專利名稱：：3，6-二取代甾體肟類化合物作為抗腫瘤藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一類3，6-二取代甾體肟類化合物及其合成方法，以及其在制備治療癌癥藥物中的應(yīng)用。(二)
背景技術(shù)：
：癌癥是對(duì)人類健康和生活素質(zhì)危險(xiǎn)最大的疾病之一。尋找高效、高選擇性和副作用小的抗癌藥物是抗癌藥物開(kāi)發(fā)的主要方向。在抗癌藥物的研究中，曾報(bào)導(dǎo)過(guò)4-烯-6-肟甾體化合物(Krstic'^N.M.;Bjelakovic',M.S.;Ziz'akb，Z.;Pavlovic，M.D.;Jurani'c，Z.D.;Pavlovi'c，V.D.Synthesisofsomesteroidaloximes，lactams,thiolactamsandtheirantitumoractivities,2007，steroids,72:406^14)、3-羰基-4-烯-6-后甾體化合物、3-羥基-4-烯-6-后甾體化合物(Deive，N.;Rodn'guez,丄；Jime'nez^C.，Synthesisofcytotoxic6￡-hydroximino-4-enesteroids:structure/activitystudies,/Afed.CAe附.2001，44,2612-2618;)、2國(guó)茅5基國(guó)3-羰基-1，4-二烯陽(yáng)6-后甾體化合物(Po叫J.;Rega^M.;Paz，V.;Alonso，B.;Rodn'guez，J.;Salvador,N.;Fema'ndezbA.;Jime'nezC.Synthesisandevaluationofnew6-hydroximinosteroidanalogsascytotoxicagents,Bioorg.Med.Chem.2007，15:4722~4740)和4-烯-3-烴基胺乙基肟甾體化合物(Jindal，D.P.;Chattopadhaya^R.;Guleria^S.;Gupta^R.Synthesisandantineoplasticactivityof2-alkylaminoethylderivativesofvarioussteroidaloximes，Euro.J.Med.Chem"2003，38:1025-1034)在體外對(duì)某些腫瘤細(xì)胞具有顯著細(xì)胞毒性。但是在進(jìn)行動(dòng)物體內(nèi)評(píng)估時(shí)發(fā)現(xiàn)這些化合物的抗癌作用并不明顯，目前未能在臨床上作為抗癌藥物使用。(三)
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一類3，6-二取代甾體肟類化合物，該類化合物的合成方法及其在制備治療癌癥藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的3，6-二取代甾體肟類化合物具有下列通式l:(1)其中，R為擁有l(wèi)-14個(gè)C原子的直鏈或具有不同位置取代支鏈的碳鏈或擁有不同官能團(tuán)取代基的碳鏈，或者是含有不同雜原子的官能團(tuán)如-OS03Na、=NOH、-OH、=0、-OCH2CH2N(R)2、一N(CH2CH2C1)2、鹵素、-SH、-OR中不同的取代基。Ri和R2為-OS03Na、=NOH、-OH、=0、-OCH2CH2N(R)2、一N(CH2CH2C1)2、鹵素、-SH、-OR等不同的取代基。和R2可以是相同的取代基，也可以是不同的取代基，但在或R2中至少有一個(gè)是=NOH(肟基)取代基。本發(fā)明的3，6-二取代甾體肟類化合物，可由天然甾體化合物經(jīng)過(guò)化學(xué)修飾得到。如膽甾醇經(jīng)過(guò)3-位羥基的官能團(tuán)轉(zhuǎn)換，5-位烯基轉(zhuǎn)化為6-位取代基得到(3E，6E)-二肟基膽甾烷。所說(shuō)的天然甾體化合物，包括膽甾醇、豆甾醇，谷甾醇、孕甾醇酮、劍麻皂甙等甾體化合物。制備本發(fā)明3,6-二取代甾體肟類化合物中的部分化合物的反應(yīng)式如下所示1)(3E，6E)-二肟基膽甾烷(5)的合成452)(3E，6E，20E)-3,6，20-三肟基孕甾烷(IO)的合成67891046)(6E)-肟基-膽甾-3-硫酸酯鈉鹽(15)的合成其它類似的3，6-二取代甾體肟類化合物可通過(guò)采用不同的底物，如具有不同支鏈或不同甾核結(jié)構(gòu)的底物，參照類似的方法通過(guò)甾核或支鏈的改造得到。例如從谷甾醇出發(fā)，采用與(3E)-后基-6-羰基膽甾垸(11)的合成相類似的反應(yīng)路線，可得到24-乙基-(3E)-后基-6-羰基膽甾烷(16)。通過(guò)體外癌細(xì)胞抑制活性試驗(yàn)表明，本發(fā)明的3，6-二取代甾體肟類化合物對(duì)多種腫瘤細(xì)胞株如肝癌、肺癌、前列腺癌、卵巢癌、乳腺癌等有顯著的抑制作用。在動(dòng)物體內(nèi)試驗(yàn)也表明，本發(fā)明的化合物對(duì)小白鼠皮下植入的卵巢癌、乳腺癌等腫瘤具有明顯的抑制作用，因此本發(fā)明的3，6-二取代甾體肟類化合物可用于制備治療癌癥的藥物。本發(fā)明還提供一種用于治療癌癥的藥物，其含有上述3，6-二取代甾體肟類化合物以及藥學(xué)上可接受的輔助劑。該藥物可以制成注射劑、，片劑、丸劑、膠囊劑、懸浮劑或乳劑的形式使用，其給藥途徑可為口服，或經(jīng)皮下、靜脈或肌肉注射。具體實(shí)施方式以下通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。實(shí)施例l:(3E，6E)-二肟基膽甾垸(5)的制備步驟l:中間產(chǎn)物(2)的制備膽甾醇1.544g(4mmo1)溶于無(wú)水二氯甲烷30mL，加入PCC(pyridiniumchlorochromate)5.200g(24mmo1)。室溫下反應(yīng)29h，加入乙醚30mL，采用硅膠短柱過(guò)濾，用乙醚不斷淋洗。減壓蒸去濾液中的溶劑，殘留的黃色固體通過(guò)柱層析分離，得到4-烯-3，6-二羰基膽甾烷(2)1.211g，產(chǎn)率76%。產(chǎn)物結(jié)構(gòu)經(jīng)IR，NMR和MS分析確定。步驟2:中間產(chǎn)物(3)的制備200mg(0.50mmol)4-烯-3，6-二羰基膽甾垸(2)溶于20mL甲醇中，加入120mg(0.50mmo1)NiCl2.6H20，溶解完全后。于1min內(nèi)快速加入90mg(2.37腿o1)NaBH4，20min后停止反應(yīng)，蒸去大部分甲醇，加進(jìn)適量水，用乙酸乙酯15mLx3萃取，洗至中性，無(wú)水硫酸鈉干燥。蒸去溶劑，粗產(chǎn)品經(jīng)柱層析分離得到產(chǎn)物3,6-二羥基膽甾垸(3)，產(chǎn)率為81%。產(chǎn)物結(jié)構(gòu)經(jīng)IR,NMR和MS分析確定。步驟3:中間產(chǎn)物(4)的制備3，6-二羥基膽甾垸(3)82mg溶于10mL丙酮，在冰浴中逐滴加入0.2mL瓊斯試劑，繼續(xù)反應(yīng)10min.，用飽和NaHC03中和至PH-7,,萃取、干燥，減壓蒸去溶劑，柱層析分離得到3,6-二羰基膽甾烷(4)，產(chǎn)率88%。產(chǎn)物結(jié)構(gòu)經(jīng)IR，NMR和MS分析確定。步驟4:化合物(5)的制備202mg(0.5mmo1)3,6-二羰基膽甾烷(4)溶于20mL95%乙醇中，60。C時(shí)加入NaOAc'3H20272mg(2mmo1),溶解后，一次性加入138mg(2mmo1)NH20H'HC1，lh后停止反應(yīng)，蒸去大部分乙醇，加入少量水，乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用蒸餾水、飽和食鹽水洗滌，干燥并蒸去溶劑后，柱層析分離后得到產(chǎn)物(3E，6E)-二肟基膽甾垸(5)，產(chǎn)率86%。產(chǎn)物結(jié)構(gòu)經(jīng)IR，NMR和MS分析確定。實(shí)施例2:(3E，6E，20E)-3，6，20-三肟基孕甾烷(10)的制備步驟l:中間產(chǎn)物(7)的制備2.212g孕烯醇酮(6)用60mLCH2Cl2溶解后，加入PCC9.100g，室溫下反應(yīng)30h.后停止反應(yīng)。反應(yīng)物傾進(jìn)一硅膠短柱，乙酸乙酯洗脫，乙酸乙酯相分別用飽和碳酸氫鈉溶液、水、飽和食鹽水洗，無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸出溶劑，柱層析分離得到化合物孕甾-4-烯-3，6,20-三酮(7)1.522g，產(chǎn)率66.3%。產(chǎn)物結(jié)構(gòu)經(jīng)IR，NMR和MS分析確定。步驟2:中間產(chǎn)物(9)的制備室溫下164mg(0.5mmol)化合物(7)溶解于15mL無(wú)水甲醇，加入120mg(0.5mmo1)NiCl2'6H20，完全溶解后，一次性加入60mg(1.58mmol)NaBH4，反應(yīng)30min后，用1MHC1中和反應(yīng)液至PH-7，減壓蒸去大部分甲醇，乙酸乙酯萃取，有機(jī)層分別水洗、飽和食鹽水洗，無(wú)水硫酸鈉干燥。蒸去溶劑，得到白色固體(8)，該白色固體不需提純，直接用8mL丙酮溶解，逐滴加入瓊斯試劑，不斷攪拌，當(dāng)溶液橙色不再退去時(shí)，停止加入瓊斯試劑，繼續(xù)反應(yīng)10min.，用飽和NaHC03中和至PH7，乙酸乙酯萃取，有機(jī)層水洗、飽和食鹽水洗，無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸去溶劑，柱層析分離得到化合物孕甾-3，6，20-三酮(9)142mg，產(chǎn)率84.5%。產(chǎn)物結(jié)構(gòu)經(jīng)IR，NMR和MS分析確定。步驟3:化合物(10)的制備165mg(0.5mmol)孕甾-3,6，20-三酮(9)溶于25mL95%乙醇，溶解后在60。C下加入三水乙酸鈉238mg(1.75mmo1)、鹽酸羥胺121mg(1.75mmo1)，在60。C左右反應(yīng)一小時(shí)。停止反應(yīng)，減壓蒸出大部分乙醇。然后加入少量蒸餾水，有白色^:淀生成。加入乙酸乙酯溶解固體，乙酸乙酯萃取，有機(jī)層洗至中性。無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓蒸出溶劑，得到白色固體，板層析分離得到化合物(3E,6E，20E)-3,6,20-三肟基孕甾垸(10)169mg，產(chǎn)率90%。產(chǎn)物結(jié)構(gòu)經(jīng)IR，NMR和MS分析確定。實(shí)施例3:6-羰基-(3E)-肟基膽甾烷(ll)的制備0.152mmol3，6-二羰基膽甾垸(4)溶解于10mL95%乙醇中，60。C時(shí)加入NaOAc'3H200.152mmol，溶解后分批加入0.167mmolNH2OH.HCl。lh后停止反應(yīng)，蒸去大部分乙醇，加入少量水，乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用蒸餾水、飽和食鹽水洗滌，干燥并蒸去溶劑后，柱層析分離后得到產(chǎn)物6-羰基-(3E)-肟基膽甾垸(11)，產(chǎn)率90.2%。產(chǎn)物結(jié)構(gòu)經(jīng)IR，NMR和MS分析確定。實(shí)施例4:6-羥基-(3E)-訴基膽甾烷(12)的制備(3E)-肟基-6-羰基膽甾烷(11)3001^溶解于301^無(wú)水甲醇中，然后分批加入55mgNaBH4，反應(yīng)lh后，用1MHC1中和到PH-7終止反應(yīng)。蒸去大部分甲醇，加入少量水，有大量白色固體析出，用乙酸乙酯溶解固體，并用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層洗至中性，無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸去溶劑，柱層析分離得到化合物6-羥基-(3E)-肟基膽甾烷(12)220mg，產(chǎn)率74%。產(chǎn)物結(jié)構(gòu)經(jīng)IR,NMR和MS分析確定。實(shí)施例5:3-羥基-(6E)-肟基膽甾烷(14)的制備步驟l:中間產(chǎn)物(13)的制備3，6-二羰基-4-烯膽甾烷(2)119mg(0.3mmo1)與71mg(0.3mmol)NiCl2'6H2O溶于15rnL甲醇中，于5分鐘內(nèi)分批加入35mg(0.92mmo:l)NaBH4,反應(yīng)5min后用1N鹽酸淬滅反應(yīng)，減壓蒸去大部分甲醇，加入15mL水，乙酸乙f旨萃取，萃取液用飽和食鹽水洗至中性。干燥，蒸去溶劑，粗產(chǎn)品柱層析分離得到3-羥基-6-羰基膽甾垸(10)87mg,產(chǎn)率72%。產(chǎn)物結(jié)構(gòu)經(jīng)IR，NMR和MS分析確定。步驟2:3-羥基-(6E)-肟基膽甾烷(14)的制備3-羥基-6-羰基膽甾烷(10)80mg(0.198mmo1)溶于15mL95%乙醇中，溶解后加入27mg(0.198mmo1)NaAc'3H20，攪拌10min后加入21mgNH2OH'HCl，在60。C左右繼續(xù)反應(yīng)3h，減壓蒸去大部分乙醇，加入適量水，用乙酸乙酯萃取，有機(jī)相用飽和食鹽水洗至中性，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾并減壓蒸去溶劑，粗產(chǎn)品柱層析分離得產(chǎn)物3-羥基-(6E)-肟基膽甾烷(14)，產(chǎn)率96%。產(chǎn)物結(jié)構(gòu)經(jīng)IR,NMR和MS分析確定。實(shí)施例6:(6E)-躬基膽甾-3-硫酸酯鈉鹽(15)的制備230mg化合物13和415mg三乙胺三氧化硫溶解于1.8mL吡啶中，氬氣保護(hù)下在卯。C反應(yīng)3h,將反應(yīng)液直接倒入少量硅膠中，拌樣，柱層析分離。產(chǎn)物用15mL95X乙醇溶解，加入118mgNaOAc'3H2O和40mgNH2OH'HCl，5(TC反應(yīng)lh，蒸去大部分溶劑，柱層析分離得到化合物9256mg，產(chǎn)率86%。產(chǎn)物結(jié)構(gòu)經(jīng)IR，NMR和MS分析確定。實(shí)施例7:本實(shí)施例是采用本發(fā)明所述的3，6-二取代甾體肟類化合物對(duì)某些腫瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞毒性試驗(yàn)的測(cè)試結(jié)果。選擇本發(fā)明的部分3，6-二取代甾體肟類化合物試驗(yàn)其對(duì)人肝癌細(xì)胞株(Sk-Hep-1)，肺癌細(xì)胞株(H-292)，前列腺癌細(xì)胞株(PC-3)，卵巢癌細(xì)胞株(Hey-1B)的細(xì)胞毒性。采用MTS方法，進(jìn)行體外細(xì)胞毒性測(cè)定。在96孔板中培養(yǎng)的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞中加入不同濃度的3，6-二取代甾體肟類化合物，同時(shí)進(jìn)行3個(gè)平行試驗(yàn)，與對(duì)照組進(jìn)行比較，培養(yǎng)72小時(shí)后，加入MTS，測(cè)定其吸光度，分別計(jì)算抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)到50%時(shí)化合物的濃度，以ICso值表示，結(jié)果如表1所示表l某些3，6-二取代甾體肟類化合物抗腫瘤活性測(cè)試結(jié)果(MTS方法)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>權(quán)利要求1、一種3，6-二取代甾體肟類化合物，其特征在于所述的化合物具有下列通式(1)id="icf0001"file="S2008100734974C00011.gif"wi="47"he="37"top="37"left="88"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>其中R為擁有1-14個(gè)C原子的直鏈或具有不同位置取代支鏈的碳鏈或擁有不同官能團(tuán)取代基的碳鏈，或者是含有不同雜原子的官能團(tuán)如＝NOH、-OSO3Na、-OH、＝O、-OCH2CH2N(R)2、-N(CH2CH2Cl)2、鹵素、-SH、-OR中不同的取代基。R1和R2為＝NOH、-OSO3Na、-OH、＝O、-OCH2CH2N(R)2、-N(CH2CH2Cl)2、鹵素、-SH、-OR中不同的取代基。式(1)中的R1和R2可以是相同的取代基，也可以是不同的取代基，但在R1或R2中至少有一個(gè)是＝NOH(肟基)取代基。2.—種制備3，6-二取代留體肟類化合物的方法，其特征在于所述方法是1)將具有不同支鏈結(jié)構(gòu)的3-羥基-5-烯甾體化合物經(jīng)過(guò)氧化、還原、取代、加成的化學(xué)方法轉(zhuǎn)化為3，6-二羥基甾體化合物；2)通過(guò)置換、取代、加成、氧化、還原的官能團(tuán)轉(zhuǎn)換方法，把3，6-二羥基甾體化合物轉(zhuǎn)化為3，6-二取代甾體肟類化合物。3.—種如權(quán)利要求1所述3，6-二取代甾體肟類化合物的應(yīng)用，其特征在于其單獨(dú)或作為藥用組合物作為制備治療抗腫瘤藥物的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明涉及3，6-二取代甾體肟類化合物及其作為抗腫瘤藥物在藥物中的應(yīng)用。實(shí)驗(yàn)證明本發(fā)明的3，6-二取代甾體肟類化合物對(duì)多種腫瘤細(xì)胞株具有明顯的抑制作用，可用于制備治療癌癥的藥物。本發(fā)明也涉及制備所述化合物的方法。所述的3，6-二取代甾體肟類化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如式I所示。式中R為擁有1-14個(gè)C原子的直鏈或具有不同位置取代支鏈的碳鏈或擁有不同官能團(tuán)取代基的碳鏈。R₁和R₂為-OSO₃Na、＝NOH、-OH、＝O、-OCH₂CH₂N(R)₂、-N(CH₂CH₂Cl)₂、鹵素、-SH、-OR等不同的取代基。文檔編號(hào)C07J9/00GK101245090SQ20081007349公開(kāi)日2008年8月20日申請(qǐng)日期2008年3月14日優(yōu)先權(quán)日2008年3月14日發(fā)明者周愛(ài)民,崔建國(guó),磊范,黃立梁申請(qǐng)人:廣西師范學(xué)院