專利名稱：一種高純度棘白霉素類化合物的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于工業(yè)微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種高純度棘白霉素類化合物FR179642的制備方法。
背景技術(shù)：
近年來，隨著廣譜抗菌藥物和免疫抑制劑的大量應(yīng)用、腫瘤化療、器官移植以及艾滋病的蔓延等，導(dǎo)致免疫系統(tǒng)受到抑制的人群不斷增多，深部真菌感染的發(fā)病率開始呈現(xiàn)明顯的上升趨勢(shì)，且隨著抗真菌藥物的運(yùn)用，真菌的耐藥性也越來越強(qiáng)，使得抗真菌藥物的應(yīng)用有迅猛增加的趨勢(shì)。因此，抗深部真菌感染的藥物已成為抗感染藥的研究熱點(diǎn)之一，日益引起人們的關(guān)注。棘白菌素是一類新型的抗真菌藥，與目前臨床常用抗真菌藥物的作用機(jī)制明顯不同，是β-1，3-葡聚糖合成酶的抑制劑，作用于真菌的細(xì)胞壁。細(xì)胞壁是真菌與哺乳動(dòng)物細(xì)胞之間最大的差別，所以干擾細(xì)胞壁的合成，影響細(xì)胞壁的完整性將導(dǎo)致真菌細(xì)胞死亡而對(duì)人無傷害，因此副作用較小，安全性較高。目前棘白菌素類藥物已經(jīng)有3個(gè)品種上市，即卡泊芬凈、米卡芬凈和阿尼芬凈。其中米卡芬凈日本藤澤公司研制開發(fā)，2005年通過美國(guó)FDA認(rèn)證，是繼卡泊芬凈之后FDA批準(zhǔn)的第2種棘白菌素類抗真菌藥物。對(duì)念珠菌屬、曲霉菌屬引起的深部真菌感染有廣泛抗菌作用；對(duì)耐唑類藥物的白色念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌和其他念珠菌均有良好的抗菌活性。同時(shí)，米卡芬凈無腎毒性，并且與其他藥物幾乎無相互作用，因此有很好的臨床應(yīng)用前景。米卡芬凈是一種水溶性半合成棘白菌素類抗真菌藥物，是經(jīng)天然產(chǎn)物棘白霉素類化合物FR179642修飾而得。棘白霉素類化合物FR179642是鞘莖點(diǎn)霉屬(Coleophoma sp.) 的發(fā)酵代謝產(chǎn)物，是合成米卡芬凈的主要原料。其結(jié)構(gòu)式如下
權(quán)利要求
1.一種高純度棘白霉素類化合物FR179642的制備方法，包括下述步驟 1)在棘白霉素類化合物FR179642的發(fā)酵液中加入助濾劑，攪拌均勻； 2)對(duì)發(fā)酵液進(jìn)行固液分離，得到棘白霉素類化合物FR179642的濾液； 3)將棘白霉素類化合物FR179642的濾液導(dǎo)入大孔吸附樹脂進(jìn)行吸附； 4)吸附完畢，進(jìn)行樹脂凈化，然后用極性溶劑與水混合而成的解吸液進(jìn)行解吸，得到棘白霉素類化合物FRl79642的解吸液； 5)解吸液中加入酸性物質(zhì)調(diào)節(jié)PH值為4-5后濃縮，然后用極性溶劑結(jié)晶，得棘白霉素類化合物FRl79642粗提物； 6)將棘白霉素類化合物FR179642粗提物進(jìn)行反相填料層析分離，用極性溶劑與水的混合液梯度濃度解吸； 7)層析分離得到的解吸液中加入酸性物質(zhì)調(diào)節(jié)PH值為4-5后濃縮，然后用極性溶劑結(jié)晶，得到高純度的棘白霉素類化合物FR179642產(chǎn)品。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其中步驟I)中的助濾劑為珍珠巖或硅藻土，其用量為每升發(fā)酵液50-100克。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其中步驟2)中的固液分離過程為離心、板框壓濾方式。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其中步驟3)中的大孔吸附樹脂為弱極性吸附樹脂，優(yōu)選為AB-8或LX-18弱極性吸附樹脂，其用量為棘白霉素類化合物FR179642濾液體積的1/20-1/5。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其中步驟4)、5)、6)、7)中的極性溶劑為甲醇、乙醇或丙酮中的一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其中步驟4)中所述的樹脂凈化為用去離子水洗滌3倍柱體積，解吸液中極性溶劑的濃度為10-40%。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其中步驟5)、7)所述的酸性物質(zhì)為有機(jī)酸或無機(jī)酸中的一種，優(yōu)選為鹽酸、草酸或冰乙酸。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其中步驟5)、7)中解吸液濃縮至濃度為50-100mg/mL，結(jié)晶溶劑加入量為濃縮液體積的6-10倍。
9.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其中步驟6)中所述的反相填料為采用聚苯乙烯或聚丙烯酸酯及其衍生物制備的聚合物微球、ODS C18或Fraclite800。
10.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其中步驟6)中所述的極性溶劑與水的混合液梯度濃度解吸，解吸過程為極性溶劑濃度為5%的混合液洗滌1-3倍柱體積后，用15%濃度的混合液解吸至棘白霉素類化合物FRl79642全部解吸完畢。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種利用鞘莖點(diǎn)霉屬(Coleophoma sp.)發(fā)酵培養(yǎng)物制備棘白霉素類化合物的方法。該方法包括經(jīng)過對(duì)鞘莖點(diǎn)霉屬發(fā)酵培養(yǎng)物過濾、大孔樹脂吸附、解吸、濃縮、結(jié)晶等步驟，得到棘白霉素類化合物FR179642的粗提物，再借助反相填料對(duì)棘白霉素類化合物FR179642的粗提物進(jìn)行層析分離，得到高純度的棘白霉素類化合物FR179642產(chǎn)品。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于采用大孔吸附樹脂提取分離棘白霉素類化合物FR179642，工藝簡(jiǎn)單易行，適宜于工業(yè)化生產(chǎn)；將反相填料用于棘白霉素類化合物FR179642的層析分離，可以制備高純度的FR179642的產(chǎn)品。
文檔編號(hào)C07K7/56GK102952178SQ20111024430
公開日2013年3月6日 申請(qǐng)日期2011年8月24日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月24日
發(fā)明者王海燕, 張雪霞, 李寧, 李曉露, 任風(fēng)芝, 林毅, 張麗, 林旸, 張金娟, 陳書紅, 成曉迅, 李麗紅, 高月麒, 張艷立, 蔣沁, 段寶玲 申請(qǐng)人:華北制藥集團(tuán)新藥研究開發(fā)有限責(zé)任公司