專(zhuān)利名稱(chēng)：一種新型γ-醇溶蛋白基因的核酸序列及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物基因工程技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及到一種新型小麥Y-醇溶蛋白基 因的核酸序列，以及基于該序列通過(guò)染色體工程或轉(zhuǎn)基因方法改良小麥品質(zhì)的應(yīng) 用。
背景技術(shù)：
與其它谷物相比，小麥在人類(lèi)的食譜中扮演著重要的角色，人們利用小麥面 粉的特性已烹制出各種各樣的食物。小麥面粉的營(yíng)養(yǎng)和加工品質(zhì)主要由種子儲(chǔ)藏 蛋白決定，它們是人體攝取蛋白質(zhì)的主要來(lái)源之一。種子儲(chǔ)藏蛋白主要由谷蛋白 和醇溶蛋白組成，醇溶蛋白大約占儲(chǔ)藏蛋白的40-50%。分子生物學(xué)研究表明根 據(jù)一級(jí)結(jié)構(gòu)的差異可將醇溶蛋白分為a， Y和co三種類(lèi)型。研究發(fā)現(xiàn)二倍體、四 倍體和六倍體小麥及近緣的山羊草物種中均有這三種蛋白。
Y-醇溶蛋白基因位于1號(hào)染色體的G//-7區(qū)域，它們?cè)谛←溁蚪M中緊密連 鎖，并聚集成簇。Y-醇溶蛋白的一級(jí)結(jié)構(gòu)(圖l)包括一個(gè)19個(gè)殘基的信號(hào)肽， N末端，長(zhǎng)度變異很大的重復(fù)區(qū)，包含六個(gè)半胱氨酸殘基的非重復(fù)區(qū)，谷氨酰胺 富集區(qū)和一個(gè)包含兩個(gè)半胱氨酸殘基的C末端區(qū)。
多肽的一級(jí)結(jié)構(gòu)決定蛋白質(zhì)的性質(zhì)，儲(chǔ)藏蛋白的結(jié)構(gòu)對(duì)面團(tuán)的流變力和食品 加工的許多方面起著重要作用。種子儲(chǔ)藏蛋白的兩大特征對(duì)面粉品質(zhì)起決定作 用(1)形成分子內(nèi)和分子間二硫鍵的半胱氨酸的數(shù)目和分布情況；(2)重復(fù)區(qū) 的特征。重復(fù)區(qū)中高密度的谷氨酰胺意味著有大量可形成氫鍵的-OH,這很大程 度上決定著蛋白質(zhì)彈性。Y-醇溶蛋白包含八個(gè)保守的半胱氨酸殘基，它們兩兩之 間形成分子內(nèi)二硫鍵。另外大約l/4的Y-醇溶蛋白包含奇數(shù)個(gè)半胱氨酸。這些醇 溶蛋白在形成分子內(nèi)二硫鍵后還有一個(gè)自由的-SH可參與形成分子間二硫鍵。當(dāng) 只有一個(gè)半胱氨酸殘基以供形成分子間二硫鍵時(shí)，儲(chǔ)藏蛋白聚合物的鏈狀延伸將 在該蛋白處終止，這種結(jié)構(gòu)將降低面粉品質(zhì)。當(dāng)有至少兩個(gè)半胱氨酸殘基以供形成分子間二硫鍵時(shí)，聚合物的將順利延伸，有利于形成高強(qiáng)度的面團(tuán)。
醇溶蛋白與面粉品質(zhì)的關(guān)系目前爭(zhēng)議很大，不同學(xué)者通過(guò)品質(zhì)測(cè)驗(yàn)分別得出 負(fù)相關(guān)、正相關(guān)甚至沒(méi)有關(guān)系的結(jié)論。之所以如此，很大程度上是因?yàn)榇既艿鞍?組成非，復(fù)雜且不容易純化，因此很有必要在分子水平上進(jìn)一步深入研究醇溶蛋 白。
本發(fā)明呈現(xiàn)的醇溶蛋白基因與已報(bào)道的所有基因有明顯不同，是優(yōu)異基因 資源。本發(fā)明通過(guò)本發(fā)明人長(zhǎng)期反復(fù)的對(duì)小麥醇溶蛋白編碼基因的詳細(xì)研究，首
次成功的獲得了一種新型Y-醇溶蛋白基因。迄今為止，還沒(méi)有相關(guān)的報(bào)道在國(guó)內(nèi) 外出版物上發(fā)表過(guò)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供了一種新型Y-醇溶蛋白的編碼基因序列和氨基酸序列。
為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下
本發(fā)明以圓維7」、麥AS2255 (7Hricww fwrg/(iww subsp. ,wrg/(iw加)，總DNA為 模板，根據(jù)NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)(http:〃www,ncbi.nlm.nih.gov)中已知丫-醇溶蛋白編碼 基因保守片段設(shè)計(jì)引物，利用PCR和分子克隆技術(shù)分離Y-醇溶蛋白基因，然后 將獲得的基因序列與NCBI上的Y-醇溶蛋白基因序列進(jìn)行多重比對(duì)并分析它們?cè)?一級(jí)結(jié)構(gòu)上的異同，結(jié)果表明我們克隆到一個(gè)新型y-醇溶蛋白基因，命名為
一種新型Y-醇溶蛋白的編碼基因序列(G//-"g",其核酸序列如下
1 ATGAAGACCT TACTCATCCT AACAATCCTT GCGATGGCAG
41 TAACCATCGG CACCGCCAAT ATGCAGGTCG ACCCTAGCGG
81 CCAAGTACAA TGGCCACAAC AACAACCAGT CCCGCTCCCT
121 CAGCAACCAT TCTCCCAGAA ACCACAACAA ACATTTCCCC
161 AACCCCAACA AACATTCCCA TTCCCCCATC AACCACAACA
201 ACAATTTCCC CAGCCTCAAC AACCACAACA ACAATTTCTC
241 CAGCCCCAAC AACCACAACA ACCATATCCC CAGCAACCAC
281 AACAACCATT CCCCCAGACT CAACAACCCC AACAACTATT
321 TCCCCAGTCC CAGCAACCAC AACAACCATA TCCCCAGCAA
3 61 CCACAACAAC CATTGTCCCA GACTCAACAA CCCCAACAAC 401 CAGCTCAATT GGAGGCGATC AGGTCATTGG TGTTGCAAAC 441 TCTTCCAACC ATGTGTAACG TGTATGTCCC ACCTGAGTGC
4 81 TCTATCATCA AGGCACCATT TGCCAGCATA GTCACCGGAA521 TTGGTGGTCA ATGA
以上序列為小麥Y-醇溶蛋白的編碼基因序列(G/z、g7)，運(yùn)用點(diǎn)突變的方法 可對(duì)結(jié)構(gòu)進(jìn)行改造，得到小麥Y-醇溶蛋白的編碼基因序列(G/!、g"的衍生序列， 該衍生序列包括新分離的具有與以上所述結(jié)構(gòu)同樣基本結(jié)構(gòu)的基因序列及使用 體外DNA操作技術(shù)通過(guò)堿基的置換、插入、缺失獲得的該基因序列的各種變構(gòu) 體。
根據(jù)小麥Y-醇溶蛋白的編碼基因序列(G//-和通用密碼子信息，得到 其推導(dǎo)的氨基酸序列，該序列如下
1 MKTLLILTIL AMAVT工GTAN MQVDPSGQVQ WPQQQPVPLP
41 QQPFSQKPQQ TFPQPQQTFP FPHQPQQQFP QPQQPQQQF!L 81 QPQQPQQPYP QQPQQPFPQT QQPQQLFTQS QQPQQPYPQQ
121 PQQPLSQTQQ PQQPAQLEAI RSLVLQTLPT MCNVYVPPEC 161 S工IKAPFASI VTG工GGQ
本發(fā)明的有益效果為
通過(guò)構(gòu)建G/f-"g7的原核或酵母表達(dá)載體，利用本領(lǐng)域共知的研究方法將
分別導(dǎo)入大腸桿菌和酵母中，然后純化該基因編碼的蛋白并將其添加到 面粉中改變面團(tuán)的品質(zhì)指標(biāo)。這一結(jié)果表明，該新型Y-醇溶蛋白基因的表達(dá)產(chǎn)物 能以分子間二硫鍵相互連接形成高分子量的聚合物，這是優(yōu)質(zhì)儲(chǔ)藏蛋白基因非常 重要的一個(gè)特征。而擁有該特征的基因通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)或者染色體工程的方法導(dǎo) 入小麥，能夠培育出品質(zhì)更好的小麥品種，這已是行業(yè)廣泛公知的技術(shù)。
本發(fā)明的測(cè)序結(jié)果表明G/f-是不同于已經(jīng)公布的所有Y-醇溶蛋白基因
的新的基因類(lèi)型。與其它已知Y-醇溶蛋白基因相比，它缺少非重復(fù)區(qū)和谷氨酰胺
富集區(qū)及6個(gè)半胱氨酸殘基(圖2和圖3)。體外表達(dá)分析表明G//-的兩個(gè)半 胱氨酸均可參與形成分子間二硫鍵(圖4)。這該序列特征顯示該基因的獨(dú)特之 處和導(dǎo)致優(yōu)質(zhì)的因素。


圖l:普通Y-醇溶蛋白模式結(jié)構(gòu)。信號(hào)肽、N末端、重復(fù)區(qū)、非重復(fù)區(qū)、谷
胺酰胺富集區(qū)和C-末端分別表示各個(gè)結(jié)構(gòu)域；S指代半胱氨酸，中間的連線(xiàn)表示
二硫鍵。
圖2:新型Y-醇溶蛋白模式結(jié)構(gòu)。信號(hào)肽、N末端、重復(fù)區(qū)和C-末端分別表示各個(gè)結(jié)構(gòu)域，s指代半胱氨酸。
圖3: G/f- g7與普通Y-醇溶蛋白氨基酸序列多重比對(duì)。星號(hào)指示半胱氨酸位置。
圖4: G/f-^7體外表達(dá)結(jié)果。從做到右依次是蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)、G/"ng/ (溶 液A,含有還原劑DTT)和G/i-wgJ (溶液B,沒(méi)有還原劑)。
具體實(shí)施例方式
以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)描述，但并非對(duì)本發(fā)明的限制，凡 依照本發(fā)明公開(kāi)內(nèi)容所作的任何本領(lǐng)域的等同替換，均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
實(shí)施例l:
1、 提取基因組DNA
采用CTAB法提取圓錐小麥AS2255的基因組DNA，提取步驟如下
(1) 取2克新鮮幼嫩葉片，液氮研磨成細(xì)粉后加預(yù)熱至65X:的2xCTAB提取液(2。/。 CTAB、 1.4MNaCl、 0.1 MTris-HCl PH8.0、 0.1M EDTAPH8.0,臨用前加2% p-巰基乙醇)15ml混勻；
(2) 65'C水浴30-45分鐘,其間輕搖混勻。冷卻至室溫后加等體積的氯仿異戊醇 (24: 1),輕輕混勻至上清液呈牛奶狀，4000rpm離心10分鐘。
(3) 取上清液，加等體積異丙醇，冰浴2小時(shí)沉淀DNA;
(4) 勾出DNA，用70%酒精洗2次，無(wú)水乙醇洗一次氣干DNA，溶于適量pH8.0 的l XTE溶液中。加入RNA酶至終濃度IOO pgAxl;
(5) IOOV恒定電壓下，1%瓊脂糖凝膠電泳30分鐘，檢測(cè)DNA濃度及質(zhì)量。
2、 根據(jù)已知相關(guān)序列的保守區(qū)域設(shè)計(jì)了以下引物
F: 5'墨CTTC AC AC A ACTAGAGC AC AAG -3' R: 5，陽(yáng)GATGAATCAGCTAAGCAACGATG-3'
3、 PCR擴(kuò)增
反應(yīng)體系如下DNA 100-150ng
dNTPs 100|_iM
引物Pi 5pmol
引物P2 5pmol ragp/i"聚合酶 1U10xPCR緩沖液
1.5mM
ddH20
加至終體積25^L
PCR反應(yīng)程序(1) 94 °C
4分鐘
(2) 94°C
45秒
(3) 57 °C
1分鐘
(4) 72°C
70秒
重復(fù)(2) — (4) 35次
(5) 72°C
10分鐘
PCR反應(yīng)在PTC-220型PCR儀(MJ Research, U.S.A.)中進(jìn)行。擴(kuò)增產(chǎn)物 在1%瓊脂糖凝膠上分離，130V恒定電壓電泳30分鐘。
4、 PCR產(chǎn)物回收和純化
使用r/朋取"的膠回收試劑盒，所有操作均按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。
5、 連接和轉(zhuǎn)化
使用7Mam的連接試劑盒將回收產(chǎn)物連接到PMD-18T載體，反應(yīng)體系如下 PMD-18T載體 0.5 pi (約25ng)
Solution I 4.75[jJ 回收PCR產(chǎn)物 加至終反應(yīng)體積10nl
16T:連接io小時(shí)
轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5a 感受態(tài)細(xì)胞的制備
(1 )取在無(wú)抗生素平板上生長(zhǎng)良好的DH5a單菌落，接種于2 pl LB液體培養(yǎng)基中；
(2) 取50(^l活化過(guò)夜的菌液于50ml LB液體培養(yǎng)基中，37'C振蕩培養(yǎng)至 OD600=0.3;
(3) 將菌液倒入50ml離心管中，冰浴放置IO分鐘；
(4) 在預(yù)冷至4。C的離心機(jī)中，4000ipm離心10分鐘后去掉上清液，收集菌體;
(5) 加入20ml冰冷的0.1MCaCl2于離心管中，均勻懸浮菌體后，冰浴中30分鐘；
(6) 4t:下，4000 rpm離心10分鐘后去掉上清液，收集菌體，加入2 ml冰冷的 0.1MCaCl2溶液均勻懸浮菌體后，放入冰中待用。轉(zhuǎn)化步驟如下
(1) 將連接產(chǎn)物加入200pl感受態(tài)細(xì)胞中，充分混勻置于冰上30分鐘；
(2) 42i:熱擊90秒，冰浴150秒后加入預(yù)熱至37'C的LB液體培養(yǎng)基1000 pl;
(3) 37。C振蕩(200rpm)培養(yǎng)45分鐘；
(4) 3000rpm離心10分鐘收集菌體；
(4) 將菌體均勻涂于含有氨芐青霉素(33 ^g/ml)的LB固體培養(yǎng)基平板上；
(5) 37t;培養(yǎng)箱中培養(yǎng)16小時(shí)。 6、陽(yáng)性克隆的篩選
(1) 挑取培養(yǎng)平板上生長(zhǎng)良好的白色單菌落，在含有氨芐青霉素(33pg/rnl)的 LB固體培養(yǎng)基平板上劃線(xiàn)，擴(kuò)大培養(yǎng)(37'C培養(yǎng)12小時(shí))；
(2) 挑取擴(kuò)大培養(yǎng)后的菌進(jìn)行PCR擴(kuò)增，反應(yīng)體系如下-
DNA
dNTPs 引物Pi
引物P2
r叫咖聚合酶
10xPCR緩沖液
Mg2+
ddH20
少許菌體 lOO^M 5 pmol 5 pmol 1U
1.5mM
加至終體積25pl;
(3) PCR反應(yīng)程序同前。擴(kuò)增產(chǎn)物在1%瓊脂糖凝膠上分離，IOOV恒定電壓電 泳30分鐘，檢測(cè)有無(wú)目的片段。
7、 序列測(cè)定與比較分析
隨機(jī)選取陽(yáng)性克隆進(jìn)行測(cè)序，序列測(cè)定由上海英俊公司完成，測(cè)序結(jié)果比較分析 釆用NCBI網(wǎng)址中的blast (http:〃www. ncbi.nlm.nib.gov/BLAST/)程序、MEGA 3.1和DNAman 5.2.2軟件進(jìn)行。
8、 G/f-唯7的體外表達(dá)
(1)依據(jù)所測(cè)定的基因序列，設(shè)計(jì)可擴(kuò)增整個(gè)基因編碼區(qū)除信號(hào)肽區(qū)域的PCR 引物，并在與基因N末端保守區(qū)結(jié)合部位的5'端添加限制性?xún)?nèi)切酶Mfel位點(diǎn)， 另一引物的5'端添加位點(diǎn)，引物序列如下P3 (Ndel-fo醒rd): ACACATATGAATATGCAGGTCGACCCTAGCG P4 (HindIII墨認(rèn)rse): TTCAAGCTTGATGAATCAGCTAAGCAACGATG;
(2) 使用PCR方法從質(zhì)粒中擴(kuò)增出目的基因片段，回收擴(kuò)增產(chǎn)物，方法同前;
(3) 對(duì)PCR產(chǎn)物和pET-30a質(zhì)粒載體進(jìn)行MM和扭ncffll的37。C過(guò)夜酶切；
(4) 對(duì)酶解后的PCR產(chǎn)物和pET-30a載體進(jìn)行回收，16° C過(guò)夜連接反應(yīng) 連接體系如下
pET-30a載體 4.35 pl
PCR回收產(chǎn)物 4.35pl
T4連接buffer lm
T4連接酶 350U;
(5) 連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化入DH5oc感受態(tài)細(xì)胞，在25pg/ml的卡那霉素平板上篩選， 挑選出陽(yáng)性克隆(使用引物P3和P4，步驟同前面擴(kuò)菌)，提取質(zhì)粒(7 "/7^"提 取質(zhì)粒試劑盒，操作步驟見(jiàn)說(shuō)明書(shū))，轉(zhuǎn)化入大腸桿菌BL21，在含25|ig/nil的卡 那霉素的平板上涂板；
(6) 取在平板上篩選到的單個(gè)菌落在2ml含25嗎/ml的卡那霉素的LB液體培 養(yǎng)基中過(guò)夜培養(yǎng)；
(7) 第2天將500^x1過(guò)夜的菌液加到50ml含25pg/ml的卡那霉素的LB液體培 養(yǎng)基中培養(yǎng)至OD600=0.6-1.0時(shí)加入IPTG至O.lmM誘導(dǎo)12小時(shí)；
(8) 8000r/min離心IO分鐘收集菌體;
(9) 加600^1水混勻菌體，凍融6次，然后加1400W無(wú)水乙醇6(TC水浴2小時(shí)；
(10) 8000r/min離心IO分鐘收集菌體；
(11) 取上清，加2倍體積1.5M NaCl冰浴4小時(shí)；
(12) 21000g離心IO分鐘，去上清，加500W 70%乙醇使沉淀溶解，再加2倍 體積1.5M NaCi冰浴4小時(shí)；
(13) 加lOOOpl水冰浴半小時(shí)；
(14) 8000r/mifi離心IO分鐘，去上清，加入溶液A或B溶解表達(dá)的蛋白；
(15) SDS-PAGE電泳分析
溶液A組成62.5mM Tris-HC1 (pH6.8)， 10% (v/v) glycerol, 2% (w/v) SDS, 0.002% (w/v) bromophenol blue, 1.5% (w/v) DTT;溶液B組成62.5mM Tris-HC1 (pH6.8), 10% (v/v) glycerol, 2% (w/v) SDS, 0.002% (w/v) broraophenol blue 9、 SDS-PAGE分析
分離膠(Resolving gel)緩沖液(2.5L):溶解378g Tris， 25g SDS， 95g硼酸, 加水定容至2.5L，pH值應(yīng)為8.9。
濃縮膠(Stacking gel)緩沖液1.0 M Tris-HCL, pH6.8,10%(W/V)SDS。
電泳緩沖液將分離膠緩沖液稀釋10倍
聚丙烯酰胺凝膠組成
濃縮膠(3%) 分離膠(10%)
40%丙烯酰胺，ml0.3752.5
2%甲叉雙丙烯酰胺，ml0.20.52
Resolving gel緩沖液，ml01
Stacking gel緩沖液，ml0.620
10%SDS (WAO， ml0.040
10% (W/V)過(guò)硫酸胺，ml0.050.09
TEMED， pi4.2
H20， ml3.75.9
以r"tom蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)作對(duì)照，恒壓150V電泳，待指示劑走出分離膠后，取 下膠染色15分鐘，用水脫震蕩脫色至條帶清晰后，保存于固定液中，照相保存 SDS-PAGE結(jié)果。
染色液組成(1L): 650ml蒸餾水、lg考馬斯亮藍(lán)R-250、 250ml異丙醇、 100ml冰醋酸；
脫色液組成(1L): 650 ml蒸餾水、250 ml異丙醇、100 ml冰醋酸； 固定液組成O L): 100 ml冰醋酸、900 ml蒸餾水。序列表.ST25
SEQUENCE LISTING
<110〉四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
<120> —種新型y-醇溶蛋白基因的核酸序列及其應(yīng)用 <130> 081129 〈160> 2
<170> Patentln version 3.3
<210> 1
<211> 535
<212〉 腿
<213〉 小麥屬(Triticum L.)
<400> 1
aatgaaga^ccttactcatcctaacaatccttgcgatggcagtaaccatcggC3CCgCC3360
tatgcaggtcg己ccctagcggccaagtacaatggccacaacaacaaccagtcccgctccc120
tcagcaaccattctcccagaaaccscaacaaacatttccccaaccccaa^caaacattccc180
attcccccataacaatttccccagcctcaaaacaatttct240
ccsgcccca3c犯ccac犯caaccatatcccceigc犯ccacgiac犯cca^tcccccagac300
ttCCCCdgtCccagcaaccEL360
ccattgtcccagactcaacaccagctcaattggaggcgat420
caggtxattggtgttgcaaactcttccaacg"tgtatg"tcccacctgagtg480
ctctatcatcaaggcaccatttgccagcatagtcaccggaattggtggtcaatga535
<210〉 2
〈211> 177
〈212〉 PRT
<213〉 小麥屬(Triticum L.)
<400〉 2
Met Lys Thr 1
Leu
Leu 5
lie Leu Thr lie
Leu Ala Met Ala Val Thr lie 10 15
Gly Thr Ala Asn Met Gin Val Asp Pro Ser Gly Gin Val Gin Trp Pro
20
25
30
Gin Gin Gin Pro Val Pro Leu Pro Gin Gin Pro Phe Ser Gin Lys Pro 35 40 45
Gin Gin Thr Phe Pro Gin Pro Gin Gin Thr Phe Pro Phe Pro His Gin 50 55 60
Pro Gin Gin Gin Phe Pro Gin Pro Gin Gin Pro Gin Gin Gin Phe Leu 65 70 75 80
Gin Pro Gin Gin Pro Gin Gin Pro Tyr Pro Gin Gin Pro Gin Gin Pro 85 90 95
Phe Pro Gin Thr Gin Gin Pro Gin Gin Leu Phe Pro Gin Ser Gin Gin
100
105
110
Pro Gin Gin Pro Tyr Pro Gin Gin Pro Gin Gin Pro Leu Ser Gin Thr 115 120 125
11Gin Gin Pro Gin Gin Pro Ala Gin Leu Glu Ala lie Arg Ser Leu Val 130 135 140
Leu Gin Thr Leu Pro Thr Met Cys Asn Val Tyr Val Pro Pro Glu Cys 145 150 155 160
Ser lie lie Lys Ala Pro Phe Ala Ser lie Val Thr Gly lie Gly Gly 165 170 175
Gin
權(quán)利要求
1、一種新型γ-醇溶蛋白基因的核酸序列，其特征在于，所述基因序列為序列表中SEQ ID No.1所示的核酸序列。
2、 一種新型Y-醇溶蛋白基因的的氨基酸序列，其特征在于，所述氨基酸序 列為序列表中SEQ IDNo.2所示的氨基酸序列。
3、 一種新型Y-醇溶蛋白基因的核酸序列的衍生序列，其特征在于，該衍生 序列為權(quán)利要求1所述的基因序列的一個(gè)或幾個(gè)堿基的置換、插入或缺失獲得的 該基因序列的變構(gòu)體。
4、 一種新型Y-醇溶蛋白基因的氨基酸序列的衍生序列，其特征在于，該衍生 序列與權(quán)利要求3所述的一種新型Y-醇溶蛋白基因的核酸序列的衍生序列相對(duì) 應(yīng)，為在相應(yīng)蛋白質(zhì)的氨基酸序列基礎(chǔ)上經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸的一個(gè)或幾個(gè)堿 基的置換、插入或缺失獲得的該基因序列的變構(gòu)體。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種新型γ-醇溶蛋白基因的核酸序列和氨基酸序列，如序列表SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示，屬于生物基因工程技術(shù)領(lǐng)域。該新型基因序列可以通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)或染色體工程方法導(dǎo)入普通小麥，培育出品質(zhì)更好的小麥品種。同時(shí)可以通過(guò)構(gòu)建原核或酵母表達(dá)載體，導(dǎo)入大腸桿菌和酵母中進(jìn)行表達(dá)，純化該基因編碼的蛋白并將其添加到面粉中，具有很高的應(yīng)用價(jià)值。
文檔編號(hào)C07K14/415GK101544982SQ200810147798
公開(kāi)日2009年9月30日 申請(qǐng)日期2008年12月9日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月9日
發(fā)明者祁鵬飛, 鄭有良, 陳國(guó)躍, 顏澤洪, 魏育明 申請(qǐng)人:四川農(nóng)業(yè)大學(xué)