專利名稱：一種分離純化虎杖中白藜蘆醇的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物分離純化技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種分離純化虎杖中白藜蘆醇的方法。
背景技術(shù)：
白藜蘆醇被喻為繼紫杉醇之后的又一新的綠色抗癌藥物，有顯著的抑制癌細(xì)胞、 降低血脂、防治心血管疾病、抗氧化、增強(qiáng)免疫力、延緩衰老等作用。在制藥、食品、保健品和化妝品等行業(yè)中有及廣泛的應(yīng)用。近年來，以白藜蘆醇為活性成分的保健食品層出不窮日本將白藜蘆醇作為食品添加劑加到各種酒中，配制出對心血管疾病有良好預(yù)防作用的低醇，高白藜蘆醇的新型保健佐餐酒；Paradise her Resveratrol及力口拿大的Natrol resveratrol，天津天卿集團(tuán)的天獅活力康，上海納貝生物制品有限公司的益生膠囊均為含白藜蘆醇的保健品。白藜蘆醇分子結(jié)構(gòu)中富含羥基，具有捕獲自由基，抗氧化能力，其分子中的二苯烯結(jié)構(gòu)有吸收紫外光的能力，這些特性被化妝品行業(yè)充分應(yīng)用。Lauder的白金級極致賦活精華及世界十五大護(hù)膚品AVEDA(肯夢)的新作-晶彩INNER LIGHT新底妝系列美容產(chǎn)品中均含白藜蘆醇。白藜蘆醇已廣泛用于治療心血管疾病，動脈硬化和高血脂等疾病，在治療阿爾茨海默病、認(rèn)知功能損害及其他predementia綜合征方面的效果已被醫(yī)學(xué)界證實并得到重視。據(jù)統(tǒng)計，現(xiàn)已批準(zhǔn)上市的含白藜蘆醇高端藥物制劑已近1000種，全球使用者約2億人， 并且以平均每年5000萬人的速度增長。白藜蘆醇制劑在未來8年內(nèi)將形成巨大的產(chǎn)業(yè)，銷售額將達(dá)到5-8億美元。白藜蘆醇在許多植物中都有分布，但蓼科植物虎杖中白藜蘆醇含量是最高的，達(dá) 0. 1-0.4%，是獲得天然白藜蘆醇的最理想資源。鑒于白藜蘆醇在醫(yī)藥，保健品、化妝品市場有越來越廣泛的應(yīng)用，構(gòu)建操作簡單，成本低廉，易于大批量獲得白藜蘆醇純品的分離純化技術(shù)，有廣泛的應(yīng)用前景和重要意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述不足，提供一種從虎杖中分離純化白藜蘆醇的方法，該方法操作簡單，成本低廉，易于大批量獲得白藜蘆醇純品。本發(fā)明上述目的通過以下技術(shù)方案予以實現(xiàn)
本發(fā)明的核心內(nèi)容是根據(jù)虎杖的化學(xué)成份及白藜蘆醇的溶解特性，設(shè)計發(fā)明了對白藜蘆醇具有高選擇性的含丙酮-水-親脂性溶劑組成的堿性三元兩相液-液萃取系統(tǒng)，用該系統(tǒng)對虎杖中白藜蘆醇進(jìn)行萃取分離純化，通過一步萃取操作，可使虎杖中白藜蘆醇得到定量富集，與其他非白藜蘆醇成分分開，再經(jīng)結(jié)晶操作，得到純度大于85%白藜蘆醇產(chǎn)品。本發(fā)明分離純化虎杖中白藜蘆醇的方法具體包括如下步驟 (1)提取將干燥虎杖藥材粉碎，用丙酮-水作為提取溶劑進(jìn)行提取；(2)純化在步驟(1)所得的提取液中加入親脂性溶劑，構(gòu)成丙酮-水-親脂性溶劑組成的三元兩相液-液萃取系統(tǒng)，萃取完畢、靜置分層后，白藜蘆醇在親脂性溶劑富集相中富集濃縮；
(3)結(jié)晶將富集了白藜蘆醇的親脂性溶劑減壓濃縮，放置析出白藜蘆醇。作為一種優(yōu)選方案，上述方法中，步驟(1)中所述丙酮-水的體積比為1:廣7:3;所述虎杖和丙酮-水的用量比為1:10 (g/v);鑒于白藜蘆醇的不穩(wěn)定性，為了加速提取過程， 縮短提取周期，所述提取過程采用超聲波輔助完成。作為一種優(yōu)選方案，上述方法中，步驟(2)中所述親脂性溶劑為乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、乙醚中的任意一種；所述丙酮-水-親脂性溶劑的體積比為5:5:3 7:3:6;所述三元兩相液-液萃取系統(tǒng)的PH值為弱堿性，為7. 5^9 ；所述靜置分層的溫度為25 35°C，時間為4(T80min。弱堿性萃取條件的設(shè)計有如下優(yōu)點虎杖中共存的大黃素、大黃酚等蒽醌類化合物的酸性比白藜蘆醇的酸性要強(qiáng)，在系統(tǒng)所設(shè)的弱堿性條件下，共存蒽醌類成份呈離子狀態(tài)，不被親酯性溶劑富集相萃取，只有白藜蘆醇被選擇性萃取，使選擇性大幅度提高。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果
(1)本發(fā)明所述丙酮-水-親脂性溶劑組成的三元兩相堿性溶劑系統(tǒng)對白藜蘆醇有很高的萃取選擇性，在純化步驟中白藜蘆醇幾乎不損失，僅需一次液-液萃取，便可定量萃取虎杖提取液中白藜蘆醇，方法的提取產(chǎn)率極高，根據(jù)天然虎杖中白藜蘆醇的含量(通常為 0. Γ0. 4%)，可得相應(yīng)的定量提取率，產(chǎn)率最高可達(dá)1%(按虎杖藥材干重計算)，超過酶解、酸水解技術(shù)的提取率。(2)本發(fā)明所述丙酮-水-親脂性溶劑組成的三元兩相堿性溶劑系統(tǒng)對虎杖中與白藜蘆醇共存的酸性蒽醌類及大極性組分沒有親合力，這些組分通過一次萃取幾乎可定量除去，萃取系統(tǒng)對虎杖中酸性及大極性的物質(zhì)具有很強(qiáng)的除雜能力，因此不需柱層析技術(shù)， 結(jié)合結(jié)晶技術(shù)，就能獲得純度理想的白藜蘆醇產(chǎn)品。所得的白藜蘆醇產(chǎn)品用核磁共振氫譜技術(shù)測定，不含醌類成分吸收信號。(3)本發(fā)明所述純化技術(shù)操作極其簡單主要為下述幾個部分，超聲輔助溶劑提取 —堿性條件下三元兩相溶劑系統(tǒng)液液萃取進(jìn)行白藜蘆醇分離除雜一富集白藜蘆醇后的溶液濃縮至小體積，進(jìn)行結(jié)晶，便可得到產(chǎn)率高，純度理想的白藜蘆醇產(chǎn)品。這些操作易掌握、 無危險、周期短，適合批量制備。(4)本發(fā)明所述方法成本低廉因操作極其簡單，所用的所有試劑耗費(fèi)極低，實驗中的各種損耗極小，且發(fā)明技術(shù)得到的產(chǎn)率極高，故有成本極低廉的優(yōu)點。
具體實施例方式以下結(jié)合實施例來進(jìn)一步解釋本發(fā)明，但實施例并不對本發(fā)明做任何形式的限定。實施例1
將虎杖干燥藥材500g粉碎，用丙酮/水為6/4( ν/ν)的溶液作為提取溶劑，提取液用量按料/液為1 10 (g/v)，分2次超聲提取，每次35min，過濾，收集濾液，用苛性堿溶液調(diào)節(jié)濾液PH為弱堿性(pH 7. 5-9)，加入一定體積的乙酸乙酯，使體系中乙酸乙酯/丙酮/水的比例為5/6/4(ν/ν/ν)，充分振搖，35°C下靜置分層40min，收集上相溶液，減壓濃縮回收溶劑，至小體積(約剩余5ml左右)，靜置，析出固體，得白藜蘆醇產(chǎn)品；產(chǎn)品采用單標(biāo)定點法，用薄層掃描技術(shù)分析鑒定，白藜蘆醇純度在85%以上；提取率由虎杖中白藜蘆醇含量決定，可定量提出虎杖中的白藜蘆醇(即，若原料虎杖中白藜蘆醇含量在0. 4%，便可得到2g白藜蘆醇產(chǎn)品，若原料虎杖中白藜蘆醇含量在0. 6%，便可得到3g白藜蘆醇產(chǎn)品)。
實施例2
將虎杖干燥藥材500g粉碎，用丙酮/水為7:3( ν/ν)的溶液作為提取溶劑，提取液用量料/液為1 10 (g/v)，分2次超聲提取，每次35min，過濾，收集濾液，用苛性堿溶液調(diào)節(jié)濾液 PH為弱堿性(pH7. 5-9)，加入一定體積的二氯甲烷，使體系中二氯甲烷/丙酮/水的比例為 5/7/3 (ν/ν/ν)，充分振搖，35°C下靜置分層40min，收集下相溶液，減壓濃縮回收溶劑至小體積(約剩余5ml左右)，靜置，析出固體，得白藜蘆醇產(chǎn)品；產(chǎn)品采用單標(biāo)定點法，用薄層掃描技術(shù)分析鑒定，白藜蘆醇純度在85%以上，提取率由虎杖中白藜蘆醇含量決定，可定量提出虎杖中的白藜蘆醇(即，若原料虎杖中白藜蘆醇含量在0. 4%，便可得到2g白藜蘆醇產(chǎn)品，若原料虎杖中白藜蘆醇含量在0. 6%，便可得到3g白藜蘆醇產(chǎn)品)。
權(quán)利要求
1.一種分離純化虎杖中白藜蘆醇的方法，其特征在于所述方法包括如下步驟(1)提取將干燥虎杖藥材粉碎，用丙酮-水作為提取溶劑進(jìn)行提?。?2)純化在步驟(1)所得的提取液中加入親脂性溶劑，構(gòu)成丙酮-水-親脂性溶劑組成的三元兩相液-液萃取系統(tǒng)，萃取完畢、靜置分層后，白藜蘆醇在親脂性溶劑富集相中富集濃縮；(3)結(jié)晶將富集了白藜蘆醇的親脂性溶劑減壓濃縮，放置吸出白藜蘆醇。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述分離純化虎杖中白藜蘆醇的方法，其特征在于步驟(1)中所述丙酮-水的體積比為1:廣7:3。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述分離純化虎杖中白藜蘆醇的方法，其特征在于步驟(1)中所述虎杖和丙酮-水的用量比為1:10 (g/V)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述分離純化虎杖中白藜蘆醇的方法，其特征在于步驟(2)中所述親脂性溶劑為乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、乙醚中的任意一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述分離純化虎杖中白藜蘆醇的方法，其特征在于步驟(2)中所述丙酮-水-親脂性溶劑的體積比為5 5 3 7 3 6。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述分離純化虎杖中白藜蘆醇的方法，其特征在于步驟(2)中所述三元兩相液-液萃取系統(tǒng)的PH值為弱堿性，為7. 5 9。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述分離純化虎杖中白藜蘆醇的方法，其特征在于步驟(2)中所述靜置分層的溫度為25 35°C，時間為4(T80min。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種分離純化虎杖中白藜蘆醇的方法。本發(fā)明通過構(gòu)建堿性三元兩相液-液萃取系統(tǒng)純化虎杖中的白藜蘆醇，整個過程由提取、一次萃取和一次結(jié)晶等簡單的操作組成，具有操作簡單、成本低廉、純化周期短等優(yōu)點，無需繁瑣昂貴的色譜分離裝置。而且本發(fā)明方法制得的白藜蘆醇產(chǎn)品純度高，不含酸性蒽醌類共存組分，純化過程中無白藜蘆醇損失，提取率較傳統(tǒng)方法高。
文檔編號C07C37/70GK102304028SQ201110183680
公開日2012年1月4日 申請日期2011年7月1日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月1日
發(fā)明者蘭晶, 向玲麗, 周少耿, 姚美村, 尹勝, 李春燕, 楊潤潮, 王軍, 鄭晶 申請人:中山大學(xué)