一種紅根草鄰醌的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種操作簡(jiǎn)單、污染少的紅根草鄰醌的制備方法，工藝步驟為：（1）提?。喝「稍锛t根草的根，經(jīng)粉碎處理，用醇類溶液進(jìn)行超高壓提取，合并提取液；（2）色譜柱層析：以氧化鎂為填料，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫，收集目標(biāo)洗脫液，濃縮干燥得粗提物；（3）高速逆流色譜法分離：采用高速逆流色譜法分離純化粗提物中的紅根草鄰醌，其兩相溶劑系統(tǒng)為正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水，上相為固定相，下相為流動(dòng)相，收集紅根草鄰醌組分，進(jìn)行真空濃縮，干燥即得紅根草鄰醌。本發(fā)明制備紅根草鄰醌，產(chǎn)品純度高，易于實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化放大。
【專利說(shuō)明】一種紅根草鄰醌的制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于中藥提取分離【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種從紅根草的根中分離制備紅根草鄰醌的方法。

【背景技術(shù)】
[0002]唇形科(Labiatae)植物，是干旱地區(qū)的主要植被，是一類重要的藥用植物資源。紅根草為唇形科鼠尾草屬植物黃埔鼠尾Salvia pr1nitis Hance,以全草入藥。根含丹參酮(tanshinone) 1、II A,紅根草鄰醌(saprorthoquinone),隱含丹參酮(cryptotanshinone), β-谷留醇(β-sitosterol),丹參新酮(miltirone),丹參新醌(danshenkinkun) B、D,去氫丹參新酮(dehydromiltirone),紅根草對(duì)醌(sapriparaquinone),紅根草內(nèi)酯(sapr1lactone),丹參酌.酮(salvinolone),丹參酌.內(nèi)酯(salvinolactone), 4_ 輕基紅根草對(duì) Il (4-hydroxysapriparaquinone),紅根草素(salvonitin), 3-酮紅根草對(duì)Il (3-ketosapriparaquinone)，鼠尾草呋萘嵌苯(salvilenone), 3-輕基鼠尾草呋萘嵌苯酮(3_hydroxxysalvilenone),銀白鼠尾草二醇(arucad1l),總狀土木香醌(royleanone),柳杉酹(sug1l),彌羅松酹(ferruginol),紅根草種素(pr1nitin)等。紅根草主治菌痢,腹灣,腹痛,感冒。
[0003]現(xiàn)代研究，紅根草還具有抗腫瘤的功效?？鼓[瘤主要活性成分為紅根草的根中二萜類化合物紅根草鄰醌。紅根草鄰醌具有抗腫瘤作用，對(duì)P388白血病細(xì)胞有很強(qiáng)的抑制活性。在I μ m/mL時(shí)，抑制率為92.7% ;在100?1000 μ g/mL時(shí)，對(duì)G+細(xì)菌(枯草桿菌，金黃色葡萄球菌等)有明顯拮抗作用。
[0004]現(xiàn)有技術(shù)中，尚沒(méi)有適用于紅根草鄰醌工業(yè)化大生產(chǎn)的制備工藝報(bào)道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一種紅根草鄰醌的制備方法。
[0006]本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:
一種紅根草鄰醌的制備方法，其特征在于包括以下步驟:
(1)提取:取干燥紅根草的根，經(jīng)粉碎處理，加入用乙醇溶液，采用超高壓法進(jìn)行提取，控制藥材粒徑為40目，壓力為400MPa，保壓3_5min，重復(fù)2_3次，合并提取液；
(2)色譜柱層析:以中性氧化鎂為填料，上述提取液濃縮，上氧化鎂住，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫，收集目標(biāo)洗脫液，濃縮干燥得粗提物；
(3)高速逆流色譜法分離:采用高速逆流色譜法分離純化粗提物中的紅根草鄰醌，其兩相溶劑系統(tǒng)為正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水，上相注滿高速逆流色譜柱為固定相，轉(zhuǎn)動(dòng)主機(jī)，泵入下相做流動(dòng)相，流動(dòng)相溶解粗提物由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)，收集紅根草鄰醌組分；
(4)濃縮干燥:將紅根草鄰醌組分進(jìn)行真空濃縮，低溫干燥即得紅根草鄰醌。
[0007]所述步驟(I)中乙醇溶液為90-99%乙醇水溶液，固液體積比為1:10-1:18。
[0008]所述步驟(2)中中性氧化鎂目數(shù)為100-200目，柱壓為5_7.5bar，柱徑高比為1:7-12。
[0009]所述步驟(2)中石油醚-乙酸乙酯體積比為11:1-2:1。
[0010]所述步驟(3)中正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水溶劑系統(tǒng)的體積比為5-7:5-7:4-7:4-6。
[0011]所述步驟(3)中高速逆流色譜儀轉(zhuǎn)速為900-1050rpm，流動(dòng)相流速為3.5_5ml/
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[0012]所述步驟(3)中紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為224nm。
[0013]所述步驟(4)中低溫為5-10°C。
[0014]本方法的積極效果是:
(1)本方法采用超高壓法提取，溶劑消耗少，耗時(shí)短，得率高，且不會(huì)破壞有效成分的生物活性；
(2)柱層析過(guò)程中用石油醚、乙酸乙酯、丙酮等，可替代通常所用的氯仿、甲醇等，安全無(wú)毒，環(huán)保；
(3)采用高速逆流色譜法，收率高、制備量大、制備周期短；
(4)工藝步驟操作較簡(jiǎn)單，易操作，能進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)，所得產(chǎn)品純度高。
[0015]下面將結(jié)合【具體實(shí)施方式】進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實(shí)施方式。

【具體實(shí)施方式】
[0016]實(shí)施例1:
取干燥紅根草的根，經(jīng)粉碎處理，控制粒徑為40目，稱取200g，加10倍90%乙醇溶液，采用超高壓法進(jìn)行提取，提取壓力為400MPa，保壓時(shí)間為3.5min，重復(fù)3次，合并提取液，減壓濃縮，進(jìn)行色譜柱層析，層析柱以中性氧化鎂為填料，粒度為100目，柱壓為5bar，柱徑高比為1:7，石油醚-乙酸乙酯11:1、5:1、2:1梯度洗脫，收集目標(biāo)洗脫液，濃縮干燥得粗提物；采用高速逆流色譜法分離純化粗提物中的紅根草鄰醌，以體積比7:7:6:4正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水為兩相溶劑系統(tǒng)，上相注滿高速逆流色譜柱為固定相，轉(zhuǎn)動(dòng)主機(jī)，高速逆流色譜儀轉(zhuǎn)速為100rpm,泵入下相做流動(dòng)相,流動(dòng)相流速為4ml/min,流動(dòng)相溶解粗提物由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)，檢測(cè)波長(zhǎng)為224nm，收集紅根草鄰醌組分，進(jìn)行真空濃縮，8°C下低溫干燥即得紅根草鄰醌，含量98.0%。
[0017]實(shí)施例2:
取干燥紅根草的根，經(jīng)粉碎處理，控制粒徑為40目，稱取500g，加12倍99%乙醇溶液，采用超高壓法進(jìn)行提取，提取壓力為400MPa，保壓時(shí)間為5min，重復(fù)3次，合并提取液，減壓濃縮，進(jìn)行色譜柱層析，層析柱以中性氧化鎂為填料，粒度為100目，柱壓為6bar，柱徑高比為1:10，石油醚-乙酸乙酯10:1、5:1、2:1梯度洗脫，收集目標(biāo)洗脫液，濃縮干燥得粗提物；采用高速逆流色譜法分離純化粗提物中的紅根草鄰醌，以體積比5:6:7:6正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水為兩相溶劑系統(tǒng)，上相注滿高速逆流色譜柱為固定相，轉(zhuǎn)動(dòng)主機(jī)，高速逆流色譜儀轉(zhuǎn)速為950rpm,泵入下相做流動(dòng)相,流動(dòng)相流速為3.5ml/min,流動(dòng)相溶解粗提物由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)，檢測(cè)波長(zhǎng)為224nm，收集紅根草鄰醌組分，進(jìn)行真空濃縮，8°C下低溫干燥即得紅根草鄰醌，含量97.4%。
[0018]實(shí)施例3:
取干燥紅根草的根，經(jīng)粉碎處理，控制粒徑為40目，稱取500g，加10倍99%乙醇溶液，采用超高壓法進(jìn)行提取，提取壓力為400MPa，保壓時(shí)間為5min，重復(fù)2次，合并提取液，減壓濃縮，進(jìn)行色譜柱層析，層析柱以中性氧化鎂為填料，粒度為100目，柱壓為7.5bar，柱徑高比為1:12，石油醚-乙酸乙酯10:1、4:1、2:1梯度洗脫，收集目標(biāo)洗脫液，濃縮干燥得粗提物；采用高速逆流色譜法分離純化粗提物中的紅根草鄰醌，以體積比7:5:4:4正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水為兩相溶劑系統(tǒng)，上相注滿高速逆流色譜柱為固定相，轉(zhuǎn)動(dòng)主機(jī)，高速逆流色譜儀轉(zhuǎn)速為950rpm，泵入下相做流動(dòng)相，流動(dòng)相流速為4ml/min，流動(dòng)相溶解粗提物由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)，檢測(cè)波長(zhǎng)為224nm，收集紅根草鄰醌組分，進(jìn)行真空濃縮，5°C下低溫干燥即得紅根草鄰醌，含量97.4%。
[0019]實(shí)施例4:
取干燥紅根草的根，經(jīng)粉碎處理，控制粒徑為40目，稱取500g，加18倍95%乙醇溶液，采用超高壓法進(jìn)行提取，提取壓力為400MPa，保壓時(shí)間為4min，重復(fù)3次，合并提取液，減壓濃縮，進(jìn)行色譜柱層析，層析柱以中性氧化鎂為填料，粒度為100目，柱壓為7bar，柱徑高比為1:12，石油醚-乙酸乙酯11:1、4:1、2:1梯度洗脫，收集目標(biāo)洗脫液，濃縮干燥得粗提物；采用高速逆流色譜法分離純化粗提物中的紅根草鄰醌，以體積比5:5:6:6正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水為兩相溶劑系統(tǒng)，上相注滿高速逆流色譜柱為固定相，轉(zhuǎn)動(dòng)主機(jī)，高速逆流色譜儀轉(zhuǎn)速為900rpm,泵入下相做流動(dòng)相,流動(dòng)相流速為3.5ml/min,流動(dòng)相溶解粗提物由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)，檢測(cè)波長(zhǎng)為224nm，收集紅根草鄰醌組分，進(jìn)行真空濃縮，10°C下低溫干燥即得紅根草鄰醌，含量98.4%。
[0020]實(shí)施例5:
取干燥紅根草的根，經(jīng)粉碎處理，控制粒徑為40目，稱取1kg，加15倍90%乙醇溶液，采用超高壓法進(jìn)行提取，提取壓力為400MPa，保壓時(shí)間為3min，重復(fù)3次，合并提取液，減壓濃縮，進(jìn)行色譜柱層析，層析柱以中性氧化鎂為填料，粒度為100目，柱壓為6bar，柱徑高比為1:10，石油醚-乙酸乙酯10:1、5:1、2:1梯度洗脫，收集目標(biāo)洗脫液，濃縮干燥得粗提物；采用高速逆流色譜法分離純化粗提物中的紅根草鄰醌，以體積比5:7:6:4正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水為兩相溶劑系統(tǒng)，上相注滿高速逆流色譜柱為固定相，轉(zhuǎn)動(dòng)主機(jī)，高速逆流色譜儀轉(zhuǎn)速為1050rpm,泵入下相做流動(dòng)相,流動(dòng)相流速為5ml/min,流動(dòng)相溶解粗提物由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)，檢測(cè)波長(zhǎng)為224nm，收集紅根草鄰醌組分，進(jìn)行真空濃縮，5°C下低溫干燥即得紅根草鄰醌，含量98.5%。
【權(quán)利要求】
1.一種紅根草鄰醌的制備方法，其特征在于包括以下步驟: (1)提取:取干燥紅根草的根，經(jīng)粉碎處理，加入用乙醇溶液，采用超高壓法進(jìn)行提取，控制藥材粒徑為40目，壓力為400MPa，保壓3_5min，重復(fù)2_3次，合并提取液； (2)色譜柱層析:以中性氧化鎂為填料，上述提取液濃縮，上氧化鎂住，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫，收集目標(biāo)洗脫液，濃縮干燥得粗提物； (3)高速逆流色譜法分離:采用高速逆流色譜法分離純化粗提物中的紅根草鄰醌，其兩相溶劑系統(tǒng)為正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水，上相注滿高速逆流色譜柱為固定相，轉(zhuǎn)動(dòng)主機(jī)，泵入下相做流動(dòng)相，流動(dòng)相溶解粗提物由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)，收集紅根草鄰醌組分； (4)濃縮干燥:將紅根草鄰醌組分進(jìn)行真空濃縮，低溫干燥即得紅根草鄰醌。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種紅根草鄰醌的制備方法，其特征在于:所述步驟(I)中乙醇溶液為90-99%乙醇水溶液，固液體積比為1:10-1:18。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種紅根草鄰醌的制備方法，其特征在于:所述步驟(2)中中性氧化鎂目數(shù)為100-200目，柱壓為5-7.5bar，柱徑高比為1:7-12。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種紅根草鄰醌的制備方法，其特征在于:所述步驟(2)中石油醚-乙酸乙酯體積比為11:1-2:1。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種紅根草鄰醌的制備方法，其特征在于:所述步驟(3)中正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水溶劑系統(tǒng)的體積比為5-7:5-7:4-7:4-6。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種紅根草鄰醌的制備方法，其特征在于:所述步驟(3)中高速逆流色譜儀轉(zhuǎn)速為900-1050rpm，流動(dòng)相流速為3.5_5ml/min。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種紅根草鄰醌的制備方法，其特征在于:所述步驟(3)中紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為224nm。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種紅根草鄰醌的制備方法，其特征在于:所述步驟(4)中低溫為5-10°C。
【文檔編號(hào)】C07C46/10GK104292086SQ201410465962
【公開(kāi)日】2015年1月21日 申請(qǐng)日期:2014年9月15日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月15日
【發(fā)明者】劉東鋒, 楊成東 申請(qǐng)人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司