一種從紅景天中提取紅景天甙的方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于藥物提取技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種從紅景天中提取紅景天甙的方法,包括以下制備步驟：1)取紅景天除雜，粉碎，酶解，滅酶，過濾，收集濾液，濃縮，噴霧干燥，得到酶解提取粉；2)微波提取，過濾，濃縮，加入乙醇溶液沉淀，離心，沉淀；3)二次洗滌，真空干燥，得到紅景天甙。本發(fā)明方法制備的紅景天甙提取率和純度高，且能夠提高紅景天甙的抗腫瘤和抗疲勞功效。
【專利說明】
一種從紅景天中提取紅景天甙的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于藥物提取技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種從紅景天中提取紅景天甙的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 紅景天(Rhodiola)為景天科紅景天屬多年生草本或亞灌木植物，是珍稀藥用植物 之一，被譽(yù)為"高原人參"。該屬植物在全世界共約90種，在我國分布70多種，主產(chǎn)于華北、東 北、西南、西北和華中等地區(qū)。其化學(xué)成分主要有黃酮類、酪醇、紅景天(Salidroside)、谷甾 醇、有機(jī)酸、揮發(fā)油、多糖、脂肪、蛋白質(zhì)等。其中，紅景天甙及其苷元酪醇是紅景天主要有效 成份，也是評(píng)價(jià)紅景天及其提取物的最重要指標(biāo)。現(xiàn)代藥理學(xué)研究證實(shí)，紅景天提取物具有 抗衰老、抗腫瘤、抗病毒、抗菌、抗缺氧、抗疲勞、抗輻射、抗氧化、鎮(zhèn)痛、對(duì)中樞神經(jīng)及內(nèi)分泌 系統(tǒng)雙向調(diào)節(jié)等多種活性，且具有很小副作用。
[0003] 研究一種提高紅景天甙抗腫瘤和抗疲勞功效的方法，是本發(fā)明的出發(fā)點(diǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種從紅景天中提取紅景天甙的方法，該方法 制備的紅景天甙提取率和純度高，且能夠提高紅景天甙的抗腫瘤和抗疲勞功效。
[0005] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所要解決的技術(shù)方案為：
[0006] 本發(fā)明提供一種從紅景天中提取紅景天甙的方法，包括以下制備步驟：
[0007] 1)取紅景天除雜，粉碎，加入其重量9~16倍水，調(diào)節(jié)pH為3.8~4.8，溫度為42~50 。(：，再加入紅景天重量0.03~0.09 %的復(fù)合酶，酶解100~200min，滅酶，過濾，收集濾液，濃 縮濾液至濾液原體積的1/4~1/2，噴霧干燥，得到酶解提取粉；
[0008] 2)再向酶解提取粉中加入酶解提取粉重量12~18倍的甲醇溶液，在350~550W功 率下微波提取50~100s，過濾，將濾液濃縮至相對(duì)密度為1.12~1.20,加入乙醇溶液沉淀， 4000~6000r/min轉(zhuǎn)速下離心3~6min得沉淀；
[0009] 3)將沉淀用紅景天原質(zhì)量6~10倍的無水甲醇進(jìn)行第一次洗滌，再用紅景天原質(zhì) 量4~8倍的無水乙酸乙酯進(jìn)行第二次洗滌，真空干燥，得到紅景天甙。
[0010] 本發(fā)明所述的復(fù)合酶為纖維素酶、木瓜蛋白酶、果膠裂解酶和脂肪酶的混合物。 [0011] 更優(yōu)選地，本發(fā)明所述步驟1)的復(fù)合酶為質(zhì)量比為15~25:5~10:10~20:1~3的 纖維素酶、木瓜蛋白酶、果膠裂解酶和脂肪酶的混合物。
[0012] 更優(yōu)選地，本發(fā)明所述步驟1)的復(fù)合酶為質(zhì)量比為20:8:15:2的纖維素酶、木瓜蛋 白酶、果膠裂解酶和脂肪酶的混合物。
[0013] 優(yōu)選地，本發(fā)明所述步驟2)甲醇溶液的體積濃度為60~70%。
[0014]優(yōu)選地，本發(fā)明所述步驟2)乙醇溶液的體積濃度為85~95%。
[0015] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果在于：
[0016] 1、本發(fā)明先用復(fù)合酶酶解紅景天，最大限度使紅景天甙溶出，保證提取率，再結(jié)合 微波提取，進(jìn)一步提高紅景天甙純度，最后進(jìn)行洗滌，最大限度保證紅景天甙純度，同時(shí)整 個(gè)過程的操作，保證了紅景天甙的生物活性，有效提高紅景天甙抗腫瘤和抗疲勞功效。
[0017] 2、本發(fā)明方法易于操作，制備得到的紅景天甙提取率和純度高。
[0018] 3、用小鼠肉瘤180(S180)，按照常規(guī)方法進(jìn)行抗癌試驗(yàn)，接種瘤細(xì)胞后24h，腹腔注 射(ip)生理鹽水(空白組）、現(xiàn)有技術(shù)制備得到的紅景天甙、本發(fā)明方法制備得到的紅景天 戒，每天一次，每只的注射量為0.5mg/kg，注射8天，紅景天戒對(duì)實(shí)體瘤的影響結(jié)果為:相對(duì) 空白組，現(xiàn)有技術(shù)制備得到的紅景天甙抑癌率為33.5~41.2%，本發(fā)明方法制備得到的紅 景天甙抑癌率62.4~72.4%，說明本發(fā)明方法制備得到的紅景天甙的抗腫瘤效果顯著提 尚。
【具體實(shí)施方式】
[0019] 以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但本發(fā)明并不局限于這些實(shí)施例。
[0020] 實(shí)施例1
[0021] 1)取紅景天除雜，粉碎，加入其重量9倍水，調(diào)節(jié)pH為3.8，溫度為50°C，再加入紅景 天重量0.09 %的復(fù)合酶，酶解lOOmin，滅酶，過濾，收集濾液，濃縮濾液至濾液原體積的1/4， 噴霧干燥，得到酶解提取粉，所述復(fù)合酶為質(zhì)量比為15:10:10:1的纖維素酶、木瓜蛋白酶、 果膠裂解酶和脂肪酶的混合物；
[0022] 2)再向酶解提取粉中加入酶解提取粉重量12倍體積濃度為70%的甲醇溶液，在 350W功率下微波提取100 s，過濾，將濾液濃縮至相對(duì)密度為1.12，加入體積濃度為95 %的乙 醇溶液沉淀，4000r/min轉(zhuǎn)速下離心5min得沉淀；
[0023] 3)將沉淀用紅景天原質(zhì)量6倍的無水甲醇進(jìn)行第一次洗滌，再用紅景天原質(zhì)量8倍 的無水乙酸乙酯進(jìn)行第二次洗滌，真空干燥，得到紅景天甙，經(jīng)檢測(cè)，紅景天甙的純度為 99.1%〇
[0024] 實(shí)施例2
[0025] 1)取紅景天除雜，粉碎，加入其重量11倍水，調(diào)節(jié)pH為4.1，溫度為48°C，再加入紅 景天重量〇. 08 %的復(fù)合酶，酶解120min，滅酶，過濾，收集濾液，濃縮濾液至濾液原體積的1/ 2, 噴霧干燥，得到酶解提取粉，所述復(fù)合酶為質(zhì)量比為18:9:13:3的纖維素酶、木瓜蛋白酶、 果膠裂解酶和脂肪酶的混合物；
[0026] 2)再向酶解提取粉中加入酶解提取粉重量14倍體積濃度為68%的甲醇溶液，在 400W功率下微波提取90s，過濾，將濾液濃縮至相對(duì)密度為1.14，加入體積濃度為85 %的乙 醇溶液沉淀，4500r/min轉(zhuǎn)速下離心6min得沉淀；
[0027] 3)將沉淀用紅景天原質(zhì)量7倍的無水甲醇進(jìn)行第一次洗滌，再用紅景天原質(zhì)量7倍 的無水乙酸乙酯進(jìn)行第二次洗滌，真空干燥，得到紅景天甙，經(jīng)檢測(cè)，紅景天甙的純度為 99.2%〇
[0028] 實(shí)施例3
[0029] 1)取紅景天除雜，粉碎，加入其重量13倍水，調(diào)節(jié)pH為4.3，溫度為46 °C，再加入紅 景天重量0.06 %的復(fù)合酶，酶解150min，滅酶，過濾，收集濾液，濃縮濾液至濾液原體積的1/ 3, 噴霧干燥，得到酶解提取粉，所述復(fù)合酶為質(zhì)量比為20:8:15:2的纖維素酶、木瓜蛋白酶、 果膠裂解酶和脂肪酶的混合物；
[0030] 2)再向酶解提取粉中加入酶解提取粉重量16倍體積濃度為65%的甲醇溶液，在 450W功率下微波提取80s，過濾，將濾液濃縮至相對(duì)密度為1.16，加入體積濃度為90 %的乙 醇溶液沉淀，5000r/min轉(zhuǎn)速下離心5min得沉淀；
[0031] 3)將沉淀用紅景天原質(zhì)量8倍的無水甲醇進(jìn)行第一次洗滌，再用紅景天原質(zhì)量6倍 的無水乙酸乙酯進(jìn)行第二次洗滌，真空干燥，得到紅景天甙，經(jīng)檢測(cè)，紅景天甙的純度為 99.4% 〇
[0032] 實(shí)施例4
[0033] 1)取紅景天除雜，粉碎，加入其重量15倍水，調(diào)節(jié)pH為4.5，溫度為44°C，再加入紅 景天重量0.04 %的復(fù)合酶，酶解180min，滅酶，過濾，收集濾液，濃縮濾液至濾液原體積的1/ 3, 噴霧干燥，得到酶解提取粉，所述復(fù)合酶為質(zhì)量比為23:6:18:2的纖維素酶、木瓜蛋白酶、 果膠裂解酶和脂肪酶的混合物；
[0034] 2)再向酶解提取粉中加入酶解提取粉重量17倍體積濃度為62%的甲醇溶液，在 500W功率下微波提取60s，過濾，將濾液濃縮至相對(duì)密度為1.18，加入體積濃度為90 %的乙 醇溶液沉淀，5500r/min轉(zhuǎn)速下離心4min得沉淀；
[0035] 3)將沉淀用紅景天原質(zhì)量9倍的無水甲醇進(jìn)行第一次洗滌，再用紅景天原質(zhì)量5倍 的無水乙酸乙酯進(jìn)行第二次洗滌，真空干燥，得到紅景天甙，經(jīng)檢測(cè)，紅景天甙的純度為 99.3%〇
[0036] 實(shí)施例5
[0037] 1)取紅景天除雜，粉碎，加入其重量16倍水，調(diào)節(jié)pH為4.8，溫度為42°C，再加入紅 景天重量0.03 %的復(fù)合酶，酶解200min，滅酶，過濾，收集濾液，濃縮濾液至濾液原體積的1/ 4, 噴霧干燥，得到酶解提取粉，所述復(fù)合酶為質(zhì)量比為25:5:20:1的纖維素酶、木瓜蛋白酶、 果膠裂解酶和脂肪酶的混合物；
[0038] 2)再向酶解提取粉中加入酶解提取粉重量18倍體積濃度為60%的甲醇溶液，在 550W功率下微波提取50s，過濾，將濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20，加入體積濃度為85 %的乙 醇溶液沉淀，6000r/min轉(zhuǎn)速下離心3min得沉淀；
[0039] 3)將沉淀用紅景天原質(zhì)量0倍的無水甲醇進(jìn)行第一次洗滌，再用紅景天原質(zhì)量4倍 的無水乙酸乙酯進(jìn)行第二次洗滌，真空干燥，得到紅景天甙，經(jīng)檢測(cè)，紅景天甙的純度為 99.1%〇
[0040] 試驗(yàn)例:本發(fā)明方法制備得到的紅景天甙抗疲勞試驗(yàn)
[0041] 選昆明小鼠30只，隨機(jī)分為3組，分別為對(duì)照組、A組(現(xiàn)有技術(shù)制備得到的紅景天 甙）、B組(本發(fā)明實(shí)施例3制備得到的紅景天甙），每組10只。現(xiàn)A組和B組按每天300mg/kg的 劑量給昆明小鼠灌胃，對(duì)照組灌胃同體積生理鹽水，連續(xù)灌胃30d。
[0042] 1、小鼠末次灌胃給藥30min后，尾部載5%體重鉛皮，置于游泳箱（水深30cm、水溫 25°C)中游泳，記錄游泳開始至死亡(小鼠沉降不露頭)時(shí)間，即小鼠負(fù)重游泳時(shí)間。
[0043] 2、小鼠末次灌胃給藥30min后分別于30°C水中游泳60min，休息20min后摘眼球取 血，分離血清，嚴(yán)格按試劑盒說明測(cè)定血清尿素氮及乳酸水平。
[0044] 3、鼠摘眼球取血后立即斷頸處死，剖出肝臟，用生理鹽水沖洗，濾紙吸干后準(zhǔn)確稱 取肝組織，嚴(yán)格按試劑盒說明測(cè)定肝糖原水平。
[0045] 紅景天甙對(duì)昆明小鼠負(fù)重游泳時(shí)間及抗疲勞生化指標(biāo)的影響，具體見表1:
[0046] 表1紅景天甙對(duì)昆明小鼠負(fù)重游泳時(shí)間及抗疲勞生化指標(biāo)
[0047]
[0048] 注:*和**分別表示與對(duì)照組相比存在顯著差異(P〈0.05)或極顯著差異(P〈0.01)。
[0049] 從上表可知，本發(fā)明方法能夠提高紅景天甙的抗疲勞功效。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種從紅景天中提取紅景天甙的方法，其特征在于，包括以下制備步驟： 1) 取紅景天除雜，粉碎，加入其重量9~16倍水，調(diào)節(jié)pH為3.8~4.8，溫度為42~50°C， 再加入紅景天重量0.03~0.09 %的復(fù)合酶，酶解100~200min，滅酶，過濾，收集濾液，濃縮 濾液至濾液原體積的1/4~1/2，噴霧干燥，得到酶解提取粉； 2) 再向酶解提取粉中加入酶解提取粉重量12~18倍的甲醇溶液，在350~550W功率下 微波提取50~100s，過濾，將濾液濃縮至相對(duì)密度為1.12~1.20，加入乙醇溶液沉淀，4000 ~6000r/min轉(zhuǎn)速下離心3~6min得沉淀； 3) 將沉淀用紅景天原質(zhì)量6~10倍的無水甲醇進(jìn)行第一次洗滌，再用紅景天原質(zhì)量4~ 8倍的無水乙酸乙酯進(jìn)行第二次洗滌，真空干燥，得到紅景天甙； 所述的復(fù)合酶為纖維素酶、木瓜蛋白酶、果膠裂解酶和脂肪酶的混合物。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從紅景天中提取紅景天甙的方法，其特征在于:所述步驟1)的 復(fù)合酶為質(zhì)量比為15~25:5~10:10~20:1~3的纖維素酶、木瓜蛋白酶、果膠裂解酶和脂 肪酶的混合物。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的從紅景天中提取紅景天甙的方法，其特征在于:所述步驟1)的 復(fù)合酶為質(zhì)量比為20:8:15:2的纖維素酶、木瓜蛋白酶、果膠裂解酶和脂肪酶的混合物。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從紅景天中提取紅景天甙的方法，其特征在于:所述步驟2)甲 醇溶液的體積濃度為60~70%。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從紅景天中提取紅景天甙的方法，其特征在于:所述步驟2)乙 醇溶液的體積濃度為85~95%。
【文檔編號(hào)】C07H1/08GK106083950SQ201610459614
【公開日】2016年11月9日
【申請(qǐng)日】2016年6月22日
【發(fā)明人】高楓
【申請(qǐng)人】高楓