專利名稱：從油茶餅中提取表沒食子兒茶素沒食子酸酯的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及表沒食子兒茶素沒食子酸酯的提取方法，具體涉及從油茶餅中提取表沒食子兒茶素沒食子酸酯的方法。
背景技術：
油茶餅，為山茶科油茶屬常綠小喬木油茶樹(Camellia oleiferaAbel)的種仁榨油后壓成的餅狀殘渣。油茶餅含有脂肪、蛋白質、粗纖維、茶皂素、糖類及少量的多酚類抗氧化活性物質，可以從中提取殘油、茶皂素、多酚等物質。多酚作為ー種天然抗氧化劑，具有抗氧化能力強、安全性好等特點，是ー種值得深入研究和開發(fā)的天然抗氧化劑，特別是其中抗氧化性質最強的表沒食子兒茶素沒食子酸酷(EGCG)，其具有抗氧化、抗癌、抗突變等活性， 抗氧化活性至少是維生素C的100多倍，是維生素E的25倍，能夠保護細胞和DNA受損害， 這種損害相信與癌癥、心臟疾病和其他重大疾病有夫，EGCG的這些功效歸結于它們對氧自由基的清除(抗氧化)能力。現(xiàn)有的對EGCG的提取純化方法主要有溶劑提取法、離子沉淀法、超臨界萃取法、 高速逆流層和膜分離技術結合凝膠柱分離制備方法。目前提取EGCG的原料基本為茶葉、茶葉提取物或茶多酚，尚未見有從油茶餅中提取EGCG的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術問題是提供一種從油茶餅中提取表沒食子兒茶素沒食子酸酷的方法。該方法エ藝簡單易控，所得產(chǎn)品純度高。本發(fā)明所述的從油茶餅中提取表沒食子兒茶素沒食子酸酯的方法，包括以下步驟I)以油茶餅為原料，粉碎，加入溶媒進行滲漉提取，滲漉液回收溶劑，過濾，收集濾液；2)將步驟I)所得的濾液進大孔樹脂柱層析，先用水洗樹脂柱至流出液無色，再用 20 30% (v/v)こ醇洗脫，薄層層析跟蹤檢測，收集醇洗脫液；其中，所述大孔樹脂的型號 HPD-600、NKA-9 或 S-8 ；3)將步驟2)所得的醇洗脫液濃縮，所得濃縮液中加入有機酸，放置析晶，分離出晶體，干燥，得到低含量的表沒食子兒茶素沒食子酸酯晶體；4)將步驟3)所得的晶體用混合溶劑I溶解后上硅膠柱，先用混合溶劑I洗柱，然后再用混合溶劑2洗柱，收集混合溶劑2的洗脫液；其中，混合溶劑I由體積比為I : 3 4的甲醇和こ酸こ酯組成，混合溶劑2由體積比為2 4 : I的甲醇和こ酸こ酯組成；5)將步驟4)所得的洗脫液濃縮，濃縮液中加入有機酸和少量高純度表沒食子兒茶素沒食子酸酷，放置析晶，分離出晶體，干燥，得到高純度的表沒食子兒茶素沒食子酸酷。上述技術方案中步驟I)中，所述的溶媒為水、甲醇、こ醇或こ酸こ酷，其加入量通常為原料重量的2 8倍。步驟I)中，滲漉速度為I 2BV/h，整個滲漉提取在常溫下進行。步驟2)中，在進樣、洗柱和洗脫的過程中，流速一般控制在0. 5 2BV/h。步驟3)和步驟5)中，所述的濃縮較好的選擇是濃縮至原料重量的I 5 %。步驟3)和步驟5)中，所述有機酸為抗壞血酸、檸檬酸或醋酸，其加入量優(yōu)選為濃縮液重量的0. I 1%。步驟4)中，所述硅膠的粒度為160 200目。步驟4)中，在洗柱時，混合溶劑I的用量優(yōu)選為硅膠重量的I. 2 4倍；混合溶劑2的用量優(yōu)選為硅膠重量的I. 2 5倍。在進樣、洗柱和洗脫的過程中，流速一般控制在
0.5 2BV/h。為了便于步驟I)中滲漉液的過濾，最好是在加入溶媒之前先進行脫脂步驟，具體是在粉碎后的油茶餅中加入石油醚或6#溶劑油浸泡3 5h，過濾，濾餅干燥后再加入溶媒進行滲漉提取。所述石油醚或者6#溶劑油的用量通常為原料重量的3 10倍。與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明所述方法的優(yōu)點在于I、以油茶餅為原料，經(jīng)滲漉提取、大孔樹脂柱層析，由洗脫液析出的晶體再經(jīng)硅膠柱純化，得到純度為98%以上的表沒食子兒茶素沒食子酸酷；2、在濃縮液中加入有機酸既可防止表沒食子兒茶素沒食子酸酷被破壞，又可進ー 步降低表沒食子兒茶素沒食子酸酯在濃縮液中的溶解度，因而更容易析出晶體，進而提高收率；3、整個エ藝簡單易控，洗脫劑用量少，生產(chǎn)成本低。
具體實施例方式下面以具體實施例對本發(fā)明作進ー步說明，但本發(fā)明并不局限于這些實施例。實施例II)將油茶餅粉碎至10目，取50kg，用200kg石油醚室溫浸泡4h，抽濾，收集濾餅， 室溫下自然風干；2)將風干的濾餅用60kg的こ酸こ酯室溫下浸濕24h，轉入滲漉筒中，壓實，再用 300kgこ酸こ酯滲漉提取，滲漉速度為I. 5BV/h，滲漉時間為5h，滲漉液在40°C條件下減壓濃縮，放置冷卻至室溫，抽濾去除不溶物，收集濾液；3)濾液過HPD-600大孔樹脂柱，進柱流速I. 5BV/h ;水洗樹脂柱至流出液無色，流速2.0BV/h，然后用30% (v/v)こ醇洗脫，流速I. OBV/h，薄層層析跟蹤檢測，收集醇洗脫液；4)醇洗脫液濃縮至2kg，加入抗壞血酸10g，放置18h析晶，抽濾，收集晶體，40°C真空干燥，得到低含量表沒食子兒茶素沒食子酸酯晶體；5)將步驟4)所得晶體用適量(為可溶解晶體的量即可)混合溶劑I溶解后上硅膠柱(硅膠重量10kg，粒度180目)層析，先用30kg甲醇こ酸こ酷=I 3的混合溶劑 I洗脫除去雜質，再用30kg甲醇こ酸こ酷=2 I的混合溶劑2進行目標成分的洗脫， 收集混合溶劑2的洗脫液，洗脫流速均是0. 8BV/h ;其中，混合溶劑I由甲醇こ酸こ酷= I 3 (v/v)組成，混合溶劑2由甲醇こ酸こ酷=2 I (v/v)組成；
6)將步驟5)收集的洗脫液減壓濃縮至0. 8kg，所得濃縮液中加入4g抗壞血酸和 5g高純度表沒食子兒茶素沒食子酸酷(98. 20% )，放置20h析晶，抽濾，所得晶體在40°C下真空減壓干燥，得表沒食子兒茶素沒食子酸酷0. 5kg。所得產(chǎn)品外觀為白色晶體，HPLC法檢測含量為98. 30%。實施例2I)將油茶餅粉碎至20目，取100kg，用300kg6#溶劑油室溫浸泡5h，抽濾，收集濾
餅，室溫下自然風干；2)將風干的濾餅用IOOkg 60% (v/v)こ醇室溫下浸濕24h，轉入滲漉筒中，壓實， 再用500kg 60% (v/v)こ醇滲漉提取，滲漉速度為1.0BV/h，滲漉時間為4h，滲漉液在40°C 條件下減壓濃縮，放置冷卻至室溫，抽濾去除不溶物，收集濾液；3)濾液過NKA-9大孔樹脂柱，進柱流速I. OBV/h ;水洗樹脂柱至流出液無色，流速 2.0BV/h，然后用25% (v/v)こ醇洗脫，流速I. OBV/h，薄層層析跟蹤檢測，收集醇洗脫液；4)醇洗脫液濃縮至3kg，加入檸檬酸30g，放置24h析晶，抽濾，收集晶體，40°C真空干燥，得到低含量表沒食子兒茶素沒食子酸酯晶體；5)將步驟4)所得晶體用適量混合溶劑I溶解后上硅膠柱(硅膠重量20kg，粒度 200目)層析，先用50kg混合溶劑I洗脫除去雜質，再用50kg混合溶劑2進行目標成分的洗脫，收集混合溶劑2的洗脫液，洗脫流速均是0.8BV/h;其中，混合溶劑I由甲醇こ酸こ 酷=I 4 (v/v)組成,混合溶劑2由甲醇こ酸こ酷=3 I (v/v)組成；6)將步驟5)收集的洗脫液減壓濃縮至0. 8kg，所得濃縮液中加入IOg醋酸和20g 高純度表沒食子兒茶素沒食子酸酷(98. 20% )，放置12h析晶，抽濾，所得晶體在40°C下真空減壓干燥，得表沒食子兒茶素沒食子酸酷0. 5kg。所得產(chǎn)品外觀為白色晶體，HPLC法檢測含量為98. 22%。實施例3I)將油茶餅粉碎至10目，取10kg，用100kg6#溶劑油室溫浸泡3h，抽濾，收集濾餅，室溫下自然風干；2)將風干的濾餅用30kg 70% (v/v)甲醇室溫下浸濕24h，轉入滲漉筒中，壓實，再用50kg 70% (v/v)甲醇滲漉提取，滲漉速度為2. OBV/h，滲漉時間為3. 5h，滲漉液在40°C 條件下減壓濃縮，放置冷卻至室溫，抽濾去除不溶物，收集濾液；3)濾液過S-8大孔樹脂柱，進柱流速I. OBV/h ;水洗樹脂柱至流出液無色，流速
I.0BV/h，然后用20% (v/v)こ醇洗脫，流速0.8BV/h，薄層層析跟蹤檢測，收集醇洗脫液；4)醇洗脫液濃縮至0. 4kg，加入醋酸4g，放置30h析晶，抽濾，收集晶體，40°C真空干燥，得到低含量表沒食子兒茶素沒食子酸酯晶體；5)將步驟4)所得晶體用適量混合溶劑I溶解后上硅膠柱(硅膠重量4kg，粒度 180目)層析，先用5kg混合溶劑I洗脫除去雜質，再用5kg混合溶劑2進行目標成分的洗脫，收集混合溶劑2的洗脫液，洗脫流速均是0.8BV/h;其中，混合溶劑I由甲醇こ酸こ酯 =I : 4 (v/v)組成,混合溶劑2由甲醇こ酸こ酷=4 I (v/v)組成；6)將步驟5)收集的洗脫液減壓濃縮至0. 2kg，所得濃縮液中加入Ig醋酸和0. 5g 高純度表沒食子兒茶素沒食子酸酷(98. 20% )，放置20h析晶，抽濾，所得晶體在40°C下真空減壓干燥，得表沒食子兒茶素沒食子酸酷0. 08kg。
所得產(chǎn)品外觀為白色晶體，HPLC法檢測含量為98. 05%。實施例4I)將油茶餅粉碎至10目，取500kg,用1500kg石油醚室溫浸泡3h,抽濾，收集濾餅，室溫下自然風干；2)將風干的濾餅用IOOOkg純凈水室溫下浸濕24h,轉入滲漉筒中，壓實，再用 2500kg純凈水滲漉提取，滲漉速度為I. OBV/h，滲漉時間為3h，滲漉液減壓濃縮，放置冷卻至室溫，抽濾去除不溶物，收集濾液；3)濾液過HPD-600大孔樹脂柱，進柱流速I. OBV/h ;水洗樹脂柱至流出液無色，流速I. OBV/h，然后用28% (v/v)こ醇洗脫，流速I. OBV/h，薄層層析跟蹤檢測，收集醇洗脫液；4)醇洗脫液濃縮至15kg，加入抗壞血酸100g，放置48h析晶，抽濾，收集晶體，干燥，得到低含量表沒食子兒茶素沒食子酸酯晶體；5)將步驟4)所得晶體用適量混合溶劑I溶解后上硅膠柱(硅膠重量180kg，粒度 200目)層析，先用600kg混合溶劑I洗脫除去雜質，再用800kg混合溶劑2進行目標成分的洗脫，收集混合溶劑2的洗脫液，洗脫流速均是I. 5BV/h;其中，混合溶劑I由甲醇こ酸 こ酷=I 3 (v/v)組成,混合溶劑2由甲醇こ酸こ酷=4 I (v/v)組成；6)將步驟5)收集的洗脫液減壓濃縮至12kg，所得濃縮液中加入IOOg抗壞血酸和 200g高純度表沒食子兒茶素沒食子酸酷(98. 20%),放置20h析晶，抽濾，所得晶體干燥，得到表沒食子兒茶素沒食子酸酷5. 2kg。所得產(chǎn)品外觀為白色晶體，HPLC法檢測含量為98. 64%。實施例5I)將油茶餅粉碎至10目，取IOOkg用200kg純凈水室溫下浸濕24h，轉入滲漉筒中，壓實，再用600kg純凈水滲漉提取，滲漉速度為I. 0BV/h，滲漉時間為5. 5h，滲漉液減壓濃縮，放置冷卻至室溫，抽濾去除不溶物，收集濾液；2)濾液過S-8大孔樹脂柱，進柱流速I. 0BV/h ;水洗樹脂柱至流出液無色，流速
I.0BV/h，然后用22% (v/v)こ醇洗脫，流速2. 0BV/h，薄層層析跟蹤檢測，收集醇洗脫液；3)醇洗脫液濃縮至4. Okg,加入檸檬酸30g，放置70h析晶，抽濾，收集晶體，干燥， 得到低含量表沒食子兒茶素沒食子酸酯晶體；4)將步驟3)所得晶體用適量混合溶劑I溶解后上硅膠柱(硅膠重量50kg，粒度 200目)層析，先用80kg混合溶劑I洗脫除去雜質，再用IOOkg混合溶劑2進行目標成分的洗脫，收集混合溶劑2的洗脫液，洗脫流速均是I. 0BV/h ;其中，混合溶劑I由甲醇こ酸こ 酷=I 3. 5 (v/v)組成，混合溶劑2由甲醇こ酸こ酷=4 I (v/v)組成；5)將步驟4)收集的洗脫液減壓濃縮至2. 0kg，所得濃縮液中加入IOg檸檬酸和 15g高純度表沒食子兒茶素沒食子酸酷(98. 20% )，放置15h析晶，抽濾，所得晶體干燥，得到表沒食子兒茶素沒食子酸酷5. 2kg。所得產(chǎn)品外觀為白色晶體，HPLC法檢測含量為98. 47%。
權利要求
1.從油茶餅中提取表沒食子兒茶素沒食子酸酯的方法，其特征在于包括以下步驟D以油茶餅為原料，粉碎，加入溶媒進行滲漉提取，滲漉液回收溶劑，過濾，收集濾液；2)將步驟I)所得的濾液進大孔樹脂柱層析，先用水洗樹脂柱至流出液無色，再用 20 30% (v/v)こ醇洗脫，薄層層析跟蹤檢測，收集醇洗脫液；其中，所述大孔樹脂的型號 HPD-600、NKA-9 或 S-8 ；3)將步驟2)所得的醇洗脫液濃縮，所得濃縮液中加入有機酸，放置析晶，分離出晶體， 干燥，得到低含量的表沒食子兒茶素沒食子酸酯晶體；4)將步驟3)所得的晶體用混合溶劑I溶解后上硅膠柱，先用混合溶劑I洗柱，再用混合溶劑2洗柱，收集混合溶劑2的洗脫液；其中，混合溶劑I由體積比為I : 3 4的甲醇和こ酸こ酯組成，混合溶劑2由體積比為2 4 I的甲醇和こ酸こ酯組成；5)將步驟4)所得的洗脫液濃縮，濃縮液中加入有機酸和少量高純度表沒食子兒茶素沒食子酸酷，放置析晶，分離出晶體，干燥，得到高純度的表沒食子兒茶素沒食子酸酷。
2.根據(jù)權利要求I所述的從油茶餅中提取表沒食子兒茶素沒食子酸酯的方法，其特征在于步驟I)中，所述的溶媒為水、甲醇、こ醇或こ酸こ酷，其加入量為原料重量的2 8 倍。
3.根據(jù)權利要求I所述的從油茶餅中提取表沒食子兒茶素沒食子酸酯的方法，其特征在于步驟I)中，滲漉速度為I 2BV/h。
4.根據(jù)權利要求I所述的從油茶餅中提取表沒食子兒茶素沒食子酸酯的方法，其特征在于步驟3)和步驟5)中，所述的濃縮為濃縮至原料重量的I 5%。
5.根據(jù)權利要求I所述的從油茶餅中提取表沒食子兒茶素沒食子酸酯的方法，其特征在于步驟3)和步驟5)中，所述有機酸為抗壞血酸、檸檬酸或醋酸，其加入量為濃縮液重量的0. I I %。
6.根據(jù)權利要求I所述的從油茶餅中提取表沒食子兒茶素沒食子酸酯的方法，其特征在于步驟4)中，在洗柱時，混合溶劑I的用量為硅膠重量的I. 2 4倍；混合溶剤2的用量為娃膠重量的I. 2 5倍。
7.根據(jù)權利要求I 6中任一項所述的從油茶餅中提取表沒食子兒茶素沒食子酸酯的方法，其特征在于步驟I)中，在加入溶媒之前先進行脫脂步驟，具體是在粉碎后的油茶餅中加入石油醚或6#溶劑油浸泡3 5h，過濾，濾餅干燥后再加入溶媒進行滲漉提取。
8.根據(jù)權利要求7所述的從油茶餅中提取表沒食子兒茶素沒食子酸酯的方法，其特征在于所述石油醚或者6#溶劑油的用量為原料重量的3 10倍。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種從油茶餅中提取表沒食子兒茶素沒食子酸酯的方法，包括以下步驟1)以油茶餅為原料，粉碎，加入溶媒進行滲漉提取，滲漉液回收溶劑，過濾，收集濾液；2)濾液進大孔樹脂柱層析，水洗柱后用20～30％(v/v)乙醇洗脫，薄層層析跟蹤檢測，收集醇洗脫液；3)將醇洗脫液濃縮，濃縮液中加入有機酸，放置析晶；4)所得晶體用混合溶劑1溶解后上硅膠柱，先用混合溶劑1洗柱，然后再用混合溶劑2洗柱，收集混合溶劑2的洗脫液；5)將步驟4)所得洗脫液濃縮，濃縮液中加入有機酸和少量高純度表沒食子兒茶素沒食子酸酯，放置析晶，晶體干燥，即得。本發(fā)明所述方法工藝簡單易控，洗脫劑用量少，收率高，生產(chǎn)成本低。
文檔編號C07D311/62GK102603699SQ20121005022
公開日2012年7月25日 申請日期2012年2月29日 優(yōu)先權日2012年2月29日
發(fā)明者盧樺香, 盧照凱, 周曉青, 應啟實, 謝冬養(yǎng), 謝陽姣 申請人:桂林三寶藥業(yè)有限公司