生物合成多肽融合抑制劑的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供經(jīng)修飾的生物合成多肽融合抑制劑、其制造方法和用途。
【專利說明】生物合成多肽融合抑制劑
[0001]分案說明
[0002]本申請案是申請日為2006年11月I日，申請?zhí)枮?00680041233.X(國際申請?zhí)枮镻CT/US2006/042851)，發(fā)明名稱為生物合成多肽融合抑制劑的專利申請的分案申請。
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0003]本發(fā)明涉及抑制膜融合事件并且包含至少一個(gè)非天然編碼的氨基酸或利用至少一個(gè)非天然編碼的氨基酸制造的生物合成多肽和融合蛋白。
【背景技術(shù)】
[0004]呼吸道合胞病毒(Respiratory Syncytial Virus, RSV)屬于副粘液病毒(Paramyxoviridae)科。RSV是引起嬰兒、老人和免疫功能低下的個(gè)體(包括但不限于移植患者)下呼吸道感染的主要原因。尚無有效治療或疫苗。RSV是一種單股反義RNA病毒，其編碼11種蛋白質(zhì)，其中有9種為結(jié)構(gòu)蛋白并且有2種為病毒復(fù)制的調(diào)控蛋白。RSV含有兩種主要的表面糖蛋白，意即使病毒與宿主受體連接的受體結(jié)合蛋白(G)和使病毒能夠進(jìn)入宿主細(xì)胞的融合(F)蛋白。在中性pH下發(fā)生的RSV包膜的融合誘導(dǎo)受感染細(xì)胞與近旁未受感染的細(xì)胞之間巨大合胞體的形成。F蛋白裂解產(chǎn)生兩個(gè)經(jīng)二硫鍵連接的多肽，即來自C末端的Fl和來自N末端的F2。與這兩個(gè)區(qū)相鄰的為兩個(gè)稱為HR-C和HR-N的七肽重復(fù)序列，其形成使病毒與宿主細(xì)胞膜融合的具有發(fā)夾樣結(jié)構(gòu)的三聚體。七肽區(qū)為設(shè)計(jì)與HR-N結(jié)合且因此防止發(fā)夾樣結(jié)構(gòu)形成及隨后融合的抑制肽的潛在標(biāo)靶。RSV的融合過程與HIV融合機(jī)制極其類似。
[0005]兩個(gè)獨(dú)立的研究小組已集中在研發(fā)抑制RSV進(jìn)入的肽。就阻斷HIV融合的產(chǎn)品FUZEON? (Roche)來說，源自HR-C區(qū)的肽是類似的。也已證實(shí)具有常見陰離子特征的肽(諸如，源自GTPase RhoA的肽)針對RSV具有抗病毒活性。這些RhoA來源的肽顯然是通過抑制病毒細(xì)胞表面接觸的單獨(dú)機(jī)制起作用。
[0006]肽被廣泛用于研究和醫(yī)學(xué)實(shí)踐中，并且可以預(yù)期隨著肽產(chǎn)品的制造和性能難題的解決，肽的重要性將增加。治療肽(諸如本文所述的肽)被稱為生物合成肽融合抑制劑(BPFI)。
[0007]當(dāng)將天然肽或其類似物用于療法中時(shí)，通常會(huì)發(fā)現(xiàn)其具有極高的降解和/或清除率。在需要于較長時(shí)間段內(nèi)保持高的治療劑血液含量的情況下，治療劑的高清除率相當(dāng)不便，這是因?yàn)殡S后將需要重復(fù)投藥。在一些情況下，可能通過施用適當(dāng)?shù)尼t(yī)藥組合物來影響肽的釋放曲線，但這種方法具有多個(gè)缺點(diǎn)且通常并不適用。 [0008]肽酶通過跨肽鍵插入水分子來使肽中的肽鍵斷裂。一般說來，大部分肽都是通過體內(nèi)的肽酶以一種數(shù)分鐘或更短的方式斷裂。此外，一些肽酶對于某些類型的肽具有特異性，從而使其降解甚至更快。因此，如果將肽用作治療劑，那么其活性通常會(huì)隨著由肽酶作用引起的體內(nèi)肽的迅速降解而降低。
[0009]克服這一缺點(diǎn)的一種方式是對患者投與較大劑量的所關(guān)注的治療肽，以致即使一些肽降解，仍有足夠肽保持治療有效性。然而，這種方法令患者相當(dāng)不舒服。由于大部分治療肽無法經(jīng)口投與，故治療肽將需要持續(xù)輸注、通過靜脈內(nèi)注射頻繁投與或者通過不方便的皮下注射途徑頻繁投與。對于頻繁投藥的需求也導(dǎo)致許多潛在肽治療劑在每一治療過程中的預(yù)計(jì)成本高的令人無法接受。大量降解肽的存在還可能產(chǎn)生不合需要的副作用。
[0010]共價(jià)連接親水性聚合物聚(乙二醇)(縮寫為PEG)為一種增加許多生物活性分子(包括蛋白質(zhì)、肽和尤其疏水性分子)的水溶性和生物利用性、增加其血清半衰期、增加其治療半衰期、調(diào)節(jié)其免疫原性、調(diào)節(jié)其生物活性或延長其循環(huán)時(shí)間的方法。PEG已經(jīng)廣泛用于藥品中、人工移植物上以及生物相容性、毒性缺乏和免疫原性缺乏至關(guān)重要的其它應(yīng)用中。為使PEG的所需特性最大化，與生物活性分子連接的PEG聚合物的總分子量和水合狀態(tài)必須足夠高以賦予通常與PEG聚合物連接有關(guān)的有利特征，諸如增加的水溶性和循環(huán)半衰期，而不會(huì)不利地影響母體分子的生物活性。
[0011]PEG衍生物通常經(jīng)由反應(yīng)性化學(xué)官能團(tuán)與生物活性分子連接，所述官能團(tuán)諸如賴氨酸、半胱氨酸和組氨酸殘基、N末端和碳水化合物部分。蛋白質(zhì)和其它分子通常具有有限數(shù)目的可用于聚合物連接的反應(yīng)性位點(diǎn)。通常，最適于經(jīng)由聚合物連接進(jìn)行修飾的位點(diǎn)在受體結(jié)合中具有重要作用，并且為分子生物活性的保留所必需。結(jié)果，聚合物鏈與生物活性分子上所述反應(yīng)性位點(diǎn)的不加選擇的連接通常引起經(jīng)聚合物修飾的分子的生物活性顯著降低乃至完全喪失。R.Clark等人，(1996).T.Biol.Chem., 271:21969-21977。為形成具有賦予標(biāo)靶分子所需優(yōu)勢的足夠聚合物分子量的接合物，現(xiàn)有技術(shù)方法通常已涉及將眾多聚合物臂與所述分子隨機(jī)連接，從而增加母體分子的生物活性降低乃至完全喪失的風(fēng)險(xiǎn)。
[0012]形成用于將P EG衍生物與蛋白質(zhì)連接的基因座的反應(yīng)性位點(diǎn)受蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)支配。蛋白質(zhì)(包括酶)是由具有通用結(jié)構(gòu)H2N--CHR--COOH的各種α氨基酸序列組成。一種氨基酸的α氨基部分(H2N-)與相鄰氨基酸的羧基部分(一C00H)連接形成酰胺鍵，其可表示為一(NH--CHR--CO)n--,其中下標(biāo)“η”可等于數(shù)百或數(shù)千。由R表示的片段可含有用于蛋白質(zhì)生物活性且用于連接PEG衍生物的反應(yīng)性位點(diǎn)。
[0013]舉例來說，在氨基酸賴氨酸的情況下，在ε位以及α位中存在一NH2部分。在堿性pH條件下ε--ΝΗ2不發(fā)生反應(yīng)。在以PEG對蛋白質(zhì)進(jìn)行衍生的領(lǐng)域中的許多技術(shù)已針對研發(fā)用于連接蛋白質(zhì)中所存在的賴氨酸殘基的ε -NH2部分的PEG衍生物。"PolyethyleneGlycol and Derivatives for Advanced PEGylation^j Nektar Molecular EngineeringCatalog, 2003,第1-17頁。然而，這些PEG衍生物都具有共同的局限，即其不能選擇性地安裝于蛋白質(zhì)表面上所存在的通常眾多的賴氨酸殘基上。與在受體結(jié)合位點(diǎn)的情況下一樣，在賴氨酸殘基對于蛋白質(zhì)活性重要(例如存在于酶活性位點(diǎn)中)的情況下，或在賴氨酸殘基對于介導(dǎo)蛋白質(zhì)與其它生物分子的相互作用起作用的情況下，此可為重要限制。
[0014]用于蛋白質(zhì)聚乙二醇化的現(xiàn)有方法的第二且同樣重要的新增問題在于:除所需反應(yīng)之外，PEG衍生物可經(jīng)歷與殘基的不合需要的副反應(yīng)。組氨酸含有反應(yīng)性亞氨基部分(結(jié)構(gòu)表示為一N(H)--)，但與ε -NH2反應(yīng)的許多化學(xué)反應(yīng)性物質(zhì)也可與一N(H)--反應(yīng)。類似地，氨基酸半胱氨酸的側(cè)鏈帶有游離巰基，其結(jié)構(gòu)表示為-SH。在一些情況下，針對賴氨酸ε -NH2基團(tuán)的PEG衍生物也可與半胱氨酸、組氨酸或其它殘基反應(yīng)。此可產(chǎn)生經(jīng)PEG衍生的生物活性分子的復(fù)雜異質(zhì)混合物和破壞所靶向的生物活性分子的活性的風(fēng)險(xiǎn)。需要研發(fā)允許在蛋白質(zhì)內(nèi)的單一位點(diǎn)處引入化學(xué)官能團(tuán)的PEG衍生物，其隨后會(huì)使一種或一種以上PEG聚合物與生物活性分子在蛋白質(zhì)表面上經(jīng)明確定義且可預(yù)測的特異性位點(diǎn)處選擇性偶合。
[0015]除賴氨酸殘基之外，所屬領(lǐng)域中已針對研發(fā)靶向其它氨基酸側(cè)鏈(包括半胱氨酸、組氨酸和N末端)的活性PEG試劑作出相當(dāng)大的努力。例如參看美國專利第6，610，281號，其是以引用的方式并入本文中；和〃Polyethylene Glycol and Derivatives forAdvanced PEGylation^, Nektar Molecular Engineering Catalog, 2003,第 1-17 頁?？墒褂枚c(diǎn)突變誘發(fā)和所屬領(lǐng)域中已知的其它技術(shù)將半胱氨酸殘基位點(diǎn)選擇性地引入蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)中，且所得游離巰基部分可與帶有硫醇反應(yīng)性官能團(tuán)的PEG衍生物反應(yīng)。然而，這種方法相當(dāng)復(fù)雜，原因在于引入游離巰基會(huì)使所得蛋白質(zhì)的表達(dá)、折疊和穩(wěn)定性復(fù)雜化。因此，需要具有一種將化學(xué)官能團(tuán)引入生物活性分子中的方法，其能夠使一種或一種以上PEG聚合物與蛋白質(zhì)選擇性偶合，而同時(shí)與巰基和通常見于蛋白質(zhì)中的其它化學(xué)官能團(tuán)相容(即，不與其進(jìn)行不需要的副反應(yīng))。 [0016]自所屬領(lǐng)域的取樣可見，針對與蛋白質(zhì)的側(cè)鏈(具體說來，賴氨酸氨基酸側(cè)鏈上的一NH2部分和半胱氨酸側(cè)鏈上的-SH部分)連接所研發(fā)的這些衍生物中的多種已經(jīng)證明在其合成和使用中有問題。一些衍生物與蛋白質(zhì)形成不穩(wěn)定鍵，其在水性環(huán)境中(諸如在血流中)經(jīng)歷水解且因此分解、降解或在其它方面不穩(wěn)定。一些衍生物形成較穩(wěn)定的鍵，但在鍵形成之前經(jīng)歷水解，這意謂著PEG衍生物上的反應(yīng)性基團(tuán)可在蛋白質(zhì)連接之前失活。一些衍生物具有些許毒性且因此不太適用于活體內(nèi)。一些衍生物反應(yīng)過慢以致于實(shí)際上無用。一些衍生物通過與負(fù)責(zé)蛋白質(zhì)活性的位點(diǎn)連接而導(dǎo)致蛋白質(zhì)活性喪失。一些衍生物對于其將連接的位點(diǎn)無特異性，這也可導(dǎo)致所需活性喪失且結(jié)果缺乏再現(xiàn)性。為克服與用聚(乙二醇)部分修飾蛋白質(zhì)相關(guān)的難題，已研發(fā)出較穩(wěn)定(例如，美國專利6，602，498，其是以引用的方式并入本文中)或與分子和表面上的硫醇部分選擇性反應(yīng)(例如，美國專利6，610，281，其是以引用的方式并入本文中)的PEG衍生物。在所屬領(lǐng)域中明顯需要直到要求選擇性反應(yīng)形成穩(wěn)定化學(xué)鍵之前都在生理環(huán)境中呈化學(xué)惰性的PEG衍生物。
[0017]近來，在蛋白質(zhì)科學(xué)中已報(bào)導(dǎo)一種全新的技術(shù)，其有希望克服與蛋白質(zhì)的位點(diǎn)特異性修飾相關(guān)的許多局限。具體說來，已將新組分加到原核生物大腸桿菌(Escherichia coli ；E.coli)(例如，L.Wang 等人,(2001), Science292:498-500)和真核生物釀酒酵母(Sacchromyces cerevisiae ；S.cerevisiae)(例如，J.Chin 等人，Science301:964-7 (2003))的蛋白質(zhì)生物合成機(jī)構(gòu)中，其使得能夠在活體內(nèi)向蛋白質(zhì)中并入非基因編碼的氨基酸。使用這種方法，已經(jīng)回應(yīng)琥珀密碼子TAG而將具有新穎化學(xué)、物理或生物特性的眾多新穎氨基酸(包括光親和性標(biāo)記和可光異構(gòu)化氨基酸、酮基氨基酸和糖基化氨基酸)有效且高保真地并入大腸桿菌和酵母中的蛋白質(zhì)中。例如參看J.W.Chin等人，(2002), Tournal of the American Chemical Societyl24:9026-9027 ；J.ff.Chin, &P.G.Schultz, (2002).ChemBioChem3(ll): 1135-1137 ；J.ff.Chin 等人，(2002).PNASUnited States of America99:1102Q-11024:和 L.Wang, &P.G.Schultz, (2002), Chem.Comm., 1:1-11。這些研究已證實(shí)有可能選擇性且常規(guī)地引入諸如酮基、炔基和疊氮基部分的化學(xué)官能團(tuán)，所述化學(xué)官能團(tuán)未見于蛋白質(zhì)中，對見于20種常見基因編碼氨基酸中的所有官能團(tuán)呈化學(xué)惰性并且可用于有效且選擇性地反應(yīng)以形成穩(wěn)定共價(jià)鍵。
[0018]將非基因編碼的氨基酸并入蛋白質(zhì)中的能力允許引入可提供天然存在官能團(tuán)(諸如賴氨酸的ε-NH2、半胱氨酸的巰基-SH、組氨酸的亞氨基等)的有價(jià)值替代物的化學(xué)官能團(tuán)。已知某些化學(xué)官能團(tuán)對見于20種常見基因編碼氨基酸中的官能團(tuán)呈惰性，但完全且有效地反應(yīng)以形成穩(wěn)定鍵。舉例來說，在所屬領(lǐng)域中已知疊氮基和乙炔基在存在催化量的銅的情況下在水性條件中經(jīng)歷Huisgen[3+2]環(huán)加成反應(yīng)。例如參看Tornoe等人，(2002) J.0rg.Chem.67:3057-3064 ；和 Rostovtsev 等人，(2002) Angew.Chem.1nt.Ed.41:2596-2599。舉例來說，通過將疊氮基部分引入蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)中，能夠并入對見于蛋白質(zhì)中的胺、巰基、羧酸、羥基呈化學(xué)惰性但也與乙炔部分平穩(wěn)且有效地反應(yīng)形成環(huán)加成產(chǎn)物的官能團(tuán)。重要的是，在不存在乙炔部分的情況下，疊氮基在存在其它蛋白質(zhì)側(cè)鏈的情況下且在生理?xiàng)l件下保持化學(xué)惰性且不起反應(yīng)。
[0019]本發(fā)明尤其針對與BPFI的活性和制備相關(guān)的問題，且也針對具有改良的生物或藥理學(xué)特性(諸如改良的治療半衰期)的BPFI的制備。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0020]本發(fā)明提供HR-C源性肽的具有改良的螺旋傾向的RSV進(jìn)入抑制劑。本發(fā)明還提供具有融合抑制劑活性與陰離子肽活性的組合的RSV進(jìn)入抑制劑。本發(fā)明還提供具有位點(diǎn)特異性聚乙二醇化以改 良肽的藥理學(xué)特性的BPFI。本發(fā)明提供生物合成肽融合抑制劑(BPFI)，其包括但不限于膜融合抑制肽和陰離子肽，BPFI包含一個(gè)或一個(gè)以上非天然編碼的氨基酸。具有治療活性的任何BPF1、其片段、類似物或變體都可用于本發(fā)明中。已提供可用于本發(fā)明中的BPFI的眾多實(shí)例。然而，所提供的列表并不詳盡并且不欲以任何方式限制可用于本發(fā)明中的BPFI的數(shù)量或類型。因此，可根據(jù)本發(fā)明對任何BPFI和/或由任何BPFI (包括新穎BPFI)產(chǎn)生的片段、類似物和變體進(jìn)行修飾并且在治療上使用。
[0021]在一些實(shí)施例中，BPFI包含一個(gè)或一個(gè)以上翻譯后修飾。在一些實(shí)施例中，BPFI與連接基、聚合物或生物活性分子連接。在一些實(shí)施例中，BPFI與雙官能聚合物、雙官能連接基或至少一種其它BPFI連接。
[0022]在一些實(shí)施例中，非天然編碼的氨基酸與水溶性聚合物連接。在一些實(shí)施例中，水溶性聚合物包含聚(乙二醇)部分。在一些實(shí)施例中，聚(乙二醇)分子為雙官能聚合物。在一些實(shí)施例中，雙官能聚合物與第二多肽連接。在一些實(shí)施例中，第二多肽為BPFI。
[0023]在一些實(shí)施例中，非天然編碼的氨基酸與水溶性聚合物連接。在一些實(shí)施例中，非天然編碼的氨基酸與具有連接基的水溶性聚合物連接或與水溶性聚合物鍵結(jié)。在一些實(shí)施例中，非天然編碼的氨基酸與具有可生物降解的連接基的水溶性聚合物連接。在一些實(shí)施例中，可生物降解的連接基可用于形成包含BPFI的前藥。在所述前藥方法的一個(gè)實(shí)例中，水溶性聚合物阻斷BPFI活性并且連接基的降解釋放活性BPFI。在一些實(shí)施例中，非天然編碼的氨基酸與?；糠只蝓；溸B接。在一些實(shí)施例中，非天然編碼的氨基酸通過連接基與?；糠只蝓；溸B接。在一些實(shí)施例中，非天然編碼的氨基酸通過聚(乙二醇)連接基或前藥與?；糠只蝓；溸B接。在一些實(shí)施例中，非天然編碼的氨基酸與血清白蛋白連接。在一些實(shí)施例中，非天然編碼的氨基酸通過連接基與血清白蛋白連接。在一些實(shí)施例中，連接基為聚(乙二醇)或前藥。在一些實(shí)施例中，連接基為兩次裂解(dual cleavage)的前藥，其中第I步驟為諸如白蛋白的分子的受控釋放并且第2步驟為連接基或其部分的第二次裂解釋放。[0024]在一些實(shí)施例中，BPFI包含BPFI中存在的兩個(gè)氨基酸之間的分子內(nèi)橋。在一些實(shí)施例中，BPFI包含一個(gè)或一個(gè)以上非天然編碼的氨基酸。兩個(gè)橋接殘基中一個(gè)可為非天然編碼的氨基酸或天然編碼的氨基酸。非天然編碼的氨基酸可通過連接基、聚合物或生物活性分子接合。
[0025]在一些實(shí)施例中，BPFI包含至少兩個(gè)與包含聚(乙二醇)部分的水溶性聚合物連接的氨基酸。在一些實(shí)施例中，至少一個(gè)氨基酸為非天然編碼的氨基酸。
[0026]在一些實(shí)施例中，將一個(gè)或一個(gè)以上非天然編碼的氨基酸并入BPFI的任何位置處，諸如HR-C、HR-N或陰離子肽、這些肽中任一者或一者以上的融合體或這些肽中任一者或一者以上的片段、第一氨基酸(氨基酸末端處)之前、在羧基末端處添加或其任何組合。在一些實(shí)施例中，將一個(gè)或一個(gè)以上非天然編碼的氨基酸并入BPFI氨基酸序列內(nèi)的任何位置處。
[0027]在一些實(shí)施例中，在這些位置的一個(gè)或一個(gè)以上位置中的非天然編碼的氨基酸與水溶性聚合物連接。
[0028]在一些實(shí)施例中，本發(fā)明的BPFI多肽在與BPFI序列相鄰或BPFI序列內(nèi)的一個(gè)或一個(gè)以上氨基酸位置處包含一個(gè)或一個(gè)以上非天然存在的氨基酸以提供拮抗劑。
[0029]在一些實(shí)施例中，BPFI包含調(diào)節(jié)BPFI對BPFI受體或結(jié)合搭配物(包括但不限于，蛋白質(zhì)、多肽、小分子、脂質(zhì)或核酸)的親和力的取代、添加或缺失。在一些實(shí)施例中，BPFI包含當(dāng)與無取代、添加或缺失的相應(yīng)BPFI的穩(wěn)定性相比時(shí)增加BPFI的穩(wěn)定性的取代、添加或缺失。在一些實(shí)施例中，BPFI包含當(dāng)與無取代、添加或缺失的相應(yīng)BPFI的免疫原性相比時(shí)調(diào)節(jié)BPFI的免疫原性的取代、添加或缺失。在一些實(shí)施例中，BPFI包含當(dāng)與無取代、添加或缺失的相應(yīng)BPFI的血清半衰期或循環(huán)時(shí)間相比時(shí)調(diào)節(jié)BPFI的血清半衰期或循環(huán)時(shí)間的取代、添加或缺失。
[0030]在一些實(shí)施例中，BPFI包含當(dāng)與無取代、添加或缺失的相應(yīng)BPFI的水溶性相比時(shí)增加BPFI的水溶性的取代、添加或缺失。在一些實(shí)施例中，BPFI包含當(dāng)與無取代、添加或缺失的相應(yīng)BPFI的溶解性相比時(shí)增加宿主細(xì)胞中所產(chǎn)生的BPFI的溶解性的取代、添加或缺失。在一些實(shí)施例中，BPFI包含當(dāng)與無取代、添加或缺失的相應(yīng)BPFI的表達(dá)或合成相比時(shí)增加宿主細(xì)胞中BPFI的表達(dá)或增加活體外合成的取代、添加或缺失。在一些實(shí)施例中，BPFI包含當(dāng)與無取代、添加或缺失的相應(yīng)BPFI的肽酶或蛋白酶敏感性相比時(shí)降低BPFI的肽酶或蛋白酶敏感性的取代、添加或缺失。在一些實(shí)施例中，BPFI包含當(dāng)與無取代、添加或缺失的相應(yīng)BPFI的活性相比時(shí)調(diào)節(jié)BPFI受體或結(jié)合搭配物的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)活性的取代、添加或缺失。在一些實(shí)施例中，BPFI包含當(dāng)與無取代、添加或缺失的相應(yīng)BPFI的結(jié)合相比時(shí)調(diào)節(jié)其與另一分子(諸如受體)的結(jié)合的取代、添加或缺失。在一些實(shí)施例中，BPFI包含當(dāng)與在無取代、添加或缺失的相應(yīng)BPFI結(jié)合后結(jié)合搭配物的構(gòu)象或生物活性相比時(shí)調(diào)節(jié)其結(jié)合搭配物的構(gòu)象或一種或一種以上生物活性的取代、添加或缺失。
[0031]在一些實(shí)施例中，BPFI中的氨基酸取代可以天然存在或非天然存在的氨基酸進(jìn)行，條件是至少一個(gè)取代是以非天然編碼的氨基酸進(jìn)行。
[0032]在一些實(shí)施例中，非天然編碼的氨基酸包含羰基、氨基氧基、肼基、酰肼基、氨基脲基、置氣基或炔基。
[0033]在一些實(shí)施例中，非天然編碼的氨基酸包含羰基。在一些實(shí)施例中，非天然編碼的氨基酸具有以下結(jié)構(gòu):
[0034]
【權(quán)利要求】
1.一種生物合成多肽融合抑制劑(BPFI)，其包含一個(gè)或一個(gè)以上非天然編碼的氨基酸。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的BPFI，其中所述BPFI包含一個(gè)或一個(gè)以上翻譯后修飾。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的BPFI，其中所述多肽與連接基、聚合物或生物活性分子連接。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的BPFI，其中所述多肽與水溶性聚合物連接。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的BPFI，其中所述多肽與雙官能聚合物、雙官能連接基或至少一個(gè)其它BPFI連接。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的BPFI，其中所述雙官能連接基或聚合物與第二多肽連接。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的BPFI，其中所述第二多肽為BPFI。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的BPFI，其中所述水溶性聚合物包含聚(乙二醇)部分。
9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的BPFI，其中所述水溶性聚合物與所述BPFI中存在的非天然編碼的氨基酸連接。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的BPFI，其中所述非天然編碼的氨基酸對連接基、聚合物或生物活性分子具反應(yīng)性，所述連接基、聚合物或生物活性分子對所述多肽中的20種常見氨基酸中的任一種不具反應(yīng)性。
11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的BPFI，其中所述非天然編碼的氨基酸包含羰基、氨基氧基、餅基、酸餅基、氣基服基、置氣基或炔基。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的BPFI，其中所述非天然編碼的氨基酸包含羰基。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的BPFI，其中所述非天然編碼的氨基酸具有以下結(jié)構(gòu):
14.根據(jù)權(quán)利要求11所述的BPFI，其中所述非天然編碼的氨基酸包含氨基氧基。
15.根據(jù)權(quán)利要求11所述的BPFI，其中所述非天然編碼的氨基酸包含酰肼基。
16.根據(jù)權(quán)利要求11所述的BPFI，其中所述非天然編碼的氨基酸包含肼基。
17.根據(jù)權(quán)利要求11所述的BPFI，其中所述非天然編碼的氨基酸殘基包含氨基脲基。
18.根據(jù)權(quán)利要求11所述的BPFI，其中所述非天然編碼的氨基酸殘基包含疊氮基。
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的BPFI，其中所述非天然編碼的氨基酸具有以下結(jié)構(gòu):
20.根據(jù)權(quán)利要求11所述的BPFI，其中所述非天然編碼的氨基酸包含炔基。
21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的BPFI，其中所述非天然編碼的氨基酸具有以下結(jié)構(gòu):
22.根據(jù)權(quán)利要求4所述的BPFI，其中所述水溶性聚合物具有介于約0.1kDa與約IOOkDa之間的分子量。
23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的BPFI，其中所述水溶性聚合物具有介于約0.1kDa與約50kDa之間的分子量。
24.根據(jù)權(quán)利要求4所述的BPFI，其是通過使包含含羰基氨基酸的BPFI與包含氨基氧基、肼基、酰肼基或氨基脲基的水溶性聚合物反應(yīng)來制備。
25.根據(jù)權(quán)利要求24所述的BPFI，其中所述氨基氧基、肼基、酰肼基或氨基脲基通過酰胺鍵與所述水溶性聚合物連接。
26.根據(jù)權(quán)利要求4所述的BPFI，其是通過使包含羰基的水溶性聚合物與包含非天然編碼的氨基酸的多肽反應(yīng)來制備，所述非天然編碼的氨基酸包含氨基氧基、肼基、酰肼基或氣基服基。
27.根據(jù)權(quán)利要求4所述的BPFI，其是通過使包含含炔氨基酸的BPFI與包含疊氮基部分的水溶性聚合物反應(yīng)來制備。
28.根據(jù)權(quán)利要求4所述的BPFI，其是通過使包含含疊氮基氨基酸的BPFI與包含炔部分的水溶性聚合物反應(yīng)來制備。
29.根據(jù)權(quán)利要求28所述的BPFI，其中所述疊氮基或炔基通過酰胺鍵與水溶性聚合物連接。
30.根據(jù)權(quán)利要求4所述的BPFI，其中所述水溶性聚合物為分支或多臂聚合物。
31.根據(jù)權(quán)利要求30所述的BPFI，其中所述水溶性聚合物的各分支具有介于約IkDa與約IOOkDa之間的分子量。
32.根據(jù)權(quán)利要求1所述的BPFI，其中所述多肽為拮抗劑。
33.根據(jù)權(quán)利要求32所述的BPFI，其中所述多肽包含一個(gè)或一個(gè)以上翻譯后修飾、連接基、聚合物或生物活性分子。
34.根據(jù)權(quán)利要求33所述的BPFI，其中所述聚合物包含選自由水溶性聚合物和聚(乙二醇)組成的群組的部分。
35.一種經(jīng)分離核酸,其包含在嚴(yán)格條件下與編碼BPFI的核苷酸序列雜交的聚核苷酸，其中所述聚核苷酸包含至少一個(gè)選擇密碼子。
36.根據(jù)權(quán)利要求35所述的經(jīng)分離核酸，其中所述選擇密碼子選自由琥珀密碼子、赭石密碼子、蛋白石密碼子、獨(dú)特密碼子、稀有密碼子和四堿基密碼子組成的群組。
37.一種制備根據(jù)權(quán)利要求3所述的BPFI的方法，所述方法包含使包含非天然編碼的氨基酸的經(jīng)分離BPFI與包含與所述非天然編碼的氨基酸反應(yīng)的部分的連接基、聚合物或生物活性分子接觸。
38.根據(jù)權(quán)利要求37所述的方法，其中所述聚合物包含選自由水溶性聚合物和聚(乙二醇)組成的群組的部分。
39.一種細(xì)胞 ，其包含根據(jù)權(quán)利要求35所述的核酸。
【文檔編號】C07K14/135GK103965300SQ201410202290
【公開日】2014年8月6日 申請日期:2006年11月1日 優(yōu)先權(quán)日:2005年11月2日
【發(fā)明者】羅伯托·馬利安, 布魯斯·E.·金摩 申請人:Ambrx公司