專利名稱：一種分離純化紫杉醇的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及分離純化紫杉醇的技術領域，具體涉及一種從紫杉醇粗產(chǎn)品分離純化紫杉醇的方法。
背景技術：
紫杉醇是紅豆杉屬植物中的一種復雜的次生代謝產(chǎn)物，是世界公認的廣譜、強活性的抗癌藥物。目前，紫杉醇主要從紅豆杉植物原料中提取而得到?，F(xiàn)有從紅豆杉植物原料中提取紫杉醇的常用方法是先經(jīng)原料粉碎、浸泡提取、濃縮、萃取等步驟制得紫杉醇粗品，再將紫杉醇粗品用柱層析法進行分離純化制得高純度紫杉醇。例如授權公告號為 CN1244566C、發(fā)明名稱為“一種從種植紅豆杉葉枝中制備紫杉醇的方法”的中國專利中，公開了從紅豆杉葉枝中制備紫杉醇的方法，包括紅豆杉葉枝粉碎后經(jīng)乙醇浸泡提取、濃縮、萃取等步驟制得紫杉醇粗品，紫杉醇粗品經(jīng)常壓正相硅膠柱層析、反相高壓液相色譜分離制得高純度紫杉醇；以及授權公告號為CN101560197B、發(fā)明名稱為“從人工栽培的紅豆杉枝葉中提取紫杉醇的方法”的中國專利中，公開了從紅豆杉枝葉中提取紫杉醇的方法，包括紅豆杉葉枝粉碎后經(jīng)甲醇浸泡提取、依次用石油醚和乙酸丙酯萃取等步驟制得紫杉醇粗品， 紫杉醇粗品經(jīng)常壓正相硅膠柱層析、反相高壓液相色譜分離制得高純度紫杉醇。在用紅豆杉原料中制備紫杉醇的過程中，紫杉醇粗品的分離純化是一個重要的步驟，現(xiàn)有分離純化紫杉醇的方法的不足之處是在分離純化過程中需用多組流動相進行反復多次層析分離，對目標物進行多次分段收集，控制過程復雜，溶劑使用量大，紫杉醇的收率較低、生產(chǎn)成本較高。

發(fā)明內容
本發(fā)明所解決的技術問題是提供一種工藝簡單、收率高、生產(chǎn)成本低的分離純化紫杉醇的方法。本發(fā)明所采用的技術方案是一種分離純化紫杉醇的方法，包括以下步驟
①將含量為1 5%的紫杉醇粗品用氯仿或丙酮進行溶解，紫杉醇粗品與氯仿或丙酮的重量比為1 3 6，溶解完全后加入固定相硅膠或氧化鋁或大孔吸附樹脂，攪拌均勻后干燥制得物料干樣；
②將兩根層析柱用管道串聯(lián)，兩根層析柱之間設置用于控制分流的三通閥；在第一根層析柱的下部裝入固定相氧化鋁，將步驟①制得的物料干樣裝入第一根層析柱上部；在第二根層析柱中裝入固定相硅膠或大孔吸附樹脂；
③用丙酮、石油醚、氯仿混合溶劑或乙酸乙酯、正己烷、二氯甲烷混合溶劑作為三元流動相，先用低極性的所述三元流動相對物料干樣進行洗脫，洗脫液流經(jīng)第一根層析柱后從三通閥分流出，將物料干樣中的低極性雜質洗出；待低極性雜質洗出完后改用中等極性的所述三元流動相對物料干樣進行洗脫，洗脫液流經(jīng)第一根層析柱和第二根層析柱后流出， 分段收集洗脫液，得到含有紫杉醇的洗脫液；
3④將含有紫杉醇的洗脫液進行濃縮、結晶、干燥后制得紫杉醇半成品；
⑤用紫杉醇半成品代替1 5%的紫杉醇粗品按照步驟①、②、③、④的方法進行二次柱層析分離，制得高純度的紫杉醇產(chǎn)品。所述步驟①中紫杉醇粗品與氯仿或丙酮的重量份比為1 4。所述步驟①中1 5%的紫杉醇粗品為從紅豆杉枝葉中提取得到。本發(fā)明的有益效果是1、本發(fā)明通過對分離純化紫杉醇過程中的層析柱進行結構改進，將兩根層析柱用管道串聯(lián)且兩根層析柱之間設置用于控制分流的三通閥的，在兩根層析柱中裝入不同的固定相，從而實現(xiàn)在一個層析系統(tǒng)中使用兩種固定相，增加了固定相和目標產(chǎn)物之間的選擇性，提高分離效率；2、本發(fā)明通過采用三元流動相進行洗脫，增加了流動相和目標產(chǎn)物的之間的選擇性，提高了目標產(chǎn)物和雜質之間的分離度；3、本發(fā)明通過將三元流動相和二元固定相在一個層析系統(tǒng)中進行巧妙組合，在分離純化紫杉醇的過程中，首先使用低極性的三元流動相進行洗脫，洗脫液流經(jīng)第一根層析柱后從三通閥分流出， 將物料干樣中的低極性雜質洗出，而不會把中等極性的紫杉醇洗脫出來；然后用中等極性的三元流動相進行洗脫時，洗脫液流經(jīng)第一根層析柱和第二根層析柱后再流出，提高了分離柱的理論塔板數(shù)，中等極性的紫杉醇得到充分的吸附和解析，使分離純化紫杉醇的收率提高；4、本發(fā)明在分離純化紫杉醇的過程中只需進行兩次層析分離，簡化了生產(chǎn)工藝，降低了生產(chǎn)成本。
具體實施例方式下面結合具體實施例對本發(fā)明做進一步說明。實施例1
一種分離純化紫杉醇的方法，按以下步驟實施
①將從紅豆杉枝葉中提取得到的含量為1%的紫杉醇粗品用氯仿進行溶解，紫杉醇粗品與氯仿的重量比為1 3，溶解完全后加入固定相硅膠，攪拌均勻后干燥制得物料干樣；
②將兩根層析柱用管道串聯(lián)，兩根層析柱之間設置用于控制分流的三通閥；在第一根層析柱的下部裝入固定相氧化鋁，將步驟①制得的物料干樣裝入第一根層析柱上部；在第二根層析柱中裝入固定相硅膠；
③用丙酮、石油醚、氯仿混合溶劑作為三元流動相，先用低極性的丙酮、石油醚、氯仿混合溶劑對物料干樣進行洗脫，洗脫液流經(jīng)第一根層析柱后從三通閥分流出，將物料干樣中的低極性雜質洗出；待低極性雜質洗出完后改用中等極性的丙酮、石油醚、氯仿混合溶劑對物料干樣進行洗脫，洗脫液流經(jīng)第一根層析柱和第二根層析柱后流出，分段收集洗脫液，得到含有紫杉醇的洗脫液；
④將含有紫杉醇的洗脫液進行濃縮、結晶、干燥后制得紫杉醇半成品；
⑤用紫杉醇半成品代替1%的紫杉醇粗品按照步驟①、②、③、④的方法進行二次柱層析分離，制得高純度的紫杉醇產(chǎn)品。實施例2
一種分離純化紫杉醇的方法，按以下步驟實施
①將從紅豆杉枝葉中提取得到的含量為5%的紫杉醇粗品用氯仿進行溶解，紫杉醇粗品與氯仿的重量比為1 6，溶解完全后加入固定相氧化鋁，攪拌均勻后干燥制得物料干樣；
②將兩根層析柱用管道串聯(lián)，兩根層析柱之間設置用于控制分流的三通閥；在第一根層析柱的下部裝入固定相氧化鋁，將步驟①制得的物料干樣裝入第一根層析柱上部；在第二根層析柱中裝入固定相大孔吸附樹脂；
③用乙酸乙酯、正己烷、二氯甲烷混合溶劑作為三元流動相，先用低極性的乙酸乙酯、 正己烷、二氯甲烷混合溶劑對物料干樣進行洗脫，洗脫液流經(jīng)第一根層析柱后從三通閥分流出，將物料干樣中的低極性雜質洗出；待低極性雜質洗出完后改用中等極性的乙酸乙酯、 正己烷、二氯甲烷混合溶劑對物料干樣進行洗脫，洗脫液流經(jīng)第一根層析柱和第二根層析柱后流出，分段收集洗脫液，得到含有紫杉醇的洗脫液；
④將含有紫杉醇的洗脫液進行濃縮、結晶、干燥后制得紫杉醇半成品；
⑤用紫杉醇半成品代替5%的紫杉醇粗品按照步驟①、②、③、④的方法進行二次柱層析分離，制得高純度的紫杉醇產(chǎn)品。 實施例3
一種分離純化紫杉醇的方法，按以下步驟實施
①將從紅豆杉枝葉中提取得到的含量為3%的紫杉醇粗品用丙酮進行溶解，紫杉醇粗品與丙酮的重量比為1 4，溶解完全后加入固定相大孔吸附樹脂，攪拌均勻后干燥制得物料干樣；
②將兩根層析柱用管道串聯(lián)，兩根層析柱之間設置用于控制分流的三通閥；在第一根層析柱的下部裝入固定相氧化鋁，將步驟①制得的物料干樣裝入第一根層析柱上部；在第二根層析柱中裝入固定相大孔吸附樹脂；
③用丙酮、石油醚、氯仿混合溶劑作為三元流動相，先用低極性的丙酮、石油醚、氯仿混合溶劑對物料干樣進行洗脫，洗脫液流經(jīng)第一根層析柱后從三通閥分流出，將物料干樣中的低極性雜質洗出；待低極性雜質洗出完后改用中等極性的丙酮、石油醚、氯仿混合溶劑對物料干樣進行洗脫，洗脫液流經(jīng)第一根層析柱和第二根層析柱后流出，分段收集洗脫液，得到含有紫杉醇的洗脫液；
④將含有紫杉醇的洗脫液進行濃縮、結晶、干燥后制得紫杉醇半成品；
⑤用紫杉醇半成品代替3%的紫杉醇粗品按照步驟①、②、③、④的方法進行二次柱層析分離，制得高純度的紫杉醇產(chǎn)品。
權利要求
1.一種分離純化紫杉醇的方法，其特征在于，包括以下步驟①將含量為1 5%的紫杉醇粗品用氯仿或丙酮進行溶解，紫杉醇粗品與氯仿或丙酮的重量比為1 3 6，溶解完全后加入固定相硅膠或氧化鋁或大孔吸附樹脂，攪拌均勻后干燥制得物料干樣；②將兩根層析柱用管道串聯(lián)，兩根層析柱之間設置用于控制分流的三通閥；在第一根層析柱的下部裝入固定相氧化鋁，將步驟①制得的物料干樣裝入第一根層析柱上部；在第二根層析柱中裝入固定相硅膠或大孔吸附樹脂；③用丙酮、石油醚、氯仿混合溶劑或乙酸乙酯、正己烷、二氯甲烷混合溶劑作為三元流動相，先用低極性的所述三元流動相對物料干樣進行洗脫，洗脫液流經(jīng)第一根層析柱后從三通閥分流出，將物料干樣中的低極性雜質洗出；待低極性雜質洗出完后改用中等極性的所述三元流動相對物料干樣進行洗脫，洗脫液流經(jīng)第一根層析柱和第二根層析柱后流出， 分段收集洗脫液，得到含有紫杉醇的洗脫液；④將含有紫杉醇的洗脫液進行濃縮、結晶、干燥后制得紫杉醇半成品；⑤用紫杉醇半成品代替1 5%的紫杉醇粗品按照步驟①、②、③、④的方法進行二次柱層析分離，制得高純度的紫杉醇產(chǎn)品。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種分離純化紫杉醇的方法，其特征在于所述步驟①中紫杉醇粗品與氯仿或丙酮的重量份比為1 4。
3.根據(jù)權利要求1所述的一種分離純化紫杉醇的方法，其特征在于所述步驟①中 1% 5%的紫杉醇粗品為從紅豆杉枝葉中提取得到。
全文摘要
本發(fā)明一種分離純化紫杉醇的方法，將紫杉醇粗品用氯仿或丙酮溶解后加入硅膠或氧化鋁或大孔吸附樹脂制得物料干樣，在兩根串聯(lián)的層析柱中第一根層析柱的下部裝入固定相氧化鋁、第一根層析柱上部裝入物料干樣、第二根層析柱中裝入固定相硅膠或大孔吸附樹脂，用三元流動相進行洗脫得到含有紫杉醇的洗脫液，洗脫液經(jīng)濃縮、結晶、干燥后制得紫杉醇半成品，紫杉醇半成品經(jīng)二次柱層析分離后制得高純度的紫杉醇產(chǎn)品。本發(fā)明通過對分離純化紫杉醇的層析柱進行結構改進，實現(xiàn)在一個層析系統(tǒng)中使用兩種固定相，同時采用三元流動相進行洗脫，增加了固定相和目標產(chǎn)物之間的選擇性，簡化了生產(chǎn)工藝，提高了分離效率，降低了生產(chǎn)成本。
文檔編號C07D305/14GK102417492SQ20111040089
公開日2012年4月18日 申請日期2011年12月7日 優(yōu)先權日2011年12月7日
發(fā)明者李智高, 李長明 申請人:福建紫杉園生物有限公司