專利名稱：一種制備波戈甾醇的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種制備波戈留醇的方法。
背景技術(shù)：
波戈甾醇(Pogosterol) CAS登錄號(hào)為149155-26-0，分子式為C29H46O6,分子量為490. 68,是一種留體阜苷元，mp. 154_157°C。主要存在于菊科(Compositae)植物波戈斑鳩菊Vernonia pogosperma的葉中,現(xiàn)代藥理研究表明,波戈留醇具有一定的細(xì)胞毒活性,體外對(duì)L-1210細(xì)胞呈弱的細(xì)胞毒作用，目前對(duì)波戈甾醇的研究較少，因此需要一種高效、環(huán)保、簡(jiǎn)單、適合工業(yè)化生產(chǎn)的制備方法，為波戈斑鳩菊中有效成分以及波戈留醇的進(jìn)一步研究提供豐富的原料
發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種制備波戈留醇的方法，該方法工藝簡(jiǎn)單、高效、環(huán)保、提率高。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是
(1)將波戈斑鳩菊干燥葉粉碎成粗粉，加入6-15倍藥材重量的質(zhì)量百分比濃度為80-100%的甲醇水溶液,室溫浸泡提取5-10h,過(guò)濾,將濾洛重復(fù)上述操作2-3次,合并濾液，減壓濃縮成浸膏，得甲醇提取物；
(2)將上述步驟得到的甲醇提取物加少量水分散，用二氯甲烷溶液萃取，分取水層和二氯甲烷層，將水層用水飽和正丁醇進(jìn)行萃取，分取上層，即正丁醇層，減壓回收正丁醇得總甾體皂苷；
(3)將總留體皂苷加適量水共沸，冷卻至45-50°C，調(diào)節(jié)pH4.5-5. 5，加入生物酶保溫酶解1-4小時(shí)，酶解液減壓濃縮、離心得粗品；
(4)將上述粗品用高速逆流色譜儀制備分離純化，得到波戈留醇粗晶；
(5)將上述粗晶用二氯甲烷-甲醇(1:3，V/V)重結(jié)晶，過(guò)濾，干燥得到波戈甾醇純品。步驟(3)所述的生物酶可選蝸牛酶、纖維素酶、果膠酶、淀粉酶或半纖維素酶中的一種或幾種重混合，用量為原料的1-3. 5%。。步驟(4)所述高速逆流色譜制備條件為溶劑系統(tǒng)選用氯仿-甲醇-水，體積比為1:4:2,以上相為固定相，下相為流動(dòng)相，轉(zhuǎn)速為850-1000r/min，流動(dòng)相流速為2_4ml/min。本發(fā)明的有益效果是在常溫下進(jìn)行分離和分解，不引入酸堿，目標(biāo)化合物不發(fā)生結(jié)構(gòu)改變，最大程度保持了化合物的穩(wěn)定性。采用采用高速逆流色譜分離，產(chǎn)品無(wú)損失，無(wú)廢棄物產(chǎn)生，再進(jìn)行重結(jié)晶操作可得到高純度波戈留醇，工藝簡(jiǎn)便、得率高。
具體實(shí)施例方式 實(shí)施例I:
取波戈斑鳩菊干燥葉經(jīng)粉碎機(jī)粉碎，稱取粉末10kg，加入12倍藥材重量的85%甲醇溶液中室溫浸泡提取8h，過(guò)濾，將濾渣重復(fù)上述操作，再提取2次，合并濾液，減壓濃縮成浸膏，得甲醇提取物；取浸膏加入2倍體積量的水分散，然后用與水等體積量的二氯甲烷萃取2次，合并二氯甲烷層，減壓回收二氯甲烷(用于下次萃取使用)，將水層繼續(xù)用水飽和正丁醇萃取3次，分取上層即正丁醇層，合并正丁醇層，減壓回收正丁醇(用于下次萃取使用)得總甾體皂苷；將總甾體皂苷加適量水共沸30min，冷卻至45°C，鹽酸調(diào)節(jié)pH至4. 5，加入18g蝸牛酶保溫酶解2小時(shí)，酶解液減壓濃縮，離心得到粗品。取氯仿、甲醇、水按1:4:2比例混合，取上相注入色譜柱作固定相，開啟高速逆流色譜儀，調(diào)整轉(zhuǎn)速900r/min，注入流動(dòng)相，平衡后，調(diào)整流速2. 5ml/min,甲醇溶解粗品，進(jìn)樣，通過(guò)檢測(cè)儀定時(shí)收集流分，流分回收試劑干燥，連續(xù)制備，得到波戈甾醇粗晶，再用二氯甲烷-甲醇(1:3，V/V)重結(jié)晶，濾出結(jié)晶，干燥得到657mg波戈留醇，經(jīng)HPLC檢測(cè)，其含量為98. 8%。實(shí)施例2
取波戈斑鳩菊干燥葉經(jīng)粉碎機(jī)粉碎，稱取粉末10kg，加入10倍藥材重量的100%甲醇溶液中室溫浸泡提取5h，過(guò)濾，將濾渣重復(fù)上述操作，再提取I次，合并濾液，減壓濃縮成浸膏，得甲醇提取物；取浸膏加入2. 5倍體積量的水分散，然后用與水等體積量的二氯甲烷萃 取2次，合并二氯甲烷層，減壓回收二氯甲烷(用于下次萃取使用)，將水層繼續(xù)用水飽和正丁醇萃取3次，分取上層即正丁醇層，合并正丁醇層，減壓回收正丁醇(用于下次萃取使用)得總甾體皂苷；將總甾體皂苷加適量水共沸30min，冷卻至50°C，鹽酸調(diào)節(jié)pH至4. 8，加入IOg果膠酶和半纖維素酶復(fù)合酶(按重量比2:1混合)保溫酶解I小時(shí)，酶解液減壓濃縮，離心得到粗品。取氯仿、甲醇、水按1:4:2比例混合，取上相注入色譜柱作固定相，開啟高速逆流色譜儀，調(diào)整轉(zhuǎn)速950r/min，注入流動(dòng)相，平衡后，調(diào)整流速2. 5ml/min,甲醇溶解粗品，進(jìn)樣，通過(guò)檢測(cè)儀定時(shí)收集流分，流分回收試劑干燥，連續(xù)制備，得到波戈留醇粗晶，再用二氯甲烷-甲醇(1: 3，V/V)重結(jié)晶，濾出結(jié)晶，干燥得到668mg波戈甾醇，經(jīng)HPLC檢測(cè)，其含量為98. 5%ο實(shí)施例3
取波戈斑鳩菊干燥葉經(jīng)粉碎機(jī)粉碎，稱取粉末10kg，加入6倍藥材重量的90%甲醇溶液中室溫浸泡提取10h，過(guò)濾，將濾渣重復(fù)上述操作，再提取2次，合并濾液，減壓濃縮成浸膏，得甲醇提取物；取浸膏加入I. 5倍體積量的水分散，然后用與水等體積量的二氯甲烷萃取2次，合并二氯甲烷層，減壓回收二氯甲烷(用于下次萃取使用)，將水層繼續(xù)用水飽和正丁醇萃取3次，分取上層即正丁醇層，合并正丁醇層，減壓回收正丁醇(用于下次萃取使用)得總甾體皂苷；將總甾體皂苷加適量水共沸30min，冷卻至46°C，鹽酸調(diào)節(jié)pH至5. O,加入22g淀粉酶和蝸牛酶復(fù)合酶(按重量比2:1混合)保溫酶解4小時(shí)，酶解液減壓濃縮，離心得到粗品。取氯仿、甲醇、水按1:4:2比例混合，取上相注入色譜柱作固定相，開啟高速逆流色譜儀，調(diào)整轉(zhuǎn)速850r/min，注入流動(dòng)相，平衡后，調(diào)整流速4. Oml/min,甲醇溶解粗品，進(jìn)樣，通過(guò)檢測(cè)儀定時(shí)收集流分，流分回收試劑干燥，連續(xù)制備，得到波戈留醇粗晶，再用二氯甲烷-甲醇(1:3，V/V)重結(jié)晶，濾出結(jié)晶，干燥得到670mg波戈甾醇，經(jīng)HPLC檢測(cè)，其含量為98. 2%。實(shí)施例4:
取波戈斑鳩菊干燥葉經(jīng)粉碎機(jī)粉碎，稱取粉末10kg，加入8倍藥材重量的80%甲醇溶液中室溫浸泡提取6h，過(guò)濾，將濾渣重復(fù)上述操作，再提取2次，合并濾液，減壓濃縮成浸膏，得甲醇提取物；取浸膏加入2倍體積量的水分散，然后用與水等體積量的二氯甲烷萃取2次，合并二氯甲烷層，減壓回收二氯甲烷(用于下次萃取使用)，將水層繼續(xù)用水飽和正丁醇萃取3次，分取上層即正丁醇層，合并正丁醇層，減壓回收正丁醇(用于下次萃取使用)得總甾體皂苷；將總甾體皂苷加適量水共沸30min，冷卻至50°C，鹽酸調(diào)節(jié)pH至5. 2，加入35g果膠酶保溫酶解2. 5小時(shí)，酶解液減壓濃縮，離心得到粗品。取氯仿、甲醇、水按1:4:2比例混合，取上相注入色譜柱作固定相，開啟高速逆流色譜儀，調(diào)整轉(zhuǎn)速lOOOr/min，注入流動(dòng)相，平衡后，調(diào)整流速2. Oml/min，甲醇溶解粗品，進(jìn)樣，通過(guò)檢測(cè)儀定時(shí)收集流分，流分回收試劑干燥，連續(xù)制備，得到波戈甾醇粗晶，再用二氯甲烷-甲醇(1:3，V/V)重結(jié)晶，濾出結(jié)晶，干燥得到643mg波戈留醇，經(jīng)HPLC檢測(cè)，其含量為99. 2%。 實(shí)施例5:
取波戈斑鳩菊干燥葉經(jīng)粉碎機(jī)粉碎，稱取粉末10kg，加入15倍藥材重量的95%甲醇溶液中室溫浸泡提取8h，過(guò)濾，將濾渣重復(fù)上述操作，再提取I次，合并濾液，減壓濃縮成浸膏，得甲醇提取物；取浸膏加入I. 5倍體積量的水分散，然后用與水等體積量的二氯甲烷萃 取2次，合并二氯甲烷層，減壓回收二氯甲烷(用于下次萃取使用)，將水層繼續(xù)用水飽和正 丁醇萃取3次，分取上層即正丁醇層，合并正丁醇層，減壓回收正丁醇(用于下次萃取使用)得總甾體皂苷；將總甾體皂苷加適量水共沸30min，冷卻至48°C，鹽酸調(diào)節(jié)pH至5. 5，加入26g纖維素酶保溫酶解3. 5小時(shí)，酶解液減壓濃縮，離心得到粗品。取氯仿、甲醇、水按1:4:2比例混合，取上相注入色譜柱作固定相，開啟高速逆流色譜儀，調(diào)整轉(zhuǎn)速920r/min，注入流動(dòng)相，平衡后，調(diào)整流速3. 5ml/min,甲醇溶解粗品，進(jìn)樣，通過(guò)檢測(cè)儀定時(shí)收集流分，流分回收試劑干燥，連續(xù)制備，得到波戈留醇粗晶，再用二氯甲烷-甲醇(1:3，V/V)重結(jié)晶，濾出結(jié)晶，干燥得到662mg波戈留醇，經(jīng)HPLC檢測(cè)，其含量為98. 7%。
權(quán)利要求
1.一種制備波戈留醇的方法，其特征在于包括以下步驟 (1)將波戈斑鳩菊干燥葉粉碎成粗粉，加入6-15倍藥材重量的質(zhì)量百分比濃度為80-100%的甲醇水溶液,室溫浸泡提取5-10h,過(guò)濾,將濾洛重復(fù)上述操作2-3次,合并濾液，減壓濃縮成浸膏，得甲醇提取物； (2)將上述步驟得到的甲醇提取物加少量水分散，用二氯甲烷溶液萃取，分取水層和二氯甲烷層，將水層用水飽和正丁醇進(jìn)行萃取，分取上層，即正丁醇層，減壓回收正丁醇得總甾體皂苷； (3)將總留體皂苷加適量水共沸，冷卻至45-50°C，調(diào)節(jié)pH4.5-5. 5，加入生物酶保溫酶解1-4小時(shí)，酶解液減壓濃縮、離心得粗品； (4)將上述粗品用高速逆流色譜儀制備分離純化，得到波戈留醇粗晶； (5)將上述粗晶用二氯甲烷-甲醇(1:3，V/V)重結(jié)晶，過(guò)濾，干燥得到波戈留醇純品。
2.如權(quán)利要求I所述的一種制備波戈留醇的方法，其特征在于步驟(3)所述的生物酶可選蝸牛酶、纖維素酶、果膠酶、淀粉酶或半纖維素酶中的一種或幾種重混合，用量為原料的 1-3. 5%0。
3.如權(quán)利要求I所述的一種制備波戈留醇的方法，其特征在于步驟(4)所述高速逆流色譜制備條件為溶劑系統(tǒng)選用氯仿-甲醇-水，體積比為1:4:2，以上相為固定相，下相為流動(dòng)相，轉(zhuǎn)速為850-1000r/min,流動(dòng)相流速為2_4ml/min。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種制備波戈甾醇的方法。該方法是采用甲醇浸泡、有機(jī)溶劑萃取酶解、高速逆流色譜分離以及重結(jié)晶等方法得到純度大于95%的波戈甾醇。該方法不經(jīng)柱層析、合成等操作，具有工藝簡(jiǎn)單、效率高、分離環(huán)境緩和、產(chǎn)品純度高等特點(diǎn)，適合工業(yè)化生產(chǎn)，為波戈斑鳩菊中有效成分的提取利用奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。
文檔編號(hào)C07J71/00GK102875637SQ20121036313
公開日2013年1月16日 申請(qǐng)日期2012年9月26日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月26日
發(fā)明者蘇劉花 申請(qǐng)人:南京澤朗農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司