喃溶液中加入叔丁基鋰(2eq，在己烷中的溶液)。接著將反應混合物攪拌30分鐘。向反應混合物中加入來自步驟A的產(chǎn)物(1eq)的無水THF溶液。接著監(jiān)測反應混合物并緩慢降至室溫。將反應混合物用水驟冷，隨后用二氯甲烷萃取。將有機相用水、鹽水洗滌，硫酸鎂干燥，并真空濃縮。將殘留物通過硅膠層析純化以產(chǎn)生產(chǎn)物。

將步驟B的產(chǎn)物與濃硫酸的混合物加熱到100℃達1小時。將溶液冷卻并用飽和碳酸氫鈉溶液調(diào)節(jié)至pH8。將反應混合物用二氯甲烷萃取。將有機層用水、鹽水洗滌，硫酸鎂干燥，真空濃縮以產(chǎn)生產(chǎn)物。終產(chǎn)物通過硅膠快速層析純化。

將步驟C的產(chǎn)物(1eq)和N，N-二甲基甲酰胺二甲基乙縮醛(2eq)的甲苯溶液(5ml)在100℃加熱1小時。冷卻下，過濾產(chǎn)生的固體并溶解在溫乙酸乙酯中。用滴加乙醚沉淀產(chǎn)物。接著過濾產(chǎn)物并用乙醚洗滌以產(chǎn)生式Ib的p38抑制劑。終產(chǎn)物通過硅膠層析進一步純化。
可以類似的方式，使用適宜的起始物合成本發(fā)明的式Ib的其它化合物。實施例6p38抑制劑化合物103的合成

本實施例提供了式Ic化合物的常規(guī)合成。A.本質(zhì)上如實施例4所提供的制備p38抑制劑化合物12，除了在步驟B中使用4-氟苯硫基。B.室溫下，將化合物12溶解在無水THF(5ml)中。向該溶液中加入氫化二異丁基鋁(1M在甲苯中的溶液，5ml，5mmol)，室溫下，將反應液攪拌1小時。接著將反應混合物用乙酸乙酯稀釋，通過加入羅謝爾(Rochelle)鹽驟冷。將各層分開，分離有機層，用水、鹽水洗滌、硫酸鎂干燥，過濾以產(chǎn)生粗化合物103。將粗產(chǎn)物進行硅膠層析，用2％甲醇的二氯甲烷溶液洗脫。由此獲得純的化合物103(210mg，50％產(chǎn)率)1HNMR(500MHz，CDC13)7.51(m，1H)，7.38(d，2H)，7.20(t，2H)，7.08(t，2H)，6.70(寬s，1H)，6.30(dd，2H)，5.20(s，2H)。實施例7p38抑制劑化合物201的合成

室溫下，將上面所示的起始腈(5.9g，31.8mmol)溶解在DMF(20ml)中。接著加入氫化鈉(763mg，31.8mmol)，產(chǎn)生亮黃色溶液。15分鐘后，加入2，5二溴吡啶(5.0gr，21.1mmol)的DMF溶液(10ml)，接著加入四(三苯基膦)鈀(3mmol)。接著將溶液回流3小時。將反應冷卻至室溫，用乙酸乙酯稀釋。接著分離有機層，用水洗滌，接著用鹽水洗滌，硫酸鎂干燥，過濾，真空蒸發(fā)為粗油。用10％乙酸乙酯的己烷溶液洗脫的快速柱層析提供灰白色固體產(chǎn)物(5.8g，84％)。

將步驟A中產(chǎn)生的溴化物(194.8mg，0.57mmol)溶解在二甲苯(15ml)中。向該溶液中加入苯硫基錫烷(200μl，587mmol)和四(三苯基膦)鈀(25mg)。將溶液回流過夜，冷卻，過濾并真空蒸發(fā)。將粗產(chǎn)物在硅膠上層析，用二氯甲烷洗脫，以產(chǎn)生黃色油狀的純的產(chǎn)物(152mg，72％)。

將步驟B產(chǎn)生的腈(1.2g，3.37mmol)溶解在冰乙酸(30ml)中。向該溶液中加入水(120μl，6.67mmol)，接著加入四氯化鈦(760μl，6.91mmol)，這導致放熱。將溶液回流2小時，冷卻，倒入1NHCl中。將水層用二氯甲烷萃取。將有機層用1N NaOH回洗，硫酸鎂干燥，硅膠柱過濾。將柱首先用二氯甲烷洗脫以除去未反應的起始物，接著用乙酸乙酯洗脫以產(chǎn)生化合物201。將乙酸乙酯蒸發(fā)以產(chǎn)生純的化合物201(1.0g，77％)。實施例8p38抑制劑化合物110的合成

首先將起始的腈(3.76g，11.1mmol)溶解在冰乙酸(20ml)中。向該溶液中加入四氯化鈦(22.2mmol)和水(22.2mmol)，并將溶液加熱回流1小時。冷卻反應混合物，用水/乙酸乙酯稀釋。分離有機層，用鹽水洗滌，硫酸鎂干燥。過濾有機層，真空蒸發(fā)。將產(chǎn)生的粗產(chǎn)物在硅膠上進行層析，用5％甲醇的二氯甲烷溶液洗脫，以產(chǎn)生黃色泡沫狀純的產(chǎn)物(2.77g，70％)。

將步驟A產(chǎn)生的酰胺(1.54g，4.3mmol)溶解在甲苯(20ml)中。接著加入N，N-二甲基甲酰胺二甲基乙縮醛(1.53g，12.9mmol)，將產(chǎn)生的溶液加熱10分鐘，然后讓其冷卻至室溫。將反應物在真空中蒸發(fā)，將殘留物在硅膠上進行層析，用2-5％甲醇的二氯甲烷溶液洗脫。將回收物溶解在熱的乙酸乙酯中。讓溶液冷卻，產(chǎn)生為黃色固體的純的產(chǎn)物晶體(600mg，40％)。從母液中可獲得另外的物質(zhì)(～800mg)。

將來自步驟B的溴化物(369mg，1mmol)溶解在THF(10ml)中。接著加入氫化二異丁基鋁(1.0M溶液，4mmol)，室溫下，將反應物攪拌10分鐘，用甲醇(1ml)驟冷反應物。接著加入Rochelle鹽的飽和水溶液，將混合物用乙酸乙酯萃取。分離有機層，硫酸鎂干燥，蒸發(fā)，殘留物在硅膠上進行層析，用1-3％甲醇的二氯甲烷溶液洗脫以產(chǎn)生亮橙色固體(85mg，23％產(chǎn)率)。

將步驟C中產(chǎn)生的溴化物(35.2mg，0.1mmol)溶解在二甲苯(12ml)中。向該溶液中加入苯硫酚(0.19mmol)，接著加入三丁基甲醇錫(0.19mmol)。將產(chǎn)生的溶液加熱回流10分鐘，接著加入四(三苯基膦)鈀(0.020mmol)。加熱反應物，監(jiān)測溴化物起始物的消失。將反應物冷卻到室溫，通過硅膠柱。最初將柱用二氯甲烷洗脫，以除去過量的錫試劑，接著用5％甲醇的乙酸乙酯溶液洗脫以洗脫p38抑制劑。濃縮濾液，在硅膠上再進行再層析，其中使用5％甲醇的乙酸乙酯溶液作為洗脫液，產(chǎn)生純的化合物110(20mg，52％)。實施例9p38抑制劑化合物202的合成

室溫下，將起始腈(2.32g，12mmol)溶解在DMF(10ml)中。接著加入氫化鈉(12mmol)，產(chǎn)生亮黃色溶液。15分鐘后，加入2，6二溴吡啶(2.36gr，10mmol)的DMF溶液(5ml)，接著加入四(三苯基膦)鈀(1.0mmol)。接著將溶液回流3小時。將反應冷卻至室溫，用乙酸乙酯稀釋。接著分離有機層，用水和鹽水洗滌，硫酸鎂干燥，過濾，真空干燥為粗油。用10％乙酸乙酯的己烷溶液洗脫的快速柱層析提供白色固體產(chǎn)物(1.45g，42％)。

將步驟A產(chǎn)生的溴化物(1.77g，5.2mmol)溶解在甲苯(20ml)中，將產(chǎn)生的溶液脫氣。氮氣氛下，加入苯基硼酸(950mg，7.8mmol)的乙醇(4ml)溶液和碳酸鈉(1.73g，14mmol)的水(4ml)溶液。將反應混合物加熱回流1小時，接著冷卻到室溫，將反應物用乙酸乙酯稀釋，用水和鹽水洗滌。將有機層用硫酸鎂干燥，過濾，真空濃縮。殘留物在硅膠上進行層析，用30％乙酸乙酯的己烷溶液洗脫以產(chǎn)生為白色固體的產(chǎn)物(1.56g，88％)。

將來自步驟B的產(chǎn)物(700mg，2.07mmol)溶解在濃硫酸(10ml)中，加熱到80℃達1小時。將溶液冷卻至室溫，并用6N氫氧化鈉調(diào)節(jié)至pH8。將混合物用乙酸乙酯萃取。分離有機層，硫酸鎂干燥，真空濃縮以產(chǎn)生為黃色泡沫的化合物202(618mg，84％)。實施例10化合物410的合成

在火焰干燥的100ml圓底燒瓶中，向50ml無水四氫呋喃中加入2.28g(93.8mmol)鎂碎片。加入一粒碘晶體，形成淺棕色。向溶液中加入1.5ml的10.0ml(79.1mmol)2-溴-5-氟甲苯的樣品。將溶液回流加熱。棕色褪色，當撤去外界熱源時保持回流，表明格利雅反應形成。當回流平靜時，加入另外1.0-1.5ml溴化物，導致劇烈回流。重復該過程直至加入所有的溴化物。將橄欖綠溶液外部加熱至回流達1小時以確保完全反應。將溶液在冰浴中冷卻，-78℃下，借助于注射器加入到9.3ml(81.9mmol)的硼酸三甲酯的100ml四氫呋喃溶液中。加入格利雅試劑后，將燒瓶從冰浴中取出，室溫下，將溶液攪拌過夜。將灰白色淤漿倒至300ml水中，真空蒸發(fā)揮發(fā)性物質(zhì)。加入HCl(400ml 2N溶液)，室溫下，將奶白色混合物攪拌1小時。白色固體沉淀。將混合物用乙酸乙酯萃取，干燥有機萃取物(MgSO4)，真空蒸發(fā)以產(chǎn)生11.44g(94％)為白色固體的硼酸。

在100ml圓底燒瓶中，將7.92(33.4mmol)2，6-二溴吡啶溶解在50ml無水甲苯中，形成清亮無色溶液。加入步驟A中產(chǎn)生的4-氟-2-甲基苯硼酸(5.09g，33.1mmol)，形成白色懸液。加入碳酸鉈(17.45g，37.2mmol)，接著加入催化量(150mg)的Pd(PPH3)4。將混合物加熱回流過夜，冷卻，硅膠柱過濾。將硅膠用CH2Cl2洗滌，蒸發(fā)濾液以產(chǎn)生白色固體。將固體溶解在最少量的50％CH2Cl2/己烷中，使用30％CH2Cl2/已烷，在硅膠短柱上進行層析以產(chǎn)生6.55g(74％)的2-溴-6-(4-氟-2-甲基苯基)吡啶白色固體。

在50ml圓底燒瓶中，將步驟B產(chǎn)生的550mg(2.07mmol)2-溴-6-(4-氟-2-甲基苯基)吡啶溶解在30ml無水四氫呋喃中，形成清亮無色溶液。加入2，6-二氟苯胺(2.14g，2.14mmol)，接著加入112mg(2.79mmol)60％NaH的礦物油懸液。觀察到氣體放出和溫和的放熱。將反應溶液加熱回流過夜，冷卻。將反應混合物倒入10％NH4Cl中，用CH2Cl2萃取。干燥有機萃取物(MgSO4)，真空蒸發(fā)以產(chǎn)生為產(chǎn)物和起始物混合物的棕色油。使用50％CH2Cl2/己烷，在硅膠短柱上進行層析以產(chǎn)生262mg(40％)為無色油狀物的2-(2，6-二氟苯基-6-(4-氟-2-甲基苯基)吡啶。

在100ml圓底燒瓶中，將步驟C中產(chǎn)生的262mg(834mmol)2-(2，6-二氟苯基-6-(4-氟-2-甲基苯基)吡啶溶解在30ml無水CHCl3中形成清亮無色溶液。加入異氰酸氯磺酰酯(1.0ml，11.5mmol)，室溫下，將淺黃色溶液攪拌過夜。加入水(～30ml)，導致中等的放熱和劇烈的氣體釋放。攪拌過夜后，分離有機層，干燥(MgSO4)，真空蒸發(fā)以產(chǎn)生為產(chǎn)物與起始物混合物的棕色油。將物質(zhì)在使用10％EtOAc/CH2Cl2的硅膠短柱上進行層析。將回收的起始物重新放置于反應條件下，并以相同方式純化以產(chǎn)生總共205mg(69％)為白色固體的脲。實施例11化合物138的合成

將化合物103(106mg，0.25mmol)溶解在THF(0.5ml)中，向該溶液中加入三乙胺(35μl，0.25mmol)，接著加入過量的甲醛(37％水溶液，45mg)。室溫下，將反應攪拌過夜。減壓下，將反應混合物旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，將殘留物溶解在二氯甲烷中，加樣至快速硅膠柱中。將柱用2％甲醇的二氯甲烷洗脫以產(chǎn)生純的產(chǎn)物(78mg，70％產(chǎn)率)。實施例12化合物103的前藥的合成

將化合物138(1當量)溶解在二氯甲烷中，向該溶液中加入三乙胺(1當量)，接著加入二芐基膦酰氯(1當量)。室溫下攪拌溶液，用TLC監(jiān)測起始物的消耗。接著將二氯甲烷層用乙酸乙酯稀釋，并用1N HCl、飽和碳酸氫鈉和飽和NaCl洗滌。接著干燥有機層，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，硅膠純化粗產(chǎn)物。然后將純的產(chǎn)物溶解在甲醇中，氫氣氛下，將二芐基酯用10％位于活性碳上的鈀去保護。當反應被監(jiān)測為完全時，硅藻土過濾催化劑，將濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)以產(chǎn)生磷酸鹽產(chǎn)物。

將化合物105(210mg，1.05mmol)溶解在THF(2ml)中，氮氣氛下，冷卻至-50℃。向該溶液中加入六甲基二硅氮化鋰(1.1mmol)，接著加入氯乙酰氯(1.13mmol)。將反應從冷浴中撤出，讓其升溫至室溫，此后，將反應物用乙酸乙酯稀釋并用水驟冷。將有機層用鹽水洗滌，干燥并旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干燥。使用25％乙酸乙酯的己烷溶液作為洗脫液，使粗產(chǎn)物在硅膠上進行快速層析以產(chǎn)生172mg(70％)純的所需產(chǎn)物，它被用于下一反應中。

將氯乙酰基化合物溶解在二氯甲烷中，用過量的二甲基胺處理。用TLC監(jiān)測反應，當完成時，除去所有揮發(fā)性物質(zhì)以產(chǎn)生所需產(chǎn)物。實施例13化合物34和117的合成

將來自實施例5步驟A的腈(300mg，1.0mmol)溶解在乙醇(10ml)中，向該溶液中加入硫脲(80.3mg，1.05mmol)。將反應回流4小時，此時TLC表明所有起始物已被消耗。冷卻反應物，減壓下除去所有揮發(fā)性物質(zhì)，將殘留物溶解在丙酮(10ml)中。
向該溶液中加入2，5-二氟硝基苯(110μl，1.01mmol)，接著加入碳酸鉀(200mg，1.45mmol)和水(400μl)。室溫下，將反應物攪拌過夜。將反應物用二氯甲烷(25ml)稀釋，經(jīng)棉塞過濾。減壓下除去所有揮發(fā)性物質(zhì)，將殘留物在硅膠中進行快速層析，用10％-25％梯度的乙酸乙酯的己烷溶液洗脫以產(chǎn)生所需產(chǎn)物(142mg，33％)。

將來自步驟A的腈化合物(142mg，0.33mmol)與濃硫酸(2ml)混合，加熱回流1小時，接著讓其冷卻至室溫。將混合物用乙酸乙酯稀釋，并小心地用飽和碳酸鉀溶液(含水)中和。分離各層，用水、鹽水洗滌有機層，硫酸鎂干燥。過濾混合物并蒸發(fā)至干燥。殘留物不經(jīng)進一步純化而用于下一步驟(127mg，85％產(chǎn)率)。

將步驟B產(chǎn)生的酰胺(127mg，0.28mmol)溶解在THF(3ml)中，向該溶液中加入二甲基甲酰胺二甲基乙縮醛(110μl，0.83mmol)。將反應物加熱回流5分鐘，接著冷卻至室溫。真空除去所有揮發(fā)性物質(zhì)，將殘留物在硅膠上進行閃蒸層析，用2.5％甲醇的二氯甲烷溶液洗脫以產(chǎn)生純的所需化合物34(118mg，92％)。

將二氯化鎳六水合物(103mg，0.44mol)在苯/甲醇混合物(0.84mL/0.84ml)的溶液加入到化合物34(100.8mg，0.22mmol)的苯溶液(3.4ml)中，將該溶液冷卻到0℃。接著向該溶液中加入硼氫化鈉(49mg，1.3mmol)。攪拌反應物并升至室溫。真空蒸發(fā)反應物，將殘留物進行閃蒸層析，用2％甲醇的二氯甲烷溶液洗脫以產(chǎn)生純的所需產(chǎn)物，化合物117(21mg，25％產(chǎn)物)。實施例14化合物53和142的合成

采用實施例1步驟B的方法，使用氯噠嗪(359mg，1.21mmol)和2，4-二氟苯硫酚(176mmg，1.21mmol)合成上面反應所述的產(chǎn)物?？焖俟枘z層析后獲得產(chǎn)物(451mg，92％)。
B.

如實施例1步驟C所述，使用451mg起始物和5ml濃硫酸進行上面的反應以產(chǎn)生所述產(chǎn)物(425mg，90％)。

如實施例1，步驟D所述，使用起始酰胺(410mg，0.96mmol)和二甲基甲酰胺二甲基乙縮醛(3mmol)進行上面的反應。將反應在50℃加熱30分鐘，并如前所述進行處理。獲得化合物53(313mg，75％)。

將化合物34(213，0.49mmol)溶解在THF(10ml)中，冷卻至0℃，向該溶液中加入甲硼烷的THF溶液(1M，0.6mmol)。將反應物攪拌30分鐘，用水驟冷，乙酸乙酯稀釋。將有機層用水和鹽水洗滌，干燥和旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)。將殘留物在硅膠上進行純化，用1％-5％梯度的甲醇的二氯甲烷溶液洗脫以產(chǎn)生化合物142(125mg，57％)。實施例15在昆蟲細胞中克隆p38激酶鑒別了人p38激酶的兩個剪接變體CSBP1和CSBP2。采用HeLa細胞文庫(Stratagene)作為模板，用特定的寡核苷酸引物擴增CSBP2 cDNA的編碼區(qū)域。將聚合酶鏈反應產(chǎn)物克隆至pET-15b載體(Novagen)中。通過將pET15b-(His)6-p38的XbaI-BamHI片段亞克隆至質(zhì)粒pVL1392(Pharmingen)的互補位點中構(gòu)建桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體pVL-(His)6-p38。
質(zhì)粒pVL-(His)6-p38控制由在框內(nèi)與p38的N末端融合的23個殘基肽(MGSSHHHHHHSSGLVPRGSHMLE，其中LVPRGS代表凝血酶裂解位點)組成的重組蛋白的合成，這通過DNA序列測定和表達蛋白的N末端序列測定而得以證實。27℃下，在T型燒瓶中將草地貪夜蛾(Sf9)昆蟲細胞(ATCC)的單層培養(yǎng)物保存在補充有10％胎牛血清的TNM-FH培養(yǎng)基(Gibco BRL)中。使用脂轉(zhuǎn)染試劑(Invitrogen)，將對數(shù)期的Sf9細胞用苜蓿銀紋夜蛾核型多角體病毒(Pharmingen)的線性病毒DNA和轉(zhuǎn)移載體pVL-(His)6-p38共轉(zhuǎn)染。使用1％低熔化的瓊脂糖，通過噬菌斑分析純化各個重組桿狀病毒克隆。實施例16重組p38激酶的表達和純化27℃下，在搖瓶中，將粉紋夜蛾(Tn-368)High-FiveTM細胞(Invitrogen)培養(yǎng)在不含Excel-405蛋白的培養(yǎng)基(JRH Bioscience)的懸液中。以5的感染復數(shù)將密度為1.5×106細胞/ml的細胞用上述重組桿狀病毒感染。使用兔抗p38抗體(Santa Cruz Biotechnology)，通過免疫印跡監(jiān)測重組p38的表達水平。感染后72小時，當p38的表達水平達到其最大時，收集細胞塊。
將來自表達(His)6-標記的p38的細胞的冷凍細胞膏融化在5體積的緩沖液A(50mM NaH2PO4pH 8.0，200mM NaCl，2mMβ-疏基乙醇，10％甘油和0.2mM PMSF)。在顯微流化儀中將細胞機械破碎后，將裂解液以30,000×g離心30分鐘。4℃下，以1ml樹脂/2-4mg預期的p38的比例，將上清與TalonTM(Clontech)金屬親和性樹脂分批保溫3-5小時。以500×g離心5分鐘沉淀收集樹脂，并用緩沖液A輕輕地分批洗滌。將樹脂漿化，倒入柱中(約2.6×5.0cm)，用緩沖液A+5mM咪唑洗滌。
將(His)6-p38用緩沖液A+100mM咪唑洗脫，隨后4℃下，對2升緩沖液B(50mM HEPES，pH7.5，25mM β甘油磷酸，5％甘油，2mM DTT)透析過夜。通過加入1.5單位的凝血酶(Calbiochem)/mg p38并在20℃保溫2-3小時來除去His6標記。通過加入0.2mM PMSF驟冷凝血酶，接著將全部樣品加至2ml苯甲脒瓊脂糖(American International Chemical)柱中。
將經(jīng)分離的液體直接上樣至預先用緩沖液B+0.2mM PMSF平衡的2.6×5.0cm Q-瓊脂糖(Pharmacia)柱上。將p38用在緩沖液B中線性梯度至0.6M NaCl的20倍柱體積洗脫。收集洗脫的蛋白峰，4℃下對緩沖液C(50mMHEPES pH7.5，5％甘油，50mM NaCl，2mM DTT，0.2mM PMSF)透析過夜。
在Centriprep(Amicom)中將透析的蛋白濃縮至3-4ml，并上樣至2.6×100cm Sephacryl S-100HR(Pharmacia)柱。以35ml/小時的流速洗脫蛋白。收集主峰，調(diào)節(jié)至20mM DTT，濃縮至10-80mgs/ml，-70℃下以等分試樣冷凍或立即使用。實施例17p38的活化通過在20℃下，將0.5mg/ml p38與0.005mg/ml DD-雙突變的MKK6的緩沖液B+10mM MgCl2，2mM ATP，0.2mM Na2VO4混合30分鐘活化p38。接著將活化的混合物上樣至1.0×10cm MonoQ柱(Pharmacia)上，用梯度至1.0M NaCl的緩沖液B的線性20柱體積洗脫。活化的p38在ADP和ATP之后被洗脫。收集活化的p38峰，對緩沖液B+0.2mM Na2VO4透析以除去NaCl。通過加入4.0M儲液將透析的蛋白調(diào)節(jié)至1.1M磷酸鈉溶液，并上樣至預先用緩沖液D(10％甘油，20mM β甘油磷酸，2.0mM DTT)+1.1M K2HPO4的1.0×10cm HIC(Rainin Hydropore)柱上。將蛋白用線性梯度至緩沖液D+50mM K2HPO4的20柱體積洗脫。二磷酸化的p38被洗脫作為主峰，收集，用于對緩沖液B+0.2mM Na2VO4透析。將活化的p38存貯在-70℃下。實施例18p38抑制測定A.EGF受體肽的磷酸化的抑制在pH7.6，在存在10mM MgCl2，25mM β甘油磷酸，10％甘油和100mMHEPES緩沖液時進行本次測定。為了典型的IC50測定，制備包含所有上述成分以及活化的p38(5nM)的儲液。將儲液等分至小瓶中。將固定體積的DMSO或抑制劑的DMSO溶液(反應中DMSO的最終濃度為5％)加入到各小瓶中，混合并在室溫下保溫15分鐘。將EGF受體肽，KRELVEPLTPSGEAPNQALLR，p38催化的激酶反應(1)中的磷?；荏w加入到各小瓶中直至最終濃度為200μM。用ATP(100μM)啟動激酶反應，將小瓶保溫于30℃。30分鐘后，將反應用等體積的10％三氟乙酸(TFA)猝滅。
通過HPLC分析定量磷酸化的肽。用各自含0.1％TFA的水和乙腈雙梯度洗脫液在反相柱(Deltapak，5μm，C18 100D)上進行磷酸化肽與未磷酸化肽的分離。通過將剩余活性的百分數(shù)對抑制劑濃度作圖確定IC50(產(chǎn)生50％抑制的抑制劑的濃度)。B.ATP酶活性的抑制在pH7.6，在存在10mM MgCl2，25mM β甘油磷酸，10％甘油和100mMHEPES緩沖液時進行本次測定。為了典型的Ki測定，在不存在抑制劑和存在兩種濃度的抑制劑時測定ATP在活化的p38反應中的ATP酶活性中的km。制備包含所有上述成分以及活化的p38(60nM)的儲液。將儲液等分至小瓶中。將固定體積的DMSO或抑制劑的DMSO溶液(反應中DMSO的最終濃度為2.5％)加入到各小瓶中，混合并在室溫下保溫15分鐘。通過加入各種濃度的ATP啟動反應，接著保溫于30℃。30分鐘后，將反應用50μl的EDTA(0.1M的最終濃度)，pH8.0猝滅。用HPLC分析定量產(chǎn)生的p38 ATP酶活性ADP。
使用雙溶劑梯度的下列成分在反相柱(Supelcosil，LC-18，3μm，批號5-8985)中從ATP中分離ADP溶劑A-包含8mM硫酸氫四丁基銨的0.1M磷酸緩沖液(Sigma Chemical Co.，目錄號T-7158)，溶劑B-含有30％甲醇的溶劑A。
從作為抑制劑和ATP濃度函數(shù)的速率數(shù)據(jù)確定Ki。一些本發(fā)明抑制劑的結(jié)果描述在下表6中表6化合物 Ki(μM)1 ＞202 153 5.05 2.96 0.4本發(fā)明其它p38抑制劑也抑制p38的ATP酶活性。C.在LPS-刺激的PBMCs中產(chǎn)生的IL-1、TNF、IL-6和IL-8的抑制用DMSO從20mM儲液系列稀釋抑制劑。制備至少6個系列稀釋液。接著通過將4μl抑制劑稀釋液加入到1ml RPMI1640培養(yǎng)基/10％胎牛血清中制備4×抑制劑儲液。4×抑制劑儲液包含80μm、32μm、12.8μm、5.12μm、2.048μm、0.819μm、0.328μm、0.131μm、0.052μm、0.021μm等濃度的抑制劑。37℃下，將4×抑制劑儲液預加溫直至使用。
通過以1500×g離心15分鐘，在來自Bectou ＆ Dickinson的Vacutainer CPT(包含4ml血和足夠的不含Mg2+/Ca2+的DPBS以填充血管)中將新鮮人血buffy細胞與其它細胞分離。除去位于Vacutainer中的梯度頂部的外周血單核細胞(PBMCs)，用RPMI1640培養(yǎng)基/10％胎牛血清洗滌兩次。通過以500×g離心10分鐘收集PBMCs。使用Neubauer細胞室(Neubauer Cell Chamber)測定總細胞數(shù)目，將細胞調(diào)節(jié)為在細胞培養(yǎng)基中為4.8×106細胞/ml的濃度(補充有10％胎牛血清的RPMI1640)。
另一方面，含有抗促凝劑的全血被直接用于測定。
將100μl細胞懸液或全血放置在96孔細胞培養(yǎng)平板中的各孔中。接著向細胞中加入50μl 4×抑制劑儲液。最后，加入50μl脂多糖(LPS)工作儲液(在細胞培養(yǎng)基中為16ng/ml)從而在測定中產(chǎn)生4ng/ml LPS的最終濃度。還通過加入50μl細胞培養(yǎng)基將載體對照的總的測定體積調(diào)節(jié)至200μl。37℃/5％CO2濕潤空氣中，將PBMC細胞或全血保溫過夜(達12-15小時)。
第二天，在以500×g離心5分鐘之前，將細胞在振蕩器上混合3-5分鐘。收集細胞培養(yǎng)物上清液，根據(jù)制造商的說明用ELISA分析IL-1b(R&D系統(tǒng)，Quantikine試劑盒，#DBL50)、TNF-α(Biosource，#KHC3012)、IL-6(Endogen，#EH2-IL-6)和IL-8(Endogen，#EH2-IL8)的水平。ELISA數(shù)據(jù)被用來制備從中產(chǎn)生IC50值的劑量應答曲線。
本發(fā)明各種p38抑制劑對激酶測定(“激酶”；上文小節(jié)A)、在LPS刺激的PBMC(細胞)中的IL-1和TNT，全血(“WB”)中的TNF和IL-6的結(jié)果示于下表7中表中cmpd#表示化合物序號，kinase表示激酶，cell表示細胞。cmpd# kinase cell IL-1 cell TNF WB IL-1WB TNF WB IL-6IC50 IC50 IC50 IC50 C50 IC502+ N.D. N.D. N.D. N.D.N.D.3+ N.D. N.D. N.D. N.D.N.D.5+ N.D. N.D. N.D. N.D.N.D.6++ ++ + N.DN.D.N.D.7+ + + N.D. N.D.N.D.8+ + + N.D. N.D.N.D.9+ + + N.D. N.D.N.D.10 + N.D. N.D. N.D. N.D.N.D.11 + + + N.D. N.D.N.D.12 ++ ++ ++ + + +cmpd# kinase cell IL-1 cell TNF WB IL-1 WB TNF WB IL-6IC50 IC50 IC50 IC50IC50 IC5013++ + N.D.N.D.N.D.14++++ N.D.N.D.N.D.15+++++ N.D.N.D.N.D.16++ + ++ N.D.N.D.N.D.17++ + N.D.N.D.N.D.18++ + N.D.N.D.N.D.19++ + N.D.N.D.N.D.20++ + + N.D.N.D.N.D.21++ +++ N.D.N.D.N.D.22++ + N.D.N.D.N.D.23++ +++ + + +24++ ++++ + + N.D.25+++ +++ N.D.N.D.N.D.26++++ ++ + + +27++ + + + + +28++ ++++ N.D.N.D.N.D.29++ ++++ N.D.N.D.N.D.30++ + + N.D.N.D.31++ + N.D.N.D.N.D.32++ + ++ + + +33++ ++++ + + +34++ + N.D.N.D.N.D.35++ +++ + + +36++ + + + +37++ +++ + + +38+++ +++ ++ ++ ++ ++39++ + + N.D.N.D.N.D.40++ +++ N.D.N.D.N.D.41+++ +++ +++ N.D.N.D.N.D.cmpd# kinase cell IL-1 cell TNF WB IL-1 WB TNF WB IL-6IC50 IC50 IC50 IC50IC50 IC5042+ N.D. N.D. N.D.N.D.N.D.43+++ + N.D.N.D.N.D.44+++ + N.D.N.D.N.D.45++N.D. N.D. N.D.N.D.N.D.46+++ + N.D.N.D.N.D.47+++++ N.D.N.D.N.D.48+++++ N.D.N.D.N.D.49+++++ + + + +50+ N.D. N.D. N.D.N.D.N.D.51++N.D. N.D. N.D.N.D.N.D.52++N.D. N.D. N.D.N.D.N.D.53+++ +++ ++++++ +++ +++101 +++++ ++++ + ++102 +++ +++ ++++ ++ ++103 +++ +++ ++++ ++ ++104 ++++++ + + +105 +++ + N.D.N.D.N.D.106 +++ +++ ++++ ++ ++107 +++ + N.D.N.D.N.D.109 +++ +++ ++++ + ++108 +++ +++++++ +++ +++110 +++ + N.D.N.D.N.D.111 +++ + N.D.N.D.N.D.112 +++++ + + +113 +++ +++ ++ + + +114 +++ +++ +++++ ++ +++115 +++ +++ ++++ + +116 +++ +++ ++ + + +117 +++ +++ +++++ ++ +++cmpd#kinase cell IL-1 cell TNF WB IL-1 WB TNF WB IL-6IC50 IC50 IC50 IC50IC50 IC50118++++ +++++119++N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.120N.D. ++ + +++121+++ ++++++++122++++ + +++123++++ +++++124+ + + N.D. N.D. N.D.125+++ ++++++ +++126+ ++ + N.D. N.D. N.D.127+++ ++++++ ++ ++ +++128+ + + N.D. N.D. N.D.129+++ ++++++ ++ +++130+++ ++ + N.D. N.D. N.D.131+++ ++++++ N.D. N.D. N.D.132+++ +++++N.D. N.D. N.D.133+++ ++++++ N.D. N.D. N.D.134+++ ++ + N.D. N.D. N.D.135+++ ++ + +++136+++ ++++++ ++++137+++ +++++++++138++++++++++++139+++ ++++ +++140+++ ++++++ ++ +++141+++ ++++++ +++142+++ ++++++ +++ +++ +++143+++ ++++++++144+++ +++++++++145+++ ++++++ +++ +++ +++201+++ + ++++ +cmpd# kinase cell IL-1 cell TNF WB IL-1WB TNF WB IL-6IC50 IC50 IC50 IC50 IC50 IC50203 + N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.204 + N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.205 + N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.206 +++ + N.D. N.D. N.D.207 + N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.208 N.D. ++ N.D. N.D. N.D. N.D.209 N.D. + N.D. N.D. N.D. N.D.202/ +++ ++ +++ + +301302 +++ ++++++ + +303 + + + + + +304 + + + + + +305 +++ ++++ + + +306 ++++ + + + +307 +++ ++ + + + +308 + N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.309 ++++ +++ + +310 +++ + N.D. N.D. N.D.311 +++ + N.D. N.D. N.D.312 +++ ++ + + + +313 +++ + N.D. N.D. N.D.314 + N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.315 + N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.316 + N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.317 + + + N.D. N.D. N.D.318 ++N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.319 + N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.320 +++ ++ ++N.D. N.D. N.D.321 + N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.cmpd# kinase cell IL-1 cell TNFWB IL-1 WB TNF WB IL-6IC50 IC50 IC50 IC50 IC50 IC50322 ++ + + N.D. N.D. N.D.323 ++ ++ ++N.D. N.D. N.D.324 ++ ++ + N.D. N.D. N.D.325 +++ +++ +++ ++326 +N.D.N.D. N.D. N.D. N.D.327 ++ N.D.N.D. N.D. N.D. N.D.328 +N.D.N.D. N.D. N.D. N.D.329 ++ ++ + + ++330 +N.D.N.D. N.D. N.D. N.D.331 +N.D.N.D. N.D. N.D. N.D.332 ++ ++ + + ++333 ++ + + N.D. N.D. N.D.334 +N.D.N.D. N.D. N.D. N.D.335 ++ + + + ++336 +N.D.N.D. N.D. N.D. N.D.337 +N.D.N.D. N.D. N.D. N.D.338 +N.D.N.D. N.D. N.D. N.D.339 +N.D.N.D. N.D. N.D. N.D.340 +N.D.N.D. N.D. N.D. N.D.341 ++ ++ ++N.D. N.D. N.D.342 +N.D.N.D. N.D. N.D. N.D.343 +N.D.N.D. N.D. N.D. N.D.344 +N.D.N.D. N.D. N.D. N.D.345 +N.D.N.D. N.D. N.D. N.D.346 ++ + + + ++347 +N.D.N.D. N.D N.D. N.D.348 +N.D.N.D. N.D. N.D. N.D.349 +++ + + ++350 +++ + N.D N.D. N.D.cmpd# kinase cell IL-1 cell TNF WB IL-1 WB TNF WB IL-6IC50 IC50 IC50 IC50 IC50 IC50357 + ++ N.D. N.D. N.D.352 + +N.D. N.D. N.D. N.D.353 ++++ N.D. N.D. N.D.354 + N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.355 + N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.356 + N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.357 + N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.358 ++++ + N.D. N.D. N.D.359 + N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.360 + N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.361 ++++ + N.D. N.D. N.D.362 +++ ++ ++ + ++363 +++ +++ ++ + ++364 +++ +++ ++ + ++365 N.D. N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.366 + N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.367 N.D. N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.368 N.D. N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.369 N.D. N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.370 N.D. N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.371 N.D. N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.372 N.D. N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.373 N.D. N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.374 ++N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.375 +++ N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.376 +++ N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.377 +++ N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.378 +++ N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.379 +++ N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.cmpd# kinase cell IL-1 cell TNF WB IL-1 WB TNF WB IL-6IC50 IC50 IC50IC50 IC50IC50380++ N.D.N.D.N.D. N.D.N.D.381++ N.D.N.D.N.D. N.D.N.D.382+++N.D.N.D.N.D. N.D.N.D.383+++N.D.N.D.N.D. N.D.N.D.384++ N.D.N.D.N.D. N.D.N.D.385++ N.D.N.D.N.D. N.D.N.D.386+ N.D.N.D.N.D. N.D.N.D.387+ N.D.N.D.N.D. N.D.N.D.388+++N.D.N.D.N.D. N.D.N.D.389++ N.D.N.D.N.D. N.D.N.D.390+ N.D.N.D.N.D. N.D.N.D.391++ N.D.N.D.N.D. N.D.N.D.392++ N.D.N.D.N.D. N.D.N.D.393++ N.D.N.D.N.D. N.D.N.D.394+++N.D.N.D.N.D. N.D.N.D.395+++N.D.N.D.N.D. N.D.N.D.396+++N.D.N.D.N.D. N.D.N.D.397+ N.D.N.D.N.D. N.D.N.D.398N.D. N.D.N.D.N.D. N.D.N.D.399+++N.D.N.D.N.D. N.D.N.D.1301 +++N.D.N.D.N.D. N.D.N.D.401+++++ ++ + + +402++++++ +++ + + +403++++++ +++ + + ++404++++++ +++ + + +405++++++ ++ N.D. N.D.N.D.406++ ++ + N.D. N.D.N.D.407++ ++ + N.D. N.D.N.D.408++++++ ++ N.D. N.D.N.D.cmpd# kinase cell IL-1 cell TNF WB IL-1 WB TNF WB IL-6IC50 IC50 IC50 IC50 IC50IC50409+++ +++ +++ ++++410+++ +++ +++ ++ ++ ++411+++ +++ +++ +++412N.D. N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
對于激酶，IC50值“+++”代表＞0.1μM，“++”代表在0.1-1.0μM之間，“+”代表＜1.0μM。對于細胞IL-1和TNF值，“+++”代表＞0.1μM，“++”代表在0.1-0.5μM之間，“+”代表＜0.5μM。對于全血(WB)測定值，“+++”代表＞0.25μM，“++”代表在0.25-0.5μM之間，“+”代表＜0.5μM。在上表所示的所有測定中，“N.D.”代表未測定的值。
本發(fā)明其它的p38抑制劑也將抑制EGF受體肽的磷酸化以及在LPS-刺激的PBMCs或全血中的IL-1、TNF、IL-6以及IL-8的產(chǎn)生。D.IL-1刺激的PBMCs中產(chǎn)生的IL-6和IL-8的抑制用幾乎與上面相同的方法對PBMCs進行本測定，除了將50μl IL-1b工作儲液(在細胞培養(yǎng)基中為2ng/ml)加入測定中以代替(LPS)工作儲液。
如上所述收集細胞培養(yǎng)上清并根據(jù)制造商的說明用ELISA分析IL-6(Endogen，#EH2-IL6)和IL-8(Endogen，#EH2-IL8)的水平。ELISA數(shù)據(jù)被用來制備從中產(chǎn)生IC50值的劑量應答曲線。
p38抑制劑化合物6的結(jié)果示于下表8中表8分析白細胞因子 IC50(μM)IL-60.60IL-80.85E.在PBMCs中LPS誘導的前列腺素內(nèi)過氧化物酶-2(PGHS-2，或COX-2)誘導的抑制通過在Vacutainer CPT(Becton&Dickinson)中離心從新鮮人血buffy表層中分離人外周血單核細胞(PBMCs)。將15×106細胞放入包含補充有10％胎牛血清，500U/ml青霉素，50μg/ml鏈霉素和2mM L-谷氨酰銨的RPMI1640的6孔組織培養(yǎng)皿中。以在DMSO中為0.2、2.0和20μM的最終濃度加入化合物6(上面)。接著以4ng/ml的最終濃度加入LPS以誘導酶的表達。最終培養(yǎng)體積為10ml/孔。
37℃，5％CO2培養(yǎng)過夜后，通過刮取和隨后的離心收集細胞，除去上清，將細胞用冰冷的DPBS(Dulbecco氏磷酸緩沖鹽溶液，BioWhittaker)洗滌兩次。在冰上將細胞在50μl含有1μl Benzonase(來自Merck的DNA酶)的冷的溶胞緩沖液(20mM Tris-HCl，pH7.2，150mM NaCl，1％Triton-X-100，1％脫氧膽酸，0.1％SDS，1mM EDTA，2％抑酶肽(Sigma)，10μg/ml胃蛋白酶抑制劑，10μg/ml亮抑蛋白酶肽，2mM PMSF，1mM芐脒，1mM DTT)中溶胞10分鐘。使用BCA測定(Pierce)并以牛血清白蛋白作為標準確定各樣品的蛋白濃度。用冷的溶胞緩沖液將各樣品的蛋白濃度調(diào)節(jié)至1mg/ml。向100μl溶胞液中加入等體積的2xSDS PAGE加樣緩沖液，將樣品煮沸5分鐘。在4-20％SDS PAGE梯度凝膠(Novex)中分級分離蛋白(30μg/道)，接著通過在包含20％甲醇的Towbin轉(zhuǎn)移緩沖液(25mM Tris，192mM甘氨酸)中，以100mA進行2小時電穿孔方法轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜中。室溫下，將膜用封閉緩沖液(本充有0.1％Tween-20的5％脫脂奶粉的DPBS溶液)預處理1小時，用DPBS/0.1％Tween-20洗滌3次。4℃下，將膜與在封閉緩沖液中為1∶250稀釋度的單克隆抗COX-2抗體(Transduction實驗室)一起保溫過夜。用DPBS/0.1％Tween-20洗滌3次后，室溫下，將膜在封閉緩沖液中與1∶1000稀釋度的聯(lián)接辣根過氧化物酶的抗小鼠Ig(Amersham)的羊抗血清一起保溫1小時。接著將膜再用DPBS/0.1％Tween-20洗滌3次，ECL檢測系統(tǒng)(SuperSignalTMCL-HRP底物系統(tǒng)，Pierce)被用來測定COX-2的表達水平。
上述測定結(jié)果表明在PBMC中化合物6抑制LPS誘導的PGHS-2的表達。
雖然我們在此提供了許多本發(fā)明的具體實施方案，很顯然可改變基本組成以提供利用本發(fā)明方法的其它具體的實施方案。
權(quán)利要求
1.下式化合物
其中Q1和Q2各自獨立地選自5-6元芳香碳環(huán)或雜環(huán)系，或包含芳香碳環(huán)、芳香雜環(huán)或芳香碳環(huán)與芳香雜環(huán)相結(jié)合的8-10元雙環(huán)系；其中Q1被1-4個取代基取代，其中各取代基獨立地選自鹵素；任選被NR’2、OR’、CO2R’或CONR’2取代的C1-C3烷基；任選被NR’2、OR’、CO2R’或CONR’2取代的O-(C1-C3)-烷基；NR’2；OCF3；CF3；NO2；CO2R’；CONR’；SR’；S(O2)N(R’)2；SCF3；CN；N(R’)C(O)R4；N(R’)C(O)OR4；N(R’)C(O)C(O)R4；N(R’)S(O2)R4；N(R’)R4；N(R4)2；OR4；OC(O)R4；OP(O)3H2；或N＝C-N(R’)2；Q2任選被至多4個的取代基取代，其各取代基獨立地選自鹵素；任選被NR’2、OR’、CO2R’、S(O2)N(R’)2、N＝C-N(R’)2、R3或CDNR’2取代的C1-C3直鏈或支鏈烷基；任選被NR’2、OR’、CO2R’、S(O2)N(R’)2、N＝C-N(R’)2、R3或CONR’2取代的O-(C1-C3)-烷基；NR’2；OCF3；CF3；NO2；CO2R’；CDNR’；R3；OR3；NR3；SR3；C(O)R3；C(O)N(R’)R3；C(O)OR3；SR’；S(O2)N(R’)2；SCF3；N＝C-N(R’)2或CN；其中R’選自氫、(C1-C3)-烷基；(C2-C3)-鏈烯基或炔基；苯基或被1-3個獨立地選自鹵素、甲氧基、氰基、硝基、氨基、羥基、甲基或乙基的取代基取代的苯基；R3選自5-6元芳香碳環(huán)或雜環(huán)系；和R4為任選被N(R’)2、OR’、CO2R’、CON(R’)2或S(O2)N(R2)2取代的(C1-C4)-烷基；或任選被N(R’)2、OR’、CO2R’、CON(R’)2或S(O2)N(R2)2取代的5-6元碳環(huán)或雜環(huán)系；X選自-S-、-O-、-S(O2)-、-S(O)-、-S(O2)-N(R2)-、-N(R2)-S(O2)-、-N(R2)-C(O)O-、-O-C(O)-N(R2)、-C(O)-、-C(O)O-、-O-C(O)-、-C(O)-N(R2)-、-N(R2)-C(O)-、-N(R2)-、-C(R2)2-或-C(OR2)2-；每個R獨立地選自氫、-R2、-N(R2)2、-OR2、SR2、-C(O)-N(R2)2、-S(O2)-N(R’)2或-C(O)-OR2，其中兩個相鄰的R任選相互連接并與分別與它們相連的各個Y一起形成4-8元碳環(huán)或雜環(huán)；R2選自氫、(C1-C3)-烷基或(C1-C3)-鏈烯基；其中各個任選被-N(R’)2、-OR’、SR’、-C(O)-N(R’)2、-S(O2)-N(R’)2、-C(O)-OR’或R3取代。Y為N或C；A如果存在，為N或CR’；n為0或1；R1選自氫、(C1-C3)-烷基、OH或O-(C1-C3)-烷基。
2.下式化合物
其中A、Q1、Q2、R、R’、X、Y和n以如式Ia或Ib化合物提供的相同方式定義；而R5選自氫、-CR’2OH、-C(O)R4、-C(O)OR4、-CR’2OPO3H2和-PO3H2的鹽。
3.下式化合物
其中Q3為5-6元芳香碳環(huán)或雜環(huán)系，或包含芳香碳環(huán)的8-10元雙環(huán)系、芳香雜環(huán)或芳香碳環(huán)和芳香雜環(huán)的結(jié)合物。Q3的環(huán)被1-4個取代基取代，其中各取代基獨立地選自鹵素；任選被NR’2、OR’、CO2R’或(CONR’2取代的C1-C3烷基；任選被NR’2、OR’、CO2R’或CONR’2取代的O-(C1-C3)-烷基；NR’2；OCF3；CF3；NO2；CO2R’；CONR’；SR’；S(O2)N(R’)2；SCF3；CN；N(R’)C(O)R4；N(R’)C(O)OR4；N(R’)C(O)C(O)R4；N(R’)S(O2)R4；N(R’)R4；N(R4)2；OR4；OC(O)R4；OP(O)3H2；或N＝C-N(R’)2；而A、Q1、Q2、R、R’、X、Y和n如權(quán)利要求1所定義。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項的化合物，其中Q1選自包含1-3個取代基的苯基或吡啶基，其中至少一個所述取代基是在鄰位，所述取代基獨立地選自氯、氟、溴、-CH3-、-OCH3、-OH、-CF3、-OCF3、-O(CH2)CH3、NH2、3，4-亞甲二氧基、-N(CH3)2、-NH-S(O)2-苯基、-NH-C(O)O-CH2-4-吡啶、-NH-C(O)CH2-嗎啉、-NH-C(O)CH2-N(CH3)2、-NH-C(O)CH2-哌嗪、-NH-C(O)CH2-吡咯烷酮、-NH-C(O)C(O)-嗎啉、-NH-C(O)C(O)哌嗪、-NH-C(O)C(O)-吡咯烷酮、-O-C(O)CH2-N(CH3)2或-O-(CH2)2-N(CH3)2。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的化合物，其中Q1包含至少兩個在鄰位的取代基。
6.根據(jù)權(quán)利要求4的化合物，其中Q1選自
7.根據(jù)權(quán)利要求6的化合物，其中Q1選自2-氟-6-三氟甲基苯基、2，6-二氟苯基、2，6-二氯苯基、2-氯-4-羥基苯基、2-氯-4-氨基苯基、2，6-二氯-4-氨基苯基、2，6-二氯-3-氨基苯基、2，6-二甲基-4-羥基苯基、2-甲氧基-3，5-二氯-4-吡啶基、2-氯-4，5-亞甲二氧基苯基或2-氯-4-(N-2-嗎啉代-乙酰氨基)苯基。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項的化合物，其中Q2選自苯基或吡啶基，其中Q2任選包含至多3個的取代基，各取代基獨立地選自氯、氟、溴、甲基、乙基、異丙基、-OCH3、-OH、-NH2、-CF3、-OCF3、-SOH3、-OCH-3、-C(O)OH、-C(O)OCH3、-CH2NH2、-N(CH3)2、-CH2-吡咯烷酮和-CH2OH。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的化合物，其中Q2選自
未取代的2-吡啶基或未取代的苯基。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的化合物，其中Q2選自苯基、2-異丙基苯基、3，4-二甲基苯基、2-乙基苯基、3-氟苯基。2-甲基苯基、3-氯-4-氟苯基、3-氯苯基、2-羧甲氧基苯基、2-羧基苯基、2-甲基-4-氯苯基、2-溴苯基、2-吡啶基、2-亞甲基羥基苯基、4-氟苯基、2-甲基-4-氟苯基、2-氯-4-氟苯基、2，4-二氟苯基、2-羥基-4-氟苯基或2-亞甲基羥基-4-氟苯基。
11.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項的化合物，其中X選自-S-、-O-、-S(O2)-、-S(O)-、-NR-、-C(R2)-或-C(O)-。
12.根據(jù)權(quán)利要求10的化合物，其中X為S。
13.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項的化合物，其中n為1和A為N。
14.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項的化合物，其中每個Y為C。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的化合物，其中與Y相連的各個R獨立地選自氫或甲基。
16.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物選自表1描述的化合物2-3或5-53中的任一化合物。
17.根據(jù)權(quán)利要求2的化合物，其中所述化合物選自表2提供的化合物101-145中的任一化合物。
18.根據(jù)權(quán)利要求3的化合物，其中Q3被2-4個取代基取代，其中至少一個所述取代基以相對于Q3與抑制劑其余部分相連的點為鄰位而存在。
19.根據(jù)權(quán)利要求18的化合物，其中兩個鄰位均被所述獨立選擇的取代基中的一個所占據(jù)。
20.根據(jù)權(quán)利要求19的化合物，其中Q3為單環(huán)碳環(huán)；而Q3中所述鄰位取代基的每一個獨立地選自鹵素或甲基。
21.根據(jù)權(quán)利要求19的化合物，其中除了所述鄰位取代基外Q3還包含1至2個取代基，其中所述另外的取代基獨立選自NR’2、OR’、CO2R’、CN、N(R’)C(O)R4；N(R’)C(O)OR4；N(R’)C(O)C(O)R4；N(R’)S(O2)R4；N(R’)R4；N(R4)2；OR4；OC(O)R4；OP(O)3H2；或N＝C-N(R’)2。
22.根據(jù)權(quán)利要求3的化合物，其中所述化合物為式Ie化合物，并且其選自表3提供的化合物201或203-209中的任一個。
23.根據(jù)權(quán)利要求3的化合物，其中所述化合物為式Ig化合物，并且選自表5提供的化合物202/301、302-399或1301中的任一個。
24.根據(jù)權(quán)利要求3的化合物，其中所述化合物為式Ih化合物，并且選自表5提供的化合物401-412中的任一個。
25.包含有效抑制p38量的根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項的化合物和藥物可接受的載體的藥物組合物。
26.一種治療或預防炎癥疾病、自身免疫疾病、破壞性骨疾病、增生性疾病、感染性疾病、神經(jīng)變性疾病、變態(tài)反應、中風中的再灌注/局部缺血、心臟病、血管原性疾病、器官缺氧、血管增生、心臟肥大、凝血酶誘導的血小板凝集或與前列腺素內(nèi)過氧化物酶合成酶-2相關的疾病的方法，所述方法包括對所述病人給藥根據(jù)權(quán)利要求25的組合物。
27.根據(jù)權(quán)利要求26的方法，其中所述方法被用來治療或預防選自急性胰腺炎、慢性胰腺炎、哮喘、變態(tài)反應或成人呼吸窘迫癥的炎癥性疾病。
28..根據(jù)權(quán)利要求26的方法，其中所述方法被用來治療或預防選自腎小球腎炎、類風濕性關節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、硬皮病、慢性甲狀腺炎、格雷夫斯病、自身免疫胃炎、糖尿病、自身免疫溶血性貧血、自身免疫中性白細胞減少癥、血小板減少癥、特應性皮炎、慢性活動性肝炎、重癥肌無力、多發(fā)性硬化、炎性腸疾病、結(jié)腸潰瘍、節(jié)段性回腸炎、牛皮癬或宿主移植疾病的自身免疫疾病。
29.根據(jù)權(quán)利要求26的方法，其中所述方法被用來治療或預防選自骨質(zhì)疏松癥、骨關節(jié)炎或多發(fā)性骨髓瘤相關的骨疾病的破壞性骨疾病。30.根據(jù)權(quán)利要求26的方法，其中所述方法被用來治療或預防選自急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、轉(zhuǎn)移性黑素瘤、卡波西肉瘤或多發(fā)性骨髓瘤的增生性疾病。
31.根據(jù)權(quán)利要求26的方法，其中所述方法被用來治療或預防選自膿毒癥、敗血性休克或志賀氏菌病的感染性疾病。
32.根據(jù)權(quán)利要求26的方法，其中所述方法被用來治療或預防選自急性肝炎感染、HIV感染或CMV視網(wǎng)膜炎的病毒性疾病。
33.根據(jù)權(quán)利要求26的方法，其中所述方法被用來治療或預防選自阿爾茨海默氏病、帕金森氏病、腦局部缺血或由創(chuàng)傷導致的神經(jīng)變性疾病。
34.根據(jù)權(quán)利要求26的方法，其中所述方法被用來治療或預防中風中的局部缺血/再灌注、或心肌缺血、腎缺血、心臟病、器官缺氧、或凝血酶誘導的血小板凝集。
35.根據(jù)權(quán)利要求26的方法，其中所述方法被用來治療或預防選自水腫、發(fā)燒痛覺缺失、或疼痛的與前列腺素內(nèi)過氧化物合成酶-2相關的疾病。
36.根據(jù)權(quán)利要求35的方法，其中所述疼痛選自神經(jīng)肌肉痛、頭疼、癌癥疼痛、牙疼或關節(jié)疼。
37.根據(jù)權(quán)利要求26的方法，其中所述方法被用來治療或預防選自實體瘤、眼新血管形成或嬰兒期血管瘤的血管生成性疾病。
全文摘要
本發(fā)明涉及與細胞增殖、細胞死亡和對外界刺激產(chǎn)生應答有關的哺乳動物蛋白激酶p38的抑制劑。本發(fā)明還涉及制備這些抑制劑的方法。本發(fā)明還提供了包含本發(fā)明抑制劑的藥物組合物以及這些組合物在治療或預防各種疾病中的使用方法。
文檔編號C07D241/12GK1244867SQ97181382
公開日2000年2月16日 申請日期1997年12月17日 優(yōu)先權(quán)日1996年12月18日
發(fā)明者G·W·比密斯, F·G·薩利圖羅, J·P·杜非, J·E·科克蘭, E·M·哈倫格湯, M·A·穆科, K·P·威爾森, M·蘇, V·P·加魯勞 申請人:沃泰克斯藥物股份有限公司