一種從花生根中提取分離高純度白藜蘆醇的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種從花生根中提取分離高純度白藜蘆醇的方法，包括以下步驟：（1）花生根用乙醇低溫超聲震蕩提取;（2）提取液60℃以下減壓回收乙醇至無(wú)醇味;（3）醇提物先用大孔吸附樹(shù)脂柱吸附、洗脫，除去雜質(zhì)，再用聚酰胺樹(shù)脂柱吸附分離;（4）薄層層析跟蹤檢測(cè)，收集白藜蘆醇流分，用活性炭脫色，低溫減壓濃縮，冷凍干燥;（5）用乙醇重結(jié)晶，即得高純度的白藜蘆醇;本發(fā)明的工藝步驟簡(jiǎn)便易行，采用聚酰胺樹(shù)脂可達(dá)到吸附、分離純化一步完成，所使用的溶劑無(wú)毒，安全，可靠，產(chǎn)品純度高、成本低，適合于工業(yè)化大生產(chǎn)。
【專利說(shuō)明】—種從花生根中提取分離高純度白藜蘆醇的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種從花生根中快速提取分離高純度白藜蘆醇的方法。

【背景技術(shù)】
[0002]白藜蘆醇，是含有芪類結(jié)構(gòu)的非黃酮多酚類化合物，是植物在受到應(yīng)激時(shí)自身合成的一種抗毒素。白藜蘆醇主要有抗腫瘤、抗炎、抗菌、抗氧化、抗自由基、保護(hù)肝臟、保護(hù)心血管和抗心肌缺血等功能，其中，最令人矚目和最有發(fā)展前景的是抗腫瘤作用，被喻為繼紫杉醇之后又一新的綠色抗癌藥物；同時(shí)也被美國(guó)專著《抗衰老圣典》一書(shū)列為“100種最熱門(mén)有效抗衰老物質(zhì)之一”，因此白藜蘆醇在醫(yī)藥、食品工業(yè)上的應(yīng)用越來(lái)越廣，市場(chǎng)價(jià)值極聞。
[0003]白藜蘆醇(Resveratrol)，又名芪三酚，化學(xué)名為3，5，4’ -三羥基二苯乙烯(3，5，4’ 一 trihydrolystilbene),分子式為C14H12O3,分子量為228.2,白色針狀晶體,難溶于水，在有機(jī)溶劑中的溶解性順序大致為:丙酮 > 乙醇 > 甲醇 > 乙酸乙酯 > 乙醚 > 氯仿；在366nm的紫外光照射下產(chǎn)生紫色熒光，在低溫、避光條件下較為穩(wěn)定，堿性環(huán)境中不穩(wěn)定。白藜蘆醇具有順、反式兩種結(jié)構(gòu)，在自然界中主要是以反式結(jié)構(gòu)存在。白藜蘆醇在自然界廣泛分布，1940年首次從毛葉藜蘆的根部獲得，目前至少已經(jīng)在21個(gè)科、31個(gè)屬的72種植物中發(fā)現(xiàn):如葡萄科的葡萄屬、蛇葡萄屬，豆科的落花生屬、決明屬、槐屬，百合科的藜蘆屬，寥科的寥屬等。
[0004]白藜蘆醇是一種重要的植物抗毒素，在葡萄、虎杖、花生等植物中含量相對(duì)較高，目前已經(jīng)在花生的根、莖、花、果實(shí)等各部位發(fā)現(xiàn)了該物質(zhì)的存在，充分說(shuō)明花生是開(kāi)發(fā)白藜蘆醇的一種重要資源，我國(guó)學(xué)者測(cè)定出花生根中白藜蘆醇含量是花生衣幾十倍和葡萄籽幾百倍，但以花生根為原料進(jìn)行白藜蘆醇開(kāi)發(fā)的研究少見(jiàn)報(bào)道。在我國(guó)，花生根原本是廢棄物且資源豐富，并且花生根莖中的白藜蘆醇含量也相當(dāng)可觀，用它提取白藜蘆醇可變廢為寶，將更具有市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力，可以增加農(nóng)民收入，對(duì)于提高花生的利用價(jià)值將更加有意義。
[0005]白藜蘆醇的提取技術(shù)包括有機(jī)溶劑浸提法、超聲波或微波輔助提取法、酶解法、超臨界萃取等；純化技術(shù)有柱層析、薄層層析、高效逆流色譜等。目前，從花生根中提取分離白藜蘆醇的方法專利不多，主要有:
CN101074188A 利用大孔吸附樹(shù)脂富集純化花生根中白藜蘆醇的方法 CN1903815A 超聲提取花生根中白藜蘆醇的方法 CN1709846A 花生根提取白藜蘆醇的生產(chǎn)方法 CN101353675A 利用黑曲霉發(fā)酵花生根提取白藜蘆醇的方法 CN101597214A 一種萃取花生根中白藜蘆醇的方法
上述的五項(xiàng)專利，樣品都是采用常規(guī)的方法進(jìn)行提取，包括有機(jī)溶劑提取、超聲波提取、生物霉發(fā)酵提取等，在對(duì)提取物的純化過(guò)程中，大都是先采用大孔樹(shù)脂吸附技術(shù)進(jìn)行除雜，然后再進(jìn)行硅膠柱層析，用混合有機(jī)溶劑梯度洗脫，收集流分，也有采用高效液相制備色譜或者采用二氧化碳超臨界流體色譜進(jìn)行純化。
[0006]上述的幾項(xiàng)專利的不足之處在于操作過(guò)程比較復(fù)雜，硅膠柱層析操作耗時(shí)長(zhǎng)，使用大量的有機(jī)溶劑，毒性較大，對(duì)環(huán)境污染嚴(yán)重，產(chǎn)品有機(jī)溶劑殘留量高。高效液相制備色譜對(duì)實(shí)驗(yàn)條件要求苛刻，必須采用高端精密的實(shí)驗(yàn)儀器和昂貴的色譜純?cè)噭?，產(chǎn)品收率少，使得制備成本很高、且操作不易控制。二氧化碳超臨界流體色譜雖然解決了收率問(wèn)題，但產(chǎn)品的純度不高，達(dá)不到食品級(jí)或藥用級(jí)要求，并在過(guò)程中引入了大量的二氧化碳，操作步驟僅限于實(shí)驗(yàn)室，產(chǎn)品不能實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明主要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種能夠解決花生根在純化白藜蘆醇過(guò)程中，步驟復(fù)雜，耗時(shí)長(zhǎng)，所用溶劑毒性大，產(chǎn)品收率低，不能實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化的從花生根中快速提取分離高純度白藜蘆醇的方法。
[0008]本發(fā)明的技術(shù)解決方案是這樣實(shí)現(xiàn)的:一種從花生根中提取分離高純度白藜蘆醇的方法，包括如下步驟:
(O花生根粉碎成細(xì)粉，用乙醇超聲震蕩提取，提取溫度為20°c -60°C，提取時(shí)間為30-60分鐘，提取兩次，合并提取液；
(2)提取液回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.18-1.22的清膏，冷卻；
(3)上述(2)的清膏上大孔吸附樹(shù)脂柱吸附，分別以水、70%乙醇洗脫至洗脫液無(wú)色，然后用95%乙醇洗脫，收集95%洗脫的流分，回收乙醇至無(wú)醇味，再用聚酰胺樹(shù)脂柱吸附分離，以醇-酸的混合液為洗脫液進(jìn)行層析分離；
(4)薄層色譜跟蹤檢測(cè)，收集白藜蘆醇流分，用活性炭脫色后，過(guò)濾，濾液于50°C-70°C在通氮?dú)獗Ｗo(hù)下，低溫減壓濃縮至相對(duì)密度為1.15-1.18，冷凍干燥；
(5)用乙醇重結(jié)晶，即得95%以上的高純度白藜蘆醇。
[0009]優(yōu)選的，所述的步驟(1)中花生根細(xì)粉和乙醇的比是1:10-1:20 (g/ml)。
[0010]優(yōu)選的，所述的步驟(1)中乙醇濃度為40%_95%。
[0011]優(yōu)選的，所述的步驟(1)中乙醇濃度為60%。
[0012]優(yōu)選的，所述的步驟(2)中提取液回收乙醇，是指在60°C以下減壓回收。
[0013]優(yōu)選的，所述的步驟(3)大孔吸附樹(shù)脂為DlOl或AB-8或DM130或HPD600或HPD400，大孔吸附樹(shù)脂的粒度為30-50目，用量為:樹(shù)脂:清膏=10-20:1 (g/g)，樹(shù)脂柱的徑聞比為I:20o
[0014]優(yōu)選的，所述的步驟(3)中聚酰胺樹(shù)脂的粒度為60-100目，用量為:樹(shù)脂:清膏=10-20:1 (g/g)，樹(shù)脂柱的徑高比為1:20。
優(yōu)選的，所述的步驟(3)中以醇-酸的混合液為洗脫液，醇包括10%-95% (V/V)乙醇或無(wú)水乙醇，酸包括10%-30% (V/V)甲酸或10%-100% (V/V)乙酸，洗脫液中醇:酸的比例為2:1-1:2 (V/V)。
[0015]優(yōu)選的，所述的步驟(4)活性炭的用量為溶液體積的2%_3%( g/100ml)。
[0016]由于上述技術(shù)方案的運(yùn)用，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有下列優(yōu)點(diǎn):
本發(fā)明采用大孔樹(shù)脂對(duì)樣品進(jìn)行初步提純后，通過(guò)控制色譜分離條件，采用一種分離系統(tǒng)，可以直接進(jìn)行聚酰胺色譜層析分離，再通過(guò)薄層色譜跟蹤檢測(cè)，直接可以得到白藜蘆醇純品，使分離、純化一步完成，使得操作簡(jiǎn)便易行。整個(gè)過(guò)程中只用了兩種食品級(jí)的溶劑，保證了產(chǎn)品安全、無(wú)毒；本發(fā)明工藝過(guò)程簡(jiǎn)單，使得花生根作為廢棄物得到了回收利用，同時(shí)也解決了花生根在純化白藜蘆醇過(guò)程中，步驟復(fù)雜，耗時(shí)長(zhǎng)，所用溶劑毒性大，產(chǎn)品收率低，不能實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化等問(wèn)題。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0017]附圖1是白藜蘆醇對(duì)照品的高效液相色譜圖；
附圖2是花生根樣品用60%乙醇超聲提取后未經(jīng)純化的高效液相色譜圖；
附圖3是本發(fā)明所述從花生根中快速提取分離高純度白藜蘆醇的方法獲得的樣品高效液相色譜圖。

【具體實(shí)施方式】
[0018]實(shí)施例1
一種從花生根中提取分離高純度白藜蘆醇的方法，包含以下步驟:
(I)花生根粉碎成細(xì)粉，過(guò)60目篩，稱取I kg，加10L40%乙醇超聲震蕩提取，提取溫度為40°C，提取兩次，每次各30min，合并提取液；(2)提取液60°C以下減壓回收乙醇至無(wú)醇味，濃縮至相對(duì)密度為1.20的清膏，冷卻；(3)上述(2)的清膏上AB-8大孔吸附樹(shù)脂柱吸附，分別以水、70%乙醇洗脫至洗脫液無(wú)色，再用95%乙醇洗脫，收集95%洗脫的流分，回收乙醇至無(wú)醇味，再用聚酰胺樹(shù)脂柱(樹(shù)脂用量為膏重的10倍，柱的徑高比為1:20)吸附分離，以95%乙醇:36%乙酸(2:1) (V/V)洗脫；(4)薄層色譜跟蹤檢測(cè)，收集白藜蘆醇流分，用活性炭吸附后(活性炭的用量為溶液體積的2%-3%( g/100ml),即每10ml溶液中添加活性炭的量為2g-3g)，過(guò)濾，濾液于60°C低溫減壓(通氮?dú)獗Ｗo(hù))濃縮至相對(duì)密度為1.15-1.18，冷凍干燥；(5)用乙醇重結(jié)晶，即得純度為95.3%的白藜蘆醇,收率為0.1%。
[0019]實(shí)施例2
一種從花生根中提取分離高純度白藜蘆醇的方法，包含以下步驟:
(I)花生根粉碎成細(xì)粉，過(guò)60目篩，稱取I kg，加10L60%乙醇超聲震蕩提取，提取溫度為40°C，提取兩次，每次各30min，合并提取液；(2)提取液60°C以下減壓回收乙醇至無(wú)醇味，濃縮至相對(duì)密度為1.20的清膏，冷卻；(3)上DlOl大孔吸附樹(shù)脂柱吸附，分別以水、70%乙醇洗脫至洗脫液無(wú)色，再用95%乙醇洗脫，收集95%洗脫的流分，回收乙醇至無(wú)醇味，再用聚酰胺樹(shù)脂柱(樹(shù)脂用量為膏重的20倍，柱的徑高比為1:20)吸附分離，以乙醇:36%乙酸(2:1)洗脫；(4)薄層色譜跟蹤檢測(cè)，收集白藜蘆醇流分，用活性炭吸附后(活性炭的用量為溶液體積的2%-3%( g/100ml)，即每10ml溶液中添加活性炭的量為2g_3g)，過(guò)濾，濾液于60°C低溫減壓(通氮?dú)獗Ｗo(hù))濃縮至相對(duì)密度為1.15-1.18，冷凍干燥；(5)用乙醇重結(jié)晶，即得純度為97.5%的白藜蘆醇，收率為0.09%。
[0020]實(shí)施例3
一種從花生根中提取分離高純度白藜蘆醇的方法，包含以下步驟:
(I)花生根粉碎成細(xì)粉，過(guò)60目篩，稱取I kg，加20L40%乙醇超聲震蕩提取，提取溫度為50°C，提取兩次，每次各30min，合并提取液；(2)提取液60°C以下減壓回收乙醇至無(wú)醇味，濃縮至相對(duì)密度為1.20的清膏，冷卻；(3)上HPD-600大孔吸附樹(shù)脂柱吸附，分別以水、70%乙醇洗脫至洗脫液無(wú)色，再用95%乙醇洗脫，收集95%洗脫的流分，回收乙醇至無(wú)醇味，再用聚酰胺樹(shù)脂柱(樹(shù)脂用量為膏重的15倍，柱的徑高比為1:20)吸附分離，以95%乙醇:10%甲酸(2:1)洗脫；(4)薄層色譜跟蹤檢測(cè)，收集白藜蘆醇流分，用活性炭吸附后(活性炭的用量為溶液體積的2%-3%( g/100ml)，即每10ml溶液中添加活性炭的量為2g_3g)，過(guò)濾，濾液于60°C低溫減壓(通氮?dú)獗Ｗo(hù))濃縮至相對(duì)密度為1.15-1.18，冷凍干燥；(5)用乙醇重結(jié)晶，即得純度為95.8%的白藜蘆醇，收率為0.09%ο
[0021]實(shí)施例4
一種從花生根中提取分離高純度白藜蘆醇的方法，包含以下步驟:
(I)花生根粉碎成細(xì)粉，過(guò)60目篩，稱取I kg，加20L60%乙醇超聲震蕩提取，提取溫度為40°C，提取兩次，每次各30min，合并提取液；(2)提取液60°C以下減壓回收乙醇至無(wú)醇味，濃縮至相對(duì)密度為1.22的清膏，冷卻；(3)上DM130大孔吸附樹(shù)脂柱吸附，分別以水、70%乙醇洗脫至洗脫液無(wú)色，再用95%乙醇洗脫，收集95%洗脫的流分，回收乙醇至無(wú)醇味，再用聚酰胺樹(shù)脂柱(樹(shù)脂用量為膏重的10倍，柱的徑高比為1:20)吸附分離，以95%乙醇:20%乙酸(2:1)洗脫；(4)薄層色譜跟蹤檢測(cè)，收集白藜蘆醇流分，用活性炭吸附后(活性炭的用量為溶液體積的2%-3%( g/100ml)，即每10ml溶液中添加活性炭的量為2g_3g)，過(guò)濾，濾液于60°C低溫減壓(通氮?dú)獗Ｗo(hù))濃縮至相對(duì)密度為1.15-1.18，冷凍干燥；(5)用乙醇重結(jié)晶，即得純度為96.1%的白藜蘆醇，收率為0.12%。
[0022]實(shí)施例5
一種從花生根中提取分離高純度白藜蘆醇的方法，包含以下步驟:
(I)花生根粉碎成細(xì)粉，過(guò)60目篩，稱取I kg，加10L40%乙醇超聲震蕩提取，提取溫度為40°C，提取兩次，每次各30min，合并提取液；(2)提取液60°C以下減壓回收乙醇至無(wú)醇味，濃縮至相對(duì)密度為1.22的清膏，冷卻；(3)上HPD600大孔吸附樹(shù)脂柱吸附，分別以水、70%乙醇洗脫至洗脫液無(wú)色，再用95%乙醇洗脫，收集95%洗脫的流分，回收乙醇至無(wú)醇味，再用聚酰胺樹(shù)脂柱(樹(shù)脂用量為膏重的20倍，柱的徑高比為1:20)吸附分離，以95%乙醇:36%乙酸(1:1)洗脫；(4)薄層色譜跟蹤檢測(cè)，收集白藜蘆醇流分，用活性炭吸附后(活性炭的用量為溶液體積的2%-3%( g/100ml)，即每10ml溶液中添加活性炭的量為2g_3g)，過(guò)濾，濾液于60°C低溫減壓(通氮?dú)獗Ｗo(hù))濃縮至相對(duì)密度為1.15-1.18，冷凍干燥；(5)用乙醇重結(jié)晶，即得純度為96.3%的白藜蘆醇，收率為0.1%。
[0023]實(shí)施例6
一種從花生根中提取分離高純度白藜蘆醇的方法，包含以下步驟:
(I)花生根粉碎成細(xì)粉，過(guò)60目篩，稱取I kg，加10L40%乙醇超聲震蕩提取，提取溫度為40°C，提取兩次，每次各30min，合并提取液；(2)提取液60°C以下減壓回收乙醇至無(wú)醇味，濃縮至相對(duì)密度為1.20的清膏，冷卻；(3)上AB-8大孔吸附樹(shù)脂柱吸附，分別以水、70%乙醇洗脫至洗脫液無(wú)色，再用95%乙醇洗脫，收集95%洗脫的流分，回收乙醇至無(wú)醇味，再用聚酰胺樹(shù)脂柱(樹(shù)脂用量為膏重的10倍，柱的徑高比為1:20)吸附分離，以95%乙醇:36%乙酸(1:2)洗脫；(4)薄層色譜跟蹤檢測(cè)，收集白藜蘆醇流分，用活性炭吸附后(活性炭的用量為溶液體積的2%-3%( g/100ml)，即每10ml溶液中添加活性炭的量為2g_3g)，過(guò)濾，濾液于60°C低溫減壓(通氮?dú)獗Ｗo(hù))濃縮至相對(duì)密度為1.15-1.18，冷凍干燥；(5)用乙醇重結(jié)晶，即得純度為98.8%的白藜蘆醇，收率為0.08%ο
[0024]上述實(shí)施例的有益效果是:本發(fā)明通過(guò)控制薄層色譜分離條件，直接進(jìn)行聚酰胺色譜層析分離，通過(guò)薄層色譜跟蹤檢測(cè)，可以直接得到EGCG純品，見(jiàn)附圖1、2、3，而不是混合物，這樣使分離、純化一步完成，使得操作簡(jiǎn)便易行；而且整個(gè)過(guò)程中只用了食品級(jí)的溶劑乙醇、乙酸(或甲酸)和活性炭，保證了產(chǎn)品安全、無(wú)毒。
[0025]上述實(shí)施例只為說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思及特點(diǎn)，其目的在于讓熟悉此項(xiàng)技術(shù)的人士能夠了解本發(fā)明的內(nèi)容并加以實(shí)施，并不能以此限制本發(fā)明的保護(hù)范圍，凡根據(jù)本發(fā)明精神實(shí)質(zhì)所作的等效變化或修飾，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種從花生根中提取分離高純度白藜蘆醇的方法，其特征在于，包括如下步驟: (O花生根粉碎成細(xì)粉，用乙醇超聲震蕩提取，提取溫度為20°c -60°C，提取時(shí)間為30-60分鐘，提取兩次，合并提取液； (2)提取液回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.18-1.22的清膏，冷卻； (3)上述(2)的清膏上大孔吸附樹(shù)脂柱吸附，分別以水、70%乙醇洗脫至洗脫液無(wú)色，然后用95%乙醇洗脫，收集95%洗脫的流分，回收乙醇至無(wú)醇味，再用聚酰胺樹(shù)脂柱吸附分離，以醇-酸的混合液為洗脫液進(jìn)行層析分離； (4)薄層色譜跟蹤檢測(cè)，收集白藜蘆醇流分，用活性炭脫色后，過(guò)濾，濾液于50°C-70°C在通氮?dú)獗Ｗo(hù)下，低溫減壓濃縮至相對(duì)密度為1.15-1.18，冷凍干燥； (5)用乙醇重結(jié)晶，即得95%以上的高純度白藜蘆醇。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從花生根中提取分離高純度白藜蘆醇的方法，其特征在于:所述的步驟(1)中花生根細(xì)粉和乙醇的比是1:10-1:20 (g/ml)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從花生根中提取分離高純度白藜蘆醇的方法，其特征在于:所述的步驟(1)中乙醇濃度為40%-95%。
4.根據(jù)權(quán)利要求 3所述的從花生根中提取分離高純度白藜蘆醇的方法，其特征在于:所述的步驟(1)中乙醇濃度為60%。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從花生根中提取分離高純度白藜蘆醇的方法，其特征在于:所述的步驟(2)中提取液回收乙醇，是指在60°C以下減壓回收。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從花生根中提取分離高純度白藜蘆醇的方法，其特征在于:所述的步驟(3)大孔吸附樹(shù)脂為DlOl或AB-8或DM130或HPD600或HPD400，大孔吸附樹(shù)脂的粒度為30-50目，用量為:樹(shù)脂:清膏=10-20:1 (g/g)，樹(shù)脂柱的徑高比為1:20。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從花生根中提取分離高純度白藜蘆醇的方法，其特征在于:所述的步驟(3)中聚酰胺樹(shù)脂的粒度為60-100目，用量為:樹(shù)脂:清膏=10-20:1 (g/g),樹(shù)脂柱的徑聞比為1:20。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從花生根中提取分離高純度白藜蘆醇的方法，其特征在于:所述的步驟(3)中以醇-酸的混合液為洗脫液，醇包括10%-95% (V/V)乙醇或無(wú)水乙醇，酸包括10%-30% (V/V)甲酸或10%-100% (V/V)乙酸，洗脫液中醇:酸的比例為2:1_1:2 (V/V)。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從花生根中提取分離高純度白藜蘆醇的方法，其特征在于:所述的步驟(4)活性炭的用量為溶液體積的2%-3%( g/100ml)。
【文檔編號(hào)】C07C37/82GK104163754SQ201410343453
【公開(kāi)日】2014年11月26日 申請(qǐng)日期:2014年7月18日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月18日
【發(fā)明者】劉臣, 唐長(zhǎng)波 申請(qǐng)人:蘇州市職業(yè)大學(xué)