專利名稱：苯并氮-苯并氧氮-和苯并硫氮-n-乙酸衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的苯并氮-、苯并氧氮-和苯并硫氮-N-乙酸衍生物，它們的鹽和生物不穩(wěn)定酯，及含這些化合物的藥物制劑，以及制備這些化合物的方法，這些衍生物在氮原子的α-位含氧代基團(tuán)，在3-位被1-(羧烷基)-環(huán)戊基羰基氨基取代。
本
發(fā)明內(nèi)容
是基于發(fā)展具有有價(jià)值的藥理性質(zhì)的新型苯并氮-、苯并氧氮-和苯并硫氮化合物，本發(fā)明內(nèi)容還基于發(fā)展用于治療心臟功能不全的藥物有效物質(zhì)。
現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明新的、在3-位載有任選酯化的1-(羧基烷基)-環(huán)戊甲酰胺基的苯并氮、苯并氧氮-和苯并硫氮-N-乙酸衍生物具有有價(jià)值的心臟藥理性質(zhì)，對(duì)于有優(yōu)良作用樣式的中性肽鏈內(nèi)切酶有獨(dú)特的抑制作用，因而可降低因心肌功能不全而出現(xiàn)的高心臟充盈壓力，并能減輕心臟負(fù)擔(dān)和增強(qiáng)利尿作用。
本發(fā)明涉及通式I的新化合物及式I酸的藥用鹽。 式中，R1為低碳烷氧基-低碳烷基，在低碳烷氧基上可被低碳烷氧基取代，苯基低碳烷基-，或苯氧基低碳烷基，在苯環(huán)上可任選地被低碳烷基、低碳烷氧基或鹵素取代，或是萘基低碳烷基；A為CH2、O或S；R2為氫或鹵素；R3為氫或鹵素；R4為氫或形成生物不穩(wěn)性酯的基團(tuán)；R5為氫或形成生物不穩(wěn)性酯的基團(tuán)。
如果在式I化合物中取代基表示或包含低碳烷基或低碳烷氧基，可為直鏈或支鏈、含有尤其是1-4個(gè)碳原子、優(yōu)選為1-2個(gè)碳原子，并優(yōu)選為甲基或甲氧基。取代基為鹵素或含鹵素取代基時(shí)，尤其可考慮為氟、氯或溴，優(yōu)選氟或氯。
式I化合物中A代表亞甲基、氧或硫，尤其是亞甲基。
式I化合物中的苯環(huán)上可帶有取代基R2和R3，優(yōu)選的是這兩個(gè)取代基R2和R3、或至少一個(gè)取代基為氫。
R1優(yōu)選為含有芳環(huán)的基團(tuán)，例如是任選取代的苯基低碳烷基或苯氧低碳烷基，其中該低碳烷基鏈含1-4個(gè)碳原子，優(yōu)選為1-2個(gè)碳原子。R1尤其可為任選取代的苯乙基，苯環(huán)上可任選被鹵素、低碳烷氧基或低碳烷基單或多取代，或是萘乙基。若R1是被低碳烷氧基取代的低碳烷氧基低碳烷基，則優(yōu)選為低碳烷氧甲基，該低碳烷氧基為1-4個(gè)碳原子，優(yōu)選為1-2個(gè)碳原子，并被低碳烷氧基取代，尤其是甲氧基。
式I化合物可為任選酯化的二羧酸衍生物，根據(jù)使用的方式可以是生物不穩(wěn)性單酯，尤其是R4為形成了生物不穩(wěn)性酯的基團(tuán)和R5為氫的化合物，或者是二羧酸，后者尤其用于靜脈注射。
形成生物不穩(wěn)性酯的基團(tuán)R4和R5宜于為低碳烷基，任選于苯環(huán)上被低碳烷基取代，或被一個(gè)在兩個(gè)鄰位碳原子上相連的低碳亞烷鏈取代的苯基或苯基低碳烷基，在二氧烷環(huán)上任選被低碳烷基取代的二氧烷基甲基，或任選地為在氧甲基上被低碳烷基取代的C2-C6鏈酰氧甲基。若形成生物不穩(wěn)性酯的基團(tuán)R4或R5為低碳烷基，可為非支鏈1-4個(gè)碳原子的烷基，優(yōu)選為2個(gè)碳原子。若形成生物不穩(wěn)性酯的基團(tuán)為任選取代的苯基低碳烷基，亞烷基可含有1-3個(gè)碳原子，優(yōu)選為1個(gè)碳原子。若苯環(huán)被低碳亞烷基取代，可含3-4個(gè)碳原子，尤其是3個(gè)碳原子。含苯基的取代基R4和/或R5尤其宜為苯基、芐基或茚基。若R4和/或R5為任選取代的鏈酰氧甲基，該鏈酰氧基含2-6個(gè)碳原子，優(yōu)選3-5個(gè)，并且最好是支鏈，例如新戊酰氧甲基(叔丁基羰氧甲基)。
本發(fā)明式I新的化合物及其鹽的制備是按皆知的方法由式II的酸或其有反應(yīng)活性的酸衍生物與通式III的胺反應(yīng)，生成通式IV的酰胺。
式中R1、R2、R3和A的含義同上，R4a和R5a為酸保護(hù)基， 式中R1、R2、R3、R4a、R5a和A的含義同上。在式IV化合物中的羧酸保護(hù)基R4a和R5a若不是所希望的形成生物不穩(wěn)性酯的基團(tuán)，可同時(shí)或先后裂解掉，并按需要用游離酸與通式V的醇或通式Va的相應(yīng)的有反應(yīng)活性的衍生物進(jìn)行酯化反應(yīng)R6-OHVR6-X Va式中R6為形成生物不穩(wěn)性酯的基團(tuán)，X為可離去的有反應(yīng)活性的基團(tuán)。根據(jù)需要，所得之式I酸可轉(zhuǎn)變?yōu)樗幱名}，或式I酸的鹽轉(zhuǎn)變?yōu)橛坞x酸。
式I的二羧酸或單酯的藥用鹽可考慮為它們的堿金屬鹽、堿土金屬鹽或銨鹽，例如鈉鹽、鉀鹽或藥用的、無藥理作用的有機(jī)胺鹽，如二乙胺或叔丁胺。
式I化合物含有二個(gè)手性碳原子，即在環(huán)的3位帶有酰胺側(cè)鏈的碳原子和在酰胺側(cè)鏈上帶有R1基的碳原子。因此，該化合物可以多種光學(xué)活性異構(gòu)體或消旋體形式存在，本發(fā)明包括了式I化合物的消旋體混合物及純異構(gòu)體化合物。
式II的酸與式III的胺反應(yīng)生成式IV的酰胺，可按照經(jīng)胺?；纬甚０返某Ｒ?guī)方法進(jìn)行。作為酰化試劑，可用式II的酸或其有反應(yīng)活性的衍生物。作為有反應(yīng)活性的衍生物尤其可考慮用混合酸酐或酰鹵化合物，例如可用式II酸的酰氯或酰溴，或式II酸與有機(jī)磺酸，例如低碳烷基磺酸如甲烷磺酸或芳香族磺酸如苯磺酸形成的混合酯，或被低碳烷基或鹵素取代的苯磺酸，如甲苯磺酸或溴苯磺酸。該?；磻?yīng)可在反應(yīng)條件下呈惰性的有機(jī)溶劑中進(jìn)行，溫度優(yōu)選于-20℃到室溫之間。作為溶劑尤其適用鹵代烷烴如二氯甲烷或芳烴如苯或甲苯，或環(huán)醚如四氫呋喃或二氧六環(huán)，或這些溶劑的混合物。
酰化反應(yīng)尤其當(dāng)?；噭┦鞘絀I的酸與磺酸形成混合酐時(shí)，宜在酸結(jié)合劑的存在下進(jìn)行。作為酸結(jié)合劑宜用在反應(yīng)混合物中可溶性堿，尤其是有機(jī)堿如低碳叔烷胺和吡啶類如三乙胺，三丙胺，吡啶，4-二甲胺基吡啶，4-二乙胺基吡啶或4-吡咯烷基吡啶。加入過量的有機(jī)堿同時(shí)也可以作為溶劑。
式II酸與有機(jī)磺酸形成的混合酸酐宜于將式II的酸與有機(jī)磺酸的酰鹵，尤其是磺酰氯反應(yīng)而就地生成，不必分離而直接與式III的胺化合物反應(yīng)。
若用式II酸本身作為酰化試劑，可在按肽化學(xué)中用作酰胺生成時(shí)已知的縮合劑的存在下將式II酸與式III胺反應(yīng)，縮合劑可這樣促進(jìn)與游離酸形成酰胺，即在形成有反應(yīng)活性的酸衍生物下就地與酸反應(yīng)，這樣的縮合劑的例子，尤其是所謂的烷基碳二亞胺例如環(huán)烷基碳二亞胺，如二環(huán)己基碳二亞胺或1-乙基-3-〔3-(二甲胺基)-丙基〕-碳二亞胺，羰基二咪唑和N-低碳烷基-2-鹵代吡啶鎓鹽，尤其是鹵化物或甲苯磺酸鹽，優(yōu)選為碘化N-甲基-2-氯吡啶鎓鹽(例如參見MukaijamaAngewandte Chemie 91，789-812)。該反應(yīng)在縮合劑存在下，宜于-30℃～+50℃之間進(jìn)行，使用的溶劑如鹵代烷烴和/或芳烷，任選地在酸結(jié)合劑胺的存在下進(jìn)行。
由式II化合物與式III化合物反應(yīng)得到的式IV化合物，其保護(hù)基R4a和R5a若不是式I化合物所希望的形成生物不穩(wěn)性酯的基團(tuán)，可按已知方法裂解掉。
作為保護(hù)基R4a和R5a可選用羧酸官能基常規(guī)用的保護(hù)基加以保護(hù)，然后按已知方法將其裂除。適宜的酸保護(hù)基例如已知于McOmie著“有機(jī)化學(xué)的保護(hù)基團(tuán)”Plenum Press和Greene著“有機(jī)合成中的保護(hù)基團(tuán)”Wiley Interscience出版社中敘述。
若制備的式I化合物中R4和R5是相同的，則在選擇R4a和R5a保護(hù)基時(shí)，起始物II和III中也選用相同的。
若制備的式I化合物中R4和R5是不相同的，則在起始化合物II和III中宜選用不同的保護(hù)基，在不同的條件下按已知的方法再選擇性地裂解掉。
作為實(shí)例可有下列三種不同條件的裂解保護(hù)基1.甲酯或乙酯，易于堿性情況下裂解，而對(duì)酸性或氧解，基本上是穩(wěn)定的；2.叔丁酯，易于酸性情況下裂解，而對(duì)堿性或氫解，基本上是穩(wěn)定的；3.芐酯，易用氫解裂解，或也可用堿性情況下裂解，而對(duì)酸性基本上是穩(wěn)定的。
若制備的是式I的二羧酸化合物，其中R4和R5均是氫，則最好用的保護(hù)基R4a和R5a是酸性可裂解的保護(hù)基，例如用叔丁基，經(jīng)式II與式III化合物反應(yīng)得到的式IV的叔丁酯化合物隨后用酸處理裂解。該裂解作用例如用三氟乙酸處理或用三氟乙酸的鹵代烷烴(如二氯甲烷)溶液處理，或者用HCl氯體在對(duì)反應(yīng)條件下呈惰性的有機(jī)溶劑中(如乙酸乙酯)進(jìn)行裂解。該反應(yīng)可在-25℃到室溫之間進(jìn)行。
若制備的是式I單羧酸化合物，即R4為形成生物不穩(wěn)性酯的基團(tuán)和R5是氫，則用作式II起始化合物的R4a是所需的形成生物不穩(wěn)性酯的基團(tuán)，如乙基，而在式III中的保護(hù)基R5a在裂解時(shí)不會(huì)將R4-OCO-基裂解。若R4-OCO-基是對(duì)酸比較穩(wěn)定的乙酯基，則R5a保護(hù)基例如為酸裂解的叔丁基或可氫解裂解的基團(tuán)如芐基。
若式II化合物的R4a酸敏感性的形成生物不穩(wěn)性酯的基團(tuán)，則式III化合物的保護(hù)基R5a宜選用可氫解掉的基團(tuán)，如芐基，由式II化合物與式III化合物反應(yīng)生成的式IV化合物可將此氫解裂解。氫解是用氫化方法，在催化劑存在下、優(yōu)選用Pd/C催化劑在對(duì)該反應(yīng)呈惰性的有機(jī)溶劑中例如低碳醇，如乙醇或低碳烷酯，如乙酸乙酯中進(jìn)行。催化氫化宜于在4-5正氫壓下室溫下進(jìn)行。
為了制備式I中R4為形成生物不穩(wěn)性酯的基團(tuán)、R5為氫的化合物，還可選用的式II和式III的起始化合物為具有不同反應(yīng)活性的不同的保護(hù)基R4a和R5a，由式II的化合物與式III化合物反應(yīng)得到的式IV化合物，首先裂解掉保護(hù)基R4a，而保留保護(hù)基R5a得到式IV’反應(yīng)產(chǎn)物， 式中R1，R2，R3，R4，R5aA的含義同前。所需的形成生物不穩(wěn)性酯的基團(tuán)R4通過將式IV’化合物的游離羧基用式V或Va化合物反應(yīng)引入，最后由得到的式IV化合物裂解掉保護(hù)基R5a。
這樣，例如由式IV中R4a為酸可裂解的保護(hù)基尤其是叔丁基、R5a為酸穩(wěn)定的保護(hù)基例如芐基的化合物，開始只將R4a酸性裂解掉。得到的式IV’的單羧酸按照常規(guī)的酯化方法與式V醇或與式Va的相應(yīng)化合物進(jìn)行酯化。在式Va化合物中可裂解的有反應(yīng)活性的基團(tuán)X宜于為鹵素，尤為氯或溴，或是有機(jī)磺酸基，例如低碳烷基磺酸基，如甲烷磺酸基，或芳香磺酸如苯磺酸，或苯環(huán)上被低碳烷基或鹵素取代的苯磺酸，如甲苯磺酸。為進(jìn)行酯化，可將式V的醇與例如式IV’的酸或該酸的有反應(yīng)活性的衍生物按已知的醇?；椒ㄟM(jìn)行反應(yīng)。該反應(yīng)可按照上述式II與式III化合物反應(yīng)的條件進(jìn)行。
用類似的方法選擇不同的保護(hù)基也可制備式I中R5為形成生物不穩(wěn)性酯的基團(tuán)、R4為氫或與R5不同的形成生物不穩(wěn)性酯的化合物。
在上述的反應(yīng)中，式II和III的起始化合物的手性中心未發(fā)生改變，所以根據(jù)起始化合物的類型可得到式I化合物的純異構(gòu)體化合物或異構(gòu)體的混合物。為了制備式I化合物的純異構(gòu)體和光活單一的化合物，宜將式II的純對(duì)映體化合物與式III的純對(duì)映體化合物反應(yīng)。若式II的純對(duì)映體化合物與式III的消旋化合物反應(yīng)，或式II的消旋化合物與式III的純對(duì)映體化合物反應(yīng)，則往往得到兩個(gè)差向異構(gòu)體的混合物，并可按需要用已知方法加以分離。式II的消旋化合物與式III的消旋化合物反應(yīng)，得到4種相應(yīng)的異構(gòu)體混合物，并可根據(jù)需要用已知方法加以分離。
式II的起始化合物可按已知方法得到。
例如式IIa的化合物可由通式VI的丙烯酸衍生物與式VII的環(huán)戊羧酸反應(yīng)得到， 式中R4a含義同上，R1a與R1的含義相同，但低碳烷氧低碳烷氧甲基除外。該反應(yīng)可按已知方法、于麥克爾加成反應(yīng)的條件、于惰性有機(jī)溶劑中將環(huán)戊羧酸與能將環(huán)戊羧酸形成二價(jià)陰離子的強(qiáng)堿反應(yīng)，然后與式VI的丙烯酸酯衍生物反應(yīng)。溶劑宜用醚，尤為環(huán)醚，例如四氫呋喃。強(qiáng)堿宜用非親核性的有機(jī)氨基堿金屬，例如二并丙基鋰氨。環(huán)戊羧酸于四氫呋喃中宜與二當(dāng)量的二異丙基鋰氨反應(yīng)，然后再與式VI的化合物反應(yīng)。該反應(yīng)溫度可于-70℃～0℃間進(jìn)行。
式IIb化合物可由式VIII的鹵代羧酯酯與式VII的環(huán)戊羧酸反應(yīng)，得到的式IX反應(yīng)產(chǎn)物與通式Xb化合物反應(yīng)而得到。 式中R4a的含義同前，R1b為低碳烷氧低碳烷氧甲基，Y是鹵素； 式中R4a、R1b、和X的含義同前，式VIII的鹵代羧酸酯與式VII的環(huán)戊羧酸反應(yīng)，可按已知方法于對(duì)此反應(yīng)條件下呈惰性的溶劑中、在可使環(huán)戊羧酸形成二價(jià)陰離子的強(qiáng)堿存在下進(jìn)行。例如該反應(yīng)可按環(huán)戊羧酸與式VI化合物反應(yīng)所述的條件下進(jìn)行。接下的式IX的酸與式Xb的化合物的反應(yīng)可按已知方法在對(duì)羧酸酯進(jìn)行α-烷基化的適宜條件下、于對(duì)該反應(yīng)條件呈惰性的有機(jī)溶劑中、在強(qiáng)堿存在下進(jìn)行。所用的式Xb化合物優(yōu)選為X是氯或溴。溶劑宜用醚，尤為環(huán)醚，例如四氫呋喃或二氧六環(huán)。強(qiáng)堿用堿金屬氫化物或氨化物，如二異丙氨鋰。
式II化合物中帶有R1基團(tuán)的碳原子為手性中心，在合成時(shí)可形成其消旋物。該光活化合物可按已知方法自消旋混合物中得到，例如用手性分離材料進(jìn)行層析分離，或者用適宜的光活性堿反應(yīng)得到，例如α-甲基芐胺或偽麻黃堿，然后經(jīng)分步結(jié)晶所得鹽而分開光學(xué)對(duì)映體。
式VI的丙烯酸酯衍生物可按已知方法由通式XI(二低碳烷基膦?；?-乙酸酯衍生物與甲醛反應(yīng)得到。 式中R4a和R1a含義同前，R7和R8各為低碳烷基，優(yōu)選為甲基或乙基，該反應(yīng)是在對(duì)此反應(yīng)條件呈惰性的有機(jī)溶劑中于堿性條件下進(jìn)行。例如式XI化合物與多聚甲醛在醚中、優(yōu)選為環(huán)醚如四氫呋喃中、在堿存在下，優(yōu)選為非親核性堿金屬醇化物如叔丁醇鉀存在下，溫度為-20℃-30℃之間進(jìn)行反應(yīng)。
式XI化合物是按已知方法將通式XII的膦酰基乙酸衍生物與式Xa化合物反應(yīng)得到 式中R4a、R7、R8、Ra和X的含義同前所述。該反應(yīng)可在常規(guī)進(jìn)行烷基化的條件下于該反應(yīng)條件下呈惰性的非質(zhì)子性極性有機(jī)溶劑中、于堿存在下、溫度為0-80℃之間進(jìn)行。優(yōu)選加入的式Xa的化合物中X為鹵素，尤其是溴、碘或甲苯磺酸酯。溶劑例如宜用酰胺，如二甲基甲酰胺或也可用醚。堿用非親核性堿金屬醇化物如叔丁醇鉀。
式VI化合物也可用通式XIII的丙二酸衍生物與甲醛在堿性條件下按已知方法反應(yīng)， 式中R4a和R1a含義同前。因此式VIII的丙二酸衍生物能與例如甲醛水溶液反應(yīng)，反應(yīng)是在有機(jī)仲胺存在下，尤其哌啶存在下、溫度為0-30℃，優(yōu)選低于室溫進(jìn)行。式VIII的丙二酸衍生物也可與多聚甲醛在吡啶中于40-60℃下反應(yīng)。
式XIII的丙二酸單酯可這樣得到即把式XIV的丙二酸二酯與式Xa的化合物反應(yīng)，R4aOOC-CH2-COOR9XIV式中R4a含義同上，R9為低碳烷基，尤其為甲基，或芐基。得到的式XV的丙二酸二酯衍生物經(jīng)部分水解轉(zhuǎn)化成式XIII的相應(yīng)丙二酯單酯衍生物， 式中R1a，R4a和R9含義同前。
在式XIV的丙二酸二酯中引入基團(tuán)R1a是按已知的方法將式XIV酯與式Xa化合物于非質(zhì)子性極性有機(jī)溶劑中，優(yōu)選為二甲基甲酰胺中、在堿的存在下，如非親核性堿金屬醇化物如叔丁醇鉀、溫度為0℃-80℃反應(yīng)。該反應(yīng)例如于式XI化合物與式Xa化合物反應(yīng)所述的條件下進(jìn)行。
得到的式XV取代的丙二酸二酯可按已知方法裂解掉R9基團(tuán)，轉(zhuǎn)變成相應(yīng)的式XIII丙二酸單酯。若R4a和R9保護(hù)基是兩個(gè)不同反應(yīng)活性的基團(tuán)，則在裂解R9時(shí)宜選用這樣的條件，即不會(huì)攻擊R4a基團(tuán)。若R9是芐基，則按已知方法用氫解法裂解。低碳烷酯R9按照已知方法、根據(jù)烷基的性質(zhì)用酸性或堿性條件下進(jìn)行水解法裂解。若R9為乙基，優(yōu)選用堿性水解方法。為此，將式XV的烷基酯于低碳醇或低碳醇與水的混合物中用堿金屬氫氧化物如氫氧化鉀處理。若R4a與R9相同，則所用的堿金屬氫氧化物量要保持小到僅部分進(jìn)行水解。
式III化合物用已知方法由通式XVI化合物與通式XVII化合 X-CH2-COOR5aXVII式中R2、R3、A、R5a和X的含義同前，R10R11N-為經(jīng)氨基保護(hù)基保護(hù)的氨基。在生成的式XVIII化合物中由R10R11N-游離出氨基， 式中R2，R3，R5a，A和R10R11N-的含義同前。式XVI化合物與式XVII化合物的反應(yīng)按照對(duì)酰胺烷化的已知方法進(jìn)行。優(yōu)選加入的式XVII的化合物是X為鹵素，優(yōu)選為溴或碘。反應(yīng)在非質(zhì)子極性有機(jī)溶劑中，例如二甲基甲酰胺或環(huán)醚如四氫呋喃中堿存在下進(jìn)行。堿宜用非親核性堿例如叔丁醇鉀。根據(jù)需要該反應(yīng)也可在堿金屬氫氧化物如氫氧化鉀存在下，于兩相系統(tǒng)和相轉(zhuǎn)移催化劑例如四低碳烷銨鹵化物如溴化四丁銨的存在下進(jìn)行。
在得到的式XVIII化合物中然后用裂解氨基保護(hù)基的已知方法將氨基游離出。為了保護(hù)氨基，用已知的容易再將氨保護(hù)基裂解掉的保護(hù)基，例如用肽化學(xué)中已知的保護(hù)基。適宜的保護(hù)基例如敘述于E.McOmie“有機(jī)化學(xué)中的保護(hù)基”(Plenum出版社1971)。例如適宜的保護(hù)基為鄰苯二甲酰亞胺基、叔丁氧羰基或芐氧羰基。但在選擇保護(hù)基R5a時(shí)，要使后來在裂解條件下，R5a不受攻擊。鄰苯二甲酰亞胺基在堿性介質(zhì)中是適宜的可裂解掉的保護(hù)基，可用乙醇胺或肼在提高的溫度下例如70-90℃之間加以裂解，鄰苯二甲酰亞胺基作為保護(hù)基時(shí)例如適用于化合物中A為硫原子的保護(hù)基。酸性可裂解的保護(hù)基例如宜用叔丁氧羰基，經(jīng)酸處理，例如用三氟乙酸或氯化氫氣體于乙酸乙酯的溶液中再加以裂解，化合物中A為氧時(shí)，宜用叔丁氧羰基作為保護(hù)基。作為氫化裂解的保護(hù)基例如宜用芐氧羰基，在鈀/碳催化劑存在下用氫化法可將其裂解掉。
式III化合物在帶有氨基的碳原子上含有手性中心。若用光學(xué)純的式XVI起始化合物，則得到式III的光學(xué)純化合物。這尤其是在A為氧或硫的化合物為如此。若用的式XVI化合物為消旋體，則得到式III的消旋化合物，這通常是A為亞甲基的化合物。式III化合物的消旋體混合物可按已知方法拆分成其光學(xué)異構(gòu)體，例如用手性分離材料經(jīng)層析分離，或與適宜的光活酸例如酒石酸反應(yīng)，然后用分步結(jié)晶法將得到的鹽分離成光活異構(gòu)體。為了提高光學(xué)異構(gòu)體的收率，在與適宜的光活酸反應(yīng)時(shí)，一種異構(gòu)體與該光活酸形成的鹽大部分沉淀的同時(shí)或其后，在反應(yīng)混合物溶液中剩余的異構(gòu)體加入芳香醛例如苯甲醛，使其再消旋化。這樣，因與醛形成亞胺而引起手性中心的消旋化。
式XVI化合物可按已知方法制備，例如通式XVIa的化合物可由通式XIX中的鹵素Y按已知方法被R10R11N-基團(tuán)取代而得到 式中R2，R3，R10R11N-和Y的含義同前。例如式XIX化合物與胺R10R11NH的堿金屬鹽如鄰苯二甲酰亞胺鉀反應(yīng)。該反應(yīng)于惰性非質(zhì)子性有機(jī)溶劑中，優(yōu)選為二甲基甲酰胺、溫度為40-80℃之間進(jìn)行。
式XIX化合物可按已知方法由通式XX肟化合物經(jīng)貝克曼重排而得到。 式中R2、R3和Y的含義同前，反應(yīng)中式XX化合物用酸處理，按照貝克曼重排反應(yīng)的條件進(jìn)行。式XX化合物宜于用多聚磷酸于60-90℃間處理，轉(zhuǎn)位生成式XIX化合物。
式XX肟可由式XXI環(huán)酮制備， 式中R2與R3的含義同前，該式XXI酮首先為引入Y基團(tuán)而用鹵素處理，得到的鹵代酮與羥胺反應(yīng)。該酮的α-鹵代和以后的肟化宜于整鍋煮方式進(jìn)行。為此，式XXI酮首先在惰性有機(jī)溶劑如低碳醇如甲醇中用鹵素處理，然后在反應(yīng)混合物中加入羥胺。加入的羥胺宜用其鹽，例如鹽酸鹽，然后向反應(yīng)混合物中加入水，該反應(yīng)于0℃-40℃、優(yōu)選于室溫下進(jìn)行。
通式XVIb的化合物可按已知方法將通式XXII芳香氨基酸化 式中R2，R3和R10R11N-基的含義同前，Aa為氧或硫。式XXII化合物的環(huán)化是經(jīng)脫水并按已知形成內(nèi)酰胺的方法而得到。該環(huán)化例如在肽化學(xué)中形成酰胺的已知酸活化的縮合劑如碳二亞胺的存在下進(jìn)行的，該反應(yīng)條件是在惰性極性有機(jī)溶劑中例如二甲基甲酰胺中進(jìn)行。該反應(yīng)例如在式II與式III化合物反應(yīng)所述相同的條件下進(jìn)行。羧基活化劑也可用氰代膦酸二乙酯，該反應(yīng)在有機(jī)堿如三低碳烷胺如三乙胺存在下進(jìn)行。
式XXII化合物可用已知方法將通式XXIII1相應(yīng)的硝基化合物還原得到 式中R2，R3，Aa和R10R11N-基的含義同前。硝基的還原可按已知將硝基苯化合物還原成苯胺化合物方法在鈀/碳催化劑存在下用催化氫化法進(jìn)行。該還原反應(yīng)也可用其它的使氫就地生成的還原劑例如金屬鐵/鹽酸或金屬鋅/鹽酸進(jìn)行。
式XXIII化合物可用已知方法將通式XXIV鄰氟代硝基苯化合物與通式XXV酸反應(yīng)而得到 式中R2、R3、Aa和R10R11N-基的含義同前。式XXV的化合物為絲氨酸或半胱氨酸衍生物，其氨基被保護(hù)基保護(hù)。該反應(yīng)是在惰性有機(jī)溶劑中和有堿的存在下進(jìn)行。氟代硝基苯與具有強(qiáng)親核性半胱氨酸衍生物反應(yīng)可在低碳醇或醇/水混合液中在弱堿如碳酸氫鈉存在下進(jìn)行。對(duì)于親核性較弱的絲氨酸衍生物的反應(yīng)，宜用強(qiáng)堿如堿金屬氫化物于極性有機(jī)溶劑如二甲基甲酰胺中進(jìn)行。
在形成了式XXIII化合物后，起初在式XXV的化合物中已有的氨基保護(hù)基可根據(jù)需要按已知方法交換成另一種氨基保護(hù)基，該保護(hù)基與R5a的反應(yīng)活性可很好地區(qū)別開，因而適于對(duì)式XXIII化合物作進(jìn)一步處理。
式I化合物及其藥用鹽具有重要的藥理性質(zhì)，尤其是這類物質(zhì)對(duì)中性肽鏈內(nèi)切酶(NEP)有抑制作用。NEP是一種使內(nèi)源性排鈉肽降解的酶，例如是動(dòng)脈排鈉肽(ANP)降解的酶，這些物質(zhì)由于抑制了NEP活性，能夠改善可被NEP攻擊的排鈉肽的生物活性和存留時(shí)間，因而適于治療由于這類激素而影響的疾病狀態(tài)，尤其是心機(jī)能不全。
心機(jī)能不全是指由于病態(tài)造成的心收縮力的降低，導(dǎo)致反射性地提高了外周的阻力，從而導(dǎo)致肺循環(huán)和心臟本身的血塊栓塞。結(jié)果是心臟有較高的充盈壓力，引起了心房和心室壁的膨脹。在這種情況下心臟如同一個(gè)內(nèi)分泌器官，能夠產(chǎn)生并分泌ANP到血循環(huán)中，而ANP具有顯著的血管松弛和利尿/排鈉作用。ANP的作用是降低心臟充盈壓力。其特征是利尿/排鈉(減少循環(huán)中的血容量)，是通過降低外周阻力實(shí)現(xiàn)的(預(yù)負(fù)荷降低和后負(fù)荷降低)。ANP的心臟去負(fù)荷作用被認(rèn)為是內(nèi)源性心保護(hù)機(jī)理起作用的，但ANP的作用是短時(shí)的，因?yàn)樵摷に乜杀籒EP裂解。
本發(fā)明化合物由于有抑制NEP的作用，它可以改善ANP的心保護(hù)作用機(jī)理，并且在加強(qiáng)利尿/排鈉作用方面，尤其表現(xiàn)有很高的活性。
本發(fā)明化合物的特征是，有優(yōu)良的作用樣式和良好的耐受性，并對(duì)NEP有選擇性的抑制作用。此外，對(duì)內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶(ECE)只有較小的抑制作用。在較嚴(yán)重程度的心功能不全狀態(tài)下，會(huì)反射性地使血中血管緊張素II、內(nèi)皮素和兒茶酚胺水平提高，以致會(huì)進(jìn)一步增高了外周阻力和心臟充盈壓力，因此使心肌肥大和膨脹擴(kuò)大。抑制ECE的性質(zhì)從而可增強(qiáng)本發(fā)明化合物對(duì)外周阻力的降低作用。
這些化合物的抑制NEP和ECE作用和增強(qiáng)利尿/排鈉性質(zhì)，可用體外和體內(nèi)的藥理試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)方法證明。
藥理研究方法的說明1.最小毒性劑量的測(cè)定體重20-25g雄性小鼠，口服受試物質(zhì)最大劑量為300mg/kg，給藥后仔細(xì)觀察3小時(shí)的毒性征候。還要記錄給藥后72小時(shí)內(nèi)的全部癥候和死亡性質(zhì)。同樣觀察和記錄伴隨癥狀。當(dāng)觀察到有動(dòng)物死亡和較強(qiáng)毒性癥狀時(shí)，再用另外的小鼠給較小劑量，直到不再出現(xiàn)毒性癥狀?？梢鹚劳龊蛷?qiáng)毒性癥狀的最低劑量為列于下表A的最低毒性劑量。在表A中列出的實(shí)施例號(hào)就是后面的制備實(shí)施例號(hào)。
表A
2.受試物質(zhì)對(duì)體外NEP抑制作用的研究和對(duì)該酶的親合力為了證明本發(fā)明化合物對(duì)中性內(nèi)切肽酶(NEP)的抑制作用，在體外標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)中測(cè)試受試物質(zhì)對(duì)NEP的酶活性引起的蛋氨酸-腦菲肽(Met-Enkephalin)水解的抑制作用。為此，測(cè)定Ki值作為該物質(zhì)抑制作用的尺度(抑制常數(shù))。受試物質(zhì)的酶抑制作用的Ki值是酶-受試物質(zhì)復(fù)合物或(酶-底物)-受試物質(zhì)復(fù)合物的離解常數(shù)，因而單位是濃度。試驗(yàn)方法為進(jìn)行試驗(yàn)，各制備不同培育溶液的100μl的樣品，每個(gè)培育溶液中含有10ng純凈的NEP(E.C.3.4.24.11)并且都有不同量的受試物質(zhì)和底物(蛋氨酸-腦菲肽)，和50mM Tris緩沖液(三-(羥甲基)胺基甲烷/HCl，PH7.4)。
每個(gè)受試物質(zhì)制成24個(gè)不同的培育溶液，有3種不同的溶度，并與2、5、7、10、12、15、40和100μM的蛋氨酸-腦菲肽相混合。
每次測(cè)定，也要同時(shí)進(jìn)行兩次對(duì)照培育溶液的試驗(yàn)，一次酶對(duì)照液中不含受試物質(zhì)，另一次底物對(duì)照液既不含酶也不含受試物質(zhì)。
培育溶液在振蕩水浴37℃保溫45分鐘，在15分鐘后，加入底物(Met-腦菲肽)使酶反應(yīng)開始，培育時(shí)間終結(jié)時(shí)，于95℃加熱5分鐘，使反應(yīng)中止。然后將中止的培育液于12,000Xg離心3分鐘，上清液測(cè)定未發(fā)生反應(yīng)的底物的濃度和經(jīng)酶反應(yīng)生成的水解產(chǎn)物的濃度。為此，每個(gè)上清液樣品于疏水化的硅膠上進(jìn)行HPLC(高壓液相色譜)分離，用分光光度法于波長207nm處測(cè)定酶反應(yīng)產(chǎn)物和未反應(yīng)之底物。為進(jìn)行HPLC分離，用反相分離柱(4.6×250mm)，填充物質(zhì)為Encapharm*100RP18，粒度5μ。溶液流速1.4ml/min，柱溫40℃。流動(dòng)相A為5mMH3PO4，PH2.5，流動(dòng)相B為乙腈+1％5mMH3PO4，PH2.5。
由各個(gè)試樣測(cè)得的水解產(chǎn)物濃度和未反應(yīng)的底物濃度。按已知方法，計(jì)算各受試物質(zhì)的Ki值。下表B列出了受試物質(zhì)的Ki值。表B中列出的實(shí)施例號(hào)是后面的制備實(shí)施例號(hào)。
表B
3.受試物質(zhì)對(duì)ECE抑制作用的體外測(cè)試本發(fā)明化合物對(duì)內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶(ECE)的抑制作用的確定是在體外標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)中測(cè)試受試物質(zhì)對(duì)由于ECE酶活性誘導(dǎo)的Big-內(nèi)皮素1(BigET-1)水解裂解的抑制作用。為此，測(cè)定受試物質(zhì)的抑制作用IC50值，受試物質(zhì)的酶抑制作用IC50值是能夠抑制ECE酶活性50％時(shí)的受試物質(zhì)的濃度。制備含有ECE的內(nèi)皮細(xì)胞膜成分中國地鼠卵細(xì)胞(以下簡寫CHO細(xì)胞)，用來進(jìn)行人的ECE重組實(shí)驗(yàn)(見Schmidt等，F(xiàn)ederation of European BiochemicalSocietie Letters 356(1994)，238-243)，使細(xì)胞溶解后，經(jīng)10000xg離心10分鐘，分出細(xì)胞膜。經(jīng)3次再懸浮和多次離心操作洗滌細(xì)胞膜。含有ECE的細(xì)胞膜組分再懸浮于Tris/HCl緩沖液中(PH7.0含250mM NaCl)，于-70℃冷凍保存，做酶實(shí)驗(yàn)時(shí)化開。試驗(yàn)步驟為進(jìn)行試驗(yàn)，各制備100μl不同培育溶液的樣品，每個(gè)培育溶液中含5μg的含有ECE的內(nèi)皮細(xì)胞膜的蛋白，不同量的受試物質(zhì)和24μM的底物(合成肽H2N-Asp-Ile-Ala-Trp-Phe-Asn-Thr-Pro-Glu-His-Val-Val Pro-Tyr-Gly-Leu-Gly-COOH)，和100mM Tris緩沖液(PH7.0，含250mM NaCl)。此外，在每個(gè)培育溶液中還含有100μM Thiorphan和10μM卡托普利和1mM苯磺酰氟，100μM胃酶抑素A(蛋白酶抑制劑)和100μMAmastatin(蛋白酶抑制劑)。
每個(gè)受試物質(zhì)制成6個(gè)不同的培育溶液，三種不同的濃度，每個(gè)進(jìn)行雙次測(cè)定。
每次試驗(yàn)各進(jìn)行不合酶的對(duì)照實(shí)驗(yàn)。
于37℃預(yù)培育15分鐘后，加入底物。加入底物后使酶反應(yīng)開始，于37℃反應(yīng)60分鐘，然后于95℃加熱培育液5分鐘，使反應(yīng)中止。由于酶促反應(yīng)由底物生成的水解產(chǎn)物H2N-Asp-Ile-Ala-Trp-COOH和H2N-Phe-Asn-Thr-Pro-Glu-His-Val-Val-Pro-Tyr-Gly-Leu-Gly-COOH，用高壓液相層析進(jìn)行測(cè)定。HPLC測(cè)定的條件按前述的對(duì)NEP抑制作用的體外測(cè)定進(jìn)行。
由不同的檢樣測(cè)定的水解產(chǎn)物的濃度，按已知方法計(jì)算每個(gè)受試物質(zhì)的IC50，下表C列出了受試物質(zhì)的IC50。
表C
4.體內(nèi)方法測(cè)定受試物質(zhì)對(duì)容積負(fù)載大鼠利尿作用/排鈉作用的影響用容積負(fù)載大鼠進(jìn)行體內(nèi)活性試驗(yàn)。該實(shí)驗(yàn)是將等滲氯化鈉溶液灌注大鼠，以造成心臟高充盈狀態(tài)，從而引起ANP釋放，導(dǎo)致利尿/排鈉。試驗(yàn)方法用體重200-400g雄性Wistar大鼠進(jìn)行試驗(yàn)。在神經(jīng)性鎮(zhèn)痛(芬太尼；Hypnorm楊森公司制造)下，將導(dǎo)管插入右大腿靜脈中，以進(jìn)行后基底灌注，用等滲氯化鈉溶液使呈容積負(fù)載。打開腹腔后，第二根導(dǎo)管插到膀胱中，結(jié)緊輸尿管，以便測(cè)定尿體積、排鈉量、排鉀量。
再將腹腔縫合，在整個(gè)試驗(yàn)的2小時(shí)過程中，持續(xù)灌注氯化鈉溶液(0.5ml/100g體重)。在30分鐘的平衡期后，加入受試物質(zhì)之前，每10分鐘接尿樣，共3次。這些預(yù)先值(加藥前值)的測(cè)定，是為了檢查對(duì)受試動(dòng)物發(fā)生的連續(xù)性尿量的影響。
然后，將含有受試化合物的溶液靜脈注射(股靜脈注射)或口服(用灌胃針頭)給大鼠，每組10只。用兩種給藥途徑分別給對(duì)照組以安慰劑溶液(不含有效物質(zhì))。受試物質(zhì)靜脈注射5分鐘后或口服120分鐘后，靜脈注射大體積的氯化鈉溶液(在2分鐘內(nèi)注入2ml/100g體重)給大鼠，并在6分鐘內(nèi)收集尿量。在這段時(shí)間內(nèi)測(cè)量降低的尿量，從而得到鈉和鉀含量。由該降低的尿量可以得到在容積載負(fù)的情況下，與開始時(shí)數(shù)值相比較所增高的排泄量。
在下表D中列出了在容積載負(fù)情況下，給了受試物質(zhì)后，所出現(xiàn)的尿排泄量增加的％數(shù)(以容積載負(fù)情況下只給安慰劑而增高的尿排泄量為基計(jì))。此外，也得出在容積載負(fù)情況下給受試物質(zhì)后排泄的鈉和鉀的％量(以容量載負(fù)情況下給安慰劑后的鈉和鉀排出量計(jì))。
表D
*n＝未測(cè)以上試驗(yàn)結(jié)果表明，式I化合物對(duì)NEP有高親合力，通過抑制該ANP-降解酶，提高了血液中ANP水平，因此呈劑量依賴性地提高了因ANP引起的利尿和排鈉作用，而對(duì)鉀的排泄基本上沒有影響。
根據(jù)上述的作用，式I化合物作為藥物適于對(duì)大哺乳動(dòng)物、尤其是人治療心機(jī)不全，促進(jìn)排尿/排鈉，尤其是心力不全的患者。式I的二羧酸及其鹽宜于腸胃道外用藥，尤其是靜脈注射給藥形式；式I的單酯或雙酯宜于口服給藥方式。給藥劑量因個(gè)體而異，根據(jù)受治疾病的性質(zhì)，所用的藥物，用藥劑型而劑量有變化。例如胃腸道外給藥劑型的含有效成分一般比口服劑量低。對(duì)于大哺乳動(dòng)物、尤其是人用藥的劑量一般是每個(gè)劑型單元含1-200mg有效成分。
式I化合物作為治療藥與常規(guī)用的藥用助劑制成格林制劑，例如片劑，膠囊劑，栓劑或溶液。這些格林制劑可按已知方法制備，與常規(guī)的固體或液體載體混合，如乳糖，淀粉，或滑石粉，或液體石臘，和/或與常規(guī)的藥用助劑合用，如片劑崩解劑，助溶劑或防腐劑。
下面的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但不以任何方式限制本發(fā)明范圍。
這些新化合物的結(jié)構(gòu)用光譜方法確證，尤其是NMR、質(zhì)譜、紅外或紫外法，并且必要時(shí)測(cè)定旋光度。實(shí)施例13-{1-〔2’(乙氧羰基)-4’-苯基-丁基〕-環(huán)戊-1-羰胺基}-2，3，4，5-四氫-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸叔丁酯A)于15℃下將123.4g叔丁醇鉀分次加到160.1g丙二酸二乙酯于1升二甲基甲酰胺的溶液中。反應(yīng)混合物攪拌30分鐘，然后于室溫下滴入207.7g溴苯乙烷于200ml的二甲基甲酰胺溶液中。反應(yīng)混合物于60℃加熱1小時(shí)，冷卻之。減壓蒸除二甲基甲酰胺，剩余物與甲基-叔丁基醚和水混合。分離有機(jī)相，用水洗滌，硫酸鈉干燥，蒸干。剩余的油狀物為粗品，減壓蒸餾以純化。得202.5g2-乙氧羰基-4-苯基丁酸乙酯，沸點(diǎn)(KP1.5)＝148-153℃。
B)于冰冷條件下將6.17g氫氧化鉀于76ml水的溶液加到23.6g上面得到的二酯產(chǎn)物于285ml乙醇的溶液中。室溫下攪拌混合物數(shù)小時(shí)。減壓蒸除乙醇，剩余物與甲基叔丁基醚和水混合。分開有機(jī)相，水相在冰冷條件下用稀鹽酸水溶液酸化，用甲基叔丁基醚多次萃取。合并有機(jī)相，用水洗滌，硫酸鈉干燥，減壓蒸發(fā)，得到20.2g油狀粗產(chǎn)物，為2-羧基-4-苯丁酸乙酯，不必精制而進(jìn)入下一步加工。
C)在冰冷條件下，相繼將11ml 35％甲醛水溶液和9.23ml哌啶加到20.2g上述制的產(chǎn)物中。室溫?cái)嚢钄?shù)小時(shí)，然后用甲基叔丁基醚稀釋，用硫酸氫鉀水溶液和水洗滌，硫酸鈉干燥，蒸干。剩余物減壓干燥，得14.8gα-(2-苯乙基)-丙烯酸乙酯。
D)在氮?dú)夥障?，?5.2ml二異丙胺溶解于150ml無水四氫呋喃中，冷卻至-35℃。將100ml1.6摩爾濃度的丁基鋰于正己烷的溶液滴加到該溶液中。然后，將反應(yīng)混合液于0℃攪拌30分鐘。然后滴入8.1ml環(huán)戊甲酸于20ml無水四氫呋喃溶液。0℃下攪拌該混合物2小時(shí)。然后滴入16.8g于C)步得到的丙烯酸酯于20ml無水四氫呋喃的溶液。0℃攪拌2小時(shí)，然后于-15℃放置數(shù)小時(shí)。用10％鹽酸水溶液酸化反應(yīng)混合物，正己烷萃取。有機(jī)層用半飽和的碳酸氫鈉水溶液滌滌7次，水洗1次。硫酸鈉干燥，減壓蒸除溶劑，得到的剩余物為粗品，經(jīng)快速硅膠層析，用正己烷/乙酸乙酯(8∶2)洗脫，得19.6g純凈的1-〔2’-(乙氧羰基)-4’-苯丁基〕-環(huán)戊-1-甲酸，熔點(diǎn)68-69℃。
E)冰冷下將108.3g溴慢慢滴入100gα-四氫萘酮于820ml甲醇的溶液中。室溫?cái)嚢璺磻?yīng)混合物30分鐘，然后室溫下先加入122.4g鹽酸羥胺，后加入110ml水。室溫?cái)嚢柙摶旌衔?天。再加入493ml水。1小時(shí)后沉出白色沉淀。該反應(yīng)混合物再攪拌3天，于5℃冷卻。濾集沉淀。水洗，40℃減壓干燥，得136.7g 2-溴-3，4-二氫萘-1(2H)-酮-肟，熔點(diǎn)130-132℃。
F)79.5g上面制得的肟分次加到熱至80℃的452g多聚磷酸中，于80℃攪拌18小時(shí)。然后小心地用710ml水稀釋，并于室溫下攪拌2小時(shí)。濾集生成的沉淀，用水、碳酸氫鈉水溶液和水洗滌，最后用甲基叔丁基醚洗滌，于60℃氫氧化鉀上干燥，得66.6g3-溴-4，5-二氫-1H-1-苯并氮-2(3H)-酮，熔點(diǎn)168-170℃。
G)80g上制的產(chǎn)物懸浮于140ml二甲基甲酰胺中加入72.6g鄰苯二甲酰亞胺鉀于205ml二甲基甲酰胺的溶液，60℃攪拌該混合物16小時(shí)。冷卻至室溫，慢慢滴加入800ml水，并于冰冷下攪拌2小時(shí)。濾集結(jié)晶性產(chǎn)物，先用水/二甲基甲酰胺混合液洗滌，再用甲基叔丁基醚洗滌，60℃減壓干燥2日，得73.3g 4，5-二氫-3-鄰苯二甲酰亞胺基-1H-1-苯并氮-2(3H)-酮，熔點(diǎn)185-195℃。
H)于冰冷下將12.3叔丁醇鉀于二甲基甲酰胺的溶液加到上述制的27g產(chǎn)物于90ml二甲基甲酰胺的懸浮液中。于冰冷卻下攪拌30分鐘后，于1小時(shí)、0-5℃內(nèi)滴加入20.7g溴乙酸叔丁酯，0℃攪拌1小時(shí)。溫?zé)嶂?0℃，于3小時(shí)內(nèi)滴加入164ml水，再于30℃攪拌1小時(shí)。傾析出生成之沉淀，剩余固體物用甲基-叔丁基醚結(jié)晶，濾集結(jié)晶，用水、甲基叔丁基醚洗滌，60℃減壓干燥，得26.3g 2，3，4，5-四氫-2-氧代-3-鄰苯二甲酰亞胺基-1H-1-苯并氮-1-乙酸叔丁酯，熔點(diǎn)194-197℃。
I)7g上制的酯，于5分鐘內(nèi)加到80℃的13.8ml乙醇胺中，5分鐘后，呈澄清溶液，冷卻至室溫，用105ml甲苯稀釋，該溶液和140ml5％氯化鈉溶液一起振搖，分出有機(jī)相，硫酸鈉干燥，蒸干。甲基叔丁基醚結(jié)晶，得4.0g3-氨基-2，3，4，5-四氫-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸叔丁酯，熔點(diǎn)117-118℃。
J)2.9g上面得到的胺與3.2g于D)項(xiàng)得到的酸溶解于100ml二氯甲烷中，冰冷卻下，向反應(yīng)混合物中加入2.2mlN-甲基嗎啉、1.27g羥基苯并三唑，和3.81gN-乙基-N-(3-二甲胺基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽。室溫?cái)嚢璺磻?yīng)混合物1小時(shí)，用二氯甲烷稀釋，先后用水、硫酸氫鉀水溶液、水、碳酸氫鈉水溶液洗滌，再用水洗滌。有機(jī)相用硫酸鈉干燥，減壓蒸干，得到的粗品用硅膠柱層析快速層析(略提高壓力)，用正己烷/乙酸乙酯洗脫。洗脫劑中的乙酸乙酯含量由開始的1∶9到3∶7。得純凈的本標(biāo)題化合物5.4g，為油狀物。IR譜(涂膜)3400cm-1，1725cm-1，1660cm-1.實(shí)施例23-{1-〔2’-(乙氧羰基)-4’-苯基-丁基〕-環(huán)戊-1-甲酰胺基}-2，3，4，5-四氫-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸5g3-{1-〔2’-(乙氧羰基)-4-苯基丁基〕-環(huán)戊-1-甲酰胺基}-2，3，4，5-四氫-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸叔丁酯(制備方法見實(shí)施例1)溶解于16ml三氟乙酸中，室溫?cái)嚢?小時(shí)。減壓蒸除三氟乙酸。剩余物溶于二氯甲烷，用水洗至中性。有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥，減壓蒸干。剩余物和正己烷一起攪拌，并蒸干，重復(fù)多次。得到3.4g本標(biāo)題化合物，為泡沫狀固體，熔點(diǎn)81-104℃。實(shí)施例3(3S，2’R)-3-{1-〔2’-(乙氧羰基)-4’-苯丁基〕-環(huán)戊-1-甲酰胺基)-2，3，4，5-四氫-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸叔丁酯A)30.5g1-〔2’-(乙氧羰基)-4’-苯丁基〕-環(huán)戊-1-羧酸(制法見實(shí)施例1D))和11.6g L-(-)-α-甲基芐胺加熱溶于乙醇?；旌衔镉诶涔裰蟹胖?2小時(shí)，濾集析出的結(jié)晶，干燥后于乙醇中多次重結(jié)晶直至旋光度恒定，減壓下干燥。得到該酸的α-甲基芐胺鹽17.7g，熔點(diǎn)118-121℃，旋光度〔α〕20D＝+5.6°(C＝0.5，甲醇)。
為將酸游離出，將此鹽用水/二氯甲烷混合液處理，該混合物中加入硫酸氫鉀水溶液使呈酸性。分開有機(jī)相，水相用二氯甲烷萃取3次，合并有機(jī)萃取液，水洗，硫酸鈉干燥，減壓蒸發(fā)。剩余物干燥后，得11.2g純凈的(2’R)-1-〔2’-(乙氧羰基)-4’-苯丁基〕-環(huán)戊-1-羧酸，旋光度〔α〕20D＝+7.4°(C＝0.651，甲醇)。
B)將12.65gL-(+)酒石酸于54ml加熱到65℃的乙醇中的溶液加到65℃ 24.5g消旋的3-氨基-2，3，4，5-四氫-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸叔丁酯(制法見實(shí)施例1I))于54ml乙醇的溶液中，混合物室溫下攪拌1小時(shí)，然后滴加入1.72ml苯甲醛于1.3ml乙醇中的溶液。該懸浮物于80℃加熱回流14小時(shí)，冷至室溫。濾集生成的結(jié)晶性沉淀，溶于80ml乙醇中，再加熱回流8小時(shí)。冷卻至室溫，濾集結(jié)晶，50℃減壓干燥。得23.6g酒石酸鹽，熔點(diǎn)195-196℃，旋光度〔α〕20D＝152°(C＝0.5，甲醇)。
為游離出堿，將23.6g酒石酸鹽與由250ml水和108ml二氯甲烷組成的混合液于0℃下攪拌，加入氨水，PH9.6。分離出有機(jī)相，水相用30ml二氯甲烷萃取，合并有機(jī)相，硫酸鈉干燥，減壓濃縮，剩余物用甲基叔丁基醚結(jié)晶，減壓干燥，得12.2g(3S)-3-氨基-2，3，4，5-四氫-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸叔丁酯，熔點(diǎn)113-115℃，旋光度〔α〕20D＝-276.2°(C＝0.5，甲醇)。
C)5.4g于A)項(xiàng)制得的酸溶解于60ml干燥二氯甲烷中，加入2.33ml三乙胺，冷卻至-20℃，然后慢慢滴入1.31ml甲烷磺酰氯于5ml干燥二氯甲烷的溶液中，攪拌15分鐘后，滴加入4.8g于B)項(xiàng)得到的胺和2.33ml三乙胺于60ml二氯甲烷的溶液。室溫?cái)嚢?小時(shí)，反應(yīng)混合物中加入水，分離有機(jī)相，用硫酸氫鉀水溶液和水洗滌，硫酸鈉干燥，過濾，減壓濃縮。剩余物粗品于500g硅膠柱作快速層析純化(正己烷/乙酸乙酯(7∶3)洗脫)，減壓干燥后得9.5g純凈的本標(biāo)題化合物，為油狀物，旋光度〔α〕20D＝-115.2°(C＝0.463，甲醇)。實(shí)施例4(3S，2’R)-3-{1-〔2’-(乙氧羰基)-4’-苯丁基〕-環(huán)戊-1-甲酰胺基}-2，3，4，5-四氫-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸。
9.4g(3S，2’R)-3-{1-〔2’-(乙氧羰基)-4’-苯丁基〕-環(huán)戊-1-甲酰胺基}-2，3，4，5-四氫-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸叔丁酯(制法見實(shí)施例3)于冰冷卻下溶解于15ml二氯甲烷中，該溶液與31ml三氟乙酸混合，于4℃冰箱中放置12小時(shí)。減壓下蒸去二氯甲烷和三氟乙酸，剩余的粗產(chǎn)物溶于乙酸乙酯，先后用水、稀碳酸氫鈉水溶液和水洗滌，分出有機(jī)層，硫酸鈉干燥，減壓蒸發(fā)。剩余物進(jìn)行硅膠快速層析純化洗脫液先用二氯甲烷，然后用二氯甲烷/甲醇(95∶5)，得到的產(chǎn)物于80℃減壓干燥2日，得7.3g純凈的今標(biāo)題化合物熔點(diǎn)71-74℃，旋光度〔α〕20D＝-131.0°(C＝0.5甲醇)。實(shí)施例53-{1-〔2’-(叔丁氧羰基)-4’-苯丁基〕-環(huán)戊-1-甲酰胺基}-2，3，4，5-四氫-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸叔丁酯。
A)在氮?dú)夥障聦?18g二甲基膦乙酸叔丁酯溶解于875ml無水二甲基甲酰胺中，于冰冷下加入58.9g叔丁醇鉀溶液得到的混合物于60℃加熱片刻，冷卻至室溫。向此混合物中滴加入104.9g溴代乙苯干110ml二甲基甲酰胺的溶液，60℃加熱2小時(shí)。減壓蒸除二甲基甲酰胺，剩余物溶解于甲基叔丁基醚中，該溶液用硫酸氫鉀水溶液至酸性。分開有機(jī)相，水洗，硫酸鈉干燥，減壓蒸干，得到的粗品經(jīng)硅膠快速層析，(3kg硅膠，洗脫液為二氯甲烷/甲基叔丁基醚4∶1)，得105.1g純凈的2-(二甲基膦?；?-4-苯基-正丁酸叔丁酯，為油狀物。
B)105.1g上面得之產(chǎn)物于氮?dú)夥障氯芙庥?05ml無水四氫呋喃中，向此溶液中加入28.4g多聚甲醛，然后慢慢滴入32.5g叔丁醇鉀于100ml四氫呋喃的溶液。攪拌1小時(shí)。反應(yīng)混合物中加冷硫酸氫鉀水溶液使至酸性，用甲基叔丁基醚稀釋。分開有機(jī)相，水洗，硫酸鈉干燥，減壓濃縮。粗品于700g硅膠上快速層析，洗脫液為正己烷/乙酸乙酯(9∶1)，得47.0gα-(苯乙基)-丙烯酸叔丁酯，為無色油狀液體。
C)將200ml 1.6M丁基鋰在正己烷中的溶液滴加到冷卻至-50℃的50.2ml二異丙胺于450ml無水四氫呋喃的溶液中。再于0℃保持30分鐘。于此溫度下滴加入16.2ml環(huán)戊甲酸于40ml無水四氫呋喃的溶液，0℃攪拌2小時(shí)，向反應(yīng)液中慢慢加入B)項(xiàng)制備的產(chǎn)物38g于50ml無水四氫呋喃的溶液，0℃攪拌2小時(shí)，再于-15℃放置數(shù)小時(shí)。冰冷下用飽和硫酸氫鉀水溶液酸化，正己烷萃取3次，合并有機(jī)相，用半飽和的碳酸氫鈉溶液洗滌7次，水洗1次，硫酸鈉干燥，減壓蒸干，油狀粗品用冰冷正己烷結(jié)晶，得41.9g純凈結(jié)晶的1-〔2’-(叔丁氧羰基)-4’-苯丁基〕-環(huán)戊-1-甲酸，熔點(diǎn)75-77℃。
D)在氮?dú)夥障聦⑸现频?.3g產(chǎn)品、2.7g3-氨基-2，3，4，5-四氫-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸叔丁酯(實(shí)施例1I制得)、1.53mlN-甲基嗎啉和1.18g羥基苯并三唑溶解于93ml無水二氯甲烷中，冰冷卻下加入3.52gN-乙基-N’-(3-二甲胺基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽，冰冷卻下攪拌2小時(shí)。反應(yīng)液先后用水硫酸氫鉀水溶液、水、碳酸氨鈉水溶液，再用水洗滌。有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥，減壓濃縮，粗品于200g硅膠上快速層析純化，正己烷/乙酸乙酯(7∶3)洗脫，用甲基叔丁基醚結(jié)晶。得4.2g純凈的本標(biāo)題化合物，熔點(diǎn)110-114℃。實(shí)施例63-〔1-(2’-羧基-4’-苯丁基)-環(huán)戊-1-甲酰胺基〕-2，3，4，5-四氫-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸于4℃和避潮氣情況下將4.1g3-{1-〔2’-(叔丁氧羰基)--4’-苯丁基〕-環(huán)戊-1-甲酰胺基}-2，3，4，5-四氫-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸叔丁酯(制法見實(shí)施例5)溶解于13ml三氟乙酸中。于此溫度下攪拌3小時(shí)。減壓濃縮溶劑。為了完全除去三氟乙酸，剩余物加入二氯甲烷并蒸干，重復(fù)多次。剩余物溶于二氯甲烷，水洗，硫酸鈉干燥，減壓濃縮。剩余物為粗品，二氯甲烷結(jié)晶，得2.7g純的本標(biāo)題化合物，熔點(diǎn)178-183℃。實(shí)施例7(3S，2’R)-3-{1-〔2’-(叔丁氧羰基)-4’-苯丁基〕-環(huán)戊-1-甲酰胺基}-2，3，4，5-四氫-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸叔丁酯A)68g 1-〔2’-(叔丁氧羰基)-4’-苯丁基〕-環(huán)戊-1-甲酸(制法見實(shí)施5C))和23.5mlL-(-)-α-甲基芐胺加熱溶于200ml乙醇中。該反應(yīng)混合物按實(shí)施例3A)所述處理。得到32.2g該酸的α-甲基芐胺鹽，熔點(diǎn)118-119℃，旋光度〔α〕20D＝+9.2°(C＝0.5，甲醇)。按實(shí)施例3A)所述方法處理此鹽以游離出酸，得23g(2’R)-1-〔2’-(叔丁氧羰基)-4’-苯丁基〕-環(huán)戊-1-甲酸，熔點(diǎn)68-70℃，旋光度〔α〕20D＝+15.4°(C＝0.5，甲醇)B)60.1g上制的酸與50.3g(3S)-3-氨基-2，3，4，5-四氫-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸叔丁酯(制法見實(shí)施例3B)，按實(shí)施例3C)所述反應(yīng)，并按3C)所述方法處理反應(yīng)混合物，得94.3g本標(biāo)題化合物，為泡沫狀物，旋光度〔α〕20D＝-110.2(C＝0.5，甲醇)。紅外光譜(KBr壓片)3420cm-1；1743cm-1；1725cm-1；1670cm-1。實(shí)施例8(3S，2’R)-3-〔1-(2’-羧基-4’-苯丁基)-環(huán)戊-1-甲酰胺基〕-2，3，4，5-四氫-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸93g(3S，2’R)-3-{1-〔2’-(叔丁氧羰基)-4’-苯丁基〕-環(huán)戊-1-甲酰胺基}-2，3，4，5-四氫-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸叔丁酯(制法見實(shí)施例7)，按實(shí)施例6所述方法用三氟乙酸水解，并按實(shí)施例6所述方法處理。得63.5g本標(biāo)題化合物，為固體泡沫狀物，熔點(diǎn)97-122℃，旋光度〔α〕20D＝-136.2°(C＝0.5，甲醇)實(shí)施例9(3S，2’S)-3-{1-〔2’-(叔丁氧羰基)-3’-(2-甲氧乙氧基)-丙基〕-環(huán)戊-1-甲酰胺基}-3，4-二氫-4-氧代-1，5-苯并氧氮-5(2H)-乙酸芐酯A)7ml硫酸加到100g3-溴丙酸于200ml乙醚的溶液中，冷卻至-20℃。然后加入123ml液化異丁烯。于加壓釜中室溫?cái)嚢杌旌衔飻?shù)小時(shí)。加入冷卻的氫氧化鈉水溶液，分開乙醚相，水相用乙醚萃取數(shù)次，合并有機(jī)相，氯化鈉水溶液洗滌，硫酸鈉干燥，減壓蒸干，得100g3-溴丙酸叔丁酯，沸點(diǎn)(KP20)＝75-77℃。
B)在氮?dú)夥障聦?0.4ml二異丙胺溶解于300ml無水四氫呋喃中，將此溶液冷卻至-70℃。于此溫度下滴加入200ml 1.6摩爾濃度的丁基鋰于正己烷中的溶液，溫?zé)嶂?℃，攪拌30分鐘，再冷卻至-20℃，于此溫度下，滴加入16.2ml環(huán)戊甲酸于30ml無水四氫呋喃中的溶液，室溫?cái)嚢?小時(shí)，再將混合物冷卻至-10℃，并滴加到35g3-溴丙酸叔丁酯于100ml四氫呋喃中的溶液中，再于室溫?cái)嚢钄?shù)小時(shí)。用稀鹽酸水溶液酸化反應(yīng)液，加入375ml乙醚。分開有機(jī)相，水相用乙醚萃取3次，每次100ml，合并有機(jī)相，用氯化鈉水溶液洗滌，硫酸鈉干燥，減壓蒸干，剩余物溶解于300ml乙醚中，用碳酸氫鈉水溶液洗滌6次，并用10％碳酸鈉水溶液洗滌四次，合并碳酸鈉溶液，冰冷卻下酸化，乙醚萃取3次，每次150ml。合并乙醚和萃取液，用氯化鈉水溶液洗滌，硫酸鈉干燥，減壓濃縮，用冰冷正己烷結(jié)晶粗產(chǎn)物。得7.7g純凈的1-〔2’-(叔丁氧羰基)-乙基〕-1-環(huán)戊甲酸，熔點(diǎn)78-81℃。
C)在氮?dú)夥障聦?0ml二異丙胺溶解于100ml無水四氫呋喃中，冷卻至-70℃。向此溶液中滴加132ml 1.6摩爾濃度的丁基鋰正己烷溶液，0℃再攪拌30分鐘，再冷卻至-70℃。然后依次向其中滴加入24.2gB)項(xiàng)制得的產(chǎn)物于100ml四氫呋喃中的溶液，再加入14.2ml甲氧乙氧基氯甲烷于20ml四氫呋喃中的溶液。再于室溫下攪拌16小時(shí)。加入冰水，用硫酸氫鉀水溶液酸化，乙酸乙酯萃取3次，每次300ml。合并有機(jī)相，氯化鈉水溶液洗滌，硫酸鈉干燥，減壓濃縮，粗品用500g硅膠快速層析純化，洗脫液為二氯甲烷/乙醚(8∶2)，得26.5g純凈的1-〔2’-(叔丁氧羰基)-3’-(2-甲氧乙氧基)-丙基〕-環(huán)戊-1-甲酸，為油狀物。
D)將36.7g上制的消旋酸溶解于184ml正己烷，加入18.4g(+)-偽麻黃堿。生成的沉淀經(jīng)短時(shí)間加熱沸騰回流使重新溶解，冷卻并于冰柜中放置數(shù)小時(shí)。濾集生成的沉淀。用冰冷的正己烷洗滌，并用正己烷重結(jié)晶四次。得16.2g該酸的偽麻黃堿鹽，熔點(diǎn)89-91℃，旋光度〔α〕20D＝36.5°(C＝1，甲醇)為將酸游離出，將16g鹽懸浮于正己烷中，用冰冷的硫酸氫鉀水溶液酸化，分開有機(jī)層，水層用正己烷萃取2次。合并有機(jī)層，氯化鈉水溶液洗滌，硫酸鈉干燥，減壓蒸干。剩余物于50℃減壓干燥。得9.9g(2’S)-1-〔2-(叔丁氧羰基)-3’-(2-甲氧乙氧基)-丙基〕-環(huán)戊-1-甲酸，為油狀物，旋光度〔α〕20D＝+2.9°(C＝1，甲醇)E)在氮?dú)夥蘸捅艹睔鈼l件下將17.2g氫化鈉(80％)溶解于400ml干燥的二甲基甲酰胺中。向此溶液中于0℃下慢慢滴加入50gL-BOC-絲氨酸(N-(叔丁氧羰基)-絲氨酸)于50ml干燥的二甲基甲酰胺中的溶液，然后緩慢加熱到15℃并滴加入37.4g鄰硝基酚于50ml二甲基甲酰胺中的溶液。再于室溫下攪拌數(shù)小時(shí)，加入冰冷的硫酸氫鉀水溶液。乙酸乙酯萃取數(shù)次，合并有機(jī)相，加入碳酸氫鈉水溶液。分開水相，用乙醚洗滌，然后用硫酸氫鉀水溶液酸化，乙酸乙酯萃取。萃取液用水洗滌，硫酸鈉干燥，減壓蒸干，得54.2g粗品，為(2S)-3-(2-硝基苯氧基)-2-(叔丁氧羰胺基)-丙酸，無需精制，進(jìn)入下一步反應(yīng)。
F)54.2g上制的酸溶解于600ml甲醇，加入1.8g5％鈀/碳催化劑，于5巴氫氣中氫化1小時(shí)。濾除催化劑，濾液減壓濃縮，粗品于甲基叔丁基醚/正己烷中冰冷結(jié)晶，得30.1g(2S)-3-(2-氨基苯氧基)-2-(叔丁氧羰胺基)-丙酸，熔點(diǎn)87-91℃，旋光度〔α〕20D＝+55.9°(C＝1，甲醇)。
G)在避潮氣條件下，將13.3g上制的酸溶解于71ml無水二甲基甲酰胺中，冰冷下向其中加入7.8ml氰化膦酸二乙酯于6ml二甲基甲酰胺中的溶液，10分鐘后，滴加入5.7ml三乙胺，室溫?cái)嚢?小時(shí)。反應(yīng)混合物傾入冰水中，甲基叔丁基醚萃取數(shù)次，合并有機(jī)相，干燥后減壓蒸干，粗品于乙醇中結(jié)晶，得1.3g(3S)-3-(叔丁氧羰胺基)-2，3-二氫-1，5-苯并氧氮-4(5H)-酮，旋光度〔α〕20D＝-194°(C＝1，甲醇)。
H)在避潮氣情況下，將上制的16g產(chǎn)物溶解于313ml四氫呋喃中，向其中先后滴加入7.1g叔丁醇鉀于30ml四氫呋喃中的溶液和10.9ml溴乙酸芐酯于10ml四氫呋喃中的溶液。室溫?cái)嚢?小時(shí)，用甲基叔丁基醚稀釋，水洗，有機(jī)相用硫酸鈉干燥，減壓濃縮，粗品用500g硅膠快速層析，正己烷/乙酸乙酯(3∶2)洗脫，得20.5g純的(3S)-3-(叔丁氧羰胺基)-4-氧代-3，4-二氫-1，5-苯并氧氮-5(2H)-乙酸芐酯，為油狀物，旋光度〔α〕20D＝-152°(C＝0.68，甲醇)。
I)20g上制產(chǎn)物溶于137ml二氯甲烷，加入77ml三氟乙酸，攪拌1小時(shí)，減壓濃縮，剩余物溶于二氯甲烷，碳酸氫鈉洗至堿性。分出有機(jī)相，水洗，硫酸鈉干燥，減壓濃縮，得15.7g純凈的(3S)-3-氨基-4-氧代-3，4-二氫-1，5-苯并氧氮-5(2H)-乙酸芐酯，旋光度〔α〕20D＝-187.5°(C＝0.536，甲醇)。
J)15.7g上制產(chǎn)物溶于48ml無水二氯甲烷，室溫下先后加入1.6gD)項(xiàng)制備的酸，0.79mlN-甲基嗎啉和1.83gN-乙基-N’-(3-二甲胺基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽，室溫?cái)嚢?小時(shí)。然后相繼用水、硫酸氫鉀水溶液、水、碳酸氫鈉水溶液、水洗滌，硫酸鈉干燥，減壓蒸干，剩余物經(jīng)快速硅膠層析，正己烷/乙酸乙酯洗脫，得1.8g本標(biāo)題化合物，為油狀物，旋光度〔α〕20D＝-96.3°(C＝0.326，甲醇)。實(shí)施例10(3S，2’S)-3-{1-〔2’-羧基-3’-(2-甲氧乙氧基)-丙基〕-環(huán)戊-1-甲酰胺基}-4-氧代-3，4-二氫-1，5-苯并氧氮-S(2H)-乙酸芐酯冰冷下將1.6g(3S，2’S)-3-{1-(2’-叔丁氧羰基)-3’-(2-甲氧乙氧基)-丙基〕-環(huán)戊-1-甲酰胺基}-4-氧代-3，4-二氫-1，5-苯并氧氮-5(2H)-乙酸芐酯(制法見實(shí)施例9)溶解于5ml三氟乙酸，4℃放置數(shù)小時(shí)。減壓蒸除溶劑，剩余物經(jīng)硅膠快速層析，二氯甲烷/甲基叔丁基醚/甲醇(85∶15∶5)洗脫，干燥得1.0g油狀標(biāo)題化合物，旋光度〔α〕20D＝-117.2°(C＝0.42，甲醇)。實(shí)施例11(3S，2’S)-3-{1-〔2’-羧基-3’-(2-甲氧乙氧基)-丙基〕-環(huán)戊-1-甲酰胺基}-4-氧代-3，4-二氫-1，5-苯并氧氮-5(2H)乙酸0.95g(3S，2’S )-3-{1-〔2’-羧基-3’-(2-甲氧乙氧基)-丙基〕-環(huán)戊-1-甲酰胺基}-4-氧代-3，4-二氫-1，5-苯并氧氮-5-(2H)-乙酸芐酯(制法見實(shí)施例10)溶于10ml乙醇，向此溶液加入鈀催化劑(鈀/碳5％)0.2g，于5巴氫氣中氫化2小時(shí)，濾除催化劑，濾液減壓蒸發(fā)，剩余物干燥，得0.7g泡沫狀標(biāo)題化合物，旋光度〔α〕20D＝-142.6°(C＝0.5，甲醇)。實(shí)施例12(3R)-3-{1-〔2’-(叔丁氧羰基)-4’-(4-氟苯氧基)-丁基〕-環(huán)戊-1-甲酰胺基}-4-氧代-3，4-二氫-1，5-苯并硫氮-5(2H)-乙酸叔丁酯A)20.5g二甲基膦代乙酸叔丁酯與25g 4-氟苯乙基溴化物按實(shí)施例5A)方法反應(yīng)，并按5A)法處理，得到20.4g 4-(4-氟苯氧基)-2-(二甲基膦代)-正丁酸叔丁酯。
B)20.4g上制之產(chǎn)物與4.8g多聚甲醛按實(shí)施例5B)所述方法反應(yīng)并處理，得粗品15.3gα-〔2-(4-氟苯氧基)-乙基〕-丙烯酸叔丁酯，為油狀物，無需進(jìn)一步層析純化，進(jìn)入下一步反應(yīng)。
C)15.3g上制之產(chǎn)物與5.1ml環(huán)戊甲酸按實(shí)施例5C)的方法反應(yīng)并處理，得6.0g1-〔2’-(叔丁氧羰基)-4’-(4-氟苯氧基)-丁基〕-環(huán)戊-1-甲酸(熔點(diǎn)58-63℃)和7.6g油狀不易純化的產(chǎn)品。
D)將122.4g N-乙酰-L-半胱氨酸和181.9g碳酸氫鈉于550ml水中的溶液加到100ml1-氟-2-硝基苯于1800ml乙醇的溶液中?；旌衔锛訜峄亓?小時(shí)，冷卻至室溫，濾集沉淀，濾液濃縮到大約700ml，剩余物中加入1.8l水。水相用乙醚萃取，加入濃鹽酸水溶液，使PH1，析出黃色固體，濾集，得253.6gR-(2-硝基苯基)-N-乙酰基-L-半胱氨酸粗品，無需進(jìn)一步純化，進(jìn)入下步反應(yīng)。
E)253.6g上制的產(chǎn)物與825ml18摩爾濃度硫酸和3.3l水相混合，混合物加熱回流40分鐘后，冷卻至0℃，加入1925ml濃氨水，濾集析出的沉淀，水重結(jié)晶，得143gR-(2-硝基苯基)-L-半胱氨酸。
F)100g上制的產(chǎn)物和62.2g碳酸鉀溶解于7l水中，隨后于3小時(shí)內(nèi)分次加入120g乙氧羰基鄰苯二甲酰亞胺，攪拌5小時(shí)，再放置數(shù)小時(shí)。濾集析出的沉淀，濾液加入濃鹽酸，使PH2-3，濾集析出的沉淀，水多次洗滌，然后用約1l乙醇溫?zé)釕腋∫?約40℃)，冷卻后，濾集沉淀，空氣干燥，得100g(2R)-3-(2-硝基苯硫基)-2-鄰苯二甲酰亞胺基丙酸，無需純化，進(jìn)入下步反應(yīng)。
G)100g上制的產(chǎn)物溶于1.5l甲醇，加入0.8g5％鈀/碳催化劑，氫化5小時(shí)，濾除催化劑，濾液減壓蒸發(fā)，得71.6g(2R)-3-(2-氨苯基硫代)-2-鄰苯二甲酰亞胺基丙酸粗品，為黃褐色油狀物，無需純化，進(jìn)入下步反應(yīng)。
H)71.6g上制的產(chǎn)品溶于440ml二甲基甲酰胺中，向此溶液中加入38.0g1-〔3-(二甲胺基)-丙基〕-3-乙基碳二亞胺-鹽酸鹽，室溫下攪拌3小時(shí)。然后用1.5l乙酸乙酯稀釋，用1.5l1N碳酸氫鈉水溶液洗滌數(shù)次，有機(jī)相再用水洗2次，每次200ml，硫酸鎂干燥，減壓濃縮至干，剩余物用硅膠柱快速層析純化，乙酸乙酯/環(huán)己烷(1∶1)洗脫，得46.3g(3R)-2，3-二氫-3-鄰苯二甲酰亞胺基-1，5-苯并硫氮-4(5H)-酮。
I)將10.6g粉狀氫氧化鉀和4.8g溴化四丁銨加到46.3g上制產(chǎn)物于300ml四氫呋喃的溶液中。反應(yīng)混合物冷卻到0℃，慢慢滴加23.2ml溴乙酸叔丁酯，再于室溫?cái)嚢?小時(shí)。過濾，濾液減壓濃縮至干，剩余物溶于乙醚，醚液用水和1摩爾濃度(M)硫酸氫鉀洗滌，硫酸鎂干燥，減壓濃縮。油狀剩余物加入乙酸乙酯和乙醚，濾集析出的沉淀，得34g(3R)-5-(叔丁氧羰甲基)-2，3-二氫-5-鄰苯二甲酰亞胺基-1，5-苯并硫氮-4(5H)-酮，為固體，減壓濃縮母液，又得25g不易純化的油狀產(chǎn)物。旋光度〔α〕20D＝-146°(C＝0.8，二氯甲烷)。
J)2g上制的產(chǎn)物與7.5ml乙醇胺混合，于80℃攪拌10分鐘，撤去熱源，再攪拌30分鐘，加入70ml 5％氯化鈉水溶液，用甲苯萃取。分開有機(jī)相，硫酸鈉干燥，減壓濃縮至于。得1.46g含有甲苯的(3R)-3-氨基-4-氧代-3，4-二氫-1，5-苯并硫氮-5(2H)-乙酸叔丁酯，為含甲苯的固體。
K)1.45g上制的產(chǎn)物、1.75g C)項(xiàng)制得的環(huán)戊甲酸衍生物、0.70g羥基苯并三唑和1.50ml N-甲基嗎啉加到100ml干二氯甲烷中，混合物冷卻至0℃，加入1.76g 1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽，室溫?cái)嚢?小時(shí)，加入1摩爾濃度(M)的硫酸氫鉀水溶液，分開有機(jī)相，用1摩爾濃度(M)的碳酸氫鉀水溶液和飽和氯化鈉溶液洗滌，硫酸鈉干燥，減壓蒸干，粗品經(jīng)硅膠柱快速層析，用正己烷/乙酸乙酯(4∶1)洗脫，得1.4g本標(biāo)題化合物，為油狀物。紅外光譜(涂膜)3366cm-1；3059cm-1；2969cm-1；2874cm-1；1727cm-1；1657cm-1；1505cm-1。實(shí)施例13(3R)-3-{1-〔2’-羧基-4’-(4-氟苯氧基)-丁基〕-環(huán)戊-1-甲酰胺基}-4-氧代-3，4-二氫-1，5-苯并硫氮-5(2H)-乙酸。
1.9g(3R)-3-{1-〔2’-(叔丁氧羰基)-4’-(4-氟苯氧基)-丁基〕-環(huán)戊-1-甲酰胺基}-4-氧代-3，4-二氫-1，5-苯并硫氮-5(2H)-乙酸叔丁酯(制法見實(shí)施例12)按實(shí)施例6所述方法用三氟乙酸水解，并按實(shí)施例6方法處理，得0.56g本標(biāo)題化合物，為無定形固體，熔點(diǎn)90-94℃。實(shí)施例14(3R)-3-{1-〔2’-(叔丁氧羰基)-5’-(3，4-二甲氧苯基)-戊基〕-環(huán)戊-1-甲酰胺基}-4-氧代-3，4-二氫-1，5-苯并硫氮-5(2H)-乙酸叔丁酯。
A)6.7g三苯膦溶于200ml乙腈中，冷卻至0℃，滴入1.3ml溴。除去冷浴，滴加入5g 3-(3，4-二甲氧苯基)-1-丙醇于80ml乙腈的溶液，混合物加熱回流，在6小時(shí)內(nèi)多次用分水器，每次蒸出10ml乙腈，并用新鮮乙腈補(bǔ)充除去的乙腈。減壓蒸除乙腈，剩余物溶于乙醚，過濾。濾液減壓濃縮，剩余物用硅膠柱快速層析，環(huán)己烷/甲基叔丁基醚(7∶2)洗脫，得5.5g 3-(3，4-二甲氧苯基-1-溴-丙烷，為無色油狀物。
B)5.5g上制的產(chǎn)物與3.8ml二甲基膦代乙酸叔丁酯按實(shí)施例5A)方法反應(yīng)并處理，得6.1g4-(3，4-二甲氧基苯基)-2-(二甲基膦代)-戊酸叔丁酯，為無色油狀物。
C)6g上制的產(chǎn)物與多聚甲醛按實(shí)施例5B)所述方法反應(yīng)并處理，得之粗品用硅膠柱快速層析，甲基叔丁基醚/環(huán)己烷(1∶3)洗脫，得3.4g油狀1-〔3-(3，4-二甲氧苯基)-丙基)丙烯酸叔丁酯。
D)3.4g上制的產(chǎn)物與1.3ml環(huán)戊甲酸按實(shí)施例5C)所述方法反應(yīng)并處理。粗品經(jīng)硅膠柱快速層析純化，乙酸乙酯/環(huán)己烷(1∶3)洗脫，得2.5g油狀1-〔2-(叔丁氧羰基)-5-(3，4-二甲氧苯基)-戊基〕-環(huán)戊甲酸。
E)2.5g上制的產(chǎn)物溶于50ml乙腈，于0℃避潮氣條件下加入4.2ml二異丙基乙胺、1.7g2-氯-1-甲基吡啶碘化物鎓和2.5g(3R)-3-氨基-4-氧代-3，4-二氫-1，5-苯并二氮-5(2H)-乙酸叔丁酯(制法見實(shí)施例12J)，混合物于0℃攪拌30分鐘，室溫?cái)嚢?小時(shí)。減壓蒸除溶劑至干，剩余物溶于二氯甲烷，先用稀鹽酸水溶液洗，后用水洗，分開有機(jī)相，水相用二氯甲烷萃取2次，合并有機(jī)相，硫酸鈉干燥，減壓濃縮，得3g本標(biāo)題化合物，為油狀物。硅膠薄層層析Rf值0.4(洗脫劑環(huán)己烷/乙酸乙酯，1∶1)。實(shí)施例15(3R)-3-{1-〔2’-羧基-5’-(3，4-二甲氧苯基)-戊基〕-環(huán)戊-1-甲酰胺基}-4-氧代-3，4-二氫-1，5-苯并硫氮-5(2H)-乙酸3g(3R)-3-{1-〔2’-叔丁氧羰基)-5’-(3，4-二甲氧苯基)-戊基〕-環(huán)戊-1-甲酰胺基}-4-氧代-3，4-二氫-1，5-苯并硫氮-5(2H)-乙酸叔丁酯(制法見實(shí)施例14)溶于20ml二氯甲烷。向此溶液加入3ml三氟乙酸，室溫?cái)嚢?日，減壓濃縮，為完全除去三氟乙酸，多次加入2ml甲苯并蒸干。得之粗品經(jīng)硅膠快速層析，二氯甲烷/乙酸乙酯(1∶1)洗脫，后用純乙酸乙酯。減壓蒸發(fā)洗脫液，得1.26g本標(biāo)題化合物，為無定形固體。紅外光譜，KBr壓片3365cm-1；2942cm-1；1726cm-1；1652cm-1。實(shí)施例163-{1-(2’-(叔丁氧羰基)-4’-苯丁基〕-環(huán)戊-1-甲酰胺基}-2，3，4，5-四氫-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸芐酯A)10.5g3-氨基-2，3，4，5-四氫-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸叔丁酯(制法見實(shí)施例1I)、8.25g對(duì)甲苯磺酸水合物和20.1ml芐醇加到174ml甲苯中。分水器加熱4小時(shí)，此時(shí)開始形成的沉淀慢慢進(jìn)入溶液中。減壓蒸除甲苯，剩余物與甲基叔丁基醚攪拌，過濾，得到的固體溶于二氯甲烷中，冰冷下用碳酸氫鈉調(diào)至堿性。分開二氯甲烷溶液，水洗，硫酸鈉干燥并蒸干，粗品用甲基叔丁基醚重結(jié)晶，得8.2g 3-氨基-2，3，4，5-四氫-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸芐酯，熔點(diǎn)105-107℃。
B)12.8g上制的產(chǎn)物與13.7g1-〔2’-(叔丁氧羰基)-4’-苯丁基〕-環(huán)戊-1-羧酸(制法見實(shí)施例5C))按實(shí)施例3C)所述方法反應(yīng)并處理，得19.3g本標(biāo)題化合物，熔點(diǎn)118-123℃。實(shí)施例173-〔1-(2-羧基-4’-苯丁基)-環(huán)戊-1-甲酰胺基〕-2，3，4，5-四氫-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸芐酯15g3-{1-〔2’-(叔丁氧羰基)-4’-苯丁基〕-環(huán)戊-1-甲酰胺基}-2，3，4，5-四氫-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸芐酯(制法見實(shí)施例16)與56ml三氟乙酸按實(shí)施例6所述方法反應(yīng)和處理，粗品用甲基叔丁基醚結(jié)晶，得13.1g本標(biāo)題化合物，熔點(diǎn)86-90℃。實(shí)施例183-{1-〔2’-(叔丁基羰氧甲氧羰基)-4’-苯丁基〕-環(huán)戊-1-甲酰胺基}-2，3，4，5-四氫-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸芐酯2g3-〔1-(2’-羧基-4’-苯丁基)-環(huán)戊-1-甲酰胺基〕-2，3，4，5-四氫-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸芐酯(制法見實(shí)施例17)在避潮氣條件下溶于20ml干燥二氯甲烷中。向該溶液加入0.46ml三乙胺和0.1g二甲胺基吡啶。然后于冰冷下滴入0.5g新戊酸氯甲基酯于3ml干燥二氯甲烷的溶液。室溫?cái)嚢?日，混合物中加入水，分開有機(jī)層，用碳酸氫鈉水溶液和水洗滌，硫酸鈉干燥，減壓濃縮，剩余物于150g硅膠上快速層析純化，正己烷/乙酸乙酯混合液洗脫，開始比例為7∶3，后為1∶1。得1.1g純凈的3-{1-〔2’-(新戊酰氧甲氧羰基)-4’-苯丁基〕-環(huán)戊-1-甲酰胺基}-2，3，4，5-四氫-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸芐酯，為泡沫狀固體，熔點(diǎn)71-78℃。實(shí)施例193-{1-〔2’-(新戊酰氧甲氧羰基)-4’-苯丁基〕-環(huán)戊-1-甲酰胺基}-2，3，4，5-四氫-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸1.0g 3-{1-〔2’-(新戊酰氧甲氧羰基)-4’-苯丁基〕-環(huán)戊-1-甲酰胺基}-2，3，4，5-四氫-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸芐酯(制法見實(shí)施例18)溶解于100ml乙醇中。加入0.5g 5％鈀/碳催化劑，于5巴氫壓下氫化3小時(shí)。濾除催化劑，濾液濃縮。剩余物于80℃減壓干燥，得0.7g本標(biāo)題化合物，為玻璃狀固體。紅外光譜(KBr壓片)3410cm-1；1750cm-1；1660cm-1；按上述諸法可制備下表1所列的式I化合物。
Phe＝苯基；nap＝α-萘基；ind＝吲哚基；diox＝(2，2-二甲基-1，3-二氧戊烷-4-基)-甲基；C-Sei＝側(cè)鏈上的手性中心；C-rin＝環(huán)上的手性中心，rac＝消旋；R-k＝R-構(gòu)型；S-k＝S-構(gòu)型；Sch＝泡沫狀物；l＝油狀物；Su＝游離酸；Na＝鈉鹽。實(shí)施例I含(3S，2’R)-3-{1-〔2’-(乙氧羰基)-4’-苯丁基〕-環(huán)戊-1-甲酰胺基}-2，3，4，5-四氫-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸的片劑按如下配方制備片劑，每片中含有(3S，2’R)-3-{1-〔2’-(乙氧羰基)-4-苯丁基〕-環(huán)戊-1-甲酰胺基}-2，3，4，5-四氫-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸20mg玉米淀粉 60mg乳糖 135mg明膠(為10％溶液) 6mg將有效成分、玉米淀粉、乳糖用105明膠溶液增稠成團(tuán)，制粒，置于適宜的鐵皮上，45℃干燥，干燥的顆粒進(jìn)入粉碎機(jī)上，再與下列的助劑混合滑石粉 5mg硬脂酸鎂 5mg玉米淀粉 9mg
然后壓制成240mg重的片劑。實(shí)施例II含有(3S，2’R)-3-〔1-(2’-羧基-4’-苯丁基)-環(huán)戊-1-甲酰胺基〕-2，3，4，5-四氫-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸的注射劑。
按如下配方制備注射液，每5ml中含(3S，2’R)-3-{1-〔2’-羧基-4’-苯丁基〕-環(huán)戊-1-甲酰胺基}-2，3，4，5-四氫-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸10mgNa2HPO4·7H2O 43.24mgNa2HPO4·2H2O 7.72mgNaCl 30.0mg純化水 4948.0mg將固體物質(zhì)溶水中，殺菌，分裝5ml注入安瓿中。
權(quán)利要求
1.通式I的化合物及式I酸的藥用鹽 式中R1為低碳烷氧基-低碳烷基，在低碳烷氧基上可被低碳烷氧基取代，苯基低碳烷基-，或苯氧基低碳烷基，在苯環(huán)上可任選地被低碳烷基、低碳烷氧基或鹵素取代，或是萘基低碳烷基；A為CH2、O或S；R2為氫或鹵素；R3為氫或鹵素；R4為氫或形成生物不穩(wěn)性酯的基團(tuán)；R5為氫或形成生物不穩(wěn)性酯的基團(tuán)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R4和/或R5為形成生物不穩(wěn)性酯的基團(tuán)。
3.根據(jù)上述權(quán)利要求之一的化合物，其中形成生物不穩(wěn)性酯的基團(tuán)為低碳烷基，任選地在苯環(huán)上被低碳烷基取代、或被連接到2個(gè)相鄰碳原子上的低碳亞烷鏈取代的苯基或苯基低碳烷基，尤其是苯基、芐基、或茚基，一個(gè)在二氧戊烷環(huán)上任選被低碳烷基取代的二氧戊烷基甲基，尤其是(2，2，-二甲基-1，3-二氧戊烷-4-基)甲基，或任選地在氧甲基上被低碳烷基取代的C2-C6-鏈烷酰氧甲基。
4.根據(jù)上述權(quán)利要求之一的化合物，其特征是，R4為形成生物不穩(wěn)性酯的基團(tuán)，R5為氫。
5.根據(jù)上述權(quán)利要求之一的化合物，其特征是，A為CH2。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的化合物，其中R1為苯乙基或萘乙基，R2為氫。
7.含有有效藥理量的權(quán)利要求1的化合物和常規(guī)藥用助劑和/或載體的藥物。
8.通式I化合物及式I酸的藥用鹽的制備方法， 式中R1為低碳烷氧基-低碳烷基，在低碳烷氧基上可被低碳烷氧基取代，苯基低碳烷基-，或苯氧基低碳烷基，在苯環(huán)上可任選地被低碳烷基、低碳烷氧基或鹵素取代，或是萘基低碳烷基；A為CH2、O或S；R2為氫或鹵素；R3為氫或鹵素；R4為氫或形成生物不穩(wěn)性酯的基團(tuán)；R5為氫或形成生物不穩(wěn)性酯的基團(tuán)。其特征是，通式II的酸或它的活化的酸衍生物與通式III的胺反應(yīng)， 式中R1、R2、R3、和A的含義同前所述，R4a、R5a為酸保護(hù)基，生成通式IV的酰胺， 式中R1、R2、R3、R4a、R5a和A的含義同前所述，若在式IV化合物中酸保護(hù)基R4a和R5a不是所希望的形成生物不穩(wěn)性酯的基團(tuán)，則同時(shí)或任意順序先后裂解掉，并且任選地將游離的酸基用通式V的醇或通式Va的相應(yīng)活化的衍生物酯化，R6-OH(V)R6-X(Va)式中R6為形成生物不穩(wěn)性酯的基團(tuán)，X為可裂解掉的活化基團(tuán)。并任選地將生成的式I酸轉(zhuǎn)變成藥用鹽或?qū)⑹絀的酸的藥用鹽轉(zhuǎn)變成游離酸。
全文摘要
本發(fā)明涉及通式I的具有對(duì)NEP有抑制作用的化合物及通式I酸的藥用鹽，式中R
文檔編號(hào)C07D223/16GK1147506SQ9610425
公開日1997年4月16日 申請(qǐng)日期1996年3月20日 優(yōu)先權(quán)日1995年3月23日
發(fā)明者H·沃德克, D·郝特杰, J·麥森格, J·安特爾, M·沃爾, D·索曼林 申請(qǐng)人:卡利藥物化學(xué)股份公司