專利名稱：取代的*唑烷酮類及其用途的制作方法
取代的噁唑烷酮類及其用途 本發(fā)明涉及新的取代噁唑烷酮類(Oxazolidinone)，涉及它們的制備方法，涉及它們用于治療和/或預(yù)防疾病的用途和它們用于制備用來治療和/或預(yù)防疾病(特別是血栓栓塞病癥)的藥物的用途。 血液凝固是生物體的保護(hù)性機(jī)制，藉此能快速并可靠地"密封"血管壁中的缺陷。因此，失血能夠被避免或最小化。血管損傷之后的止血法主要由凝固體系實(shí)施，在該凝固體系中血漿蛋白的復(fù)雜反應(yīng)的酶級(jí)聯(lián)被觸發(fā)。該過程涉及眾多的凝血因子，其中每種因子一旦被激活分別將最接近的非活性前體轉(zhuǎn)變?yōu)槠浠钚孕问健Ｔ诩?jí)聯(lián)末期，發(fā)生可溶性纖維蛋白原向不溶性纖維蛋白的轉(zhuǎn)變，導(dǎo)致血凝塊形成。在血液凝固中，傳統(tǒng)上區(qū)分出內(nèi)在的和外來的體系，其以最終共同的反應(yīng)途徑結(jié)束。在此，因子Xa和IIa(凝血酶)扮演關(guān)鍵角色。
因子Xa捆綁兩個(gè)凝固途徑的信號(hào)，因?yàn)榻?jīng)由因子Vila/組織因子(外來的途徑)和經(jīng)由因子X酶(Tenase)復(fù)合物(內(nèi)在的途徑)通過轉(zhuǎn)化因子X兩者形成。活化的絲氨酸蛋白酶Xa將凝血酶原分裂為凝血酶。 經(jīng)由一系列反應(yīng)，凝血酶將信號(hào)從所述級(jí)聯(lián)傳遞至血液的凝固狀態(tài)。凝血酶將纖維蛋白原直接分裂成纖維蛋白。其將因子XIII(該因子XIII是穩(wěn)定纖維蛋白凝塊所需的)活化成因子XIIIa。另外，凝血酶是血小板凝聚的潛在觸發(fā)器(經(jīng)由PAR-1活化)，其還顯著有助于止血。通過將TAFI(凝血酶可活化的纖維蛋白溶解抑制劑)活化成TAFIa，具有血栓調(diào)節(jié)素的復(fù)合物中的凝血酶抑制所述凝塊的融化。因子V和VIII的活化增強(qiáng)凝血酶的產(chǎn)生并因此進(jìn)而放大凝固反應(yīng)；在具有血栓調(diào)節(jié)素的復(fù)合物中產(chǎn)生的活化的蛋白質(zhì)C對(duì)抗該提高的凝血酶產(chǎn)生，因而防止過度的止血(血栓形成)。 除了血液中游離存在的因子X和凝血酶之外，結(jié)合形式也是公知的。在纖維蛋白凝塊的形成期間，凝血酶和凝血酶原酶(處于復(fù)合物(Komplex)形式中的因子Xa)結(jié)合至纖維蛋白骨架。這些酶分子仍然是活性的且不能由內(nèi)源性抗凝血酶III抑制。因此，以此方式，凝塊仍然具有一般性的凝固效力。 在由于全身因素引起的許多心血管循環(huán)疾病和代謝紊亂疾病中，例如高脂血癥、糖尿病或吸煙，由于血液流動(dòng)因血停滯而改變?cè)斐傻?，例如心房纖維性顫動(dòng)，或由于血管壁的病態(tài)改變?cè)斐傻模鐑?nèi)皮功能障礙或動(dòng)脈粥樣硬化，存在提高的凝固和血小板活化趨向。該不期望的過度的止血可能通過形成富含纖維蛋白和血小板的血栓引起血栓栓塞病癥和伴隨著有生命危險(xiǎn)的狀態(tài)的血栓形成并發(fā)癥。 止血受復(fù)雜調(diào)節(jié)機(jī)制支配。凝固體系不受控制的活化或活化過程的抑制缺陷可能導(dǎo)致形成局部血栓形成或脈管(動(dòng)脈、靜脈、淋巴管)或心室中的栓塞。這可能導(dǎo)致嚴(yán)重的血栓形成的或血栓栓塞的病癥。此外，全身性的高凝固性可能導(dǎo)致散布的血管內(nèi)凝固范圍內(nèi)的消耗性凝血病。血栓栓塞并發(fā)癥進(jìn)一步在微血管病的溶血性貧血、體外循環(huán)系統(tǒng)如血液透析、以及心臟瓣膜修復(fù)術(shù)和支架中遇到。 血栓栓塞病癥是大多數(shù)工業(yè)化國家中最常見的發(fā)病和死亡的起因[HeartDisease :A Textbook of Cardiovascular Medicine, Eugene Braunwald，第5片反，1997，W.B. Saunders Company, Philadelphia]。
來自現(xiàn)有技術(shù)的公知抗凝血?jiǎng)┤缬糜谝种苹蚍乐寡耗痰奈镔|(zhì)具有各種且常常重大的缺點(diǎn)。因此，在實(shí)踐中，血栓形成/血栓栓塞病癥的有效治療方法或預(yù)防措施經(jīng)證實(shí)是很困難和不令人滿意的。 在血栓栓塞病癥的治療和預(yù)防中，首先利用了肝素，其非經(jīng)腸或皮下給藥。由于更有利的藥物動(dòng)力學(xué)性能，目前日益優(yōu)選低分子量肝素；但是，肝素治療中遇到的下文描述的公知缺點(diǎn)不能以此方式避免。例如，肝素是口服無效的并僅僅具有相對(duì)短的半衰期。此外，存在出血的高風(fēng)險(xiǎn)，其中特別可能有腦出血和胃腸道出血，并可能導(dǎo)致血小板減少、藥物性脫發(fā)或骨質(zhì)疏松癥[Pschyrembel，Klinisches W6rterbuch [臨床辭典]，第257版，1994，Walter de Gruyter Verlag，第610頁，關(guān)鍵詞"H印arin" ;R6mpp Lexikon Chemie， 1. 5版，1998， Georg Thieme Verlag Stuttgart,關(guān)鍵詞"H印arin"]。低分子量肝素確實(shí)具有較低的導(dǎo)致肝素引起的血小板減少發(fā)展的可能性，但是，它們同樣僅僅可皮下給藥。這也適用于磺達(dá)肝素，其為半衰期長(zhǎng)的合成制備的選擇性因子Xa抑制劑。 第二類抗凝血?jiǎng)┦蔷S生素K拮抗劑。這些包括例如，2， 3- 二氫-1， 3-茚二酮且特別是化合物如華法林、苯丙香豆素、雙羥香豆素和其它香豆素衍生物，其非選擇性地抑制肝臟中某些維生素K依賴性凝血因子的各種產(chǎn)物的合成。由于作用機(jī)理，作用起效非常緩慢(作用起效的等待時(shí)間36至48小時(shí))。所述化合物盡管可口服給藥；但是，由于出血的高風(fēng)險(xiǎn)以及窄的治療指數(shù)，需要復(fù)雜的個(gè)體調(diào)整和患者監(jiān)控[J. Hirsch，J. Dalen，D. R.Anderson等，"0ral anticoagulants :Mechanism of action,clinicaleffectiveness，and optimaltherapeutic range，，Chest 2001， 119， 8S-21S ;J. Ansell， J. Hirsch， J. Dalen等，"Managingoral anticoagulant therapy" Chest2001，119，22S-38S;P. S. Wells， A.M. Holbtook，N. R. Crowther等，"Interactions of warfarin with drugs and food，， Ann. Intern.Med. 1994， 121,676-683]。此外，已經(jīng)描述了其它副作用如胃腸紊亂、掉發(fā)和皮膚壞死。
另外，在較低程度采用凝血抑制劑。水蛭素是非常有效地抑制凝血酶的蛋白質(zhì)。其以重組體形式作為儲(chǔ)備抗凝血?jiǎng)╈o脈內(nèi)給藥。比伐盧定是水蛭素的20個(gè)氨基酸片段，其具有非常短的半衰期且同樣不可口服利用。這對(duì)直接的非肽的低分子量凝血抑制劑阿加曲班來說也是成立的[J.H. Sohn，等Appl. Microbiol. Biotechnol. 2001， 57， 606-613 ;T.GaldwellClin.Ther. 2002， 24， 38-58 ;G. Escolar， Drugs of Today 2006， 42， 223]。
其它治療方案需要單獨(dú)抑制因子Xa。 [J. Hauptmann， J. Stiirzebecher， ThrombosisResearch 1999， 93， 203 ;S. A. V. Raghavan， M. Dikshit，"Recentadvances in the statusand targets of antithrombotic agents" Drugs Fut. 2002， 27， 669-683 ;H. A. Wieland，V丄aux， D. Kozian， M丄orenz， "Approaches inanticoagulation-Rationales for targetpositioning" Curr. Op in. Invest ig. Drugs 2003， 4， 264-271 ;U. J". Ries， W. Wienen，"Serine proteases as targetsfor antithrombotic therapy，，Drugs Fut. 2003,28，355-370 ;L. _A. Linkins， J. I. Weitz， "New anticoagulant therapy" A皿u. Rev. Med. 2005，56，63-77 ;A. Casimiro-Garcia等 人，"Progress in the discovery of Factor Xainhibitors"Expert Opin. Ther. Patents 2006，15，119_145]。 在此，已經(jīng)展示了在動(dòng)物模型中有效作為因子Xa抑制劑的各種化合物，既有肽的化合物也有非肽的化合物。迄今為止，已知許多直接因子Xa抑制劑[J. M. Walenga，W. P. Jeske， D. Hoppensteadt， J. Fareed，"Factor Xa Inhibitors :Today and beyond，，Curr.Opin.Investig. Drugs 2003，4，272-281 ;J. Ruef， H. A. Katus，"New antithromboticdrugs on the horizon" Expert Opin. Investig. Drugs 2003， 12， 781-797 ;M丄Qimn，J. M. Smallheer，"The race to an orally active Factor Xa inhibitor :Recentadvances"Curr. Opin. Drug Discovery & Development 2004，7，460-469]。在W0 01/47919中描述了噁唑烷酮類作為非肽的低分子量因子Xa抑制劑。 最近，已經(jīng)描述了其中低分子量凝血酶和因子Xa抑制劑以不同混合比在體外和體內(nèi)測(cè)試的方案。在此，發(fā)現(xiàn)了強(qiáng)烈的協(xié)同效應(yīng)。Tanogitran被描述為低分子量物質(zhì)，其抑制凝血酶和因子Xa兩者，但是其強(qiáng)烈優(yōu)選用于凝血酶抑制。該物質(zhì)處于開發(fā)中，不是經(jīng)口可生物利用的。 對(duì)于抗血栓形成的藥物，治療廣度具有中心重要性用于凝血抑制的治療活性劑量與其中可能出血的劑量之間的間距應(yīng)該盡可能地大，以使得在最低的風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)實(shí)現(xiàn)最大治療活性。 如通過由低分子量凝血酶與因子Xa抑制劑的混合物進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)所示，抑制凝血酶和因子Xa兩者的化合物借助于它們的雙重特性而具有特別強(qiáng)烈的協(xié)同作用，因此在控制血栓形成中特別有效。以此方式，所述化合物抑制凝固級(jí)聯(lián)的兩種關(guān)鍵酶，而無需完全阻滯各個(gè)酶。保持其余的因子Xa和凝血酶導(dǎo)致完好的止血并因此導(dǎo)致特別有利的治療廣度。在兔子中的動(dòng)靜脈分流模型中，可以表明，選擇性因子Xa抑制劑PD0313052和選擇性凝血酶抑制劑阿加曲班的僅僅弱抗血栓形成活性劑量的輔助給藥導(dǎo)致強(qiáng)烈的超加性的抗血栓形成效果。另外，當(dāng)具有最大協(xié)同效應(yīng)的各個(gè)劑量合并時(shí)，沒有觀察到增加的出血。這些觀察結(jié)果能夠得出以下結(jié)論凝血酶和因子Xa的同時(shí)抑制提高了就抗血栓形成作用和出血風(fēng)P僉之間的間足巨來i兌的治療廣度(Journal of Thrombosis andHaemostasis，4 :834—841)。
該協(xié)同作用在作為物質(zhì)濃度的函數(shù)的前凝血酶時(shí)間通過與純因子Xa和凝血酶抑制劑直接比較而進(jìn)行研究時(shí)特別顯著。對(duì)所述凝固級(jí)聯(lián)的兩種關(guān)鍵酶的強(qiáng)烈影響被認(rèn)為在存在血栓形成的高風(fēng)險(xiǎn)時(shí)，或者在血栓形成可能導(dǎo)致致死病癥時(shí)特別有利。這二者例如涉及在急性冠狀動(dòng)脈綜合征類型的動(dòng)脈粥樣硬化性病癥或急性心肌梗塞之后的狀態(tài)的情況下。 此外，與肝素、水蛭素和維生素K拮抗劑不同，抑制凝血酶和因子Xa 二者的化合物還將對(duì)與纖維蛋白凝塊結(jié)合的凝血因子是活性的。已經(jīng)存在的凝塊的血栓形成效力的限制是預(yù)防動(dòng)脈阻塞的關(guān)鍵點(diǎn)。這特別有效地通過抑制存在的凝血酶活性和凝塊中新凝血酶的形成二者而實(shí)現(xiàn)。盡管純的凝血抑制劑不能通過凝塊結(jié)合的含因子Xa的凝血酶原酶復(fù)合物防止雪崩樣凝血酶產(chǎn)生且所述抑制效果因此可能在高度激發(fā)的凝固中通過產(chǎn)生的大量凝血酶過度補(bǔ)償，但純的因子Xa抑制劑不能夠抑制已經(jīng)存在的凝血酶活性。由于抑制同樣不可能通過生理機(jī)制進(jìn)行，該凝塊結(jié)合的凝血酶造成特別大的風(fēng)險(xiǎn)。相反，雙重化合物，即抑制凝血酶和因子Xa 二者的化合物，既能夠抑制凝血酶產(chǎn)生又能夠抑制凝塊上的凝血酶活性，因此還防止可能的凝塊生長(zhǎng)。 因此，本發(fā)明的目的是提供雙重化合物，即抑制凝血酶和因子Xa 二者的化合物，且其通過抑制凝血酶產(chǎn)生和凝塊上的凝血酶活性防止它們可能的生長(zhǎng)，其具有寬的治療窗口 ，用于在人和動(dòng)物中控制疾病，特別是血栓栓塞病癥。
本發(fā)明提供下式的化合物
<formula>formula see original document page 8</formula>
其中 n表示數(shù)字0、1、2或3， R1表示氯、三氟甲氧基、甲基、乙基、正丙基、甲氧基、甲氧基甲基或乙氧基甲基，
f表示氫或甲基， 和它們的鹽、它們的溶劑合物和它們的鹽的溶劑合物。 如果式(I)所包括的下文提及的化合物并未已經(jīng)是鹽、溶劑合物和其鹽的溶劑合物，則本發(fā)明化合物是式(I)的化合物和它們的鹽、溶劑合物和其鹽的溶劑合物，式(I)所包括并具有下文提及的通式的化合物和它們的鹽、溶劑合物和其鹽的溶劑合物，以及式(I)所包括并在下文中作為示例性實(shí)施方案提及的化合物和它們的鹽、溶劑合物和其鹽的溶劑合物。 根據(jù)它們的結(jié)構(gòu)，本發(fā)明化合物可以以立體異構(gòu)形式(對(duì)映體、非對(duì)映體)存在。因此，本發(fā)明包括對(duì)映體或非對(duì)映體以及它們各自的混合物。從對(duì)映體和/或非對(duì)映體的此類混合物，可以以公知方式分離出立體異構(gòu)一致的組分。 如果本發(fā)明化合物能夠以互變異構(gòu)形式存在，則本發(fā)明包括所有的互變異構(gòu)形式。 在本發(fā)明的上下文中，優(yōu)選的鹽是本發(fā)明化合物的生理學(xué)可接受的鹽。本發(fā)明還包括就其本身來說并不適合于藥學(xué)應(yīng)用，但其可以例如用于分離或純化本發(fā)明化合物的
^! . o 本發(fā)明化合物的生理學(xué)可接受的鹽包括無機(jī)酸、羧酸和磺酸的酸加成鹽，例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、萘二磺酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、乳酸、酒石酸、蘋果酸、檸檬酸、富馬酸、馬來酸和苯甲酸的鹽。 本發(fā)明化合物的生理學(xué)可接受的鹽還包括常規(guī)堿的鹽，例如且優(yōu)選，堿金屬鹽(例如鈉鹽和鉀鹽)、堿土金屬鹽(例如f5鹽和鎂鹽)和銨鹽，衍生自氨或具有i-ie個(gè)碳原子的有機(jī)胺，例如且優(yōu)選，乙胺、二乙胺、三乙胺、乙基二異丙基胺、單乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二環(huán)己胺、二甲氨基乙醇、普魯卡因、二芐基胺、N-甲基嗎啉、精氨酸、賴氨酸、乙二胺和N-甲基哌啶。 在本發(fā)明上下文中，溶劑合物是處于固體或液態(tài)的本發(fā)明化合物通過與溶劑分子配位形成絡(luò)合物的那些形式。水合物是特定形式的溶劑合物，其中與水進(jìn)行配位。在本發(fā)明的上下文中，優(yōu)選的溶劑合物是水合物。 此外，本發(fā)明還包括本發(fā)明化合物的前藥。術(shù)語"前藥"包括就其本身來說可以是生物學(xué)活性的或非活性的，但在其于體內(nèi)停留時(shí)間期間轉(zhuǎn)變?yōu)楸景l(fā)明化合物(例如代謝地或水解地)的化合物。
優(yōu)選式(I)化合物，其中
n表示數(shù)字0、l或2， R1表示氯，三氟甲氧基，甲基，正丙基，甲氧基或甲氧基甲基， f表示氫或甲基， 和它們的鹽、它們的溶劑合物和它們的鹽的溶劑合物。 還優(yōu)選這樣的式(I)化合物，其中 n表示數(shù)字0、l或2， W表示甲基，甲氧基或甲氧基甲基， 1 2表示氫， 和它們的鹽、它們的溶劑合物和它們的鹽的溶劑合物。 還優(yōu)選這樣的式(I)化合物，其中 n表示數(shù)字0、l或2， W表示甲基， 1 2表示氫， 和它們的鹽、它們的溶劑合物和它們的鹽的溶劑合物。 還優(yōu)選這樣的式(I)化合物，其中 n表示數(shù)字l或2， W表示甲基， 1 2表示氫， 和它們的鹽、它們的溶劑合物和它們的鹽的溶劑合物。 還優(yōu)選其中n表示數(shù)字1或2的式(I)的化合物。 還優(yōu)選其中n表示數(shù)字1的式(I)的化合物。 還優(yōu)選其中R1表示甲基的式(I)的化合物。 還優(yōu)選其中R2表示氫的式(I)的化合物。 還優(yōu)選其中R1表示甲基和R2表示氫的式(I)的化合物。.還特別優(yōu)選以下通式的化合物5-氯-N- [ ((5S) -3- {4- [3-(羥甲基)_2_氧代吡 啶_1(211)-基]-3-甲基苯基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5_基)甲基]噻吩-2_甲酰胺
和其鹽、其溶劑合物和其鹽的溶劑合物。所述化合物描述于實(shí)施例2中。
還特別優(yōu)選以下通式的化合物5-氯-N- [ ((5S) -3- {4_ [3- (2-羥乙基)_2_氧代吡 啶_1(211)-基]-3-甲基苯基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5_基)甲基]噻吩-2_甲酰胺
9<formula>formula see original document page 10</formula> 和其鹽、其溶劑合物和其鹽的溶劑合物。所述化合物描述于實(shí)施例6中。
還特別優(yōu)選以下通式的化合物5-氯-N- {[ (5S) -3- {4_[3_ (3_羥丙基)_2_氧代吡 啶_1(211)-基]-3-甲基苯基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5_基]甲基}噻吩-2_甲酰胺
<formula>formula see original document page 10</formula> 和其鹽、其溶劑合物和其鹽的溶劑合物。所述化合物描述于實(shí)施例10中。 基團(tuán)的各個(gè)組合或優(yōu)選組合中的在每一情況下給出的基團(tuán)定義還獨(dú)立于基團(tuán)的
各個(gè)給定組合而被其它組合的任何基團(tuán)定義所代替。 非常特別優(yōu)選兩個(gè)或更多個(gè)的以上提及的優(yōu)選范圍的組合。 本發(fā)明此外提供了用于制備式(I)的化合物或其鹽、其溶劑合物或其鹽的溶劑合
物的方法，其中 [A]下式的化合物<formula>formula see original document page 10</formula>
<formula>formula see original document page 10</formula>
在第一步驟中與下式的化合物反應(yīng)

其中n、 R1和R2具有如上給出的含義， 以產(chǎn)生下式的化合物，V (IV), 其中n、 R1和R2具有如上給出的含義， 以及在第二步驟中，在光氣或光氣等同物如羰二咪唑(CDI)的存在下環(huán)化以產(chǎn)生
式(I)的化合物 或者 [B]下式的化合物 其中 X表示鹵素，優(yōu)選溴或者氯，或者羥基。 如果羥基在所述方法過程中受到保護(hù)，例如通過甲硅烷基保護(hù)基保護(hù)，則這些保
護(hù)基在所述方法[A]或[B]結(jié)束后使用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法除去，例如通過與溶劑
如四氫呋喃中的四丁基氟化銨反應(yīng)，或通過與甲醇中的氯化氫反應(yīng)除去。 通過使用乙腈/水梯度并添加有堿的反相柱上的色譜，特別是通過使用
RP18Phenomenex Luna C18(2)柱和二乙胺作為堿，或者通過在有機(jī)溶劑中溶解所述鹽并用
堿式鹽如碳酸氫鈉的水溶液提取(ausschiltteln)，能夠獲得所述鹽的游離堿。 本發(fā)明還提供了用于制備式(I)的化合物或其溶劑合物的方法，其中所述化合物
的鹽或所述化合物的鹽的溶劑合物通過色譜法在向所述化合物添加堿的條件下轉(zhuǎn)化。 方法[A]的第一步驟的反應(yīng)通常在惰性溶劑中，在路易斯酸的存在下，優(yōu)選在室
溫_溶劑回流的溫度范圍，在大氣壓下實(shí)施。 惰性溶劑是例如極性非質(zhì)子溶劑，例如乙腈、丁腈、二氯甲烷或氯仿；優(yōu)選乙腈。
路易斯酸是例如高氯酸鎂、三氟甲磺酸鐿(ni)、溴化鋰、三氟甲基磺酸鎂或三氯
化鋁；優(yōu)選高氯酸鎂。

其中n，R1和f如以上所定義 與下式的化合物反應(yīng)
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方法[A]的第二步驟的反應(yīng)通常在惰性溶劑中，在堿的存在下，優(yōu)選在室溫-溶劑 回流的溫度范圍，在大氣壓下實(shí)施。 惰性溶劑是例如極性非質(zhì)子溶劑，例如乙腈或丁腈。
堿是例如強(qiáng)叔胺堿，例如4-N， N- 二甲基氨基吡啶。 優(yōu)選與N， N-羰二咪唑作為碳酸等同物通過添加4_N， N_ 二甲基氨基吡啶作為堿反 應(yīng)。 如果在方法[B]中X是鹵素，則反應(yīng)通常在惰性溶劑中，任選地在堿的存在下，優(yōu) 選在-3(TC至5(TC的溫度范圍，在大氣壓下實(shí)施。 惰性溶劑是例如四氫呋喃，二氯甲烷，吡啶，二氧雜環(huán)己烷或二甲基甲酰胺，優(yōu)選 四氫呋喃或二氯甲烷。 堿是例如三乙胺，二異丙基乙胺或N-甲基嗎啉；優(yōu)選二異丙基乙胺。 如果在方法[B]中X是羥基，則反應(yīng)通常在惰性溶劑中，在脫水劑的存在下，任選
地在堿的存在下，優(yōu)選在_301:至5(TC的溫度范圍，在大氣壓下實(shí)施。 惰性溶劑是例如鹵代烴，如二氯甲烷或三氯甲烷，烴，如苯，硝基甲烷，二氧雜環(huán)己 烷，二甲基甲酰胺或乙腈。還可以使用所述溶劑的混合物。特別優(yōu)選二氯甲烷或二甲基甲 酰胺。 在此，合適的脫水劑是例如，碳二亞胺，例如，N， N， -二乙基-，N， N，' -二丙基-， N， N' -二異丙基-，N， N' -二環(huán)己基碳二亞胺，N-(3-二甲基氨基異丙基)-N'-乙基碳二 亞胺鹽酸鹽(EDC) ，N-環(huán)己基碳二亞胺-N'-丙氧基甲基-聚苯乙烯(PS-碳二亞胺)或羰 基化合物，如羰二咪唑，或1， 2-噁唑鎗化合物(Oxazoliumverbindung)，如2-乙基-5-苯 基-1， 2-噁唑鎗(oxazolium) 3_硫酸鹽或2-叔丁基-5-甲基異噁唑鎗高氯酸鹽，或酰氨基 化合物，如2-乙氧基-1-乙氧基羰基-1， 2- 二氫喹啉，或丙烷膦酸酐，或氯甲酸異丁酯，或 雙(2-氧代-3-噁唑烷基)磷酰氯或苯并三唑基氧基_三(二甲基氨基)六氟磷酸轔，或 0-(苯并三唑-1-基)-N， N， N， ， N，-四甲基脲鎗六氟磷酸鹽(HBTU) ， 2- (2-氧代+ (2H)-吡 啶基)_1，1，3，3-四甲基脲鎗四氟硼酸鹽(TPTU)或0-(7-氛雜苯并三唑-l-基)-N，N，N'， N'-四甲基脲鎗六氟磷酸鹽(HATU)，或1-羥基苯并三唑(HOBt)，或苯并三唑_1_基氧基三 (二甲基氨基)六氟磷酸轔(BOP)，或N-羥基琥珀酰亞胺，或它們與堿的混合物。
堿是例如堿金屬碳酸鹽，例如，碳酸鈉或碳酸鉀，或碳酸氫鈉或碳酸氫鉀，或有機(jī) 堿，例如三烷基胺如三乙胺，N-甲基嗎啉，N-甲基哌啶，4-二甲基氨基吡啶或二異丙基乙 胺。 與HATU或與EDC的縮合優(yōu)選在HOBt存在下實(shí)施。 通式(II)和(VI)的化合物是已知的或者能夠由已知的方法從相應(yīng)起始化合物合 成。 式(III)的化合物是已知的或者能夠通過還原下式化合物中的硝基制備
12HO 其中n、W和f具有如上給出的含義。 該反應(yīng)通常使用還原劑在惰性溶劑中，優(yōu)選在室溫-溶劑回流的溫度范圍，在大 氣壓至3巴實(shí)施。 還原劑是例如披鈀活性碳(Palladium auf Aktivkohl)和氫氣、二氯化錫、三氯化 鈦或甲酸銨以及在乙醇和乙酸乙酯混合物中的披鈀活性碳；優(yōu)選披鈀活性碳和氫氣或二氯 化錫。 惰性溶劑是例如醚，如乙醚，甲基叔丁基醚，l，2-二甲氧基乙烷，二氧雜環(huán)己烷， 四氫呋喃，乙二醇二甲醚或二甘醇二甲醚，醇，如甲醇，乙醇，正丙醇，異丙醇，正丁醇或叔丁 醇，烴，如苯，二甲苯，甲苯，己烷，環(huán)己烷或石油級(jí)分，或其它溶劑，如二甲基甲酰胺，二甲基 乙酰胺，乙腈或吡啶；優(yōu)選溶劑是甲醇，乙醇，異丙醇或在二氯化錫的情況下，二甲基甲酰胺。 式(VII)的化合物是已知的，能夠通過公知方法從相應(yīng)的起始化合物合成或者能 夠類似于實(shí)施例部分描述的方法制備。 式(V)的化合物是已知的或者能夠通過從下式化合物中除去鄰苯二甲酰亞胺保
護(hù)基而制備
HO
(vm)' 其中n、W和f具有如上給出的含義。 該反應(yīng)通常使用甲胺水溶液或水合肼的乙醇溶液，優(yōu)選使用甲胺水性溶液在溶劑 回流下在大氣壓下實(shí)施。 式(VIII)的化合物是已知的，能夠如方法[A]所述制備或者能夠通過公知方法從 適當(dāng)?shù)钠鹗蓟衔锖铣伞?在式(III)、 (IV)、 (V)、 (VII)和(VIII)的化合物中，羥基可任選帶有甲硅烷基保 護(hù)基，例如叔丁基(二苯基)甲硅烷基。 本發(fā)明化合物的制備可以通過以下合成方案例示說明 方案1 :
13
本發(fā)明化合物具有預(yù)料不到的有用藥理學(xué)活性范圍。
因此它們適用于作為用來治療和/或預(yù)防人和動(dòng)物疾病的藥物。 本發(fā)明化合物是凝血因子Xa和凝血酶(因子IIa)的雙重抑制劑，特別地作為抗
凝血?jiǎng)┢鹱饔?。所述化合物抑制凝血酶和因子Xa 二者，通過抑制凝血酶產(chǎn)生和凝塊上的凝
14血酶活性防止它們可能的生長(zhǎng)并具有寬的治療窗口。 本發(fā)明還提供了本發(fā)明化合物用來治療和/或預(yù)防病癥，優(yōu)選血栓栓塞病癥和/ 或血栓栓塞并發(fā)癥的用途。"血栓栓塞病癥"在本發(fā)明意義上特別地是病癥如伴隨著ST段抬高(STEMI)和沒 有ST段抬高(非STEMI)的心肌梗死、穩(wěn)定型心絞痛、不穩(wěn)定型心絞痛、冠狀動(dòng)脈介入如血 管成形術(shù)或主冠狀動(dòng)脈分流術(shù)后的再閉合(Reokklusion)和再狹窄、周邊動(dòng)脈阻塞疾病、 肺栓塞、重度靜脈血栓形成和腎靜脈血栓形成、暫時(shí)的缺血性發(fā)病以及血栓形成的和血栓 栓塞的中風(fēng)。 因此，本發(fā)明化合物還適合于在具有急性、間歇性或持續(xù)性心律不齊(例如心房
纖維性顫動(dòng))的患者和經(jīng)歷心臟復(fù)律的患者以及具有心臟瓣膜病癥或具有人造心臟瓣膜
的患者中預(yù)防和治療心原性的血栓栓塞，例如腦缺血、中風(fēng)和全身性血栓栓塞和缺血。 血栓栓塞并發(fā)癥還在微血管病的溶血性貧血、體外血液循環(huán)系統(tǒng)如血液透析和心
臟瓣膜修復(fù)術(shù)中遇到。 此外，本發(fā)明化合物還適合于預(yù)防和/或治療動(dòng)脈粥樣硬化的血管病癥和炎性病 癥，例如運(yùn)動(dòng)機(jī)構(gòu)的風(fēng)濕性病癥，并另外還用于預(yù)防和/或治療阿爾茨海默氏病。此外，本 發(fā)明化合物可以用于抑制腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的形成，用于微血管病、年齡相關(guān)的斑點(diǎn)退化、糖 尿病性視網(wǎng)膜病、糖尿病性腎病和其它微血管病癥，以及用于預(yù)防和治療血栓栓塞并發(fā)癥， 例如靜脈血栓栓塞，用于腫瘤患者，特別是經(jīng)歷大外科手術(shù)或者化學(xué)或放射療法的那些。
此外，本發(fā)明化合物還適合于預(yù)防和/或治療肺動(dòng)脈高血壓。 術(shù)語"肺動(dòng)脈高血壓"包括肺動(dòng)脈高血壓的特定形式，如通過例如世界衛(wèi)生組織 (WHO)所測(cè)定的(Clinical Classification of PulmonaryHypertension，威尼斯2003)。 可以提及的實(shí)例是肺動(dòng)脈高血壓、與左心病癥有關(guān)的肺動(dòng)脈高血壓、與肺病癥和/或缺氧 有關(guān)的肺動(dòng)脈高血壓以及由于慢性血栓栓塞造成的肺動(dòng)脈高血壓(CTEPH)。
"肺動(dòng)脈高血壓"包括自發(fā)的肺動(dòng)脈高血壓(IPAH，過去還稱為原發(fā)性肺動(dòng)脈 高血壓)，家族性肺動(dòng)脈高血壓(FPAH)以及相關(guān)性肺動(dòng)脈高血壓(APAH)，其與膠原酶 (Kollagenoses)有關(guān)，先天性的系統(tǒng)性肺Shuntvitien，門靜脈高壓癥，HIV感染，特定藥品 和藥劑的攝取，伴隨著其它病癥(甲狀腺病癥、糖原儲(chǔ)存病癥、戈謝病(Morbus Gaucher)、 遺傳性毛細(xì)血管擴(kuò)張癥(Teleangietasy)、血紅蛋白病(hamoglobinopathien)、脊髓增生 病、脾切除術(shù))，伴隨著具有顯著靜脈毛細(xì)管作用的病癥，例如肺靜脈閉塞病癥和肺毛細(xì)管 血紅蛋白病，以及新生嬰兒的持續(xù)性肺動(dòng)脈高血壓。 與左心病癥有關(guān)的肺動(dòng)脈高血壓包括患病的左心房或心室以及二尖瓣的或主動(dòng) 脈的瓣膜缺陷。 與肺病癥和/或缺氧有關(guān)的肺動(dòng)脈高血壓包括慢性梗阻性肺病癥、間質(zhì)肺病癥、 睡眠呼吸暫停綜合征、肺泡換氣過低、慢性高山病和內(nèi)在缺陷。 由于慢性血栓栓塞造成的肺動(dòng)脈高血壓(CTEPH)包括肺動(dòng)脈近端的血栓栓塞閉
塞、肺動(dòng)脈遠(yuǎn)端的血栓栓塞閉塞和非血栓形成的肺栓塞(腫瘤、寄生蟲、外來體)。 本發(fā)明還提供了本發(fā)明化合物用于制備用來治療和/或預(yù)防與結(jié)節(jié)病、組織細(xì)胞
增多病X和淋巴管瘤病(Lymphangiomatosis)有關(guān)的肺動(dòng)脈高血壓。 此外，根據(jù)本發(fā)明的物質(zhì)還可以適合于治療肺和肝纖維組織形成。
15
此外，本發(fā)明化合物還可以適用于治療和/或預(yù)防膿毒癥(或敗血病)、全身性炎 性綜合征(SIRS)、膿毒性器官功能障礙、膿毒性器官衰竭和多器官衰竭、急性呼吸困難綜合 征(ARDS)、急性肺損傷(ALI)、膿毒性休克、DIC(彌漫性血管內(nèi)凝血或消耗性凝血病)和/ 或膿毒性器官衰竭。"膿毒癥"定義為存在感染和全身性炎性響應(yīng)綜合征(以下稱為"SIRS")。 SIRS 發(fā)生與感染、以及其它狀態(tài)如損傷、燒傷、休克、手術(shù)、缺血、胰腺炎、復(fù)蘇(Reanimation)或 月中瘤有關(guān)。ACCP/SCCMConsensus Conference Committee 1992的定義(Crit Care Med 1992;20:864-874)描述了用于診斷"SIRS"所需的診斷癥狀和測(cè)量參數(shù)(尤其是體溫 變化、提高的心率、呼吸困難和變化的血像)。后來的(2001)SCCM/ESICM/ACCP/ATS/SIS International S印sis Definitions Conference基本上保留了所述標(biāo)準(zhǔn)，但進(jìn)行了細(xì)節(jié) 的微調(diào)(Levy等人，Crit Care Med2003 ;31 :1250-1256)。 在膿毒癥的過程中，可能有伴隨著在不同器官中形成微血栓和繼發(fā)性出血性并發(fā) 癥的凝固體系的普遍活化(彌漫性血管內(nèi)凝血或消耗性凝血病，以下稱為"DIC")。此外， 可能有伴隨著脈管增加的滲透性以及液體和蛋白滲出進(jìn)入血管外腔的內(nèi)皮損傷。隨著膿毒 癥進(jìn)一步發(fā)展，可能有器官衰竭(例如腎衰竭、肝衰竭、呼吸衰竭、中樞神經(jīng)缺陷和/或心血 管衰竭)或多器官衰竭。"膿毒性休克"表示需要治療的低血壓發(fā)作，該低血壓推動(dòng)其它器 官損傷并且與預(yù)后惡化有關(guān)。 病原體可以是細(xì)菌(Bakterien)(革蘭氏陰性和革蘭氏陽性)、真菌、病毒和/或真 核生物。引入點(diǎn)或原發(fā)性感染可以是例如肺炎、尿路感染或腹膜炎。感染可能但并不一定 地與菌血癥有關(guān)。 DIC和/或SIRS可能在膿毒癥過程中，以及由于手術(shù)、腫瘤疾病、燒傷或其它損傷 而出現(xiàn)，在DIC中，在受損內(nèi)皮細(xì)胞表面、外來體表面或受損的血管外組織的表面上存在凝 血體系的大量活化。結(jié)果，在多個(gè)器官的小脈管中存在凝固，伴隨著相關(guān)的缺氧和后續(xù)的器 官功能障礙。其次，存在凝血因子(例如因子X、凝血酶原和纖維蛋白原)和血小板消耗，這 降低了血液凝固的能力并可能導(dǎo)致嚴(yán)重的出血。 膿毒癥的治療首先由隨后的消除感染性起因組成，例如通過手術(shù)的病灶改造和抗 生作用。其次，其在于受影響器官系統(tǒng)的臨時(shí)性密集醫(yī)療援助。該疾病的多個(gè)階段的治療 已經(jīng)例如描述于以下出版物中(Dellinger等人，Crit Care Med 2004;32:858-873)。對(duì) 于DIC，沒有經(jīng)證實(shí)的奏效治療。 本發(fā)明還提供了包括至少一種本發(fā)明化合物和一種或多種其它活性成分，特別是 用于治療和/或預(yù)防上述病癥的其它活性成分的藥物。示例性和優(yōu)選的活性成分組合是
抗生素治療 多種抗生素或抗真菌藥劑組合是合適的，作為計(jì)劃的治療(在存在微生物診斷之
前)或作為特異性治療。
液體治療
例如晶質(zhì)或膠態(tài)液體。
血管加壓藥例如正腎上腺素(Nor印in印hrin)、多巴胺或加壓素
"變力治療
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例如多巴酚丁胺 皮質(zhì)類固醇 例如氫化可的松或氟氫可的松'重組的人活化蛋白質(zhì)C Xigris *血液產(chǎn)品 例如紅血球濃縮物、血小板濃縮物、促紅細(xì)胞生成因子或新鮮冰凍血漿 在膿毒癥引起的急性肺損傷(ALI) 或急性呼吸困難綜合征(ARDS)的情況下人工換氣 例如允許性高碳酸血癥、降低的潮氣量 鎮(zhèn)靜、止痛和神經(jīng)肌肉阻斷 鎮(zhèn)靜例如地西泮、勞拉西泮、咪達(dá)唑侖或丙泊酚。類阿片例如芬太尼、氫嗎啡 酮、嗎啡、哌替啶或瑞芬太尼。NSAID :例如酮咯酸、布洛芬或?qū)σ阴０被印Ｉ窠?jīng)肌肉阻斷 例如泮庫溴銨(Pancuronium)
葡萄糖控制
例如胰島素、葡萄糖
腎臟替代方法 例如連續(xù)的靜脈-靜脈血液過濾(Hamofiltration)或間歇性的血液透析。用于 腎保護(hù)的低劑量多巴胺。
抗凝血?jiǎng)?例如用于血栓形成預(yù)防或腎臟替代方法，例如未分級(jí)的肝素、低分子量肝素、類肝
素、水蛭素、比伐盧定或阿加曲班。 *碳酸氫鹽治療，應(yīng)激性潰瘍預(yù)防 例如H2-受體抑制劑、抗酸劑 此外，本發(fā)明化合物還可以用于防止體外凝固，例如用于保存血液和血漿產(chǎn)品，用 于清潔/預(yù)處理導(dǎo)液管和其它醫(yī)療輔助品和儀器，用于涂布體內(nèi)或體外使用的醫(yī)療輔助品 和儀器的合成表面或用于包括因子Xa和/或因子IIa的生物樣品。 本發(fā)明還提供了本發(fā)明化合物用來治療和/或預(yù)防病癥，特別是以上提及的病癥 的用途。 本發(fā)明還提供了本發(fā)明化合物用于制備用來治療和/或預(yù)防病癥(特別是以上提 及的病癥)的藥物的用途。 本發(fā)明還提供了使用抗凝固有效量的本發(fā)明化合物用于制備用來治療和/或預(yù) 防病癥(特別是以上提及的病癥)的藥物的用途。 本發(fā)明還提供了用于防止血液體外凝固的方法，特別是在庫存血或包含因子Xa 和/或因子IIa的生物樣品中，該方法的特征在于加入抗凝固有效量的的本發(fā)明化合物。
本發(fā)明還提供了包括本發(fā)明化合物和一種或多種其它活性成分，特別是用于治療 和/或預(yù)防上述病癥的其它活性成分的藥物。例如且優(yōu)選，提及下列活性成分或組合
脂質(zhì)降低物質(zhì)，特別是服6-&^-(3-羥基-3_甲基戊二酰-輔酶A)還原酶抑制
17劑，例如，洛伐他汀(Mevacor ;US 4， 231， 938)，辛伐他汀(Zocor ;US 4， 444， 784)，普伐他汀 (Pravachol ;US 4， 346， 227)，氟伐他汀(Lescol ;US 5， 354， 772)和阿托伐他汀(Lipitor ; US 5， 273， 995); 冠狀動(dòng)脈的治療劑/血管舒張藥(Vasodilatator)，特別是ACE(血管緊張肽轉(zhuǎn)化 酶)抑制劑，例如卡托普利(C即topril)、賴諾普利(Lisinopril)、依那普利(Enal即ril)、 雷米普利(Ramipril)、西拉普利(Cilaz即ril)、貝那普利(Benaz印ril)、福辛普利 (Fosinopril)、喹那普利(Quinapril)和培哚普利(Perindopril)，或者All (血管緊張素 II)受體拮抗體，例如恩布沙坦(Embusartan) (US 5863930)、氯沙坦、纈沙坦、厄貝沙坦、 坎地沙坦(Candesartan)、依普羅沙坦和替米沙坦(Temisartan)，或P _腎上腺素能受體 拮抗劑，例如卡維地洛(Carvedilol)、阿普洛爾(Alprenolol)、比索洛爾(Bisoprolol)、 醋丁洛爾(Acebutolol)、阿替洛爾(Atenolol)、倍他洛爾(Betaxolol)、卡替洛爾 (Carteolol)、美托洛爾(Metoprolol)、納多洛爾(Nadolol)、噴布洛爾(Penbutolol) 、 口引 哚洛爾(Pindolol)、萘異丙促胺(Propanolol)和噻嗎洛爾(Timolol)，或a _1_腎上腺 素能受體拮抗劑，例如哌唑嗪(Prazosin)、布那唑嗪(Bunazosin)、多沙唑嗪(Doxazosin) 和特拉唑嗪(Terazosin)或利尿劑，例如氫氯噻嗪(Hydrochlorothiazid)、呋喃苯胺酸 (Furosemid)、布美他尼(Bumetanid)、妣咯他尼(Piretanid)、托拉塞米(Torasemid)、阿米 洛利(Amilorid)和雙肼屈嗪(Dihydralazin)或f丐通道阻滯劑，例如維拉帕米(Verapamil) 和地爾硫卓(Diltiazem)，或二氫妣啶衍生物，例如硝苯地平(Nifedipin) (Adalat)和尼 群地平(Nitrendipine) (Bayotensin)，或硝基制劑，例如5-—硝酸異山梨醇酯、二硝酸 異山梨醇酯和三硝酸甘油酯，或引起環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)增加的物質(zhì)，例如可溶性鳥苷酸 環(huán)化酶的激活劑(TO 98/16223， W0 98/16507， W098/23619, WO 00/06567， W0 00/06568， W0 00/06569， W0 00/21954， W000/66582, W0 01/17998， W0 01/19776， W0 01/19355， W0 01/19780， W001/19778, W0 07/045366， W0 07/045367， W0 07/045369， W0 07/045370， W0 07/045433); 溶纖酶原活化劑(溶栓劑/溶血纖劑)和推動(dòng)血栓溶解/纖維蛋白溶解的化合 物，例如血纖蛋白溶酶原激活物抑制劑的抑制劑(PAI抑制劑)或凝血酶活化的纖維蛋白溶 解抑制劑的抑制劑(TAFI抑制劑)，例如組織纖溶酶原活化劑(t-PA)、鏈激酶、瑞替普酶和 尿激酶； 抗凝固活性物質(zhì)(抗凝血?jiǎng)?，例如肝素(UFH)、低分子量肝素(NMH)，例 如亭扎肝素(Tinz即arin)、舍托肝素(Certoparin)、帕肝素(Parn即arin)、那屈肝素 (Nadroparin)、阿地月干素(Ard印arin)、依諾月干素(Enoxaparin)、瑞月干素(Reviparin)、達(dá)月干 素(Dalt印arin)、達(dá)那月干素(Dan即aroid)，AVE 5026(Sanofi-Aventis， Company Presentation 2008年2月12日)，
M118(Momenta Pharmaceuticals Inc，Press Release 2008年2月14日)，
0RG42675 (0rga麗International Inc， Company World Wide Website2007年4 月)， 以及直接的凝血酶抑制劑(DTI)，例如，
Exanta(希美力口群(Ximelagatran))
18
Rendix(達(dá)比力口群(Dabigatran))
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基]-D-脯氨酰胺[W0 2005/084685]
19

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ofAnti-Thrombin Drug MPC_0920，，， Myriad Genetics Inc，2006年5月2日]禾口 TGN-255(flovagatran) 以及直接的因子Xa抑制劑，例如 利伐沙班(Rivaroxaban) (BAY59-7939) :5-氯_N_ ({(5S) _2_氧代_3_[4-(3_氧代 嗎啉-4-基)苯基]-l， 3-噁唑烷-5-基}甲基)噻吩-2-甲酰胺[W02001/47919]
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HO WO 2004/056784中公開的化合物YM-150[Y. Iwatsuki等人，Blood 2006， 108，摘要911 (ASH 2006)]， N-(4-溴-2-[(5-氯妣啶-2-基)氨基甲?；鵠_6_羥苯基} _1_異丙基哌啶_4_羧
酰胺[JP 2005/179272] W0 2000/242270中公開的化合物，AZ12300547 :6_[4_ ({(2S) _4_[ (3_氯_1H_吲哚_6_基)磺?；鵠-2-甲基-6-氧 代哌嗪-1_基}甲基)苯基]_2-甲基噠嗪-3(2H)_酮[K. L Granberg等人，American Chemical Society-232th National Meeting, San Francisco, USA，2006， MEDI 391]
W0 2007/008142中公開的化合物， 雷扎沙班(DPC-906) :l-(3-氨基-l，2-苯并異噁唑-5-基)-N-(4-(2-[(二甲基氨 基)-甲基]-川-咪唑-1-基}-2-氟苯基)-3-(三氟甲基)_111-吡唑-5-甲酰胺[J.Med. Chem. 2005,48，1729-1744]
21<formula>formula see original document page 22</formula> 阿哌沙班(Apixaban) (BMS-562247) :1_(4-甲氧基苯基)_7_氧代_6_[4-(2_氧代 哌啶-l-基)苯基]-4，5，6，7-四氫-lH-吡唑并[3，4-C]吡啶-3-甲酰胺[W0 2003/026652， WO 2003/049681]
<formula>formula see original document page 22</formula> BMS-691648 :3-氯-N-[(3S，4R)-1_(甲基磺?；?+ {[4_(2_氧代吡 啶-l(2H)-基)苯甲?；鵠氨基}哌啶-3-基]-lH-噴哚-6-甲酰胺[T. Giing6r等人 Drugs Fut. 2006，31(Suppl A):摘要P118 ;WO 2004/082687]
DX-9065a:(2S)-3-(7-[氨基(亞氨基)甲基]_2_萘基} _2_ (4_ {[ (3S) _1_乙烷 亞氨基(ethanimidoyl)-吡咯烷-3-基]氧基}苯基)丙酸[T. Nagahara等人，J.Med. Chem. 1994,37，1200-1207]
DU-176b[Y.Morishima等人，Blood 2004,104，摘要1862 (ASH2004) ;T. Fukuda 等人，Blood 2004， 104，摘要1852 (ASH 2004) ;T. Furugohri等人，Blood 2004， 104，摘要 1851(ASH 2004)]， N-(5-氯吡啶-2-基)-N' -[ (1S， 2R，4S)_4_( 二甲基氨基甲?；?_2_{[ (5_甲 基-4，5，6，7-四氫[1，3]噻唑并[5，4-c]吡啶_2_基)羰基]氨基}環(huán)己基]乙烷二酰胺 [US 2005/0020645，W0 2005/47296] US 2005/0020645中公開的化合物， LY517717 :N_ {(1R) _2_[4-(1_甲基哌啶-4-基)哌嗪_1_基]_2_氧代_1_苯乙
基卜lH-卩引哚-6-羧酰胺[W0 2000/76971， W0 2002/100847] 813893[Proteinase Inhibitor Design-Fourth SCI-RSC Symposium,Proteinase 2004-Strategies for New Medicines(Part I) ，London]， 6-氯-N- {(3S) _1_ [ (IS) _1_甲基_2_嗎啉_4_基_2_氧代乙基]_2_氧代吡咯 烷-3_基}萘-2-磺酰胺[N. S. Watson等人，Bioorg. Med. Chem. Lett. 2006,16,3784 ;W0 2002/100830 ;W0 2002/100886]
23
KFA_1982(KFA_1829的iij藥)[T. Koizumi等人，Journal ofThrombosis andHemostasis 2003， 1 S聊l 1，P2022]，EMD-503982 [Merck KGaA Annual R印ort 2006,48-49]，EMD-495235 :5-氯-N-[(lR) + (甲氧基甲基)_2_{[3_甲基+(3-氧代嗎啉-4-基)-苯基]氨基} -2-氧代乙基]噻吩_2-甲酰胺[Bioorg. Med. Chem. Lett. 2004，14,5817-5822]
M-55113 :4-[(6-氯-2-萘基)磺?；鵠-l-[(l-吡啶-4-基哌啶-4-基)甲基]
哌嗪-2-酮[H.Nishida等人，Chem. Pharm. Bull. 2001， 49， 1237-1244]
〇 M-55551/M-55555 : (2R)_4_[(6-氯_2_萘基)磺酰基]_6_氧代-l-[(l-妣啶-4-基哌啶-4-基)甲基]哌嗪-2-甲酸[H.Nishida等人，Chem. Pharm. Bull. 2002,50，1187-1194]
M-55190 : (2R) _4_ [ (6_氯_2_萘基)磺?；鵠_6_氧代_1_ [ (1_吡啶+基哌啶-4-基)甲基]哌嗪_2-甲酸乙酯[H. Nishida等人，16th Int Symp Med Chem，Bologna，18-222000年9月，Abst PA-125]
24
M-55532 :7-[(6-氯-2-萘基)磺酰基]_8a-(甲氧基甲基)_1'-吡啶_4_基四 氫-5H-螺[1，3-噁唑并[3，2-a]妣嗪_2， 4'-哌啶]-5-酮[H. Nishida等人，228thACS National Meeting, Philadelphia, August 22—26， 2004， MEDI—251 ;H. Nishida等人，Chem. Pharm.Bull. 2004，52，406-412 ;dito 459-462]
N-((7-[(5-氯-lH-吲哚-2-基)磺?；鵠_5_氧代_1'-丙酰四氫_8aH-螺[1， 3-噁唑并_[3，2-a]妣嗪-2，4'-哌啶]_8&-基}甲基)-N-甲基甘氨酸[W02006/106804]
O PRT54021 [U. Sinha等人，Blood 2006， 108，摘要907 (ASH 2006) ;K. Abe等人， Blood 2006， 108，摘要901 (ASH 2006)]， [O253]W0 2006/002099中公開的化合物， 奧米沙班(Otamixaban)(fxv_673， rpr-130673) : (2R，3R)_2_{3_[氨基(亞氨 基)甲基]節(jié)基}-3_{[4-(1-氧吡啶(oxidopyridin)-4-基)苯甲?；鵠氨基} 丁酸甲酯 [V. Chu等人，Thrombosis Research 2001， 103， 309-324 ;K. R. Guertin等人，Bioorg Med. Chem. Lett. 2002，12，1671-1674]
O CPU OAVE3247[Sanofi Aventis Company Presentation, Paris 2007年2月13日]，
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25Haemostasis, Washington D. C. ， USA，1999年8月14-21日generating greater value from our products and pipeline. Aventis SACompany Presentation, 2004年2月5日]，
艾卓肝素[Harry R. Biiller等人，Blood， 2006， 108，摘要571 (ASH2006)]禾口
磺達(dá)肝素； 抑制血小板聚集的物質(zhì)(血小板聚集抑制劑、凝血細(xì)胞聚集抑制劑)，例如 乙酰水楊酸(例如阿司匹林)，噻氯匹定(Ticlid)，氯吡格雷(Plavix)和普拉格雷 (Prasugrel) 5 纖維蛋白原受體拮抗體(糖蛋白-Ilb/IIIa拮抗劑)，例如阿昔單抗 (Abciximab)、依非巴特(Eptif ibatide)、替羅非班(Tirof iban)、拉米非班(Lamif iban)、 來達(dá)非班(Lefradafiban)和夫雷非班(Fradafiban);
以及抗心律失常藥。 本發(fā)明進(jìn)一步涉及藥物，其包含至少一種本發(fā)明化合物、通常連同一種或多種惰 性的、無毒的、藥學(xué)上適合的助劑(Hilfsstoff)，本發(fā)明還涉及該藥物用于上述目的的用 途。 本發(fā)明化合物可以全身地和/或局部地作用。為此目的，它們可以以合適的方式 給藥，例如，通過口服的、非經(jīng)腸的、經(jīng)肺的、經(jīng)鼻的、舌下的、經(jīng)舌的、經(jīng)面頰的、直腸的、真 皮的、透皮的、結(jié)膜的、耳部的路徑或者作為植入物或移植片固定模。
本發(fā)明化合物可以以適用于這些給藥途徑的給藥形式給藥。 適合于口服給藥的是按照現(xiàn)有技術(shù)起作用并迅速地和/或以改良的方式遞送本 發(fā)明化合物的給藥形式，其含有處于晶體和/或非晶態(tài)和/或溶解形式的本發(fā)明化合物，例 如，片劑(未包衣或包衣片劑，例如具有腸溶包衣或者不能溶解或延遲溶解并控制本發(fā)明 化合物釋放的包衣)、在口中迅速崩解的片劑、或薄膜/糯米紙囊劑(0blate)、薄膜/凍干 劑(lyophilisates)、膠囊(例如且優(yōu)選硬的或軟的明膠膠囊)、糖衣片劑、粒劑、丸劑、粉 劑、乳劑、懸浮液、氣霧劑或溶液。 可以進(jìn)行非經(jīng)腸給藥而繞開吸收步驟(例如靜脈內(nèi)的、動(dòng)脈內(nèi)的、心內(nèi)的、脊柱內(nèi) 的或者腰髓內(nèi)的)或者包括吸收步驟(例如肌內(nèi)的、皮下的、皮內(nèi)的、透皮的或者腹內(nèi)的)。 適合于非經(jīng)腸給藥的給藥形式尤其是為溶液、懸浮液、乳劑、凍干劑或無菌粉劑形式的用于 注射和輸注的制劑。 例如，適合于其它給藥途徑的是用于吸入的藥物形式(尤其是粉劑吸入器、噴霧 器)、滴鼻劑、溶液或噴霧劑；經(jīng)舌、舌下或經(jīng)面頰給藥的片劑、薄膜/糯米紙囊劑或膠囊、栓 劑、用于耳朵或眼睛的制劑、陰道膠囊、水性懸浮液(洗液、振蕩合劑(Schilttelmixture))、 親脂性懸浮液、軟膏、霜?jiǎng)?、?jīng)皮治療體系(例如貼劑)、乳液、糊劑、泡沫、撲粉、植入物或移 植片固定模。 優(yōu)選口服或非經(jīng)腸給藥，尤其是口服給藥。 本發(fā)明化合物可以轉(zhuǎn)變?yōu)樗鼋o藥形式。這可以以其本身已知的方式，通過與惰 性的、無毒的、藥學(xué)上適合的助劑混合而進(jìn)行。這些助劑尤其包括載體(例如微晶纖維素、 乳糖、甘露糖醇)、溶劑(例如液體聚乙二醇)、乳化劑和分散劑或潤(rùn)濕劑(例如十二烷基硫 酸鈉、聚氧山梨聚糖油酸酯)、粘合劑(例如聚乙烯吡咯烷酮)、合成的和天然的多聚物(例 如白蛋白)、穩(wěn)定劑(例如抗氧化劑，例如抗壞血酸)、色料(Farbstoff)(例如無機(jī)顏料，例如氧化鐵)和味道和/或氣味遮蔽劑。 通常證明有利的非經(jīng)腸給藥的給藥量是大約0. 001-5mg/kg，優(yōu)選大約0. 01_lmg/kg體重，以實(shí)現(xiàn)有效的結(jié)果?？诜o藥劑量為大約0. 01-100mg/kg，優(yōu)選大約0. 01-20mg/kg，且非常特別優(yōu)選0. l-10mg/kg體重。 然而視需要，背離所述量可能是必要的，特別是隨體重、給藥途徑、個(gè)體對(duì)于活性成分的響應(yīng)、制劑的性質(zhì)和進(jìn)行給藥的時(shí)間或間隔而變化。因此，在有些情況中小于上述最低量可能就是足夠的，而在其它情況下必須超過所述上限。倘若給藥較大的量，可能可取的是將其在一天中分為多個(gè)單獨(dú)劑量。 以下示例性實(shí)施方案舉例說明本發(fā)明。本發(fā)明并不局限于所述實(shí)施例。 除非另外指出，否則在以下測(cè)試和實(shí)施例中的百分比數(shù)據(jù)是重量百分比；份數(shù)是
重量份數(shù)。用于液體/液體溶液的溶劑比率、稀釋比率和濃度數(shù)據(jù)在每一情況下基于體積。A.實(shí)施例
縮寫CDI羰二咪唑d天，雙峰(在NMR中)DC薄層色譜DCI直接化學(xué)離子化(在MS中)dd雙二重峰(在NMR中)D證4-二甲基氨基吡啶DMFN， N-二甲基甲酰胺DMSO二甲基亞砜d. Th.理論值(在產(chǎn)率中)eq.當(dāng)量ESI電噴射離子化(在MS中)h小時(shí)HPLC高壓、高效液相色譜法1X-MS偶聯(lián)的液相色譜-質(zhì)譜法m多重峰(在NMR中)min分鐘MS質(zhì)譜法腿核磁共振譜RP反相(在HPLC中)RT室溫Rt保留時(shí)間(在HPLC中)s單重峰(Singulet)(在NMR中)THF四氫呋喃1X-MS禾口HPLC方法方法1 (HPLC):儀器HP 1100 ，含DAD檢測(cè);米，3.5微米；流動(dòng)相A:5毫升高氯酸(70%),
;柱Kromasil 100RP-18,60毫米X 2. 1
升的水，流動(dòng)相B :乙腈；梯度0分鐘2%
27B，O. 5分鐘2% B，4. 5分鐘90% B，6. 5分鐘90% B，6. 7分鐘2% B，7. 5分鐘2% B ;流速:0. 75ml/min ;柱溫30。C ;檢測(cè)UV210納米。 方法2(HPLC):儀器:HP1100，含DAD檢測(cè)；柱Kromasil 100RP_18，60毫米X2. 1
毫米，3. 5微米；流動(dòng)相A :5毫升高氯酸(70X強(qiáng)度)/升的水，流動(dòng)相B :乙腈；梯度0分鐘
2% B，O. 5分鐘2% B，4. 5分鐘90% B，9分鐘90% B，9. 2分鐘2% B， 10分鐘2% B ;流速:0. 75ml/min ;柱溫30。C ;檢測(cè)UV210納米。 方法3(LC-MS) :MS儀器類型:Micromass ZQ ;HPLC儀器類型:Waters Alliance2795 ;柱Phe謹(jǐn)e證Sy證gi 2 ii Hydro_RP Mercury 20毫米X4毫米；流動(dòng)相A :1升的水+0. 5毫升50X的甲酸，流動(dòng)相B :1升的乙腈+0. 5毫升50%的甲酸；梯度0.0分鐘90%A — 2. 5分鐘30% A — 3. 0分鐘5% A — 4. 5分鐘5% A ;流速0. 0分鐘lml/min， 2. 5分鐘/3. 0分鐘/4. 5分鐘2ml/min ;烘箱50。C ;UV檢測(cè):210納米。 方法4(LC-MS) :MS儀器類型Micromass ZQ ;HPLC儀器類型HP 1100系列；UVDAD ;柱Phe謹(jǐn)e證Sy證gi 2 ii Hydro-RP Mercury20毫米X4毫米；流動(dòng)相A :1升的水+0. 5毫升50 %的甲酸，流動(dòng)相B : 1升的乙腈+0. 5毫升50 %的甲酸；梯度0. 0分鐘90 %A — 2. 5分鐘30% A — 3. 0分鐘5% A — 4. 5分鐘5% A ;流速0. 0分鐘lml/min， 2. 5分鐘/3. 0分鐘/4. 5分鐘2ml/min ;烘箱50。C ;UV檢測(cè):210納米。 方法5(LC-MS):儀器:Micromass Quattro LCZ與HPLC Agilent系列1100 ;柱:Phe謹(jǐn)e證Sy證gi 2 u Hydro-RP Mercury 20毫米X4毫米；流動(dòng)相A :1升的水+0. 5毫升50 %的甲酸，流動(dòng)相B : 1升的乙腈+0. 5毫升50 %的甲酸；梯度0. 0分鐘90% A — 2. 5分鐘30% A — 3. 0分鐘5% A — 4. 5分鐘5% A ;流速0. 0分鐘lml/min， 2. 5分鐘/3. 0分鐘/4. 5分鐘2ml/min ;烘箱50。C ;UV檢測(cè)208-400納米。 方法6(LC-MS) :MS儀器類型Micromass ZQ ;HPLC儀器類型HP 1100系列；UVDAD ;柱Phenomenex Gemini 3 ii 30毫米X 3. 00毫米；流動(dòng)相A : 1升的水+0. 5毫升50%的甲酸，流動(dòng)相B :1升的乙腈+0. 5毫升50%的甲酸；梯度0. 0分鐘90 % A — 2. 5分鐘30%A — 3. 0分鐘5% A — 4. 5分鐘5% A ;流速0. 0分鐘lml/min， 2. 5分鐘/3. 0分鐘/4. 5分鐘。2ml/min ;烘箱5(TC ;UV檢測(cè)210納米。 方法7(LC-MS):儀器:Micromass Platform LCZ與HPLC Agilent系列1100 ;柱:Thermo Hypersil GOLD 3 y 20毫米X4毫米；流動(dòng)相A :1升的水+0. 5毫升50%的甲酸，流動(dòng)相B :1升的乙腈+0. 5毫升50 %的甲酸；梯度0. 0分鐘100 % A — 0. 2分鐘100 %A — 2. 9分鐘30% A — 3. 1分鐘10% A — 5. 5分鐘10% A ;烘箱50。C ;流速0. 8ml/min ;UV檢測(cè)210納米。 方法8(LC-MS) :MS儀器類型Waters ZQ ;HPLC儀器類型WatersAlliance 2795 ;柱Phenomenex Onyx Monolithic C18， 100毫米X3毫米；流動(dòng)相A :1升的水+0. 5毫升50%的甲酸，流動(dòng)相B :1升的乙腈+0. 5毫升50%的甲酸；梯度0. 0分鐘90% A — 2分鐘65%A — 4. 5分鐘5% A — 6分鐘5% A ;流速:2ml/min ;烘箱40。C ;UV檢測(cè):210納米。
方法9(GC-MS):儀器Micromass GCT， GC6890 ;柱RestekRTX-35MS， 30mX 250微米XO. 25微米；恒定氦流動(dòng)0. 88ml/min ;烘箱60。C;入口 250。C;梯度60。C (保持0. 30分鐘)，50°C /分鐘一120°C ， 16°C /分鐘一250°C ， 30°C /分鐘一300°C (保持1. 7分鐘)。
方法IO(GC-MS):儀器:Micromass GCT， GC6890 ;柱RestekRTX-35， 15mX200微
28米X0. 33微米；恒定氦流動(dòng)0. 88ml/min ;烘箱70。C ;入口 250。C ;梯度70。C，30。C /分鐘一310°C (保持3分鐘)。
原材料
實(shí)施例1A 5-氯-N-[(2S)-環(huán)氧乙烷-2-基甲基]噻吩_2_甲酰胺<formula>formula see original document page 29</formula>
實(shí)施例1A如W004/101557 (實(shí)施例6A)中所述制備。實(shí)施例2A
3-(羥甲基)吡啶-2(lH)-酮
<formula>formula see original document page 29</formula>
在室溫，將23. 2克(144毫摩爾)六甲基二硅烷和0. 781克(7. 19毫摩爾)三甲基氯硅烷加入至10. 0克(71. 9毫摩爾)2-羥基煙酸在100毫升甲苯中的懸浮液中，且混合物用KPG攪拌器在ll(TC攪拌30分鐘。然后將混合物冷卻至_40°C，并將22. 5克(158毫摩爾)的二異丁基氫化鋁在二氯甲烷中的1M溶液滴加至所述溶液中。將所述混合物溫?zé)嶂潦覝?，在室溫?cái)嚢?8小時(shí)并最后處于-l(TC ，用稀鹽酸調(diào)節(jié)到pH = 4，并如此加入500毫升甲醇以使溫度不超過-l(TC。濾出形成的沉淀，將100毫升水加入至濾液，在5(TC攪拌混合物1小時(shí)并濾出沉淀。濃縮濾液產(chǎn)生8. 55克(理論值的95% )所需化合物。
力-NMR(400MHz， DMS0-d6， S/ppm) : 11. 53 (br. s， 1H) ， 7. 40 (d， 1H) ， 7. 25 (d， 1H)，6. 19 (dd， 1H) ， 5. 00 (t， 1H) ， 4. 28 (d， 2H)。
HPLC(方法1) :Rt = 0. 27min。
MS(ESIpos， m/z) :148(M+Na)+。
實(shí)施例3A 3_({[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基}甲基)吡啶-2(lH)-酮
<formula>formula see original document page 29</formula>
在室溫，將0. 65克(9. 59毫摩爾)咪唑、2. 42克(8. 79毫摩爾)叔丁基二苯基氯硅烷和0. 10克(0. 80毫摩爾)DMAP加入至1. 00克(7. 99毫摩爾)在19毫升DMF中的來自實(shí)施例2A的化合物中，且混合物攪拌18小時(shí)。然后加入180毫升水，且混合物在0t:保持3小時(shí)。過濾后，殘余物通過色譜法在硅膠上提純(乙酸乙酯/乙基二甲基胺1000 : 1)。這產(chǎn)生801毫克(理論值的27% )所需化合物。 "H-匪R(400MHz， DMS0_d6， S/ppm) : 11. 61 (br. s， 1H) ， 7. 69-7. 52 (m， 5H)，7. 51-7. 38 (m， 6H) ， 730 (d， 1H) ， 6. 29 (dd， 1H) ， 4. 51 (s， 2H) ， 1. 05 (s， 9H)。
HPLC(方法2) :Rt = 5. 27min。
MS(DCI，m/z) :364(M+H)+。
實(shí)施例4A 3_({[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基}甲基)-l-(2-氯-4-硝基苯基)妣
啶-2(lH)-酮 在(TC ，將0. 500克(4. 46毫摩爾)叔丁醇鉀加入至1. 08克(2. 97毫摩爾)在21
毫升DMF中的來自實(shí)施例3A的化合物中，且混合物在室溫下攪拌30分鐘。加入0. 571克(3. 27毫摩爾)2-氯-1-氟-4-硝基苯，且混合物在室溫?cái)嚢琛?. 5小時(shí)后，加入200毫升水，且混合物隨后用乙酸乙酯提取三次。合并的有機(jī)相由水洗滌并隨后以硫酸鈉干燥。過濾之后，將溶劑在減壓下除去。殘余物通過色譜法在硅膠上提純(環(huán)己烷/乙酸乙酯9 : 1)。這產(chǎn)生872毫克(理論值的56% )所需化合物。 "H-畫R(400MHz， DMS0_d6， S/ppm) :8. 52 (d， 1H) ， 8. 32 (dd， 1H) ， 7. 85 (d， 1H)，
7. 76 (dd， 1H) ， 7. 68—7. 63 (m， 4H) ， 7. 59—7. 55 (m， 1H) ， 7. 54—7. 41 (m， 6H) ， 6. 54 (dd， 1H)，
4. 56(br. s，2H) ， 1. 07(s，9H)。 HPLC(方法2) :Rt = 6. 05min。 MS(DCI，m/z) :519(M+H)+。 實(shí)施例5A 1_(4-氨基-2-氯苯基)-3-({[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基}甲基)妣啶-2(lH)-酮
30CI 將800毫克(1. 54毫摩爾)來自實(shí)施例4A的化合物溶于48毫升THF中。然后加入50毫克(0.05毫摩爾)披鈀碳，且混合物在氫氣氛中在大氣壓下在室溫氫化。然后過濾反應(yīng)混合物，濾餅由THF洗滌并從濾液除去溶劑。反應(yīng)產(chǎn)物(純度95% )進(jìn)一步反應(yīng)而無需另外提純。 HPLC(方法1) :Rt = 5. 55min。
MS(ESIpos， m/z) :489(M+H)+。
實(shí)施例6A N-([(5S)-3-(4-[3-(([叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基}甲基)_2_氧代吡啶-1 (2H)-基]-3-氯-苯基} -2-氧代-1， 3-噁唑烷-5-基]甲基} -5-氯噻吩-2-甲酰胺 將386毫克(1. 77毫摩爾)來自實(shí)施例1A的化合物加入至789毫克(1. 61毫摩爾)的來自實(shí)施例5A的化合物的24毫升乙腈溶液中。將540毫克(2. 42毫摩爾)高氯酸鎂加入至懸浮液中。在室溫19小時(shí)后，加入193毫克(0. 952毫摩爾)來自實(shí)施例1A的化合物，并在室溫繼續(xù)攪拌另外30小時(shí)。然后加入523毫克(2.46毫摩爾)1，1'-羰二咪唑和19毫克(0. 09毫摩爾)DMAP，且混合物在6(TC加熱。21小時(shí)后，混合物由水、飽和氯化鈉水溶液和乙酸乙酯稀釋。該含水相用乙酸乙酯提取兩次，并且合并的有機(jī)相以硫酸鈉干燥。過濾后，除去溶劑且殘余物通過色譜法在硅膠上提純(環(huán)己烷/乙酸乙酯l : 1)。這產(chǎn)生533毫克(理論值的45% )所需產(chǎn)物。 "H-匪R(400MHz， DMS0_d6， S/ppm) :8. 97 (t ， 1H) ， 7. 85 (dd， 1H) ， 7. 73 (dd，1H) ， 7. 70-7. 63 (m， 5H) ， 7. 58 (dd， 1H) ， 7. 53—7. 38 (m， 8H) ，7.19 (d， 1H) ， 6. 47 (dd， 1H)，4. 91-4. 82 (m， 1H) ， 4. 55 (br. s， 2H) ， 4. 24 (dd， 1H) ， 3. 89 (dd， 1H) ， 3. 65—3. 58 (m， 2H) ， 1. 07 (s，
9H)。
31(方法2) :Rt = 6. 07min。
MS(ESIpos， m/z) :732(M+H)+。
實(shí)施例7A 3- ({[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基}甲基)-1- (2-甲基-4-硝基苯基)妣
啶-2(lH)-酮 類似于實(shí)施例4A，使1. 50克(4. 13毫摩爾)來自實(shí)施例3A的化合物與704毫克 (4. 54毫摩爾)2-氟-5-硝基甲苯反應(yīng)。這產(chǎn)生570毫克(理論值的28% )標(biāo)題化合物。
"H-匪R(400MHz， DMS0_d6， S/ppm) :8. 29 (d， 1H) ， 8. 17 (dd， 1H) ， 7. 76 (dd， 1H) ，7. 67-7. 63 (m，4H) ，7. 57(d， 1H) ， 7. 53(dd， 1H) ，7. 51-7. 41 (m， 6H) ，6. 52(t， 1H)， 4. 63-4. 51 (m， 2H) ， 2. 12 (s， 3H) ， 1. 07 (s， 9H)。
HPLC(方f去4) :Rt = 3. 39min。
MS(ESIpos， m/z) :499(M+H)+。
實(shí)施例8A 1- (4-氨基-2-甲基苯基)-3- ({[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基}甲基)吡
啶-2(lH)-酮 將555毫克(1. ll毫摩爾)來自實(shí)施例7A的化合物溶于15毫升THF中，加入150 毫克披鈀活性碳且混合物在氫氣氛中在大氣壓下氫化直至得到理論值的氫氣。濾出催化 劑，這在減壓(im Vak皿m)下濃縮后產(chǎn)生520毫克(理論值的99% )標(biāo)題化合物。
"H-NMR(400MHz， DMS0_d6， S/ppm) :7. 70-7. 63 (m， 5H) ， 7. 51-7. 41 (m， 6H)， 7. 40-7. 36 (m， 1H) ，6. 78(d， 1H) ，6. 47-6. 41 (m， 2H) ，6. 38(t， 1H) ，5. 22(s，寬，2H)， 4. 59-4. 48 (m， 2H) ， 1. 81 (s， 3H) ， 1. 06 (s， 9H)。
HPLC(方法5) :Rt = 3. 20min。
MS(ESIpos， m/z) :469(M+H)+。
實(shí)施例9A
32
N-[((5S)-3-(4-[3-(([叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基}甲基)_2_氧代妣
啶-l(2H)-基]-3-甲基-苯基}_2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基)甲基]_5-氯噻吩-2-甲
酰胺
將522毫克(1. ll毫摩爾)來自實(shí)施例8A的化合物溶于10毫升乙腈中，并在0t: 加入266毫克(1. 22毫摩爾)來自實(shí)施例1A的化合物。加入373毫克(1. 67毫摩爾)高 氯酸鎂，且混合物在室溫?cái)嚢?0小時(shí)。然后加入271毫克(1.67毫摩爾)1，1'-羰二咪唑 和14毫克(0. 11毫摩爾)DMAP，且反應(yīng)混合物在6(TC加熱20小時(shí)?；旌衔锶缓笤跍p壓下 濃縮物，并加入水和叔丁基甲醚?；旌衔镉靡宜嵋阴ヌ崛纱巍：喜⒌挠袡C(jī)相以硫酸鈉干 燥并濃縮。殘余物通過制備HPLC提純。這產(chǎn)生562毫克(理論值的71% )所需產(chǎn)物。
力-NMR(400MHz， DMS0_d6， S /卯m) :8. 97 (t， 1H) ， 7. 74-7. 63 (m， 6H) ， 7. 58-7. 41 (m， 9H) ， 7. 23 (d， 1H) ， 7. 19 (d， 1H) ， 6. 45 (t， 1H) ， 4. 89—4. 80 (m， 1H) ， 4. 58—4. 49 (m， 2H) ， 4. 21 (t， 1H) ， 3. 90-3. 83 (m， 1H) ， 3. 63-3. 58 (m， 2H) ， 1. 98 (s， 3H) ， 1. 07 (s， 9H)。
HPLC(方法4) :Rt = 3. 39min。
MS(ESIpos， m/z) :712/714 (35C1/37C1) (M+H)+。
實(shí)施例10A 3_({[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基}甲基)-1-(2_甲氧基-4-硝基苯基) 吡啶-2(lH)-酮 類似于實(shí)施例4A，使5. 00克(13. 8毫摩爾)來自實(shí)施例3A的化合物與2. 59克 (15. 1毫摩爾)1-氟-2-甲氧基-4-硝基苯反應(yīng)。產(chǎn)物通過色譜法在硅膠上提純(流動(dòng)相 戊烷/乙酸乙酯=5 : 1)，產(chǎn)生2.70克(理論值的38%)標(biāo)題化合物。
力-NMR(400MHz， DMS0_d6， S /卯m) :7. 97 (d， 1H) ， 7. 92 (dd， 1H) ， 7. 74-7. 70 (m， 1H)， 7. 68-7. 64(m，4H) ，7. 61 (d， 1H) ，7. 52—7. 43 (m，7H) ，6. 46(t， 1H) ，4. 54(s，2H) ，3. 88(s，3H)，
331. 07(s，9H)。 HPLC(方法5) :Rt = 3. 32min。
MS(ESIpos， m/z) :515(M+H)+。
實(shí)施例11A 1_(4-氨基-2-甲氧基苯基)-3_({[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基}甲基)
吡啶-2(lH)-酮 類似于實(shí)施例8A氫化2. 60克(5. 05毫摩爾)來自實(shí)施例10A的化合物。這產(chǎn)生 2. 40克(理論值的95% )標(biāo)題化合物。 'H-NMR(400MHz， DMSO-d6， S/ppm) :7. 70-7. 61 (m， 5H) ， 7. 51-7. 42 (m， 6H)，
7. 34-7. 31(m，lH)，6. 79(d，lH) ，6. 35—6. 29(m，2H)，6. 15(dd，lH)，5. 35(s， 寬，2H)'4. 50(s，
2H) ，3. 60(s，3H) ， 1. 06(s，9H)。 HPLC(方法5) :Rt = 3. 13min。 MS(ESIpos， m/z) :485(M+H)+。 實(shí)旋例12A N-[((5S)-3-(4-[3-(([叔丁基(二苯基)甲硅垸基]氧基}甲基)_2_氧代吡 啶-l(2H)-基]-3-甲氧基苯基}-2-氧代-1，3-噁唑垸-5-基)甲基]_5-氯噻吩-2-甲
酰胺
類似于實(shí)施例6A，使2. 30克(4. 75毫摩爾)來自實(shí)施例11A的化合物與來自實(shí)施 例1A的化合物反應(yīng)。產(chǎn)物通過色譜法在硅膠上提純(流動(dòng)相二氯甲烷/甲醇=25 : 1)。 這產(chǎn)生3. 10克(理論值的88% )所需產(chǎn)物。 力-NMR(400MHz， DMS0-d6， S /卯m) :8. 98 (t， 1H) ， 7. 71-7. 63 (m， 6H) ， 7. 52-7. 38 (m， 8H) ， 7. 25 (d， 1H) ， 7. 20 (d， 1H) ， 7. 10 (dd， 1H) ， 6. 40 (t， 1H) ， 4. 90-4. 82 (m， 1H) ， 4. 52 (s， 2H)， 4. 24 (t ， 1H) ， 3. 89 (dd， 1H) ， 3. 71 (s， 3H) ， 3. 64—3. 59 (m， 2H) ， 1. 07 (s， 9H)。
34
HPLC(方法3) :Rt = 3. 17min。 MS(ESIpos，m/z) :728/730 (35C1/37C1) (M+H)+。 實(shí)施例13A 3_({[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基}甲基)-1-[4-硝基-2_(三氟甲基)苯
基]吡啶-2(lH)-酮 類似于實(shí)施例4A，使1. 50克(4. 13毫摩爾)來自實(shí)施例3A的化合物與949毫克
(4. 54毫摩爾)1-氟-4-硝基-2-(三氟甲基)苯反應(yīng)。產(chǎn)物通過色譜法在硅膠上提純(流
動(dòng)相戊烷/乙酸乙酯=5 : l)，產(chǎn)生l.OO克(理論值的44% )標(biāo)題化合物。 力-腿(400MHz， DMS0-d6， S/ppm) :8. 65 (dd， 1H) ， 8. 61 (d， 1H) ， 7. 92 (d， 1H)，
7. 78-7. 74 (m， 1H) ， 7. 67-7. 63 (m， 4H) ， 7. 61-7. 58 (m， 1H) ， 7. 62—7. 41 (m， 6H) ， 6. 52 (t ， 1H)，
4. 58-4. 50(m，2H) ， 1. 06(s，9H)。 HPLC(方法4) :Rt = 3. 40min。 MS(ESIpos， m/z) :553(M+H)+。 實(shí)施例14A 卜[4-氨基-2-(三氟甲基)苯基]-3-({[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基}甲
基)吡啶-2(lH)-酮
類似于實(shí)施例8A氫化1. 00克(1. 81毫摩爾)來自實(shí)施例13A的化合物。這產(chǎn)生 930毫克(理論值的98% )標(biāo)題化合物。 'H-NMR(400MHz， DMS0—d6， S /卯m) :7. 70-7. 62 (m， 5H) ， 7. 51—7. 37 (m， 7H) ， 7. 04 (d， 1H) ， 6. 95 (d， 1H) ， 6. 82 (dd， 1H) ， 6. 37 (t， 1H) ， 5. 85 (s， 2H)' 4. 51 (s， 2H) ， 1. 06 (s， 9H)。
HPLC(方法3) :Rt = 3. 13min。
MS(ESIpos， m/z) :523(M+H)+。
實(shí)施例15A N-[((5S)-3-{4_[3-({[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基}甲基)_2-氧代吡
35啶-l(2H)-基]-3-(三氟甲基)苯基}_2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基)甲基]-5-氯噻
吩-2-甲酰胺 類似于實(shí)施例6A，使930毫克(1. 78毫摩爾)來自實(shí)施例14A的化合物與來自實(shí) 施例1A的化合物反應(yīng)。產(chǎn)物通過制備HPLC提純。這產(chǎn)生405毫克(理論值的28% )所需 產(chǎn)物。 力-畫R(400MHz， DMS0_d6， S/ppm) :8. 97 (t， 1H) ， 8. 11 (dd， 1H) ， 7. 82 (dd， 1H)，
7. 75-7. 71 (m， 1H) ， 7. 68 (d， 1H) ， 7. 67-7. 63 (m， 4H) ， 7. 55 (d， 1H) ， 7. 53-7. 41 (m， 7H) ， 7. 19 (d，
1H) ， 6. 45 (t， 1H) ， 4. 93-4. 85 (m， 1H) ， 4. 57—4. 48 (m， 2H) ， 4. 29 (dt， 1H) ， 3. 98—3. 92 (m， 1H)，
3. 66-3. 60(m，2H) ， 1. 06(s，9H)。HPLC(方法3) :Rt = 3. 25min。MS(ESIpos， m/z) :766/768 (35C1/37C1) (M+H)+。 實(shí)施例16A 3-溴-l-(2-氯-4-硝基苯基)吡啶-2(lH)-酮
將2. 00克(11. 5毫摩爾)的3-溴妣啶-2(1H)_酮(0. S. Tee， M. Pavent， J. Am. Chem. Soc. 1982， 104,4142-4146)溶于40毫升DMF。將混合物冷卻至(TC，并加入2. 04克 (17.2毫摩爾，95%)叔丁醇鉀。在大約15分鐘以后，除去冰浴，并在另外30分鐘以后，加 入2.22克(12.6毫摩爾)2-氯-1-氟-4-硝基苯。混合物在室溫下攪拌4小時(shí)。然后將 混合物加入至水中并用乙酸乙酯提取三次。合并的有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液搖動(dòng)并以硫酸 鈉干燥。在減壓下除去溶劑，并將殘余物懸浮在戊烷中并用抽吸濾出。獲得的固體用環(huán)己 烷/乙酸乙酯10 : l沸騰。由抽吸濾出產(chǎn)物并用環(huán)己烷/乙酸乙酯10 : l洗滌。這產(chǎn)生 2. 54克(理論值的67% )所需化合物。 力-畫R(400MHz， DMS0_d6， S/ppm) :8. 57 (d， 1H) ， 8. 37 (dd， 1H) ， 8. 11 (dd， 1H)，
7. 94 (d， 1H) ， 7. 73 (dd， 1H) ， 6. 39 (t， 1H)。 HPLC(方法3) :Rt = 1. 76min。 MS (ESIpos， m/z) :329/331 (35C1/37C1) (M+H) +。
36
實(shí)施例17A 1- (4-氨基-2-氯苯基)-3-溴吡啶-2 (1H)-酮
將2.00克(6.07毫摩爾)來自實(shí)施例的化合物16A溶于80毫升甲醇。加入6. 83 克(30.3毫摩爾)氯化錫二水合物，且混合物在回流下加熱2小時(shí)。然后濃縮溶液。在硅 膠上柱過濾(流動(dòng)相二氯甲烷甲醇=25 : 1)之后，將殘余物溶于乙酸乙酯并用飽和碳 酸氫鈉溶液搖動(dòng)。有機(jī)相以硫酸鈉干燥并濃縮。這產(chǎn)生1. 60毫克(理論值的87% )標(biāo)題 化合物。 力-畫R(400MHz， DMSO-d6， S/ppm) :8. 00 (dd， 1H) ， 7. 56 (dd， 1H) ， 7. 08 (d， 1H)，
6. 73 (d， 1H) ， 6. 58 (dd， 1H) ， 6. 22 (t， 1H) ， 5. 71 (s， 2H)。 HPLC(方法5) :Rt = 1. 69min。 MS (ESIpos， m/z) :299/301 (35C1/37C1) (M+H) +。 實(shí)施例18A N- ({(5S) -3- [4- (3-溴_2_氧代吡啶_1 (2H) _基)_3_氯苯基]_2_氧代_1 ， 3_噁
唑烷_5-基}甲基)-5-氯噻吩-2-甲酰胺 起初在0。C將1. 60克(5. 34毫摩爾)來自實(shí)施例17A的化合物加入25毫升乙腈 中，并加入1. 28克(5. 88毫摩爾)來自實(shí)施例1A的化合物。加入1. 79克(8. 01毫摩爾) 高氯酸鎂，且混合物在室溫?cái)嚢?0小時(shí)。然后加入另外O. 38克(1.76毫摩爾)來自實(shí)施例 1A的化合物和0. 54克(2. 4毫摩爾)高氯酸鎂，且混合物再攪拌20小時(shí)。然后加入1. 30 克(8. 01毫摩爾)CDI和65毫克(0. 53毫摩爾)DMAP。混合物在6(TC加熱20小時(shí)并隨后 在減壓下濃縮，加入水和乙酸乙酯。除去有機(jī)相，以硫酸鈉干燥并濃縮。將產(chǎn)物從甲醇重結(jié) 晶。這產(chǎn)生1. 32克(理論值的45% )標(biāo)題化合物。 力-畫R(400MHz， DMSO-d6， S/ppm) :8. 97 (t， 1H) ， 8. 06 (dd， 1H) ， 7. 88 (dd， 1H)， 7. 69 (d， 1H) ， 7. 66-7. 56 (m， 3H) ， 7. 20 (d， 1H) ， 6. 31 (t， 1H) ， 4. 92—4. 85 (m， 1H) ， 4. 25 (t， 1H)， 3. 91 (dd， 1H) ， 3. 65-3. 60 (m， 2H)。
HPLC(方法4) :Rt = 2. 37min。
實(shí)施例19A 3-烯丙基-1- (2-氯-4-硝基苯基)吡啶-2 (1H)-酮
37<formula>formula see original document page 38</formula> 起初將1. 00克(3. 03毫摩爾)來自實(shí)施例16A的化合物、922毫克(6. 07毫摩爾) 銫氟化物和124毫克(152毫摩爾)[1， l'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]鈀二氯化物加入20 毫升脫氣THF中。滴加765毫克(4. 55毫摩爾)2-烯丙基-4， 4， 5， 5-四甲基-1， 3， 2- 二氧 雜硼戊環(huán)(dioxaborolan)，且混合物在回流下加熱過夜。加入飽和碳酸氫鈉溶液，且混合物 用乙酸乙酯提取三次。合并的有機(jī)相以硫酸鈉干燥并濃縮。產(chǎn)物通過制備HPLC提純，產(chǎn)生 616毫克(理論值的70% )標(biāo)題化合物。 "H-NMR (400MHz， DMS0_d6， S/ppm) :8. 54 (d， 1H) ， 8. 34 (dd， 1H) ， 7. 86 (d， 1H)， 7. 50 (dd， 1H) ， 7. 42—7. 39 (m， 1H) ， 6. 37 (t， 1H) ， 6. 01—5. 90 (m， 1H) ， 5. 15—5. 06 (m， 2H)， 3. 20 (d，2H)。 HPLC(方法5) :Rt = 2. 22min。 MS(ESIpos， m/z) :291/293 (35C1/37C1) (M+H)+。 實(shí)施例20A 3-烯丙基-1- (4-氨基-2-氯苯基)吡啶-2 (1H)-酮
類似于實(shí)施例17A，用氯化錫還原815毫克(2. 80毫摩爾)來自實(shí)施例19A的化合
物。這產(chǎn)生737毫克(理論值的99% )標(biāo)題化合物。 'H-NMR (400MHz, DMS0_d6， S /ppm) :7. 34—7. 27 (m， 2H) ， 7. 02 (d， 1H) ， 6. 72 (d， 1H)， 6. 57 (dd， 1H) ， 6. 21 (t， 1H) ， 6. 00-5. 89 (m， 1H) ， 5. 64 (s， 寬，2H) ， 5. 13-5. 04 (m， 2H) ， 3. 16 (d，
2H)。 HPLC(方法3) :Rt = 1. 70min。 MS (ESIpos， m/z) :261/263 (35C1/37C1) (M+H) +。 實(shí)施例21A N- ({(5S) -3- [4_ (3_烯丙基_2_氧代吡啶_1 (2H) _基)_3_氯苯基]_2_氧代_1 ，
3-噁唑烷-5-基}甲基)-5-氯噻吩-2-甲酰胺類似于實(shí)施例18A，使735毫克(2. 82毫摩爾)來自實(shí)施例20A的化合物與來自實(shí)施例1A的產(chǎn)物反應(yīng)。將產(chǎn)物通過從甲醇重結(jié)晶而提純。這產(chǎn)生826毫克(理論值的58% ) 所需產(chǎn)物。 4_腿(400MHz ， DMS0_d6， S/ppm) :8. 98 (t， 1H) ， 7. 86 (d， 1H) ， 7. 69 (d， 1H)， 7. 62-7. 57 (m， 1H) ， 7. 51 (d， 1H) ， 7. 43-7. 39 (m， 1H) ， 7. 37-7. 34 (m， 1H) ， 7. 20 (d， 1H) ， 6. 30 (t， 1H) ， 6. 01-5. 90 (m， 1H) ， 5. 14—5. 07 (m， 2H) ， 4. 92—4. 85 (m， 1H) ， 4. 25 (t， 1H) ， 3. 90 (dd， 1H)， 3. 65-3. 60(m，2H) ，3. 19(d，2H)。
HPLC(方法3) :Rt = 2. 22min。MS(ESIpos， m/z) :504/506/508 (35C12/35C137C1/37C12) (M+H)+。
實(shí)施例22A 3-溴-1- (2-甲基-4-硝基苯基)吡啶-2 (1H)-酮
將44. 5克(280毫摩爾)的3_溴妣啶_2(1H)_酮溶于750毫升無水二甲基亞砜 中，并在室溫下逐份(portionsweise)加入33. 4克(298毫摩爾)叔丁醇鉀。懸浮液在該 溫度攪拌1小時(shí)，然后加入38. 5克(280毫摩爾)1-氟-2-甲基-4-硝基苯并將該反應(yīng)溶 液在8(TC加熱20小時(shí)。使溶液冷卻并小心地由水稀釋。濾出所得晶狀沉淀，用少許水洗滌 并在減壓下干燥。這產(chǎn)生62克(理論值的80% )所需產(chǎn)物。 力-NMR (400MHz ，DMS0-d6， S /ppm) : S = 8. 34 (d， 1H) ，8. 21 (dd， 1H) ，8. 10(dd， 1H)， 7. 71-7. 63 (m， 2H) ， 6. 36 (t， 1H) ， 2. 17 (s， 3H)。
LC-MS(方法3) :Rt = 1. 72min
MS(ESIpos) :m/z = 309 (M+H) +
實(shí)施例23A 1- (2-甲基-4-硝基苯基)-3-乙烯基吡啶-2 (1H)-酮
將50克(162毫摩爾)來自實(shí)施例22A的化合物溶于700毫升無水二氧雜環(huán)己烷 中，加入62克(194毫摩爾)三丁基乙烯基錫和4. 7克(4毫摩爾)四(三苯基膦)鈀且混 合物在回流下加熱15小時(shí)。使混合物冷卻并通過硅藻土過濾。濾餅由乙酸乙酯洗滌且合 并的濾液在減壓下蒸發(fā)至干。將殘余物施加于硅膠并在800克硅膠上使用環(huán)己烷和乙酸乙 酯的梯度色譜處理。這產(chǎn)生27克(理論值的62% )所需產(chǎn)物。 力-NMR (400MHz ， DMS0_d6， S /ppm) : S = 8. 35 (d， 1H) ，8. 2(dd， 1H) ， 7. 75(dd， 1H)， 7. 60 (d， 1H) ，7. 55(dd， 1H) ，6. 75(dd， 1H) ，6. 45 (t， 1H) ，6. 15(dd， 1H) ，5. 3(dd， 1H) ， 2. 17 (s，
393H)。 LC-MS (方法4) :Rt = 1. 86min MS(ESIpos) :m/z = 257(M+H) + 實(shí)施例24A 3-(2-羥乙基)-1-(2_甲基-4-硝基苯基)吡啶-2(lH)-酮
在冰冷卻下，將40克(326毫摩爾)9_硼雜雙環(huán)[3. 3. 1]壬烷在650毫升四氫呋 喃中的溶液以45分鐘加入到38克(148毫摩爾)來自實(shí)施例23A的化合物中。將混合物 在該溫度再攪拌1小時(shí)，然后以15分鐘加入30克(747毫摩爾)氫氧化鈉在740毫升水中 的溶液。如此加入151毫升30^的過氧化氫溶液，使得溫度不超過3(TC。在添加結(jié)束后， 除去冷卻并繼續(xù)攪拌另外30分鐘?；旌衔镉梢宜嵋阴シ磸?fù)提取，合并的有機(jī)相用780克 (1.63摩爾)亞硫酸氫鈉溶液洗滌，分離有機(jī)相并由乙酸乙酯再次提取含水相。合并的有機(jī) 相用飽和氯化鈉溶液洗滌，以硫酸鎂干燥并在減壓下蒸發(fā)至干。將殘余物施加于硅膠并使 用環(huán)己烷和乙酸乙酯的梯度色譜處理。合并包含產(chǎn)物的級(jí)分并在減壓下濃縮至干。這產(chǎn)生 38克(理論值的93% )所需產(chǎn)物。 力-NMR(400MHz， DMS0_d6， S /ppm) :5=8. 33(d， 1H) ，8. 18(d， 1H) ， 7. 57(d， 1H)， 7. 48-7. 40 (m， 2H) ， 6. 33 (t， 1H) ， 4. 58 (t， 1H) ， 3. 62-3. 50 (m， 2H) ， 2. 62 (t， 2H) ， 2. 15 (s， 3H)。
LC-MS(方法6) :Rt = 1. 57min
MS(ESIpos) :m/z = 275(M+H) +
實(shí)施例25A 3-(2_{[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基}乙基)-1_(2-甲基-4-硝基苯基) 吡啶-2(lH)-酮 將38克(138毫摩爾)來自實(shí)施例24A的化合物溶于200毫升無水N， N- 二甲基 甲酰胺中，并在(TC加入12. 2克(198毫摩爾)的咪唑并逐份地加入46克(135毫摩爾)叔 丁基(氯)二苯基硅烷。將混合物攪拌過夜并隨后由水稀釋，并用乙酸乙酯提取三次。合并的有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液洗滌兩次，以硫酸鎂干燥，過濾并在減壓下蒸發(fā)。將殘余物施
加于硅膠并使用環(huán)己烷和乙酸乙酯的梯度色譜處理。合并包含產(chǎn)物的級(jí)分并在減壓下蒸發(fā)
至干。這產(chǎn)生62克(理論值的88% )所需產(chǎn)物。 LC-MS(方法5) :Rt = 3. 18min MS(ESIpos) :m/z = 483(M+H) + 實(shí)施例27A 1-(4-氨基-2_甲基苯基)-3-(2_{[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基}乙基)
吡啶-2(lH)-酮
H3C 將62克(121毫摩爾)來自實(shí)施例25A的化合物溶于2升的乙醇和乙酸乙酯1 : 1 的混合物中，并加入46克(726毫摩爾)甲酸銨和0.6克披鈀碳。在8(TC加熱混合物。在 45分鐘后，使混合物冷卻并通過硅膠過濾。濾餅由乙酸乙酯洗滌且濾波在減壓下蒸發(fā)至干。 這產(chǎn)生36克(理論值的61% )所需產(chǎn)物。
LC-MS (方法7) :Rt = 1. 84min
MS(ESIpos) :m/z = 221(M+H) +
實(shí)施例27A N-[((5S)-3-(4-[3-(2-([叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基}乙基)-2-氧代吡
啶-l(2H)-基]-3-甲基-苯基}_2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基)甲基]_5-氯噻吩-2-甲
酰胺
將35.6克(74. l毫摩爾)來自實(shí)施例26A的化合物溶于800毫升無水乙睛中，并 在Ot:加入19克(89毫摩爾)來自實(shí)施例1A的化合物。加入25克(110毫摩爾)高氯酸
41溫?cái)嚢?5小時(shí)。加入24毫克(148毫摩爾)l，l-羰二咪唑和 180毫克(1. 4毫摩爾)N，N- 二甲基氨基吡啶，且混合物在回流下加熱2小時(shí)。使混合物冷 卻并在減壓下餾出溶劑。然后將殘余物導(dǎo)出至乙酸乙酯中，由水洗滌并用飽和氯化鈉溶液 洗滌三次。以硫酸鎂干燥后，將混合物過濾并在減壓下蒸發(fā)至干。將殘余物施加于硅膠并 使用環(huán)己烷和乙酸乙酯的梯度色譜處理。合并包含產(chǎn)物的級(jí)分并在減壓下蒸發(fā)至干。這產(chǎn) 生46. 4克(理論值的84% )所需產(chǎn)物。
LC-MS (方法5) :Rt = 3. 31min
MS(ESIpos) :m/z = 700(M+H) +
實(shí)施例28A 3-溴-1- (2-甲氧基-4-硝基苯基)吡啶-2 (1H)-酮
將70克(403毫摩爾)3-溴吡啶-2(lH)-酮溶于l升無水二甲基亞砜中，并在室 溫下加入54克(484毫摩爾)叔丁醇鉀。在該溫度攪拌懸浮液1小時(shí)。加入69克(403毫 摩爾)1-氟-2-甲氧基-4-硝基苯，并在8(TC加熱反應(yīng)溶液20小時(shí)。將該混合物小心地由 5升水稀釋。濾出沉淀的固體，由水洗滌并在減壓下干燥。這產(chǎn)生103克(理論值的72%) 所需產(chǎn)物。 力-NMR(400MHz， DMS0_d6， S /卯m) :5=8. 05(dd， 1H) ，8. 1 (d， 1H) ， 7. 95(dd， 1H)， 7. 7 (d， 1H) ， 7. 6 (dd， 1H) ， 6. 3 (t， 1H) ， 3. 9 (s， 3H)。
MS(ESIpos) :m/z = 342(M+NH4) +
實(shí)施例29A 1-(2_甲氧基_4-硝基苯基)-3-乙烯基吡啶-2(lH)-酮
將100克(308毫摩爾)來自實(shí)施例28A的化合物溶于1. 4升無水二氧雜環(huán)己烷 中，加入8. 9克(7. 7毫摩爾)四(三苯基膦)鈀和117克(370毫摩爾)三丁基乙烯基錫。 將混合物在回流下加熱16小時(shí)。然后使反應(yīng)溶液冷卻并通過硅藻土過濾。將該濾液在減 壓下濃縮至干。將殘余物在硅膠上使用環(huán)己烷和乙酸乙酯的梯度色譜處理。合并包含產(chǎn)物 的級(jí)分并在減壓下濃縮至干。加入石油醚直至開始結(jié)晶。濾出晶體并在減壓下干燥。這產(chǎn) 生37克(理論值的41%)所需產(chǎn)物。 力-腿(400MHz， DMS0-d6， S/ppm) : S = 8. 0 (m， 2H) ， 7. 7 (m， 2H) ， 7. 5 (dd， 1H)， 6. 7 (q， 1H) ， 6. 4 (t， 1H) ， 6. 1 (dd， 1H) ， 5. 3 (dd， 1H) ， 3. 9 (s， 3H)。
42



MS(ESIpos) :m/z 實(shí)施例30A 3-(2-羥乙基)-l
(2-甲氧基-4-硝基苯基)吡啶-2 (1H)-酮
273(M+H) 在(TC，將36克(299毫摩爾)9-硼雜雙環(huán)[3.3. 1]壬烷在600毫升四氫呋喃中的 溶液在45分鐘內(nèi)加入到37克(136毫摩爾)來自實(shí)施例29A的化合物中。在該溫度下另外 1小時(shí)之后，以15分鐘過程加入27克(680毫摩爾)氫氧化鈉(在水中1N)的溶液。將混 合物再攪拌5分鐘，并隨后加入125毫升30^的過氧化氫溶液以使溫度不超過3(TC。除去 冷卻，且混合物再攪拌30分鐘。混合物由乙酸乙酯反復(fù)提取，合并的有機(jī)相用730克(1.50 摩爾)亞硫酸氫鈉溶液洗滌，分離有機(jī)相并由乙酸乙酯再提取含水相。合并的有機(jī)相用飽 和氯化鈉溶液洗滌，以硫酸鎂干燥并在減壓下蒸發(fā)至干。將殘余物吸收在硅膠上并使用環(huán) 己烷和乙酸乙酯的梯度色譜處理。合并產(chǎn)物級(jí)分并在減壓下蒸發(fā)至干。為了進(jìn)行結(jié)晶，加 入叔丁基甲醚。濾出晶體并在減壓下干燥。這產(chǎn)生24克(理論值的60%)所需產(chǎn)物。
力-NMR(400MHz， DMS0-d6， S/ppm) : S = 8. 0 (d， 1H) ， 7. 95 (dd， 1H) ， 7. 6 (d， 1H)， 7. 4 (d， 1H) ， 6. 35 (t， 1H) ， 4. 6 (t， 1H) ， 3. 9 (s， 3H) ， 3. 55 (m， 2H) ， 2. 6 (m， 2H)。
MS(ESIpos) :m/z = 291(M+H) +
實(shí)施例31A 3-(2_{[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基}乙基)-l-(2-甲氧基-4-硝基苯基) 吡啶-2(lH)-酮 將24克(81毫摩爾)來自實(shí)施例30A的化合物溶于200毫升無水N，N-二甲基甲 酰胺中，并加入7. 2克(106毫摩爾)咪唑和27克(98毫摩爾)叔丁基(氯)二苯基硅烷。 在16小時(shí)后，將混合物由1. 2升水稀釋并用乙酸乙酯提取三次。合并的有機(jī)相用水洗滌兩 次，以硫酸鎂干燥，過濾并在減壓下濃縮。為了進(jìn)行結(jié)晶，加入叔丁基甲醚，濾出所得晶體并 在減壓下干燥。這產(chǎn)生30克(理論值的67% )所需產(chǎn)物。 力-NMR(400MHz， DMS0-d6， S/ppm) : S = 8. 0 (d， 1H) ， 7. 95 (dd， 1H) ， 7. 6—7. 5 (m，
43
H，C—05H) ， 7. 5-7. 4 (m， 8H) ， 6. 35 (t， 1H) ， 3. 8 (m， 5H) ， 2. 7 (m， 2H) ， 1. 0 (s， 9H)。
實(shí)施例32A 1-(4-氨基-2-甲氧基苯基)-3-(2-{[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基}乙基)
吡啶-2(lH)-酮
H3C—O 將25克(48毫摩爾)來自實(shí)施例31A的化合物溶于800毫升的乙醇和乙酸乙酯 1 : 1的混合物中，并加入18克(286毫摩爾)甲酸銨和800毫克披鈀碳。在8(TC加熱混 合物。在60分鐘后，使混合物冷卻并通過硅膠過濾。濾餅由乙酸乙酯洗滌，且濾液在減壓 下濃縮至干。這產(chǎn)生27克(理論值的98% )所需產(chǎn)物。 力-腿(400MHz， DMS0-d6， S/ppm) : S = 7. 6 (m， 4H) ， 7. 4 (m， 6H) ， 7. 3 (dd， 1H)， 7. 25(dd， 1H) ，6. 75(d， 1H) ，6. 3(d， 1H) ，6. 2(dd， 1H) ， 6. 1 (t， 1H) ， 5. 3 (b， 2H) ， 3. 8 (m， 2H)， 3. 6 (s， 3H) ， 2. 7 (m， 2H) ， 1. 0 (s， 9H)。
MS(ESIpos) :m/z = 499(M+H) +
實(shí)施例33A N-([(5S)-3-(4-[3-(2-([叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基] 啶-1 (2H)-基]-3-甲氧基-苯基} -2-氧代-1 ， 3-噁唑烷-5-基]甲基
酰胺
乙基)-2_氧代吡 -5-氯噻吩-2-甲
H3C_0 將29克(58毫摩爾)來自實(shí)施例32A的化合物溶于600毫升無水乙睛中，并在 (TC加入15克(69毫摩爾)來自實(shí)施例1A的化合物。加入19克(87毫摩爾)高氯酸鎂， 除去冷卻且混合物在室溫?cái)嚢?5小時(shí)。然后加入19. 0克(116毫摩爾)1， 1-羰二咪唑和 141毫克(1. 21毫摩爾)N，N- 二甲基氨基吡啶，且混合物在回流下加熱。在2小時(shí)后，使混
44合物冷卻并在減壓下餾出溶劑。然后將殘余物導(dǎo)出至乙酸乙酯中，由水洗滌并用飽和氯化 鈉溶液洗滌三次。以硫酸鎂干燥后，將混合物過濾并在減壓下蒸發(fā)至干。將殘余物在硅膠 上使用環(huán)己烷和乙酸乙酯的梯度色譜處理。合并包含產(chǎn)物的級(jí)分并在減壓下濃縮至干。這 產(chǎn)生37克(理論值的85% )所需產(chǎn)物。 'H-NMR (400MHz ， DMS0_d6) : S = 9. 0 (t， 1H) ， 7. 7 (d， 1H) ， 7. 6 (m， 4H) ， 7. 5—7. 3 (m，
9H) ， 7. 2 (m， 2H) ， 7. 1 (m， 1H) ， 6. 2 (t， 1H) ， 4. 8 (m， 1H) ， 4. 4 (t， 1H) ， 3. 9 (m， 1H) ， 3. 8 (b， 2H)，
3. 7 (s， 3H) ， 3. 65 (m， 2H) ， 2. 7 (m， 2H) ， 1. 0 (s， 9H)。 LC-MS (方法8) :Rt = 4. 53min MS(ESIpos) :m/z = 742(M+H) + 實(shí)施例34A 2-(溴甲基)-l-氟-4-硝基苯 將186克(1. 20摩爾)2_氟_5_硝基甲苯溶于1. 2升四氯化碳中，并加入214克 (1.20摩爾)N-溴琥珀酰亞胺。加入19.7克(120毫摩爾)偶氮二異丁腈，且混合物在回流 下加熱。在16小時(shí)以后，使該混合物冷卻，過濾并在減壓下蒸發(fā)至干。將殘余物溶于300 毫升二氯甲烷中，并加入300克海沙。然后將混合物再一次在減壓下濃縮至干，并將殘余物 施加于l千克硅膠柱上。將產(chǎn)物使用環(huán)己烷和乙酸乙酯的20 : l混合物色譜處理，并在減 壓下將產(chǎn)物級(jí)分蒸發(fā)至干。殘余物用環(huán)己烷結(jié)晶并在減壓下干燥。這產(chǎn)生92克(理論值 的32%)所需產(chǎn)物。 丄H-NMR (400MHz ， DMS0_d6， S /ppm) :5= 8. 57-8. 52 (m， 1H) ， 8. 33-8. 27 (m， 1H)，
7. 56(t， 1H) ，4. 62(s，2H)。 GC-MS (方法9) :Rt = 7. 79min MS(ESIpos) :m/z = 154(M_Br) + 實(shí)施例35A l-氟-2-(甲氧基甲基)-4-硝基苯
將30克(128毫摩爾)來自實(shí)施例34A的化合物溶于1. 3升無水甲苯中，并加入 45克(192毫摩爾)氧化銀(I)和24. 6克(769毫摩爾)無水甲醇。將混合物在6(TC下 加熱16小時(shí)。然后使混合物冷卻并通過硅膠過濾。將產(chǎn)物使用環(huán)己烷和環(huán)己烷/乙酸乙 酯25 : l的梯度分級(jí)洗脫。將產(chǎn)物級(jí)分在減壓下蒸發(fā)至干并在減壓下干燥。這產(chǎn)生17克
45(理論值的72%)所需產(chǎn)物。 力-NMR (400MHz， DMS0_d6， S /ppm) : S = 8. 41-8. 36 (m， 1H) ，8. 22-8. 16(m， 1H)， 7. 26 (t， 1H) ， 4. 58 (s， 2H) ， 3. 49 (s， 3H)。
GC-MS (方法9) :Rt = 6. 52min
MS(ESIpos) :m/z = 154(M_0CH3) +
實(shí)施例36A 3-溴-l-[2-(甲氧基甲基)-4-硝基苯基]妣啶-2(lH)-酮
<formula>formula see original document page 46</formula>
將38克(391毫摩爾)3-溴-2-羥基妣啶溶于1250毫升無水二甲基亞砜中，并逐 份地加入53克(469毫摩爾)叔丁醇鉀。將混合物再攪拌1小時(shí)，然后加入72. 4克(391 毫摩爾)來自實(shí)施例35A的化合物。在添加已經(jīng)結(jié)束后，將混合物在8(TC加熱3小時(shí)。然 后使混合物冷卻，并在室溫下繼續(xù)攪拌另外16小時(shí)。然后將反應(yīng)溶液冷卻至15t:，并在該 溫度用1N鹽酸將pH小心地調(diào)節(jié)至pH = 3。加入4升水，且混合物用2升乙酸乙酯提取三 次。合并的有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液洗滌并以硫酸鎂干燥。溶液然后在減壓下蒸發(fā)至干， 并加入叔丁基甲醚以便結(jié)晶。濾出晶體并在減壓下干燥。這產(chǎn)生94克(理論值的71%) 所需產(chǎn)物。 力-NMR(400MHz，DMS0-d6， S /ppm) :5=8. 37(d， 1H) ，8. 33(dd， 1H) ，8. 10(dd， 1H)， 7. 73-7. 67 (m， 2H) ， 6. 35 (t， 1H) ， 4. 3 (q， 2H) ， 3. 3 (s， 3H)。
LC-MS (方法6) :Rt = 1. 88min
MS(ESIpos) :m/z = 339(M+H+) +
實(shí)施例37A l-[2-(甲氧基甲基)_4-硝基苯基]-3-乙烯基妣啶-2(lH)-酮
<formula>formula see original document page 46</formula>
將94克(277毫摩爾)來自實(shí)施例36A的化合物溶于1.2升無水二氧雜環(huán)己烷中， 并加入8克(6. 9毫摩爾)四(三苯基膦)鈀(0)。在室溫下，緩慢加入105克(333毫摩爾)三丁基乙烯基錫，并在添加已經(jīng)結(jié)束之后，將該混合物在回流下加熱21小時(shí)。使反應(yīng)溶 液冷卻并通過硅藻土過濾。濾餅由乙酸乙酯洗滌且合并的有機(jī)濾液在減壓下濃縮至干。將 保留的殘余物溶于二氯甲烷中并施加于硅藻土上。將產(chǎn)物在1. 2千克硅膠上使用環(huán)己烷和 乙酸乙酯的梯度色譜處理。合并包含產(chǎn)物的級(jí)分并在減壓下濃縮至干。這產(chǎn)生23克(理 論值的29%)所需產(chǎn)物。 力-NMR(400MHz，DMS0-d6， S /ppm) :5=8. 36(d， 1H) ，8. 31 (dd， 1H) ， 7. 77(dd， 1H)，
7. 67 (d， 1H) ， 7. 56 (dd， 1H) ， 6. 80—6. 71 (m， 1H) ， 6. 45 (t， 1H) ， 6. 14 (dd， 1H) ， 5. 33 (dd， 1H)，
4. 37-4. 22(m，2H) ，3. 26(s，3H)。 LC-MS (方法6) :Rt = 2. 07min MS(ESIpos) :m/z = 387(M+H+) + 實(shí)施例38A 3-(2-羥乙基)-l-[2-(甲氧基甲基)-4-硝基苯基]妣啶-2(lH)-酮
HO
0
H3C 將23克(80毫摩爾)來自實(shí)施例37A的化合物溶于80毫升無水四氫呋喃中并冷 卻到5t:。在15分鐘期間內(nèi)，加入21克(176毫摩爾)9-硼雜雙環(huán)[3.3.1]壬烷(在四氫 呋喃中的0.5M溶液)。除去冷卻，且混合物在室溫下再攪拌2小時(shí)。然后將混合物再次冷 卻至5°C ，并加入400毫升的IN氫氧化鈉水溶液。在添加已經(jīng)結(jié)束之后，在該溫度逐份地加 入81毫升30%的過氧化氫溶液。在用500毫升乙酸乙酯稀釋后，將混合物用32毫升40% 的亞硫酸氫鈉溶液洗滌以消除過氧化物。分離有機(jī)相，且含水相用乙酸乙酯提取四次。合 并的有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液洗滌，以硫酸鎂干燥，并且在過濾后在減壓下濃縮至干。將殘 余物在硅膠上使用環(huán)己烷和乙酸乙酯的梯度色譜處理。合并包含產(chǎn)物的級(jí)分并在減壓下濃 縮至干。這產(chǎn)生20克(理論值的77% )所需產(chǎn)物。 力-NMR(400MHz， DMS0_d6， S /ppm) :5=8. 36(d， 1H) ，8. 30(dd， 1H) ， 7. 62(d， 1H)， 7. 45 (d， 1H) ， 6. 33 (t， 1H) ， 4. 60 (t， 1H) ， 4. 35-4. 20 (m， 2H) ， 3. 62-3. 55 (m， 2H) ， 3. 32 (s， 3H)， 2. 62(t，2H)。 LC-MS (方法8) :Rt = 1. 60min
MS(ESIpos) :m/z = 305(M+H+) +
實(shí)施例39A 3-(2_{[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基}乙基)-l-[2-(甲氧基甲基)-4-硝
基苯基]吡啶-2(lH)-酮
47<formula>formula see original document page 48</formula> 將20克(65毫摩爾)來自實(shí)施例38A的化合物溶于75毫升無水N， N_ 二甲基甲 酰胺中，并且，在冰冷卻下，首先加入5.3克(78毫摩爾)咪唑并隨后，在3分鐘期間內(nèi)，逐 份地加入19克(72毫摩爾)叔丁基二苯基氯硅烷。除去冷卻，且混合物在室溫下再攪拌19 小時(shí)。將反應(yīng)溶液由乙酸乙酯稀釋，由水洗滌三次并用飽和氯化鈉溶液洗滌兩次?；旌衔?然后以硫酸鎂干燥，過濾并在減壓下濃縮至干。將叔丁基甲醚加入至殘余物中，濾出所得晶 體并在減壓下干燥。這產(chǎn)生39克(理論值的90% )所需產(chǎn)物。 力-NMR(400MHz，DMS0-d6， S/ppm) :S = 8. 35 (d， 1H) ， 8. 31 (dd， 1H) ， 7. 65-7. 35 (m， 13H) ， 6. 35 (t， 1H) ， 4. 32-4. 14 (m， 2H) ， 3. 92—3. 80 (m， 2H) ， 3. 32 (s， 3H) ， 2. 78—2. 71 (m， 2H)， 0. 97(s，9H)。LC-MS (方法8) :Rt = 4. 59min
MS(ESIpos) :m/z = 543(M+H+) +
實(shí)施例40A l-[4-氨基-2-(甲氧基甲基)苯基]-3-(2_{[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧
基}乙基)吡啶-2(lH)-酮
O
H3C 將25克(48毫摩爾)來自實(shí)施例39A的化合物溶于500毫升乙酸乙酯和500毫升 乙醇中。加入18克(286毫摩爾)甲酸銨和1克披鈀碳，且混合物在回流下加熱45分鐘。 然后使反應(yīng)溶液冷卻并通過硅膠過濾。將該濾液在減壓下濃縮至干。這產(chǎn)生25克(理論 值的100%)所需產(chǎn)物。
48
'H-NMR (400MHz ，DMS0-d6， S /ppm) : S = 7. 65-7. 20 (m， 12H) ，6. 79 (d， 1H) ，6. 68 (d， 1H) ， 6. 54 (dd， 1H) ， 6. 20 (t， 1H) ， 5. 46—5. 25 (m， 2H) ， 4. 04—3. 91 (m， 2H) ， 3. 87—3. 77 (m， 2H)， 3. 07 (s， 3H) ， 2. 75-2. 68 (m， 2H) ， 0. 95 (s， 9H)。
LC-MS (方法6) :Rt = 3. 22min
MS(ESIpos) :m/z = 513(M+H+) +
實(shí)施例41A
N-{[(5S)-3-{4_[3 啶-l(2H)-基]-3-(甲氧基 吩-2-甲酰胺
<formula>formula see original document page 49</formula>
(2- {[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基}乙基)_2-氧代吡 -甲基)苯基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基]甲基}-5- 將25克(47毫摩爾)來自實(shí)施例40A的化合物溶于500毫升無水乙睛中，并加入 15克(61毫摩爾)來自實(shí)施例1A的化合物和16克(71毫摩爾)高氯酸鎂。將混合物在 室溫下攪拌5小時(shí)，然后再加入1克(4. 1毫摩爾)來自實(shí)施例1A的化合物。在21小時(shí)以 后，加入15. 3克(95毫摩爾)羰二咪唑和116毫克(0.65毫摩爾)4-二甲基氨基吡啶，且 混合物在回流下加熱3. 5小時(shí)。然后在減壓下除去溶劑，并將殘余物導(dǎo)出在800毫升乙酸 乙酯中。溶液由水洗滌并用飽和氯化鈉溶液洗滌兩次，以硫酸鎂干燥并隨后在減壓下濃縮。 將殘余物在硅膠上使用環(huán)己烷和乙酸乙酯的梯度分離。合并包含產(chǎn)物的級(jí)分并在減壓下濃 縮至干。這產(chǎn)生26. 5克(理論值的72% )所需產(chǎn)物。 力-NMR(400MHz，DMS0-d6， S /ppm) :5=9. OO(t， 1H) ， 7. 73-7. 35 (m， 15H) ，7. 23(d， 1H) ， 7. 19 (d， 1H) ， 6. 28 (t， 1H) ， 4. 90—4. 81 (m， 1H) ， 4. 28—3. 80 (m， 6H) ， 3. 62 (t， 2H) ， 3. 11 (s， 3H) ， 2. 79-2. 71 (m， 2H) ， 0. 97 (s， 9H)。
LC-MS (方法6) :Rt = 3. 39min
MS(ESIpos) :m/z = 756(M+H+) +
實(shí)施例42A (2_氟_5_硝基節(jié)基)(三苯基)溴化轔
<formula>formula see original document page 50</formula> 將20克(85. 5毫摩爾)來自實(shí)施例34A的化合物溶于250毫升無水甲苯中，并 加入22. 4克(85. 5毫摩爾)三苯基膦。將溶液在回流下加熱16小時(shí)，導(dǎo)致沉淀形成。使 混合物冷卻，并濾出沉淀。在用乙醚洗滌后，在減壓下干燥沉淀。這產(chǎn)生39克(理論值的 92% )所需產(chǎn)物。 力-NMR(400MHz， DMS0_d6， S /ppm) :5= 8. 30-8. 23 (m， 1H) ， 7. 98-7. 88 (m， 4H)， 7. 81-7. 70 (m， 12H) ， 7. 45 (t， 1H) ， 5. 32 (d， 2H)。
實(shí)施例43A l-氟-4-硝基-2-[(lE)丙-l-烯-l-基]苯
在l(TC，將5. 99克(32. 7毫摩爾)雙(三甲基甲硅烷基)酰胺鈉滴加到13. 5克 (27. 3毫摩爾)來自實(shí)施例42A的化合物在145毫升二氧雜環(huán)己烷的溶液中。在該溫度攪 拌混合物1小時(shí)。然后加入2. 40克(54. 5毫摩爾)乙醛在5毫升二氧雜環(huán)己烷中的溶液， 并在室溫?cái)嚢璺磻?yīng)1小時(shí)。然后加入400毫升水，混合物用二氯甲烷提取三次且合并的有機(jī) 相用飽和氯化鈉水溶液洗滌兩次。以硫酸鈉干燥及后續(xù)的過濾后，在減壓下除去溶劑。產(chǎn) 物通過色譜法在硅膠上提純(流動(dòng)相環(huán)己烷/乙酸乙酯=40 : 1)。這產(chǎn)生5. 2克(理 論值的100% )所需產(chǎn)物，為E/Z異構(gòu)體混合物。 力-NMR(400MHz， DMS0_d6， S /ppm) :5= 8. 47-8. 05 (m， 2H) ， 7. 58-7. 42 (m， 1H)，
6. 70-6. 05 (m， 2H) ， 1. 90-1. 78 (m， 3H)。GC-MS(方法10) :Rt = 2. 64and 2. 70mm MS(ESIpos) :m/z = 181(M+H+) + 實(shí)施例44A 3-溴-l-(4-硝基-2-[(lE)-丙-l-烯-l-基]苯基}吡啶-2(lH)-酮
50
將0. 96克(5. 52毫摩爾)3_溴吡啶_2 (1H)-酮溶于17毫升DMS0。將混合物冷卻 至0t:，并如此加入1. 00克(5. 52毫摩爾)叔丁醇鉀，以使內(nèi)部溫度不超過30°C。在室溫 下1小時(shí)后，加入1. 00克(5. 52毫摩爾)來自實(shí)施例43A的化合物在5毫升匿SO中的溶 液。在80°C 3小時(shí)后，加入200毫升水和50毫升氯化鈉溶液，且混合物用乙酸乙酯提取三 次。合并的有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液洗滌并以硫酸鈉干燥。溶劑在減壓下除去且產(chǎn)物通過 色譜法在硅膠上提純(流動(dòng)相環(huán)己烷/乙酸乙酯=4:1)。這產(chǎn)生935毫克(理論值的 49% )所需化合物，為E/Z異構(gòu)體混合物。 "H-NMR(400MHz， DMS0_d6， S/ppm) :8. 52-8. 27 (m， 1H) ， 8. 22-8. 16 (m， 1H)， 8. 13-8. 04 (m， 1H) ， 7. 76-7. 61 (m， 2H) ， 6. 65-5. 90 (m， 3H) ， 1. 83-1. 69 (m， 3H)。
HPLC(方法1) :Rt = 4. 20min。
MS(DCI，m/z) :335(M+H)+。
實(shí)施例45A l-(4-硝基-2-[(lE)-丙-l-烯-l-基]苯基}_3-乙烯基吡啶-2(lH)-酮
<formula>formula see original document page 51</formula> 將929毫克(2. 77毫摩爾)來自實(shí)施例44A的化合物溶于14毫升無水二氧雜環(huán) 己烷中，并加入64毫克(0.06毫摩爾)四(三苯基膦)鈀(O)。在室溫下，緩慢加入1.06 克(3. 33毫摩爾)三丁基乙烯基錫，并在添加已經(jīng)結(jié)束之后，將該混合物在回流下加熱21 小時(shí)。使反應(yīng)溶液冷卻并通過硅藻土過濾。濾餅隨后由乙酸乙酯洗滌且合并的有機(jī)濾液在 減壓下濃縮至干。產(chǎn)物通過色譜法在硅膠上提純(流動(dòng)相環(huán)己烷/乙酸乙酯=4 : 1)。 這產(chǎn)生568毫克(理論值的70% )所需產(chǎn)物。 "H-NMR(400MHz， DMS0_d6， S/ppm) :8. 52-8. 24 (m， 1H) ， 8. 21-8. 14 (m， 1H)， 7. 78-7. 58 (m， 2H) ， 6. 79-6. 68 (m， 1H) ， 6. 65-6. 52 (m， 1H) ， 6. 47-6. 38 (m， 1H) ， 6. 20-5. 90 (m， 3H) ， 5. 39-5. 28 (m， 1H) ， 1. 83-1. 70 (m， 3H)。
HPLC(方法1) :Rt = 4. 33min
MS(ESIpos) :m/z = 283(M+H+) +
實(shí)施例46A 3-(2-羥乙基)-l-(4-硝基-2-[(lE)-丙-l-烯-l-基]苯基}吡啶-2(lH)-酮
<formula>formula see original document page 52</formula>
將452克(1. 60毫摩爾)來自實(shí)施例45A的化合物溶于1. 7毫升無水四氫呋喃中 并冷卻到0t:。緩慢加入488毫克(176毫摩爾)9-硼雜雙環(huán)[3. 3. 1]壬烷(在四氫呋喃中 的0. 5M溶液)，且混合物在室溫下攪拌2小時(shí)。然后將混合物再次冷卻至0°C ，并緩慢加入 8毫升的1N氫氧化鈉水溶液。在添加已經(jīng)結(jié)束之后，在該溫度滴加1. 6毫升30%的過氧化 氫溶液。攪拌混合物在0t:攪拌30分鐘并隨后用1. 3毫升40%的亞硫酸氫鈉溶液洗滌以 消除過氧化物，并用500毫升乙酸乙酯稀釋。除去有機(jī)相，且含水相用乙酸乙酯提取兩次。 合并的有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液洗滌，以硫酸鈉干燥，并且在過濾后在減壓下濃縮至干。產(chǎn) 物通過色譜法在硅膠上提純(流動(dòng)相環(huán)己烷/乙酸乙酯=2:1)。這產(chǎn)生514毫克(理 論值的100%)所需產(chǎn)物。 "H-NMR(400MHz， DMS0_d6， S/ppm) :8. 51-8. 24 (m， 1H) ， 8. 22-8. 14 (m， 1H)， 7. 68-7. 55 (m， 1H) ， 7. 48-7. 36 (m， 2H) ， 6. 61-6. 50 (m， 1H) ， 6. 37-6. 26 (m， 1H) ， 6. 09-6. 86 (m， 1H) ， 4. 63-4. 56 (m， 1H) ， 3. 63-3. 54 (m， 2H) ， 2. 65-2. 56 (m， 2H) ， 1. 83-1. 69 (m， 3H)。
HPLC(方法1) :Rt = 3. 71min
MS(ESIpos) :m/z = 301(M+H+) +
實(shí)施例47A 1- (4-氨基-2-丙基苯基)-3- (2-羥乙基)吡啶_2 (1H)-酮
將520毫克(1. 73毫摩爾)來自實(shí)施例46A的化合物溶于10毫升THF中。加入 30毫克披鈀碳，且混合物在室溫在氫氣氛中在大氣壓下氫化。然后通過硅藻土過濾反應(yīng)混 合物，濾餅由THF洗滌三次并從濾液除去溶劑。反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)一步反應(yīng)而無需另外提純。這 產(chǎn)生471毫克(理論值的89% )所需產(chǎn)物。
HPLC(方法1) :Rt = 3. OOmin
MS(ESIpos) :m/z = 273(M+H+) +
實(shí)施例48A 3-烯丙基-1- (2-甲基-4-硝基苯基)吡啶-2 (1H)-酮
52
在已經(jīng)通過加熱干燥的燒瓶中，起初將1. 50克(4. 85毫摩爾)來自實(shí)施例22A的化合物、1. 44克(9. 46毫摩爾)氟化銫和0. 561克(0. 48毫摩爾)四(三苯基膦)鈀(0)加入30毫升脫氣THF中。滴加2. 04克(121毫摩爾)2-烯丙基-4， 4， 5， 5-四甲基-1， 3，2- 二氧雜硼戊環(huán)(dioxaborolan)在5毫升脫氣THF中的溶液，且混合物在回流下加熱過夜。混合物隨后用二氯甲烷稀釋，并加入水。相分離后，含水相用二氯甲烷提取三次。合并的有機(jī)相以硫酸鈉干燥并濃縮。產(chǎn)物通過色譜法在硅膠上提純，產(chǎn)生l. 18克(理論值的62% )標(biāo)題化合物。 4_腿(400MHz， DMS0_d6， S/ppm) :8. 31 (d， 1H) ， 8. 18 (dd， 1H) ， 7. 57 (d， 1H)，7. 46 (dd， 1H) ， 7. 44-7. 38 (m， 1H) ， 6. 35 (t， 1H) ， 5. 96 (dddd， 1H) ， 5. 16-5. 06 (m， 2H) ， 3. 20 (d，2H) ，2. 15(s，3H)。 HPLC(方法2) :Rt = 4. 05min。
MS(ESIpos， m/z) :271(M+H)+。
實(shí)施例49A 3- (3-羥丙基)-1- (2-甲基-4-硝基苯基)吡啶_2 (1H)-酮
在(TC，將18. 5毫升(9. 25毫摩爾)9-硼雜雙環(huán)[3. 3. 1]壬烷在THF中的O. 5M溶液緩慢滴加到處于4毫升THF中的1. 00克(3. 70毫摩爾)來自實(shí)施例48A的化合物中。在室溫下一小時(shí)后，將混合物再次冷卻至0°C ，并滴加18. 5毫升(18. 5毫摩爾)氫氧化鈉在水中的1M溶液。將混合物在0t:再攪拌30分鐘，并隨后如此加入3. 24毫升30%的過氧化氫溶液，以使溫度不超過30°C。將混合物在冰冷卻下攪拌30分鐘，然后加入乙酸乙酯和繼之以ll克(40毫摩爾)亞硫酸氫鈉溶液。分離有機(jī)相，且含水相用乙酸乙酯提取兩次。合并的有機(jī)相由飽和氯化鈉水溶液洗滌。有機(jī)相以硫酸鈉干燥并隨后在減壓下蒸發(fā)至干。殘余物在硅膠上色譜處理(環(huán)己烷/乙酸乙酯l : 4)。這產(chǎn)生1.03克(理論值的83%)所需產(chǎn)物。 力-NMR(400MHz，DMS0-d6， S /ppm) : S = 8. 31 (d， 1H) ，8. 18(dd， 1H) ， 7. 66-7. 51 (m，
1H) ， 7. 47-7. 38 (m， 2H) ， 6. 33 (t， 1H) ， 4. 46 (t， 1H) ， 3. 46—3. 38 (q， 2H) ， 2. 52—2. 45 (m， 2H)，
2. 15(s，3H) ， 1. 73-1. 62(m，2H)。 HPLC(方法1) :Rt = 3. 51min。 MS (DCI ， m/z) = 289 (M+H) + 實(shí)施例50A
1- (4-氨基-2-甲基苯基)-3- (3-羥丙基)吡啶-2 (1H)-酮 將475毫克(1. 65毫摩爾)來自實(shí)施例49A的化合物溶于48毫升THF中。然后加入50毫克(0.05毫摩爾)披鈀碳，且混合物在氫氣氛中在大氣壓下在室溫氫化。然后過濾混合物，濾餅由THF洗滌三次并從濾液除去溶劑。反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)一步反應(yīng)而無需另外提純。
HPLC(方法1) :Rt = 2. 82min。
MS(DCI，m/z) :259(M+H)+。
實(shí)施例51A 3-溴-l-(2，6-二甲基-4-硝基苯基)吡啶-2(lH)-酮
將2. 81克(16. 1毫摩爾)的3-溴妣啶-2(1H)-酮(0. S. Tee， M. Pavent， J. Am.Chem. Soc. 1982， 104， 4142-4146.)溶于100毫升DMF中。將混合物冷卻至0°C ，并加入2. 71克(24. 2毫摩爾)叔丁醇鉀。除去冷卻，且混合物在室溫下攪拌30分鐘。加入3. 00克(17. 7毫摩爾)1-氟-2，5- 二甲基-4-硝基苯，且混合物在8(TC攪拌18小時(shí)，在IO(TC攪拌36小時(shí)并在12(TC攪拌18小時(shí)。然后將混合物加入至水中并用乙酸乙酯提取三次。合并的有機(jī)相以硫酸鈉干燥。殘余物通過色譜法在硅膠上提純(環(huán)己烷/乙酸乙酯4 : 1)。這產(chǎn)生2. 04克(理論值的38% )所需化合物。 力-NMR(400MHz，DMS0-d6， S /ppm) :5=8. 19(s，2H) ，8. 14(dd， 1H) ， 7. 62(dd， 1H)，
6. 43(t，lH)，2. 11(s，6H)。 HPLC(方法1) :Rt = 4. 13min。 MS(ESIpos， m/z) :323(M+H)+。 實(shí)施例52A 1- (2， 6- 二甲基-4-硝基苯基)-3-乙烯基吡啶_2 (1H)-酮
將2. 00克(6. 19毫摩爾)來自實(shí)施例51A的化合物溶于31毫升無水二氧雜環(huán)己
54烷中，并加入2.36克(7.42毫摩爾)三丁基乙烯基錫和143毫克(0. 124毫摩爾)四(三
苯基膦)鈀且混合物在10(TC下攪拌5小時(shí)。使混合物冷卻并通過硅藻土過濾。濾餅用乙
酸乙酯洗滌三次，且合并的濾液在減壓下濃縮至干。殘余物通過色譜法在硅膠上提純(環(huán)
己烷/乙酸乙酯4 : 1)。這產(chǎn)生846毫克(理論值的51%)所需產(chǎn)物。 力-NMR(400MHz，DMS0-d6， S /ppm) :5=8. 17(s，2H) ，7. 78(dd， 1H) ， 7. 48(dd， 1H)，
6. 75 (dd， 1H) ， 6. 48 (dd， 1H) ， 6. 14 (dd， 1H) ， 5. 33 (dd， 1H) ， 2. 10 (s， 6H)。 HPLC(方法1) :Rt = 4. 25min MS(ESIpos) :m/z = 271(M+H) + 實(shí)施例53A l-(2，6-二甲基-4-硝基苯基)-3-(2-羥乙基)吡啶-2(lH)-酮
在冰冷卻下，將902毫克(7. 40毫摩爾)9_硼雜雙環(huán)[3. 3. 1]壬烷在14. 8毫升四
氫呋喃中的溶液加入至800毫克(296毫摩爾)來自實(shí)施例52A的化合物中。混合物在室溫下攪拌3小時(shí)并隨后冷卻至0°C，并以15分鐘加入591毫克(14. 8毫摩爾)的氫氧化鈉水溶液。如此加入2.60毫升30^的過氧化氫溶液，以使得溫度不超過3(TC。在添加已經(jīng)結(jié)束之后，將混合物在Ot:攪拌30分鐘。在冰冷卻下，將8. 73克(32. 6摩爾)亞硫酸氫鈉在12毫升水中的溶液加入該反應(yīng)混合物中。混合物由50毫升乙酸乙酯稀釋，除去有機(jī)相且含水相用乙酸乙酯提取兩次。合并的有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液洗滌，以硫酸鈉干燥并在減壓下蒸發(fā)至干。殘余物通過色譜法在硅膠上提純(環(huán)己烷/乙酸乙酯l : 2)。這產(chǎn)生765毫克(理論值的89% )所需產(chǎn)物。 力-NMR(400MHz，DMS0-d6， S /ppm) :5=8. 15(s，2H) ，7. 46(dd， 1H) ， 7. 35(dd， 1H)，6. 37 (dd， 1H) ， 4. 62 (dd， 1H) ， 4. 25 (d， 1H) ， 2. 62 (dd， 2H) ， 2. 08 (s， 6H)。
HPLC(方法1) :Rt = 3. 59min
MS(ESIpos) :m/z = 289(M+H) +
實(shí)施例54A 3_(2_{[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基}乙基)-1-(2，6_二甲基-4-硝基苯
基)吡啶-2(lH)-酮<formula>formula see original document page 56</formula>
將760毫克(2. 64毫摩爾)來自實(shí)施例53A的化合物和0. 55毫升(3. 9毫摩爾)三乙胺溶于7毫升無水N，N- 二甲基甲酰胺中。加入16毫克(0. 13毫摩爾)4- 二甲基氨基吡啶和1. 09克(3. 95毫摩爾)叔丁基(氯)二苯基硅烷，且混合物在室溫下攪拌2小時(shí)。然后將混合物加入至水中，并在相分離后用乙酸乙酯提取三次。合并的有機(jī)相用水洗滌兩次，以硫酸鈉干燥，過濾并在減壓下蒸發(fā)。殘余物通過色譜法在硅膠上提純(環(huán)己烷/乙酸乙酯5:1)。這產(chǎn)生971毫克(理論值的58% )所需產(chǎn)物。
HPLC(方法2) :Rt = 5. 97min
MS(ESIpos) :m/z = 527(M+H) +
實(shí)施例55A 1- (4-氨基-2， 6- 二甲基苯基)-3- (2_ {[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基}乙基)吡啶-2(lH)-酮
<formula>formula see original document page 56</formula>
將970毫克(1. 84毫摩爾)來自實(shí)施例54A的化合物溶于20毫升THF中。然后加入200毫克披鈀碳，且混合物在室溫在氫氣氛中在大氣壓下氫化。然后通過硅藻土過濾反應(yīng)混合物，濾餅由THF洗滌三次并從濾液除去溶劑。反應(yīng)產(chǎn)物(1. 00克)進(jìn)一步反應(yīng)而無需另外提純。 HPLC(方法2) :Rt = 4. 99min
MS(ESIpos) :m/z = 497(M+H) +
實(shí)施例56A N-[((5S)-3-(4-[3-(2-([叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基}乙基)_2_氧代吡啶-1 (2H)-基]-3， 5- 二甲基-苯基} -2-氧代-1 ， 3-噁唑烷-5-基)甲基]-5-氯噻吩-2-甲酰胺
升無水乙睛中，并
孝
E摩爾)高氯酸鎂: 將800毫克(1. 61毫摩爾)來自實(shí)施例55A的化合物溶于15 加入385克(1. 77毫摩爾)來自實(shí)施例1A的化合物和539毫克(2. 41 該混合物在室溫下攪拌5. 5小時(shí)。然后加入652毫克(4. 03毫摩爾)1， 1-羰二咪唑和19 毫克(0. 16毫摩爾)N，N-二甲基氨基吡啶，且混合物在回流下加熱18小時(shí)?；旌衔锉焕鋮s 并被加入至100毫升水和100毫升乙酸乙酯中。在相分離后，含水相用乙酸乙酯提取兩次 且合并的有機(jī)相以硫酸鈉干燥。過濾之后，將混合物在減壓下蒸發(fā)至干。殘余物通過色譜 法在硅膠上提純(環(huán)己烷/乙酸乙酯1:2)。這產(chǎn)生664毫克(理論值的55% )所需產(chǎn) 物。 力-NMR (400MHz ， DMS0_d6， S /卯m) : S = 8. 99 (t， 1H) ， 7. 70 (d， 1H) ， 7. 63-7. 45 (m， 4H) ，7. 48-7. 31 (m， 9H) ，7. 28(dd， 1H) ，7. 20(d， 1H) ，6. 32(t， 1H) ，4. 90-4. 81 (m， 1H)， 4. 22 (dd， 1H) ， 3. 89—3. 82 (m， 3H) ， 3. 62 (t， 2H) ， 2. 76 (dd， 2H) ， 1. 94 (s， 6H) ， 0. 95 (s， 9H)。
HPLC(方法2) :Rt = 5. 92min MS(ESIpos) :m/z = 740(M+H) + 工作實(shí)施例 實(shí)施例1
5_氯-N- {[ (5S) -3- {3-氯-4- [3-(羥甲基)-2-氧代吡啶_1 (2H)-基]苯基} -2-氧 噁唑烷-5-基]甲基}噻吩-2-甲酰胺


代_1，3-
將367毫克(1. 41毫摩爾；在THF中1M)四丁基氟化銨加入至515毫克(0. 703毫 摩爾)來自實(shí)施例6A的化合物在8毫升THF中的溶液中。在室溫3小時(shí)后，混合物由水、飽 和氯化鈉水溶液和乙酸乙酯稀釋。由乙酸乙酯提取含水相，且合并的有機(jī)相以硫酸鈉干燥。 過濾后，從混合物除去溶劑且殘余物通過色譜法在硅膠上提純(二氯甲烷/甲醇20 : 1)。 這產(chǎn)生278毫克(理論值的78% )所需產(chǎn)物。 4-畫R(400MHz， DMSO-d6， S/ppm) :8. 97 (t， 1H) ， 7. 87 (dd， 1H) ， 7. 69 (d， 1H)， 7. 59 (ddd， 1H) ， 7. 56-7. 48 (m， 2H) ， 7. 46-7. 38 (m， 1H) ， 7. 20 (d， 1H) ， 6. 37 (dd， 1H) ， 5. 15 (dd，
571H) ， 4. 93-4. 82 (m， 1H) ， 4. 33 (br. d， 2H) ， 4. 24 (dd， 1H) ， 3. 90 (dd， 1H) ， 3. 62 (dd， 2H)。
HPLC(方法2) :Rt = 3. 88min。
MS(DCI，m/z) :494(M+H)+。
實(shí)施例2 5-氯-N- [ ((5S) _3_ {4_ [3_ (羥甲基)_2_氧代吡啶_1 (2H)-基]_3_甲基苯
基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5_基)甲基]噻吩-2_甲酰胺<formula>formula see original document page 58</formula> 將530毫克(0. 74毫摩爾)來自實(shí)施例9A的化合物溶于9毫升THF中。加入1. 5
毫升四丁基氟化銨在THF中的1M溶液，且混合物在室溫?cái)嚢?0分鐘。加入少許水，濃縮混
合物且產(chǎn)物通過制備HPLC提純。這產(chǎn)生335毫克(理論值的93% )所需產(chǎn)物。 'H-畫R(400MHz， DMS0-d6， S/ppm) :9. 00 (t， 1H) ， 7. 70 (d， 1H) ， 7. 55-7. 49 (m， 3H)，
7. 39(d， 1H) ，7. 23(d， 1H) ， 7. 20(d， 1H) ，6. 36(t， 1H) ， 5. 14(s，寬，1H) ，4. 90-4. 82 (m， 1H)，
4. 38-4. 29 (m， 2H) ， 4. 22 (t， 1H) ， 3. 91—3. 85 (m， 1H) ， 3. 62 (t， 2H) ， 2. 01 (s， 3H)。 HPLC(方法3) :Rt = 1. 66min。 MS (ESIpos， m/z) :474/476 (35C1/37C1) (M+H) +。 實(shí)施例3 5-氯-N- [ ((5S) -3- {4- [3-(羥甲基)_2_氧代吡啶_1 (2H)-基]-3-甲氧基苯
基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5_基)甲基]噻吩-2_甲酰胺<formula>formula see original document page 58</formula> 類似于實(shí)施例2，將491毫克(0. 67毫摩爾)來自實(shí)施例12A的化合物用THF中的四丁基氟化銨去甲硅烷基化。產(chǎn)物通過制備HPLC提純。這產(chǎn)生287毫克(理論值的87%)所需產(chǎn)物。 丄H-畫R(400MHz， DMS0-d6， S/ppm) :9. 02 (t， 1H) ， 7. 71 (d， 1H) ， 7. 50-7. 46 (m， 1H)，7. 45(d， 1H) ，7. 34(dd， 1H) ， 7. 26(d， 1H) ， 7. 20(d， 1H) ， 7. 12(dd， 1H) ，6. 29(t， 1H) ， 5. 11 (s，寬，1H) ，4. 91-4. 83(m， 1H) ，4. 30(s， 寬，2H) ，4. 25(t， 1H) ， 3. 91(dd， 1H) ，3. 73(s，3H)，3. 65-3. 60(m，2H)。 HPLC(方法3) :Rt = 1. 63min。 MS (ESIpos， m/z) :490/492 (35C1/37C1) (M+H) +。 實(shí)施例4 5-氯-N- ({(5S) -3- [4- [3-(羥甲基)_2_氧代妣啶_1 (2H) _基]_3_ (三氟甲基)苯基]-2_氧代
1，3-噁唑烷-5-基
甲基)噻吩
2-甲酰胺 類似于實(shí)施例2，將370毫克(0. 48毫摩爾)來自實(shí)施例15A的化合物用THF中的 四丁基氟化銨去甲硅烷基化。產(chǎn)物通過制備HPLC提純。這產(chǎn)生200毫克(理論值的78%) 所需產(chǎn)物。 "H-畫R(400MHz， DMS0_d6， S/ppm) :8. 99 (t， 1H) ， 8. 13 (d， 1H) ， 7. 83 (dt， 1H)，
7. 69 (d， 1H) ， 7. 56 (d， 1H) ， 7. 53 (dd， 1H) ， 7. 47—7. 42 (m， 1H) ， 7. 20 (d， 1H) ， 6. 35 (t， 1H)，
5. 17 (t， 1H) ， 4. 94-4. 86 (m， 1H) ， 4. 33-4. 27 (m， 3H) ， 3. 99-3. 93 (m， 1H) ， 3. 67-3. 61 (m， 2H)。 HPLC(方法3) :Rt = 1. 82min。MS(ESIpos， m/z) :528/530 (35C1/37C1) (M+H)+。 實(shí)施例5 5-氯-N- [ ((5S) -3- {3_氯_4_ [3- (2-羥乙基)_2_氧代吡啶_1 (2H)-基]苯
基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5-基)甲基]噻吩-2-甲酰胺 將400毫克(0. 79毫摩爾)來自實(shí)施例21A的化合物溶于6毫升THF和4毫升水 的混合物中。加入161毫克(0. 016毫摩爾)四氧化鋨在叔丁醇中的2. 5M溶液和509毫克 (2.38毫摩爾)高碘酸鈉，且混合物在室溫?cái)嚢?0小時(shí)。然后將混合物由水稀釋并用二氯 甲烷提取，干燥和濃縮。將殘余物溶于4毫升THF和4毫升水的混合物中，并加入30. 0毫 克(0. 79毫摩爾)硼氫化鈉。將混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)并隨后由水稀釋和用二氯甲烷提 取。將有機(jī)相干燥，濃縮并通過制備HPLC提純。這產(chǎn)生47毫克(理論值的12%)所需產(chǎn) 物。 力-匪R(400MHz， DMS0_d6， S/ppm) :8. 97 (t ， 1H) ， 7. 85 (d， 1H) ， 7. 69 (d， 1H) ， 7. 62-7. 56 (m， 1H) ， 7. 51-7. 47 (m， 1H) ， 7. 42-7. 36 (m， 2H) ， 7. 20 (d， 1H) ， 6. 27 (t， 1H) ，4. 92-4. 84(m， 1H) ，4. 59(t， 1H) ，4. 24(t， 1H) ，3. 90(dd， 1H) ， 3. 65-3. 55 (m，4H)， 3. 18-3. 15(m，2H)。 HPLC(方法5) :Rt = 1. 94min。 MS (ESIpos， m/z) :508/510 (35C12/35C137C1) (M+H) +。 實(shí)施例6 5-氯-N- [ ((5S) _3_ {4_ [3- (2-羥乙基)_2_氧代吡啶_1 (2H)-基]-3-甲基苯基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5_基)甲基]噻吩-2-甲酰胺
H〇 在冰冷卻下，將400毫升的甲醇中的1. 25N鹽酸加入至43. 8克(60. 3毫摩爾)來
自實(shí)施例27A的化合物中。在l小時(shí)后，混合物由二氯甲烷稀釋，并隨后除去含水相。有機(jī)相用水洗滌兩次，以硫酸鈉干燥，并且在過濾后在減壓下濃縮至于。將殘余物施加于硅膠并使用環(huán)己烷和乙酸乙酯的梯度色譜處理。合并包含產(chǎn)物的級(jí)分并在減壓下濃縮至干。這產(chǎn)生19. 6克(理論值的66% )所需產(chǎn)物。 力-NMR(400MHz， DMS0_d6， S /卯m) : S = 8. 98 (t， 1H) ， 7. 70 (d， 1H) ， 7. 55-7. 47 (m，2H) ， 7. 40 (dd， 1H) ， 7. 35 (dd， 1H) ， 7. 25-7. 17 (m， 2H) ， 6. 26 (t， 1H) ， 4. 90-4. 82 (m， 1H)，4. 60 (t， 1H) ， 4. 22 (t， 1H) ， 3. 92-3. 84 (m， 1H) ， 3. 66-3. 54 (m， 4H) ， 2. 60 (t， 2H) ， 2. 01 (s， 3H)。
LC-MS(方法5) :Rt = 1. 87min
MS(ESIpos) :m/z = 488(M+H) +
實(shí)施例7 5-氯-N- {[ (5S) _3_ {4_[3- (2-羥乙基)_2_氧代吡啶_1 (2H)-基]_3_甲氧基苯
基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5_基]甲基}噻吩-2-甲酰胺 在Ot:，將37克(49毫摩爾)來自實(shí)施例33A的化合物溶于313毫升的在甲醇中的1. 25N鹽酸中。在1小時(shí)后，將溶液在減壓下蒸發(fā)并用二氯甲烷稀釋。有機(jī)相用水洗滌兩次，以硫酸鎂干燥，并且在過濾后在減壓下蒸發(fā)至干。將殘余物在硅膠上使用二氯甲烷和甲醇的梯度色譜處理。合并產(chǎn)物級(jí)分并在減壓下蒸發(fā)至干。這產(chǎn)生19克(理論值的78%)所需產(chǎn)物。 力-NMR(400MHz， DMS0_d6， S /卯m) : S = 9. 00 (t， 1H) ， 7. 70 (d， 1H) ， 7. 45 (d， 1H)，
7. 35 (dd， 1H) ， 7. 31 (dd， 1H) ， 7. 25 (d， 1H) ， 7. 20 (d， 1H) ， 7. 15—7. 08 (m， 1H) ， 6. 19 (t， 1H)，
4. 91-4. 83 (m， 1H) ， 4. 60 (t， 1H) ， 4. 25 (t， 1H) ， 3. 94-3. 87 (m， 1H) ， 3. 74 (s， 3H) ， 3. 66-3. 53 (m，
4H) ， 2. 62-2. 55 (m， 2H)。 MS(ESIpos) :m/z = 504(M+H) + 實(shí)施例8 N-([(5S)-3-(4-[3-(2-([叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基}乙基)_2_氧代妣
60啶-l(2H)-基]-3-(甲氧基甲基)苯基
吩-2-甲酰胺
-2-氧代-l，3-噁唑烷-5-基]甲基}_5-氯噻 在冰冷卻下，將135毫升的甲醇中的1.25N鹽酸加入至27克(34毫摩爾)來自 實(shí)施例41A的化合物中。在該溫度再攪拌混合物45分鐘。在冰冷卻下，使用1N氫氧化鈉 水溶液將pH調(diào)節(jié)至7，并用二氯甲烷反復(fù)提取冷溶液。合并的有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液洗 滌并以硫酸鎂干燥。將混合物在減壓下蒸發(fā)至干，且殘余物在硅膠上使用二氯甲烷和甲醇 的梯度色譜處理。合并包含產(chǎn)物的級(jí)分并在減壓下濃縮至干。這產(chǎn)生16.4克(理論值的 89% )所需產(chǎn)物。 "H-NMR(400MHz， DMS0_d6， S/ppm) : S = 8. 98 (t ， 1H) ， 7. 72-7. 66 (m， 2H)，
7. 62-7. 56 (m， 1H) ， 7. 40 (dd， 1H) ， 7. 36 (dd， 1H) ， 7. 27 (d， 1H) ， 7. 20 (d， 1H) ， 6. 25 (t， 1H)，
4. 90-4. 82 (m， 1H) ， 4. 60 (t， 1H) ， 4. 27—4. 08 (m， 3H) ， 3. 94—3. 87 (m， 1H) ， 3. 65—3. 55 (m， 4H)，
3. 18(s，3H) ，2. 60(t，2H)。 LC-MS (方法6) :Rt = 1. 96min MS(ESIpos) :m/z = 518(M+H+) + 實(shí)施例9 5-氯-N- {[ (5S) _3_ {4_ [3- (2-羥乙基)_2_氧代吡啶_1 (2H)-基]-3-丙基苯
基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5_基]甲基}噻吩-2_甲酰胺<formula>formula see original document page 61</formula>
將450毫克(1.65毫摩爾)來自實(shí)施例47A的化合物溶于10毫升無水乙睛中，并 加入395毫克(1. 82毫摩爾)來自實(shí)施例1A的化合物和552毫克(2. 47毫摩爾)高氯酸 鎂。該混合物在室溫下攪拌3. 5小時(shí)。然后加入669毫克(4. 13毫摩爾)羰二咪唑和20 毫克(0. 16毫摩爾)4-二甲基氨基吡啶，且混合物在回流下加熱3小時(shí)。在室溫下18小時(shí) 后，加入10毫克(0. 08毫摩爾)4- 二甲基氨基吡啶，且混合物在6(TC攪拌6小時(shí)。然后將 混合物加入至100毫升水中并用50毫升乙酸乙酯稀釋。在相分離后，含水相用50毫升乙 酸乙酯提取兩次。合并的有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液洗滌，以硫酸鈉干燥并隨后在減壓下濃 縮。殘余物使用乙腈/水混合物通過制備HPLC提純。這產(chǎn)生28毫克(理論值的3% )所需產(chǎn)物。 力-NMR (400MHz ， DMS0_d6， S /卯m) : S = 8. 98 (t， 1H) ， 7. 70 (d， 1H) ， 7. 54-7. 45 (m，2H) ， 7. 40-7. 31 (m， 2H) ， 7. 23—7. 17 (m， 2H) ， 6. 25 (t， 1H) ， 4. 90—4. 81 (m， 1H) ， 4. 22 (dd， 1H)，3. 92-3. 85 (m， 1H) ， 3. 65—3. 50 (m， 4H) ， 2. 62—2. 58 (m， 2H) ， 2. 28 (t， 2H) ， 1. 50—1. 32 (m， 2H)，0. 77(t，3H)。 HPLC(方法2) :Rt = 4. llmin
MS(DCI， m/z) = 516(M+H) +
實(shí)施例10 5-氯-N- {[ (5S) _3_ {4_ [3_ (3_羥丙基)_2_氧代吡啶_1 (2H)-基]_3_甲基苯
基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5_基]甲基}噻吩-2_甲酰胺 將580毫克(2. 24毫摩爾)來自實(shí)施例50A的化合物溶于12. 7毫升無水乙睛中，并加入538毫克(2. 47毫摩爾)來自實(shí)施例1A的化合物和751毫克(3. 37毫摩爾)高氯酸鎂。該混合物在室溫下攪拌3. 5小時(shí)。然后加入437毫克(2. 69毫摩爾)羰二咪唑和27毫克(0. 23毫摩爾)4-二甲基氨基吡啶，且混合物在回流下加熱18小時(shí)。然后將混合物加入至100毫升水中并用50毫升乙酸乙酯提取三次。合并的有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液洗滌，以硫酸鈉干燥并隨后在減壓下濃縮。殘余物通過制備HPLC提純。這產(chǎn)生175毫克(理論值的16% )所需產(chǎn)物。 力-NMR(400MHz， DMS0_d6， S /卯m) : S = 8. 99 (t， 1H) ， 7. 70 (d， 1H) ， 7. 57-7. 47 (m，2H) ，7. 40-7. 31 (m，2H) ，7. 23(d， 1H) ，7. 20(d， 1H) ，6. 26(t， 1H) ，4. 90-4. 81 (m， 1H)，4. 46 (dd， 1H) ， 4. 22 (t， 1H) ， 3. 91—3. 85 (m， 1H) ， 3. 62 (t， 2H) ， 3. 42 (ddd， 2H) ， 3. 31 (s， 1H)，2. 48-2. 42 (m， 1H) ， 2. 01 (s， 3H) ， 1. 67 (ddd， 2H)。
HPLC(方法2) :Rt = 3. 92min
MS (DCI ， m/z) = 502 (M+H) +
實(shí)施例11 5-氯-N- [ ((5S) _3_ {4_ [3- (2-羥乙基)_2_氧代吡啶_1 (2H)-基]-3， 5_ 二甲基苯基}-2-氧代-1，3-噁唑烷-5_基)甲基]噻吩-2_甲酰胺
將660毫克(0. 891毫摩爾)來自實(shí)施例56A的化合物溶于20毫升THF中，并加 入512毫克(1.96毫摩爾)四丁基氟化銨。在l小時(shí)后，將混合物在減壓下濃縮至干。殘余 物通過色譜法在硅膠上提純(流動(dòng)相二氯甲烷/甲醇10 : 1;1%三乙胺)。這產(chǎn)生396 毫克(理論值的85% )所需產(chǎn)物。 力-畫R(400MHz， DMS0-d6， S/ppm) : S = 8. 98 (t， 1H) ， 7. 69 (d， 1H) ， 7. 42 (dd， 1H) ， 7. 38 (d， 1H) ， 7. 25 (dd， 1H) ， 7. 19 (d， 1H) ， 6. 29 (t， 1H) ， 4. 90—4. 81 (m， 1H) ， 4. 60 (t， 1H)， 4. 20 (t， 1H) ， 3. 86 (dd， 1H) ， 3. 64—3. 52 (m， 4H) ， 2. 62 (t， 2H) ， 1. 95 (s， 6H)。
HPLC(方法1) :Rt = 3. 92min
MS(ESIpos) :m/z = 502(M+H) +
B.藥理學(xué)活性的評(píng)估 本發(fā)明化合物用于治療血栓栓塞病癥的適合性可使用下列測(cè)定體系展現(xiàn) a)測(cè)試描述(體外) a. 1)在緩沖液中因子Xa抑制的測(cè)量 為了測(cè)定上列物質(zhì)的因子Xa抑制，構(gòu)造生物測(cè)試體系，其中因子Xa底物的轉(zhuǎn)變被 用于測(cè)定人因子Xa的酶活性。在此，因子Xa從肽底物分裂氨基甲基香豆素，熒光測(cè)量該物 質(zhì)。所述測(cè)定在微量滴定板中實(shí)施。 在22t:，將待測(cè)試物質(zhì)以不同濃度溶于二甲基亞砜中并用人因子Xa(1.3nmo1/1， 溶于50毫摩爾/升Tris緩沖液[C， C， C-三(羥甲基)氨基甲烷]、100毫摩爾/升氯化 鈉、5毫摩爾/升氯化鈣、0. 1XBSA[牛血清白蛋白]中，pH7.4)培養(yǎng)30分鐘。然后加入底 物(來自Bachem公司的5微摩爾/升Boc-Ile-Glu-Gly-Arg-AMC)。在培養(yǎng)30分鐘后，在 360納米波長(zhǎng)激發(fā)樣品并在460納米測(cè)量發(fā)射。將具有測(cè)試物質(zhì)的試驗(yàn)批次測(cè)量的發(fā)射與 沒有測(cè)試物質(zhì)的對(duì)照批料(僅有二甲基亞砜代替處于二甲基亞砜中的測(cè)試物質(zhì))相比較并 由濃度/活性關(guān)系計(jì)算ICs。值。
a. 2)緩沖液中凝血酶抑制的測(cè)量 為了測(cè)定上列物質(zhì)的凝血酶抑制，構(gòu)造生物測(cè)試體系，其中凝血酶底物的轉(zhuǎn)變被 用于測(cè)定人凝血酶的酶活性。在此，凝血酶從肽底物分裂氨基甲基香豆素，熒光測(cè)量該物 質(zhì)。所述測(cè)定在微量滴定板中實(shí)施。 在22t:，將待測(cè)試物質(zhì)以不同濃度溶于二甲基亞砜中并用人凝血酶(0.06nmo1/ l，溶于50毫摩爾/升Tris緩沖液[C，C，C-三(羥甲基)氨基甲烷]、100毫摩爾/升氯化 鈉、0. 1XBSA[牛血清白蛋白]中，pH7.4)培養(yǎng)15分鐘。然后加入底物(來自Bachem公 司的5微摩爾/升Boc-Asp (OBzl) -Pro-Arg-AMC)。在培養(yǎng)30分鐘后，在360納米波長(zhǎng)激發(fā) 樣品并在460納米測(cè)量發(fā)射。將具有測(cè)試物質(zhì)的試驗(yàn)批次測(cè)量的發(fā)射與沒有測(cè)試物質(zhì)的對(duì) 照批料(僅有二甲基亞砜代替處于二甲基亞砜中的測(cè)試物質(zhì))相比較并由濃度/活性關(guān)系 計(jì)算ICs。值。 a.3)選擇性的測(cè)定 為了展現(xiàn)所述物質(zhì)對(duì)于凝血酶和因子Xa抑制的選擇性，檢驗(yàn)測(cè)試物質(zhì)對(duì)其它 人絲氨酸蛋白酶的抑制，例如對(duì)因子XIIa、因子XIa、胰蛋白酶和纖溶酶。為了測(cè)定因子 Xlla(10nmo1/升，來自Kordia)、因子XIa(O. 4nmo1/升，來自Kordia)、胰蛋白酶(83mU/毫 升，來自Sigma)和纖溶酶(0. l微克/毫升，來自Kordia)的酶活性，將這些酶溶解(50毫摩
63爾/升的Tris緩沖液[C， C， C-三(羥甲基)氨基甲烷]、100毫摩爾/升的氯化鈉、0. 1% BSA[牛血清白蛋白]、5毫摩爾/升的氯化f丐，pH7.4)并用處于二甲基亞砜中的不同濃度 的測(cè)試物質(zhì)以及用不含測(cè)試物質(zhì)的二甲基亞砜培養(yǎng)15分鐘。然后通過添加適當(dāng)?shù)牡孜镩_ 始酶促反應(yīng)(對(duì)于因子XIIa，來自Bachem的5 y mol/1的H-Pro-Phe-Arg-AMC ;對(duì)于胰蛋 白酶，來自Bachem的5 ii mol/1的Boc-Ile-Glu-Gly-Arg-AMC ;對(duì)于因子XIa，來自Bachem 的5 ii mol/1的Boc-Glu(OBzl)-Ala-Arg-AMC ;對(duì)于纖溶酶，來自Bachem的50 ii mol/1的 MeOSuc-Ala-Phe-Lys-AMC)。在22°C 30分鐘的培養(yǎng)時(shí)間后，測(cè)量熒光(激發(fā)360納米，發(fā) 射460納米)。將具有測(cè)試物質(zhì)的試驗(yàn)批次測(cè)量的發(fā)射與不含測(cè)試物質(zhì)的對(duì)照批料(僅有 二甲基亞砜代替處于二甲基亞砜中的測(cè)試物質(zhì))相比較，并由濃度/活性關(guān)系計(jì)算IC5。值。
a. 4)血漿樣品中可能的抑制劑的因子Xa抑制活性的測(cè)定 為了測(cè)定血漿樣品中因子Xa的抑制，通過來自響尾蛇毒素的蛋白酶活化血漿中 存在的因子X。然后通過添加顯色底物測(cè)量可能的抑制劑的因子Xa活性或其抑制。
將不同濃度的待測(cè)試物質(zhì)溶于二甲基亞砜中并與來匹盧定(Refludan)水溶液 (10微克/毫升)混合。在透明96孔平底板中，將30微升檸檬酸鹽血漿(Oct即harma)與 IO微升底物稀釋液混合。然后，加入20微升響尾蛇毒素(拉塞爾蝰蛇毒(RVV) ;RVV試劑 Pentapharm 121-06，最終濃度0. 6mU)在氯化f丐水溶液緩沖液(氯化f丐的最終濃度0. 05M) 的溶液或20微升不含RVV試劑的氯化鈣水溶液(氯化鈣的最終濃度O. 05M)(作為未激發(fā)樣 品的參照)。在添加20微升ChromozymX底物(最終濃度1. 6毫摩爾/升，Bachem L-1565, 在水中稀釋)之后，在20分鐘期間內(nèi)使用405納米的測(cè)量濾光片在SpectraFluor Reader 中每分鐘測(cè)量樣品。在達(dá)到最大信號(hào)的約70% (大約12分鐘)時(shí)測(cè)定ICs。值。
來自該測(cè)試的代表性活性數(shù)據(jù)列于下表1中
表1
實(shí)施例編號(hào)IC50[nM]
221
670
8167
1040 a. 5)血漿樣品中可能的抑制劑的凝血酶抑制活性的測(cè)定 將不同濃度的待測(cè)試物質(zhì)溶于二甲基亞砜中并由水稀釋。在白色96孔平底板中， 將20微升物質(zhì)稀釋液與20微升的Ca緩沖液(200mMH印es+560mM氯化鈉+10mM氯化牽丐 +0. 4% PEG)中的Ecarin溶液(Ecarin試劑，來自Sigma E_0504，每批料最終濃度20mU) 或與20微升Ca緩沖液(作為未激發(fā)對(duì)照)混合。進(jìn)一步地，加入20微升熒光凝血酶底 物(來自Bachem公司1-1120，最終濃度50微摩爾/升)和20微升擰檬酸鹽血槳(來自 Octapharma公司)并徹底均化。在20分鐘期間內(nèi)在SpectraFluorplus Reader中使用360 納米的激發(fā)濾光片和465納米的發(fā)射濾光片每分鐘測(cè)量所述板。在達(dá)到最大信號(hào)的大約
64分鐘)時(shí)測(cè)定IC5。值。 來自該測(cè)試的代表性活性數(shù)據(jù)列于下表2中 表2
實(shí)施例編號(hào)IC50[nM]
2198
6186
816
1074 a. 6)凝血酶生成測(cè)定(凝血酶生成圖(Thrombogram)) 測(cè)試物質(zhì)對(duì)凝血酶生成圖(根據(jù)Hemker的凝血酶生成測(cè)定)的影響在人血漿(來 自O(shè)ctapharma公司的Octaplas )中體外測(cè)定。在根據(jù)Hemker 的凝血酶生成測(cè)定中， 通過測(cè)量底物I-1140(Z-Gly-Gly-Arg-AMC， Bachem)的熒光分裂產(chǎn)物測(cè)定凝固血漿中凝血 酶的活性。使用來自Thrombinoscope公司的試劑(PPP試劑30pM重組體組織因子，HEPES 中的24iiM磷脂)來起動(dòng)凝固反應(yīng)。所述反應(yīng)在不同濃度的測(cè)試物質(zhì)或相應(yīng)溶劑的存在下 實(shí)施。此外，使用來自Thrombinoscope公司的凝血酶校準(zhǔn)器，其酰胺分解活性是計(jì)算血槳 樣品中的凝血酶活性所需要的。 所述測(cè)試根據(jù)制造商(Thrombinoscope BV)的說明書實(shí)施4微升測(cè)試物質(zhì)或溶 劑，76微升血漿和20微升PPP試劑或凝血酶校準(zhǔn)器在37t:培養(yǎng)5分鐘。在添加20微升的 在20mM H印es中的2. 5mM凝血酶底物、60mg/mLBSA、 102mM氯化鈣之后，在120分鐘期間內(nèi) 每20秒測(cè)量凝血酶生成。使用來自Thermo Electron公司的配備390/460納米濾光片對(duì) 和分配器的熒光計(jì)(Fluoroskan Ascent)實(shí)施測(cè)量。使用Thrombinoscope軟件，計(jì)算凝血 酶生成圖并圖形地呈現(xiàn)。計(jì)算的是下列參數(shù)滯后時(shí)間、到達(dá)峰值的時(shí)間、峰值、ETP(內(nèi)源 性凝血酶有效性)和起動(dòng)尾部(starttail)。
a. 7)抗凝固活性的測(cè)定 測(cè)試物質(zhì)的抗凝固活性在人血漿、兔子血漿和大鼠血漿中體外測(cè)定。為此，以檸檬 酸鈉/血液的1/9混合比抽出血液，使用0. 11摩爾濃度的檸檬酸鈉溶液作為接收體。在血 液已經(jīng)抽出之后，立即將其徹底地混合并在大約4000g離心15分鐘。移液管移走上層清液。
在不同濃度的測(cè)試物質(zhì)或相應(yīng)溶劑存在下，使用商售測(cè)試試劑盒(來自 Boehringer Mannheim的Neoplastin 或 來 自 Instrumentation Laboratory的 Hemoliance RecombiPlastin)測(cè)定前凝血酶時(shí)間(PT，同義詞凝血激酶時(shí)間，快速測(cè) 試)。在37t:用血漿培養(yǎng)測(cè)試化合物3分鐘。然后通過添加凝血激酶起動(dòng)凝固，并測(cè)定凝 固出現(xiàn)時(shí)的時(shí)間點(diǎn)。測(cè)定造成前凝血酶時(shí)間加倍的測(cè)試物質(zhì)的濃度。 在不同濃度的測(cè)試物質(zhì)或相應(yīng)溶劑存在下，使用商售測(cè)試試劑盒(來自Roche公 司的凝血酶試劑)測(cè)定凝血酶時(shí)間(TT)。在37t:用血漿培養(yǎng)測(cè)試化合物3分鐘。然后通 過添加凝血酶試劑起動(dòng)凝固，并測(cè)定凝固出現(xiàn)時(shí)的時(shí)間。測(cè)定造成凝血酶時(shí)間加倍的測(cè)試
65物質(zhì)的濃度。 在不同濃度的測(cè)試物質(zhì)或相應(yīng)溶劑存在下，使用商售測(cè)試試劑盒(來自Roche公 司的PTT試劑)測(cè)定活化部分凝血激酶時(shí)間(APTT)。在37t:用血槳和PTT試劑(腦磷脂， 高嶺土)培養(yǎng)測(cè)試化合物3分鐘。然后通過添加25mM氯化鈣起動(dòng)凝固，并測(cè)定凝固出現(xiàn)時(shí) 的時(shí)間。測(cè)定造成APTT加倍的測(cè)試物質(zhì)的濃度。 [O792]a. 8)凝血彈性描記法(凝血彈性圖) 借助于來自Pent即harm公司及其附件、杯子和針的凝血彈性描繪器R0TEM實(shí)施凝 血彈性描記法。在預(yù)先抽出至來自Sarstedt公司的檸檬酸鈉Monovettes中的全血中實(shí)施 測(cè)量。將Monovette中的血液使用振蕩器保持運(yùn)動(dòng)并在37t:預(yù)培養(yǎng)30分鐘。制備氯化鈣 在水中的2M原液。將其由0.9%的氯化鈉水溶液稀釋1 : 10。對(duì)于所述測(cè)量，起初將20 微升的該200mM氯化鈣溶液加入所述杯子中(氯化鈣最終濃度12. 5mM)。加入3. 2微升物 質(zhì)或溶劑。通過添加300微升全血起始測(cè)量。在所述添加后，使用移液管尖端將混合物略 略吸入移液管并在不產(chǎn)生氣泡的情況下再次釋放。所述測(cè)量在2. 5小時(shí)時(shí)期內(nèi)實(shí)施或者當(dāng) 纖維蛋白溶解出現(xiàn)時(shí)停止。為了進(jìn)行評(píng)估，測(cè)定下列參數(shù)CT(凝固時(shí)間/[秒])，CFT(凝 塊形成時(shí)間/[秒])，MCF(最大凝塊硬度/[毫米])和a角[° ]。每3秒測(cè)定測(cè)量點(diǎn)并 圖形地表示，y軸為MCF[毫米]而x軸為時(shí)間[秒]。
a. 9)血栓結(jié)合的凝血因子凝血酶和因子Xa的抑制 在由抗凝血?jiǎng)﹩?dòng)治療之前、在治療中斷期間或即使在治療時(shí)形成的血液凝塊包 含大量凝血因子，其可能有利于發(fā)展血栓形成。這些凝血因子牢固地結(jié)合至所述血栓且不 能被沖洗掉。在某些臨床情況中，這可能導(dǎo)致患者出現(xiàn)危險(xiǎn)。在以下實(shí)施的測(cè)試中，能檢驗(yàn) 在人血栓中的生物(促凝血的(prokoagulatorisch))活性的凝血酶和因子Xa 二者。
體外形成的血栓 從人血槳體外形成血栓并檢驗(yàn)結(jié)合的凝血因子凝血酶和因子Xa的活性。為此， 將300微升血漿與30微升脂囊泡和30微升氯化鈣水溶液在48孔MTP板中混合并培養(yǎng)30 分鐘。該步驟及其后步驟在37t:實(shí)施并具有恒定攪動(dòng)(300轉(zhuǎn)/分)。將形成的血栓轉(zhuǎn)移 至新的48孔MTP板中并在10分鐘時(shí)期內(nèi)用0. 9%的氯化鈉溶液洗滌兩次，在洗滌步驟過 程中將所述血栓輕輕地抹在濾紙上。將血栓轉(zhuǎn)移至緩沖液B(Owens VeronalBuffer， 1 % BSA)中并培養(yǎng)15分鐘，輕輕地抹在濾紙上并在處于緩沖液B中的不同濃度的測(cè)試物質(zhì)中 培養(yǎng)30分鐘。然后如上所述洗滌凝塊兩次。輕抹所述血栓并轉(zhuǎn)移至緩沖液D(240微升 Owren' s Veronal Buffer, 1 % BSA和15. 6mM氯化f丐)中并在有或者沒有0. 6 ii M凝血酶 原的情況下培養(yǎng)45分鐘。通過添加75微升的1% EDTA溶液停止反應(yīng)。在緩沖液A(7. 5mM Na2EDTAX2H20，175mM氯化鈉，lX BSA， pH8. 4)中的血栓中或在來自最后步驟的上層清液 中分別測(cè)量凝血酶活性。為此，以50iiM的最終濃度使用底物1-1120，并在熒光板讀數(shù)器 (360/465nm)中測(cè)量所得熒光。 該血栓結(jié)合的凝血酶的活性不能通過治療相關(guān)濃度的選擇性因子Xa抑制劑抑 制。相反，其能夠用雙重因子1Ia/因子Xa抑制劑或因子IIa參考抑制劑抑制。
在添加凝血酶原后，如果存在血栓結(jié)合的因子Xa (凝血酶原酶復(fù)合物)，則形成新 的凝血酶，其通過熒光底物檢測(cè)。該重新開始的凝血酶形成不能通過純凝血抑制劑阻止；但 是，其能夠通過雙重因子Ila/因子Xa抑制劑或通過選擇性因子Xa參考抑制劑抑制。
所述血栓結(jié)合的凝血酶活性的生物活性通過添加熒光標(biāo)記的纖維蛋白原測(cè)試，所述熒光標(biāo)記的纖維蛋白原通過活性凝血酶轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白并與血栓結(jié)合。為此，如上所述形成血栓并在250微升用Alexa488標(biāo)記的纖維蛋白原溶液(100微克/毫升)和30微升的100mM氯化鈣水溶液(有或者沒有不同濃度的測(cè)試物質(zhì))中培養(yǎng)。在熒光板讀數(shù)器中在合適的波長(zhǎng)測(cè)量上層清液的熒光。此外，每15分鐘洗滌血栓四次并通過熒光顯微鏡評(píng)估。來自上層清液的熒光的降低和血栓熒光的增加能夠通過雙重因子Ila/因子Xa抑制劑抑制，但不能通過因子Xa參考抑制劑抑制。 體內(nèi)形成心內(nèi)血柃(Intrakardiale Thromben)(患者材料) 用在心臟手術(shù)期間取自患者左心室的血栓重復(fù)實(shí)驗(yàn)。為此，將所述血栓解凍并分成多個(gè)塊(濕重10-100毫克)。根據(jù)規(guī)程，在反復(fù)洗滌后或不洗滌的情況下使用所述血栓，并類似于以上所述的方法使用所述底物1-1120 (最終濃度100i!M)測(cè)量凝血酶活性。
a. 10)具體診斷減弱的凝固以及內(nèi)源性毒血癥小鼠和大鼠中的器官功能
凝血iS /貓血隨， 凝血酶/抗凝血酶復(fù)合物(在下文稱為"TAT")是通過凝固活化內(nèi)源形成的凝血酶的量度。使用ELISA檢定(Enzygnost TAT micro,Dade-Behring)測(cè)定TAT。通過離心從檸檬酸鹽血液獲得血漿。將50微升TAT樣品緩沖液加入至50微升血漿中，并略略搖動(dòng)樣品以及在室溫下培養(yǎng)15分鐘。用抽吸濾出樣品，并用洗滌緩沖液(300微升/孔)洗滌孔3次。在洗滌期間，通過輕拍所述板除去液體。加入共軛溶液(100微升)，并在室溫下培養(yǎng)所述板15分鐘。抽吸樣品，并用洗滌緩沖液(300微升/孔)洗滌孔3次。然后加入顯色底物(100微升/孔)，將所述板在黑暗中在室溫下培養(yǎng)30分鐘，加入終止溶液(100微升/孔)并在492納米測(cè)量發(fā)色(S即hire板讀數(shù)器)。
器官功能的參數(shù) 測(cè)定多個(gè)參數(shù)，其能夠?qū)π枰玫降年P(guān)于通過給藥LPS實(shí)現(xiàn)的不同內(nèi)臟功能的限制，以及其能夠?qū)崿F(xiàn)測(cè)試物質(zhì)的治療效果提供結(jié)論。將檸檬酸鹽血液或任選的鋰/肝素血液離心，并從血漿測(cè)定所述參數(shù)。通常，測(cè)定下列參數(shù)肌酸酐(Kreatinin)、尿素、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、總膽紅素、乳酸脫氫酶(LDH)、總蛋白質(zhì)、總白蛋白和纖維蛋白原。所述值給出的指征涉及腎臟、肝臟、心血管系統(tǒng)和血管的功能。
炎癥的參數(shù) 由內(nèi)毒素觸發(fā)的炎癥反應(yīng)的程度能夠通過炎癥介質(zhì)的增加而檢測(cè)，所述炎癥介質(zhì)
例如白細(xì)胞介素(1、6、8和10)、腫瘤壞死因子a或血漿中的單核細(xì)胞趨化蛋白-1。為此，
可以使用ELISAs或luminex系統(tǒng)。 b)抗血栓形成活性的測(cè)定(體內(nèi)) b. 1)動(dòng)靜脈分流和出血模型(Kombi-模型大鼠) 使用仲丁硫巴比妥(Inactin) (150-180毫克/千克)麻醉重量300-350克的禁食雄性大鼠(菌株HSD CPB :WU)。在動(dòng)靜脈分流中根據(jù)ChristopherN. Berry等人，Br. J. Pharmacol. (1994) ， 113， 1209-1214描述的方法引發(fā)血栓形成。為此，暴露出左側(cè)頸靜脈和右側(cè)頸動(dòng)脈。通過使用長(zhǎng)度10cm的聚乙烯軟管(PE60)的體外旁路連接兩個(gè)血管。在中間，將該聚乙烯軟管連接至長(zhǎng)度3cm的另一聚乙烯軟管(PE160)，其包含粗糙化的尼龍絲線排列成環(huán)從而形成凝血酶原表面。使體外循環(huán)保持15分鐘。然后除去旁路并立即稱重
67具有血栓的尼龍絲線。在實(shí)驗(yàn)開始之前測(cè)定尼龍絲線自身的重量。 為了測(cè)定出血時(shí)間，在打開所述旁路循環(huán)后，立即使用刀片將所述大鼠尾部的尖
端剪短3毫米。然后將所述尾部放入保持在37t:溫度的生理鹽水中，并在15分鐘時(shí)期內(nèi)觀
察從切割處的出血。測(cè)定直至出血停止至少30秒時(shí)的時(shí)間(初始出血時(shí)間)、在15分鐘時(shí)
期內(nèi)的總出血時(shí)間(累積出血時(shí)間)和經(jīng)由收集的血紅蛋白光度測(cè)定失血量。 在體外循環(huán)建立且所述尾部尖端被剪短之前，將測(cè)試物質(zhì)給藥至清醒狀態(tài)的動(dòng)
物，要么經(jīng)由對(duì)側(cè)的頸靜脈靜脈內(nèi)作為單次推注給藥或者作為具有后續(xù)的持續(xù)輸注的推注
給藥，要么使用咽管經(jīng)口給藥。 c)藥物動(dòng)力學(xué)的測(cè)定(體內(nèi)) 為了測(cè)定體內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)，將測(cè)試物質(zhì)溶于各種配制劑(例如血漿、乙醇、DMSO、PEG400等等)或這些增溶劑的混合物并靜脈內(nèi)或經(jīng)口給藥于小鼠、大鼠、狗或猴子。靜脈內(nèi)給藥作為快速推注或作為輸注實(shí)施。給藥劑量為O. l-5毫克/千克。在至多26小時(shí)期間內(nèi)的不同時(shí)間間隔借助于導(dǎo)液管或作為犧牲血漿(T6tungsplasma)采集血液樣品。此外，在一些情況中，還采集器官、組織和尿樣品。測(cè)試樣品中物質(zhì)的定量測(cè)定使用在所討論的基質(zhì)中調(diào)節(jié)的校準(zhǔn)樣品進(jìn)行。樣品中存在的蛋白質(zhì)通過由乙腈或甲醇沉淀除去。然后將樣品通過HPLC使用反相柱在2300HTLC系統(tǒng)(Cohesive Technologies, Franklin, MA，USA)中分級(jí)。所述HPLC系統(tǒng)經(jīng)由渦輪離子噴射界面(Turbo Ion Spray Interface)連接至API 3000三重四極桿(Triple Quadropole)質(zhì)譜儀(Applied Biosystems，Darmstadt,Germany)。使用經(jīng)驗(yàn)證的動(dòng)力學(xué)分析程序分析血漿濃度_時(shí)間曲線。 通過體外測(cè)試在使用Caco-2細(xì)胞或在具體轉(zhuǎn)運(yùn)體中過表達(dá)的細(xì)胞的通量檢定中檢驗(yàn)用于轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的物質(zhì)的親合性(Troutman MD， Thakker DR， Pharm.Res.20(8)1210-1224(2003) ;Schwab D， Fischer H， Tabatabaei A， Poli S， Huwyler J，J. Med. Chem. 46,1716-1725(2003) ;Merino G， Jonker JW， Wage謹(jǐn)r E， Pulido匪，MolinaAJ， Alvarez AI， Schinkel AH， Drug Metab. Dispos. 33 (5) 614-618 (2005))。為此，將細(xì)胞在24或96孔濾板上培養(yǎng)4-15天。為了測(cè)定滲透，將HEPES緩沖液中的物質(zhì)頂端地(A)或者底部地(B)加入至細(xì)胞中，并將混合物培養(yǎng)2小時(shí)。在0小時(shí)和2小時(shí)后，從順式-和反式_隔室取出樣品并通過LC-MS/MS分析。使用由Schwab等人出版的公式計(jì)算P即p值。當(dāng)P即p(B-A)/P即p(A-B)比率為> 2或< 0. 5時(shí)，將物質(zhì)分類為活性轉(zhuǎn)運(yùn)。[OS18] d)內(nèi)源毒血癥活性的測(cè)定(體內(nèi)) 使用大鼠或小鼠實(shí)施檢查。在小鼠模型(NMRI，雄性)中，腹膜內(nèi)注射50毫克/千克LPS(大腸桿菌血清型055:B5， Sigma-Aldrich)。在經(jīng)由尾靜脈靜脈內(nèi)注射、皮下注射、腹膜內(nèi)注射或使用胃管經(jīng)口給藥之前至多一小時(shí)，給藥所述測(cè)試物質(zhì)。在LPS給藥四小時(shí)后，麻醉(ketavet/Rompun)動(dòng)物并通過手術(shù)打開腹部。將檸檬酸鈉溶液(3. 2% w/v)(公式以克計(jì)的體重A3乘以100微升)注入到底腔靜脈中，并在30秒后采集血液樣品(大約1毫升)。從所述血液測(cè)定多個(gè)參數(shù)，例如細(xì)胞血液組分(特別是紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板)、乳酸濃度、凝固活化(TAT)或者器官功能障礙或器官衰竭和凋亡的參數(shù)。
e)在大鼠上用于DIC測(cè)試的方法描述 將LPS(大腸桿菌055B5，由Sigma制造，溶于PBS中)以250微克/千克的劑量靜脈內(nèi)給藥于雄性Wistar大鼠的尾靜脈中(給藥體積2毫升/千克)。將測(cè)試物質(zhì)溶
68于PEG400/H20 60 % /40 %中并在LPS注射之前30分鐘經(jīng)口給藥(給藥體積5毫升/千克)。在LPS注射后l、5或4小時(shí)，通過穿剌心臟對(duì)處于終端麻醉(Trapanal 100毫克/千克i. P.)的動(dòng)物抽血，并獲得用于測(cè)定纖維蛋白原、PT、 TAT和血小板數(shù)目的檸檬酸鹽血漿。任選地，獲得血清用于測(cè)定肝臟酶、腎功能參數(shù)和細(xì)胞活素(Cytokine)。使用可商購的ELISAs(R&D Systems)測(cè)定TNFa和IL_6。 還可測(cè)量器官功能的直接參數(shù)，例如左和右心室壓、動(dòng)脈壓、排尿、腎灌注和血液氣體以及酸/堿狀態(tài)。 C.藥物組合物的示例性實(shí)施方案 本發(fā)明化合物能夠以以下方式轉(zhuǎn)變?yōu)樗幬镏苿? 片劑 組成 100毫克的本發(fā)明化合物、50毫克的乳糖(一水合物)、50毫克的玉米淀粉(天然的)，10毫克的聚乙烯吡咯烷酮(PVP25)(來自BASF, Ludwigshafen，德國)以及2毫克的
硬脂酸鎂。 片劑重212毫克。直徑8毫米，曲率半徑12毫米。
制備 將本發(fā)明化合物、乳糖和淀粉的混合物由PVP在水中的5%溶液(m/m)造粒。顆粒被干燥并隨后與硬脂酸鎂混合5分鐘。使用常規(guī)壓片機(jī)壓制該混合物(參見上文以規(guī)格化所述片劑)。作為指南，將15kN的壓縮力用于所述壓制。
可口服給藥的懸浮液
組成iooo毫克的本發(fā)明化合物、1000毫克的乙醇(96% ) 、400毫克的Rhodige產(chǎn)(來
自FMC公司的黃原膠，Pennsylvania, USA)和99克的水。 10毫升口服懸浮液相當(dāng)于單劑量的本發(fā)明化合物100毫克。 制備 將所述Rhodigel懸浮在乙醇中，并將本發(fā)明化合物加入至懸浮液中。在攪拌下加入水。將混合物攪拌大約6小時(shí)直至所述Rhodigel完全溶漲。
可口服給藥的溶液
組成 500毫克的本發(fā)明化合物、2. 5克的聚山梨酸酯和97克的聚乙二醇400。 20克口服溶液相當(dāng)于單劑量的本發(fā)明化合物100毫克。
制造: 在攪拌下將本發(fā)明化合物懸浮在聚乙二醇和聚山梨酸酯的混合物中。持續(xù)攪拌直
至本發(fā)明化合物完全溶解。 靜脈內(nèi)溶液 將本發(fā)明化合物以低于飽和溶解度的濃度溶解在生理學(xué)可接受的溶劑中(例如等滲氯化鈉溶液、葡萄糖溶液5X和/或PEG 400溶液30%)。所述溶液通過過濾滅菌并填充至無菌和無熱原的注射容器中。
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權(quán)利要求
下式的化合物，其中n表示數(shù)字0、1、2或3，R1表示氯，三氟甲氧基，甲基，乙基，正丙基，甲氧基，甲氧基甲基或乙氧基甲基，R2表示氫或甲基，或其鹽、其溶劑合物或其鹽的溶劑合物中的一種。F2008800207851C00011.tif
2. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的化合物，其特征在于 n表示數(shù)字0、1或2，R1表示氯，三氟甲氧基，甲基，正丙基，甲氧基或甲氧基甲基， ^表示氫或甲基，或其鹽、其溶劑合物或其鹽的溶劑合物中的一種。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的化合物，其特征在于 n表示數(shù)字0、1或2，R1表示甲基，甲氧基或甲氧基甲基， R2表示氫，或其鹽、其溶劑合物或其鹽的溶劑合物中的一種。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一所述的化合物，其特征在于 n表示數(shù)字1或2，R1表示甲基， R2表示氫，或其鹽、其溶劑合物或其鹽的溶劑合物中的一種。
5. 用于制備根據(jù)權(quán)利要求l所述的式(I)的化合物或者其鹽、其溶劑合物或其鹽的溶 劑合物中的一種的方法，其特征在于[A]在第一步驟中，使下式的化合物與下式的化合物反應(yīng)<formula>formula see original document page 3</formula>在該式中n、 R1和R2具有權(quán)利要求1中給出的含義， 以產(chǎn)生下式的化合物，<formula>formula see original document page 3</formula>在該式中n、 R1和R2具有權(quán)利要求1中給出的含義，且在第二步驟中，在光氣或光氣等同物存在下環(huán)化以產(chǎn)生式(I)的化合物 或者[B]下式的化合物HO在該式中n、R1并R2具有權(quán)利要求1中給出的含義， 與下式的化合物反應(yīng)<formula>formula see original document page 3</formula>射x表示鹵素，優(yōu)選溴或者氯，或者羥基。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一所述的化合物，用于治療和/或預(yù)防疾病。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一所述的化合物用于制備用來治療和/或預(yù)防疾病的藥物的 用途。
8. 根據(jù)權(quán)利要求l-4中任一所述的化合物用于制備用來治療和/或預(yù)防血栓栓塞病癥 的藥物的用途。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一所述的化合物用于在體外防止血液凝固的用途。
10. 藥物，其包括根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一所述的化合物結(jié)合惰性無毒的藥學(xué)上合適 的助劑。
11. 藥物，其包括根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一所述的化合物結(jié)合其它活性成分。
12. 根據(jù)權(quán)利要求10或11所述的藥物，用于治療和/或預(yù)防血栓栓塞病癥。
13. 用于在人和動(dòng)物中治療和/或預(yù)防血栓栓塞病癥的方法，使用抗凝固有效量的至 少一種根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一所述的化合物、根據(jù)權(quán)利要求10-12中任一所述的藥物或 根據(jù)權(quán)利要求7或8獲得的藥物。
14. 用于在體外防止血液凝固的方法，其特征在于加入抗凝固有效量的根據(jù)權(quán)利要求 l-4中任一所述的化合物。
15. 根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一所述的化合物用于制備用來治療和/或預(yù)防肺動(dòng)脈高血 壓的用途。
16. 根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一所述的化合物用于制備用來治療和/或預(yù)防下列病癥的 藥物的用途膿毒癥、全身性炎性綜合征(SIRS)、膿毒性器官功能障礙、膿毒性器官衰竭和 多器官衰竭、急性呼吸困難綜合征(ARDS)、急性肺損傷(ALI)、膿毒性休克、DIC("彌漫性血 管內(nèi)凝血")和/或膿毒性器官衰竭。
17. 如權(quán)利要求l-4中任一所定義的化合物，用于治療和/或預(yù)防血栓栓塞病癥的方法中。
全文摘要
本發(fā)明涉及新的取代噁唑烷酮類(Oxazolidinone)，涉及它們的制備方法，涉及它們用于治療和/或預(yù)防疾病的用途和它們用于制備用來治療和/或預(yù)防疾病(特別是血栓栓塞病癥)的藥物的用途。
文檔編號(hào)C07D413/14GK101743244SQ200880020785
公開日2010年6月16日 申請(qǐng)日期2008年6月7日 優(yōu)先權(quán)日2007年6月20日
發(fā)明者C·格德斯, D·蘭, E·迪特里克-溫根羅思, G·馮德根費(fèi)爾德, H·希羅克, J·斯特拉斯伯格, K·芒特, M·J·格諾思, M·鮑澤, S·阿勒黑利根, S·黑特邁耶, U·薩特曼, U·雷斯特 申請(qǐng)人:拜耳先靈制藥股份公司