專利名稱：細(xì)胞毒素、其有用的前體藥物、連接基團(tuán)和穩(wěn)定劑的制作方法
細(xì)胞毒素、其有用的前體藥物、連接基團(tuán)和穩(wěn)定劑 相關(guān)申請的交叉引用
本申請是2001年5月31日提交的美國臨時專利申請No. 60/295,196、 2001年5月31日提交的No. 60/295,259、 2001年5月31 曰提交的No. 60/295,342和2001年7月11日提交的No. 60/304,908的
非臨時性提交。每份臨時申請的公開內(nèi)容全部引用在此作為參考。
背景技術(shù)：
很多治療劑、特別是在癌癥化學(xué)療法中尤其有效的那些經(jīng)常表現(xiàn) 體內(nèi)急性毒性，尤其是骨髓和粘膜毒性，以及慢性心臟和神經(jīng)病學(xué)毒 性。這么高的毒性限制了它們的應(yīng)用。開發(fā)更多和更安全的特異性治 療劑、特別是抗胂瘤劑需要對胂瘤細(xì)胞具有更大的有效性，并且減少 這些產(chǎn)品的副作用(毒性、對非胂瘤細(xì)胞的破壞等)的數(shù)量和嚴(yán)重性。 有些現(xiàn)有治療劑的另一種困難是它們在血漿中的穩(wěn)定性不太理想。為 了穩(wěn)定這些化合物而加入的官能團(tuán)導(dǎo)致活性的顯著降低。因此，需要 確定在穩(wěn)定化合物的同時維持可接受的治療活性水平的方法，
關(guān)于更高選擇性細(xì)胞毒性劑的研究幾十年來一直是極為活躍的， 限制劑量的毒性(也就是細(xì)胞毒素對正常組織的不可取的活性)是癌 癥療法失敗的主要原因之一。例如，CC-1065和duocarmycins已知是 極為有力的細(xì)胞毒素。
CC-1065首先是由Upjohn Company于1981年從Str印tomyces zelensis分離的(Hanka等，J. Antibiot， 31: 1211 (1978); Martin等，J. Antibiot. 33: 902 (1980); Martin等，J. Antibiot. 34: 1119 (1981))，并且 發(fā)現(xiàn)在體外和實(shí)驗(yàn)動物中都具有有力的抗腫瘤和抗微生物活性(Li等， Cancer Res. 42: 999 (1982))。 CC-1065在小溝內(nèi)與雙鏈B-DNA結(jié)合 (Swenson等，Cancer Res. 42: 2821 (1982)),具有5，-d(A/GNTTA)-3， 和5，-d(AAAAA)-3，的序列優(yōu)選，并且通過其分子中的CPI左手單位烷
31基化3，-腺噤呤的N3位(Huiiey等，Science 226: 843 (1984))。盡管具有有力和廣泛的抗肝瘤活性，CC-1065也不能用于人，因?yàn)樗鼘?dǎo)致延遲的實(shí)驗(yàn)動物死亡。
CC-1065的很多類似物和書亍生物和duocarmycins是本領(lǐng)域已知的。有人已經(jīng)回顧了很多化合物的結(jié)構(gòu)、合成和性質(zhì)的研究。例如參見Boger等，Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 35: 1438 (1996); Boger等，Chem. Rev. 97: 787 (1997)。
Kyowa Hakko Kogya Co.， Ltd.的 一 個小組已經(jīng)制備了大量CC-1065衍生物。例如參見美國專利No. 5，101，038、 5,641,780、5,187,186、 5,070,092、 5，703，080、 5，070，092、 5，641，780、 5，101，038、5，084，468、公開的PCT申請WO 96/10405和公開的歐洲申請0 537 575Al 這些專利或申請都沒有公開通過生成可裂解前體藥物增強(qiáng)細(xì)胞毒素穩(wěn)定性的策略。
Upjohn Company (Pharmacia Upjohn)也 一 直積極地制備CC-1065的衍生物。例如參見美國專利No. 5,739,350、 4，978，757、5，332，837和4，912，227。所頒布的美國專利沒有公開或提示前體藥物策略將可用于提高這些專利所公開的化合物的體內(nèi)穩(wěn)定性或者減少毒性。
也有研究集中于開發(fā)新的治療劑，它們是前體藥物的形式，也就是通過對它們的結(jié)構(gòu)進(jìn)行某些化學(xué)或酶學(xué)修飾能夠體內(nèi)轉(zhuǎn)化為藥物(活性治療性化合物)的化合物。出于減少毒性的目的，這種轉(zhuǎn)化作用優(yōu)選地限于作用部位或耙組織而不是循環(huán)系統(tǒng)或非耙組織。不過，即使前體藥物也是成問題的，因?yàn)橛捎诿傅拇嬖?，很多是以血液和血清中的低穩(wěn)定性為特征的，這些酶在前體藥物到達(dá)患者體內(nèi)所需部位之前降解或者激活前體藥物。
因此，盡管本領(lǐng)域已經(jīng)取得了一定進(jìn)展，也仍然需要開發(fā)改進(jìn)的治療劑，用于治療哺乳動物，特別是人，治療劑更具體為細(xì)胞毒素，它們相對于相似結(jié)構(gòu)的已知化合物而言表現(xiàn)較高的作用特異性、減少的毒性和提高的血液穩(wěn)定性。本發(fā)明致力于這些需求。發(fā)明概述
本發(fā)明涉及細(xì)胞毒素，它們是CC-1065和duocarmycins的類似
物。本發(fā)明還提供連接基團(tuán)臂，它們在體內(nèi)例如發(fā)生酶裂解或還原裂 解，從包括連接基團(tuán)臂的前體藥物衍生物中釋放活性藥物部分。此外， 本發(fā)明包括在本發(fā)明連接基團(tuán)臂與細(xì)胞毒素之間的綴合物，和連接基 團(tuán)臂、細(xì)胞毒素與定向劑之間的綴合物，定向劑例如抗體或肽。
本發(fā)明還涉及可用于穩(wěn)定治療劑和標(biāo)記物的基團(tuán)。穩(wěn)定基團(tuán)是這 樣選擇的，以限制治療劑或標(biāo)記物被可能存在于血液或非靶組織中的 酶所廓清和代謝，并且進(jìn)一步是這樣選擇的，以限制藥物或標(biāo)記物轉(zhuǎn) 運(yùn)進(jìn)入細(xì)胞。穩(wěn)定基團(tuán)起到阻滯藥物或標(biāo)記物降解的作用，還可以提 供藥物或標(biāo)記物的其他物理特征。穩(wěn)定基團(tuán)還可以提高藥物或標(biāo)記物 在貯存期間的穩(wěn)定性，無論是經(jīng)過配制的形式還是未經(jīng)過配制的形式。
在第一方面，本發(fā)明提供具有式I結(jié)構(gòu)的細(xì)胞毒性化合物
其中環(huán)系A(chǔ)是選自取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜芳基 和取代或未取代的雜環(huán)烴基的成員。符號E和G代表H、取代或未取 代的烴基、取代或未取代的雜烴基、雜原子或單鍵。E和G可選地連 接構(gòu)成環(huán)系，選自取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜芳基和取 代或未取代的雜環(huán)烴基。
在示范性實(shí)施方式中，環(huán)系A(chǔ)是取代或未取代的笨基環(huán)。環(huán)系A(chǔ) 優(yōu)選地被一個或多個如本文定義一節(jié)所述的芳基取代基取代。在一種 優(yōu)選的實(shí)施方式中，苯基環(huán)被CN部分取代。
與R3連接的六元環(huán)內(nèi)的曲線表示環(huán)系可以在環(huán)內(nèi)任意位置具有 一個或一個以上不飽和度，并且可以表示芳香性。符號X代表選自O(shè)、 S和NR"的成員。R"是選自H、取代或未取代的烴基、取代或未取代的雜烴基和?；某蓡T。
符號113代表選自(=0)、 SR11、 NHR"和OR"的成員，其中R11是H、取代或未取代的烴基、取代或未取代的雜烴基、?；(O)R12、C(O)OR12、 C(0)NR12R13、 C(O)OR12、 P(0)(OR12)2、 C(0)CHR12R13、C(O)OR12、 SR12或SiR12R13R14。符號R12、 R13和R"獨(dú)立地代表H、取代或未取代的烴基、取代或未取代的雜烴基和取代或未取代的芳基，其中R12和R13與它們所連接的氮原子一起可選地連接構(gòu)成4至6元取代或未取代的雜環(huán)烴基環(huán)系，可選地含有兩個或多個雜原子。
114和115是獨(dú)立地選自H、取代或未取代的烴基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜芳基、取代或未取代的雜環(huán)烴基、取代或未取代的芳基烴基、鹵素、N02、 NR15R16、 NC(O)R15、 OC(0)NR15R16、OC(O)OR15、 C(O)R15、 OP(0)OR15OR16和OR"的成員。R15和R16獨(dú)立地代表H、取代或未取代的烴基、取代或未取代的雜烴基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜芳基、取代或未取代的雜環(huán)烴基、芳基烴基和取代或未取代的肽基，其中R"和R"與它們所連接的氮原子一起可選地連接構(gòu)成4至6元取代或未取代的雜環(huán)烴基環(huán)系，可選地含有兩個或多個雜原子。
R4、 R5、 R"、 R12、 R13、 R"和R"可選地在它們的結(jié)構(gòu)內(nèi)含有一個或多個可裂解基團(tuán)。示范性可裂解基團(tuán)包括但不限于肽、氨基酸和二硫化物'
116是單鍵，它可以存在也可以不存在。當(dāng)！^存在時，RS和Ri連接構(gòu)成環(huán)丙基環(huán)。R 是CHr-f或-CH;r。當(dāng)iT是-CH2-時，它是環(huán)丙烷環(huán)的組分。符號f代表離去基團(tuán)。技術(shù)人員將理解I^和R"的組合方式不會違反化合價的原理。
本發(fā)明在另一方面提供可裂解的連接基團(tuán)臂，它包括可被酶裂解的基團(tuán).可裂解的連接基團(tuán)一般賦予構(gòu)成物以體內(nèi)可裂解性。因而，連接基團(tuán)可以包括一個或多個將體內(nèi)裂解的基團(tuán)，例如在血流中，速率高于缺少這類基團(tuán)的構(gòu)成物。還提供了連接基團(tuán)臂與治療和診斷劑的綴合物。連接基團(tuán)可用于生成治療劑的前體藥物類似物，可逆地連 接治療或診斷劑與定向劑、可檢測的標(biāo)記或固體載體。連接基團(tuán)可以
結(jié)合成包括本發(fā)明細(xì)胞毒素的配合物。連接基團(tuán)具有式II所述通式
上式中，符號E代表酶可裂解部分(例如肽、酯等)。符號R、 R1、 R"和Rm代表例如包括H、取代或未取代的烴基、取代或未取代 的雜烴基、聚(乙二醇)、?；⒍ㄏ騽?、可檢測的標(biāo)記的成員。在目前 優(yōu)選的實(shí)施方式中，羧基部分的氧連接可檢測的標(biāo)記、治療性部分或 固體載體。
在進(jìn)一步的方面，本發(fā)明提供可裂解的連接基團(tuán)臂，它是基于二 硫化物部分的。因而，提供了具有式III結(jié)構(gòu)的化合物
由符號R、 R1、 R11、 Rm、 R1V、 Rv和R"所代表的原子團(tuán)是如上 R、 R1、 R"和Rm所述的。
本發(fā)明的其他方面、優(yōu)點(diǎn)和目的將因下列詳細(xì)說明而顯而易見。 附圖的簡要說明


圖1闡明本發(fā)明的示范性可裂解尿烷連接基團(tuán)，與細(xì)胞毒素綴合。 圖2闡明本發(fā)明的示范性細(xì)胞毒素.
圖3闡明本發(fā)明的示范性可裂解二硫化物連接基團(tuán)，與細(xì)胞毒素 綴合。
本發(fā)明和優(yōu)選實(shí)施方式的詳細(xì)說明 縮寫
本文所用的"Ala"表示丙氨酸。"Boc"表示叔丁氧羰基。DDQ，，表示2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌。本文所用的符號T"代表酶可裂解基團(tuán)。EDCI"是l-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺。本文所用的TMOC"表示9-藥基甲氧羰基。Leu"是亮氨酸。符號TMB"表示對甲氧基,基。TBAF"表示氟化四丁銨?？s寫"TBSO"表示叔丁基二甲基甲硅烷基醚。"TFA"表示三氟乙酸。符號""表示治療劑、診斷劑或可檢測的標(biāo)記。定義
除非有相反的定義，本文所用的全部技術(shù)和科學(xué)術(shù)語一般具有本發(fā)明所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員所公認(rèn)的含義， 一般而言，本文所用的命名法和下述細(xì)胞培養(yǎng)、分子遺傳學(xué)、有機(jī)化學(xué)與核酸化學(xué)和雜交中的實(shí)驗(yàn)室操作都是本領(lǐng)域熟知的和常用的。采用標(biāo)準(zhǔn)工藝進(jìn)行核酸和肽的合成。 一般而言，酶反應(yīng)和純化步驟是按照廠商的規(guī)范進(jìn)行的。工藝和操作一般是按照本領(lǐng)域和各種一般性參考文獻(xiàn)中的常規(guī)方法進(jìn)行的( 一般參見Sambrook等，Molecular Cloning: A Laboratory Manual,
2d ed. (1989) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold SpringHarbor, N.Y.，引用在此作為參考文獻(xiàn))，這些方法遍及該文獻(xiàn)。本文所用的命名法和下述分析化學(xué)和有機(jī)合成中的實(shí)驗(yàn)室操作都是本領(lǐng)域熟知的和常用的。采用標(biāo)準(zhǔn)工藝或其改進(jìn)進(jìn)行化學(xué)合成和化學(xué)分析。術(shù)語^療劑"打算表示這樣一種化合物，當(dāng)存在治療有效量時，對哺乳動物產(chǎn)生所需的治療效果。關(guān)于治療癌癥，需要該治療劑還能夠進(jìn)入耙細(xì)胞。
術(shù)語^胞毒素"打算表示這樣一種治療劑，它具有所需的對癌細(xì)胞而言是細(xì)胞毒性的效果.示范性細(xì)胞毒素包括——僅供舉例而非
限制--combretastatins、 duocarmycins、 CC-1065抗肺瘤抗生素、
anthracyclines和有關(guān)的化合物。其他細(xì)胞毒素包括霉菌毒素、蓖麻素及其類似物、calicheamycins、 doxirubicin和maytansinoids。
術(shù)語呀示記物"打算表示可用于肺瘤或其他醫(yī)學(xué)條件特征鑒別的化合物，.例如診斷、腫瘤的進(jìn)展和由腫瘤細(xì)胞分泌的因子的測定。標(biāo)記物被視為診斷劑"的子集。
36術(shù)語寬向基團(tuán)"打算表示這樣一種部分，它(l)能夠使它所連接 的實(shí)體(例如治療劑或標(biāo)記物)指向靶細(xì)胞，例如特殊類型的胂瘤細(xì)
胞，或者(2)優(yōu)先在把組織被激活，例如腫瘤。定向基團(tuán)可以是小分子， 它打算包括非肽類和肽類。定向基團(tuán)還可以是大分子，包括糖、凝集 素、受體、受體的配體、蛋白質(zhì)(例如BSA)、抗體等。
術(shù)語，裂解基團(tuán)"打算表示在體內(nèi)不穩(wěn)定的部分。優(yōu)選地，呵 裂解基團(tuán)"允許標(biāo)記物或治療劑通過從綴合物其余部分上裂解而被活 化。有效的定義是連接基團(tuán)優(yōu)選地被生物環(huán)境體內(nèi)裂解。裂解可以無 限制地來自任意過程，例如酶的、還原性、pH等。優(yōu)選地，可裂解基 團(tuán)是這樣選擇的，以便活化作用發(fā)生在所需的作用部位，這可以是靶 細(xì)胞(例如癌細(xì)胞)或組織內(nèi)部或附近的部位，例如治療作用或標(biāo)記 物活性的部位。這樣的裂解作用是酶的裂解作用，示范性酶可裂解基 團(tuán)包括天然氨基酸或終止于天然氨基酸的肽序列，在它們的羧基末端 與連接基團(tuán)連接。盡管裂解速率增強(qiáng)程度不是本發(fā)明的關(guān)鍵，不過可 裂解連接基團(tuán)的優(yōu)選實(shí)例是這樣的，其中在給藥24小時內(nèi)在血流中裂 解至少約10%可裂解基團(tuán)，最優(yōu)選為至少約35%。優(yōu)選的可裂解基團(tuán) 是肽鍵、酯鍵和二硫鍵。
術(shù)語"多肽"，"肽"和"蛋白質(zhì)"在本文中是可互換使用的，表 示氨基酸殘基的聚合物。這些術(shù)語適用于這樣的氨基酸聚合物，其中 一個或多個氨基酸殘基是對應(yīng)的天然存在的氨基酸的人工化學(xué)模擬 物，還適用于天然存在的氨基酸聚合物和非天然存在的氨基酸聚合物。 這些術(shù)語還涵蓋術(shù)語抗體？
術(shù)語氯基酸"表示天然存在的和合成的氨基酸，以及氨基酸類 似物和氨基酸模擬物，它們發(fā)揮作用的方式類似于天然存在的氨基酸。 天然存在的氨基酸是被遺傳密碼編碼的那些，以及后來被修飾的那些 氨基酸，例如羥基脯氨酸、Y-羧基谷氨酸鹽和O-磷酸絲氨酸。氨基酸 類似物表示這樣的化合物，它們具有與天然存在的氨基酸相同的基本 化學(xué)結(jié)構(gòu)，也就是與氫鍵合的a碳、羧基、氨基和R基團(tuán)，例如高絲 氨酸、正亮氨酸、甲硫氨酸亞砜、甲硫氨酸甲基锍。這樣的類似物具有經(jīng)過修飾的R基團(tuán)(例如正亮氨酸)或經(jīng)過修飾的肽骨架,但是保留與天然存在的氨基酸相同的基本化學(xué)結(jié)構(gòu)。氨基酸模擬物表示具有這樣一種結(jié)構(gòu)的化合物，它不同于氨基酸的一般化學(xué)結(jié)構(gòu)，但是發(fā)揮作用的方式類似于天然存在的氨基酸。術(shù)語,天然氨基酸"打算代表上述二十種天然存在的氨基酸的D"立體化學(xué)構(gòu)型。進(jìn)一步可以理解，術(shù)語非天然氨基酸包括天然氨基酸的同系物和天然氨基酸的合成修飾形式。合成修飾形式包括但不限于亞烷基鏈縮短或延長至多兩個碳原子的氨基酸、包含可選被取代的芳基的氨基酸和包含卣代基團(tuán)、優(yōu)選為卣代烴基和芳基的氨基酸。當(dāng)與本發(fā)明的連接基團(tuán)或綴合物連接時，氨基酸是"氨基酸側(cè)鏈"的形式，其中氨基酸的羧酸基團(tuán)已經(jīng)被酮基(C(O))代替。因而例如，丙氨酸側(cè)鏈?zhǔn)?C(0)-CH(NH2)-CH3，等等。
"核酸"表示脫氧核糖核苷酸或核糖核苷酸及其單鏈或雙鏈形式的聚合物。該術(shù)語涵蓋含有已知核苷酸類似物或經(jīng)過修飾的骨架殘基或鍵的核酸，它們是合成的、天然存在的和非天然存在的，具有與參考核酸相似的結(jié)合性質(zhì)，被代謝的方式也類似于參考核普酸。這類類似物的實(shí)例無限制地包括硫代磷酸酯、氨基磷酸酯、甲基膦酸酯、手性甲基膦酸酯、2-0-甲基核糖核苷酸、肽-核酸(PNAs)。
除非有相反的指示，特定的核酸序列還隱含地涵蓋其經(jīng)過保守修飾的變體(例如退化的密碼子取代)和補(bǔ)充序列以及詳細(xì)指出的序列。具體而言，退化的密碼子取代可以通過生成這樣的序列加以實(shí)現(xiàn)，其中一個或多個選定的(或全部的)密碼子的第三位被混合的堿和/或脫氧肌苷殘基取代(Batzer等，Nucleic Acid Res. 19: 5081 (1991);Ohtsuka等，J. Biol. Chem. 260: 2605-2608 (1985); Rossolini等，Mol.Cell Probes 8: 91-98 (1994))。術(shù)語核酸與基因、cDNA、 mRNA、寡核苷酸和多核苷酸可互換使用。
符號—無論用作一條鍵還是顯示一條鍵的垂直位置都表示所顯示的部分與分子、固體載體等其余部分連接的點(diǎn)。
術(shù)語繁基"獨(dú)自或者作為另一個取代基的一部分表示一一除非有相反規(guī)定一一直鏈或支鏈或環(huán)狀烴原子團(tuán)或其組合，它可以是完全 飽和的、單-或多-不飽和的，可以包括二-和多-價原子團(tuán)，具有所指定 的碳原子數(shù)(也就是說d-d。表示一至十個碳)。飽和烴原子團(tuán)的實(shí)例 包括但不限于甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、叔丁基、異丁 基、仲丁基、環(huán)己基、(環(huán)己基)甲基、環(huán)丙基甲基、例如正戊基、正己 基、正庚基、正辛基的同系物和異構(gòu)體等。不飽和的烴基是具有一條
或多條雙鍵或叁鍵者。不飽和的烴基實(shí)例包括但不限于乙烯基、2-丙 烯基、巴豆基、2-異戊烯基、2-(丁二烯基)、2,4-戊二烯基、3-(l，4-戊二 烯基)、乙炔基、1-與3-丙炔基、3-丁炔基和高級同系物和異構(gòu)體。術(shù) 語繁基"除非有相反注解，還意味著包括下列詳細(xì)定義的那些烴基 衍生物，例如雜烴基？限于烴類基團(tuán)的烴基也稱均烴基？
術(shù)語"亞烷基"獨(dú)自或者作為另一取代基的一部分表示從烷烴衍 生的二價原子團(tuán)，例如但不限于-CH2CH2CH2CHr，進(jìn)一步包括下述 "雜亞烷基"的那些基團(tuán)。通常，烴基(或亞烷基)將具有1至24個 碳原子，具有10個或更少碳原子的那些基團(tuán)在本發(fā)明中是優(yōu)選的。"低 級烴基"或1氏級亞烷基"是短鏈烴基或亞烷基， 一般具有八個或更 少碳原子。
術(shù)語"雜烴基"獨(dú)自或者與另一個術(shù)語聯(lián)合表示一一除非有相反 規(guī)定一一穩(wěn)定的直鏈或支鏈或環(huán)狀烴原子團(tuán)或其組合，由規(guī)定數(shù)量的 碳原子和至少一個雜原子組成，雜原子選自由O、 N、 Si和S組成的 組，其中氮、碳和辟f原子可以可選地是氧化的，氮雜原子可以可選地 是季銨化的。雜原子O、 N、 S和Si可以位于雜烴基的任意內(nèi)部位置 或烴基與分子其余部分連接的位置。實(shí)例包括但不限于 -CH2-CH2-0-CH3 、 -CH2-CH2-NH-CH3 、 -CH2-CH2-N(CH3)-CH3 、 -CH2S-CH2-CH3 、 -CH2-CH2-S(0)-CH3 、 -CH2-CH2-S(0)2-CH3 、 -CH=CHO-CH3 、 Si(CH3)3 、 -CH2-CH=N-OCH3 和 -CH=CH-N(CH3)-CH3 。至多兩個雜原子可以是連續(xù)的，例如 -CH2-NH-OCH3和-CHrO-Si(CH3)3。類似地，術(shù)語"雜亞烷基"獨(dú)自 或者作為另一個取代基的一部分表示從雜烴基衍生的二價原子團(tuán)，例
39如但不限于-CH2-CH2-S-CH2-CH2-和-CHrS-CH2-CH2-NH-CH2-。關(guān)于雜亞烷基，雜原子也可以占據(jù)一個或兩個鏈末端(例如亞烴氧基、亞烴二氧基、亞烴氨基、亞烴二氨基等)。術(shù)語"雜烴基"和"雜亞烷基"涵蓋聚(乙二醇)及其衍生物(例如參見Shearwater Polymers Catalog,2001 )。進(jìn)而，關(guān)于亞烷基和雜亞烷基連接基團(tuán)，連接基團(tuán)結(jié)構(gòu)式書寫的方向并不意味著連接基團(tuán)的取向。例如，式-C(0)2R，-代表-C(0)2R，-和-R，C(0)2-。
與術(shù)語，圣基"或"雜烴基"聯(lián)合的術(shù)語，氐級"表示具有1至6個碳原子的部分。
術(shù)語，圣氧基"、"烴基氨基"和"烴硫基"(或硫代烴氧基)使用它們的常規(guī)含義，表示分別經(jīng)由氧原子、氨基或硫原子與分子其余部分連接的那些烴基。
一般而言，餓基取代基"也選自上述基團(tuán)。本文所用的術(shù)語餓基取代基"表示與羰基碳連接并且滿足其化合價的基團(tuán)，該羰基碳直接或間接與本發(fā)明化合物的多環(huán)核連接。
術(shù)語哪烴基"和"雜環(huán)烴基"獨(dú)自或者與其他術(shù)語聯(lián)合分別代表一一除非有相反規(guī)定一一取代或未取代的，5基"和取代或未取代的"雜烴基"的環(huán)狀變型。另外，關(guān)于雜環(huán)烴基，雜原子可以占據(jù)雜環(huán)與分子其余部分連接的位置.環(huán)烴基的實(shí)例包括但不限于環(huán)戊基、環(huán)己基、l-環(huán)己烯基、3-環(huán)己烯基、環(huán)庚基等。雜環(huán)烴基的實(shí)例包括但不限于l-(l,2，5，6-四氫吡啶基)、l-哌啶基、2-哌咬基、3-哌啶基、4-嗎啉基、3-嗎啉基、四氫呋喃-2-基、四氬呋喃-3-基、四氫鑲哈-2-基、四氫噻吩-3-基、l-哌嚷基、2-哌溱基等。環(huán)狀結(jié)構(gòu)的雜原子和碳原子可選地是氧化的。
術(shù)語嘴代"或"卣素"獨(dú)自或者作為另一個取代基的一部分表示一一除非有相反規(guī)定一一氟、氯、溴或碘原子。另外，貨代烴基"等術(shù)語意味著包括單卣代烴基和多卣代烴基.例如，術(shù)語^代(d-C0烴基"意味著包括但不限于三氟甲基、2，2，2-三氟乙基、4-氯丁基、3-溴丙基等。術(shù)語^基"表示一一除非有相反規(guī)定一一取代或未取代的、多 不飽和的、芳族烴取代基，它可以是單一的環(huán)或多個稠合在一起或共
價連接的環(huán)(優(yōu)選l至3個環(huán))。術(shù)語"雜芳基"表示含有一至四個選 自N、 O和S的雜原子的芳基(或環(huán))，其中氮、碳和硫原子可選地是 氧化的，氮原子可選地是季銨化的。雜芳基可以通過雜原子與分子其 余部分連接。芳基和雜芳基的非限制性實(shí)例包括苯基、l-萘基、2-萘基、
4- 聯(lián)苯、l-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、3-吡唑基、2,米唑基、4-咪 唑基、吡秦基、2-噁唑基、4-噁唑基、2-苯基-4-噁唑基、5-嗜、唑基、3-異喁唑基、4-異喁唑基、5-異噁唑基、2-嚷唑基、4-嚷唑基、5-蓉唑基、 2-呋喃基、3-呋喃基、2-漆哈基、3-蓉呤基、2-吡咬基、3-晚咬基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-苯并噻唑基、嘌呤基、2-苯并咪唑基、
5- 吲哚基、l-異喹啉基、5-異喹啉基、2-喹喔啉基、5-喹喔啉基、3-喹 啉基和6-喹啉基。每個上述芳基和雜芳基環(huán)系的取代基選自下述可接 受的取代基。^基"和"雜芳基"還涵蓋這樣的環(huán)系，其中一個或多 個非芳族環(huán)系與芳基或雜芳基系統(tǒng)稠合或者鍵合。
為簡便起見，術(shù)語貨基"當(dāng)與其他術(shù)語聯(lián)合使用時(例如芳氧 基、芳硫基、芳基烴基)包括如上所定義的芳基和雜芳基環(huán)。因而， 術(shù)語貨基烴基"意味著包括這樣的原子團(tuán)，其中芳基與烴基連接(例 如節(jié)基、苯乙基、吡啶基甲基等)，該烴基包括這樣的烴基，其中碳原 子(例如亞甲基)已經(jīng)例如被氧原子代替(例如苯氧基甲基、 氧基甲基、3-(l-萘氧基)丙基等)。
每個上述術(shù)語(例如繁基"、"雜烴基"、"芳基"和"雜芳基") 包括所示原子團(tuán)的取代和未取代的形式。下面提供每種類型原子團(tuán)的 優(yōu)選取代基。
烴基和雜烴基原子團(tuán)(包括經(jīng)常稱為亞烷基、鏈烯基、雜亞烷基、 雜鏈烯基、炔基、環(huán)烴基、雜環(huán)烴基、環(huán)烯基和雜環(huán)烯基的那些基團(tuán)) 的取代基一般分別稱為繁基取代基"和"雜烴基取代基它們可以
是各種基團(tuán)的一種或多種，選自但不限于:,-OR，、 -O、 =NR，、 -N-OR，、 畫NR，R"、 -SR，、-囟素、-SiR，R"R，"、 -OC(O)R，、 -C(O)R，、 -C02R，、-CONR，R" 、 -OC(O)NR，R" 、 -NR，，C(O)R， 、 -NR，-C(O)NR"R，"、-NR，，C(0)2R， 、 -NR-C(NR，R"R，，，)=NR，，，， 、 -NR-C(NR，R，，)=NR，，，、-S(O)R'、 -S(0)2R，、 -S(0)2NR，R，，、 -NRS02R，、 -CN和-NO;j，數(shù)量范圍從0至(2m，+l)，其中m，是這類原子團(tuán)中碳原子的總數(shù)。R，、 R"、R，，，和R，，"各自優(yōu)選獨(dú)立地表示氨、取代或未取代的雜烴基、取代或未取代的芳基一一例如被1 _ 3個g素取代的芳基一一、取代或未取代的烴基、烴氧基或硫代烴氧基、或芳基烴基。當(dāng)本發(fā)明化合物包括一個以上R基團(tuán)時，例如每個R基團(tuán)是獨(dú)立地加以選擇的，當(dāng)存在一個以上R，、 R"、 R"，和R，"，基團(tuán)時，它們也是如此。當(dāng)R，和R"與相同的氮原子連接時，它們可以與氮原子聯(lián)合構(gòu)成5-、 6-或7-元環(huán)。例如，-NR，R，，意味著包括但不限于1-吡咯烷基和4-嗎啉基。本領(lǐng)域技術(shù)人員從上述取代基的討論將理解到，術(shù)語，5基"意味著包括其中碳原子與除氳以外的基團(tuán)鍵合的基團(tuán)，例如卣代烴基(例如-CF3和-CHzCF3)和?；?例如-C(0)CH3、 -C(0)CF3、 -C(0)CH2OCH3等)。
類似于關(guān)于烴基原子團(tuán)所述的取代基，芳基的取代基和雜芳基的取代基一般分別稱為嘮基取代基"和"雜芳基取代基并且是各不相同的，例如選自卣素、-OR，、 =0、 =NR，、 =N-OR，、 -NR，R"、誦SR，、誦卣素、-SiR，R"R，，,、 -OC(O)R，、 -C(O)R，、 -C02R，、 -CONR，R"、-OC(O)NR,R"、 -NR,，C(O)R，、 -NR，-C(O)NR"R"， 、 -NR,,C(0)2R，、-NR-C(NR,R")=NR"，、 -S(O)R，、 -S(0)2R，、 -S(0)2NR，R，,、 -NRS02R，、匿CN、 -N02、 -R，、 -N3、 -CH(Ph)2、氟代(d國C4)烴氧基和氟代(d-Ct)烴基，數(shù)量范圍從零至芳族環(huán)系上開放化合價的總數(shù)；其中R，、 R"、R"，和R"，，優(yōu)選獨(dú)立地表示氫、(CrCs)烴基與雜烴基、未取代的芳基與
雜芳基、(未取代的芳基)-(C廣C4)烴基和(未取代的芳基)氧基-(CVC4)烴
基。當(dāng)本發(fā)明化合物包括一個以上R基團(tuán)時，例如每個R基團(tuán)是獨(dú)立地加以選擇的，當(dāng)存在一個以上R，、 R"、 R"，和R""基團(tuán)時，它們也是如此。
國T-C(O)-(CRR，)q-U-取代基代替，其中T和U獨(dú)立地是歸NR誦、誦O-、-CRR，-或單鍵，q是0至3的整數(shù)?；蛘?，芳基或雜芳基環(huán)的相鄰原 子上兩個取代基可以可選地被式-A-(CH2)r-B-取代基代替，其中A和B 獨(dú)立地是-CRR，畫、-O國、誦NR-、 -S-、國S(O)-、畫S(O)r、國S(0)2NR,國或單 鍵，r是l至4的整數(shù)。如此構(gòu)成的新環(huán)的單鍵之一可以可選地被雙 鍵代替?；蛘撸蓟螂s芳基環(huán)的相鄰原子上兩個取代基可以可選地 被式-(CRR，VX-(CR，，R，，，)d-取代基代替，其中s和d獨(dú)立地是0至3 的整數(shù)，X是-O-、誦NR，-、 -S畫、誦S(O)-、 -8(0)2-或-8(0)^11,-。取代基 R、 R，、 R"和R"，優(yōu)選獨(dú)立地選自氫或取代或未取代的(d-C6)烴基。 本文所用的術(shù)語雜原子"包括氧(O)、氮(N)、硫(S)和硅(Si)。 符號R"是代表取代基的通用縮寫，取代基選自取代或未取代 的烴基、取代或未取代的雜烴基、取代或未取代的芳基、取代或未取 代的雜芳基和取代或未取代的雜環(huán)基。
術(shù)語，學(xué)上可接受的鹽"包括活性化合物的鹽，它們是利用相 對無毒性的酸或堿制備的，這取決于本文所述化合物上的特定取代基。 當(dāng)本發(fā)明化合物含有相對酸性的官能度時，可以這樣得到堿加成鹽， 使這類化合物的中性形式與足量所需的堿接觸，純凈地或者在適合的 惰性溶劑中。藥學(xué)上可接受的堿加成鹽的實(shí)例包括鈉、鉀、釣、銨、 有機(jī)氨基或鎂的鹽，或相似的鹽。當(dāng)本發(fā)明化合物含有相對堿性的官 能度時，可以這樣得到酸加成鹽，使這類化合物的中性形式與足量所 需的酸接觸，純凈地或者在適合的惰性溶劑中。藥學(xué)上可接受的酸加 成鹽的實(shí)例包括從無機(jī)酸衍生的那些，酸例如鹽酸、氫溴酸、硝酸、 碳酸、 一氫碳酸、磷酸、 一氫磷酸、二氫磷酸、硫酸、 一氫硫酸、氫 碘酸或磷酸等，以及從相對無毒性的有機(jī)酸衍生的鹽，酸例如乙酸、 丙酸、異丁酸、馬來酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、富馬酸、 乳酸、扁桃酸、鄰笨二甲酸、笨磺酸、對甲笨磺酸、檸檬酸、酒石酸、 甲磺酸等。還包括氨基酸的鹽，例如精氨酸鹽等，和葡萄糖膝酸或半 乳糖醛酸等有機(jī)酸的鹽(例如參見Berge等，"Pharmaceutical Salts", Journal of Pharmaceutical Science, 1977， 66， 1-19)。本發(fā)明的某些具 體化合物含有堿性和酸性官能度，允許化合物轉(zhuǎn)化為堿或酸加成鹽。
43化合物的中性形式優(yōu)選地這樣再生，使鹽與堿或酸接觸，再按常規(guī)方式分離母體化合物?；衔锏哪阁w形式在某些物理性質(zhì)上不同于各種鹽形式，例如在極性溶劑中的溶解度，但是出于本發(fā)明的目的，鹽等同于化合物的母體形式。
除了鹽形式以外，本發(fā)明提供前體藥物形式的化合物。本文所述化合物的前體藥物是這樣的化合物，它們在生理?xiàng)l件下容易經(jīng)歷化學(xué)
變化，提供本發(fā)明的化合物。另外，前體藥物可以在exvivo環(huán)境中通過化學(xué)或生化方法轉(zhuǎn)化為本發(fā)明的化合物。例如，當(dāng)置于含有適合的酶或化學(xué)試劑的透皮貼劑藥庫中時，前體藥物可以緩慢地轉(zhuǎn)化為本發(fā)明的化合物。
某些本發(fā)明化合物可以存在未溶劑化的形式以及溶劑化的形式，包括水合的形式。 一般而言，溶劑化的形式等同于未溶劑化的形式，都涵蓋在本發(fā)明的范圍內(nèi)。某些本發(fā)明化合物可以存在多晶型或無定形。 一般而言，所有物理形式在本發(fā)明所涉及的用途上都是等同的，都屬于本發(fā)明的范圍。
某些本發(fā)明化合物具有不對稱的碳原子(旋光中心)或雙鍵；外消旋物、非對映體、幾何異構(gòu)體和個別的異構(gòu)體都涵蓋在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
本發(fā)明的化合物還可以在構(gòu)成這類化合物的一個或多個原子上含有非天然部分的原子同位素.例如，化合物可以用放射性同位素放射
性標(biāo)記，例如氚fH)、碘-125 (1251)或碳-14 ("C)。本發(fā)明化合物的所有
同位素變體無論是否是放射性的都打算涵蓋在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
術(shù)語貧接部分"或"連接定向基團(tuán)的部分"表示允許定向基團(tuán)與連接基團(tuán)連接的部分。典型的連接基團(tuán)包括一一僅供闡述而非限制一一烴基、氨基烴基、氨基羰基烴基、羧基烴基、羥基烴基、烴基-馬來酰亞胺、烴基-N-鞋基琥珀酰亞胺、聚(乙二醇)-馬來酰亞胺和聚(乙二醇)-N-鞋基琥珀酰亞胺，它們?nèi)靠梢员贿M(jìn)一步取代。連接基團(tuán)還可以使連接部分事實(shí)上附于定向基團(tuán)。
本文所用的術(shù)語"離去基團(tuán)"表示在反應(yīng)中從反應(yīng)物上裂解的反應(yīng)物部分。
"抗體"一般表示這樣一種多肽，它包含來自免疫球蛋白或其片 段的框架區(qū)，特異性地結(jié)合和識別抗原。所識別的免疫球蛋白包括k、
51、 a、 y、 S、 s和n恒定區(qū)基因，以及無數(shù)的免疫球蛋白可變區(qū)基因。k 或入歸屬于輕鏈。y、 n、 a、 S或s歸屬于重鏈，繼而分別定義免疫球蛋 白種類IgG、 IgM、 IgA、 IgD和IgE。
示范性免疫球蛋白(抗體)結(jié)構(gòu)單位包含四聚物。每個四聚物由 兩對相同的多肽鏈組成，每對具有一條紫"鏈(約25kDa)和一條 ，"鏈(約50- 70kDa)。每條鏈的N-末端定義約100至110個或 以上氨基酸的可變區(qū)，主要負(fù)責(zé)抗原識別。術(shù)語可變的輕鏈(VL)和可 變的重鏈(VH)分別表示這些輕鏈和重鏈。
抗體例如以完整的免疫球蛋白形式存在，或者以大量被充分鑒別 的片段形式存在，這些片段是被各種肽酶的消化作用產(chǎn)生的。因而例 如，胃蛋白酶消化鉸鏈區(qū)二疏鍵以下的抗體，生成F(ab)，2，即Fab 的二聚物，它本身是通過二硫鍵與VH-CH1連接的輕鏈。F(ab)，2可 以在溫和條件下分解，斷開鉸鏈區(qū)的二硫鍵，由此轉(zhuǎn)化F(ab)，2 二聚 物為Fab，單體。Fab，單體本質(zhì)上是具有一部分鉸鏈區(qū)的Fab (Fundamental Immunology, Paul ed.， 3rd ed. 1993)。盡管各種抗體片 段是根據(jù)完整抗體的消化作用定義的，不過技術(shù)人員將領(lǐng)會到，這類 片段可以利用化學(xué)或重組DNA方法重新合成。因而，本文所用的術(shù)語 抗體還包括通過全部抗體的修飾作用產(chǎn)生的抗體片段或利用重組 DNA方法重新合成的那些(例如單鏈Fv)。
關(guān)于單克隆或多克隆抗體的制備，可以使用本領(lǐng)域已知的任意工 藝(例如參見Kohler & Milstein， Nature 256: 495-497 (1975); Kozbor 等，Immunology Today 4: 72 (1983); Cole等，Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, pp. 77-96， AlanLiss， Inc, (1985) X
多克隆抗體的生產(chǎn)方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。將同系繁殖的 小鼠(例如BALB/C小鼠)或兔子用蛋白質(zhì)致免疫，使用標(biāo)準(zhǔn)的佐劑， 例如Freimd佐劑，和標(biāo)準(zhǔn)的致免疫方案.動物對免疫原制備物的免疫應(yīng)答是這樣監(jiān)測的，進(jìn)行試驗(yàn)性放血，測定對P亞單位的反應(yīng)性效價。當(dāng)?shù)玫竭m當(dāng)高的抗體對免疫原的效價時，采集動物的血液，制備抗血清。如果需要的話可以進(jìn)行抗血清的進(jìn)一步分離，以富集對蛋白質(zhì)呈反應(yīng)'性的抗體。
單克隆抗體可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的各種工藝得到。簡而言之，將用所需抗原致免疫的動物的脾細(xì)胞不死化，普遍通過與骨髓
瘤細(xì)胞融合(Kohler & Milstein， Eur. J. Immunol. 6: 511-519 (1976))。不死化的替代方法包括用EB病毒、致癌基因或逆病毒轉(zhuǎn)化，或本領(lǐng)域熟知的其他方法。
在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方式中，抗體是人或人化抗體。"人化"表示非人的多肽序列，它已經(jīng)經(jīng)過修飾，以最小化對人的免疫反應(yīng)性，通常通過改變氨基酸序列，以模擬現(xiàn)有的人序列，基本上不改變多肽序列的功能(例如參見Jones等，Nature 321: 522-525 (1986)，和公開的英國專利申請No. 8707252)。"人"抗體完全由來自人抗體基因的多肽序列組成，例如可以通過噬菌體顯示法得到或者得自遺傳上變?yōu)楹腥嗣庖咔虻鞍谆虻男∈蟆?br> 本文所用的^體載體"表示這樣一種材料，它基本上不溶于所選擇的溶劑系統(tǒng)，或者可以容易從所選擇的可溶性溶劑系統(tǒng)中分離(例如通過沉淀法)?？捎糜趯?shí)施本發(fā)明的固體載體可以包括活化的或者能夠活化的基團(tuán)，以允許所選擇的種類與固體載體結(jié)合。固體栽體還可以是一種底物，例如芯片、晶片或井，本發(fā)明的個體或一種以上化合物結(jié)合其上。
本文所用的"反應(yīng)性官能團(tuán)"表示這樣的基團(tuán)，包括但不限于烯烴、炔烴、醇、酚、酸、氧化物、卣化物、醛、嗣、羧酸、醋、酰胺、氰酸鹽、異氰酸鹽、硫氰酸鹽、異疏氰酸鹽、胺、肼、腙、酰肼、重氮、重氮錯、硝基、腈、硫醇、硫化物、二硫化物、亞砜、砜、磺酸、亞磺酸、縮醛、縮酮、酸酐、硫酸鹽、次磺酸、異腈、脒、亞酰胺、亞胺酸鹽、硝賜、羥胺、將、異羥肟酸、硫代異羥厲酸、丙二烯、原酸酯、亞硫酸鹽、烯胺、炔胺、脲、假脲、氨基脲、碳二亞胺、氨基甲酸酯、亞胺、疊氮化物、偶氮化合物、氧化偶氮化合物和亞^肖基化
合物。反應(yīng)性官能團(tuán)還包括用于制備生物綴合物的那些，例如N-羥基 琥珀酰亞胺酯、馬來跣亞胺等(例如參見Hermanson, Bioconjugate Techniques, Academic press, San Diego， 1996)。制備每種這些官能團(tuán) 的方法是本領(lǐng)域熟知的，它們應(yīng)用于特定的目的或者根據(jù)特定的目的 而修改都在本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力范圍內(nèi)(例如參見Sandler and
Karo， eds. Organic Functional Group Preparations, Academic Press, San Diego， 1989 )。
本發(fā)明的化合物被制成單一的異構(gòu)體(例如對映體、順-反式、位 置的、非對映體)或異構(gòu)體的混合物。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，化合物 被制成基本上單一的異構(gòu)體。制備基本上異構(gòu)體純的化合物的方法是 本領(lǐng)域已知的。例如，富集對映體的混合物和純的對映體化合物可以 這樣制備，利用對映體純的合成中間體與這類反應(yīng)的組合，這些反應(yīng) 維持手性中心的立體化學(xué)不變，或者導(dǎo)致其完全反轉(zhuǎn)。或者，終產(chǎn)物 或合成沿途的中間體可以被拆分為單一的立體異構(gòu)體。用于反轉(zhuǎn)特定 的立體中心或者維持其不變的工藝和用于拆分立體異構(gòu)體混合物的工
藝是本領(lǐng)域熟知的，本領(lǐng)域技術(shù)人員完全在其能力范圍內(nèi)根據(jù)特定的 情形選擇適當(dāng)?shù)姆椒ā?一般參見Furniss等(eds.)， Vogel，s Encyclopedia of Practical Organic Chemistry 5th ed.， Longman Scientific and Technical Ltd., Essex, 1991， pp. 809-816; Heller, Acc. Chem. Res. 23: 128 (1990)。 細(xì)胞毒素
很多治療劑、特別是對癌癥化療法尤其有效的那些經(jīng)常表現(xiàn)急性 體內(nèi)毒性，尤其是骨髓和肌肉毒性，以及慢性心臟和神經(jīng)病學(xué)毒性。 這么高的毒性限制了它們的應(yīng)用。開發(fā)更多和更安全的特異性治療劑、 特別是抗腫瘤劑需要對胂瘤細(xì)胞具有更大的有效性，并且減少這些產(chǎn) 品的副作用(毒性、對非胂瘤細(xì)胞的破壞等)的數(shù)量和嚴(yán)重性。
關(guān)于更高選擇性細(xì)胞毒性劑的研究幾十年來一直是極為活躍的， 限制劑量的毒性(也就是細(xì)胞毒素對正常組織的不可取的活性)是癌
47癥療法失敗的主要原因之一。例如，CC-1065和duocarmycin已知是極為有力的細(xì)胞毒素。為評價這些化合物的類似物已經(jīng)進(jìn)行了大量嘗試；不過，多數(shù)已經(jīng)顯示在治療劑量下表現(xiàn)不可取的毒性。因此，目標(biāo)是提高抗胂瘤劑的特異性，增加對抗腫瘤細(xì)胞的有效性，同時減少不良的副作用，例如毒性和對非胂瘤細(xì)胞的破壞。
有研究集中于開發(fā)新的治療劑，它們是前體藥物的形式，也就是通過對它們的結(jié)構(gòu)進(jìn)行某些化學(xué)或酶學(xué)修飾能夠體內(nèi)轉(zhuǎn)化為藥物(活性治療性化合物)的化合物。出于減少毒性的目的，這種轉(zhuǎn)化作用優(yōu)選地限于作用部位或耙組織而不是循環(huán)系統(tǒng)或非靶組織。不過，即使前體藥物也是成問題的，因?yàn)橛捎诿傅拇嬖?，很多是以血液和血清中的低穩(wěn)定性為特征的，這些酶在前體藥物到達(dá)患者體內(nèi)所需部位之前降解或者激活前體藥物。
因此，盡管本領(lǐng)域已經(jīng)取得了一定進(jìn)展，也仍然需要開發(fā)改進(jìn)的治療劑，用于治療哺乳動物，特別是人，治療劑更具體為細(xì)胞毒素和有關(guān)的前體藥物，它們相對于相似結(jié)構(gòu)的已知化合物而言表現(xiàn)較高的作用特異性、減少的毒性和提高的血液穩(wěn)定性。
在第一方面，本發(fā)明提供具有式I結(jié)構(gòu)的細(xì)胞毒性化合物
其中環(huán)系A(chǔ)是選自取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜芳基和取代或未取代的雜環(huán)烴基的成員。示范性環(huán)系包括笨基和吡咯。
符號E和G代表H、取代或未取代的烴基、取代或未取代的雜烴基、雜原子或單鍵。E和G可選地連接構(gòu)成環(huán)系，選自取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜芳基和取代或未取代的雜環(huán)烴基。
符號X代表選自O(shè)、 S和NR"的成員。R"是選自H、取代或未取代的烴基、取代或未取代的雜烴基和?；某蓡T。
符號R3代表選自(-0)、 SR11、 NHR"和OR"的成員，其中R11 是H、取代或未取代的烴基、取代或未取代的雜烴基、?；?、C(O)R12、 C(O)OR12、 C(0)NR12R13、 C(O)OR12、 P(0)(OR12)2、 C(0)CHR12R13、 C(O)OR12、 SR12或SiR12R13R"。符號R12、 R13和R"獨(dú)立地代表H、 取代或未取代的烴基、取代或未取代的雜烴基和取代或未取代的芳基， 其中R12和R13與它們所連接的氮原子一起可選地連接構(gòu)成4至6元取 代或未取代的雜環(huán)烴基環(huán)系，可選地含有兩個或多個雜原子。 一個或 多個R12、 R"或R"可以在其結(jié)構(gòu)內(nèi)包括可裂解的基團(tuán)。
r"和rs是獨(dú)立地選自h、取代或未取代的烴基、取代或未取代的 芳基、取代或未取代的雜芳基、取代或未取代的雜環(huán)烴基、取代或未 取代的芳基烴基、卣素、N02、 NR15R16、 NC(O)R15、 OC(0)NR15R16、 OC(O)OR15、 C(O)R15、 SR"和OR"的成員。R"和R"獨(dú)立地代表H、 取代或未取代的烴基、取代或未取代的雜烴基、取代或未取代的芳基、 取代或未取代的雜芳基、取代或未取代的雜環(huán)烴基、芳基烴基和取代 或未取代的肽基，其中R"和R"與它們所連接的氮原子一起可選地連 接構(gòu)成4至6元取代或未取代的雜環(huán)烴基環(huán)系，可選地含有兩個或多 個雜原子。
R4、 R5、 R11、 R12、 R13、 R"和R"可選地在它們的結(jié)構(gòu)內(nèi)含有一 個或多個可裂解基團(tuán)。示范性可裂解基團(tuán)包括但不限于肽、氨基酸和 二硫化物'
在另一種示范性實(shí)施方式中，本發(fā)明提供根據(jù)式I的化合物，其
中至少一個r4r5 Rll Rl2 Rl3 Rl5和R"包含<formula>formula see original document page 49</formula>其中R^是選自H、取代或i取代的烴基和取代或未取代的雜烴 基的成員。符號R"和R"獨(dú)立地代表H、取代或未取代的烴基、取代或未取代的雜烴基、取代或未取代的芳基和取代或未取代的雜芳基，
或者R"和R32—起是
其中R"和R"獨(dú)立地代表H、取代或未取代的烴基、取代或未取代的雜烴基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的雜芳基。符號R35代表取代或未取代的烴基、取代或未取代的雜烴基或NR36。 R"是選自H、取代或未取代的烴基和取代或未取代的雜烴基的成員。XS是O或NR37，其中R"是選自H、取代或未取代的烴基和取代或未取代的雜烴基的成員。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，至少一個R"和R"選自L5X6，其中L"和X"—般是如本文所述的。
在示范性實(shí)施方式中，上述結(jié)構(gòu)中的至少一個R31、 R32、 R"和R"是被這樣一個部分取代的芳基或雜芳基部分，它包括保護(hù)或未保護(hù)的反應(yīng)性官能團(tuán)、定向劑或可檢測的標(biāo)記。
在進(jìn)一步的示范性實(shí)施方式中，至少一個R4、 Rs、 R11、 R12、 R13、R15和R16攜帶適合于綴合根據(jù)式I的化合物與另 一種分子的反應(yīng)性基團(tuán)。在進(jìn)一步的示范性實(shí)施方式中，R4、 R5、 R11、 R12、 R13、 R"和R"獨(dú)立地選自取代的烴基和取代的雜烴基，并且在烴基或雜烴基部分的游離末端具有反應(yīng)性官能團(tuán)。 一個或多個R4、 R5、 R11、 R12、 R13、1115和R"可以與另一種分子綴合，例如定向劑、可檢測的標(biāo)記、固體載體等。
從本文的討論可以明顯看出，當(dāng)至少一個R"和R"是反應(yīng)性官能團(tuán)時，該基團(tuán)可以是在根據(jù)式I的化合物與另一種分子之間的鍵的組分。在示范性實(shí)施方式中，其中至少一個R"和R"是式I化合物與另一種分子之間的鍵，至少一個R"和R"是被酶裂解的部分。
在進(jìn)一步的示范性實(shí)施方式中，至少一個I^和rS是<formula>formula see original document page 51</formula>
上式中，符號乂2和Zi代表獨(dú)立地選自O(shè)、 S和NR"的成員。基 團(tuán)R"和R"獨(dú)立地選自H、取代或未取代的烴基、取代或未取代的雜 烴基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜芳基、取代或未取代 的雜環(huán)烴基、卣素、N02、 NR19R20、 NC(O)R19、 OC(O)NR19、 OC(O)OR19、 C(O)R19、 SR"或OR19。
符號R"和R^獨(dú)立地代表取代或未取代的烴基、取代或未取代的 雜烴基、取代或未取代的芳基、取代或取代的雜芳基、取代或未取代 的雜環(huán)烴基、取代或未取代的肽基，其中R"和R"與它們所連接的氮 原子一起可選地構(gòu)成4至6元取代或未取代的雜環(huán)烴基環(huán)系，可選地 含有兩個或多個雜原子，其條件是當(dāng)f是NH時，R"和R"都不是H， R"不是NH2。遍及本說明書的符號R"和R"還涵蓋R"和RS所述基 團(tuán)。因而例如，在本發(fā)明的范圍內(nèi)提供這樣的化合物，它具有兩個或 多個如上剛才所述的相連的稠合苯基-雜環(huán)環(huán)系或稠合環(huán)與連接基團(tuán) 的組合。而且，在存在連接基團(tuán)的那些實(shí)施方式中，連接基團(tuán)可以以 W或R5取代基的形式存在或者以R"或R"取代的形式存在。
116是單鍵，它可以存在也可以不存在，當(dāng)116存在時，116和117連 接構(gòu)成環(huán)丙基環(huán)。R"是CH2-Xi或-CHr。當(dāng)R 是-CHr時，它是環(huán)丙 烷環(huán)的組分。符號f代表離去基團(tuán)。技術(shù)人員將理解116和117的組合 方式不會違反化合價的原理。
六元環(huán)內(nèi)的曲線表示該環(huán)可以具有一個或多個不飽和度，并且可 以是芳香性的。因而，例如下述等環(huán)結(jié)構(gòu)和有關(guān)的結(jié)構(gòu)都屬于式I的 范圍<formula>formula see original document page 51</formula>在示范性實(shí)施方式中，環(huán)系A(chǔ)是取代或未取代的苯基環(huán)。環(huán)系A(chǔ)優(yōu)選地被一個或多個如本文定義一節(jié)所述的芳基取代基取代。在一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，苯基環(huán)被CN部分取代。
在另一種示范性實(shí)施方式中，本發(fā)明提供具有式IV結(jié)構(gòu)的化合
物
<formula>formula see original document page 0</formula>
在這種實(shí)施方式中，原子團(tuán)R3、 R4、 R5、 R6、 R 和X是如上所述的取代基。符號Z是獨(dú)立地選自O(shè)、 S和NR"的成員。符號R"代表選自H、取代或未取代的烴基、取代或未取代的雜烴基和?；某蓡T。當(dāng)X和Z都是NR"時，每個R"是獨(dú)立地加以選擇的。符號R1代表H、取代或未取代的低級烴基或C(O)R8。 RS是選自NR9R1()、NR9NHR1G和OR9的成員。RS和R"獨(dú)立地選自H、取代或未取代的烴基和取代或未取代的雜烴基。原子團(tuán)W是H或取代或未取代的低級烴基。 一般優(yōu)選的是當(dāng)R"是取代的烴基時，它不是全氟烴基，例如CF3。
正如上面所討論的，W可以是離去基團(tuán)。有用的離去基團(tuán)包括但不限于卣化物、疊氮化物、磺酸酯(例如烴基磺?；?、芳基磺?；?、氧錯離子、烴基高氯酸酯、銨烷磺酸酯、烴基氟代磺酸酯和氟代化合物(例如三氟甲磺酸酯、nonaflate、甲苯磺酸醋)等。適合于特定的一套反應(yīng)條件的這些與其他離去基團(tuán)的選擇在本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力范圍內(nèi)(例如參見March J， Advanced Organic Chemistry, 2nd EditionJohn Wiley and Sons, 1992; Sandler SR, Karo W， Organic FunctionalGroup Preparations, 2nd Edition, Academic Press, Inc., 1983; WadeLG， Compendium of Organic Synthetic Methods, John Wiley andSons, 1980)。
在示范性實(shí)施方式中，Ri是酯部分，例如C02CH3。在進(jìn)一步的示范性實(shí)施方式中，112是低級烷基，它可以是取代或未取代的。目前優(yōu)選的低級烴基是CH3。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，Ri是C02CH3， R2是CHb。
在另一種示范性實(shí)施方式中，！^和RS是獨(dú)立地選自H、離素、NH2、 0(CH2)2N(Me)2和N02的成員。114和R5優(yōu)選地不是H或OCH3。
在另一種示范性實(shí)施方式中，本發(fā)明提供具有式V和VI結(jié)構(gòu)的化合物
上式中，X優(yōu)選地是O; Z優(yōu)選地是O。
根據(jù)式I的化合物還可以包括肽基連接基團(tuán)作為取代基。連接基團(tuán)可以位于化合物上任意所需位置。在示范性實(shí)施方式中，至少一個R4、 R5、 R11、 R12、 R13、 R"和R"具有根據(jù)式VII的結(jié)構(gòu):
在下面的討論中，根據(jù)式VII的連接基團(tuán)是如R"所例證的。集中討論僅僅為了清楚起見，將為本領(lǐng)域技術(shù)人員所顯而易見的是，連接基獨(dú)可以在本發(fā)明化合物的任意位置。
式VII中，符號XS代表保護(hù)或未保護(hù)的反應(yīng)性官能團(tuán)、可檢測的
53標(biāo)記或定向劑?；鶊F(tuán)1^和l/是連接基團(tuán)，選自取代或未取代的烴基
和取代或未取代的雜烴基。示范性連接基團(tuán)1/和L2包含聚(乙二醇)部分。連接基團(tuán)可以存在也可以不存在，因而，q和v是獨(dú)立地選自0和1的整數(shù)。符號AA1、 A^和AAb"代表天然和非天然的a-氨基酸。AAi與AAb之間的虛線表示任意數(shù)量的氨基酸可以位于兩個所引用的氨基酸之間。在示范性實(shí)施方式中，括號內(nèi)的氨基酸總數(shù)("b")從約0至約20。在進(jìn)一步的示范性實(shí)施方式中，"b"是從約1至約5的整數(shù)。根據(jù)式VII的示范性連接基團(tuán)如式VIII所述
其中符號R"和R^獨(dú)立地代表取代或未取代的烴基、取代或未取代的雜烴基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜芳基、取代或未取代的雜環(huán)烴基、可檢測的標(biāo)記和定向劑?；鶊F(tuán)R"和R"獨(dú)立地選自H、取代或未取代的低級烴基、氨基酸側(cè)鏈、可檢測的標(biāo)記和定向劑。該結(jié)構(gòu)中由AA1、 AAb和AAb^代表的氨基酸部分基本上類似于式VII。
在另一種實(shí)施方式中，根據(jù)式I的化合物包括具有式IX結(jié)構(gòu)的連接基團(tuán)
其中符號X"代表保護(hù)或未保護(hù)的反應(yīng)性官能團(tuán)、可檢測的標(biāo)記或定向劑。符號1^和1/代表這樣的連接基團(tuán)，它們是取代或未取代的烴基或取代或未取代的雜烴基。連接基團(tuán)的氨基酸部分基本上類似于式VII所逸。.示范性連接基團(tuán)在其框架內(nèi)包括聚(乙二醇)類似物，每個連接基團(tuán)可以存在也可以不存在，因而，p和t是獨(dú)立地選自0和l的整數(shù)。
根據(jù)式IX的連接基團(tuán)可以取代在根據(jù)式I的分子的任意部位。在示范性實(shí)施方式中，根據(jù)式IX的連接基團(tuán)是選自R4、 R5、 R11、 R12、R13、 R"和R"的成員。本領(lǐng)域技術(shù)人員將領(lǐng)會到，連接基團(tuán)還可以是一個或多個R"或R"的組分，或者在式I化合物的高級同系物中的相
似位置。
根據(jù)式IX的示范性連接基團(tuán)如式X所述
式X中，R"和R"是獨(dú)立地選自H、取代或未取代的低級烴基、氨基酸側(cè)鏈、可檢測的標(biāo)記和定向劑的成員。符號"s"代表一個整數(shù)，整數(shù)的選擇可以提供任意所需長度的連接基團(tuán)。目前優(yōu)選的是這樣的連接基團(tuán)，其中"s，，是0至6的整數(shù)，更優(yōu)選在1與5之間。
在另一種示范性實(shí)施方式中，本發(fā)明提供根據(jù)式I的分子，它被一個或多個連接基團(tuán)取代，連接基團(tuán)在它們的結(jié)構(gòu)中包括可裂解的二辟u化物部分，例如式XI所述
x4—(l3)p—s—S"(l4)「nr1^^
其中x"是選自被保護(hù)的反應(yīng)性官能團(tuán)、未保護(hù)的反應(yīng)性官能團(tuán)、
可檢測的標(biāo)記和定向劑的成員。！7是連接基團(tuán)，選自取代或未取代的
烴基、取代或未取代的雜烴基、取代或未取代的芳基、取代或未取代
的雜芳基、取代或未取代的環(huán)烴基。！/是連接基團(tuán)，選自取代或未取代的烴基、取代或未取代的雜烴基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜芳基、取代或未取代的環(huán)烴基。符號p和t代表獨(dú)立地選自0和1的整數(shù)。
在根據(jù)式XI的示范性實(shí)施方式中，連接基團(tuán) 〃是取代或未取代的亞乙基部分。
基團(tuán)X4是選自R29、 COOR29、 C(O)NR29和C(O)NNR29的成員，其中R29是選自取代或未取代的烴基、取代或未取代的雜烴基和取代或未取代的雜芳基的成員。
在另一種示范性實(shí)施方式中，R29是選自H; OH; NHNH2;<formula>formula see original document page 56</formula>
的成員，其中R30代表終止于反應(yīng)性官能團(tuán)的取代或未取代的烴基、終止于官能團(tuán)的取代或未取代的雜芳基和-(L X4，其中每個L3、
X"和p是獨(dú)立地加以選擇的。
多價的本發(fā)明化合物也屬于本發(fā)明的范圍，例如包括本發(fā)明化合物或其反應(yīng)性類似物的二聚物、三聚物、四聚物和高級同系物。多價物可以從單一或一個以上本發(fā)明化合物裝配而成。例如，二聚構(gòu)成物可以是^二聚的"或"雜二聚的"。而且，其中本發(fā)明化合物或其反應(yīng)性類似物與低聚或聚合框架(例如聚賴氨酸、葡聚糖、羥乙基淀粉等)連接的多價構(gòu)成物也在本發(fā)明的范圍內(nèi)?？蚣軆?yōu)選地是多官能性的(例如具有用于連接本發(fā)明化合物的一組反應(yīng)性部位)。而且，框架可以是利用單一或一個以上本發(fā)明化合物衍生的。
而且，本發(fā)明包括這樣的化合物，它們被官能化后，所得化合物的水溶性相對于沒有被類似官能化的相似化合物增強(qiáng)了。因而，本文所述的任意取代基都可以被水溶性更強(qiáng)的相似原子團(tuán)代替。例如，在本發(fā)明范圍內(nèi)的是，用二醇代替羥基，或者用季胺、羥胺或水溶性更高的相似部分代替胺。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，對本文所述化合物離子通道而言不是活性必需的部位用增強(qiáng)母體化合物水溶性的部分取代，賦予額外的水溶性。增強(qiáng)有機(jī)化合物水溶性的方法是本領(lǐng)域已知的，這類方法包括但不限于將有機(jī)核用永久帶電的部分官能化，例如季銨，
或者用在生理學(xué)有關(guān)的pH下帶電的基團(tuán)官能化，例如羧酸、胺。其他方法包括向有機(jī)核附加含有羥基或胺的基團(tuán)，例如醇、多元醇、聚醚等。代表性實(shí)例包括但不限于聚賴氨酸、聚環(huán)乙亞胺、聚(乙二醇)和聚(丙二醇)。適合于這些化合物的官能化化學(xué)和策略是本領(lǐng)域已知
的。例如參見Dunn, R. L,等，Eds. Polymeric Drugs and Drug Delivery
Systems, ACS Symposium Series Vol. 469， American Chemical Society,Washington, D.C. 1991。
本發(fā)明的示范性細(xì)胞毒素如圖2所述。前體藥物和可裂解的連接基團(tuán)
除了在上節(jié)中詳細(xì)例證的與本發(fā)明細(xì)胞毒素連接的連接基團(tuán)以外，本發(fā)明還提供適合于連接本質(zhì)上任意分子的可裂解連接基團(tuán)臂。本發(fā)明的連接基團(tuán)臂方面在本文中參照它們與治療性部分的連接加以例證。不過，將為本領(lǐng)域技術(shù)人員容易顯而易見的是，連接基團(tuán)可以與不同的種類連接，包括但不限于診斷劑、分析劑、生物分子、定向劑、可檢測的標(biāo)記等。
本發(fā)明在一方面涉及可用于連接定向基團(tuán)與治療劑和標(biāo)記物的連接基團(tuán)。本發(fā)明在另一方面提供這樣的連接基團(tuán)，它們賦予化合物以穩(wěn)定性，減少它們的體內(nèi)毒性，或者有利地影響它們的藥動學(xué)、生物利用度和/或藥效學(xué)。 一般優(yōu)選的是在這類實(shí)施方式中， 一旦藥物被釋放至它的作用部位，連接基團(tuán)即被裂解，釋放活性藥物。因而，在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，本發(fā)明的連接基團(tuán)是無痕跡的，以便一旦從治療劑或標(biāo)記物上除去(例如在活化期間)，不再存在連接基團(tuán)的痕跡。
在本發(fā)明的另一種實(shí)施方式中，連接基團(tuán)是以它們在靶細(xì)胞內(nèi)或附近的部位被裂解的能力為特征的，例如治療作用或標(biāo)記物活性的部位。這類裂解作用優(yōu)選地實(shí)際上是酶的作用。這種特性有助于減少治療劑或標(biāo)記物的全身活化作用，減少毒性和全身副作用。
連接基團(tuán)還起到穩(wěn)定化治療劑或標(biāo)記物的作用，抵抗處于循環(huán)中的降解作用。這種特性提供顯著的益處，因?yàn)檫@類穩(wěn)定作用延長所連
57接的藥物或標(biāo)記物的循環(huán)半衰期。連接基團(tuán)還起到減弱所連接的藥物或標(biāo)記物活性的作用，以便綴合物處于循環(huán)中是相對良性的，并且在所需作用部位活化后具有所需的效果，例如是毒性的。關(guān)于治療劑綴合物，連接基團(tuán)的這種特性起到提高藥物治療指數(shù)的作用。
穩(wěn)定基團(tuán)優(yōu)選地是這樣選擇的，以限制治療劑或標(biāo)記物被可能存在于血液或非把組織中的酶所廓清和代謝，并且進(jìn)一步是這樣選擇的，以限制藥物或標(biāo)記物轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入細(xì)胞。穩(wěn)定基團(tuán)起到阻滯藥物或標(biāo)記物降解的作用，還可以提供藥物或標(biāo)記物的其他物理特征。穩(wěn)定基團(tuán)還可以提高藥物或標(biāo)記物在貯存期間的穩(wěn)定性，無論是經(jīng)過配制的形式還是未經(jīng)過配制的形式。
理想的是，如果穩(wěn)定基團(tuán)起到防護(hù)藥物或標(biāo)記物降解的作用，那
么當(dāng)藥物或標(biāo)記物在37°C人血液中貯存2小時后，導(dǎo)致少于20%、優(yōu)選少于2%的藥物或標(biāo)記物在給定測定條件下被存在于人血液中的酶裂解，說明它可用于穩(wěn)定治療劑或標(biāo)記物。
本發(fā)明還涉及含有這些連接基團(tuán)的綴合物。更確切地，本發(fā)明涉及可以用于治療疾病、尤其是癌癥化療法的前體藥物。具體而言，本文所述連接基團(tuán)的使用為前體藥物提供相對于相似結(jié)構(gòu)的前體藥物而言更高的作用特異性、減少的毒性和提高的血液穩(wěn)定性。
因而，所提供的連接基團(tuán)可以含有任意各種基團(tuán)作為其鏈的一部分，它們將在體內(nèi)裂解，例如在血流中，速率高于缺少這類基團(tuán)的構(gòu)成物。還提供了連接基團(tuán)臂與治療和診斷劑的綴合物。連接基團(tuán)可用于生成治療劑的前體藥物類似物，可逆地連接治療或診斷劑與定向劑、可檢測的標(biāo)記或固體載體。連接基團(tuán)可以結(jié)合成包括本發(fā)明細(xì)胞毒素的配合物。
在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供連接基團(tuán)具有式II所述通式的連
接基團(tuán):上式中，符號E代表酶可裂解部分(例如肽、酯等)。符號R、R1、 R"和Rm代表例如包括H、取代或未取代的烴基、取代或未取代的雜烴基、聚(乙二醇)、?；⒍ㄏ騽?、可檢測的標(biāo)記的成員。在示范性實(shí)施方式中，羧基部分的氧連接可檢測的標(biāo)記、治療性部分或固體載體。羰基部分可以進(jìn)一步與氧、硫、氮或碳連接在該片段被截斷的位置。在進(jìn)一步的示范性實(shí)施方式中，羰基部分是尿烷的組分。與羰基部分連接的氧連接定向劑、細(xì)胞毒素、固體載體等。
肽類連接基團(tuán)
在示范性實(shí)施方式中，酶可裂解的基團(tuán)是氨基酸或終止于在其羧基末端與連接基團(tuán)其佘部分連接的氨基酸的肽序列。目前優(yōu)選的氨基酸或肽是被腫瘤激活的那些。被腫瘤激活的肽是酶可裂解的基團(tuán)，在胂瘤部位被特異性裂解?？梢圆捎门c所選擇的腫瘤有關(guān)的特異性肽，它們被特異性酶所激活；大量這樣的肽是本領(lǐng)域已知的。用在連接基團(tuán)中的氨基酸可以是天然的或非天然的氨基酸。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，序列中至少一個氨基酸是天然氨基酸。結(jié)合有氨基酸部分的連接基團(tuán)的示范性制備如流程1所述，詳細(xì)描述Combrestatin與本發(fā)明連接基團(tuán)的綴合作用。
流程1
流程l中，EDCI介導(dǎo)的伯胺與.t，Boc保護(hù)的亮氨酸的脫水偶聯(lián)作用得到被保護(hù)的亮氨酸-胺綴合物。使綴合物與被對硝基笨基碳酸酯激
59活的Combrestatin偶聯(lián)，再用三氟乙酸裂解t-Boc基團(tuán)使產(chǎn)物去保護(hù)。在另一種示范性實(shí)施方式中，連接基團(tuán)是如式XII所述的氨基甲酸環(huán)狀氨基酯。
R R" O
E
R, R"' (XII)
上式中的原子團(tuán)基本上與線性連接基團(tuán)所述那些相同。R、 R，、 R"和R"，中的兩個與它們所連接的原子一起構(gòu)成取代或未取代的環(huán)烴基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜芳基或取代或未取代的雜環(huán)烴基部分。
本發(fā)明氨基甲酸環(huán)狀氨基酯的示范性合成途徑如流程2所述。
流程2
流程2中，利用EDCI使對甲氧基節(jié)基保護(hù)的苯基二胺在未保護(hù)的苯胺氮上與t-Boc保護(hù)的亮氨酸偶聯(lián)。經(jīng)由DDQ的作用除去對甲氧基節(jié)基，再利用被對硝基苯基碳酸酯激活沐Combrestatin使連接基團(tuán)臂與Combrestatin偶聯(lián)。用TFA除去t-Boc基團(tuán)，得到Combrestatin-連接基團(tuán)配合物。
在另一種實(shí)施方式中，提供了如下式XIII所述的氨基甲酸氨基酯
苯甲醇連接基團(tuán)。
<formula>formula see original document page 61</formula>
(xm)
上述結(jié)構(gòu)中的原子團(tuán)基本上類似于上述那些。R，，，，代表上文討論過的芳基部分的任意取代基。當(dāng)存在一個以上R，"，基團(tuán)時，每個R，"，基團(tuán)是獨(dú)立地加以選擇的，z是0至5的整數(shù)。
本發(fā)明的氨基甲酸氨基酯笨甲醇連接基團(tuán)的示范性合成如流程3所述。
TBSO'
Br Q-OH
TBSO'
'OQ
Q=治療或診斷劑
(1) 對硝基笨基氯甲酸酯
(2) TBAF
(3> Boc-UuNH(CH2)2NH￡lEl3N
BocLeuNH(CH2)2NEtC(0)0
流程3
流程3中，使具有活化千型位置的叔丁基二甲基甲硅烷基O-保護(hù)的苯酚與治療或診斷劑偶聯(lián)。將綴合物用氟化四丁銨處理，除去叔丁基二甲基甲硅烷基保護(hù)基團(tuán)。將游離OH基團(tuán)用對硝基苯基氯甲酸酯轉(zhuǎn)化為活性碳酸酯。活化的碳酸酯中間體用于偶聯(lián)被保護(hù)的BocLeuNH(CH2)2NHEt與OH基團(tuán)，生成連接基團(tuán)-藥物綴合物。
肽連接基團(tuán)-duocarmyciii綴合物
CC-1065和duocarmycins已知是極為有力.的抗胂瘤細(xì)胞毒素，它們在治療劑量下表現(xiàn)不可取的毒性。通過連接被胂瘤激活的肽與該細(xì)
61胞毒素，減少了全身毒性，增加了治療指數(shù)。因而，本發(fā)明還提供
duocarmycins的前體藥物綴合物以及duocarmycin與定向劑或其他式I試劑之間的綴合物。
本發(fā)明綴合物的示范性合成流程如流程4所述。在所附加的實(shí)施例中提供了另外的合成途徑。
a: 對硝基苯基氯甲酸酯；b: P-Ala(FMOC)-Leu-Ala-Leu-NH(CH2)2NHEt; c:派啶流程4
流程4中，將細(xì)胞毒素用對-硝基笨基氯甲酸酯轉(zhuǎn)化為活性碳酸酯，再使活化的衍生物與FMOC-保護(hù)的被胂瘤激活的肽接觸，生成綴合物.將綴合物用哌咬處理，除去FMOC基團(tuán)，得到所需化合物。
很多被血清、肝、腸等中的酶裂解的肽序列是本領(lǐng)域已知的。本發(fā)明的示范性肽序列包括被蛋白酶裂解的肽序列。下列關(guān)于蛋白酶-敏感性序列的使用的集中討論僅供清楚地闡述，不起到限制本發(fā)明范圍的作用。
當(dāng)裂解肽的酶是一種蛋白酶時，連接基團(tuán)一般包括含有該蛋白酶的裂解識別序列的肽。蛋白酶的裂解識別序列是在蛋白裂解期間被蛋白酶識別的特異性氨基酸序列。很多蛋白酶裂解部位是本領(lǐng)域已知的，這些和其他裂解部位可以包括在連接基團(tuán)部分中。例如參見Matayoshi等，Science 247: 954 (1990); Dunn等，Meth. Enzymol. 241: 254 (1994);Seidah等，Meth. Enzymol. 244: 175 (1994); Thornberry, Meth.Enzymol. 244: 615 (1994); Weber等，Meth. Enzymol. 595 (1994);Smith等，Meth. Enzymol. 244: 412 (1994); Bouvier等，Meth. Enzymol.
62248: 614 (1995), Hardy等,Amyloid Protein Precursor in Development,Aging, and Alzheimer，s Disease, ed. Masters等，pp. 190-198 (1994)。
蛋白酶已經(jīng)參與癌癥轉(zhuǎn)移。在很多癌癥中，蛋白酶尿激酶的合成增加與轉(zhuǎn)移能力增加有相互關(guān)系。尿激酶激活纖溶酶原變?yōu)槔w溶酶，
前者普遍位于細(xì)胞外的空間，它的活化作用可以導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)中的蛋白質(zhì)的降解作用，轉(zhuǎn)移中的腫瘤細(xì)胞正是通過這種作用侵襲的。纖溶酶還可以激活膠原酶，從而促進(jìn)圍繞毛細(xì)管和淋巴系統(tǒng)的基膜中膠原的降解作用，由此允許胂瘤細(xì)胞侵襲扭組織(Dano等，Adv. CancerRes.， 44: 139 (1985))。因而，屬于本發(fā)明范圍的是采用被尿激酶裂解的肽序列作為連接基團(tuán)。
本發(fā)明還提供對類胰蛋白酶裂解敏感的肽序列的用途。人肥大細(xì)胞表達(dá)至少四種不同的類胰蛋白酶，稱為api、 PII和(3IIL這些酶不受血漿蛋白酶抑制劑的控制，并且體外僅裂解少數(shù)生理學(xué)底物。絲氨酸蛋白酶的類胰蛋白酶家族已經(jīng)參與各種牽涉肥大細(xì)胞的變應(yīng)性和炎性疾病，因?yàn)樵诨加羞@些障礙的患者生物體液中發(fā)現(xiàn)類胰蛋白酶水平升高。不過，類胰蛋白酶在疾病病理生理學(xué)中的確切角色仍然有待描繪。類胰蛋白酶的生物學(xué)功能和對應(yīng)生理學(xué)后果的范圍基本上是由它們的底物特異性所定義的。
類胰蛋白酶是前尿激酶纖溶酶原激活物(uPA)的有力激活物，即與腫瘤轉(zhuǎn)移和侵襲有關(guān)的蛋白酶的酶原形式。纖溶酶原級聯(lián)的活化作用導(dǎo)致用于細(xì)胞外滲和移行的細(xì)胞外基質(zhì)的破壞，這種活化作用可能是前尿激酶纖溶酶原激活物在P4-P1序列Pro-Arg-Phe-Lys的類胰蛋白酶活化作用的函數(shù)(Stack，等，Journal of Biological Chemistry 269(13):9416-9419(1994))。作用于血管的腸肽、即神經(jīng)肽參與血管透過性的調(diào)節(jié)，也被類胰蛋白酶裂解，主要在Thr-Arg-Leu-Arg序列(Tam,等，Am.J. Respir. Cell Mol. Biol. 3: 27-32 (1990)).與G蛋白偶聯(lián)的受體PAR國2能夠在Ser-Lys-Gly-Arg序列被類胰蛋白酶裂解和激活，驅(qū)動成纖維細(xì)胞.的增殖，而被凝血酶激活的受體PAR-1在Pro-Asin4sp-Lys序列被類胰蛋白酶滅活(Molino等，Journal of Biological Chemistry 272(7):4043-4049(1997))。總之，該證據(jù)提示了類胰蛋白酶在作為疾病后果的組織改型中的中心角色。這與在若干肥大細(xì)胞介導(dǎo)的障礙中所觀察到的深刻變化是一致的。慢性氣喘和其他長期呼吸疾病的一種證明是纖維變性和病變組織增厚，這可能是類胰蛋白酶對其生理靶的活化作用的結(jié)果。類似地， 一系列報道已經(jīng)顯示，在各種癌癥中，血管生成與肥大細(xì)胞密度、類胰蛋白酶活性和預(yù)后不良有關(guān)(Coussens等，Genesand Development 13(11): 1382-97 (1999)); Takanami等，Cancer 88(12):2686-92 (2000); Toth畫Jakatics等，Human Pathology 31(8): 955-960(2000); Ribatti等,International Journal of Cancer 85(2): 171-5(2000))。
用于評價特定的蛋白酶是否裂解所選擇的肽序列的方法是本領(lǐng)域已知的。例如，7-氨基-4-甲基香豆素(AMC)熒光肽底物的使用是關(guān)于蛋白酶特異性測定的成熟方法(Zimmerman， M.等，(1977) AnalyticalBiochemistry 78: 47-51)。 N-酰苯胺鍵的特異性裂解釋放熒光AMC離去基團(tuán)，允許簡單地測定單個底物的裂解速率。最近，通過在單一的實(shí)驗(yàn)中取廣泛的樣本，已經(jīng)采用一組AMC肽底物文庫(Lee， D.，等，(1999) Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters 9: 1667-72)和位置掃描文庫(Rano， T. A.，等，(1997) Chemistry and Biology 4: 149-55)來快速描繪蛋白酶的N-末端特異性。因而，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以容易評價一組肽序列，以確定它們在本發(fā)明中的實(shí)用性，無需訴諸過多的實(shí)驗(yàn)方法。
二硫化物連接基團(tuán)
本發(fā)明在進(jìn)一步的方面提供基于二疏化物部分的可裂解的連接基團(tuán)臂。因而，提供了具有式III結(jié)構(gòu)的化合物
由符號R、 R1、 R"、 Rm、 RIV、 RV和RW代表的原子團(tuán)是如上R、
64R1、 R"和Rm所述的。
在另一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供二疏化物氨基甲酸酯連接基團(tuán)，例如式XIV所述
R' R"' (XIV)
由符號R、 R1、 R11、 Rm、 RIV、 Rv和Rw代表的原子團(tuán)是如上所述的。
正如上面所討論的，本發(fā)明的連接基團(tuán)可以用于生成綴合物，其中包含細(xì)胞毒素作為治療劑，例如combretastatin或duocarmyein。duocarmycins在血漿中是不穩(wěn)定的。本發(fā)明的連接基團(tuán)發(fā)現(xiàn)在穩(wěn)定處于循環(huán)中的duocarmycin上具有特別的實(shí)用性， 一旦到達(dá)所需作用部位即釋放藥物(活化作用)。另外，為了在活化作用后再次獲得combretastatin或duocarmycin的最大、活寸生，連接基團(tuán)和定向基團(tuán)優(yōu)選地都被除去。因此，在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，連接基團(tuán)是無痕跡的連接基團(tuán)。包含細(xì)胞毒素、例如duocarmycin作為治療劑的綴合物也是特別令人感興趣的。本發(fā)明的連接基團(tuán)起到穩(wěn)定處于循環(huán)中的duocarmycin和在耙細(xì)胞內(nèi)或附近、在活化作用后釋放最佳有力的細(xì)胞毒素的作用。由于細(xì)胞毒素是在靶細(xì)胞內(nèi)或附近被裂解的，減少了由隨機(jī)活化作用引起的全身毒性。進(jìn)而，循環(huán)穩(wěn)定性的增加也增加了細(xì)胞毒素的半衰期和總體有效性。
用于制備本發(fā)明的二硫化物連接基團(tuán)臂-細(xì)胞毒素綴合物的示范性途徑如流程5所述。
65流程5
流程5中，使胺-保護(hù)的巰基a與2,2，-二吡啶基二硫化物b反應(yīng)， 生成胺-保護(hù)的、活化的二硫化物c。使活化的二硫化物與攜帶游離巰 基d的羧酸酯接觸，消去吡啶基硫醇，生成胺-保護(hù)的羧酸酯，其中包 括二疏化物部分e。甲基酯被LiOH的作用裂解，生成對應(yīng)的羧酸f。 通過EDCI的作用，使羧酸與雜二官能的PEG分子偶聯(lián)，后者包括馬 來酰亞胺基團(tuán)和胺，生成化合物g。使PEG衍生物與Combrestatin 的活性碳酸酯h接觸，生成綴合物i。如果需要的話，綴合物i可以通 過馬來酰亞胺部分連接定向劑、可檢測的標(biāo)記等。
在另一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供二硫化物氨基甲酸酷連接基團(tuán)， 其中該尿烷鍵的非羰基氧是從芳基衍生的。本發(fā)明的代表性連接基團(tuán) 如式XV所述(XV)
原子團(tuán)本質(zhì)上如上所述。RV"是如定義一節(jié)所述的芳基取代基。 符號w代表0至4的整數(shù)。當(dāng)存在一個以上RV"時，每個基團(tuán)都是獨(dú)
立地加以選擇的。
式XV化合物的示范性途徑如流程6所述°
流程6
流程6中，使TBS-醇保護(hù)的芐基溴衍生物與Q-OH在烷基化條件下反應(yīng)，生成b?；衔颾被氟化四丁銨的作用去保護(hù)，生成c，用d 酰化，生成碳酸酯e。使碳酸酯e與來自上述流程5的雜二官能的PEG 衍生物i反應(yīng)。所得PEG加合物f可以與另一種分子通過馬來酰亞胺 部分綴合。
二硫化物連接基團(tuán)-duocarmycin綴合物
正如上面所討論的，本發(fā)明的二硫化物連接基團(tuán)還是有用的組分， 可用于體內(nèi)穩(wěn)定治療或診斷部分、生成前體藥物和綴合藥物與定向劑 和可檢測的標(biāo)記。因而，本發(fā)明在另一方面提供duocarmycin與本發(fā) 明式I二硫化物連接基團(tuán)之間的綴合物。流程7提供本發(fā)明綴合物的 靈巧途徑。流程7
流程7中，將本發(fā)明的duocarmydn細(xì)胞毒素a用對硝基苯基氯 甲酸酯轉(zhuǎn)化為活化的碳酸酯b。使化合物b與來自流程5的雜二官能 的PEG連接基團(tuán)偶聯(lián)，生成化合物d，隨后可以與抗體通過馬來酰亞 胺-巰基偶聯(lián)反應(yīng)偶聯(lián)，生成綴合物e。
正如上面所討論的，某些毒性劑的治療功效被這樣的策略所戲劇 性地提高了，即選擇性釋放藥物至所需部位，和/或保持藥物的本質(zhì)上 無活性形式，直至它被釋放至所需作用部位。本發(fā)明還提供連接基團(tuán) 臂，它發(fā)揮作用的原理是使藥物定向至所選擇的部位，和/或使生物活 性藥物滅活，直至它到達(dá)所需部位。
因而，在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供上述細(xì)胞毒素以及其他藥 物與具有有效性質(zhì)的連接基團(tuán)臂的綴合物。在一種實(shí)施方式中，連接 基團(tuán)臂綴合治療或診斷部分與一種試劑，后者選擇性釋放前者至體內(nèi) 所需部位。該部分與定向劑之間的連接基團(tuán)可以是體內(nèi)穩(wěn)定的，或者 可以被裂解。如果該試劑被裂解，那么它優(yōu)選地主要在到達(dá)所需作用 部位之后被裂解。
在另一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供這樣的連接基團(tuán)，它不連接診 斷或治療部分與另一種試劑，但是在本質(zhì)上使該部分滅活，直至它到 達(dá)所需活性部位；活性種類在所需活性部位裂解連接基團(tuán)，優(yōu)選地恢 復(fù)該部分的活性形式。這種策略提供了減輕很多有毒又非常有用的藥 物的全身毒性的手段。
在與本發(fā)明的代表性duocarmycm類似物的綴合作用中，以本發(fā) 明的尿烷和二硫化物連接基團(tuán)為例。分別參見圖1和圖3。
定向劑
本發(fā)明的連接基團(tuán)臂和細(xì)胞毒素可以與定向劑連接，后者選擇性 釋放負(fù)載至細(xì)胞、器官或機(jī)體區(qū)域。示范性定向劑例如抗體(例如嵌 合的、人化的和人抗體)、受體的配體、凝集素、糖、抗體等，是本領(lǐng)
69域所公認(rèn)的，沒有限制地可用于實(shí)施本發(fā)明。其他定向劑包括一類化 合物，它們不包括特異性分子識別基序，包括大分子，例如聚(乙二醇)、 多糖、聚氨基酸等，它們增加細(xì)胞毒素的分子質(zhì)量。額外的分子質(zhì)量 影響細(xì)胞毒素的藥動學(xué)，例如血清半衰期。
在示范性實(shí)施方式中，本發(fā)明提供細(xì)胞毒素、連接基團(tuán)或細(xì)胞毒 素-連接基團(tuán)與定向劑的綴合物，定向劑是一種生物分子，例如抗體、 受體、肽、凝集素、糖、核酸或其組合。本發(fā)明的示范性綴合物途徑 如上流程所述
可用于實(shí)施本發(fā)明的生物分子可以是從任意來源衍生的。生物分 子可以是從天然來源分離的，或者可以利用合成方法制備。蛋白質(zhì)可 以是天然的蛋白質(zhì)或突變的蛋白質(zhì)。突變作用可以通過化學(xué)誘變、指 向位點(diǎn)的誘變或本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其他誘導(dǎo)突變的手段加以進(jìn) 行?？捎糜趯?shí)施本發(fā)明的蛋白質(zhì)例如包括酶、抗原、抗體和受體?？?體可以是多克隆的或單克隆的。肽和核酸可以是從天然來源分離的， 或者可以原本是完全或部分合成的。
在其中識別部分是蛋白質(zhì)或抗體的那些實(shí)施方式中，蛋白質(zhì)可以
通過蛋白質(zhì)表面上任意可利用的反應(yīng)性肽殘基與SAM組分或間隔基 團(tuán)臂連接。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，反應(yīng)性基團(tuán)是胺或羧酸酯。在特別 優(yōu)選的實(shí)施方式中，反應(yīng)性基團(tuán)是賴氨酸殘基的e-胺基。此外，這些 分子可以被非特異性相互作用(例如化學(xué)吸附、物理吸附)吸附在底 物或SAM的表面上。
抗體識別部分可以用于識別分析物，它們是蛋白質(zhì)、肽、核酸、 糖或小分子，例如藥物、除草劑、農(nóng)藥、工業(yè)化學(xué)品和彈藥。喚起抗 體對特異性分子活性的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的。參見1992年9 月15日頒給Feng等的美國專利No. 5/147,786; 1994年8月2日頒給 Stanker等的美國專利No. 5/334,528; 1997年11月11日頒給Al-Bayati， M.A.S.的美國專利No. 5/686,237和1996年11月12日頒給Hoess等 的美國專利No. 5/573,922。用于連接抗體與表面的方法也是本領(lǐng)域已 知的。參見Delamarche等,Langmuir 12: 1944-1946 (1996)。
70定向劑可以通過任意可利用的反應(yīng)性基團(tuán)連接本發(fā)明的連接基 團(tuán)。例如，通過胺、羧基、巰基或羥基可以連接肽。這樣一種基團(tuán)可 以位于肽鏈的末端或內(nèi)部位置。通過堿(例如環(huán)外胺)上的反應(yīng)性基
團(tuán)或糖部分上的可利用的羥基(例如3，-或5，-羥基)可以連接核酸。 肽和核酸鏈可以進(jìn)一步在一個或多個位置被衍生，以便在鏈上連接適 當(dāng)?shù)姆磻?yīng)性基團(tuán)。參見Chrisey等，Nucleic Acids Res. 24: 3031-3039 (1996)。
當(dāng)肽或核酸是完全或部分合成的分子時，可以在合成過程期間結(jié) 合反應(yīng)性基團(tuán)或被掩蔽的反應(yīng)性基團(tuán)。很多適合于在肽和核酸中結(jié)合 反應(yīng)性基團(tuán)的經(jīng)過衍生的單體都是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。例如參見 The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology, Vol. 2: "Special Methods in Peptide Synthesis", Gross, E. and Melenhofer， J.， Eds" Academic Press, New York (1980)。很多有用的單體是商業(yè)上可得到的(Bachem， Sigma， etc.)。這種被掩蔽的基團(tuán)然后可以在合成后去除掩蔽，此時它 可以與本發(fā)明化合物組分反應(yīng)。
在另一種示范性實(shí)施方式中，使定向基團(tuán)經(jīng)由包合配合物與本發(fā) 明化合物連接。例如，本發(fā)明的化合物或連接基團(tuán)可以包括這樣一種 部分，例如環(huán)糊精或改性環(huán)糊精。環(huán)糊精是由大量微生物產(chǎn)生的一類 環(huán)狀寡糖。環(huán)糊精具有籃樣形狀的環(huán)結(jié)構(gòu)。這種形狀允許環(huán)糊精在它 們的內(nèi)腔中包括^艮多種類的分子。例如參見SzejtH， J.， Cyclodextrins and Their Inclusion Complexes; Akademiai Klado， Budapest, 1982;和 Bender等，Cyclodextrin Chemistry, Springer-Verlag， Berlin, 1978。
環(huán)糊精能夠與一組有機(jī)分子生成包合配合物，例如包括藥物、農(nóng) 藥、除草劑和彈藥'參見Tenjarla等，J. Pharm. Sci. 87: 425-429 (1998); Zughul等，Pharm. Dev. Technol. 3: 43-53 (1998)和Albers等，Crit. Rev. Ther. Drug Carrier Syst. 12: 311-337 (1995)。重要的是，環(huán)糊精能夠 在它們的包合配合物中區(qū)別化合物的對映體。因而，在一種優(yōu)選的實(shí) 施方式中，本發(fā)明提供在對映體混合物中檢測特定的對映體。參見 Koppenhoefer等J. Chromatogr. A 793: 153-164 (1998)。大量用于連
71接環(huán)糊精與其他分子的途徑是本領(lǐng)域已知的。例如參見Yaiiiamoto等， J. Phys. Chem. B 101: 6855-6860 (1997);和Sreenivasan， K. J. Appl. Polym. Sci. 60: 2245-2249 (1996)。
本發(fā)明的細(xì)胞毒素-定向劑綴合物進(jìn)一步例如反義寡核苷酸-細(xì)胞 毒素綴合物。集中于細(xì)胞毒素-寡核苷酸綴合物僅僅為了闡述清楚，并 不限制能夠與本發(fā)明細(xì)胞毒素綴合的定向劑的范圍。
示范性核酸定向劑包括適體、反義化合物和構(gòu)成三螺旋的核酸。 通常，糖殘基的羥基、來自堿殘基的氨基或核苷酸的磷酸氧用作必要 的化學(xué)官能度，使核苷酸類定向劑與細(xì)胞毒素偶聯(lián)。不過，本領(lǐng)域技 術(shù)人員將容易領(lǐng)會到，其他,天然"反應(yīng)性官能度能夠利用常規(guī)工 藝附加于核酸上。例如，糖殘基的羥基可以利用本領(lǐng)域熟知的工藝轉(zhuǎn) 4匕為巰基或氨基。
適體(或核酸抗體)是結(jié)合特異性分子靶的單鏈或雙鏈DNA或單 鏈RNA分子。 一般而言，適體通過抑制分子耙——例如蛋白質(zhì)——的 作用、結(jié)合在血液中循環(huán)的靶集合而發(fā)揮作用。適體具有化學(xué)官能度， 因而能夠與細(xì)胞毒素共價鍵合，如本文所述。
盡管各種分子把能夠與適體生成非共價性而特殊的締合作用，包 括小分子藥物、代謝產(chǎn)物、輔因子、毒素、糖類藥物、核普酸類藥物、 糖蛋白等，不過一般而言分子靶將包含蛋白質(zhì)或肽，包括血清蛋白、 激肽、二十碳化合物、細(xì)胞表面分子等。適體的實(shí)例包括Gilead氏抗 凝血酶抑制劑GS 522及其衍生物(GUead Science, Foster City， Calif.)。 另見Macaya等Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 3745-9 (1993); Bock等, Nature (London) 355: 564-566 (1992)和Wang等，Biochem. 32: 1899-904 (1993),
對給定生物分子呈特異性的適體可以利用本領(lǐng)域已知的工藝鑒 別。例如參見Toole等，(1992) PCT公報No. WO 92/14843; Tuerk and Gold (1991) PCT公報No. WO 91/19813; Weintraub and Hutchinson (1992) PCT公報No. WO 92/05285和Ellington and Szostak， Nature 346:818(1990)。簡而言之，這些工藝通常牽涉分子靶與寡核苷酸隨機(jī)
7混合物的配合作用。適體-分子靶配合物是從未配合的寡核苷酸中分離 的。將適體從所分離的配合物中回收，擴(kuò)增。重復(fù)這種循環(huán)，以鑒別
對分子靶具有最高親合性的適體序列。
關(guān)于由基因的不適當(dāng)表達(dá)所引起的疾病，特異性防止或減少這類 基因的表達(dá)代表了理想的療法。原則上，特定基因產(chǎn)物的產(chǎn)生可以被 單鏈脫氧核苷酸或核糖脫氧核苷酸的雜交所抑制、減少或切斷，這些
核苷酸與mRNA中的可用序列或前-mRNA加工所必需的轉(zhuǎn)錄體內(nèi)的 序列是互補(bǔ)性的，或者與基因本身內(nèi)的序列是互補(bǔ)性的。這種遺傳控 制范例經(jīng)常稱為反義或反基因抑制。烷基化劑與核酸的綴合作用賦予 額外的功效，例如本發(fā)明的那些烷基化劑。
反義化合物是核酸，被設(shè)計(jì)用來結(jié)合mRNA，使mRNA失去能 力，或者防止mRNA的產(chǎn)生，該mRNA負(fù)責(zé)生成特定的蛋白質(zhì)。反 義化合物包括反義RNA或DNA，單鏈或雙鏈的，寡核苷酸或它們的 類似物，它們能夠與單個的mRNA特異性雜交，防止mRNA的轉(zhuǎn)錄 和/或RNA加工和/或所編碼的多肽的轉(zhuǎn)譯，由此減少各自所編碼的多 肽的數(shù)量(Ching等，Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 86: 10006-10010 (1989); Broder等，Ann. Int. Med. 113: 604-618 (1990); Loreau等， FEBS Letters 274: 53-56 (1990); Holcenberg等，WO 91/11535; WO 91/09865; WO 91/04753; WO 90/13641; WO 91/13080; WO 91/06629 和EP 386563)。由于它們的敏銳的耙敏感性和選擇性，反義寡核苷酸 可用于釋放治療劑至所需分子耙，例如本發(fā)明的細(xì)胞毒素。
其他人已經(jīng)報道，核酸能夠經(jīng)由三螺旋形成與雙螺旋DNA結(jié)合， 抑制轉(zhuǎn)錄和/或DNA合成。三螺旋化合物(也稱為三鏈藥物)是這樣 的寡核普酸，它們結(jié)合雙鏈DNA的序列，打算選擇性抑制致病基因的 轉(zhuǎn)錄，例如病毒基因，例如HIV和單純性皰滲病毒，和致癌基因，也 就是說它們終止細(xì)胞核上的蛋白質(zhì)產(chǎn)生，這些藥物直接結(jié)合細(xì)胞基因 組中的雙鏈DNA，形成三螺旋體，防止細(xì)胞制備靶蛋白。例如參見 PCT公報No. WO 92/10590、 WO 92/09705、 WO 91/0662$和美國專 利No. 5，176，996。因而，本發(fā)明的細(xì)胞毒素還與構(gòu)成三螺旋的核酸序列綴合。
核酸(例如反義化合物和三螺旋藥物)的位點(diǎn)特異性并不顯箸地 受磷酸二酯鍵的修飾或寡核苷酸末端的化學(xué)修飾的顯著影響。所以，
這些核酸能夠被化學(xué)修飾；增強(qiáng)總體的結(jié)合穩(wěn)定性，增加關(guān)于化學(xué)降 解的穩(wěn)定性，增加寡核苷酸轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入細(xì)胞的速率，賦予分子以化學(xué)反 應(yīng)性。構(gòu)建各種可用于反義療法的核酸的通用方法已經(jīng)總結(jié)在van der Krol等，Biotechniques 6: 958-976 (1988)和Stein等，Cancer Res. 48: 2659-2668 (1988)。因此，在示范性實(shí)施方式中，本發(fā)明的細(xì)胞毒素通 過磷酸二酯鍵的修飾作用與核酸綴合。
而且，攜帶本發(fā)明細(xì)胞毒素的適體、反義化合物和三螺旋藥物還 可以包括核苷酸的取代、加成、刪去或移位，只要保留與有關(guān)靶序列 的特異性雜交或締合作用作為寡核苷酸的功能性質(zhì)即可。例如，有些 實(shí)施方式將采用疏代磷酸酯類似物，它們比它們的天然存在的磷酸二 酯相應(yīng)物更加耐受核酶的降解作用，因而預(yù)期具有更高的體內(nèi)持續(xù)性 和更大的效力(例如參見Campbell等，J. Biochem. Biophys. Methods 20: 259-267(1990))。寡核苷酸的氨基磷酸酯衍生物也已知結(jié)合互補(bǔ)性 多核苷酸，具有另外容納共價連接的配體的能力，將適用于本發(fā)明的 方法。例如參見Froehler等，Nucleic Acids Res. 16(11): 4831 (1988)。
在有些實(shí)施方式中，適體、反義化合物和三螺旋藥物將包含O-甲基核糖核苷酸(EP公報No. 360609)。還可以使用嵌合的寡核苷酸 (Dagle等，Nucleic Acids Res. 18: 4751 (1990)).關(guān)于有些應(yīng)用，反義寡 核苷酸和三螺旋可以包含聚酰胺核酸(Nielsen等，Science 254: 1497 (1991)和PCT公報No. WO 90/15065)或其他陽離子衍生物(Letsinger 等，J. Am. Chem. Soc. 110: 4470-4471 (1988)),其他應(yīng)用可以利用這樣 的寡核苷酸，其中一個或多個磷酸二酯鍵已經(jīng)被等排基團(tuán)取代，例如 2-4個原子長的核普酸間鍵，如PCT公報No. WO 92/05186和 91/06556所迷，或者被甲縮醛基團(tuán)(Matteucci等，J. Am. Chem. Soc. 113: 7767-7768 (1991))或酰胺基團(tuán)(Nielsen等，Science 254: 1497-1500 (1991))取代。另外，本發(fā)明可以采用核苷酸類似物，例如其中糖或堿是被化學(xué) 修飾的。嘌呤和嘧啶的嚷似物"形式是本領(lǐng)域公知的那些，它們很
多用作化療劑。示范性而非詳盡的列表包括4-乙酰胞嘧啶、5-(羧基羥 甲基)尿嘧啶、5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-羧基甲氨基甲基-2-硫尿嘧 啶、5-羧基甲氨基甲基尿嘧啶、二氫尿嘧啶、肌苷、N、異戊烯基腺噤 呤、1-甲基腺嘌呤、1-甲基假尿嘧啶、1-甲基鳥嘌呤、l-甲基肌苷、2，2-二甲基鳥噤呤、2-甲基腺噤呤、2-甲基鳥噤呤、3-甲基胞嘧啶、5-甲基 胞嘧啶、N、甲基腺嘌呤、7-甲基鳥嘌呤、5-甲氨基甲基尿嘧啶、5-甲 氧氨基甲基-2-硫尿嘧啶、P-D-甘露糖基 queosine、 5'-甲氧羰基甲基尿 嘧啶、5-甲氧基尿嘧啶、2-甲硫基-N、異戊烯基腺嘌呤、尿嘧啶-5-氧基 乙酸甲酯、尿嘧啶-5畫氧基乙酸(v)、 wybutoxosine、假尿嘧啶、queosine、 2-疏代胞嘧啶、5-甲基-2-硫尿嘧啶、2-硫尿嘧啶、4-硫尿嘧啶、5-甲基 尿嘧啶、N-尿嘧啶-5-氧基乙酸甲酯、尿嘧啶-5-氧基乙酸(v)、假尿嘧啶、 queosine、 2-硫代胞嘧啶和2，6-二氨基噤呤。另外，常規(guī)的堿例如卣代 的堿。此外，堿上的2，-呋喃糖位置可以被不帶電的大體積基團(tuán)取代。 不帶電的大體積基團(tuán)的實(shí)例包括支鏈烴基、糖和支鏈糖。
末端修飾也提供有用的工藝，可用于綴合細(xì)胞毒素與核酸，修改 寡核苷酸藥物的細(xì)胞類型特異性、藥動學(xué)、核透過性和絕對細(xì)胞攝取 速率.例如，為包括反應(yīng)性基團(tuán)而在5，和3，末端取代是已知的，這樣 允許共價連接細(xì)胞毒素。例如參見Oligodeoxynucleotides: Antisense Inhibitors of Gene Expression, (1989) Cohen, Ed.， CRC Press; Prospects for Antisense Nucleic Acid Therapeutics for Cancer and AIDS, (1991)， Wickstrom, Ed.， Wiley-Liss; Gene Regulation: Biology of Antisense RNA and DNA， (1992)， Erickson and Izant， Eds" Raven Press和Antisense RNA and DNA, (1992)， Murray, Ed.， Wiley-Liss,關(guān) 于涉及反義化合物的通用方法，參見Antisense RNA and DNA， (1988)， D. A. Melton, Ed.， Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y.。
定向劑一般是經(jīng)由共價鍵與細(xì)胞毒素偶聯(lián)的。共價鍵可以是不可逆的、部分可逆的或完全可逆的?？赡嫘缘某潭认喈?dāng)于定向劑-細(xì)胞毒 素配合物對體內(nèi)降解作用的敏感性。
在優(yōu)選的實(shí)施方式中，該鍵是可逆的(例如容易裂解的)或部分 可逆的(例如部分或緩慢裂解的)。鍵的裂解可以通過生物或生理過程 發(fā)生。生理/生物過程裂解配合物內(nèi)任意所選擇的位置上的鍵(例如除 去與不同敏感性化學(xué)官能度偶聯(lián)的酯基或其他保護(hù)基團(tuán))，在此之后或
之前裂解細(xì)胞毒素與連接基團(tuán)之間的鍵，得到部分降解的配合物。還 可以發(fā)生其他裂解作用，例如在連接基團(tuán)與定向劑之間。
關(guān)于配合物在給藥后的快速降解， 一般依賴于循環(huán)在血漿中的酶
(例如酰胺酶、還原酶)裂解藥物上的dendrimer。這些酶可以包括 非特異性氨基肽酶與酯酶、二肽基羧基肽酶、凝血級聯(lián)的蛋白酶等。
或者，裂解是通過非酶過程進(jìn)行的。例如，配合物在釋放后所經(jīng) 歷的pH差異可以引發(fā)化學(xué)水解。在這樣一種情況下，配合物可以是 以生理pH 7.4下的高度化學(xué)不穩(wěn)定性為特征的，同時在釋放載體中的 酸性或堿性pH下表現(xiàn)更高的穩(wěn)定性。在這樣一種過程中裂解的示范 性配合物是在其框架內(nèi)結(jié)合有N-曼尼希堿鍵的配合物。
在大多數(shù)情況下，配合物的裂解將發(fā)生在給藥期間或之后不久。 不過，在其他實(shí)施方式中，直到配合物到達(dá)藥物的作用部位才發(fā)生裂
細(xì)胞毒素-定向劑配合物對降解作用的敏感性可以通過配合物向 未鍵合的藥物的水解轉(zhuǎn)化或酶轉(zhuǎn)化作用研究加以確定。 一般而言，利 用這種方法發(fā)現(xiàn)在體外與體內(nèi)活性之間存在良好的相互關(guān)系。例如參 見Phipps等，J. Pharm. Sciences 78: 365 (1989)。轉(zhuǎn)化速率是容易測定 的，例如通過分光光度法或氣相-液相或高效液相色譜法.然后可以利 用標(biāo)準(zhǔn)工藝計(jì)算半衰期和其他動力學(xué)參數(shù)。例如參見Lowry等， Mechanism and Theory in Organic Chemistry, 2nd Ed.， Harper & Row, Publishers, New York (1981)。
間隔基團(tuán)("I/")
除了可裂解的基團(tuán)以外，可選地在細(xì)胞毒素與定向劑之間引入一
76個或多個連接基團(tuán)。間隔基團(tuán)含有至少兩個反應(yīng)性官能團(tuán)。通常，間 隔基團(tuán)的一個化學(xué)官能度與細(xì)胞毒素的化學(xué)官能度鍵合，而間隔基團(tuán) 的另一個化學(xué)官能度用于與定向劑或可裂解的連接基團(tuán)的化學(xué)官能度 鍵合。間隔基團(tuán)的化學(xué)官能度的實(shí)例包括羥基、巰基、羰基、羧基、 氨基、酮和巰基。間隔基團(tuán)還可以是可裂解的連接基團(tuán)的組分，在這 種情況下它一般以1/表示，其中"X，，是整數(shù)。
由！/代表的連接基團(tuán)一般是取代或未取代的烴基、取代或未取代 的芳基、取代或未取代的雜芳基或取代或未取代的雜烴基。
示范性間隔基團(tuán)例如包括6-氨基己醇、6-巰基己醇、10-羥基癸酸、 甘氨酸與其他氨基酸、1，6-己二醇、|3-丙氨酸、2-氨基乙醇、半胱胺(2-氨基乙二醇)、5-氨基戊酸、6-氨基己酸、3-馬來酰亞氨基苯甲酸、鄰 羥甲基苯甲酸內(nèi)酯、ct-取代的鄰羥甲基苯甲酸內(nèi)酯、羰基、縮醛胺酯、 核酸、肽等。
間隔基團(tuán)能夠起到向細(xì)胞毒素-定向劑配合物引入額外的分子質(zhì) 量和化學(xué)官能度的作用。 一般而言，額外的質(zhì)量和官能度將影響配合 物的血清半衰期和其他性質(zhì)。因而，通過謹(jǐn)慎地選擇間隔基團(tuán)，可以 制備具有一定范圍血清半衰期的細(xì)胞毒素配合物。
反應(yīng)性官能團(tuán)
為了清楚起見，后續(xù)討論集中于本發(fā)明細(xì)胞毒素與定向劑的綴合 作用。以本發(fā)明的一種實(shí)施方式為例，由此本領(lǐng)域技術(shù)人員容易推導(dǎo) 出其他實(shí)施方式。討論集中于單一的實(shí)施方式并不限制本發(fā)明.
本發(fā)明的示范性化合物攜帶反應(yīng)性官能團(tuán)，它 一般位于取代或未 取代的烴基或雜烴基鏈，允許它們?nèi)菀走B接另一種基團(tuán)。反應(yīng)性基團(tuán) 的常規(guī)位置是鏈的末端位置.
可用于實(shí)施本發(fā)明的反應(yīng)性基團(tuán)和反應(yīng)種類一般是生物綴合物化 學(xué)領(lǐng)域熟知的那些。目前可取的可與反應(yīng)性細(xì)胞毒素類似物進(jìn)行的反 應(yīng)種類是在相對溫和的條件下進(jìn)行的那些。它們包括但不限于親核取 代(例如胺和醇與酰卣、活性酯的反應(yīng))、親電取代(例如烯胺反應(yīng)) 和向碳-碳與碳-雜原子多重鍵的加成(例如Michael反應(yīng)、Diels-Alder加成)。這些和其他有用的反應(yīng)例如討論在March, Advanced Organic Chemistry, 3rd Ed.， John Wiley & Sons, New York, 1985; Hermanson， Bioconjugate Techniques, Academic Press, San Diego, 1996和Feeney 等，Modification of Proteins, Advances in Chemistry Series, Vol. 198， American Chemical Society, Washington, D.C.， 1982。
示范性反應(yīng)類型包括羧基及其各種衍生物的反應(yīng)，羧基衍生物包 括但不限于N-羥基琥珀酰亞胺酯、N-羥基苯并三唑酯、酰鹵、?；?唑、疏代酸酯、對硝基苯基酯、烷基、烯基、炔基與芳族酯。羥基可 以轉(zhuǎn)化為酯、醚、醛等。卣代烴基轉(zhuǎn)化為新的基團(tuán)，例如通過與胺、 羧酸陰離子、硫醇陰離子、陰碳離子或醇化物離子的反應(yīng)。親雙烯體 (例如馬來酰亞胺)基團(tuán)參與Diels-AWer反應(yīng)。醛或酮基可以轉(zhuǎn)化為 亞胺、腙、縮氨基脲或坊，或者經(jīng)由Grignard加成或烷基鋰加成等機(jī) 理。磺酰自容易與胺反應(yīng)，例如生成磺酰胺。胺或巰基例如是?；摹?烷基化的或氧化的。利用環(huán)加成、?；ichael加成等，烯烴可以轉(zhuǎn) 化為一組新的化合物。環(huán)氧化物容易與胺和羥基化合物反應(yīng)。
本領(lǐng)域技術(shù)人員將容易領(lǐng)會到，這些鍵很多都可以按各種方式和 利用各種條件生成。關(guān)于酯的制備，例如參見March,出處同上，1157; 關(guān)于硫代酸酯的制備，參見March,出處同上，362-363， 491， 720-722， 829, 941和1172;關(guān)于碳酸酯的制備，參見March,出處同上，346-347; 關(guān)于氨基甲酸酯的制備，參見March,出處同上，1156-57;關(guān)于酰胺 的制備，參見March,出處同上，1152;關(guān)于脲和硫脲的制備，參見 March,出處同上，1174;關(guān)于縮醛和縮嗣的制備，參見Greene等，出 處同上，178-210和March,出處同上，1146;關(guān)于酰氧基烷基衍生物的 制備，參見Prodrugs: Topical and Ocular Drug Delivery, K. B. Sloan, ed.， Marcel Dekker， Inc., New York, 1992;關(guān)于烯醇酯的制備，參見 March,出處同上，1160;關(guān)于N-磺酰亞胺酸鹽的制備，參見 Bundgaard等，J. Med. Chem., 31: 2066 (1988);關(guān)于酸酐的制備，參 見March,出處同上，355-56， 636-317， 990-91和1154;關(guān)于N-?；?胺的制備，參見March,出處同上，379;關(guān) N-曼尼希堿的制備，參見March,出處同上，800-02和828;關(guān)于羥甲基酮酯的制備，參見 Petracek等，Annals NY Acad. Sci.， 507: 353-54 (1987);關(guān)于二磁"匕物 的制備，參見March,出處同上，1160;關(guān)于膦酸酯和氨基膦酸酯的制 備。
反應(yīng)性官能團(tuán)可以是這樣選擇的，以便它們不參與或干擾裝配反 應(yīng)性自誘導(dǎo)劑類似物所必要的反應(yīng)?；蛘?，通過保護(hù)基團(tuán)的存在，可 以保護(hù)反應(yīng)性官能團(tuán)不參與反應(yīng)。本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解如何保護(hù)特 定的官能團(tuán)不干擾所選擇的一套反應(yīng)條件。關(guān)于有用的保護(hù)基團(tuán)的實(shí) 例，參見Greene等，Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1991。
通常，利用標(biāo)準(zhǔn)的化學(xué)工藝，使定向劑與細(xì)胞毒素通過它們各自 的化學(xué)官能團(tuán)共價連接?？蛇x地，^吏dendrimer或藥物與該試劑通過 一個或多個間隔基團(tuán)偶聯(lián)。間隔基團(tuán)當(dāng)聯(lián)合使用時，可以是相同的或 不同的。
一般而言，在細(xì)胞毒素與定向劑(或其他試劑)和可選的間隔基
團(tuán)之間生成鍵之前，至少一個化學(xué)官能團(tuán)將被激活。本領(lǐng)域技術(shù)人員
將領(lǐng)會到，各種化學(xué)官能團(tuán)一一包括羥基、氨基和羧基一一都可以利
用各種標(biāo)準(zhǔn)方法和條件激活。例如，細(xì)胞毒素或定向劑的羥基可以這
樣被激活，用光氣處理，生成對應(yīng)的氯甲酸酯，或者用對硝基苯基氯
甲酸酯處理，生成對應(yīng)的碳酸酯.
在示范性實(shí)施方式中，本發(fā)明采用包括羧基官能度的定向劑。羧 基例如可以通過轉(zhuǎn)化為對應(yīng)的酰卣或活性酯而被激活。該反應(yīng)可以在
各種條件下進(jìn)行，如March,出處同上，pp. 388-89所述。在示范性實(shí) 施方式中，酰卣是通過含有羧基的基團(tuán)與草酰氯的反應(yīng)加以制備的。 使活化的試劑與細(xì)胞毒素或細(xì)胞毒素-連接基團(tuán)臂的組合反應(yīng)，生成本 發(fā)明的綴合物。本領(lǐng)域技術(shù)人員將領(lǐng)會到，含有羧基的定向劑的使用 僅僅是說明性的，具有很多其他官能團(tuán)的試劑可以與本發(fā)明的 dendrimer綴合。
當(dāng)本發(fā)明的化合物與可檢測的標(biāo)記綴合時，標(biāo)記優(yōu)選地是選自下組的成員放射性同位素、熒光劑、熒光劑前體、發(fā)色團(tuán)、酶及其組合。用于綴合各種基團(tuán)與抗體的方法是本領(lǐng)域熟知的。例如，經(jīng)常與抗體綴合的可檢測的標(biāo)記是一種酶，例如辣根過氧化酶、堿性蜂酸酶、P-半乳糖苷酶和葡萄糖氧化酶。可檢測的才示i己
用于本發(fā)明化合物和方法的特定標(biāo)記或可檢測的基團(tuán) 一般不是本發(fā)明的關(guān)鍵所在，只要它不會顯箸干擾本發(fā)明化合物的活性或?qū)嵱眯约纯??？蓹z測的基團(tuán)可以是具有可檢測的物理或化學(xué)性質(zhì)的任意材料。這類可檢測的標(biāo)記在免疫測定領(lǐng)域已經(jīng)是成熟的， 一般而言大多數(shù)任意可用于這類方法的標(biāo)記都可以適用于本發(fā)明。因而，標(biāo)記是任意可被光譜、光化學(xué)、生物化學(xué)、免疫化學(xué)、電學(xué)、光學(xué)或化學(xué)手段檢測的組合物。可用于本發(fā)明的標(biāo)記包括磁性珠粒(例如DYNABEADS )、熒光染劑(例如熒光素異硫氰酸酯、德克薩斯紅、若丹明等)、放射性標(biāo)記(例如311、 125I、 3SS、 "C或"P)、酶(例如辣根過氧化酶、堿性磷酸酶和其他ELISA常用的酶)、和比色標(biāo)記，例如膠體金或有色玻璃或塑料珠(例如聚苯乙烯、聚丙烯、膠乳等)。
按照本領(lǐng)域熟知的方法，標(biāo)記可以直接或間接與本發(fā)明化合物偶聯(lián)。如上所示，可以使用各種標(biāo)記，標(biāo)記的選擇取決于所需敏感性、與化合物綴合的容易程度、穩(wěn)定性要求、可利用的器械操作和處理規(guī)定。
非放射性標(biāo)記經(jīng)常借助間接手段連接。 一般而言，使配體分子(例如生物素)與綴合物組分共價鍵合。配體然后結(jié)合另一種分子(例如鏈霉抗生物素)，后者本來是可檢測的或者與信號系統(tǒng)共價鍵合，例如可檢測的酶、熒光化合物或化學(xué)發(fā)光化合物，
本發(fā)明綴合物的組分還可以與信號發(fā)生化合物直接綴合，例如與酶或熒光團(tuán)綴合。作為標(biāo)記的有關(guān)酶將主要是水解酶，確切為磷酸酶、酯酶或糖苷酶，或氧化酶，確切為過氧化物酶。熒光化合物包括熒光素及其衍生物、若丹明及其衍生物、丹磺酰、傘形嗣等'化學(xué)發(fā)光化合物包括蟲熒光素、和2,3-二氫舦溱二嗣，例如魯米諾。關(guān)于各種可以使用的標(biāo)記系統(tǒng)或信號產(chǎn)生系統(tǒng)的評論，參見美國專利No.4,391,904。
檢測標(biāo)記的手段是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的。因而，例如，若標(biāo)記是放射性標(biāo)記，檢測手段包括閃爍計(jì)數(shù)器或照相膜，如同放射自顯影法。若標(biāo)記是熒光標(biāo)記，它可以這樣檢測，用適當(dāng)波長的光激發(fā)熒光染料，再檢測所得熒光。熒光在檢測時可以用肉眼、借助照相膜、利用電子檢測器，例如電荷耦合設(shè)備(CCDs)或光電倍增管等。類似地，酶標(biāo)記可以這樣檢測，為酶提供適當(dāng)?shù)牡孜?，再檢測所得反應(yīng)產(chǎn)物。最后，簡單的比色標(biāo)記可以簡單地通過觀察與標(biāo)記有關(guān)的顏色進(jìn)行檢測。因而，在各種浸量尺測定法中，所綴合的金經(jīng)常呈現(xiàn)粉紅色，而各種所綴合的珠粒呈現(xiàn)珠粒的顏色。
熒光標(biāo)記是目前優(yōu)選的，因?yàn)樗鼈兊膬?yōu)點(diǎn)是在操作上需要很少的預(yù)防措施和適用于高通量造影工藝(光學(xué)分析，包括分析圖象在包含計(jì)算機(jī)的集成系統(tǒng)中的數(shù)字化)。優(yōu)選的標(biāo)記通常具有一個或多個下列特征高敏感性、高穩(wěn)定性、低背景、低環(huán)境敏感性和標(biāo)記時的高特異性。很多熒光標(biāo)記都是商業(yè)上可得到的SIGMA化學(xué)公司(SaintLouis, MO) 、 Molecular Probes (Eugene, OR) 、 R&D systems(Minneapolis, MN)、 Pharmacia LKB Biotechnology (Piscataway， NJ)、CLONTECH Laboratories, Inc, (Palo Alto， CA)、 Chem Genes Co卬.，Aldrich Chemical Company (Milwaukee, WI)、 Glen Research, Inc.,GIBCO BRL Life Technologies, Inc. (Gaithersburg, MD)、 FhikaChemica-Biochemika Analytika (Fluka Chemie AG, Buchs，Switzerland)和Applied Biosystems (Foster City, CA)， 以及技術(shù)人員已知的很多其他商業(yè)來源，此外，本領(lǐng)域技術(shù)人員將確認(rèn)如何根據(jù)特定的應(yīng)用選擇適當(dāng)?shù)臒晒鈭F(tuán)，并且如果不是商業(yè)上容易得到的話，也將能夠重新合成必要的熒光團(tuán)或者借助合成手段修飾商業(yè)上可得到的熒光化合物，以得到所需的熒光標(biāo)記.
除了小分子熒光團(tuán)以外，天然存在的熒光蛋白和這類蛋白質(zhì)的人工類似物也可用于本發(fā)明。這類蛋白質(zhì)例如包括cnidarians的綠焚光
81蛋白(Ward等，Photochem. Photobiol. 35: 803-808 (1982); Levine等，Comp. Biochem. Physiol" 72B: 77-85 (1982》、來自弧菌屬fischeri種的黃熒光蛋白(Baldwin等，Biochemistry 29: 5509-15 (1990))、來自腰鞭毛目 Symbiodinium sp.的 Peridinin-葉綠素(Morris等,PlantMolecular Biology 24: 673-77 (1994))、來自海洋cyanobacteria (例如Synechococcus)的藻膽蛋白質(zhì)(例如藻紅蛋白和藻藍(lán)蛋白)(Wilbanks等，J. Biol. Chem. 268: 1226-35 (1993))等。藥物制劑
在另一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供藥物制劑，包含本發(fā)明化合物和藥學(xué)上可接受的載體。
在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供藥物制劑，包括藥學(xué)上可接受的載體和本發(fā)明的定向劑與細(xì)胞毒素的綴合物。
本文所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的加成鹽或水合物可以利用各種給藥途徑或方式釋放至患者。適合的給藥途徑包括但不限于吸入、透皮、口服、直腸、經(jīng)粘膜、腸內(nèi)和腸胃外給藥，腸胃外給藥包括肌內(nèi)、皮下和靜脈內(nèi)注射。
本文所用的術(shù)語,藥"打算涵蓋所有直接與間接釋放化合物至其預(yù)期作用部位的手段。
本文所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和/或水合物可以單獨(dú)給藥，與其他本發(fā)明化合物聯(lián)合給藥，和/或以與其他治療劑聯(lián)合的雞尾酒形式給藥。當(dāng)然，能夠與本發(fā)明化合物共同給藥的治療劑的選擇將在部分程度上取決于所治療的疾病，
例如，當(dāng)對患有由依賴于自誘導(dǎo)劑的生物體導(dǎo)致的疾病狀態(tài)的患者給藥時，本發(fā)明化合物可以以雞尾酒形式給藥，其中含有用于治療
疼痛、感染和與疾病有關(guān)的其他癥狀和副作用的藥物。這類藥物例如包括止痛劑、抗生素等。
當(dāng)對接受癌癥治療的患者給藥時，化合物可以以雞尾酒形式給藥，其中，含有抗癌劑和/或補(bǔ)充強(qiáng)化劑。化合物還可以以雞尾酒形式給藥，其中含有治療放射療法副作用的藥物，例如止吐劑、放射保護(hù)劑等。能夠與本發(fā)明化合物共同給藥的補(bǔ)充強(qiáng)化劑例如包括三環(huán)抗抑郁藥(例如米帕明、地昔帕明、阿來替林、氯米帕明、曲米帕明、多塞
平、去甲替林、普羅替林、阿莫沙平和馬普替林)；非三環(huán)抗抑郁藥(例
如舍曲林、曲唑酮和西酞普蘭)；Ca"+拮抗劑(例如維拉帕米、硝笨地平、尼群地平和卡羅維林)；兩性霉素；曲帕拉醇類似物(例如他莫昔芬)；抗心律失常藥(例如套尼丁)；抗高血壓藥(例如利血平)；硫醇才非除劑(例如buthionine和sulfoximine);和亞葉酸釣。
本發(fā)明的活性化合物是以本身形式給藥的，或者以藥物組合物形式給藥，其中活性化合物是與一種或多種藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑混合的。按照本發(fā)明使用的藥物組合物通常是按常規(guī)方式配制的，使用一種或多種生理學(xué)上可接受的載體，包含賦形劑和助劑，它們有利于將活性化合物加工成可以在藥學(xué)上使用的制備物。適當(dāng)?shù)闹苿┤Q于所選擇的給藥途徑。
關(guān)于注射，本發(fā)明藥物可以被配制成水溶液，優(yōu)選地在生理學(xué)上可相容的緩沖液中，例如Hank氏溶液、Ringer氏溶液或生理鹽水緩沖液。關(guān)于經(jīng)粘膜給藥，在制劑中使用適用于所要滲透的屏障的滲透劑。這類滲透劑是本領(lǐng)域公知的。
關(guān)于口服給藥，化合物可以是容易這樣配制的，將活性化合物與本領(lǐng)域熟知的藥學(xué)上可接受的載體結(jié)合。這類載體使本發(fā)明化合物能夠配制成片劑、丸劑、錠劑、膠嚢劑、液體、凝膠、糖漿劑、漿液、懸液等，用于被所要治療的患者口服?？谟盟幬镏苽湮锟梢赃@樣得到，與固體賦形劑混合，可選地研磨所得混合物，加工顆粒的混合物，如果需要的話加入適合的助劑，得到片劑或錠劑芯。適合的賦形劑確切地是填充劑，例如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露糖醇或山梨糖醇；纖維素制備物，例如玉米淀粉、小麥淀粉、稻米淀粉、馬鈴薯淀粉、明膠、黃蓍膠、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP).如果需要的話，可以加入崩解劑，例如交聯(lián)聚乙烯吡咯烷鯛一瓊脂或藻酸或其鹽，例如藻酸鈉.
為錠劑芯提供適合的包衣。為此，可以使用濃糖溶液，其中可以
83可選地含有阿拉伯膠、滑石、聚乙埽吡咯烷酮、Carbopol凝膠、聚乙二醇和/或二氧化鈦；漆溶液；和適合的有機(jī)溶劑或溶劑混合物?？梢韵蚱瑒┗蝈V劑芯加入染料或色素，用于鑒別或區(qū)分不同的活性化合物劑量組合。
可以口用的藥物制備物包括推入配合的膠嚢劑，由明膠制成，以及軟的密封膠囊劑，由明膠和一種增塑劑制成，例如甘油或山梨糖醇。推入配合的膠嚢劑可以含有活性成分與下列成分的混合物填充劑，例如乳糖；粘合劑，例如淀粉；和/或潤滑劑，例如滑石或硬脂酸鎂；和可選的穩(wěn)定劑。在軟膠嚢劑中，活性化合物可以是溶解或懸浮在適合的液體中的，例如脂肪油、液體石蠟或液體聚乙二醇。另外，可以加入穩(wěn)定劑。所有口服給藥制劑都應(yīng)當(dāng)是適合于這類給藥的劑量。
關(guān)于頰給藥，組合物可以采取片劑或糖錠劑的形式，按常規(guī)方式配制。
關(guān)于通過吸入給藥，按照本發(fā)明使用的化合物適宜以氣霧劑的形式從加壓包裝或霧化器中釋放出來，其中利用適合的推進(jìn)劑，例如二氯二氟甲烷、三氯氟代甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他適合的氣體。在加壓氣霧劑的情況下，通過提供計(jì)量釋放的閥門可以確定劑量單位。用在吸入器或吹入器內(nèi)的明膠膠嚢和藥筒可以配制成含有化合物與適合的粉末基質(zhì)的粉末混合物，例如乳糖或淀粉.
化合物可以配制用于腸胃外給藥，通過注射，例如大丸劑注射或連續(xù)輸注。注射用制劑可以是單位劑型，例如在安瓿或多劑量容器內(nèi)，其中加入防腐劑。組合物可以采取在油性或水性載體中的懸液、溶液或乳液的形式，并且可以含有配制用試劑，例如懸浮劑、穩(wěn)定劑和/或分散劑，例如交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂或藻酸或其鹽，例如藻酸鈉。
腸胃外給藥用藥物制劑包括水溶性活性化合物的水溶液。酌情可以制備活性化合物的油性注射懸液。適合的親脂性溶劑或載體包括脂肪油，例如芝麻油，或合成的脂肪酸酯，例如油酸乙酯或甘油三酯，或脂質(zhì)體。水性注射懸液可以含有增加懸液粘性的物質(zhì)，例如羧甲基纖維素鈉、山梨糖醇或葡聚糖?？蛇x地，懸液還可以含有適合的穩(wěn)定劑或增加化合物溶解度的試劑，以便制備高濃縮的溶液。
或者，活性成分可以是粉末形式，在使用前用適合的載體再生，例如無菌無熱原的水。
化合物還可以配制成直腸組合物，例如栓劑或保留灌腸劑，例如含有常規(guī)的栓劑基質(zhì)，例如可可脂或其他甘油酯。
除了前述制劑以外，化合物還可以配制成藥庫制備物。這類長效制劑可以通過植入或經(jīng)皮釋放(例如皮下或肌內(nèi))、肌內(nèi)注射或透皮貼劑給藥。因而，例如，化合物可以與適合的聚合或疏水性材料(例如在可接受的油中的乳液)或離子交換樹脂一起配制，或者配制成微溶性衍生物，例如微溶性鹽。
藥物組合物還可以包含適合的固體或凝膠相載體或賦形劑。這類載體或賦形劑的實(shí)例包括但不限于碳酸鈣、磷酸鈣、各種糖、淀粉、纖維素衍生物、明膠、和聚合物，例如聚乙二醇。
文庫
在本發(fā)明范圍內(nèi)還包括本發(fā)明的細(xì)胞毒素、細(xì)胞毒素與連接基團(tuán)的細(xì)胞毒素-連接基團(tuán)與藥物-連接基團(tuán)綴合物的文庫。示范性文庫包
括至少10種化合物，更優(yōu)選至少100種化合物，進(jìn)而更優(yōu)選至少l，OOO種化合物，進(jìn)而更優(yōu)選至少IOO，OOO種化合物。文庫的形式容易就特
定性質(zhì)進(jìn)行查詢，例如細(xì)胞毒性、酶或其他裂解試劑對連接基團(tuán)的裂
解作用。示范性形式包括芯片格式、microarray等。
平行或組合合成的主要目的是生成不同分子的文庫，它們共享一個共同的特性，在本說明書中稱為腳手架.通過在腳手架分子的每個可變部分上取代不同的部分，文庫中可開發(fā)的空間數(shù)量增加了。理論和現(xiàn)代醫(yī)藥化學(xué)主張所占據(jù)的空間的概念，它是測定給定化合物對給定生物靶的功效的關(guān)鍵因素。通過創(chuàng)建不同的分子文庫，開發(fā)大比例的所定向的空間，開發(fā)高效的前導(dǎo)化合物的幾率戲劇性地增加了 。
平行合成一般是在固相載體上進(jìn)行的，例如聚合樹脂。腳手架或其他適合的中間體被銀學(xué)連接基團(tuán)可裂解地連接在樹脂上。進(jìn)行反應(yīng)，以修飾連接在樹脂上的腳手架。試劑和/或反應(yīng)條件的變化產(chǎn)生結(jié)構(gòu)多樣性，這是每個文庫的品質(zhì)所在。
"小"分子(分子量200- 1000的非低聚物)的平行合成在19卯年以前鮮有嘗試。例如參見Camps等，Aimaks de Quimica, 70: 848(1990)。最近，Ellmann公開了十一種笨并二氮雜萆類似物以及一些前列腺素和P-模擬物的固相支撐的平行(也稱ta合")合成。這些公開文獻(xiàn)例如美國專利No. 5,288,514。小分子平行合成的另 一份相關(guān)公開文獻(xiàn)可以參見美國專利No. 5，324，483。該專利公開了在十六種不同的腳手架中各自合成了 4至40種化合物。Chen等也應(yīng)用有機(jī)合成策略，在聚合物載體上利用多步過程合成非肽文庫(Chen等，J. Am. Chem.Soc" 116: 2661-2662 (1994))。
一旦制備了獨(dú)特化合物的文庫，就可以使用自誘導(dǎo)劑的文庫作為起點(diǎn)，利用本文所迷的方法制備免疫綴合物或抗體的文庫。
試劑盒
本發(fā)明在另一方面提供試劑盒，含有一種或多種本發(fā)明的化合物或組合物和關(guān)于使用化合物或組合物的指導(dǎo)。在示范性實(shí)施方式中，本發(fā)明提供用于綴合本發(fā)明的連接基團(tuán)臂與另一種分子的試劑盒。試劑盒包括連接基團(tuán)和關(guān)于連接連接基團(tuán)與特定官能團(tuán)的指導(dǎo)。其他試劑盒格式將為本領(lǐng)域技術(shù)人員所顯而易見，也屬于本發(fā)明的范圍。
方法
除了上述組合物和構(gòu)成物以外，本發(fā)明還提供大量可以利用本發(fā)明化合物和綴合物的方法。純化
在另一種示范性實(shí)施方式中，本發(fā)明提供用于分離本發(fā)明細(xì)胞毒素的分子靶的方法，它結(jié)合這樣一種分子，具有根據(jù)式I的基團(tuán)作為其結(jié)構(gòu)的一部分。該方法優(yōu)選地包含使包括把的細(xì)胞制備物與固定化的式I化合物接觸，由此在受體與固定化的化合物之間生成配合物.
本發(fā)明的細(xì)胞毒素可以利用任何本領(lǐng)域公認(rèn)的手段固定在親合載體上?；蛘?，細(xì)胞毒素可以利用一種或多種本發(fā)明的連接基團(tuán)加以固定。用于分離靶的本發(fā)明方法通常將采用一種或多種親合色譜工藝。親合色譜法利用生物分子或生物聚合物對某些支撐的化學(xué)結(jié)構(gòu)的具有高度選擇性的識別部位，能夠有效分離它們。文獻(xiàn)中有很多文章、?？蜁顷P(guān)于親合色譜法的，包括親合色譜法載體、交聯(lián)成員、配
體和它們的制備與用途等主題。這些參考文獻(xiàn)的實(shí)例包括Ostrove，
Methods Enzymol. 182: 357-71 (1990); Ferment, Bioeng. 70: 199-209(1990); Huang等，J. Chromatogr. 492: 431-69 (1989); "Purification ofenzymes by heparin-Sepharose affinity chromatography", J.Chromatogr" 184: 335-45 (1980); Farooqi, Enzyme Eng., 4: 441-2(1978); Nishikawa, Chem. Technol" 5(9): 564-71 (1975); Guilford等，Pract. High Perform. Liq. Chromatogr" Simpson (ed.)， 193-206 (1976);Nishikawa, Proc. Int. Workshop Technol. Protein Sep. Improv. BloodPlasma Fractionation, Sandberg (ed.)， 422-35 (1977); "Affinitychromatography of enzymes", Affinity Chromatogr" Proc. Int. Symp.25-38 (1977) (Pub. 1978); Affinity Chromatography: A PracticalApproach, Dean等，(ed.)， IRL Press Limited, Oxford, England (1985)。
量教導(dǎo)。
在本方法中，可以使用各種化學(xué)結(jié)構(gòu)的親合色譜介質(zhì)作為載體。例如，瓊脂糖凝膠和交聯(lián)瓊脂糖凝膠可用作載體材料，因?yàn)樗鼈兊挠H水性使它們相對不存在非特異性鍵合。其他有用的載體例如包括受控多孔玻璃(CPG)珠粒、纖維素粒子、聚丙烯酰胺凝膠珠粒和由葡聚糖和環(huán)氧氯丙烷制成的SephadexTM凝膠珠粒。
疾病的治療
本發(fā)明的細(xì)胞毒素是活性的、有力的duocarmycin衍生物。母體藥物是格外有力的抗腫瘤抗生素，它們的生物學(xué)作用來自可逆的、立體電子控制的序列選擇性DNA烷基化作用(Boger等，J. Org. Chem.55: 4499 (1990)., Boger等，JL Am. Chem. Soc. 112: 8961 (19， Boger等，J. Am. Chem. Soc. 113: 6645 (1991); Boger等，J. Am. Chem. Soc.115: 9872 (1993)'， Boger等，Bioorg. Med. Chem. Lett. 2: 759 (1992))。在最初公開了 duocarmycin之后，人們又投入了廣泛的努力，以闡明duocarmycin的DNA烷基化作用選擇性及其結(jié)構(gòu)起源。
在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供殺死細(xì)胞的方法。該方法包括對細(xì)胞給以一定量的本發(fā)明化合物，給藥量足以殺死所述細(xì)胞。在示范性實(shí)施方式中，化合物是對攜帶該細(xì)胞的受治療者給藥的。在進(jìn)一步的示范性實(shí)施方式中，給藥起到延緩或終止包括該細(xì)胞的腫瘤的生長的作用。
有效劑量
適用于本發(fā)明的藥物組合物包括這樣的組合物，其中含有治療有效量的活性成分，也就是有效實(shí)現(xiàn)其預(yù)期目的的量。對特定應(yīng)用有效
的真實(shí)量將尤其取決于所治療的疾病。例如，當(dāng)在就地減少鐮狀細(xì)胞脫水和/或延遲紅細(xì)胞鐮狀化或變形發(fā)生的方法中給藥時，這類組合物將含有一定量的活性成分，含量有效實(shí)現(xiàn)這種結(jié)果。有效量的確定完全在本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力范圍內(nèi)，尤其根據(jù)本文詳細(xì)公開的內(nèi)容。
關(guān)于本文所述的任意化合物，治療有效量可以最初是從細(xì)胞培養(yǎng)測定法確定的。耙血漿濃度將是這樣的活性化合物濃度，它能夠抑制細(xì)胞的生長或分化。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，細(xì)胞活性被抑制了至少25%.能夠誘導(dǎo)至少約50%、 75%或者甚至90%或者更高的細(xì)胞活性抑制作用的活性化合物的把血漿濃度是目前優(yōu)選的.可以對患者細(xì)胞活性的抑制百分率進(jìn)行監(jiān)測，以評估所達(dá)到的血漿藥物濃度的適當(dāng)性，并且可以向上或向下調(diào)整劑量，以達(dá)到所需的抑制百分率。
正如本領(lǐng)域所熟知的，用于人類的治療有效量也可以從動物模型確定。例如，可以制定人用劑量，以達(dá)到已經(jīng)發(fā)現(xiàn)對動物有效的循環(huán)濃度。如上所述，監(jiān)測細(xì)胞抑制作用，并向上或向下調(diào)整劑量，可以調(diào)整人用劑量.
治療有效量還可以從關(guān)于已知表現(xiàn)相似藥理活性的化合物的人類
88數(shù)據(jù)加以確定。所用劑量可以基于所給藥的化合物與已知化合物相比的相對生物利用度和效力加以調(diào)整。
基于上述方法和本領(lǐng)域熟知的其他方法調(diào)整劑量以實(shí)現(xiàn)對人的最大功效完全在普通技術(shù)人員的能力范圍內(nèi).
在局部給藥的情況下，所給藥的化合物的全身循環(huán)濃度將不是特別重要的。在這類情形下，將化合物給藥的目的是在局部區(qū)域達(dá)到有效實(shí)現(xiàn)預(yù)期效果的濃度。
關(guān)于在涉及異常細(xì)胞增殖的疾病的預(yù)防和/或治療中的用途，所給
藥的化合物的循環(huán)濃度優(yōu)選為約0.001nM至20pM，而約O.OlpM至5pM是優(yōu)選的。
本文所述化合物對患者口服給藥的劑量通常從約lmg/天至約10，000mg/天，更通常從約10mg/天至約1，000mg/天，最通常從約50mg/天至約500mg/天。根據(jù)患者的體重，典型的劑量從約0.01至約150mg/kg/天，更通常從約0.1至約15mg/kg/天，最通常從約1至約10mg/kg/天。
關(guān)于其他給藥方式，劑量和間隔的調(diào)整可以因人而異，以提供所給藥的化合物對所治療的特定臨床適應(yīng)癥有效的血漿水平。例如，在一種實(shí)施方式中，根據(jù)本發(fā)明的化合物可以按相對高的濃度給藥，每天多次?；蛘?，可能更可取的是按最小有效濃度給以本發(fā)明化合物，并且使用不太頻繁的給藥方案。這將提供與個體疾病嚴(yán)重性相稱的治療方案。
利用本文提供的教導(dǎo)，可以規(guī)劃有效的治療性處理方案，既不會導(dǎo)致實(shí)質(zhì)性毒性，又完全有效地治療由特定患者所表現(xiàn)的臨床癥狀.這種規(guī)劃應(yīng)當(dāng)牽涉考慮下列因素謹(jǐn)慎地選擇活性化合物化合物效力、相對生物利用度、患者體重、不利副作用的存在與嚴(yán)重性、優(yōu)選的給藥方式和所選擇的藥物的毒性曲線。
下列實(shí)施例進(jìn)一步闡述本發(fā)明的化合物、組合物和方法。這些實(shí)施例僅供舉例說明，不限制所要求保護(hù)的發(fā)明。
實(shí)施例實(shí)施例1
1.1材料和方法
在下列實(shí)施例中，除非有相反的規(guī)定，溫度是以攝氏度(。c)給出
的；操作是在室溫或環(huán)境溫度(通常為約18-25°C)下進(jìn)行的；溶劑的蒸發(fā)是利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、在減壓(通常4.5-30mmHg)下進(jìn)行的，浴溫至多60。C;反應(yīng)的過程通常繼之以TLC，反應(yīng)時間僅供舉例說明；熔點(diǎn)是未經(jīng)校正的；產(chǎn)物表現(xiàn)令人滿意的iH-NMR和/或微量分析數(shù)據(jù)；收率僅供舉例說明；還使用下列常規(guī)縮寫mp(熔點(diǎn))，L (升)，mL(毫升)，mmol(亳摩爾)，g (克)，mg(毫克)，min (分鐘)，LC-MS (液相色譜-氣相光譜)和h (小時)。
iH-NMR光譜是在Varian Mercury 300MHz光譜計(jì)上測量的，與指定的結(jié)構(gòu)一致?；瘜W(xué)漂移是以偏離四甲基硅烷的百萬分之份數(shù)(ppm)報告的。電子噴霧質(zhì)譜是在Perkin Elmer Sciex API 365質(zhì)譜計(jì)上記錄的。元素分析是由Robertson Microlit Laboratories, Madison, NJ進(jìn)行的?？焖偕V法用硅膠是E. Merck級(230-400目)。反相分析型HPLC是在HP 1100或Varian ProStar 210儀器上進(jìn)行的，帶有Phenomenex Luna 5nm C-18(2) 150mm x 4.6mm 柱或 VarianMicrosorb-MV O.lfim C-18 150mm x 4.6mm柱.流速為lmL/min,它是0%至50%緩沖液B歷經(jīng)15分鐘的梯度或10%至100%緩沖液B歷經(jīng)10分鐘的梯度，在254nm下UV檢測。緩沖液A是20mM甲酸銨+20%乙腈或含0.1%三氟乙酸的乙腈，緩沖液B是20mM甲酸銨+ 80%乙腈或0.1%三氟乙酸水溶液'反相制備型HPLC是在VarianProStar 215儀器上進(jìn)行的，帶有Waters Delta Pak 15jnm C-18 300mmx 7.8mm柱。
1.2合成方法
<formula>formula see original document page 90</formula>1.2a化合物134的合成
式I化合物容易這樣制備，使用氫化鈉，在N，N-二甲基甲酰胺(DMF)或四氫呋喃(THF)中，使適當(dāng)?shù)穆莪h(huán)丙基環(huán)己二烯基類似物(化合物B)與活化的雜環(huán)化合物A反應(yīng)。所得化合物28然后用適當(dāng)?shù)呢沾崽幚恚鐨渎人?，轉(zhuǎn)化為化合物29?；衔?9被催化氬化作用還原，得到化合物65,再與活化的酯偶聯(lián)，得到化合物134,即式I化合物。
其他式I化合物是按照所公開的工藝制備的，利用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的工藝加以修改，以制備另外的類似物，例如還原、氧化、加成、水性萃取、蒸發(fā)和純化。
1.2b化合物A的合成
在0°C下，向5-硝基-2-羧酸(0,83g， 4.0mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(60mL)溶液加入EDC (1.15g， 6.0mmo1)。將所得懸液在0。C下攪拌45min，此時EDC已經(jīng)完全溶解。加入4-硝基笨酚(0.83g， 6.0mmo1)和DMAP (0.73g， 6.0mmo1)，在環(huán)境溫度下攪拌所得混合物。13小時后，將混合物用乙酸乙酯稀釋，用10%檸檬酸水溶液洗滌兩次，然后用水和鹽水洗滌，然后經(jīng)Na2S04干燥，過濾，在真空中濃縮。所得殘余物經(jīng)過硅膠快速柱色譜純化(含7%乙酸乙酯的二氯甲烷)，得到1.02g(78%)A，為黃色固體'H NMR (CDC13) S 9.0 (brs， 1 H), 8.2 (d, 2 H), 7.8 (m' 2 H), 7.4 (d， 2 H), 7.3 (s, 1 H)， 6.8 (s, 1 H).1.2c ^合物28的合成
在-40。C下，向B (20mg， 0.08mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(1.0mL)溶液加入氫化鈉(4.0mg， O.lmmol，含60%的油)的N，N-二甲基甲酰胺(l.OmL)懸液。使所得混合物緩慢(1.5h)溫?zé)嶂?°C，然后冷卻回到-40。C。加入A (37mg， O.lmmol)，使混合物緩慢(1.5h)溫?zé)嶂?°C，保持20min。將混合物冷卻至-30。C，用乙酸(l(^iL)猝滅反應(yīng)，攪拌10min,用乙酸乙酯稀釋，然后用水和鹽水洗滌。分離有機(jī)層，經(jīng)MgS04干燥，過濾，在真空中濃縮。經(jīng)過硅膠快速柱色譜純化(含50%至100%乙酸乙酯的二氯甲烷)，得到16.3mg (43%) 28，為淺黃色固體
'H NMR (CDC13) S 11.3 (br s， 1 H)， 9.4 (br s, 1 H), 7.4 (m, 2 H)， 7.1 (s,1 H)， 6.95 (s， 1 H), 6.8 (s, 1 H)， 4.4 (s, 2 H)， 3.8 (s, 3 H), 3.8 (m， 1 H), 2.6 (s, 3 H), 2.4 (dd， 1H)， 1.4 (m, 1 H). ESMS /m/z 490 (M - H)..
1.2d化合物29的合成
將28 (50mg， 0.103mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(1.0mL)溶液用lmL無水氫氯酸(l.OM二噁烷溶液)處理。將所得溶液在環(huán)境溫度下攪拌30min，然后濃縮溶劑.所得殘余物經(jīng)過硅膠快速柱色譜純化(含50%至100%乙酸乙酯的二氯甲烷)，得到50mg (100%) 29，為淺黃色固體NMR (CDC13) S 11.3 (br s， 1 H), 9.4 (br s, 1 H)， 7.4 (m' 2 H)， 7.1 (s， 1 H), 6.95 (s， 1
H)， 6.8 (s， 1 H), 4.4 (s， 2 H), 3.8 (s, 3 H)， 3.8 (m, 1 H)， 2.6 (s， 3 H), 2.4 (dd， 1 H)， 1.4 (m, 1H).
1.2d化合物65的合成向29 (110mg， 0.184mmol)的1:1甲醇:二氯甲烷(20ml)溶液加入10。/o披鈀碳(100mg)。 4吏混合物在Parr裝置上、在50psi下氫化一小時。將混合物經(jīng)C鹽過濾，用二氯甲烷沖洗，然后在真空中濃縮，得到94mg (90%) 65，為黃色固體
'H NMR (CDC13) 5 7.8-7.3 (m, 5 H)， 4.4 (m, 3 H), 3.8 (m, 5 H), 3.4 (s， 3 H). ESMS m/z 454(M-町.
1.2e化合物134的合成
將化合物C (19mg， 0.044mmol)和HATU (50mg， 0.132mmol)溶于二甲基甲酰胺(2mL),加入N-甲基嗎啉(19.3^iL， 0，176mmo1)。 15分鐘后，加入65 (20mg，0.044mmol)的二甲基甲酰胺(lmL)溶液。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌16小時，然后在真空中濃縮。將所得固體用水和飽和碳酸氫鈉水溶液沖洗，經(jīng)真空干燥，然后用乙酸乙酯洗滌。粗產(chǎn)物經(jīng)過硅膠快速色譜純化，用5%甲醇/二氯甲烷洗脫，得到15mg(39%)134:
'HNMR(DMSO): S 11.4(brs， 1H)， ll.O(br s， 1H), 10.9(s， 1H)， 8.5 (s, 1H)， 8.3 (br s, 2H)， 8.0 (m, 2H)， 7.9 (s, 1H), 7.7 (m， 3H), 7.5 (d, 1H), 7.3 (t,2H)， 4.6 (m, 2H)， 4.5 (d, 2H), 4.3 (m， 1H)， 3.8 (s, 3H), 3.7 (d, 1H), 3.5 (t， 1H), 2.7 (s， 3H),1.7(m，2H),0,9(d，6H).
按相似的方式制備下列化合物
46: NMR (CDC13): S 8.9 (s, 1H)， 8.7 (s, 1H), 8.4 (dd， 1H)， 8.1 (br s, 1H)， 7.75 (d, 1H),7.65 (s， 1H), 4.8 (d， 1H), 4.55 (m， 2H)， 3.9 (s， 3H), 3.85 (s， 1H)， 3.7 (m, 4H), 3.4 (t， 1H)， 2.7(s, 3H), 2.5 (br s, 4H)， 2.4 (s， 3H).
95: NMR (DMSO): 5 12 (s, 1H)， 10.6 (d, 1H), 8.25 (s， 1H), 8.2 (br s， 1H)， 8.1 (s, 1H)， 7.7(m， 5H)， 7.5 (d, IH)， 4.6 (t, IH), 4.5 (《1H)， 4.4 (m, 2H)， 4.1 (m， IH), 3.9 (d， 2H)， 3.8 (s，3H)， 3.3 (m, IOH)， 2.8 (s， 3H)， 2.6 (s, 3H), 1.6 (br s, 3H)， 0.9 (s， 6H).
47: 'H NMR (CDCl3): S 9,1 (br s， 1H)， 8.1 (br s， 1H)， 7.4 (t， 2H), 6.9 (s， 1H),.6.8 (dd， 1H)，4.8 (d, 1H), 4.5 (m, 2H)， 3.9 (s, 3H), 3.85 (m， 3H), 3.7 (m， 2H), 3.4 (t, 1H)， 2.7 (s， 3H)， 2.6(brs, 4H), 2.4 (s, 3H).52: 'H NMR (DMSO): 5 12.5 (s， IH), 11.8(s, IH), 10.4 (s， IH), 8.4(s， IH), 7.8 (m, 5H)， 7.5(m, 2H), 7.3 (t, IH), 7.1 (t， IH)， 6.7 (s, IH), 4.6 (m, 4H), 3.8 (s, 3H), 2.5 (s， 3H).
108: 'H NMR (DMSO): 5 10.9 (s， IH)， 10.7 (s, IH),訓(xùn)(s, IH)， 8.5 (s, IH), 8.3 (s, IH), 8.1(m, 5H)， 7.8 (m, 5H)， 7.5 (m, 2H)' 7.3 (m, 5H)， 7.1 (m, 5H)， 5.0 (m, 2H), 4.8 (m, IH), 4.6 (m,2H)， 4.3 (m， 2H), 4.1 (t, 2H), 3.9 (m, IH)， 3.7 (m, 4H)， 3.0 (m, 6H), 2.6 (s， 2H), 2.3 (t， IH)，1.8 (s, 3H)， 1.5 (m， 9H)， 1.3 (m, 4H)， 0.8 (m, 6H).
43: 'H NMR (DMSO): 5 12.1 (s, 2H), 11.8 (s, IH), 10.5 (d, IH), 8.3 (s, IH), 8.0 (s, IH)， 7.8(m， 5H), 7.6 (s, IH), 7.2 (d, 2H)， 4.7 (m, 2H), 4.5 (m, 3H), 3.8 (s， 3H)， 3.5 (m, 2H)， 3.2 (m，2H)， 2.9 (s, 3H)， 2.7 (s， 3H), 2.3 (s， 4H).
153: 'H NMR (DMSO): 5 12.3 (brs, IH)， 11.7 prs, IH), 10.5 (brs， IH), 10.0 (brs, IH),8.3 (m, 2H), 7.9 (m, 4H), 7.5 (s, IH), 7.4 (d, IH).， 7.0 (m， IH), 4.5 (m， 5H), 4.1 (m, IH), 3.9(d， IH)， 3.8 (s， 3H), 3.4 (m, 8H), 2.9 (br s' 3H), 2.8 (s, 3H), 2.7 (s， 3H)， 1.8 (s, 2H)， 1.6 (br s,4H), 1.4 (m, 2H)， 1.2 (d, 4H), 0.9 (m, 16H).
45: lH NMR (DMSO): S 12.0 (s, IH), 11.6 (s, IH), 10.8 (s， IH), 8.4 (s， IH)， 8.3 (d, 2H)， 8.0(s， IH), 7.8 (m, 3H), 7.6 (s， IH), 7.4 (t, 1H>, 4.6 (m， 5H)， 3.8 (s, 3H), 3.4 (m, 8H), 2.9 (s， 3H),2.7 (s, 3H).
115: 'H NMR (CDC13): S 9.1 (br s， IH)， 8.4 (s, IH), 8.3 (s， IH), 7.7 (d, IH), 7.5 (m， 3H)， 7.2(m, 3H)， 6.9 (s， 2H), 4.7 (d， IH)， 4.5 (m, 4H), 3.9 (s, 3H), 3.5 (m， 14H), 2.6 (s, 3H), 1.3 (t，3H).
109: NMR (DMSO): S 11.9 (s, IH), 10.5 (s， IH), 10.2 (d, IH), 8.2 (s, IH), 7.7 (m, 6H)，
7.2 (d, IH)， 7.1 (t， IH)， 6.8 (d, IH), 4.6 (m, IH), 4.4 (d, 2H)， 4.3 (m， 2H)， 3.7 (s, 3H)， 2.6 (s，3H).
135: 'H NMR (DMSO): 5 11.4 (br s， 1H)， 11.0 (br s, IH), 10.9 (s, IH), 8.5 (s, IH)， 8.3 (br s'2H), 8.0 (m, 2H), 7.9 (s， IH)， 7.7 (m, 3H)， 7.5 (d， IH)， 7.3 (t, 2H), 4.6 (m, 2H)， 4.5 (d, 2H),
4.3 (m, IH)， 3.8 (s, 3H), 3.7 (d， IH)， 3.5 (t, IH), 2.7 (s， 3H), 1.7 (m, 2H), 0.9 (d, 6H).
24: & NMR (DMSO): S 10.8 (s， IH)， 8.6 (s, IH), 8.3 (m， 5H), 7.9 (s， IH), 7.8 (d, 2H), 7.7(d， IH)， 7.65 (s, IH)， 7.6 (d, 2H)， 7.4 (m， 5H)， 5.3 (s, 2H)， 4.9 (t， IH)， 4.7 (d, IH)， 4.4 (m,IH), 4.0 (m, 2H).ESMS m/z 696 (M鄰-.
25: !H NMR (DMSO): S 8.6 (s， IH)， 8.3 (m, 5H), 7.8 (m, 3H)， 7.6 (m, 3H)， 7.4 (m, IH), 4.8(m, IH). 4.6 (m, IH)， 4.3 (m, IH)， 4.1 (m， 2H).ESMS m/z 605 (M鄰'.
27: lH NMR (DMSO): S 10.9 (s, IH)， 10.3 (s， IH), 8.6 (s, IH), 8.3 (s， IH)， 8.2 (d， IH)， 8.1(m, 2H)， 7.8 (m， 3H), 7.6 (d， IH)， 7.3 (s, IH)， 6.9 (d, IH)， 6.8 (t> IH), 6.4 (d, IH), 4.8 (t， IH)，4.6 (d， IH), 4.3 (m, IH)， 4.0 (m, 2H).
154: 'H NMR (DMSO): 5 10.7 (s, IH)， 10.0 (s, IH)， 8.6 (s, IH), 8.4 (s， IH), 8.2 (s, IH)， 8.1(m， 3H), 7.9 (m， 5H)， 7.7 (m， IH), 7.6 (m, 3H), 7.3 (m， 5H), 5.0 (s， 2H)， 4.8 (t， IH), 4.6 (d,1H), 4.3 (m， 3H), 4.1 (d, 1H), 3.9 (m， 1H), 3.1 (s， 1H), 3.0 (m， 1H)， 2.7 (s, 1H), 2,3 (m' 5H),1.6 (m, 5H)， 1.4 (t， 2H)， 1.2 (d， 3H)， 0.9 (m, 12H).ESMSm/z1134 (M-H)-.
162: 固R (DMSO): 5 11.6 (s, 1H), 10.9 (s， 1H)， 10.5 (s， 1H)， 9.9 (s， 1H)， 8.6 (s, 1H), 8.3(s， 1H), 8.2 (d, IH)， 8.0 (m， 5H), 7.8 (m, 4H), 7.6 (d, 1H)， 7.5 (m, 3H)， 7.1 (t, 1H), 4.8 (t，1H), 4.6 (d, 2H), 4.3 (m， 3H)， 4.1 (d, 1H), 3.9 (m, 1H), 2.4 (m， 2H), 2.3 (m, 3H)1.5 (m， 9H)，1.2 (m, 3H),0.9(m, 12H).ESMSm/z 1044 (M鄰.
79: 'H NMR (CDC13): 5 9.4 (s, 1H), 8.5 (s， 1H)， 8.1(s， 2H), 8.0 (br s, 1H), 7.9 (d， 2H), 7.6 (s,2H), 7.5 (s， 1H)， 7.0 (d， 2H)， 6.9 (d， 3H), 4.7 (d, 1H), 4.5 (m， 2H)， 4.2 (m, 1H)， 3.95 (s, 3H),3.85 (s, 3H), 3.7 (m， 4H)， 3.4 (m， 1H), 2.7 (s, 3H)' 2.5 (s， 3H), 2.4 (t, 2H), 1.1 (s， 9H)， 0.4 (brs, 6H).
80: & NMR (CDC13): S 9.3 (br s, 1H)， 8.3 (s, 1H)， 8.2( br s, 1H)， 8.0 (m, 3H), 7.5 (m, 4H),7.4 (m, 2H)， 7.0 (m, 4H)， 4.7 (d, 1H), 4.6 (m， 1H)， 4.4 (m, 1H), 4.2 (m， 5H), 3.9 (s, 3H)， 3.4(m, 1H)， 2.7 (s， 3H), 2.9 (s， 3H)， 2.3 (m, 2H), U (s, 9H)， 0.4 (br s， 6H).
81: 'H NMR (CDC13): S 10.5 (s， 1H)， 8.8 (s， 1H), 8.6 (d, 2H), 8.0 (d， 2H)， 7.8 (d, 2H), 7.4(m, 3H)， 7.3 (d, 2H), 7.0 (m， 2H)， 6.9 (d, 2H), 4.6 (m， 3H)， 4.4 (m， 2H)， 3.9 (m， 4H), 3.4 (m，1H), 2.7 (s， 3H), 2.5 (s' 3H)， 1.0 (s， 9H), 0.3 (s， 6H).
82: NMR (CDC13): S 8.5 (s， 2H)， 8.4 (s， 1H)， 8.2 (s， 1H), 8.0 (m, 4H)， 7.6 (m, 4H)， 7.5 (s，1H)， 7.3 (s， 1H), 7.1 (s, 2H), 4.7 (m， 3H), 4.55 (m， 1H), 4.45 (m, 1H)， 3.9 (m, 4H), 3.4 (m,1H), 2.7 (s, 3H), 2.5 (s, 3H), 1.0 (s， 9H)， 0.4 (br s, 6H).
83: 'H NMR (CDC13): S 9.6 (s， 1H)， 8.4 (s, 1H)， 8.1 (s， 2H), 8.0 (m, 1H)， 7.8 (s， 1H), 7.6 (m'2H)， 7.5 (s， 1H)， 7.35 (q， 2H), 7.0 (s， 1H)， 4.7 (d， 1H), 4.55 (m, 1H)， 4.45 (m, 1H), 3.9 (m,4H), 3.4 (m， 1H), 2.7 (s, 3H), 1.0 (s， 9H), 0.4 (br s, 6H).
89: 'H NMR (CDC13): 5 9.3 (br s， 1H)， 8.4 (brs， 1H)， 8.2 (s, 1H)， 8.0 (br s, 2H)， 7.5 (m, 9H),
7.2 (s, 1H)， 7.1 (d， 1H), 6.9 (s, 1H), 5.1 (s, 2H), 4.7 (d， 1H)， 4.55 (m, 1H)， 4.45 (m, 1H)， 3.9(m， 4H)， 3.4 (m， 1H)， 2.7 (s， 3H), 1.05 (s， 9H)， 0.4 (br s， 6H).
卯NMR (CDC13): S 9.6 (br s, 1H), 8.5 (br s, 1H)， 8.2 (s, 1H)， 8.0 (m， 2H)， 7.5 (m， 8H),
7.3 (m, 2H)， 7.1 (d, 1H)， 6.6 (d, 1H)， 5.2 (s， 2H)， 4.7 (d， 1H), 4.55 (m, 1H)， 4.45 (m, 1H)， 3.9(m, 4H)， 3.4 (m， 1H)， 2.7 (s， 3H)， 1.05 (s， 9H), 0.3 (br s， 6H).
163: 'H NMR (DMSO): S 12.0 (s, 1H), 11.6 (s, 1H)， 10.4 (s， 1H)， 10.2 (s， 1H), 8.4 (s, 1H)，8.1 (m, 4H), 7.9 (m, 3H)， 7.5 (m， 3H), 7.2 (d, 2H)， 4,9 (s, 2H), 4.7 (m, 1H), 4.6 (m， 1H)， 4.5(m, 1H), 3.9 (m, 4H), 3.6 (m, 1H)， 2.7 (s, 3H), 2.5 (s, 3H)， 1.1 (s， 9H), 0.7 (s， 6H).
92: 'H NMR (DMSO): 5 12.0 (s， 1H)， 10.4 (s， 1H), 10.2 (s, 1H), 8.3 (s, 1H), 7.9 (s, 1H)， 7.8(m， 4H), 7.5 (d, 2H), 7.25 (s， 1H)， 7.15 (s, 1H), 6.9 (m, 3H), 4.7 (m， 3H), 4.6 (m， 1H), 4.5 (m.1H), 3.9 (m, 2H)， 3.8 (m， 4H)， 3.5 (m， 1H), 3.2 (m， 2H)， 2.9 (s, 3H)， 2.7 (s， 3H), 2.6 (s， 3H).
98: 'H畫R(CDCl3): 5 8.3 (brs, 1H), 8.1 (d， 1H)， 8.0 (brs, 1H)， 7.95 (s， 1H), 7.85 (d, 2H)，7:155 (s, 1H)， 7.6 (d， 2H), 7.5 (s， 1H), 7.4 (m, 2H)， 7.0 (s， 1H), 6.85 (d， 2H), 4.8 (m， 3H)， 4.55(m， 1H), 4.45 (m, 1H), 3.9 (m, 6H), 3.4 (m, 1H)， 2.7 (s， 3H)， 2.5 (s, 3H), 2.4 (m, 2H), 1.05 (s，9H), 0.4 (br s， 6H).
110: 'H畫R(C3D60):5 U.3(brs, lH),9.7(s, 1H),9.6(d, 1H), 8.2(s, 1H), 7.9 (m, 2H)，7.7 (d， 2H), 7.6 (m, 3H)' 7.5 (d， 1H)， 7.2 (m， 3H)， 6.9(m， 3H)， 6.8 (s, 1H)' 4.9 (m, 2H), 4.7(m, 1H), 4.6 (m, 1H), 4.5 (m, 1H), 3.8 (m， 25H), 3.5 (m， 1H), 3.2 (m， 2H), 2.7 (s, 3H)， 2.3(m, 4H), 2.0 (s， 3H).
113: 'HNMR(C3D60): S 11.3 (brs, 1H), 10.1 (s， lH)，9.9(s, 1H), 8.4 (s, 1H), 7.9 (m, 3H),7.7 (m, 2H), 7.5 (m, 3H)， 7.4 (m, 1H), 7.2 (s, 1H), 7.1 (d, 2H)， 6.9 (t， 1H), 5.0 (s, 2H)， 4.6 (d，1H), 4.5 (m, 1H), 4.4 (m， 1H), 3.9 (d, 1H)， 3.7 (s， 3H)， 3.4 (m, 1H), 2.6 (s, 3H)， 2.4 (s， 3H).
114: ^NMR(DMSO): 5 11.9(brs， IH)， U.7(s， 1H)， 10.4 (d, 1H)， 10.2 (t, 1H), 8.3 (s,1H), 7.9 (s, 1H)， 7.S (m， 7H)， 7.5 (m， 2H)， 7.0 (m, 6H), 4.9 (s， 2H), 4.6 (m, 1H)， 4.5 (m， 1H)，
4.4 (m, IH), 3.9 (d， 1H)， 3.8 (s， 3H), 3.7 (m， 2H)， 3.5 (m， 25H)， 2.9 (s, 3H), 2.7 (s' 3H), 2.2(m， 2H).
159: 'H NMR (DMSO): 5 12.0 (m， 1H), 11.9 (br s, 1H), 8.3 (m, 2H), 8,0 (m, 4H), 7.6 (m,2H), 7.3 (s， 1H), 7.1 (d， 1H), 6.9 (s, 1H), 4.5 (m， 3H), 4.3 (m， 2H), 3.9 (d, 1H)， 3.8 (s， 6H)，
3.5 (m， 8H), 3.2 (m, 4H), 2.7 (s, 3H)， 2.3 (m, 4H)， 1.4 (m， 9H), 1.1 (m, 3H), 0.8 (m， 12H).
131: 'HNMR(DMSO): 5 11.9 (s, 1H), 10.2 (s, 1H)， 7.7 (m， 1H), 7.5 (s， 1H)， 7.0 (m， 3H),6.7 (d, 1H), 4.7 (m, 1H), 4.4 (d, 1H)， 4.3 (m， 2H)， 3.9 (d, 1H), 3.8 (s， 3H), 2.6 (s， 3H).
129: 'HNMR(DMSO): 5 11.9 (s, 1H), 10.2 (s， 1H), 7.8 (m, 4H)， 4.5 (m, 2H)， 4.3 (m, 1H)，3.9 (s, 3H), 3.8 (d, 1H), 3.7 (s, 3H), 3.4 (t， 1H), 2.5 (s， 3H).
136: 'H NMR (DMSO): 5 11.9 (s, 1H), 10.2 (s, 1H)， 7.65 (d, 2H), 7.55 (s， 1H)， 7.3 (d， 1H),7.1 (dd, 1H)， 4.6 (m, 1H)， 4.5 (m， 1H)， 4.3 (m, 1H), 3.85 (m, 1H), 3.8 (s, 3H), 3.75 (s, 3H)，3.5 (m， 1H)， 2.6 (s， 3H).
137: 'H NMR (DMSO): S 11.9 (s， 1H)， 10.2 (s, 1H)， 8.0 (m， 1H), 7.5 (m, 3H), 7.2 (s, 1H)，
7.0 (m, 1H), 4.6 (m， 1H), 4.5 (m, 1H), 4.4 (m, 1H), 3.9 (m， 2H), 3.8 (d, 1H), 3.7 (s， 3H)， 3.4(m, 1H)， 2.6 (s， 3H)， 2.4 (m, 2H), 1.3 (s, 9H).
143: NMR (DMSO): S 11.9 (s, 1H)， 10.2 (s， 1H), 8.0 (m, 2H), 7.7 (m, 3H), 7.3 (s， 1H),
7.1 (d， 1H)， 4.6 (m, 1H)， 4.5 (m， 1H), 4.3 (m， 1H), 4.2 (m， 2H)， 3.9 (d， 1H), 3.8 (s， 3H), 3.4(m, 1H), 3.3 (m， 2H)， 2.6 (s, 3H).
148: 'H NMR (DMSO): S 11.9 (s, 1H)， 10.1 (s， 1H)， 7.7 (d， 2H), 7.5 (s， 1H), 7.3 (s， 1H)， 7.1(d， 1H), 4.5 (m， 1H), 4.4 (d， 1H)， 4,3 (m, 3H), 3.8 (m, 1H)， 3.7 (s, 3H), 3.5 (m, 3H)， 2.8 (s,6H)， 2.5 (s, 3H).
150: ，H NMR (DMSO): S 10.3 (s, 1H), 9.4 (s, 1H), 7.8 (m， 1H), 7.5 (m, 2H)， 7.1 (s, 1H)， 6.9(dd， 1H)， 4.5 (m, 4H), 4.3 (m， 1H)， 3.8 (s, 3H), 3.75 (d, 1H)， 3.5 (m， 1H), 3.1 (m, 2H), 2.75(s, 6H), 2.65 (s， 3H)， 2.1 (m, 2H).151: 'H NMR (DMSO):S 11.9 (s, 1H)， 10.2 (s， IH), 7.7 (d, 2H), 7.65 (s, IH)， 7.55 (s， IH)，7.25 (d， IH)， 4.6 (m， IH)， 4.5 (m, IH), 4.4 (m, IH), 3.9 (d, IH)， 3.8 (s， 3H)， 3.5 (m, IH)， 3.3(br m, 8H)， 2.9 (s, 3H)， 2.6 (s, 3H).
251: !H NMR (CDC13): 5 12.0 (s， IH), 7.9 (m, IH)， 7.7 (d， IH)， 7.6 (s， IH)， 7.4 (s， IH)， 7.2(dd， IH)， 4.6 (m， 3H)， 4.4 (m， 2H), 3.9 (m, IH), 3.8 (s， 3H), 3.7 (m, IH), 3.6 (m, 2H)， 3,4 (m,4H), 3.2 (m， 2H), 3.0 (m， 4H), 2.9 (s， 6H), 2.7 (m' 4H)， 2.6 (s, 2H)， 1.6 (m, 2H)， 1.3 (m, 8H),0.9 (q, 2H).
227: 'H NMR (CDC13): 5 10.3 (s, IH), 8.7 (s, IH), 7.7 (d, 2H)， 7.5 (m， 3H)， 7.1 (m, 2H), 6.9(d， 2H)， 4.6 (m， 5H)， 4.25 (m, 2H), 4.15 (m, 2H), 3.9 (s， 3H), 3.4 (m, IH), 3.1 (s， 2H), 2.9 (m,12H)， 2.7 (s, 3H), 2.5 (s, 6H)， 2.3 (s, 3H).
230: 'H NMR (CDC13): 5 10.3 (s， IH)， 8.6 (s， IH), 7.7 (d, 2H), 7.5 (m， 3H)， 7.1 (m， 2H)， 6.9(d, 2H)， 6.7 (s， 2H)， 4.7 (m， 4H), 4.1 (m, 4H)， 3.9 (s， 3H), 3.5 (m， 2H), 3.4 (m, IH), 3.2 (m,4H)， 3.1 (s, 2H)， 2.8 (m， 5H)， 2.4 (m, 10H), 2.2 (m, 7H).
166: ESMS m/z 532 (M-町.
165: ESMS m/z 920 (M-H)-.
9: ESMS m/z 966 (M-H)-.
17: ESMS m/z 753 (M-H)-.
19: ESMS m/z 696 (M-H)-.
50: ESMS m/z 800 (M-H)-.
174: 'H NMR (CDC13): S 8.4 (s, IH), 7.9 (m， IH), 7.5 (m, 2H)， 7.2 (m, 2H), 4.75 (m， 3H)，
4.6 (m, IH), 4.45 (m， IH)， 3.9 (m, 4H), 3.4 (m， IH)， 2.7 (s, 3H)， 1.05 (s, 9H)， 0.4 (br s, 6H);ESMS m/z 627 (M-H)-.
176: NMR (CDC13): S 8.4 (s， IH), 7.9 (m, IH)， 7.5 (m， 2H)， 7.1 (m， 2H)， 4.7 (m, 3H), 4.6(m， IH), 4.45 (m, IH), 3.9 (m， 4H), 3.4 (m, IH)， 2.7 (s, 3H)， 1.05 (s， 9H), 0.4 (br s， 6H).
94: 'H NMR (CDC13): S 8.5 (d， 2H), 8.2 (d, 2H), 7.9 (s, 2H), 7.8 (d, 2H)， 7.5(m， 2H)， 7.4 (m，4H)， 6.8 (d, 2H)， 4.7 (d, IH)， 4.5 (m, IH), 4.4 (m， IH)， 3.9 (叫6H)， 3.3 (m, IH), 2.9 (t, 2H)，
2.7 (s， 3H)， 2.5 (s， 3H)， 2.1 (m， 2H)， 1.6 (s， 6H), 1.0 (s， 9H), 0.3 (br s， 6H).ESMS m/z 1038 (M-H)-.實(shí)施例22.1合成方法<formula>formula see original document page 98</formula>
2.1a化合物1的合成
式I化合物容易這樣制備，使用氫化鈉，在N,N-二甲基甲酰胺(DMF)或四氫呋喃(THF)中，使適當(dāng)?shù)穆莪h(huán)丙基環(huán)己二烯基類似物(化合物B)與活化的雜環(huán)化合物A反應(yīng)。所得化合物28然后用適當(dāng)?shù)呢沾崽幚?，例如氫氯酸，轉(zhuǎn)化為化合物29。通過就地活化作用與化合物29偶聯(lián)，得到化合物1，即式I化合物。
其他式I化合物是按照所公開的工藝制備的，利用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的工藝加以4務(wù)改，以制備另外的類似物，例如還原、氧^1匕、加成、水性萃取、蒸發(fā)和純化。
2.1b化合物A的合成
在0°C下，向5-硝基-2-羧酸(0.83g， 4.0mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(60mL)溶液加入EDC (1.15g， 6.0mmo1)。將所得懸液在0°C下攪拌45min,此時EDC已經(jīng)完全溶解。加入4-硝基苯酚(0.83g， 6.0mmo1)和DMAP (0.73g， 6.Ommo1),在環(huán)境溫度下攪拌所得混合物。13小時后，將混合物用乙酸乙酯稀釋，用10%檸檬酸水溶液洗滌兩次，然后用水和鹽水洗滌，然后經(jīng)Na2S04干燥，過濾，在真空中濃縮。所得殘余物經(jīng)過硅膠快速柱色譜純化(含7%乙酸乙酯的二氯甲烷)，得到1.02g(78%)A,為黃色固體'HNMR(CDCl3)S9.0(br
s, 1 H), 8.2 (d， 2 H), 7.8 (m， 2 H), 7.4 (d, 2 H)， 7.3 (s， 1 H), 6.8 (s, 1 H).
2.1c化合物28的合成
在-40。C下，向B (20mg, 0.08mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(1.0mL)溶液加入氫化鈉(4.0mg， O.lmmol，含60%的油)的N，N-二甲基甲酰胺(l.OmL)懸液。使所得混合物緩慢(1.5h)溫?zé)嶂?°C，然后冷卻回到-40。C。加入A(37mg，0.1mmo1)，使混合物緩慢(1.5h)溫?zé)嶂?°C,保持20min。將混合物冷卻至-30。C，用乙酸(10fiL)猝滅反應(yīng)，攪拌10min，用乙酸乙酯稀釋，然后用水和鹽水洗滌。分離有機(jī)層，經(jīng)MgS04干燥，過濾，在真空中濃縮。經(jīng)過硅膠快速柱色譜純化(含50%至100%乙酸乙酯的二氯甲烷)，得到16.3mg (43%) 28,為淺黃色固體
'H NMR (CDC13) S 11.3 (br s, 1 H)， 9.4 (br s， 1 H), 7.4 (m， 2 H)， 7.1 (s，1 H)， 6.95 (s, 1 H)， 6.8 (s, 1 H), 4.4 (s, 2 H)， 3.8 (s， 3 H), 3.8 (m， 1 H)， 2.6 (s， 3 H)， 2.4 (dd， 1H)， 1.4 (m， 1 H). ESMS m/z 4卯(M - H)-.
2.1d化合物29的合成
將28 (50mg， 0.103mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(1.0mL)溶液用lmL無水氳氯酸(l.OM 二噁烷溶液)處理。將所得溶液在環(huán)境溫度下攪拌30min,然后濃縮溶劑。所得殘余物經(jīng)過硅膠快速柱色譜純化(含50%至100%乙酸乙酷的二氯甲烷)，得到50mg(100%)29,為淺黃色
固體'H NMR (CDC13) S 11.3 (bi" s, 1 H), 9.4 (br s， 1 H)， 7.4 (m， 2 H)， 7.1 (S> 1 H)， 6.95 (s, 1H), 6.8 (s, 1 H)， 4.4 (s, 2 H), 3.8 (s, 3 H), 3.8 (m, 1 H), 2.6 (s, 3 H)， 2.4 (dd， 1 H)， 1.4 (m, 1H). '
2.1e化合物1的合成
在-70。C下，向29 (66mg， 0.136mmol)的無水二氯甲烷(10mL)溶液加入4-硝基苯基氯甲酸酯(55mg， 0.273mmo1)，然后加入三乙胺(27mg,0.273mmo1)。使所得混合物緩慢溫?zé)帷?小時后，將混合物置于水浴中， 一次性加入胺C (82mg， 0.273mmo1)。將所得混合物在環(huán)境溫度下攪拌過夜。22小時后，將混合物倒入飽和NaHC03水溶液中。分離含水層，用二氯甲烷萃取。合并有機(jī)萃取液，經(jīng)MgS04干燥，過濾，在真空中濃縮。經(jīng)過硅膠快速柱色譜純化(含1%至2%甲醇的二氯甲烷)，得到42mg(38%) 1,為淺黃色固體
'H NMR (CDC13) S 11.0 (s, 1 H)， 8.6 (s, 1 H)， 8.4 (d, 1H)， 8.2 (br d, 1 H)， 7.6 (m， 2 H)， 6.8 (m, 1 H), 4.8 (m, 1 H), 4.7 (m， 1 H)， 4.5 (m， 1 H)， 4.1(m, 2 H)， 3.9 (s， 3 H)， 3.4 (m， 5 H)， 2.7 (d, 3 H)， 1.6 (s, 6 H)， 1.4 (s， 9 H)， 1.2 (m， 4 H), 0.9(m, 9 H).
按相似的方式制備下列化合物
220: lH NMR (CDCl3): S 11.4 (d, 1H), 8.7 (s, 1H)， 8.4 (， dd, 1H)， 8.1 (br s, 1H)， 7.75 (d， 1H), 7.65 (s,1H), 5.8 (br s, 2H), 4.7 1H), 4.5 (m, 2H), 4.2 (m， 1H)， 3.9 (s' 3H), 3.4 (m, 1H), 3.0 (s， 2H), 2.75(s， 3H)， 2.65 (s, 3H).ESMSm/z613(M-Hy.
222: 'H NMR (CDC13): S 10.3 (s, 1H)， 8.7 (d， 2H), 8.4 (d, 1H), 8.1 (m, 1H), 7.7 (d, 2H)' 7.6 1H),6.9 (d， 2H), 4.9 (d, 1H)， 4.7 (m, 1H)， 4.5 (m， 3H), 3,95 (s， 3H), 3.85 (s， 3H)， 3.6 (m， 1H), 3.4 (m, 1H),3.1 (s, 3H), 2.7 (s, 3H), 2.3 (s, 3H).ESMS m/z 745 (M隱H)-.
224: ESMS rn/z 899 ,.. 235:畫^ 913 ,..
229: ESMS m/z 598 (M-町. 8: ESMS ^ 856 ^鄰'.
233: ESMSm/z816(M-H)-. " 232:ESMSnVz612(M-H).
234: ESMS m/乙952 (M-H)-.<formula>formula see original document page 101</formula>
3.1a化合物239的合成
式I化合物容易這樣制備，使用氫化鈉，在N,N-二甲基甲酰胺(DMF)或四氫呋喃(THF)中，使適當(dāng)?shù)穆莪h(huán)丙基環(huán)己二烯基類似物(化合物B)與活化的雜環(huán)化合物A反應(yīng)。所得化合物28然后用適當(dāng)?shù)柠u代酸處理，例如氫氯酸，轉(zhuǎn)化為化合物29。將化合物29活化為4-硝基苯基酷，與化合物C偶聯(lián)，得到化合物239，即式I化合物，
其他式I化合物是按照所公開的工藝制備的，利用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的工藝加以^務(wù)改，以制備另外的類似物，例如還原、氧化、加成、水性萃取、蒸發(fā)和純化。3.1b化合物A的合成
在0°C下，向5-硝基-2-羧酸(0.83g， 4.0mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(60mL)溶液加入EDC (1.15g， 6.0mmol)。將所得懸液在0°C下攪拌45min，此時EDC已經(jīng)完全溶解。加入4-硝基苯酚(0.83g， 6.0mmol)和DMAP (0.73g, 6.0mmol)，在環(huán)境溫度下攪拌所得混合物。13小時后，將混合物用乙酸乙酯稀釋，用10%檸檬酸水溶液洗滌兩次，然后用水和鹽水洗滌，然后經(jīng)Na2S04干燥，過濾，在真空中濃縮。所得殘余物經(jīng)過硅膠快速柱色譜純化(含7%乙酸乙酯的二氯甲烷)，得到1.02g (78%) A，為黃色固體& NMR (CDC13) S 9.0 (br
s, 1 H)， 8.2 (d, 2 H), 7.8 (m， 2 H)' 7.4 (d， 2 H), 7.3 (s, 1 H)， 6.8 (s, 1 H).
3.1c化合物28的合成
在-40。C下，向B (20mg， 0.08mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(1.0mL)
溶液加入氫化鈉(4.0mg， O.lmmol,含60%的油)的N，N-二甲基曱酰胺
(l.OmL)懸液。使所得混合物緩慢(1.5h)溫?zé)嶂?°C,然后冷卻回到
-40。C。加入A(37mg， O.lmmol)，使混合物緩慢(1.5h)溫?zé)嶂?。C，保
持20min。將混合物冷卻至-30。C，用乙酸(10jiL)猝滅反應(yīng)，攪拌10min，
用乙酸乙酯稀釋，然后用水和鹽水洗滌。分離有機(jī)層，經(jīng)MgS04干燥，
過濾，在真空中濃縮。經(jīng)過硅膠快速柱色譜純化(含50%至100%乙
酸乙酯的二氯甲烷)，得到16.3mg (43%) 28，為淺黃色固體
'H NMR(CDC13) 5 11.3 (br s， 1 H)， 9.4 (br s, 1 H), 7.4 (m, 2 H), 7.1 (s,1 H), 6.95 (s, 1 H)， 6.8 (s， 1 H), 4.4 (s, 2 H)， 3.8 (s, 3 H)， 3.8 (m， 1 H)， 2.6 (s， 3 H), 2.4 (dd， 1H), 1.4 (m， 1 H). ESMS m/z 490 (M - H)-.
3.1d化合物29的合成
將28 (50mg， 0.103mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(1.0mL)溶液用lmL無水氫氯酸(l.OM 二噁烷溶液)處理 將所得溶液在環(huán)境溫度下攪拌30min，然后濃縮溶劑。所得殘余物經(jīng)過硅膠快速柱色譜純化(含50%至100%乙酸乙酯的二氯甲烷)，得到5#mg(100%)29，為淺黃色固體'H NMR (CDC13) 5 11.3 (br s， 1 H)， 9.4 (br s, 1 H), 7.4 (m, 2 H)， 7.1 (s, 1 H), 6.95 (s， 1 H), 6.8 (s， 1 H)， 4.4 (s, 2 H), 3.8 (s， 3 H), 3.8 (m, 1 H), 2.6 (s, 3 H), 2.4 (dd， 1 H)， 1.4 (m, 1H).
3.1e化合物239的合成
在國78。C下，向29 (24mg， 0.05mmol)的二氯甲烷(5mL)懸液加入 4-硝基笨基氯甲酸酯(40mg， 0.2mmol)和三乙胺(28nL， 0.2mmo1)。使反 應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝兀缓笤谡婵罩袧饪s。將所得殘余物用二乙醚洗 滌，然后經(jīng)真空干燥，得到9，為黃色固體。將黃色固體9 (19mg， 0.029mmol)溶于二氯甲烷(3mL)，加入胺C (20mg， 0.029mmo1)，然后 加入三乙胺(8.3pL，0.06mmo1)。將反應(yīng)攪拌16小時，然后在真空中濃 縮。所得殘余物經(jīng)過硅膠快速色譜純化，用40:1 二氯甲烷甲醇洗脫， 得到12mg (45%) 239，為黃色固體'HNMR
(CDC13): S 9.9 (s, 1H)， 9.7 (s, 1H)， 8.7 (s， 1H)， 8.4 (dd， 1H)， 8.3 (d， 1H)， 8.1 (br s, 1H)， 7.75(d, 1H)， 7.65 (s, 1H), 6.7(m， 2H), 4.75 (m， 1H)， 4.55 (m, 2H)， 3.9 (m， 4H)， 3.8 (m， 4H), 3.5 (m, 18H), 3.0 (m, 2H), 2.7 (s， 3H)， 2.5 (m, 4H), 1.7 (m, 2H), 1.4 (m， 10H), 1.0 (m， 2H). ESMSm/z 1100(M鄰-.
按相似的方式制備下列化合物
238: !H NMR (CDC13): S 10.3 (s， 1H), 8.7 (s, 1H), 8.5 (m, 1H), 8.4 (d， 1H)， 8.2 (br s， m), 7.7 (m, 4H)， 7.2 (m, 1H)， 4.8 (m, 1H)， 4.6 (m, 2H), 3.9 (m, 4H), 3.7 (m， 2H), 3.4 (m， 1H)， 3.2 (m， 2H), 2.9 (s， 3H)， 2.5 (s, 3H).
ESMSm/z710(M-Hy.
242: 'H NMR (CDC13): 5 9.7 (br s， 1H)， 9.0 (br s， 1H)， 8.6 (s， 1H)， 8.4 (d, 1H)， 8.1 (br s， 1H), 7.7 (m， 1H)， 7.5 (m, 1H), 7.4 (m， 1H)， 4.7 (d， 1H)， 4.5 (m， 2H)， 3.9 (s， 4H)， 3.8 (m, 1H), 3.6 (m， 1H), 3.4 (m, 1H)， 3.0 (m, 5H)， 2.6 (s, 3H)， 2.5 (m, 2H), 1.5 (m, 9H)， 1.4 (m, 6H).
244: 'H艱R (CDC13): S 8.6 (br s, 1H), 8.4 (d， 1H), 8.1 (m, 1H)， 7.7 (m, 6H)， 6:9 (m, 2H), 4.75 (m,H)， 4.55 (m, 2H), 4.1(m， 2H), 3.9 (m, 4H), 3.7 (m, 12H), 3.5 (m, 2H)， 3.4 (m, 3H), 3.2 (m, 3H)，3.1 (m， 5H)， 2.7 (s， 6H)，2.1 (m， 2H), 1.5 (s,6H).
248: 'H NMR (CDC13): S 9.9 (s, 1H)， 9.3 (br s， 1H)， 8.1 (m, 1H), 7.5 (m, 3H), 7.1 (m， 2H), 4,8 (d, 1H), 4.5 (m, 2H)， 3.95 (s， 3H), 3.85 (s, 3H)， 3.8 (m, 1H)， 3.7 (m, 2H)， 3.4 (m， 1 H), 3.0 (m, 8H)， 2.5 (m, 2H), 1.5 (dd， 6H)， 1.3 (s， 9H).
250: 'H NMR (CDC13): S 9.4 (s， 1H)， 8.6 (s, 1H), 8.3 (m, 1H)， 8.1 (m， 1H), 7.9 (m, 2H), 7.5 (m， 7H), 7.1 (m， 4H), 4.8 (m, 1H)， 4.5 (m， 2H), 4.3 (m，lH)， 4.95 (s, 3H)， 4.85 (s, 3H), 4.7 (m, 1H)， 3.4 (m， 1H)， 3.1 (m， 4H), 2.7 (s, 3H), 2.2 (s， 3H)， 1.5 (s， 6H).
272: 'HNMR (DMSO): 5 12.0 (m， 1H)， 8.8 (br s, 1H)， S3 (m, 1H)， 7.9 (m, 3H), 7.7 (m， 3H), 6.9 (m， 2H), 4.85 (s， 1H)， 4.7 (m, 1H)， 4.5 (m， 3H)， 3.8 (m， 4H)， 3.6 (m, 4H), 3.4 (m, 5H), 3.1 (m, 6H), 2.7 (s, 3H)， 2.2 (m， 2H)， 1.4 (s, 6H).實(shí)施例4 增殖測定法
選擇用于測量細(xì)胞毒性化合物的生物活性的測定法是成熟的3H-胸苷增殖測定法。這是一種適宜于量化細(xì)胞增殖的方法，因?yàn)樗ㄟ^ 測量外源性放射性標(biāo)記的311-胸苷的結(jié)合，評價DNA合成。這種測定 法是非?？稍佻F(xiàn)的，能夠適應(yīng)大量的化合物。
在含有10。/。熱滅活的胎牛血清(FCS)的RPMI培養(yǎng)基中培養(yǎng)前髓 細(xì)胞的白血病細(xì)胞HL-60。在研究當(dāng)天，收集細(xì)胞，洗滌，按0.5xl06 細(xì)胞/mL的濃度再懸浮在含有10% FCS的RPMI中。將100jiL細(xì)胞 懸液加入到96孔平板中。進(jìn)行阿霉素或供試化合物的系列稀釋(3倍 增量)，每孔加入100pL化合物。最后，每孔加入10pL 100fxCi/mL 3H-胸苷，將平板培育24小時。利用96孔收獲器(Packard Instruments) 收獲平板，在Packard Top Count計(jì)數(shù)器上計(jì)數(shù)。根據(jù)四參數(shù)邏輯曲 線測定3H-胸苷的結(jié)合，作為藥物體積摩爾濃度的函數(shù)，使用Prism 軟件測定ICso值。
本發(fā)明化合物在上述測定法中的IC5o值一般從約lpM至約 100nM,優(yōu)選從約10pM至約10nM。
在本說明書中提到或涉及的每份專利申請、專利、出版物和其他 公開的文獻(xiàn)都全部引用在此作為參考，相當(dāng)于每份單獨(dú)的專利申請、 專利、出版物和其他公開的文獻(xiàn)都是具體和單獨(dú)引用在此作為參考的。
盡管已經(jīng)參照具體實(shí)施方式
描述了本發(fā)明，不過應(yīng)當(dāng)為本領(lǐng)域技 術(shù)人員所理解的是，可以進(jìn)行各種改變，可以代替等價方式，而不背 離本發(fā)明和所附權(quán)利要求的真正精神和范圍。另外，可以進(jìn)行很多修 改，以適應(yīng)特定的情形、材料、物質(zhì)組成、方法、方法步驟，適應(yīng)本 發(fā)明的目的、精神和范圍。所有這類修改都打算屬于所附權(quán)利要求的 范圍。
權(quán)利要求
1、具有下列結(jié)構(gòu)的化合物其中X是O并且Z獨(dú)立選自O(shè)和NR23，其中R23是選自H、取代或未取代的C1-6雜烴基的成員；R1是CO2CH3，R2是H、或取代或未取代的C1-6烴基；R3是選自(＝O)和OR11的成員，其中R11是選自H、C(O)R12、C(O)OR12、C(O)NR12R13、p(O)(OR12)2、和SiR12R13R14的成員，其中R12、R13和R14是獨(dú)立選自H、取代或未取代的C1-24烴基、取代或未取代的C1-24雜烴基和取代或未取代的1-3環(huán)芳基的成員，其中R12和R13與它們所連接的氮原子一起可選地連接構(gòu)成4至6元取代或未取代的雜環(huán)烴基環(huán)系，可選地含有兩個或多個雜原子，并且一個或多個R12、R13和R14可選地包含酶可裂解的基團(tuán)；R4和R5是獨(dú)立選自H、NO2、NR15R16、NHC(O)R15、和OR15的成員，其中R16是H，并且R15獨(dú)立地選自H、取代或未取代的C1-24烴基、取代或未取代的C1-24雜烴基、取代或未取代的1-3環(huán)芳基、取代或未取代的具有選自N、O和S的1-4個雜原子的1-3環(huán)雜芳基、和取代或未取代的肽基，R6是單鍵，它可以存在也可以不存在，當(dāng)存在時，R6和R7連接構(gòu)成環(huán)丙基環(huán)；并且R7是CH2-X1或-CH2-，在所述環(huán)丙基環(huán)內(nèi)與R6連接，其中X1是鹵素，并且其中所述取代的烴基、取代的雜烴基和取代的雜環(huán)烴基被-OR′、＝O、＝NR′、＝N-OR′、NR′R″、SR′、-鹵素、SiR′R″R′″、OC(O)R′、C(O)R′、CO2R′、CONR′R″、OC(O)NR′R″、NR″C(O)R′、NR′-C(O)NR″R′″、NR″C(O)2R′、NR-C(NR′R″)＝NR″″、-NR-C(NR′R″)＝NR′″、-S(O)R′、S(O)2R′、-NR′R″、-NRSO2R′、CN和-NO2中的一個或多個取代，其中R′、R″、R′″和R″″各自優(yōu)選地獨(dú)立指氫、取代或未取代的C1-24雜烴基、取代或未取代的1-3環(huán)芳基、取代或未取代的C1-24烴基、烴氧基或硫代烴氧基或C1-24芳基烴基，并且當(dāng)所述取代的芳基和取代的雜芳基被鹵素、OR′、＝O、＝NR′、＝N-OR′、NR′R″、SR′、鹵素、SiR′R″R′″、OC(O)R′、C(O)R′、CO2R′、CONR′R″、OC(O)NR′R″、NR″C(O)R′、NR′-C(O)NR″R′″、NR″CO2R′、-NR-C(NR′R″)＝NR′″、S(O)R′、SO2R′、SO2NR′R″、NROR′、CN和-NO2、R′、-N3、CH(ph)2、氟(C1-C4)烴氧基和氟(C1-C4)烴基中的一個或多個取代時，其中R′、R″、R′″和R″″獨(dú)立地選自氫、(C1-C8)烴基和雜烴基、未取代的芳基和雜芳基、(未取代的芳基)-(C1-C4)烴基和(未取代的芳基)氧基-(C1-C4)烴基。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中！^不是CF3。
3、 根據(jù)權(quán)利要求l的化合物，其中R"是Cl或Br。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中112是《13。
5、 具有下列結(jié)構(gòu)的化合物<formula>formula see original document page 4</formula>其中x是o，并且z選自o和nr23，其中r"是選自h、取代或未取代的Cw雜烴基成員；W是h、取代或未取代的c廠C6烴基、或c(o)or9，其中W是h、取代或未取代的d-C24烴基；R2是CBb;R3是選自(-0)和or11的成員，其中r"是選自h、 c(o)r12、 c(o)or12、 c(0)nr12r13、 p(0)(or12)2、和SiR"R"R"的成員，其中r12、 r"和r"是獨(dú)立選自h、取代或未取代的d.24烴基、取代或未取代的Ci24雜烴基和取代或未取代的1-3環(huán)芳基的成員，其中r12和r13與它們所連接的氮原子一起可選地連接構(gòu)成6元取代或未取代的雜環(huán)烴基環(huán)系，可選地含有兩個或多個氮原子，并且一個或多個r12、 r"和r"可選地包含酶可裂解的基團(tuán)；r4和rs是獨(dú)立逸自h、 no2、 nr15r16、 nhc(o)r15、和or15的成員，其中r"是h，并且r"是h、取代或未取代的C^4烴基、取代或未取代的Q-24雜烴基、取代或未取代的1-3環(huán)芳基、取代或未取代的1-3環(huán)雜芳基、取代或未取代的肽基；Rs是單鍵，它可以存在也可以不存在，當(dāng)存在時，W和I^連接構(gòu)成環(huán)丙基環(huán)；并且f是CH2-^或-CH2-，在所述環(huán)丙基環(huán)內(nèi)與W連接，其中Xi是閨素、并且其中所述取代的烴基、取代的雜烴基和取代的雜環(huán)烴基被-OR'、-O、 =NR'、 -N誦OR'、 NR'R"、 SR'、-卣素、SiR'R"R"'、 OC(O)R'、C(O)R' 、 COW 、 CONR'R〃 、 OC(O)NR'R" 、 NR"C(O)R'、NR'-C(0)NR〃R'〃 、 NR〃C(0)2IT 、 NR-C(NR'R〃)=NR〃〃 、-NR-C(NR'R〃)=NR〃'、 -S(O)R'、 S(0)2R'、畫NR'R〃、 -NRS02R'、 CN和-N02中的一個或多個取代，其中R'、 R〃、 R〃'和R〃〃各自優(yōu)選地獨(dú)立指氫、取代或未取代的Q-24雜烴基、取代或未取代的1-3環(huán)芳基、取代或未取代的d.24烴基、烴氧基或硫代烴氧基或C^4芳基烴基，并且當(dāng)所述取代的芳基和取代的雜芳基被鹵素、OR'、 -O、 -NR'、-N-OR'、 NR'R〃、 SR'、卣素、SiR'R〃R〃'、 OC(O)R'、 C(O)R'、 C02R'、CONR'R〃 、 OC(O)NR'R" 、 NR"C(O)R' 、 NR'-C(0)NR〃R〃' 、 NR〃C02R'、NR-C(NR'R〃)-NR〃'、 S(O)R'、 S02R'、 S02NR'R〃、 NROR'、 CN和-N02、 R'、 -N3、 CH(ph)2、氟(d畫C4)烴氧基和氟(C廣C4)烴基中的一個或多個取代時，其中R'、 R〃、 R'〃和R'〃'獨(dú)立地選自氫、(CVCs)烴基和雜烴基、未取代的芳基和雜芳基、(未取代的芳基)-(OC4)烴基和(未取代的芳基)氧基-(CrC4)烴基。
6、 根據(jù)權(quán)利要求5的化合物，其中W是C02CH3， R2是CH3。
7、 根據(jù)權(quán)利要求6的化合物，其中114和115是獨(dú)立選自H、 NH2和NCh的成員。
8、 根據(jù)權(quán)利要求l的化合物，其中R"和RS中至少一個不是選自H和OCH3的成員。
9、 具有下列結(jié)構(gòu)的化合物<formula>formula see original document page 6</formula>其中x是o，并且z選自o和nr23，其中r"是選自h、取代或未取代的d—6雜烴基；W是h、取代或未取代的c^烴基、或c(o)r9，其中R9是h、或取代或未取代的d，24烴基；W是h、或取代或未取代的Q—6爛基；r3是選自(-o)和or11的成員，其中r"是選自h、 c(o)r12、 c(o)or12、 c(0)nr12r13、 p(0)(or12)2、和SiR"R"R"的成員，其中r12、 r"和r"是獨(dú)立選自h、取代或未取代的d.24烴基、取代或未取代的雜烴基和取代或未取代的1-3環(huán)芳基的成員，其中Ri2和R"與它們所連接的氮原子一起可選地連接構(gòu)成6元取代或未取代的雜環(huán)烴基環(huán)系，可選地含有兩個或多個氮原子，并且一個或多個r12、 r"和r"可選地包含酶可裂解的基團(tuán)；r4和rs是獨(dú)立逸自h、 no2、 nr15r16、 nhc(o)r15、和or15的成員，其中r"是氫和r"獨(dú)立地選自h、取代或未取代的d-M烴基、取代或未取代的d-24雜烴基、取代或未取代的l-3環(huán)芳基、取代或未取代的l-3環(huán)雜芳基、取代或未取代的肽基； —W是單鍵，它可以存在也可以不存在，當(dāng)存在時，議6和！17連接構(gòu)成環(huán)丙基環(huán)；并且!^是CH2-Xi或-CH2-，在所述環(huán)丙基環(huán)內(nèi)與W連接，其中f是鹵素；其中所述取代的烴基、取代的雜烴基和取代的雜環(huán)烴基被-OR'、=0、 =NR'、 =N-OR'、 NR'R〃、 SR'、-卣素、SiR'R〃R〃'、 OC(O)R'、C(O)R' 、 C02R' 、 CONR'R〃 、 OC(O)NR'R" 、 NR"C(O)R'、麼-C(0)NR〃R〃' 、 NR〃C(0)2R' 、 NR-C(NR'R〃)-NR〃〃 、-NR-C(NR'R〃)=NR〃'、 -S(O)R'、 S(0)2R'、 -NR'R"、 -NRS02R'、 CN和-N02中的一個或多個取代，其中R'、 R"、 R'〃和R〃〃各自優(yōu)選地獨(dú)立指氫、取代或未取代的C^4雜烴基、取代或未取代的l-3環(huán)芳基、取代或未取代的Cw4烴基、烴氧基或疏代烴氧基或d—24芳基烴基，并且當(dāng)所述取代的芳基和取代的雜芳基被卣素、OR'、 =0、 =NR'、-N-OR'、 NR'R〃、 SR'、囟素、SiR'R〃R〃'、 OC(O)R'、 C(O)R'、 C02R'、CONR'R〃 、 OC(0)NR'R〃 、 NR"C(O)R'、 NR'-C(0)NR〃R'〃 、 NR〃C02R'、NR-C(NR'R〃)=NR〃'、 S(O)R'、 S02R'、 S02NR'R〃、 NROR'、 CN和-N02、 R'、 -N3、 CH(ph)"氟(CrC4)烴氧基和氟(CrC4)烴基中的一個或多個取代時，其中R'、 R"、 R"'和R"〃獨(dú)立地選自氫、(CrQ)烴基和雜烴基、未取代的芳基和雜芳基、(未取代的芳基)-(cvco烴基和(未取代的芳基)氧基-(d-Q)烴基，并且其中R4、 R5、 R"和R"至少一個包含可裂解的二硫化物基團(tuán)。
10、具有下列結(jié)構(gòu)的化合物其中X是O,并且Z選自O(shè)和NR23，其中R"是選自H、取代或未取代的C^雜烴基；W是H、取代或未取代的Q-6烴基、或C(O)R9，其中R9是H、或取代或未取代的Q.24經(jīng)基；R"是H、或取代或未取代的Cw烴基；R3是選自(=0)和OR11的成員，其中Rn是選自H、 C(O)R12、 C(O)OR12、 C(0)NR12R13、 P(0)(OR12)2、和Sil^R"R"的成員，其中R12、 R"和R"是獨(dú)立選自H、取代或未取代的c^4烴基、取代或未取代的d.24雜烴基和取代或未取代的1-3環(huán)芳基的成員，其中R12和R13與它們所連接的氮原子一起可選地連接構(gòu)成4至6元取代或未取代的雜環(huán)烴基環(huán)系，可選地含有兩個或多個氮原子，并且一個或多個R12、 R"和R"可選地包含酶可裂解的基團(tuán)；r4和rs是獨(dú)立逸自h、 no2、 nr15r16、 nhc(o)r15、和or15的成員，其中R"是H，并且R"選自H、取代或未取代的d.24烴基、取代或未取代的d-M雜烴基、取代或未取代的l-3環(huán)芳基、取代或未取代的具有選自N、 O和S的1-4個雜原子的1-3環(huán)雜芳基、取代或未取代的肽基；W是單鍵，它可以存在也可以不存在，當(dāng)存在時，F(xiàn)^和R"連接構(gòu)成環(huán)丙基環(huán)；并且W是CH2-Xi或-CH2-，在所述環(huán)丙基環(huán)內(nèi)與W連接，其中W是卣素，其中所述取代的烴基、取代的雜烴基和取代的雜環(huán)烴基被-OR'、=0、 =NR'、 -N畫OR'、 NR'R"、 SR'、-卣素、SiR'R"R'"、 OC(O)R'、C(O)R' 、 C02R' 、 CONR'R〃 、 OC(O)NR'R" 、 NR"C(O)R'、麼國C(0)NR〃R'〃 、 NR〃C(0)2R' 、 NR-C(NR'R〃)=NR〃〃 、NR國C(NR'R〃)-NR'〃、 -S(O)R'、 S(0)2R'、曙NR'R〃、 -NRS02R'、 CN和-]\02中的一個或多個取代，其中R'、 R〃、 R'〃和R〃〃各自優(yōu)選地獨(dú)立指氫、取代或未取代的d.24雜烴基、取代或未取代的l-3環(huán)芳基、取代或未取代的Cw4烴基、烴氧基或硫代烴氧基或Cw4芳基烴基，并且當(dāng)所述取代的芳基和取代的雜芳基被鹵素、OR'、 =0、 -NR'、=N-OR'、 NR'R〃、 SR'、卣素、SiR'R〃R〃'、 OC(O)R'、 C(O)R'、 C02R'、CONR'R〃 、 OC(O)NR'R" 、 NR"C(O)R' 、 NR'-C(0)NR〃R'〃 、 NR〃C02R'、-NR-C(NR'R〃)=NR'〃、 S(O)R'、 S02R'、 S02NR'R〃、 NROR'、 CN和-N02、 R'、 -N3、 CH(ph)2、氟(C廣C4)烴氧基和氟(d-C4)烴基中的一個或多個取代時，其中R'、 R〃、 R'〃和R〃〃獨(dú)立地選自氫、(C廣Q)烴基和雜烴基、未取代的芳基和雜芳基、(未取代的芳基)-(CVC4)烴基和(未取代的芳基)氧基-(Q-C4)烴基，并且其中至少一個選自R4、 R5、 R"和R"的成員包含靶向劑或可檢觀'J的標(biāo)記。
11、 根據(jù)權(quán)利要求10的化合物，其中所述靶向劑是抗體。
12、 根據(jù)權(quán)利要求6的化合物，具有下列結(jié)構(gòu)<formula>formula see original document page 9</formula>
13、 根據(jù)權(quán)利要求6的化合物，其中X是o, Z是o。
14、 具有下列結(jié)構(gòu)的化合物其中X是O，并且Z選自O(shè)和NR23， 其中R"是選自H、取代或未取代的d—6雜烴基；W是h、取代或未取代的d-6烴基或c(0)R9,其中W是h、或 取代或未取代的d—24烴基；W是h、或取代或未取代的Cw烴基； R3是OR";R4和R5是獨(dú)立選自h、 no2、 nr15r16、 nhc(o)r15、和or15 的成員， 其中R"是氫和R"獨(dú)立地選自H、取代或未取代的Cw4烴基、取代 或未取代的d.24雜烴基、取代或未取代的l-3環(huán)芳基、取代或未取代 的具有選自n、 O和s的1-4個雜原子的1-3環(huán)雜芳基、取代或未取 代的肽基；Re是單鍵，它可以存在也可以不存在，當(dāng)存在時，116和117連接 構(gòu)成環(huán)丙基環(huán)；并且R〒是CH2-Xi或-CHr,在所述環(huán)丙基環(huán)內(nèi)與R6連接，其中《是鹵素，其中Ru是具有下列結(jié)構(gòu)的肽基部分<formula>formula see original document page 11</formula>其中X3是選自保護(hù)或未保護(hù)的反應(yīng)性官能團(tuán)、可檢測的標(biāo)記和靶向劑的成員；L1是連接基團(tuán)，選自取代或未取代的d-24烴基和取代或未取代的Cw4雜烴基；AA1、 AAb和AAb"是獨(dú)立選自天然與非天然a-氨基酸的成員； 1^是連接基團(tuán)，選自取代或未取代的d.24烴基和取代或未取代的Ci—24雜爛基;q和v是獨(dú)立選自0和1的整數(shù)； b是0至20的整數(shù)。其中所述取代的經(jīng)基、取代的雜烴基和取代的雜環(huán)烴基被-OR'、 =0、 =NR'、 =N-OR'、 NR'R〃、 SR'、-卣素、SiR'R〃R'〃、 OC(O)R'、 C(O)R' 、 COW 、 CONR'R〃 、 OC(O)NR'R" 、 NR"C(O)R'、 NR'-C(O)NR"R"' 、 NR"C(0)2ir 、 NR-C(NR'R")-NR'"'、 NR-C(NR'R〃)-NR'〃、 -S(O)R'、 S(0)2R'、 -NR'R"、 -NRS02R'、 CN 和-NO;j中的一個或多個取代，其中R'、 R〃、 R'〃和R〃〃各自優(yōu)選地獨(dú)立指氫、取代或未取代的Q.24雜烴基、取代或未取代的1-3環(huán)芳基、取代或未取代的Cw4烴基、烴氧基或硫代烴氧基或d-24芳基烴基，并且當(dāng)所述取代的芳基和取代的雜芳基被S素、OR'、 =0、 -NR'、 -N-OR'、 NR'R〃、 SR'、卣素、SiR'R〃R'〃、 OC(O)R'、 C(O)R'、 C02R'、 CONR'R" 、 OC(O)NR'R" 、 NR"C(O)R' 、 NR'-C(0)NR〃R〃' 、 NR〃C02R'、 -NR-C(NR'R〃)=NR〃'、 S(O)R'、 S02R'、 S02NR'R〃、 NROR'、 CN和 -N02、 R'、 -N3、 CH(ph)2、氟(C廣C4)烴氧基和氟(Q國C4)烴基中的一個 或多個取代時，其中R'、 R〃、 R'〃和R〃〃獨(dú)立地選自氫、(CrCs)烴基 和雜烴基、未取代的芳基和雜芳基、(未取代的芳基)-(d-Q)烴基和(未 取代的芳基)氧基-(CrQ)烴基。
15、 根據(jù)權(quán)利要求14的化合物，其中至少一個選自1^和I^的成 員包含聚乙二醇部分。
16、 根據(jù)權(quán)利要求14的化合物，其中所述肽基部分具有下列結(jié)構(gòu)其中R"和R"是獨(dú)立選自H、取代或未取代的d.24烴基、取代或未 取代的C^4雜烴基、取代或未取代的1-3環(huán)芳基、取代或未取代的具 有選自N、 O和S的1-4個雜原子的1-3環(huán)雜芳基、取代或未取代的 雜環(huán)烴基、可檢測的標(biāo)記和靼向劑的成員；R"和R"是獨(dú)立選自H、取代或未取代的Cw烴基、氨基酸側(cè)鏈、 可檢測的標(biāo)記和耙向劑的成員；并且s是0至20的整數(shù)。
17、 根據(jù)權(quán)利要求14的化合物，其中b是在1與5之間的整數(shù)。
18、 具有下列結(jié)構(gòu)的化合物其中X是O，并且Z選自O(shè)和NR23， 其中R"是選自H、取代或未取代的Cw雜烴基;W是h、取代或未取代的Cw烴基、或C(o)r9，其中R9是h、 或取代或未取代的c^4烴基；rz是h、或取代或未取代的q—6烴基； r3是選自(-o)和or"的成員， 其中r"是選自h、取代或未取代的d-24烴基、取代或未取代的Q.24雜烴基、?；?、C(O)R12、 C(O)OR12、 C(0)NR12R13、 P(0)(OR12)2和 SiR"R"R"的成員， 其中r12、 r"和r"是獨(dú)立選自h、取代或未取代的d—24烴基、取代 或未取代的d-24雜烴基和取代或未取代的1-3環(huán)芳基的成員，其中 r12和r13與它們所連接的氮原子一起可選地連接構(gòu)成4至6元取代或 未取代的雜環(huán)烴基環(huán)系，可選地含有兩個或多個氮原子，并且一個或 多個r12、 r"和r"可選地包含酶可裂解的基團(tuán)；r4和rs是獨(dú)立逸自h、 no2、 nr15r16、 nhc(o)r15、和or15 的成員，其中r"是h，并且r"是獨(dú)立地選自h、取代或未取代的d-24烴基、 取代或未取代的d-24雜烴基、取代或未取代的l-3環(huán)芳基、取代或未 取代的含有兩個或多個選自n、 o和s的雜原子的1-3雜芳基、和取 代或未取代的肽基；W是單鍵，它可以存在也可以不存在，當(dāng)存在時，r"和FT連接 構(gòu)成環(huán)丙基環(huán)；并且R 是CH2-Xi或-CH2-，在所述環(huán)丙基環(huán)內(nèi)與W連接，其中^是鹵素，其中至少一個選自r"和r"的成員具有下列結(jié)構(gòu)<formula>formula see original document page 13</formula>其中X4是選自保護(hù)或未保護(hù)的反應(yīng)性官能團(tuán)、可檢測的標(biāo)記和靶向劑的成員；l3是連接基團(tuán)，選自取代或未取代的烴基和取代或未取代的 Cw4雜烴基；AA1、 AAe和AAe"是獨(dú)立選自天然與非天然a-氨基酸的成員；1^是連接基團(tuán)，選自取代或未取代的d.24烴基和取代或未取代的24雜烴基；R"是選自H、取代或未取代的d.24爛基和取代和未取代的d-24雜烴基的成員； . p和t是獨(dú)立選自0和1的整數(shù)；并且 c是0至20的整數(shù)。其中所述取代的烴基、取代的雜烴基和取代的雜環(huán)烴基被-OR'、 =0、 -NR'、 =N-OR'、 NR'R"、 SR'、-卣素、SiR'R"R'"、 OC(O)R'、 C(O)R' 、 C02R' 、 CONR'R〃 、 OC(0)麼R〃 、 麼'C(O)R'、 NR'-C(0)NR〃R〃' 、 NR〃C(0)2R' 、 NR-C(NR'R〃)=NR〃〃 、 -NR-C(NR'R〃)=NR〃'、 -S(O)R'、 S(0)2R'、 -NR'R"、 -NRS02R'、 CN 和-N02中的一個或多個取代，其中R'、 R〃、 R〃'和R〃〃各自優(yōu)選地獨(dú) 立指氫、取代或未取代的d—24雜烴基、取代或未取代的1-3環(huán)芳基、取代或未取代的Cw4烴基、烴氧基或硫代烴氧基或Cw4芳基烴基，并且當(dāng)所述取代的芳基和取代的雜芳基被鹵素、OR'、 -O、 -NR'、 -N-OR'、 NR'R〃、 SR'、自素、SiR'R〃R〃'、 OC(O)R'、 C(O)R'、 C02R'、 CONR'R〃 、 OC(O)NR'R" 、 NR〃C(0)R' 、 NR'-C(0)NR〃R'〃 、 NR〃C02R'、 -NR-C(NR'R")=NR'〃、 S(O)R'、 S02R'、 S02NR'R〃、 NROR'、 CN和 -N02、 R'、 -N3、 CH(ph)2、氟(C廣C4)烴氧基和氟(C廣C4)烴基中的一個 或多個取代時，其中R'、 R〃、 R'〃和R〃"獨(dú)立地選自氫、(CrCs)烴基 和雜烴基、未取代的芳基和雜芳基、(未取代的芳基)-(cvco烴基和(未 取代的芳基)氧基-(d-C4)烴基。
19、根據(jù)權(quán)利要求18的化合物，其中至少一個選自1/和1/的成員包含聚乙二醇部分。
20、根據(jù)權(quán)利要求18的化合物，其中所述成員具有下列結(jié)構(gòu):<formula>formula see original document page 15</formula>其中R"和R"是獨(dú)立選自H、取代或未取代的d-6烴基、氨基酸側(cè)鏈、 可檢測的,標(biāo)記和乾向劑的成員； s是0至20的整數(shù)。
21、 根據(jù)權(quán)利要求18的化合物，其中c是2至3的整數(shù)。
22、 具有下列結(jié)構(gòu)的化合物<formula>formula see original document page 15</formula>其中X是O，并且Z選自O(shè)和NR23, 其中R"是選自H、取代或未取代的C^雜烴基；W是H、取代或未取代的C"烴基或C(O)R9，其中W是H或取 代或未取代的d.24烴基；W是H或取代或未取代的Cw烴基； R3是OR11，r4和rs是獨(dú)立逸自h、 no2、 nr15r16、 nhc(o)r15、和or15 的成員，其中R"是H，并且R"選自H、取代或未取代的d.24烴基、取代或 未取代的d"雜烴基、取代或未取代的l-3環(huán)芳基、取代或未取代的 具有選自n、 o和s的1-4個雜原子的1-3環(huán)雜芳基、取代或未取代 的肽基；1^6是單鍵，它可以存在也可以不存在，當(dāng)存在時，！^和R 連接 構(gòu)成環(huán)丙基環(huán)；并且R 是CH2-Xi或-CH2-，在所述環(huán)丙基環(huán)內(nèi)與Re連接,，其中W是 鹵素，其中R"具有下列結(jié)構(gòu)x4—(l3)廠s—s—l、-nro其中X"是選自被保護(hù)的反應(yīng)性官能團(tuán)、未保護(hù)的反應(yīng)性官能團(tuán)、可檢 測的標(biāo)記和把向劑的成員；L3是連接基團(tuán)，選自取代或未取代的d-24烴基和取代或未取代的 d.24雜烴基；1/是連接基團(tuán)，選自取代或未取代的d-24烴基和取代或未取代的C^雜烴基；R"是選自H、取代或未取代的d-24烴基，取代或未取代的Cw4雜炫基，聚乙二醇，?；騽┖涂蓹z測的標(biāo)記的成員；并且 p和t是獨(dú)立選自0和1的整數(shù)。其中所迷取代的烴基、取代的雜烴基和取代的雜環(huán)烴基被-OR'、 =0、 -NR'、 -N-OR'、 NR'R"、 SR'、-鹵素、SiR'R"R'"、 OC(O)R'、 c(o)r' 、 c02r' 、 conr'r" 、 oc(o)nr'r" 、 nr"c(o)r'、 nr'-c(o)麼'r'" 、 nr"c(0)2r' 、 nr誦c(nr'r〃)-nr〃〃 、-NRC(NR'R〃)=NR'〃、 -S(O)R'、 S(0)2R'、 -NR'R"、 -NRS02R'、CN 和-N02中的一個或多個取代，其中R'、 R〃、 R'〃和R〃〃各自優(yōu)選地獨(dú)立指氫、取代或未取代的Q.24雜烴基、取代或未取代的l-3環(huán)芳基、 取代或未取代的d.24烴基、烴氧基或疏代烴氧基或d—24芳基烴基，并且當(dāng)所述取代的芳基和取代的雜芳基被鹵素、OR'、 =0、 -NR'、 =N-OR'、 NR'R"、 SR'、卣素、SiR'R"R'〃、 OC(O)R'、 C(O)R'、 C02R'、 CONR'R〃 、 OC(0)NR'R〃 、 NR"C(O)R' 、 NR'-C(0)NR〃R'〃 、 NR〃C02R'、 NR-C(NR'R〃)=NR'〃、 S(O)R'、 S02R'、 S02NR'R〃、 NROR'、 CN和 -N02、 R'、 -N3、 CH(ph)2、氟(d隱C4)烴氧基和氟(CVC4)烴基中的一個 或多個取代時，其中R'、 R"、 R〃'和R'〃'獨(dú)立地選自氫、(CrCs)烴基, 和雜烴基、未取代的芳基和雜芳基、(未取代的芳基)-(d-CO烴基和(未 取代的芳基)氧基-(CrCO烴基。
23、 根據(jù)權(quán)利要求22的化合物，其中"是取代或未取代的亞乙 基部分。
24、 根據(jù)權(quán)利要求22的化合物，其中X"是選自R29、 COOR29、 C(0)NR"和C(0)NNR"的成員，其中R"是選自取代或未取代的d-24烴基、取代或未取代的d-24雜烴基和取代或未取代的具有選自N、 O和S的1-4個雜原子的雜芳基的 成員。
25、 根據(jù)權(quán)利要求22的化合物，其中R"是選自H; OH; NHNH2;的成員， 其中其中X是O，并且Z選自O(shè)和NR23， 其中R"是選自H、取代或未取代的d-6雜烴基;W0代表終止于反應(yīng)性官能團(tuán)的取代或未取代錄d-24凝基、終止于官能團(tuán)的取代或未取代的具有選自N、0和S的l-4個雜原子的1-3 環(huán)雜芳基和-(L、X4，其中每個L3、 X"和p是獨(dú)立地加以選擇的。
26、 根據(jù)權(quán)利要求14、 18或22的化合物，其中所述可檢測的標(biāo) 記是熒光團(tuán)。
27、 根據(jù)權(quán)利要求14、 18或22的化合物，其中所述靶向劑是生 物分子。
28、 根據(jù)權(quán)利要求18或22的化合物，其中乂4是靶向劑，所述靶 向劑是選自抗體、受體、肽、凝集素、糖、核酸及其組合的成員。
29、 根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R"和R"至少一個攜帶il合 于綴合所述化合物到另 一分子的反應(yīng)性基團(tuán)。
30、 根據(jù)權(quán)利要求29的化合物，其中R"和R"至少一個是選自取代的C,-24烴基和取代的d.24雜烴基的成員，所述成員具有所述反應(yīng)性官能團(tuán)作為其游離的末端。
31、 根據(jù)權(quán)利要求29的化合物，其中所述化合物是經(jīng)由所述反應(yīng) 性官能團(tuán)與所述另 一分子綴合的。
32、 具有下列結(jié)構(gòu)的化合物W是H、取代或未取代的d，6烴基或CIO)R9，S漆f(1 R9是H、取 代或未取代的C^4烴基；W是H或取代或未取代的C"烴基； R3是選自(=0)和OR11的成員， 其中R"是選自H、取代或未取代的d.24烴基、取代或未取代的d.24雜爛基、?；?、C(O)R12、 C(O)OR12、 C(0)NR12R13、 P(0)(OR12)2和 SiRi2R"R"的成員， 其中R 、 R"和R"是獨(dú)立選自H、取代或未取代的Cw4烴基、取代 或未取代的雜烴基和取代或未取代的1-3環(huán)芳基的成員，其中 R12和R13與它們所連接的氮原子一起可選地連接構(gòu)成4至6元取代或 未取代的雜環(huán)烴基環(huán)系，可選地含有兩個或多個氮原子，并且一個或 多個R12、 R"和R"可選地包含酶可裂解的基團(tuán)；r4和rs是獨(dú)立逸自h、 no2、 nr15r16、 nhc(o)r15、和or15 的成員，其中R"是H，并且R"獨(dú)立地選自H、取代或未取代的Cw4烴基、 取代或未取代的C^4雜烴基、取代或未取代的l-3環(huán)芳基、取代或未 取代的具有選自N、 O和S的1-4個雜原子的1-3環(huán)雜芳基和取代或 未取代的肽基；W是單鍵，它可以存在也可以不存在，當(dāng)存在時，RS和R 連接 構(gòu)成環(huán)丙基環(huán)；并且!^是CH2-Xi或-CH2-,在所述環(huán)丙基環(huán)內(nèi)與W連接，其中乂1是鹵素，其中所述取代的烴基、取代的雜烴基和取代的雜環(huán)烴基被-OR'、 =0、 -NR'、 -N-OR'、 NR'R"、 SR'、-卣素、SiR'R"R"'、 OC(O)R'、 C(O)R' 、 C02R' 、 CONR'R〃 、 OC(O)NR'R" 、 NR"C(O)R'、 NR'-C(0)NR〃R〃' 、 NR〃C(0)2R' 、 NR-C(NR'R〃)=NR〃"、-NR-C(NR'R〃)=NR〃'、誦S(O)R'、 S(O)W、 -NR'R"、 -NRS02R'、 CN 和-N02中的一個或多個取代，其中R'、 R〃、 R'〃和R〃〃各自優(yōu)選地獨(dú) 立指氫、取代或未取代的d-24雜烴基、取代或未取代的1-3環(huán)芳基、取代或未取代的C^4烴基、烴氧基或硫代烴氧基或d.24芳基烴基，并且當(dāng)所述取代的芳基和取代的雜芳基被卣素、OR'、 =0、 =NR'、 -N畫OR'、 NR'R"、 SR'、卣素、SiR'R"R'"、 OC(O)R'、 C(O)R'、 C02R'、 CONR'R〃 、 OC(O)NR'R" 、 NR"C(O)R' 、 NR'-C(0)NR〃R'〃 、 NR〃C02R'、 -NR-C(NR'R")=NR〃'、 S(O)R'、 S02R'、 S02NR'R"、 NROR'、 CN和 -N02、 R'、 -N3、 CH(ph)2、氟(C廣C4)烴氧基和氟(C廣C4)烴基中的一個 或多個取代時，其中R'、 R〃、 R〃'和R〃〃獨(dú)立地選自氫、(CVCs)烴基 和雜烴基、未取代的芳基和雜芳基、(未取代的芳基)-(d-CO烴基和(未 取代的芳基)氧基-(C,-C4)烴基，其中R"和R"之一包含可裂解的部分。
33、 藥物制劑，包含根據(jù)權(quán)利要求l-32任一項(xiàng)的化合物和藥學(xué)上 可接受的載體。
34、 根據(jù)權(quán)利要求l-32任一項(xiàng)的化合物在制備用于殺死細(xì)胞的藥 物中的用途。
35、 根據(jù)權(quán)利要求l-32任一項(xiàng)的化合物在制備用于殺死癌細(xì)胞的 藥物中的用途。
36、 根據(jù)權(quán)利要求1-32任一項(xiàng)的化合物在制備用于延緩或終止哺 乳動物受治療者腫瘤生長的藥物中的用途。
37、 具有下列結(jié)構(gòu)的化合物其中環(huán)系A(chǔ)是選自苯基和吡咯的威員；Z選自O(shè)和NR23，其中R"是選自H、和取代或未取代的d，6雜 烴基的成員； R3是ORU;其中，R"選自H、取代或未取代的Q.24烴基、取代或未取代的Cu4雜烴基、?；?、C(O)R12、 C(O)OR12、 C(0)NR12R13、 P(0)(OR12)2， 或SiR12R13R14，并且R11可選地包含酶可裂解的基團(tuán)，其中，R12、 R"和R"獨(dú)立選自H、取代或未取代的d.24烴基、 取代或未取代的d.24雜烴基和取代或未取代的1-3環(huán)芳基，其中R12 和R"與它們所連接的氮原子r^起可選地連接構(gòu)成4至6元取4戈或未 取代的雜環(huán)烴基，可選地含有兩個或多個氮原子，并且一個或多個R12、 R13或R14可選地包含酶可裂解的基團(tuán)；r4和rs是獨(dú)立逸自h、 no2、 nr15r16、 nhc(o)r15、和or15 的成員，其中R"是H，并且R^選自H、取代或未取代的d-M烴基、取代或 未取代的d.24雜烴基、取代或未取代的l-3環(huán)芳基、取代或未取代的 具有選自N、 O和S的1-4個雜原子的1-3環(huán)雜芳基和取代或未取代 的肽基，并且一個或多個R4、 R5、 R"和R"可選地包含酶可裂解的基團(tuán)；W是單鍵，它可以存在也可以不存在，當(dāng)存在時，116和117連接構(gòu)成環(huán)丙基環(huán)；并且R"是CH2-W或-CH2-，在所述環(huán)丙基環(huán)內(nèi)與W連接，其中^是 鹵素，其中Rn是具有下列結(jié)構(gòu)的肽基部分<formula>formula see original document page 21</formula>其中x3是選自保護(hù)或未保護(hù)的反應(yīng)性官能團(tuán)、可檢測的標(biāo)記和靶向劑的成員；!^是連接基團(tuán)，選自取代或未取代的Cw4烴基和取代或未取代的C^4雜烴基；AA1 、 AAb和AAb+1是獨(dú)立選自天然與非天然a-氨基酸的成員；1/是連接基團(tuán)，選自取代或未取代的d.24烴基和取代或未取代的C^雜烴基；q和v是獨(dú)立選自0和1的整數(shù)； b是0至20的整數(shù)。其中所述取代的烴基、取代的雜烴基和取代的雜環(huán)烴基被-OR'、 =0、 -NR'、 -N-OR'、 NR'R〃、 SR'、-囟素、SiR'R"R'〃、 OC(O)R'、 C(O)R' 、 C02R' 、 CONR'R〃 、 OC(O)NR'R" 、 NR"C(O)R'、 NR'誦C(0)NR〃R〃' 、 NR〃C(0)2R' 、 NR-C(NR'R〃)=NR〃〃 、 -NR-C(NR'R〃)=NR〃'、 -S(O)R'、 S(0)2R'、 -NR'R"、 -NRS02R'、 CN 和-N02中的一個或多個取代，其中R'、 R〃、 R〃'和R〃〃各自優(yōu)選地獨(dú) 立指氫、取代或未取代的Cw4雜烴基、取代或未取代的1-3環(huán)芳基、取代或未取代的Cw烴基、烴氧基或硫代烴氧基或d-24芳基烴基，并且當(dāng)所述取代的芳基和取代的雜芳基被鹵素、OR'、 -O、 =NR'、 -N-OR'、 NR'R〃、 SR'、卣素、SiR'R〃R〃'、 OC(O)R'、 C(O)R'、 C02R'、 CONR'R" 、 OC(0)NR'R〃 、 NR"C(O)R' 、 NR'-C(0)NR〃R〃' 、 NR〃C02R'、 -NR-C(NR'R〃)=NR'〃、 S(O)R'、 S02R'、 S02NR'R〃、 NROR'、 CN和 -N02、 R'、 -N3、 CH(ph)2、氟(d曙C4)烴氧基和氟(C廣C4)烴基中的一個 或多個取代時，其中R'、 R〃、 R'〃和R"〃獨(dú)立地選自氫、(CVCs)烴基 和雜烴基、未取代的芳基和雜芳基、(未取代的芳基)-(d-Ct)烴基和(未 取代的芳基)氧基-(CrCO烴基。
38、具有下列結(jié)構(gòu)的化合物環(huán)系A(chǔ)是選自苯基和吡咯的成員； Z選自0和NR23的成員， 其中，R"是選自H、取代或未取代的Cw雜烴基的成員；R3是選自(-O)和OR11的成員，其中R"是選自H、取代或未取代的烴基、C(O)R12、 C(O)OR12、 C(0)NR12R13、 P(0)(OR12)2和SiR12R13R14的成員，R11可選地包含酶 可裂解的基團(tuán)，其中R12、 R"和R"是獨(dú)立選自H、取代或未取代d-24的烴基、取代 或未取代的雜烴基和取代或未取代的1-3環(huán)芳基的成員，其中 R12和R13與它們所連接的氮原子一起可選地連接構(gòu)成4至6元取代或 未取代的雜環(huán)烴基環(huán)系，可選地含有兩個或多個氮原子，并且一個或 多個R12、 R"和R"可選地包含酶可裂解的基團(tuán)；R4和r5是獨(dú)立逸自h、 no2、 nr15r16、 nhc(o)r15、和or15 的成員，其中R"是H，并且R"選自H、取代或未取代的c"4烴基、取代或 未取代的d.24雜烴基、取代或未取代的l-3環(huán)芳基、取代或未取代的 具有選自N、 O和S的1-4個雜原子的1-3環(huán)雜芳基和取代或未取代 的肽基；并且一個或多個R4、 R5、 R"和R"可選地包含酶可裂解的 基團(tuán)，其中R4、 RS和R"和R"中至少一個含有可裂解的二硫基； R"是單鍵，它可以存在也可以不存在，當(dāng)存在時，116和117連接構(gòu)成環(huán)丙基環(huán)；并且!^是CHrO^或-CH2-，在所述環(huán)丙基環(huán)內(nèi)與R6連接，其中W是鹵素，其中所迷取代的烴基、取代的雜烴基和取代的雜環(huán)烴基被-OR'、 -O、 =NR'、 -N-OR'、 NR'R"、 SR'、-卣素、SiR'R〃R"'、 OC(O)R'、 C(O)R' 、 C02R' 、 CONR'R〃 、 OC(O)NR'R" 、 NR"C(O)R'、 NR'國C(0)NR〃R'〃 、 NR〃C(0)2R' 、 NR-C(NR'R〃)-NR〃"、 -NR-C(NR'R〃)=NR〃'、 -S(O)R'、 S(0)2R'、 -NR'R"、 -NRS02R'、、CN 和-1\02中的一個或多個取代，其中R'、 R〃、 R〃'和R〃〃各自優(yōu)選地獨(dú) 立指氫、取代或未取代的d-M雜烴基、取代或未取代的l-3環(huán)芳基、取代或未取代的C^4烴基、烴氧基或-充代烴氧基或d-24芳基烴基，并且當(dāng)所述取代的芳基和取代的雜芳基被鹵素、OR'、 =0、 -NR'、 -N-OR'、 NR'R〃、 SR'、卣素、SiR'R〃R〃'、 OC(O)R'、 C(O)R'、 C02R'、 CO麼R〃 、 OC(0)麼R〃 、 NR"C(O)R' 、 NR'-C(0)NR〃R'〃 、 NR〃C02R'、 NR-C(NR'R〃)=NR〃'、 S(O)R'、 S02R'、 S02NR'R〃、 NROR'、 CN和 -N02、 R'、 -N3、 CH(ph)2、氟(C「C4)烴氧基和氟(C廣C4)烴基中的一個 或多個取代時，其中R'、 R〃、 R'〃和R〃〃獨(dú)立地選自氫、(C廣Q)烴基 和雜烴基、未取代的芳基和雜芳基、(未取代的芳基)-(CrC4)烴基和(未取代的芳基)氧基-(C,-C4)烴基。
39、具有下列結(jié)構(gòu)的化合物<formula>formula see original document page 24</formula>其中環(huán)系A(chǔ)是選自苯基和吡咯的成員；Z選自O(shè)和NR"的成員，R"是選自H和取代或未取代的d_6 雜烴基的成員； R3是OR11 ，議4和r5是獨(dú)立選自h、 no2、 nr15r16、 nhc(o)r15、和or15 的成員， 其中R"是H,并且R"選自H、取代或未取代的d.24烴基、取代或 未取代的d.24雜烴基、取代或未取代的1-3環(huán)芳基、取代或未取代的 具有選自N、 O和S的1,4個雜原子的1-3環(huán)雜芳基和取悉或未取代 的肽基；并且一個或多個R4、 R5、 R"和R"可選地包含酶可裂解的 基團(tuán)；rg是單鍵，它可以存在也可以不存在，當(dāng)存在時，！^和r卩連接 構(gòu)成環(huán)丙基環(huán)；并且W是ch2-^或-ch2-，在所述環(huán)丙基環(huán)內(nèi)與R"連接，其中f是 鹵素，其中R"具有下列結(jié)構(gòu)其中X"是選自被保護(hù)的反應(yīng)性官能團(tuán)、未保護(hù)的反應(yīng)性官能團(tuán)、可檢 領(lǐng)'J的標(biāo)記和乾向劑的成員；L3是連接基團(tuán)，選自取代或未取代的Cw4烴基和取代或未取代的 雜烴基；L"是連接基團(tuán)，選自取代或未取代的d.24烴基和取代或未取代的c-24雜經(jīng)基;p和t是獨(dú)立選自o和i的整數(shù)。其中所述取代的烴基、取代的雜烴基和取代的雜環(huán)烴基被-OR'、=0、 -NR'、享N-OR'、 NR'R〃、 SR'、-卣素、SiR'R〃R〃" OC(Q)R'、 C(O)R' 、 C02R' 、 CONR'R〃 、 OC(O)NR'R" 、 NR"C(O)R'、 NR'-C(0)NR〃R'〃 、 NR〃C(0)2R' 、 NR-C(NR'R〃)=NR〃〃 、 -NR-C(NR'R")-NR'"、 -S(O)R'、 S(0)2R'、 -NR'R"、 -NRS02R'、 CN 和-N02中的一個或多個取代，其中R'、 R〃、 R〃'和R〃〃各自優(yōu)選地獨(dú) 立指氫、取代或未取代的d.24雜烴基、取代或未取代的l-3環(huán)芳基、取代或未取代的d.24烴基、烴氧基或硫代烴氧基或CL24芳基烴基，并且當(dāng)所迷取代的芳基和取代的雜芳基被鹵素、OR'、 -O、 -NR'、 =N-OR'、 NR'R〃、 SR'、卣素、SiR'R〃R〃'、 OC(O)R'、 C(O)R'、 C02R'、 CONR'R〃 、 OC(0)NR'R〃 、 NR"C(O)R' 、 NR'-C(0)NR〃R'〃 、 NR〃C02R'、 -NR-C(NR'R")=NR〃'、 S(O)R'、 S02R'、 S02NR'R〃、 NROR'、 CN和 -N02、 R'、 -N3、 CH(ph)2、氟(C廣C4)烴氧基和氟(C廣C4)烴基中的一個 或多個取代時，其中R'、 R〃、 R"'和R〃"獨(dú)立地選自氫、(d-Cs)烴基 和雜烴基、未取代的芳基和雜芳基、(未取代的芳基)-(d-C4)烴基和(未取代的芳基)氧基-(Q-C4)烴基。
40、具有下列結(jié)構(gòu)的化合物其中環(huán)系A(chǔ)是選自苯基和吡咯的成員； Z選自0和NR"的成員， 其中，R"是選自H和取代或未取代的Cw雜烴基的成員； R3是OR11，R4和Rs是獨(dú)立選自H、 N02、 NR15R16、 NHC(O)R15、和OR的成員'， 其中R"是H，并且R"選自H、取代或未取代的d.24烴基、取代或 未取代的d.M雜烴基、取代或未取代的l-3環(huán)芳基、取代或未取代的 具有選自N、 O和S的1-4個雜原子的1-3環(huán)雜芳基和取代或未取代 的肽基；并且一個或多個R4、 R5、 R"和R"可選地包含酶可裂解的 基團(tuán)，其中至少一個選自R"和R"的成員具有下列結(jié)構(gòu)<formula>formula see original document page 27</formula>其中X4是選自保護(hù)或未保護(hù)的反應(yīng)性官能團(tuán)、可檢測的標(biāo)記和乾向劑的成員；L3是連接基團(tuán)，選自取代或未取代的d.24烴基和取代或未取代的 C,—24雜烴基；AA1、 AA^和AA^是獨(dú)立選自天然與非天然a-氨基酸的成員； 1/是連接基團(tuán)，選自取代或未取代的Cw4烴基和取代或未取代的 d.24雜烴基；R"是選自H、取代或未取代的d-M烴基和取代和未取代的雜烴基的成員；p和t是獨(dú)立選自0和1的整數(shù)； c是0至20的整數(shù)；116是單鍵，它可以存在也可以不存在，當(dāng)存在時，116和議7連接 構(gòu)成環(huán)丙基環(huán)；并且R 是CH2-Xi或-CHr,在所述環(huán)丙基環(huán)內(nèi)與R"連接，其中W是 鹵素。其中所述取代的烴基、取代的雜烴基和取代的雜環(huán)烴基被-OR'、 =0、 =NR'、 =N-OR'、 NR'R"、 SR'、-卣素、SiR'R"R'"、 OC(O)R'、C(O)R' 、 C02R' 、 CONR'R〃 、 OC(O)NR'R" 、 NR〃C(0)R'、 NR'-C(0)NR〃R'〃 、 NR〃C(0)2R' 、 NR-C(NR'R〃)=NR〃〃 、 -NR畫C(NR'R〃)-NR'〃、畫S(O)R'、 S(0)2R'、 -NR'R"、 -NRS02R'、 CN 和-1\02中的一個或多個取代，其中R'、 R〃、 R〃'和R〃〃各自優(yōu)選地獨(dú) 立指氫、取代或未取代的Cw4雜烴基、取代或未取代的l-3環(huán)芳基、取代或未取代的d.24烴基、烴氧基或硫代烴氧基或Cw4芳基烴基，并且當(dāng)所述取代的芳基和取代的雜芳基被鹵素、OR'、 =0、 -NR'、 -N畫OR'、 NR'R〃、 SR'、卣素、SiR'R"R〃'、 OC(O)R'、 C(O)R'、 C02R'、 CONR'R〃 、 OC(O)NR'R" 、 NR"C(O)R' 、 NR'-C(0)NR〃R〃' 、 NR〃C02R'、 -NR-C(NR'R〃)=NR'〃、 S(O)R'、 S02R'、 S02NR'R〃、 NROR', CN和 -N02、 R'、 -N3、 CH(ph)2、氟(CrC4)烴氧基和氟(d-Ct)烴基中的一個 或多個取代時，其中R'、 R"、 R〃'和R〃〃獨(dú)立地選自氫、(CrC8)經(jīng)基 和雜烴基、未取代的芳基和雜芳基、(未取代的芳基)-(CVC4)烴基和(未 取代的芳基)氧基-(CVC4)烴基。
41、具有下列結(jié)構(gòu)的化合物其中環(huán)系A(chǔ)是選自苯基和吡咯的成員； Z選自0和NR"的成員， 其中，R"是選自H和取代或未取代的Cw雜烴基的成員；R3是選自(=0)和OR11的成員，其中R"是選自H、 C(O)R12、 C(O)OR12、 C(0)NR12R13、 P(0)(OR12)2、和SiR12R13R14的成員，R11可選地包含酶可裂解的基團(tuán)， 其中R12、 R"和R"是獨(dú)立選自H、取代或未取代的d.M烴基、取代 或未取代的d-24雜烴基和取代或未取代的1-3環(huán)芳基的成員，其中 r12和r13與它們所連接的氮原子一起可選地連接構(gòu)成4至6元取代或 未取代的雜環(huán)烴基環(huán)系，可選地含有兩個或多個雜原子，并且一個或 多個R12、 R"和R"可選地包含酶可裂解的基團(tuán)；r4和rs是獨(dú)立逸自h、 no2、 nr15r16、 nch(o)r15、和or15 的成員，其中R"是H，并且R"選自H、取代或未取代的d.24烴基、取代或 未取代的d-24雜烴基、取代或未取代的l-3環(huán)芳基、取代或未取代的 具有選自N、 O和S的1-4個雜原子的1-3環(huán)雜芳基和取代或未取代 的肽基；并且一個或多個R4、 R5、 R"和R"可選地包含酶可裂解的 基團(tuán)；W是單鍵，它可以存在也可以不存在，當(dāng)存在時，116和117連接 構(gòu)成環(huán)丙基環(huán)；W是CH2-f或-CH2-，在所述環(huán)丙基環(huán)內(nèi)與W連接，其中V是鹵素；其中所述取代的烴基、取代的雜烴基和取代的雜環(huán)烴基被-OR'、 =0、 -NR'、 -N-OR'、 NR'R"、 SR'、-卣素、SiR'R"R'"、 OC(O)R'、 C(O)R' 、 C02R' 、 CONR'R〃 、 OC(O)NR'R" 、 NR"C(O)R'、 NR'誦C(0)NR〃R〃' 、 NR〃C(0)2R' 、 NR-C(NR'R〃)=NR〃〃 、 畫NR-C(NR'R〃)-NR"'、 -S(O)R'、 S(0)2R'、 -NR'R"、 -NRS02R'、 CN 和-N02中的一個或多個取代，其中R'、 R〃、 R'〃和R"〃各自優(yōu)選地獨(dú) 立指氫、取代或未取代的Cw4雜烴基、取代或未取代的1-3環(huán)芳基、取代或未取代的Cw4烴基、烴氧基或硫代烴氧基或Cw4芳基烴基，并且當(dāng)所述取代的芳基和取代的雜芳基被卣素、OR'、 -O、 -NR'、 =NOR'、 NR'R〃、 SR'、鹵素、SiR'R"R〃'、 OC(O)R'、 C(O)R'、 C02R'、CONR'R〃 、 OC(O)NR'R" 、 NR〃C(0)寂'、NR、C(0)NR〃R〃' 、 NR〃C02R'、 -NR-C(NR'R〃)=NR'〃、 S(O)R'、 S02R'、 S02NR'R〃、 NROR'、 CN和 -N02、 R'、 -N3、 CH(ph)2、氟(d畫C4)烴氧基和氟(C廠C4)烴基中的一個 或多個取代時，其中R'、 R"、 R'"和R""獨(dú)立地選自氫、(C廣Cs)烴基 和雜烴基、未取代的芳基和雜芳基、(未取代的芳基)-(c「co烴基和(未取代的芳基)氧基-(cvco烴基，其中至少一個選自R4、 R5、 R"和R"的成員包含靶向劑或可檢 測的才示i己。
42、 根據(jù)權(quán)利要求41的化合物，其中所述靶向劑是抗體。
43、 根據(jù)權(quán)利要求37-42任一項(xiàng)的化合物，其中A是取代或未取 代的苯基。
44、 根據(jù)權(quán)利要求37-42任一項(xiàng)的化合物，其中A是取代或未取 代的吡咯。
全文摘要
本發(fā)明提供細(xì)胞毒素duocarmycin的類似物，其有用的前體藥物、連接基團(tuán)和穩(wěn)定劑。還提供了體內(nèi)裂解的肽基和二硫化物連接基團(tuán)。連接基團(tuán)可用于生成本發(fā)明細(xì)胞毒素以及其他診斷和治療部分的前體藥物和綴合物。本發(fā)明提供帶有本發(fā)明連接基團(tuán)臂的duocarmycin類似物的前體藥物和綴合物。
文檔編號C07D417/04GK101671335SQ20091017355
公開日2010年3月17日 申請日期2002年5月31日 優(yōu)先權(quán)日2001年5月31日
發(fā)明者D·J·金, D·P·C·麥克吉, G·T·雅蘭頓, H·P·恩格, I·阿斯塔菲瓦, J·莫勒, O·L·薩恩德斯, S·博伊德, S·甘格沃, T·J·羅布爾, V·馬逖施諾克, 伍國賢, 李志宏 申請人:梅達(dá)萊克斯公司