專利名稱：經(jīng)鹵烷基取代的嘧啶酮衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明一般而言系有關(guān)具有有利藥理性質(zhì)之經(jīng)鹵烷基取代之嘧啶酮衍生物。本發(fā)明進(jìn)一步有關(guān)此等化合物于治療與辣椒素受體活化作用有關(guān)之病癥上、于檢測與辣椒素受體結(jié)合之其它試劑上及作為檢測與定位辣椒素受體之探針上之用途。

背景技術(shù)：
疼痛知覺，或傷害感受覺，系受一群稱為“傷害感受器”之特殊感覺神經(jīng)元之周邊末端所調(diào)節(jié)。有多種物理與化學(xué)刺激會誘發(fā)哺乳動物之此等神經(jīng)元活化，以辨識可能之有害刺激。然而，當(dāng)傷害感受器之活化作用不當(dāng)或過度時，可能造成使人耗弱之急性或慢性疼痛。
神經(jīng)性疼痛涉及在沒有刺激時的疼痛信號傳遞，典型地系由神經(jīng)系統(tǒng)受損所致。大多數(shù)情況下，認(rèn)為此等疼痛系因周邊系統(tǒng)受到初次傷害(例如經(jīng)由直接傷害或全身性疾病)后造成周邊與中樞神經(jīng)系統(tǒng)敏化所致。神經(jīng)性疼痛典型為灼熱、抽痛且其強(qiáng)度不緩和，有時候可能使誘發(fā)該疼痛之初次傷害或疾病過程更惡化。
目前對神經(jīng)性疼痛之治療大多無效。鴉片(如嗎啡)為強(qiáng)力之止痛劑，但其適用性常受限于其不良副作用，如肉體上癮與戒斷性質(zhì)，及呼吸困難、情緒變化與并發(fā)便秘之腸蠕動下降、惡心、嘔吐及內(nèi)分泌與自主神經(jīng)系統(tǒng)改變。此外，神經(jīng)性疼痛經(jīng)常對一般類鴉片止痛劑療法沒有反應(yīng)或僅有部份反應(yīng)。使用N-甲基-D-天冬胺酸拮抗劑克他命(ketamine)或α(2)-腎上腺素激導(dǎo)性激動劑氯壓定(clonidine)治療可減輕急性或慢性疼痛，并可減少類鴉片劑之用量，但經(jīng)常因副作用而無法耐受此等制劑。
過去曾使用辣椒素局部治療慢性與急性疼痛，包括神經(jīng)性疼痛。辣椒素為一種衍生自茄科(Solanaceae)植物(包括辣椒)之辛辣物質(zhì)，似乎可選擇性作用在咸信可媒介疼痛之小直徑傳入神經(jīng)纖維(A-δ與C纖維)。對應(yīng)于辣椒素之反應(yīng)特征為在周邊組織中持續(xù)活化傷害感受器，最后使得周邊傷害感受器對一種或多種刺激沒有敏感性。由動物試驗(yàn)可見，辣椒素似乎藉由打開鈣與鈉之陽離子選擇性信道而激活C纖維膜去極化。
同樣具有類香草醇部份(moiety)之辣椒素結(jié)構(gòu)類似物亦會引發(fā)類似反應(yīng)。其中一種類似物為樹脂毒素(resiniferatoxin)(RTX)，系大戟科(Euphorbia)植物之天然產(chǎn)物。類香草醇受體(VR)系用于說明辣椒素與此等相關(guān)的刺激性化合物之神經(jīng)元膜辨識位置。辣椒素反應(yīng)受到另一種辣椒素類似物(辣椒素氮呯(capsazepine))之競爭性抑制(進(jìn)而拮抗)，亦受非選擇性陽離子信道阻斷劑釕紅所抑制，此等拮抗劑與VR結(jié)合不超過中等親和性(典型Ki值不超過140μM)。
已有人自大鼠與人類之背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞克隆出類香草醇受體。所判別出之第一種類香草醇受體稱為1型類香草醇受體(VR1)，術(shù)語“VR1”與“辣椒素受體”在本文中可交換使用，系指此型之大鼠與/或人類受體，及哺乳動物之同系物(homologue)。VR1于疼痛感受中之角色已采用缺乏此受體之小白鼠確認(rèn)，此種小白鼠不會被類香草醇誘發(fā)疼痛行為，且對熱與發(fā)炎之反應(yīng)已受損。VR1為一種非選擇性陽離子信道，當(dāng)受到高溫、低pH與辣椒素受體激動劑時，其開放閥值即下降。打開此辣椒素受體信道后，通常即自表達(dá)該受體之神經(jīng)元與其它附近神經(jīng)元中釋出發(fā)炎性肽，提高疼痛反應(yīng)。受到辣椒素初次活化作用后，辣椒素受體即經(jīng)由cAMP依賴型蛋白質(zhì)激酶之磷酸化反應(yīng)，進(jìn)行迅速去敏化反應(yīng)。
由于VR1激動劑類香草醇化合物有能力在周邊組織中將傷害感受器去敏化，因此其已用為局部麻醉劑。然而，施用激動劑本身可能造成灼熱疼痛，因而限制其醫(yī)療用途。近來已有報告指出，VR1拮抗劑(包括某些非類香草醇化合物)亦適用于治療疼痛(參見例如PCT國際申請專利案案號WO 02/08221、WO 03/062209、WO 04/054582、WO04/055003、WO 04/055004、WO 04/056774、WO 05/007646、WO05/007648、WO 05/007652、WO 05/009977、WO 05/009980、WO05/009982、WO 05/049601、WO 05/049613、WO 06/122200與WO06/120481)。
因此，需要會與VR1交互作用，但不會誘發(fā)VR1激動劑類香草醇化合物之初期疼痛感受的化合物來治療慢性與急性疼痛(包括神經(jīng)性疼痛)及其它特別對辣椒素受體調(diào)節(jié)作用有反應(yīng)之病癥。本發(fā)明可符合此需求，并提供進(jìn)一步相關(guān)優(yōu)點(diǎn)。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提出一種式I之經(jīng)鹵烷基取代之嘧啶酮衍生物

式I 及此等化合物之藥學(xué)上可接受的鹽類、溶劑合物(例如水合物)與酯類。
式I中 代表環(huán)中包含1、2或3個雜原子的稠合5或6元雜芳基，該雜原子系分別獨(dú)立選自O(shè)、N與S，其余環(huán)原子為碳，其中，該稠合的雜芳基為視需要經(jīng)取代；較佳為該稠合的雜芳基經(jīng)0至3個或經(jīng)0至2個獨(dú)立選自下列的取代基取代氨基、羥基、C1-C6烷基、C1-C6羥基烷基、(C3-C7環(huán)烷基)C0-C2烷基、C1-C6鹵烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烷基醚、C1-C6烷酰氧基、C1-C6烷基磺?；被?、C1-C6烷?；被c單或二(C1-C6烷基)氨基； Ar為苯基或5或6元雜芳基，其分別為視需要經(jīng)取代，且其較佳為分別經(jīng)0至4個或0至3個獨(dú)立選自下列的取代基取代鹵素、氰基、氨基、硝基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6鹵烷基、C1-C6羥基烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6鹵烷氧基、(C3-C7環(huán)烷基)C0-C4烷基與單或二(C1-C6烷基)氨基； X為C1-C2亞烷基，其中，各碳原子為視需要經(jīng)取代且較佳為經(jīng)0、1或2個獨(dú)立選自下列的取代基取代甲基、乙基及可共同形成C3-C5環(huán)烷基之取代基，以使其中至少一個碳原子經(jīng)取代；及 Y為二氟甲基或三氟甲基。
本發(fā)明進(jìn)一步提出式Ia之經(jīng)鹵烷基取代之嘧啶酮衍生物

式Ia 及此等化合物之藥學(xué)上可接受的鹽類、溶劑合物(例如水合物)與酯類。式Ia中

X與Y如式I的說明； W為N或CH，其視需要經(jīng)R1所代表的取代基取代；及 R1代表0至3個取代基；較佳為各此等取代基獨(dú)立選自鹵素、氰基、氨基、硝基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6鹵烷基、C1-C6羥基烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6鹵烷氧基、(C3-C7環(huán)烷基)C0-C4烷基與單或二(C1-C6烷基)氨基。
某些態(tài)樣中，式I與式Ia的化合物為VR1調(diào)節(jié)劑，其于辣椒素受體結(jié)合性分析法中之Ki不超過1微摩爾、500毫微摩爾、100毫微摩爾、50毫微摩爾、10毫微摩爾或1毫微摩爾及/或其在測定辣椒素受體激動劑或拮抗劑活性的活體外分析法中之EC50或IC50值不超過1微摩爾、500毫微摩爾、100毫微摩爾、50毫微摩爾、10毫微摩爾或1毫微摩爾。某些具體實(shí)施例中，此等VR1調(diào)節(jié)劑為VR1拮抗劑，且在辣椒素受體活化作用的活體外分析法(例如本文實(shí)例6提供之分析法)中，于等于IC50之濃度、10倍IC50之濃度或100倍IC50之濃度下沒有可檢測之激動劑活性。
某些態(tài)樣中，本文所提供的化合物系標(biāo)記可檢測之標(biāo)記物(例如放射性標(biāo)記物或螢光素共軛標(biāo)記物)。
本發(fā)明進(jìn)一步在其它態(tài)樣中提供藥物組合物，其包含至少一種經(jīng)鹵烷基取代之嘧啶酮衍生物與生理上可接受的載體或賦形劑組合。
其它態(tài)樣中，提供降低細(xì)胞辣椒素受體的鈣傳導(dǎo)性之方法，其包括使表達(dá)辣椒素受體的細(xì)胞(例如神經(jīng)元，如中樞神經(jīng)系統(tǒng)或周邊神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、膀胱上皮或肺部的細(xì)胞)與至少一種本文所說明之VR1調(diào)節(jié)劑接觸。此等接觸可于活體內(nèi)或活體外進(jìn)行，且通常使用足以于活體外改變類香草醇配位體與VR1之結(jié)合性(采用實(shí)例5提供之分析法)及/或VR1-媒介之訊息傳遞(采用實(shí)例6提供之分析法)之VR1調(diào)節(jié)劑濃度進(jìn)行。
進(jìn)一步提供抑制類香草醇配位體與辣椒素受體結(jié)合之方法。某些具體實(shí)施例中，抑制作用系于活體外進(jìn)行。此等方法包括使辣椒素受體與本文所說明之至少一種VR1調(diào)節(jié)劑，于足以可檢測到其抑制類香草醇配位體與辣椒素受體結(jié)合之條件與用量或濃度下接觸。其它具體實(shí)施例中，辣椒素受體系在患者體內(nèi)。此等方法包括使患者體內(nèi)表達(dá)辣椒素受體的細(xì)胞與至少一種本文所說明之VR1調(diào)節(jié)劑，于足以于活體外可檢測到其抑制類香草醇配位體與表達(dá)克隆之辣椒素受體的細(xì)胞結(jié)合之用量或濃度下接觸。
本發(fā)明尚提供治療患者體內(nèi)對辣椒素受體調(diào)節(jié)作用有反應(yīng)之病癥之方法，其包括對患者給予治療有效量之至少一種本文所說明之VR1調(diào)節(jié)劑。
其它態(tài)樣中，提供為患者治療疼痛之方法，其包括對承受(或可能承受)疼痛之患者給予治療有效量之至少一種本文所說明之VR1調(diào)節(jié)劑。
尚提出治療患者的瘙癢、尿失禁、膀胱過動癥、停經(jīng)癥狀、咳嗽與/或打嗝之方法，其包括對遭受(或可能遭受)上述一種或多種病癥之患者給予治療有效量之至少一種本文所說明之VR1調(diào)節(jié)劑。
其它態(tài)樣中，尚提出治療患者的停經(jīng)癥狀之方法，其包括對遭受(或可能遭受)此等癥狀之患者給予治療有效量之至少一種本文所說明之VR1調(diào)節(jié)劑。
本發(fā)明進(jìn)一步提供促進(jìn)肥胖患者減輕體重之方法，其包括對肥胖患者給予治療有效量之至少一種本文所說明之VR1調(diào)節(jié)劑。
本發(fā)明進(jìn)一步提供判別與辣椒素受體結(jié)合之制劑之方法，其包括(a)使辣椒素受體與本文所說明有標(biāo)記的化合物，于可使該化合物與辣椒素受體結(jié)合之條件下接觸，以產(chǎn)生已結(jié)合之有標(biāo)記的化合物；(b)于沒有試驗(yàn)制劑之存在下，檢測相當(dāng)于已結(jié)合之有標(biāo)記的化合物含量之信號；(c)使已結(jié)合之有標(biāo)記化合物與試驗(yàn)制劑接觸；(d)于試驗(yàn)制劑之存在下，檢測相當(dāng)于已結(jié)合之有標(biāo)記的化合物含量之信號；及(e)與(b)步驟檢測到之信號比較，檢測(d)步驟信號之下降程度。
其它態(tài)樣中，本發(fā)明提供一種決定樣本中是否存在辣椒素受體之方法，其包括(a)使樣本與本文所說明化合物，于可使該化合物與辣椒素受體結(jié)合之條件下接觸；與(b)檢測指示化合物與辣椒素受體結(jié)合程度之信號。
本發(fā)明亦提供包裝之藥物制劑，其包括(a)含于容器中之本文所說明之藥物組合物；與(b)使用該組合物治療對辣椒素受體調(diào)節(jié)作用有反應(yīng)之一種或多種病癥的說明書，如疼痛、瘙癢、尿失禁、膀胱過動癥、停經(jīng)癥狀、咳嗽、打嗝與/或肥胖。
另一態(tài)樣中，本發(fā)明提供制備本文所揭示化合物(包括中間物)之方法。
本發(fā)明此等與其它態(tài)樣將可參考下列詳細(xì)說明而了解。

具體實(shí)施例方式 如上述，本發(fā)明提出經(jīng)鹵烷基取代之嘧啶酮衍生物。此等化合物可用于活體外或活體內(nèi)，在各種情況下調(diào)節(jié)辣椒素受體活性。
術(shù)語說明 本文中通常采用標(biāo)準(zhǔn)命名法說明化合物。咸了解，具有不對稱中心的化合物(除非另有說明，否則)包括所有光學(xué)異構(gòu)物與其混合物。此外，具有碳-碳雙鍵的化合物可能出現(xiàn)Z與E型，化合物之所有異構(gòu)型均包括在本發(fā)明中，除非另有說明。若化合物呈多種互變異構(gòu)型時，所示的化合物并不限于任一種特定互變異構(gòu)物，而意欲包括所有互變異構(gòu)型。本文中某些化合物系以包括代號之通式說明(例如R1、A、X)。除非另有說明，否則此等化學(xué)式中各代號之定義獨(dú)立于任何其它代號，化學(xué)式中任何出現(xiàn)一次以上之代號于每次出現(xiàn)時之定義亦分別獨(dú)立。
本文所采用術(shù)語「經(jīng)鹵烷基取代之嘧啶酮衍生物」包括所有式I化合物，包括彼等式Ia化合物，及本文所提出其它化學(xué)式的化合物(包括任何鏡像異構(gòu)物、消旋物與立體異構(gòu)物)，及此等化合物之藥學(xué)上可接受的鹽類、溶劑合物與酯類。
本文所采用「藥學(xué)上可接受的鹽」為適用于與人類或動物之組織接觸，不會引起過度毒性與致癌性，且最好沒有刺激性、過敏反應(yīng)或其它問題或并發(fā)癥之酸或堿鹽。此等鹽類包括如胺之堿性殘基之無機(jī)酸與有機(jī)酸鹽類，及如羧酸之酸性殘基之堿金屬或有機(jī)鹽類。用于形成鹽之特定藥學(xué)上可接受的陰離子包括(但不限于)乙酸根、2-乙酰氧基苯甲酸根、抗壞血酸根、苯甲酸根、碳酸氫根、溴化物、乙二胺四乙酸鈣、碳酸根、氯化物、檸檬酸根、二氫氯、二磷酸根、二酒石酸根、乙二胺四乙酸根、丙酯月桂基硫酸根(estolate)(乙基琥珀酸根)、甲酸根、富馬酸根、葡庚酸根(gluceptate)、葡糖酸根、麩胺酸根、乙醇酸根、乙醇?；繁诫纤岣?、己基間苯二酸根(hexylresorcinate)、哈巴胺鹽(hydrabamine)、氫溴酸根、氫氯酸根、氫碘酸根、羥基馬來酸根、羥基萘酸根、碘化物、羥乙磺酸根、乳酸根、乳糖醛酸根、蘋果酸根、馬來酸根、扁桃酸根、甲基溴化物、甲基硝酸根、甲基硫酸根、黏酸根(mucate)、萘磺酸根、硝酸根、雙羥萘酸根、泛酸根、苯基乙酸根、磷酸根、聚半乳糖醛酸根、丙酸根、水楊酸根、硬脂酸根、次醋酸根、琥珀酸根、胺磺酸根、磺胺酸根、硫酸根、磺酸根包括苯磺酸根、樟腦磺酸根、乙二磺酸根(乙烷-1，2-二磺酸根)、乙磺酸根、2-羥基乙磺酸根、甲磺酸根、三氟甲磺酸根與對甲苯磺酸根、單寧酸根、酒石酸根、氯茶堿根與三乙基碘化物(triethiodide)。同樣地，用于形成鹽之藥學(xué)上可接受的陽離子包括(但不限于)銨、雙芐基乙二胺、氯普魯卡因(chloroprocaine)、膽堿、二乙醇胺、乙二胺、甲基葡糖胺、普魯卡因與金屬如鋁、鈣、鋰、鎂、鉀、鈉與鋅。習(xí)此相關(guān)技藝之人士咸了解其它可用于本發(fā)明所提供化合物之藥學(xué)上可接受的鹽類。一般而言，藥學(xué)上可接受的酸或堿鹽可由包含堿性或酸性部份之母化合物經(jīng)由任何習(xí)知化學(xué)方法合成。簡言之，此等鹽類之制法可由此等化合物之游離酸或堿形式與化學(xué)計量之適當(dāng)堿或酸，于水或有機(jī)溶劑中，或于此二者之混合物中反應(yīng)而制備；通常使用非水性介質(zhì)，如醚、乙酸乙酯、乙醇、甲醇、異丙醇或乙腈較佳。
咸了解，本文所提供化合物可以(但不一定要)調(diào)配成溶劑合物(例如水合物)或非共價復(fù)合物。此外，多種結(jié)晶型與多形體(polymorph)均在本發(fā)明范圍內(nèi)。本文亦提供所示化學(xué)式的化合物之前藥?！盖八帯篂橐环N不一定完全符合本文所提供化合物結(jié)構(gòu)式要求的化合物，但可在給予患者后，于活體內(nèi)經(jīng)修飾產(chǎn)生本文所示化學(xué)式的化合物。例如前藥可為本文所提供化合物之醯化衍生物。前藥包括化合物中之羥基、胺或硫氫基(sulfhydryl)鍵結(jié)在任何基團(tuán)上的化合物，當(dāng)給予哺乳動物個體后，會分別裂解形成游離羥基、氨基或硫氫基。前藥實(shí)例包括(但不限于)本文所提供化合物中的醇與胺官能基之乙酸酯、甲酸酯與苯甲酸酯衍生物。本文所提供化合物之前藥可藉由修飾化合物中之官能基，使之可于活體內(nèi)裂解形成母化合物而予以制備。
本文所采用術(shù)語「烷基」指直鏈或分支鏈之飽和脂族烴。烷基包括具有1至8個碳原子(C1-C8烷基)、1至6個碳原子(C1-C6烷基)與1至4個碳原子(C1-C4烷基)之基團(tuán)，如甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、第二丁基、第三丁基、戊基、2-戊基、異戊基、新戊基、己基、2-己基、3-己基與3-甲基戊基。「C0-Cn烷基」指單一共價單鍵(C0)或具有1至n個碳原子之烷基；例如「C0-C4烷基」指單一共價單鍵或C1-C4烷基。某些實(shí)施例中，烷基之取代基有明確說明。例如「羥基烷基」指具有至少一個羥基取代基之烷基。
「亞烷基」系指如上述定義之二價烷基。C1-C2亞烷基為亞甲基或伸乙基；C0-C4亞烷基為單一共價鍵或具有1、2、3或4個碳原子之亞烷基；C0-C2亞烷基為單一共價鍵或具有1或2個碳原子之亞烷基。
「烯基」指直鏈或分支鏈烯基，其中含有至少一個不飽和碳-碳雙鍵。烯基包括C2-C8烯基、C2-C6烯基與C2-C4烯基，其分別含有2至8個、2至6個或2至4個碳原子，如乙烯基、烯丙基或異丙烯基。「炔基」指直鏈或分支鏈炔基，其包含一個或多個不飽和碳-碳鍵，其中至少一個為三鍵。炔基包括C2-C8炔基、C2-C6炔基與C2-C4炔基，其分別含有2至8個、2至6個或2至4個碳原子。
「環(huán)烷基」為包含一個或多個飽和及/或部份飽和環(huán)之基團(tuán)，其中所有環(huán)成員均為碳，如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、環(huán)辛基、金剛烷基及如上述基團(tuán)之部份飽和變體，如環(huán)己烯基。環(huán)烷基不包含芳香環(huán)或雜環(huán)。某些環(huán)烷基為C3-C7環(huán)烷基，其中該環(huán)烷基包含具有3至7個均為碳的環(huán)成員之單環(huán)。「(C3-C7環(huán)烷基)C0-C4烷基」為利用單一共價鍵或C1-C4亞烷基鏈接之C3-C7環(huán)烷基。
本文所采用「烷氧基」系指利用氧橋連基附接之如上述烷基。烷氧基包括分別具有1至6個或1至4個碳原子之C1-C6烷氧基與C1-C4烷氧基。代表性烷氧基為甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、第二丁氧基、第三丁氧基、正戊氧基、2-戊氧基、3-戊氧基、異戊氧基、新戊氧基、己氧基、2-己氧基、3-己氧基與3-甲基戊氧基。
「烷基醚」系指直鏈或分支鏈醚取代基(亦即經(jīng)烷氧基取代之烷基)。烷基醚包括C2-C8烷基醚、C2-C6烷基醚與C2-C4烷基醚，其分別具有2至8、6或4個碳原子。C2烷基醚之結(jié)構(gòu)式為-CH2-O-CH3。
術(shù)語「烷?；怪钙渲刑荚映手辨溁蚍种ф溚榛渲们依猛几浇又；?例如-(C＝O)-烷基)。烷?；哂兄付ㄌ荚訑?shù)，酮基之碳亦包括在碳原子數(shù)內(nèi)。例如C2烷?；鶠槿缡?(C＝O)CH3之乙?；弧窩1烷?；怪?(C＝O)H?！窩1-C6烷?；拱?至6個碳原子。
本文所采用術(shù)語「烷酰氧基」指利用氧連結(jié)基(linker)連結(jié)之烷?；?亦即通式結(jié)構(gòu)為-0-C(＝O)-烷基之基團(tuán))。烷酰氧基包括例如C1-C6烷酰氧基，其具有1至6個碳原子。
本文所采用術(shù)語「烷?；被瓜抵咐冒被B結(jié)基附接之烷?；?亦即通式結(jié)構(gòu)為-N(R)-C(＝O)-烷基之基團(tuán)，其中R為氫或C1-C6烷基)。烷?；被ɡ鏑1-C6烷?；被洹竿榛共糠菥哂?至6個碳原子(亦即酮基橋連基之碳不包括在指定碳原子數(shù)內(nèi))。
「烷基磺?；瓜抵溉缡?(SO2)-烷基之基團(tuán)，其中硫原子為附接點(diǎn)。烷基磺?；ǚ謩e具有1至6個或1至4個碳原子之C1-C6烷基磺?；cC1-C4烷基磺?；?。烷基磺酰基之代表性基團(tuán)之一為甲基磺?；?br> 「烷基磺?；被瓜抵咐冒被B結(jié)基附接之烷基磺酰基(亦即通式結(jié)構(gòu)為-N(R)-(SO2)-烷基之基團(tuán)，其中R為氫或C1-C6烷基)。烷基磺?；被ɡ缇哂?至6個碳原子之C1-C6烷基磺?；被?br> 「烷基氨基」系指通式結(jié)構(gòu)為-NH-烷基或-N(烷基)(烷基)之二級或三級胺，其中，各烷基分別獨(dú)立選自烷基、環(huán)烷基與(環(huán)烷基)烷基。此等基團(tuán)包括例如單與二(C1-C6烷基)氨基，其中各C1-C6烷基可相同或相異。咸了解，術(shù)語「烷基氨基」中所采用「烷基」之定義不同于所有其它含烷基之基團(tuán)(包括環(huán)烷基與(環(huán)烷基)烷基)(例如(C3-C7環(huán)烷基)C0-C4烷基)中所采用「烷基」之定義。
術(shù)語「鹵素」系指氟、氯、溴或碘。
「鹵烷基」為經(jīng)一個或多個獨(dú)立選出之鹵素取代之烷基(例如具有1至6個碳原子之「C1-C6鹵烷基」)。鹵烷基實(shí)例包括(但不限于)單、二或三氟甲基；單、二或三氯甲基；單、二、三、四或五氟乙基；單、二、三、四或五氯乙基；與1，2，2，2-四氟-1-三氟甲基-乙基。典型鹵烷基為三氟甲基與二氟甲基。術(shù)語「鹵烷氧基」系指利用氧橋連基連結(jié)之如上述定義之鹵烷基。
不位于兩個字母或代號之間之短折線(「-」)系用于表示取代基之附接點(diǎn)。例如-CONH2系利用碳原子附接。
「雜芳基」為其中至少一個芳香環(huán)包含至少一個選自N、O與S中之雜原子之芳香基。雜芳基包括例如5與6元雜芳基，如咪唑、呋喃、呋咱、異噻唑、異唑、二唑、唑、吡、吡唑、嗒、吡啶、嘧啶、四唑、噻唑與噻吩。
本文所采用「取代基」指共價鍵結(jié)至所欲分子中之原子的分子部份。例如環(huán)取代基可為下述部份(moiety)如鹵素、烷基、鹵烷基或與作為環(huán)成員之原子(較佳為碳或氮原子)共價鍵結(jié)之其它基團(tuán)。芳香基之取代基通常與環(huán)碳原子共價鍵結(jié)。術(shù)語「取代」指使用取代基置換分子結(jié)構(gòu)中的氫原子，但不可超過所指定原子上之價數(shù)，并可由此取代法得到化學(xué)上安定的化合物(亦即化合物可單離、判定其特性及測試其生物活性)。
「視需要經(jīng)取代」之基團(tuán)為未經(jīng)取代或經(jīng)氫以外之一個或多個合適基團(tuán)(其可相同或相異)取代在一個或多個可利用之位置，典型為1、2、3、4或5個位置。視需要之取代法亦以「經(jīng)0至X個取代基取代」之語法表示，其中，X為可使用之取代基最高數(shù)目。某些視需要經(jīng)取代之基團(tuán)系經(jīng)0至2、3或4個分別獨(dú)立選出之取代基取代(亦即未經(jīng)取代或經(jīng)至多達(dá)所示之最高取代基數(shù)目取代)。其它視需要經(jīng)取代之基團(tuán)系經(jīng)至少一個取代基取代(例如經(jīng)1至2、3或4個獨(dú)立選出之取代基取代)。
術(shù)語「VR1」與「辣椒素受體」在本文中交換使用，系指1型類香草醇受體。除非另有說明，否則此等術(shù)語包括大鼠與人類VR1受體(例如GenBank Accession Numbers AF327067、AJ277028與NM_018727；某些人類VR1 cDNA序列及所編碼氨基酸序列示于美國專利案第6,482,611號)，及在其它物種中發(fā)現(xiàn)之其同系物。
「VR1調(diào)節(jié)劑」在本文中亦稱為「調(diào)節(jié)劑」，為調(diào)節(jié)VR1活化作用與/或VR1媒介之訊息傳遞的化合物。本文所明確提供之VR1調(diào)節(jié)劑為式I化合物(包括式Ia化合物)及其藥學(xué)上可接受的鹽類、水合物與酯類。某些較佳VR1調(diào)節(jié)劑為非類香草醇。VR1調(diào)節(jié)劑可為VR1激動劑或拮抗劑。某些調(diào)節(jié)劑與VR1結(jié)合之Ki低于1微摩爾，較佳為低于500毫微摩爾，100毫微摩爾，10毫微摩爾或1毫微摩爾。測定對VR1之Ki之代表性分析法示于本文中實(shí)例5。
若調(diào)節(jié)劑可檢測到其抑制類香草醇配位體與VR1之結(jié)合性與/或VR1-媒介之訊息傳遞時(采用例如實(shí)例6所示之代表性分析法)，則視該調(diào)節(jié)劑為「拮抗劑」；通常此等拮抗劑在實(shí)例6所提供之分析法中抑制VR1活化作用之IC50值小于1微摩爾，較佳為小于500毫微摩爾，更佳為小于100毫微摩爾、10毫微摩爾或1毫微摩爾。VR1拮抗劑包括中性拮抗劑與反激動劑(inverse agonist)。
VR1之「反激動劑」為當(dāng)不添加類香草醇配位體時，使VR1之活性降至其基礎(chǔ)活性以下的化合物。VR1之反激動劑亦可抑制類香草醇配位體在VR1之活性與/或類香草醇配位體與VR1之結(jié)合性。VR1之基礎(chǔ)活性及因VR1拮抗劑之存在下而降低之VR1活性可采用鈣移動性分析法測定，如實(shí)例6之分析法。
VR1之「中性拮抗劑」為抑制類香草醇配位體在VR1上之活性，但不會顯著改變受體基礎(chǔ)活性的化合物(亦即在實(shí)例6所述之鈣移動性分析法中，沒有類香草醇配位體存在時，VR1活性降低程度不超過10％，較佳為不超過5％，更佳為不超過2％；最佳為沒有檢測到活性下降)。VR1之中性拮抗劑可抑制類香草醇配位體與VR1結(jié)合。
本文所采用「辣椒素受體激動劑」或「VR1激動劑」為提高受體之活性超過受體之基礎(chǔ)活性的化合物(亦即加強(qiáng)VR1活化作用與/或VR1所媒介之訊息傳遞)。辣椒素受體激動劑活性可采用實(shí)例6所提供之代表性分析法判別。一般而言，此等激動劑在實(shí)例6所提供之分析法中，EC50值小于1微摩爾，較佳為小于500毫微摩爾，更佳為小于100毫微摩爾或10毫微摩爾。
「類香草醇」為包含苯基環(huán)，利用兩個氧原子與相鄰環(huán)碳原子鍵結(jié)(其中一個碳原子與苯環(huán)上所鍵結(jié)之第三個部份之附接點(diǎn)呈對位)之任何化合物。辣椒素為一種代表性類香草醇。類香草醇與VR1結(jié)合之Ki(依本文所說明方法測定)不超過10μM時，則該類香草醇為「類香草醇配位體」。類香草醇配位體激動劑包括辣椒素、歐凡尼(olvanil)、N-花生四烯酰基-多巴胺與樹脂毒素(resiniferatoxin)(RTX)。類香草醇配位體拮抗劑包括辣椒素氮呯(capsazepine)與碘代樹脂毒素(iodo-resiniferatoxin)。
「治療有效量」(或劑量)為當(dāng)給予患者時，足以為患者提供顯著效益(例如可檢測到緩解至少一種所治療之病癥)時之用量。此等緩解程度可采用任何適當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)檢測，包括減輕一種或多種癥狀，如疼痛。治療有效量或劑量通?？墒贵w液(如血液、血漿、血清、CSF、滑液、淋巴液、細(xì)胞間質(zhì)液、眼淚或尿液)中的化合物濃度足以于活體外改變類香草醇配位體與VR1之結(jié)合性(采用實(shí)例5提供之分析法)及/或VR1-媒介之訊息傳遞(采用實(shí)例6提供之分析法)。咸了解，可能在給予單一劑量后，或可能依據(jù)預(yù)定療程，隨所給予的化合物而定，在重復(fù)給予治療有效量后，使患者出現(xiàn)顯著效果。
「統(tǒng)計上顯著」用于本文中系指采用統(tǒng)計顯著性之標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)分析法(如史都登氏T試驗(yàn)(student′s T test))測定結(jié)果與對照組之變異在p＜0.1之顯著水準(zhǔn)內(nèi)。
「患者」為接受本文所提供的化合物處理之任何個體?；颊甙ㄈ祟?，及其它動物如寵物(例如狗與貓)與家畜?；颊呖赡艹惺芤环N或多種對辣椒素受體調(diào)節(jié)作用有反應(yīng)之病癥(例如疼痛、曝露于類香草醇配位體、瘙癢、尿失禁、膀胱過動癥、停經(jīng)癥狀、呼吸障礙、咳嗽與/或打嗝)，或可能沒有此等癥狀(亦即可為有發(fā)展出此等癥狀危險之患者進(jìn)行預(yù)防性處理)。
經(jīng)鹵烷基取代之嘧啶酮衍生物 如上述，本發(fā)明提出如式I與式Ia之經(jīng)鹵烷基取代之嘧啶酮衍生物。某些態(tài)樣中，此等化合物為可用于多方面之VR1調(diào)節(jié)劑，包括用于治療疼痛(例如神經(jīng)性或周邊神經(jīng)所媒介的疼痛)；曝露于辣椒素；曝露于酸、熱、光、催淚氣體、空氣污染物(如香煙煙霧)、傳染媒介(包括病毒、細(xì)菌與酵母菌)、胡椒噴霧或相關(guān)媒介；呼吸病癥如氣喘或慢性阻塞性肺??；瘙癢；尿失禁或膀胱過動癥；停經(jīng)癥狀；咳嗽或打嗝；與/或肥胖。此等化合物亦可用于活體外分析法(例如受體活性分析法)，作為檢測與定位VR1之探針，及作為配位體結(jié)合性與VR1所媒介訊息傳遞分析法之標(biāo)準(zhǔn)物。
已發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明中，本文所提供經(jīng)鹵烷基取代之嘧啶酮衍生物至少部份因?yàn)橛谑絀與式Ia之嘧啶酮上2位置之分支鏈鹵烷基部份而具有驚人之高度VR1-調(diào)節(jié)活性。
如上述，

代表稠合的視需要經(jīng)取代之5或6元雜芳基，其中1、2或3個環(huán)成員為分別獨(dú)立選自O(shè)、N與S之雜原子且其余環(huán)成員為碳。某些具體實(shí)施例中，

系經(jīng)0至2個獨(dú)立選自下列的取代基取代C1-C6烷基、(C3-C7環(huán)烷基)C0-C2烷基與C1-C6鹵烷基。其它具體實(shí)施例中，

系經(jīng)0至2個獨(dú)立選自下列的取代基取代C1-C4烷基、C3-C5環(huán)烷基與C1-C4鹵烷基。
某些具體實(shí)施例中，

為經(jīng)0至2個如上述取代基(例如獨(dú)立選自C1-C4烷基、(C3-C5環(huán)烷基)C0-C2烷基與C1-C4鹵烷基)取代之5元雜芳基。其它具體實(shí)施例中，

為如下任一式代表的5元雜芳基

與
其中R′4為氫、C1-C4烷基、(C3-C5環(huán)烷基)C0-C2烷基、C1-C4鹵烷基、C1-C4羥基烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4烷酰基氨基或C1-C4烷基磺?；被４硇灾说然鶊F(tuán)包括例如


與

其中R2為例如氫、氰基、芳基、雜芳基、鹵素、C1-C4烷基、C1-C4鹵烷基或C3-C5環(huán)烷基。某些具體實(shí)施例中，

為


咸了解，此等

部份之取向(orientation)如式中所示(例如若

為

時，則雙環(huán)核心

為

)。
其它具體實(shí)施例中，

為經(jīng)0至3個獨(dú)立選自下列的取代基取代之6元雜芳基羥基、C1-C6烷基、(C3-C7環(huán)烷基)C0-C2烷基、C1-C6鹵烷基、C1-C6羥基烷基、C1-C6烷氧基、單-(C1-C6烷基)氨基、C1-C6烷酰基氨基或C1-C6烷基磺酰基氨基。代表性之此等基團(tuán)包括例如

其中，R4代表0至3個，較佳為1至3個分別獨(dú)立選自下列的取代基羥基、C1-C4烷基、(C3-C5環(huán)烷基)C0-C2烷基、C1-C4鹵烷基、C1-C4羥基烷基、C1-C4烷氧基、單-(C1-C4烷基)氨基、C1-C4烷?；被駽1-C4烷基磺?；被?br> 某些具體實(shí)施例中，代號R1代表0至3個，較佳為1至3個獨(dú)立選自下列的取代基鹵素、氰基、C1-C4烷基與C1-C4鹵烷基。例如某些此等化合物中，R1代表僅一個取代基(例如位于環(huán)Ar之對位)。其它此等化合物中，至少一個由R1代表的取代基為鹵素或CN；某些此等化合物中，此等取代基位于6員Ar部份之對位。咸了解，式Ia中，對位系指Ar部份與嘧啶酮核心之附接點(diǎn)之對位；亦即當(dāng)X為CH時，位于苯基環(huán)之4位置，及當(dāng)W為N時，位于吡啶-3-基環(huán)之6位置。
某些具體實(shí)施例中，式Ia化合物進(jìn)一步符合式II、IIa、III、IIIa、IV、IVa、V或Va
式II 式IIa 式III
式IIIa式IV 式IVa
式V 式Va 其中R2為氫、C1-C4烷基、C1-C4鹵烷基或C3-C5環(huán)烷基；R3為鹵素、氰基、C1-C4烷基或C1-C4鹵烷基；R4代表1至2個獨(dú)立選自下列的取代基羥基、C1-C4烷基、(C3-C5環(huán)烷基)C0-C2烷基、C1-C4鹵烷基與C1-C4烷氧基；R6為氫、C1-C4烷基、(C3-C5環(huán)烷基)C0-C2烷基、C1-C4鹵烷基、C1-C4羥基烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4烷酰基氨基或C1-C4烷基磺?；被?；且其余代號如上述說明。
某些式II、IIa、III、IIIa、IV與IVa之具體實(shí)施例中，R6為H；亦即此等化合物進(jìn)一步符合式IIb、IIc、IIIb、IIIc、IVb或IVc中之一者
式IIb式IIc式IIIb
式IIIc 式IVb式IVc 其中R2為氫、C1-C4烷基、C1-C4鹵烷基或C3-C5環(huán)烷基；R3為鹵素、氰基、C1-C4烷基或C1-C4鹵烷基；且其余代號如上述說明。
“X”部份如上述為分支鏈之二價亞烷基，包括例如-CH(R5)-、-CH2-CH(R5)-與-CH(R5)-CH2-，其中，R5為甲基或乙基。代表性之此等基團(tuán)包括-CH(CH3)-、-CH2-CH(CH3)-與-CH(CH3)-CH2-。其它X部份包括-C(CH3)2-、-C(CH3)2-CH2-、-CH2-C(CH3)2-、-CH(CH3)-CH(CH3)-、-CH(CH3)2-CH(CH3)-、-CH(CH3)-CH(CH3)2-與-CH(CH3)2-CH(CH3)2-。X部份進(jìn)一步包括亞甲基與伸乙基，其中單一碳原子上之兩個取代基共同形成環(huán)烷基部份(例如環(huán)丙基或環(huán)丁基)。
某些具體實(shí)施例中，式Ia化合物進(jìn)一步符合式VI至XX中之一者
式VI 式VII 式VIII
式IX 式X式XI
式XII 式XIII 式XIV
式XV 式XVI式XVII
式XVIII式XIX式XX 其中代號如上述說明。
某些本文所提供經(jīng)鹵烷基取代之嘧啶酮衍生物中，Y為三氟甲基。某些此等化合物符合下列化學(xué)式之一，其中，R2、R3與R4如上述說明。

式A 式B式C 式D
式E 式F 式G 式H
式J 式K 式L式M
式N式O 式P 式Q
式R 式S式T 式U
式V 式W式Y(jié) 式Z
式AA 式BB 式CC 式DD
式EE 式FF式GG 式HH
式JJ式KK式LL式MM
式NN 式OO 式PP 式QQ
式RR式SS 式TT 式UU
式VV 式WW 式Y(jié)Y 式ZZ
式AAA 式BBB 式CCC 式DDD
式EEE式FFF式GGG 式HHH
式JJJ 式KKK 式LLL式MMM
式NNN 式OOO 式PPP 式QQQ
式RRR式SSS式TTT 式UUU
式VVV 式WWW 式Y(jié)YY 式ZZZ 如上式某些化合物中，R3為鹵素或CN。
本文所提供代表性化合物包括(但不限于)彼等明確說明于實(shí)例1至3中者。咸了解，本文所說明之具體化合物僅供代表且未限制本發(fā)明范圍。此外，如上述，所有本發(fā)明化合物均可呈游離酸或堿、或藥學(xué)上可接受的鹽。此外，此等化合物之其它型式如水合物與前藥均明確包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。
本發(fā)明某些態(tài)樣中，本文所提供經(jīng)鹵烷基取代之嘧啶酮衍生物可檢測到其改變(調(diào)節(jié))VR1活性，其系采用活體外VR1功能性分析法測定，如鈣移動性分析法?？刹捎肰R1配位體結(jié)合性分析法為此等活性進(jìn)行初步篩選。本文所提及之「VR1配位體結(jié)合性分析法」系指標(biāo)準(zhǔn)活體外受體結(jié)合性分析法，如實(shí)例5所提供者，及「鈣移動性分析法」(本文中亦稱為「訊息傳遞分析法」)可依實(shí)例6所述進(jìn)行。簡言之，可采用競爭性分析法分析與VR1之結(jié)合性，其中使VR1制劑與會結(jié)合至VR1(例如辣椒素受體激動劑如RTX)之有標(biāo)記(例如125I或3H)化合物及無標(biāo)記之試驗(yàn)化合物培養(yǎng)。本文所提供之分析法中，所使用之VR1最好為哺乳動物VR1，更佳為人類或大鼠VR1。受體可經(jīng)重組表達(dá)或自然表達(dá)。VR1制劑可為例如來自重組表達(dá)人類VR1之HEK293或CHO細(xì)胞之膜制劑。與可檢測到其調(diào)節(jié)類香草醇配位體與VR1的結(jié)合性的化合物培養(yǎng)時，導(dǎo)致與VR1制劑結(jié)合之標(biāo)記物量會相對于沒有化合物時之標(biāo)記物結(jié)合量下降或提高。此下降或提高可決定本文所說明對VR1之Ki。一般而言，可在此等分析法中使與VR1制劑結(jié)合之標(biāo)記物量降低的化合物較佳。
本文所提供某些VR1調(diào)節(jié)劑在毫微摩爾濃度(亦即低于微摩爾濃度)、低于毫微摩爾濃度或低于100微微摩爾(picomolar)濃度、20微微摩爾濃度、10微微摩爾濃度或5微微摩爾濃度下可檢測到其調(diào)節(jié)VR1活性。
如上述，作為VR1拮抗劑的化合物較適用于某些具體實(shí)施例。此等化合物之IC50值可采用標(biāo)準(zhǔn)活體外VR1媒介之鈣移動性分析法(如實(shí)例6所示)測定。簡言之，使表達(dá)辣椒素受體的細(xì)胞與所欲化合物及可指示細(xì)胞內(nèi)鈣濃度之指示劑(例如膜可通透之鈣敏感性染料如Fluo-3或Fura-2(Molecular Probes，Eugene，OR)，當(dāng)與Ca++結(jié)合時，分別會產(chǎn)生螢光信號)接觸。此等接觸較佳系以下述方式進(jìn)行在包含化合物及指示劑之一者或兩者之緩沖液或培養(yǎng)基之溶液中，培養(yǎng)細(xì)胞一次或多次。接觸時間應(yīng)維持足使染料進(jìn)入細(xì)胞中(例如1至2小時)。細(xì)胞經(jīng)洗滌或過濾排除過量染料后，與類香草醇受體激動劑(例如辣椒素、RTX或歐凡尼(olvanil))，典型于等于EC50之濃度下接觸，測定螢光反應(yīng)。當(dāng)接觸過激動劑的細(xì)胞與作為VR1拮抗劑的化合物接觸時，該螢光反應(yīng)通常相較于在沒有試驗(yàn)化合物下與激動劑接觸的細(xì)胞會下降至少20％，較佳為至少50％，更佳為至少80％。本文所提供VR1拮抗劑之IC50較佳為小于1微摩爾濃度，小于100nM，小于10nM或小于1nM。某些具體實(shí)施例中，本文所提供VR1拮抗劑在辣椒素受體激動作用的活體外分析法中，于等于IC50的化合物濃度下，沒有可檢測到之激動劑活性。某些此等拮抗劑在辣椒素受體激動作用的活體外分析法中，于高于100倍IC50的化合物濃度下，沒有可檢測到之激動劑活性。
其它具體實(shí)施例中，以作為辣椒素受體激動劑的化合物較佳。辣椒素受體激動劑活性通常依實(shí)例6所述測定。當(dāng)細(xì)胞與1微摩爾作為VR1激動劑的化合物接觸時，該螢光反應(yīng)量通常比與100nM辣椒素接觸的細(xì)胞所觀察到之螢光反應(yīng)量提高至少30％。本文所提供VR1激動劑之EC50較佳為小于1微摩爾，小于100nM或小于10nM。
VR1調(diào)節(jié)活性亦或者可采用培養(yǎng)之背根神經(jīng)節(jié)分析法(如實(shí)例7所述)與/或活體內(nèi)疼痛緩解分析法(如實(shí)例8所述)分析。本文所提供VR1調(diào)節(jié)劑在本文所提供一種或多種功能性分析法中對VR1活性較佳具有統(tǒng)計上顯著之明確效應(yīng)。
某些具體實(shí)施例中，本文所提供VR1調(diào)節(jié)劑實(shí)質(zhì)上不會調(diào)節(jié)配位體與其它細(xì)胞表面受體如EGF受體酪胺酸激酶或煙堿乙醯膽堿受體之結(jié)合性。換言之，此等調(diào)節(jié)劑實(shí)質(zhì)上不會抑制細(xì)胞表面受體如人類上皮生長因子(EGF)受體酪胺酸激酶或煙堿乙醯膽堿受體之活性(例如此等受體之IC50或IC40較佳為大于1微摩爾，最佳為大于10微摩爾)。較佳者，調(diào)節(jié)劑不會在0.5微摩爾、1微摩爾或更佳為10微摩爾之濃度檢測到其抑制EGF受體活性或煙堿乙醯膽堿受體活性。測定細(xì)胞表面受體活性之分析法可自商品取得，包括可得自Panvera(Madison，WI)之酪胺酸激酶分析套組。
某些具體實(shí)施例中，較佳VR1調(diào)節(jié)劑不為鎮(zhèn)定劑。換言之，在測定疼痛緩解之動物模式中(如本文實(shí)例8所提供之模式)，VR1調(diào)節(jié)劑之用量達(dá)充分止痛之最低劑量之兩倍劑量時，僅會暫時鎮(zhèn)定(亦即持續(xù)時間不超過緩解疼痛所維持時間之1/2)或最好在鎮(zhèn)定之動物模式分析法中沒有統(tǒng)計上顯著之鎮(zhèn)定作用(采用Fitzgerald等人說明于(1988)Toxicology 49(2-3)433-9之方法)。較佳者，其劑量達(dá)充分止痛之最低劑量之5倍劑量時，不會產(chǎn)生統(tǒng)計上顯著之鎮(zhèn)定作用。更佳者，本文所提供VR1調(diào)節(jié)劑在小于25毫克/公斤(較佳為小于10毫克/公斤)之靜脈內(nèi)劑量下或小于140毫克/公斤(較佳為小于50毫克/公斤，更佳為小于30毫克/公斤)之口服劑量下，不會產(chǎn)生鎮(zhèn)定作用。
若需要時，可分析本文所提供化合物之某些藥理性質(zhì)，包括(但不限于)口服生體可用率(較佳化合物之口服生體可用率程度應(yīng)可使口服劑量小于140毫克/公斤，較佳為小于50毫克/公斤，更佳為小于30毫克/公斤，甚至更佳為小于10毫克/公斤，亦更佳為小于1毫克/公斤與最佳為小于0.1毫克/公斤的化合物達(dá)治療有效濃度)、毒性(較佳化合物當(dāng)依治療有效量投藥給個體時，應(yīng)無毒性)、副作用(較佳化合物所產(chǎn)生之副作用應(yīng)相當(dāng)于對個體給予治療有效量安慰劑時之副作用)、血清蛋白質(zhì)結(jié)合性及活體外與活體內(nèi)半衰期(較佳化合物的活體內(nèi)半衰期應(yīng)容許進(jìn)行Q.I.D.投藥法，較佳為T.I.D.投藥法，更佳為B.I.D.投藥法及最佳為一天一次投藥法)。此外，藉由調(diào)節(jié)CNS VR1活性而治療疼痛之VR1調(diào)節(jié)劑可能需要對血腦障壁有不同滲透性，因此當(dāng)提供上述每日口服總劑量時，可使此等調(diào)節(jié)作用達(dá)治療有效程度，同時降低腦中用于治療周邊神經(jīng)所媒介疼痛之VR1調(diào)節(jié)劑濃度為較佳之作法(亦即此等劑量在腦中(例如CSF)所產(chǎn)生的化合物濃度應(yīng)不足以顯著調(diào)節(jié)VR1活性)?？刹捎孟嚓P(guān)技藝習(xí)知之例行分析法來分析此等性質(zhì)及判別特別用途之優(yōu)良化合物。例如用于預(yù)估生體可用率之分析法包括轉(zhuǎn)運(yùn)通過人類腸單層細(xì)胞，包括Caco-2單層細(xì)胞?；衔镌谌梭w中滲透血腦障壁之性質(zhì)可采用接受化合物投藥(例如經(jīng)靜脈內(nèi))之實(shí)驗(yàn)室動物腦中化合物濃度來評估。血清蛋白質(zhì)結(jié)合性可由白蛋白結(jié)合性分析法預(yù)估?；衔锇胨テ谙蹬c化合物劑量頻率成反比?；衔锏幕铙w外半衰期可由美國專利申請案公開第2005/0070547號中之實(shí)例7所述之微粒體半衰期分析法預(yù)估。
如上述，本文所提供較佳化合物無毒性。一般而言，本文所采用術(shù)語「無毒性」咸了解，系一種相對定義，意指任何經(jīng)美國食品與藥物檢驗(yàn)局(“FDA”)核準(zhǔn)用于給予哺乳動物(較佳為人類)或符合所制定之標(biāo)準(zhǔn)，可被FDA核準(zhǔn)給予哺乳動物(較佳為人類)之物質(zhì)。此外，極佳之無毒性化合物通常會符合下列一項或多項標(biāo)準(zhǔn)(1)不會實(shí)質(zhì)上抑制細(xì)胞ATP產(chǎn)生；(2)不會顯著延長心臟QT間隔；(3)不會造成實(shí)質(zhì)肝腫大，與(4)不會造成肝酵素大量釋出。
如本文所采用，不會實(shí)質(zhì)上抑制細(xì)胞ATP產(chǎn)生的化合物為符合美國專利申請案公開第2005/0070547號中實(shí)例8所示標(biāo)準(zhǔn)的化合物。換言之，依其中所述，經(jīng)過100μM此等化合物處理的細(xì)胞中ATP含量為未處理細(xì)胞中所檢測到ATP含量之至少50％。更佳具體實(shí)施例中，此等細(xì)胞中ATP含量為未處理細(xì)胞中所檢測到ATP含量之至少80％。
不會顯著延長心臟QT間隔的化合物為不會使天竺鼠、迷你豬或狗在接受可使血清中化合物濃度等于EC50或IC50之劑量下投藥后統(tǒng)計上顯著延長心臟QT間隔的化合物(由心電圖測定的化合物)。某些較佳具體實(shí)施例中，非經(jīng)腸式或口服給予0.01、0.05、0.1、0.5、1、5、10、40或50毫克/公斤之劑量不會在統(tǒng)計上顯著延長心臟QT間隔。
若實(shí)驗(yàn)室囓齒類動物(例如小白鼠或大鼠)每天接受可使血清中化合物濃度等于EC50或IC50之劑量下投藥進(jìn)行5至10天后，所造成之肝對體重比例不超過平行對照組(matched control)之100％時，該化合物即不會造成實(shí)質(zhì)肝腫大。極更佳之具體實(shí)施例中，此等劑量不會使肝腫大程度超過平行對照組之75％或50％。若采用非囓齒類動物(例如狗)時，此等劑量不應(yīng)使肝對體重比例超過平行對照組之50％，較佳不超過25％，更佳為不超過10％。此等分析法中，較佳投藥劑量包括非經(jīng)腸式或口服給予0.01、0.05、0.1、0.5、1、5、10、40或50毫克/公斤。
同樣地，若化合物之投藥量可使血清中濃度等于化合物對VR1之EC50或IC50時之最低劑量的兩倍濃度，而不會使實(shí)驗(yàn)室動物(如囓齒類)血清中ALT、LDH或AST濃度提高程度超過平行偽處理對照組之100％時，該化合物不會促進(jìn)肝酵素大量釋出。極更佳之具體實(shí)施例中，此等劑量不會使此等血清濃度超過平行對照組之75％或50％?；蛘?，在活體外肝細(xì)胞分析法中，若濃度(于活體外與肝細(xì)胞接觸及培養(yǎng)之培養(yǎng)基中或其它此等溶液中)等于化合物之EC50或IC50之濃度時，不會使任何此等肝酵素釋出至培養(yǎng)基中之量高于平行偽處理之對照組細(xì)胞培養(yǎng)基中所觀察到之底線值達(dá)可檢測之程度，則該化合物不會促進(jìn)肝酵素大量釋出。極更佳之具體實(shí)施例中，當(dāng)此等化合物濃度為該化合物EC50或IC50之5倍及較佳為10倍濃度時，不會使任何此等肝酵素釋出至培養(yǎng)基中之量高于底線值達(dá)可檢測之程度。
其它具體實(shí)施例中，某些較佳化合物不會在等于化合物對VR1之EC50或IC50之濃度下抑制或誘發(fā)微粒體細(xì)胞色素P450酵素活性，如CYP1A2活性、CYP2A6活性、CYP2C9活性、CYP2C19活性、CYP2D6活性、CYP2E1活性或CYP3A4活性。
某些較佳化合物在等于化合物之EC50或IC50之濃度下，不會使細(xì)胞裂解(例如采用小白鼠紅血球前驅(qū)細(xì)胞小核分析法、Ames小核分析法、螺旋小核分析法，等等測定)。其它具體實(shí)施例中，某些較佳化合物在此等濃度下不會誘發(fā)姊妹染色體(sister chromatid)交換(例如中國倉鼠卵巢細(xì)胞)。
如下文所討論，為了檢測目的，本文所提供之VR1調(diào)節(jié)劑可標(biāo)記同位素或放射性。例如化合物中可能有一個或多個原子被原子量或質(zhì)量數(shù)不同于通常天然存在之原子量或質(zhì)量數(shù)之相同元素置換。本文所提供化合物中可出現(xiàn)之同位素實(shí)例包括氫、碳、氮、氧、磷、氟與氯之同位素，如2H、3H、11C、13C、14C、15N、18O、17O、31P、32P、35S、18F與36Cl。此外，經(jīng)重同位素如氘(亦即2H)取代時，可因代謝安定性較高而產(chǎn)生某些治療優(yōu)勢，例如提高活體內(nèi)半衰期或降低所需劑量，因此于有些情況下較有利。
經(jīng)鹵烷基取代之嘧啶酮衍生物制法 經(jīng)鹵烷基取代之嘧啶酮衍生物一般可采用標(biāo)準(zhǔn)合成法制備。起始物可自如Sigma-Aldrich Corp.(St.Louis，MO)供貨商所提供之商品取得，或可由自商品取得之前體，采用已建立之方法制備。例如可采用類似下列反應(yīng)圖所示之合成途徑，及合成有機(jī)化學(xué)相關(guān)技藝已知之合成法制備。下列反應(yīng)圖中之代號系指本文所提供化合物所說明之任何基團(tuán)。
下列反應(yīng)圖與本文中某些縮寫包括 δ 化學(xué)位移 DCM二氯甲烷 DMF二甲基甲醯胺 DMSO 二甲亞砜 EtOAc 乙酸乙酯 EtOH 乙醇 h 時 1H NMR 質(zhì)核磁共振 HPLC 高效液相層析法 Hz 赫茲 min分鐘(s) MS 質(zhì)譜 (M+1) 質(zhì)量+1 n-BuLi 正丁基鋰 RT 室溫 TEA三乙基胺 TFA三氟乙酸 THF四氫呋喃 TLC薄層層析法 反應(yīng)圖
某些具體實(shí)施例中，本文所提供化合物可包含一個或多個不對稱碳原子，因此化合物可出現(xiàn)不同立體異構(gòu)型。此等型式可為例如消旋物或光學(xué)活性型式。如上述，所有立體異構(gòu)型均包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。盡管如此，仍可能需要得到單一鏡像異構(gòu)物(亦即光學(xué)活性型式)。制備單一鏡像異構(gòu)物之標(biāo)準(zhǔn)方法包括不對稱合成法與消旋物解析法。消旋物解析法可例如依一般方法進(jìn)行如于解析劑之存在下結(jié)晶或使用例如對掌性HPLC管柱層析。
化合物可在其合成法中使用包含至少一個放射性同位素原子之前體進(jìn)行放射性標(biāo)記。各放射性同位素較佳為碳(例如14C)、氫(例如3H)、硫(例如35S)或碘(例如125I)。標(biāo)記氚的化合物制法亦可于氚化之乙酸中，使用鉑催化之交換反應(yīng)；于氚化之三氟乙酸中，使用酸催化之交換反應(yīng)；或使用化合物作為受質(zhì)，與氚氣體進(jìn)行不均相之催化交換反應(yīng)。此外，某些前體可依需要使用氚氣體進(jìn)行氚-鹵素交換反應(yīng)，使用氚氣體還原不飽和鍵或使用氚硼化鈉還原。標(biāo)記放射性的化合物制法宜由專為合成標(biāo)記放射性之探針化合物的放射性同位素供貨商進(jìn)行。
醫(yī)藥組成物藥物組合物 本發(fā)明亦提供藥物組合物，其包含一種或多種本文所提供化合物，及至少一種生理上可接受的載體或賦形劑。藥物組合物可包含例如下列一項或多項水、緩沖液(例如中性之緩沖生理食鹽水或磷酸鹽緩沖生理食鹽水)、乙醇、礦物油、植物油、二甲亞砜、碳水化合物(例如葡萄糖、甘露糖、蔗糖或葡聚糖)、甘露糖醇、蛋白質(zhì)、輔劑、多肽或氨基酸(如甘胺酸)、抗氧化劑、螯合劑如EDTA或谷胱甘肽與/或防腐劑。此外，本文所提供之藥物組合物中亦可(但不一定)包括其它活性成分。
藥物組合物可調(diào)配供任何適當(dāng)投藥方式使用，包括例如局部、口服、經(jīng)鼻、經(jīng)直腸或非經(jīng)腸式投藥。本文所采用術(shù)語非經(jīng)腸式包括經(jīng)皮下、皮內(nèi)、血管內(nèi)(例如靜脈內(nèi))、肌內(nèi)、脊髓內(nèi)、顱內(nèi)、鞘內(nèi)、與腹膜內(nèi)注射，及任何類似之注射或輸液技術(shù)。某些具體實(shí)施例中，以適合口服之組合物較佳。此等組合物包括例如錠劑、糖衣錠、菱形錠、水性或油性懸浮液、可勻散之粉劑或粒劑、乳液、硬性或軟性膠囊或糖漿或酏劑。其它具體實(shí)施例中，藥物組合物可調(diào)配成冷凍干燥物。局部投藥用調(diào)配物可能較適于某些病癥(例如用于治療皮膚病如灼傷或瘙癢)。直接投藥至膀胱之調(diào)配物(膀胱內(nèi)投藥)可能較適于治療尿失禁與膀胱過動癥。
口服用組合物尚可包含一種或多種成分，如甜味劑、調(diào)味劑、著色劑與/或防腐劑，以提供吸引人且適口之制劑。錠劑包含活性成分與適合制造錠劑之生理上可接受的賦形劑混合。此等賦形劑包括例如惰性稀釋劑(例如碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉)、制粒劑與崩解劑(例如玉米淀粉或藻酸)、黏結(jié)劑(例如淀粉、明膠或金合歡膠)及潤滑劑(例如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石)。錠劑可采用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)形成，包括干式制粒法、直接壓縮法及濕式制粒法。錠劑可以沒有包衣或可依已知技術(shù)包覆包衣。
口服用調(diào)配物亦可呈硬明膠囊，其中，使活性成分與惰性固體稀釋劑混合(例如碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土)；或呈軟明膠囊，其中，使活性成分與水或油介質(zhì)混合(例如花生油、液態(tài)石蠟或橄欖油)。
水性懸浮液包含活性成分(群)與合適之賦形劑混合，如懸浮劑(例如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、藻酸鈉、聚乙烯吡咯啶酮、黃耆膠與金合歡膠)；與勻散劑或濕潤劑(例如天然磷脂如卵磷脂、亞烷基氧化物與脂肪酸之縮合產(chǎn)物如聚氧乙烯硬脂酸酯、環(huán)氧乙烷與長鏈脂族醇之縮合產(chǎn)物如十七伸乙基氧鯨蠟醇、環(huán)氧乙烷與衍生自脂肪酸及己糖醇之部份酯之縮合產(chǎn)物如聚氧乙烯山梨糖醇單油酸酯、或環(huán)氧乙烷與衍生自脂肪酸及己糖醇酐之部份酯之縮合產(chǎn)物如聚乙烯山梨糖醇酐單油酸酯)。水性懸浮液亦可包含一種或多種防腐劑例如對羥基苯甲酸乙酯或?qū)αu基苯甲酸正丙酯、一種或多種著色劑、一種或多種調(diào)味劑與/或一種或多種甜味劑，如蔗糖或糖精。
油性懸浮液之調(diào)配法為取活性成分(群)懸浮于植物油中(例如花生油、橄欖油、芝麻油或椰子油)或礦物油如液態(tài)石蠟。油性懸浮液可包含增稠劑如蜂蠟、硬性石蠟或鯨蠟醇?？商砑犹鹞秳?如如上述)與/或調(diào)味劑以提供適口之口服制劑。此等懸浮液可添加抗氧化劑如抗壞血酸進(jìn)行防腐。
適合制備水性懸浮液之可勻散性粉劑與粒劑可加水使活性成分與勻散劑或濕潤劑、懸浮劑與一種或多種防腐劑混合。合適之勻散劑或濕潤劑及懸浮劑實(shí)例已如上述。亦可包含其它賦形劑如甜味劑、調(diào)味劑與著色劑。
藥物組合物亦可調(diào)配成水包油性乳液。油相可為植物油(例如橄欖油或花生油)、礦物油(例如液態(tài)石蠟)或其混合物。合適之乳化劑包括天然膠質(zhì)(例如金合歡膠或黃耆膠)、天然磷脂(例如大豆卵磷脂、與衍生自脂肪酸及己糖醇之酯或部份酯)、酸酐(例如山梨糖醇酐單油酸酯)及衍生自脂肪酸及己糖醇酐之部份酯與環(huán)氧乙烷之縮合產(chǎn)物(例如聚氧乙烯山梨糖醇酐單油酸酯)。乳液亦可包含一種或多種甜味劑與/或調(diào)味劑。
糖漿與酏劑可使用甜味劑調(diào)配，如甘油、丙二醇、山梨糖醇或蔗糖。此等調(diào)配物亦可包含一種或多種緩和劑、防腐劑、調(diào)味劑與/或著色劑。
局部投藥用調(diào)配物典型地包含局部用媒劑與活性劑(群)組合，可添加或不添加其它可視需選用之成分。合適之局部用媒劑與其它成分系技藝中已知者，且咸了解，其可依特定之物理形式與傳送模式選擇媒劑。局部用媒劑包括水；有機(jī)溶劑如醇類(例如乙醇或異丙醇)或甘油；二醇類(例如丁二醇、異戊間二烯二醇或丙二醇)；脂族醇(例如羊毛脂)；水與有機(jī)溶劑之混合物，及有機(jī)溶劑之混合物如醇與甘油混合物；以脂質(zhì)為主之物質(zhì)如脂肪酸、?；视?包括油類如礦物油與天然或合成之脂肪)、磷酸甘油酯、神經(jīng)鞘脂質(zhì)與蠟類；以蛋白質(zhì)為主之物質(zhì)如膠原與明膠；以聚硅氧為主之物質(zhì)(包括非揮發(fā)性及揮發(fā)性)；與以烴為主之物質(zhì)如小海綿與聚合物母質(zhì)。組合物可另包括一種或多種適合改善所施用調(diào)配物之安定性或有效性之成分，如安定劑、懸浮劑、乳化劑、黏度調(diào)整劑、膠凝劑、防腐劑、抗氧化劑、皮膚滲透加強(qiáng)劑、濕化劑與持續(xù)釋放性材料。此等成分實(shí)例說明于Martindale之The Extra Pharmacopoeia(Pharmaceutical Press，London1993)與Remington之“The Science and Practice of Pharmacy”，第21版，Lippincott Williams & Wilkins，Philadelphia，PA(2005)。調(diào)配物可包括微膠囊，如羥甲基纖維素或明膠微膠囊、微脂粒、白蛋白微小球、微乳液、毫微粒子或毫微膠囊。
局部用調(diào)配物可制成多種物理型式，包括例如固體、糊劑、乳霜、泡沫物、洗液、凝膠、粉劑、水性液體與乳液。此等藥學(xué)上可接受的型式之物理外觀與黏度可使用調(diào)配物中所含乳化劑與黏度調(diào)整劑及其用量來控制。固體通常堅實(shí)，無法傾倒，經(jīng)常調(diào)配成棒狀或桿狀或粒狀；固體可不透明或透明，其可視需要包含溶劑、乳化劑、濕化劑、軟化劑、香料、染料/著色劑、防腐劑與其它可提高或加強(qiáng)最終產(chǎn)物效力之活性成分。乳霜與洗液通常類似，其差異主要在其黏度；洗液與乳霜二者均可能不透明、半透明或澄清，經(jīng)常包含乳化劑、溶劑與黏度調(diào)整劑，及濕化劑、軟化劑、香料、染料/著色劑、防腐劑與其它可提高或加強(qiáng)最終產(chǎn)物效力之活性成分。凝膠可制成多種不同黏度，由濃稠或高黏度至稀薄或低黏度。此等調(diào)配物如同洗液與乳霜，亦可包含溶劑、乳化劑、濕化劑、軟化劑、香料、染料/著色劑、防腐劑與其它可提高或加強(qiáng)最終產(chǎn)物效力之活性成分。液體比乳霜、洗液或凝膠稀薄，通常不包含乳化劑。液態(tài)局部產(chǎn)品經(jīng)常包含溶劑、乳化劑、濕化劑、軟化劑、香料、染料/著色劑、防腐劑與其它可提高或加強(qiáng)最終產(chǎn)物效力之活性成分。
適用于局部用調(diào)配物之乳化劑包括(但不限于)離子性乳化劑、鯨蠟硬脂基醇、非離子性乳化劑如聚氧乙烯油基醚、PEG-40硬脂酸酯、鯨蠟硬脂醇醚(ceteareth)-12、鯨蠟硬脂醇醚-20、鯨蠟硬脂醇醚-30、鯨蠟硬脂醇(ceteareth alcohol)、PEG-100硬脂酸酯與硬脂酸甘油酯。合適之黏度調(diào)整劑包括(但不限于)保護(hù)性膠體或非離子性膠質(zhì)如羥乙基纖維素、黃原膠、硅酸鎂鋁、硅石、微晶蠟、蜂蠟、石蠟與棕櫚酸鯨蠟酯。凝膠組合物之形成法可添加膠凝劑如脫乙醯殼多糖、甲基纖維素、乙基纖維素、聚乙烯醇、聚四元鹽、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、聚羧基制劑(carbomer)或胺化甘草酸鹽。合適之界面活性劑包括(但不限于)非離子性、兩性、離子性與陰離子性界面活性劑。局部用調(diào)配物中可使用例如下列一種或多種二甲硅酮共多元醇、聚山梨酸酯20、聚山梨酸酯40、聚山梨酸酯60、聚山梨酸酯80、月桂醯胺DEA、椰子醯胺DEA與椰子醯胺MEA、油基甜菜堿、椰子醯胺丙基磷脂?；鵓G-甲基氯化銨與月桂基醚硫酸銨。合適之防腐劑包括(但不限于)抗微生物劑如對氧苯甲酸甲酯、對氧苯甲酸丙酯、山梨酸、苯甲酸與甲醛，及物理性安定劑與抗氧化劑如維生素E、抗壞血酸鈉/抗壞血酸與棓酸丙酯。合適之濕潤劑包括(但不限于)乳酸與其它羥基酸與其鹽類、甘油、丙二醇與丁二醇。合適之軟化劑包括羊毛脂醇、羊毛脂、羊毛脂衍生物、膽固醇、凡士林、新戊酸異硬脂基酯與礦物油。合適之香料與色素包括(但不限于)FD&C紅色40號與FD&C黃色5號。局部用調(diào)配物中可包含之其它合適之額外成分包括(但不限于)研磨劑、吸收劑、抗結(jié)塊劑、消泡劑、抗靜電劑、收斂劑(例如美洲金縷梅、酒精與藥草萃液如甘菊萃液)、結(jié)合劑/賦形劑、緩沖劑、螯合劑、膜形成劑、調(diào)理劑、推進(jìn)劑、不透明劑、pH調(diào)整劑與保護(hù)劑。
調(diào)配凝膠之合適局部用媒劑實(shí)例為羥丙基纖維素(2.1％)；70/30異丙醇/水(90.9％)；丙二醇(5.1％)；與聚山梨酸酯80(1.9％)。調(diào)配泡沫物之合適局部用媒劑實(shí)例為鯨蠟醇(1.1％)；硬脂醇(0.5％；季銨鹽(Quaternium)52(1.0％)；丙二醇(2.0％)；乙醇95PGF3(61.05％)；去離子水(30.05％)；P75烴推進(jìn)劑(4.30％)。所有百分比均以重量計。
傳送局部用組合物之典型方式包括使用手指涂抹；使用物理性涂抹器施用如布、衛(wèi)生紙、棉花、小棒或刷子；噴灑(包括霧化、氣霧或泡沫噴灑)；滴藥法；傾注；浸泡；及潤洗。
藥物組合物亦可制成無菌之注射用水性或油性懸浮液。依所使用之媒劑與濃度而定，本文所提供化合物可以懸浮或溶解于媒劑中。此等組合物可依據(jù)相關(guān)技藝已知之方式，使用如上述之合適勻散劑、濕潤劑與/或懸浮劑調(diào)配?？山邮艿拿絼┡c溶劑中，可使用水、1，3-丁二醇、林格氏(Ringer′s)溶液與等張性氯化鈉溶液。此外，可使用無菌之固定油類作為溶劑或懸浮介質(zhì)。因此任何溫和之固定油均可使用，包括合成之單-或二酸甘油酯。此外，用于制備注射用組合物之制劑之脂肪酸如油酸與輔劑如局部麻醉劑、防腐劑與/或緩沖劑可溶于媒劑中。
藥物組合物亦可調(diào)配成栓劑(例如經(jīng)直腸投藥用)。此等組合物之制法可由藥物與常溫下呈固體，但在直腸溫度下卻呈液體之合適無刺激性賦形劑混合，因此可于直腸中融化釋出藥物。合適之賦形劑包括例如可可奶油與聚乙二醇。
吸入式組合物典型地可呈溶液、懸浮液或乳液形式使用，其可呈干粉投藥或呈氣霧劑，使用常用之推進(jìn)劑(例如二氯二氟甲烷或三氯氟甲烷)投藥。
藥物組合物可調(diào)配成依預(yù)定速率釋出。實(shí)時釋放法可藉由例如舌下投藥法達(dá)成(亦即經(jīng)口投藥，使活性成份(群)得以迅速經(jīng)由舌下血管而非消化道吸收)?？刂漆尫胖{(diào)配物(亦即如可在投藥后減慢及/或延緩活性成份(群)釋放之膠囊、錠劑或包衣錠劑)可經(jīng)例如口、直腸或皮下植入物投藥或植入標(biāo)靶位置投藥。通常，控制釋放調(diào)配物包含母質(zhì)及/或在腸胃道(或植入位置)中延緩崩解及吸收之包衣，以提供延緩作用或長期持續(xù)作用。其中一種控制釋放調(diào)配物為持續(xù)釋放調(diào)配物，其中至少一種活性成份系依恒定速率長期持續(xù)釋放。較佳者，治療劑之釋放速率會使得血液(例如血漿)濃度在至少4小時內(nèi)，較佳為至少8小時內(nèi)，更佳為至少12小時內(nèi)，保持在治療范圍內(nèi)，但低于毒性范圍。此等調(diào)配物通?？刹捎昧?xí)知技術(shù)制備，且經(jīng)由例如口、直腸或皮下植入物投藥，或植入所需標(biāo)靶位置投藥。此等調(diào)配物所使用之載體為生物可兼容性且亦可為生物可降解性；較佳調(diào)配物可相當(dāng)恒定地釋放調(diào)節(jié)劑。持續(xù)釋放調(diào)配物中之調(diào)節(jié)劑含量依例如植入位置、釋放速率與期望之期效、及需治療或預(yù)防之病癥性質(zhì)決定。
控制釋放法可藉由組合活性成份(群)與本身即可改變釋放速率之母質(zhì)材料及/或利用控制釋放包衣達(dá)成。釋放速率可依相關(guān)技藝已知方法變化，包括(a)改變包衣厚度或組成，(b)改變包衣中增塑劑添加量或添加方式，(c)包含其它成份，如釋放修飾劑，(d)改變母質(zhì)之組成、粒子大小或粒子形狀，與(e)透過包衣提供一個或多個信道。持續(xù)釋放調(diào)配物中之調(diào)節(jié)劑含量依例如投藥方法(例如植入位置)、釋放速率與期望效期、及所治療或預(yù)防病癥之性質(zhì)而異。
本身有或沒有控制釋放功能之母質(zhì)材料通常為任何可承載活性成份(群)之材料。例如可使用緩釋材料，如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯?；钚猿煞?群)可在形成劑型(例如錠劑)之前先與母質(zhì)材料組合?；蛘?，或另外，活性成份(群)可包覆在包含母質(zhì)材料之粒子、顆粒、球粒、微粒、小珠或丸粒表面上。此等包覆法可藉由習(xí)知方法達(dá)成，如取活性成份(群)溶于水或其它合適溶劑后，噴灑?？梢曅枰忍砑悠渌煞莺螅龠M(jìn)行包覆(例如促進(jìn)活性成份(群)與母質(zhì)材料結(jié)合或?yàn)槿芤荷仙?。隨后再先以隔離劑包覆母質(zhì)后，再涂覆控制釋放包衣。若需要時，可包埋多重包衣母質(zhì)單位，形成最終劑型。
某些具體實(shí)施例中，控制釋放法系利用控制釋放包衣達(dá)成(亦即可依控制速率釋放活性成份(群)至水性介質(zhì)中之包衣)?？刂漆尫虐聭?yīng)為強(qiáng)力之連續(xù)膜，其平滑、可以承載色素與其它添加物、無毒性、惰性且不沾黏。調(diào)控調(diào)節(jié)劑釋放之包衣包括不依賴pH之包衣、依賴pH之包衣(其可用于在胃中釋放調(diào)節(jié)劑)與腸溶性包衣(其容許調(diào)配物完整通過胃，再進(jìn)入小腸，包衣在此時才溶解，由身體吸收其內(nèi)容物)。咸了解，可使用多重包衣(例如得以于胃中釋放一部份劑量，再延著胃腸道釋放另一部份)。例如一部份活性成份(群)可包覆在腸溶性包衣外面，以于胃中釋放，母質(zhì)核心中其余活性成份(群)則因受到腸溶性包衣保護(hù)，需直到GI道中才釋放。依賴pH之包衣包括例如蟲膠、纖維素乙酸酯酞酸酯、聚乙烯基乙酸酯酞酸酯、羥丙基甲基纖維素酞酸酯、甲基丙烯酸酯共聚物與玉米蛋白。
某些具體實(shí)施例中，包衣為疏水性材料，較佳用量應(yīng)在投藥后有效減緩膠凝劑之水合作用。合適之疏水性材料包括烷基纖維素(例如乙基纖維素或羧甲基纖維素)、纖維素醚類、纖維素酯類、丙烯酸聚合物(例如聚(丙烯酸)、聚(甲基丙烯酸)、丙烯酸與甲基丙烯酸共聚物、甲基丙烯酸甲酯共聚物、甲基丙烯酸乙氧基乙酯、甲基丙烯酸氰基乙酯、甲基丙烯酸烷基醯胺共聚物、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚丙烯醯胺、甲基丙烯酸銨共聚物、甲基丙烯酸氨基烷基酯共聚物、聚(甲基丙烯酸酐)與甲基丙烯酸甘油酯共聚物)與如上述物質(zhì)之混合物。乙基纖維素之代表性水性勻散液包括例如

(FMC Corp.，Philadelphia，PA)與

(Colorcon，Inc.，West Point，PA)，此二者均可依據(jù)制商之指示涂覆基質(zhì)。代表性丙烯酸聚合物包括例如各種不同

(Rohm America，Piscataway，NJ)聚合物，其可依據(jù)制造商之指示單獨(dú)使用或依所需釋放形態(tài)組合使用。
包含疏水性材料之水性勻散劑之包衣之物理性質(zhì)可藉由添加一種或多種增塑劑來改良。烷基纖維素之合適增塑劑包括例如癸二酸二丁基酯、酞酸二乙酯、檸檬酸三乙酯、檸檬酸三丁酯與三醋精。丙烯酸聚合物之合適增塑劑包括例如檸檬酸酯類，如檸檬酸三乙酯與檸檬酸三丁酯、酞酸二丁酯、聚乙二醇、丙二醇、酞酸二乙酯、蓖麻油與三醋精。
控制釋放之包衣通常采用習(xí)知技術(shù)涂覆，如以水性勻散液之形式噴灑。若需要時，包衣可包含孔洞或信道以促進(jìn)活性成份釋放。孔洞與信道可依相關(guān)技藝已知方法形成，包括添加有機(jī)或無機(jī)材料，再自包衣中溶解、萃取或滲濾至使用環(huán)境中。某些此等形成孔洞之材料包括親水性之聚合物，如羥烷基纖維素(例如羥丙基甲基纖維素)、纖維素醚類、合成之水溶性聚合物(例如聚乙烯基吡咯啶酮、交聯(lián)聚乙烯基吡咯啶酮與聚環(huán)氧乙烷)、水溶性聚右旋糖、醣類與多醣及堿金屬鹽?；蛘撸蛄硗?，控制釋放包衣可包括一個或多個孔隙，其可依彼等說明于美國專利案案號3,845,770；4,034,758；4,077,407；4,088,864；4,783,337與5,071,607說明之方法形成。控制釋放法亦可利用穿皮式貼布，采用習(xí)知技術(shù)達(dá)成(參見例如美國專利案案號4,668,232)。
其它控制釋放調(diào)配物與其成份之實(shí)例可參見例如美國專利案案號5,524,060；4,572,833；4,587,117；4,606,909；4,610,870；4,684,516；4,777,049；4,994,276；4,996,058；5,128,143；5,202,128；5,376,384；5,384,133；5,445,829；5,510,119；5,618,560；5,643,604；5,891,474；5,958,456；6,039,980；6,143,353；6,126,969；6,156,342；6,197,347；6,387,394；6,399,096；6,437,000；6,447,796；6,475,493；6,491,950；6,524,615；6,838,094；6,905,709；6,923,984；6,923,988；與6,911,217；其中有關(guān)制備控制釋放劑型之教示內(nèi)容已以引用方式分別并入本文中。
除了或并用上述投藥法外，本文所提供化合物亦可加至食物或飲水中(例如供投藥給非人類動物時，包括寵物(如狗與貓)與家畜)。動物飼料與飲水組合物之調(diào)配可使動物在進(jìn)食時，同時攝取適量組合物。亦適合使組合物形成可加至飼料或飲水中之預(yù)混合物。
該化合物通常給予治療有效量。較佳之全身劑量不超過每天每公斤體重50毫克(例如每天每公斤體重約0.001毫克至約50毫克)，口服劑量通常高于靜脈內(nèi)投藥劑量之約5至20倍(例如每天每公斤體重0.01至40毫克)。
可與載體材料組合使用形成單一劑量單位之活性成分用量將依例如所治療患者、特定之投藥模式及共同給予之藥物而變化。劑量單位通常包含約10微克至約500毫克活性成分。最佳劑量可采用相關(guān)技藝已知之例行試驗(yàn)與方法決定。
藥物組合物可經(jīng)包裝以用于治療對VR1調(diào)節(jié)作用有反應(yīng)之病癥(例如治療曝露于類香草醇配位體或其它刺激物、疼痛、瘙癢、肥胖或尿失禁)。包裝之藥物組合物通常包括(i)一容器，內(nèi)裝包含至少一種本文所說明VR1調(diào)節(jié)劑之藥物組合物及(ii)說明書(例如卷標(biāo)或包裝內(nèi)頁)，指示其中所包含之組合物系用于治療患者對VR1調(diào)節(jié)作用有反應(yīng)之病癥。
使用方法 本文所提供VR1調(diào)節(jié)劑可用于多方面改變辣椒素受體之活性與/或活化作用，包括活體內(nèi)與活體外。某些態(tài)樣中，VR1拮抗劑可用于活體外或活體內(nèi)抑制類香草醇配位體激動劑(如辣椒素與/或RTX)與辣椒素受體之結(jié)合性。通常，此等方法包括之步驟為使辣椒素受體與一種或多種本文所提供VR1調(diào)節(jié)劑，于類香草醇配位體存在下，于水溶液中，及于適合配位體與辣椒素受體結(jié)合之條件下接觸。VR1調(diào)節(jié)劑(群)之含量濃度通常足以于活體外改變類香草醇配位體與VR1之結(jié)合性(使用實(shí)例5所示之分析法)及/或VR1-媒介之訊息傳遞(使用實(shí)例6所示之分析法)。辣椒素受體可在溶液或懸浮液中(例如含于單離之膜或細(xì)胞制劑中)，或含于培養(yǎng)或單離的細(xì)胞中。某些具體實(shí)施例中，辣椒素受體系由患者之神經(jīng)元細(xì)胞表達(dá)，且該水溶液為體液。較佳者，可對動物給予一種或多種VR1調(diào)節(jié)劑，其投藥量應(yīng)使動物體內(nèi)至少一種體液之VR1調(diào)節(jié)劑之治療有效濃度為1微摩爾或以下；較佳為500毫微摩爾或以下；更佳為100毫微摩爾或以下，50毫微摩爾或以下，20毫微摩爾或以下，或10毫微摩爾或以下。例如此等化合物可以治療有效量小于20毫克/公斤體重，較佳為小于5毫克/公斤，有時候小于1毫克/公斤給予。
本文亦提供一種調(diào)節(jié)(較佳為降低)細(xì)胞辣椒素受體之訊息傳遞活性(亦即鈣傳導(dǎo)性)之方法。此等調(diào)節(jié)法系使辣椒素受體(活體外或活體內(nèi))與一種或多種本文所提供VR1調(diào)節(jié)劑，于適合調(diào)節(jié)劑(群)與受體結(jié)合之條件下接觸而達(dá)成。VR1調(diào)節(jié)劑(群)之含量濃度通常足以于活體外改變類香草醇配位體與VR1之結(jié)合性及/或本文所說明之VR1-媒介之訊息傳遞。受體可在溶液或懸浮液中，含于培養(yǎng)或單離的細(xì)胞制劑或在患者體內(nèi)的細(xì)胞中。例如細(xì)胞可為于動物活體內(nèi)接觸之神經(jīng)元細(xì)胞?；蛘?，細(xì)胞可為于動物活體內(nèi)接觸之上皮細(xì)胞，如膀胱上皮細(xì)胞或呼吸道上皮細(xì)胞。訊息傳遞活性之調(diào)節(jié)作用可藉由檢測其對鈣離子傳導(dǎo)性(亦稱為鈣移動性或流量)之影響來分析。訊息傳遞活性之調(diào)節(jié)作用亦可藉由檢測接受本文所提供一種或多種VR1調(diào)節(jié)劑治療之患者癥狀之改變來分析(例如疼痛、灼傷感覺、支氣管收縮、發(fā)炎、咳嗽、打嗝、瘙癢、停經(jīng)癥狀、尿失禁或膀胱過動癥)。
本文所提供VR1調(diào)節(jié)劑(群)較佳為經(jīng)口或局部給予患者(例如人類)，且當(dāng)調(diào)節(jié)VR1訊息傳遞活性時，存在于動物之至少一種體液中。用于此方法于活體外調(diào)節(jié)VR1訊息傳遞活性之較佳VR1調(diào)節(jié)劑濃度為1毫微摩爾或以下，較佳為100微微摩爾或以下，更佳為20微微摩爾或以下，及體液如血液中的活體內(nèi)濃度為1微摩爾或以下，500毫微摩爾或以下，或100毫微摩爾或以下。
本發(fā)明并提供一種治療對VR1調(diào)節(jié)作用有反應(yīng)之病癥之方法。本發(fā)明中，術(shù)語「治療」包括減緩疾病之治療及癥狀之治療，其可為預(yù)防性(亦即在癥狀出現(xiàn)之前處理，以預(yù)防、延緩或降低癥狀之嚴(yán)重性)或治療性(亦即在癥狀出現(xiàn)后處理，以降低癥狀之嚴(yán)重性與/或持續(xù)時間)。不論類香草醇配位體之局部含量，若病癥之特征為辣椒素受體活性不當(dāng)，與/或若辣椒素受體活性之調(diào)節(jié)作用造成病癥或其癥狀減輕時，則稱該病癥「對VR1調(diào)節(jié)作用有反應(yīng)」。此等病癥包括例如因曝露于VR1活化刺激所造成之癥狀、疼痛、呼吸障礙(如咳嗽、氣喘、慢性阻塞性肺病、慢性支氣管炎、纖維性囊腫與鼻炎，包括過敏性鼻炎如季節(jié)性與常年性鼻炎，與非過敏性鼻炎)、抑郁、瘙癢、尿失禁、膀胱過動癥、停經(jīng)癥狀、聽覺受損(例如耳蝸受損)、耳鳴、聽覺過敏、糖尿病與糖尿病前期病癥(例如胰島素抗性或葡萄糖耐受性)、打嗝與肥胖，其更詳細(xì)說明于下文中。此等病癥可采用相關(guān)技藝已知之標(biāo)準(zhǔn)診斷及追蹤。患者可包括人類、家庭寵物與家畜，其劑量如上述。
療程可能隨所使用的化合物與所治療之特定病癥而定。然而，治療大多數(shù)疾患時，以每天投藥4次或以下之頻率較佳。通常，以每天投藥2次之劑量療程更佳，以每天投藥1次特別佳。治療急性疼痛時，需要可迅速達(dá)到有效濃度之單一劑量。然而咸了解，對任何特定患者之明確劑量與療程將依多項因素決定，包括所使用明確化合物之活性、年齡、體重、一般健康情形、性別、飲食、投藥時間、投藥途徑與排泄速度、藥物組合與治療期間特定疾病之嚴(yán)重性。通常，以足以提供有效療法之最低劑量較佳?？刹捎眠m合所治療或預(yù)防病癥之醫(yī)學(xué)或獸醫(yī)學(xué)標(biāo)準(zhǔn)追蹤患者之治療有效性。
因曝露于辣椒素受體活化刺激而產(chǎn)生癥狀之患者包括因熱、光、催淚氣體或酸而引起灼傷之個體及黏膜曝露于(例如因食入、吸入或眼睛接觸)辣椒素(例如辣椒或胡椒噴霧)或相關(guān)刺激物如酸、催淚氣體、傳染媒介(群)或空氣污染之個體。所產(chǎn)生之癥狀(可使用本文所提供VR1調(diào)節(jié)劑，尤指拮抗劑治療之癥狀)可包括例如疼痛、支氣管收縮與發(fā)炎。
可使用本文所提供VR1調(diào)節(jié)劑治療的疼痛包括慢性或急性疼痛，包括(但不限于)周邊神經(jīng)所媒介的疼痛(尤指神經(jīng)性疼痛)。本文所提供化合物可用于治療例如乳房切除手術(shù)后疼痛綜合征、殘肢疼痛、幻肢疼痛、口腔神經(jīng)性疼痛、牙痛(牙齒疼痛)、假牙疼痛、皰疹后神經(jīng)痛、糖尿病神經(jīng)性病變、化療誘發(fā)之神經(jīng)性病變、反射性交感神經(jīng)失養(yǎng)癥、三叉神經(jīng)痛、骨關(guān)節(jié)炎(osteoarthritis)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、纖維肌痛、吉蘭-拜瑞(Guillain-Barre)綜合征、感覺異常性股痛、口腔灼熱綜合征及/或與神經(jīng)及神經(jīng)根傷害有關(guān)的疼痛，包括與周邊神經(jīng)障礙有關(guān)的疼痛(例如神經(jīng)壓迫性損害與臂叢撕脫、截肢、周邊神經(jīng)性病變(包括兩側(cè)周邊神經(jīng)病變)、三叉神經(jīng)痛、非典型顏面疼痛、神經(jīng)根傷害與蜘蛛膜炎)。其它神經(jīng)病變性疼痛病癥包括灼痛(反射性交感神經(jīng)失養(yǎng)癥-RSD、周邊神經(jīng)損傷后續(xù)發(fā))、神經(jīng)炎(包括例如坐骨神經(jīng)炎、周邊神經(jīng)炎、多發(fā)神經(jīng)炎、眼神經(jīng)炎、發(fā)熱后神經(jīng)炎、游走性神經(jīng)炎、節(jié)段神經(jīng)炎與貢博氏(Gombault′s)神經(jīng)炎)、神經(jīng)元炎、神經(jīng)痛(例如如上述、頸臂神經(jīng)痛、顱側(cè)神經(jīng)痛、膝狀神經(jīng)痛、舌咽神經(jīng)痛、偏頭痛神經(jīng)痛、自發(fā)性神經(jīng)痛、肋間神經(jīng)痛、乳房神經(jīng)痛、下頜關(guān)節(jié)神經(jīng)痛、莫頓氏(Morton′s)神經(jīng)痛、鼻睫狀神經(jīng)痛、枕骨神經(jīng)痛、紅色神經(jīng)痛、斯盧德氏(Sluder′s)神經(jīng)痛、脾顎神經(jīng)痛、眶上神經(jīng)痛與翼管神經(jīng)痛)、與手術(shù)相關(guān)的疼痛、肌肉骨骼疼痛、肌筋膜疼痛綜合征、AIDS相關(guān)神經(jīng)性病變、MS相關(guān)神經(jīng)性病變、中樞神經(jīng)系統(tǒng)疼痛(例如因腦干損傷、坐骨神經(jīng)痛、及僵直性脊椎炎引起的疼痛)及脊椎疼痛(包括與脊柱傷害相關(guān)的疼痛)?？梢辣疚牡恼f明治療頭痛，包括涉及周邊神經(jīng)活性之頭痛。此等疼痛包括例如竇、簇集(亦即偏頭痛神經(jīng)痛)與緊張性頭痛、偏頭痛、顳下頷疼痛與上頷竇疼痛。例如當(dāng)患者出現(xiàn)偏頭痛前之先兆時，即可給予本文所提供的化合物預(yù)防偏頭痛。其它可依本文所說明治療的疼痛病癥包括沙爾科氏(Charcot′s)疼痛、腸脹氣疼痛、耳痛、心臟痛、肌肉痛、眼睛痛、口腔顏面疼痛(例如牙痛)、腹痛、婦科疼痛(例如月經(jīng)疼痛、痛經(jīng)、與囊腫有關(guān)的疼痛、分娩疼痛、慢性骨盆腔疼痛、慢性前列腺炎與子宮內(nèi)膜異位癥)、急性與慢性背痛(例如下背疼痛)、痛風(fēng)、瘢痕疼痛、痔瘡疼痛、消化不良疼痛、絞痛、神經(jīng)根疼痛、「非疼痛性」神經(jīng)性病變、復(fù)合區(qū)域疼痛綜合征、等位疼痛與異位疼痛-包括癌癥的相關(guān)疼痛，通常稱為癌痛(例如骨癌患者)、與曝露于毒液有關(guān)的疼痛(與發(fā)炎)(例如因蛇咬傷、蜘蛛咬傷、或昆蟲叮咬)及創(chuàng)傷的相關(guān)疼痛(例如手術(shù)后疼痛、會陰切開疼痛、割傷疼痛、挫傷與斷骨與燒燙傷疼痛，尤指與其相關(guān)的原發(fā)性痛覺過敏)。其它可依本文所述治療的疼痛病癥包括與如上述呼吸障礙、自體免疫疾病、免疫缺乏性病變、熱潮紅、發(fā)炎性腸道疾病、胃食道回流綜合征(GERD)、腸躁癥與/或發(fā)炎性腸道疾病相關(guān)的疼痛。
某些態(tài)樣中，本文所提供VR1調(diào)節(jié)劑可用于治療機(jī)械性疼痛。本文所采用術(shù)語「機(jī)械性疼痛」指頭痛以外的疼痛，其不為神經(jīng)病變性或因曝露于熱、冷或外來化學(xué)刺激所致。機(jī)械性疼痛包括物理性創(chuàng)傷(不為熱或化學(xué)燒燙傷或其它曝露到有害化學(xué)物質(zhì)之刺激與/或疼痛)如手術(shù)后疼痛及因割傷、挫傷與斷骨引起的疼痛；牙痛、假牙疼痛；神經(jīng)根疼痛；骨關(guān)節(jié)炎；類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎；纖維肌痛；感覺異常性股痛；背痛；癌癥的相關(guān)疼痛；絞痛；腕管綜合征；及因骨折、分娩、痔瘡、腸部脹氣、消化不良及月經(jīng)引起的疼痛。
可治療的瘙癢病癥包括干癬性瘙癢、因血液透析引起的瘙癢、瘧疾引起的瘙癢，及與外陰前庭炎有關(guān)的瘙癢、接觸性皮膚、昆蟲叮咬與皮膚過敏?？梢辣疚牡恼f明治療的尿道病癥包括尿失禁(包括溢流性失禁、緊迫性失禁與腹部壓力性失禁)，及過動性或不穩(wěn)定性膀胱病癥(包括膀胱迫肌過度反射、因脊柱造成迫肌過度反射與膀胱過度敏感)。某些此等治療法中，VR1調(diào)節(jié)劑系經(jīng)由導(dǎo)管或類似裝置投藥，可直接注射VR1調(diào)節(jié)劑至膀胱中。本文所提供化合物亦可用為止咳劑(預(yù)防、緩解或壓抑咳嗽，包括因給予如ACE抑制劑所誘發(fā)的咳嗽)、用于治療打嗝、治療停經(jīng)癥狀(如熱潮紅)及促進(jìn)肥胖患者減輕體重。
其它態(tài)樣中，本文所提供VR1調(diào)節(jié)劑可用于組合療法中，供治療涉及疼痛與/或發(fā)炎成分之癥狀。此等病癥包括例如自體免疫病變與已知具有發(fā)炎成分之病理性自體免疫反應(yīng)，包括(但不限于)關(guān)節(jié)炎(尤指類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)、干癬、克隆氏癥(Crohn′s disease)、紅斑性狼瘡、腸躁癥、組織移植物排斥與移植器官之過急性排斥。其它此等病癥包括創(chuàng)傷(例如頭部或脊柱受傷)、心臟與腦血管疾病與某些傳染性疾病。
此等組合療法中，VR1調(diào)節(jié)劑系與止痛劑與/或消炎劑一起給予至患者。VR1調(diào)節(jié)劑與止痛劑與/或消炎劑可含在同一藥物組合物中，或可分開依任一順序投藥。消炎劑包括例如非類固醇消炎藥(NSAID)、非專一性與環(huán)氧化酶-2專一性環(huán)氧化酶酵素抑制劑、金化合物、皮質(zhì)類固醇、胺甲蝶呤、腫瘤壞死因子(TNF)受體拮抗劑、抗-TNFα抗體、抗-C5抗體與間白素-1(IL-1)受體拮抗劑。NSAID實(shí)例包括(但不限于)布洛芬(ibuprofen)、氟布洛芬(flurbiprofen)、萘普生(naproxen)或萘普生鈉、雙氯芬酸(diclofenac)、雙氯芬酸鈉與米索前列醇(misoprostol)的組合、速靈達(dá)(sulindac)、丙(oxaprozin)、二氟尼柳(diflunisal)、炎痛喜康(piroxicam)、吲哚美辛(indomethacin)、乙哚乙酸鹽(etodolac)、非諾洛芬鈣(fenoprofen calcium)、酮洛芬(ketoprofen)、萘丁美酮鈉(sodiumnabumetone)、柳氮磺胺嘧啶(sulfasalazine))、托美汀鈉(tolmetin sodium)、及羥氯楏(hydroxychloroquine)。有一類NSAID包括抑制環(huán)氧化酶酵素的化合物，此等化合物包括希利克補(bǔ)(celecoxib)與洛菲克補(bǔ)(rofecoxib)。NSAID尚包括水楊酸鹽如乙酰基水楊酸或阿司匹林、水楊酸鈉、膽堿與水楊酸鎂與水楊醯水楊酸，及皮質(zhì)類固醇如可體松、地塞美松(dexamethasone)、甲基氫化潑尼松(methylprednisolone)、氫化潑尼松、氫化潑尼松磷酸鈉與潑尼松。其它消炎劑包括美?？?meloxicam)、洛弗克(rofecoxib)、希利克補(bǔ)(celecoxib)、抑利克補(bǔ)(etoricoxib)、普克補(bǔ)(parecoxib)、瓦克補(bǔ)(valdecoxib)與特利克補(bǔ)(tilicoxib)。
此等組合療法中，VR1調(diào)節(jié)劑之合適劑量通常如上述。消炎劑之劑量與投藥方法可參見例如制造商于Physician′s Desk Reference中的說明。某些具體實(shí)施例中，VR1調(diào)節(jié)劑與消炎劑的組合投藥結(jié)果可降低消炎劑要產(chǎn)生治療效果時所需劑量(例如降低最小之治療有效量)。因此，本發(fā)明組合或組合投藥法中，消炎劑之劑量最好低于不與VR1拮抗劑組合投藥時，制造商所建議之最高消炎劑劑量。此劑量低于不與VR1拮抗劑組合投藥時，制造商所建議之最高消炎劑劑量之3/4時更佳，甚至更佳為低于1/2，極佳為低于1/4，最佳劑量為低于最高劑量之10％。咸了解，組合中VR1拮抗劑成分要達(dá)到所需效果時所需劑量同樣會受組合中消炎劑成分劑量與效力影響。
某些較佳具體實(shí)施例中，VR1調(diào)節(jié)劑與消炎劑的組合投藥法系將一種或多種VR1調(diào)節(jié)劑與一種或多種消炎劑包裝在同一包裝中，在同一包裝中分裝在不同容器中、或由一種或多種VR1拮抗劑與一種或多種消炎劑形成混合物裝在同一容器中。較佳混合物系調(diào)配成口服投藥用(例如形成丸劑、膠囊、錠劑，等等)。某些具體實(shí)施例中，包裝中包含卷標(biāo)，指示該一種或多種VR1調(diào)節(jié)劑與一種或多種消炎劑系共同用于治療發(fā)炎疼痛病癥。
其它態(tài)樣中，本文所提供VR1調(diào)節(jié)劑可與一種或多種其它緩解疼痛之藥物組合使用。某些此等藥物亦為上列之消炎劑。其它此等藥物為止痛劑，包括典型作用在一種或多種類鴉片受體亞型(例如μ、κ與/或δ)之麻醉劑，較佳為作為激動劑或部份激動劑。此等藥劑包括鴉片制劑、鴉片制劑衍生物與類鴉片劑，及其藥學(xué)上可接受的鹽與水合物。較佳具體實(shí)施例中，麻醉止痛劑之明確實(shí)例包括阿芬他泥(alfentanyl)、安依痛(alphaprodine)、阿尼利定(anileridine)、貝齊醯胺(bezitramide)、丁丙諾菲(buprenorphine)、丁啡喃(butorphanol)、可待因(codeine)、二乙?；鋯岱?、二乙?；鶈岱?、二氫可待因、地芬諾酯(diphenoxylate)、乙基嗎啡、芬坦尼(fentanyl)、海若因、氫可酮、氫化嗎啡酮(hydromorphone)、異美沙酮(isomethadone)、左旋甲嗎凡(levomethorphan)、左旋凡(levorphane)、左嗎喃(levorphanol)、麥啶(meperidine)、美索辛(metazocine)、美沙酮(methadone)、甲嗎凡(methorphan)、甲基二氫嗎啡酮(metopon)、嗎啡、納布啡(nalbuphine)、鴉片萃出物、鴉片液體萃出物、鴉片粉末、鴉片粒劑、生鴉片、鴉片酊劑、羥考酮(oxycodone)、羥氫嗎啡酮(oxymorphone)、帕格利(paregoric)、噴他左辛(pentazocine)、派替啶(pethidine)、安唑辛(phenazocine)、去痛定(piminodine)、丙氧吩(propoxyphene)、消旋甲嗎喃(racemethorphan)、消旋嗎喃(racemorphan)、速芬坦尼(sufentanyl)、蒂巴因(thebaine)與上述制劑之藥學(xué)上可接受的鹽類與水合物。
麻醉止痛劑之其它實(shí)例包括乙醯吩(acetorphine)、乙?；淇纱?、乙醯美沙醇(acetylmethadol)、烯丙基普洛定(allylprodine)、α-乙醯美沙醇(alphracetylmethadol)、α-美普定(alphameprodine)、α-美沙醇(alphamethadol)、苯塞定(benzethidine)、苯甲基嗎啡、β-乙醯美沙醇(betacetylmethadol)、β-美普定(betameprodine)、β-美沙醇(betamethadol)、β-普洛定(betaprodine)、克尼辛(clonitazene)、可待因甲基溴化物、可待因-N-氧化物、希普嗎啡(cyprenorphine)、二氫脫氧嗎啡(desomorphine)、右旋莫醯胺(dextromoramide)、二普醯胺(diampromide)、二乙基噻丁烯(diethylthiambutene)、二氫嗎啡(dihydromorphine)、二孟賽哚(dimenoxadol)、二甲庚醇(dimepheptanol)、二甲基噻丁烯(dimethylthiamubutene)、二菲定丁酸鹽(dioxaphetyl butyrate)、地匹派酮(dipipanone)、羥蒂巴酚(drotebanol)、乙醇、乙基甲基噻丁烯(ethylmethylthiambutene)、依托塔辛(etonitazene)、依托芬(etorphine)、依托利定(etoxeridine)、夫特定(furethidine)、氫化嗎啡醇(hydromorphinol)、羥基普地定(hydroxypethidine)、酮基貝米酮(ketobemidone)、左旋莫醯胺(levomoramide)、左旋酚?；鶈徉?levophenacylmorphan)、甲基脫氧嗎啡(methyldesorphine)、甲基二氫嗎啡、嗎啡啶(morpheridine)、嗎啡、甲基普醯胺(methylpromide)、嗎啡甲基磺酸酯、嗎啡-N-氧化物、嗎咯吩(myrophin)、納洛酮(naloxone)、納曲酮(naltyhexone)、煙可待因(nicocodeine)、煙嗎啡(nicomorphine)、去甲基?；郎炒?noracymethadol)、去甲基左嗎喃(norlevorphanol)、去甲基美沙酮(normethadone)、去甲基嗎啡、去甲基比喃酮(norpipanone)、苯他索卡因(pentazocaine)、吩哚散(phenadoxone)、酚安普醯胺(phenampromide)、酚嗎喃(phenomorphan)、酚普啶(phenoperidine)、吡咯他醯胺(piritramide)、福爾可定(pholcodine)、普庚索辛(proheptazoine)、備解素(properidine)、丙吡胺(propiran)、消旋莫醯胺(racemoramide)、蒂巴康(thebacon)、三甲普定(trimeperidine)與其藥學(xué)上可接受的鹽類與水合物。
其它明確之代表性止痛劑包括例如乙醯胺酚(醋胺酚(paracetamol))；布洛芬(ibuprofen)；阿司匹林與其它上述NSAID；NR2B拮抗劑；舒緩素拮抗劑；抗偏頭痛劑；抗痙攣劑如歐卡巴肼(oxcarbazepine)與卡巴肼(carbamazepine)；抗抑郁劑(如TCA、SSRI、SNRI、P物質(zhì)拮抗劑，等等)；脊椎阻斷劑；噴他左辛(pentazocine)/納洛酮(naloxone)；麥啶(meperidine)；左嗎喃(levorphanol)；丁丙諾菲(buprenorphine)；氫化嗎啡酮(hydromorphone)；芬坦尼(fentanyl)；速芬坦尼(sufentanyl)；羥考酮(oxycodone)；羥考酮(oxycodone)/乙醯胺酚、納布酚(nalbuphine)與羥氫嗎啡酮(oxymorphone)。其它止痛劑包括CB2-受體激動劑，如AM1241、辣椒素受體拮抗劑及會與電壓閘控鈣信道之α2δ亞單位結(jié)合的化合物，如加巴噴汀(gabapentin)與普加林(pregabalin)。
用于與本文所提供VR1調(diào)節(jié)劑組合使用之代表性抗偏頭痛劑包括CGRP拮抗劑、麥角胺類與5-HT1激動劑，如舒馬曲坦(sumatripan)、納曲坦(naratriptan)、索馬曲坦(zolmatriptan)與利曲坦(rizatriptan)。
其它態(tài)樣中，本文所提供調(diào)節(jié)劑可組合使用一種或多種β(2)□腎上腺激導(dǎo)性受體激動劑或白三烯受體拮抗劑(例如抑制半胱胺?；兹〤ysLT1受體之藥劑)，用于例如治療肺部疾病，如氣喘。CysLT1拮抗劑包括目特路卡(montelukast)、賽弗路卡(zafirlukast)與普安路卡(pranlukast)。
用于治療或預(yù)防咳嗽時，本文所提供VR1調(diào)節(jié)劑可與其它設(shè)計用于治療此病癥之藥物組合使用，如抗生素、消炎劑、半胱胺酰基白三烯類、組織胺拮抗劑、皮質(zhì)類固醇、類鴉片劑、NMDA拮抗劑、質(zhì)子幫浦抑制劑、傷害感受素(nociceptin)、神經(jīng)激肽(NK1、NK2與NK3)與舒緩素(BK1與BK2)受體拮抗劑、類大麻酚、依賴Na+之信道之阻斷劑與高傳導(dǎo)性Ca+2依賴性K+信道活化劑。明確藥劑包括右溴苯納敏(dexbrompheniramine)加假麻黃堿(pseudoephedrine)、氯雷它定(loratadine)、羥甲唑啉(oxymetazoline)、異丙托溴胺(ipratropium)、沙丁胺醇(albuterol)、貝克美松(beclomethasone)、嗎啡、可待因、福爾可定(pholcodeine)與美殺芬(dextromethorphan)。
本發(fā)明進(jìn)一步提出一種治療尿失禁的組合療法。此等態(tài)樣中，本文所提供之調(diào)節(jié)劑可與設(shè)計用于治療此等病癥之藥劑組合使用，如雌激素置換療法、黃體酮同系物、電刺激、鈣信道阻斷劑、抗痙攣劑、膽堿激導(dǎo)性拮抗劑、抗蕈毒堿藥物、三環(huán)類抗抑郁劑、SNRI、β腎上腺素能受體激動劑、磷酸二酯酶抑制劑、鉀信道開放劑、傷害感受素/歐吩寧(orphanin)FQ(OP4)激動劑、神經(jīng)激肽(NK1與NK2)拮抗劑、P2X3拮抗劑、肌營養(yǎng)性藥物與骶骨神經(jīng)調(diào)節(jié)劑。明確藥劑包括羥丁寧(oxybutinin)、安普寧(emepronium)、妥樂定(tolterodine)、弗法賽(flavoxate)、弗布吩(flurbiprofen)、妥樂定(tolterodine)、二賽明(dicyclomine)、普菲靈(propiverine)、普本靈(propantheline)、二賽明(dicyclomine)、抑普胺(imipramine)、得西平(doxepin)、得樂西平(duloxetine)、1-去氨基-8-D-精胺酸血管收縮素、蕈毒堿受體拮抗劑，如妥樂定(tolterodine)與抗膽堿激導(dǎo)性劑，如歐布汀(oxybutynin)。
此等組合療法中合適之VR1調(diào)節(jié)劑劑量通常如上述。其它緩解疼痛之藥物劑量與投藥方法可參見例如制造商于Physician′s DeskReference中的說明。某些具體實(shí)施例中，VR1調(diào)節(jié)劑與一種或多種其它緩解疼痛之藥物的組合投藥結(jié)果可降低要產(chǎn)生治療效果時所需各治療劑之劑量(例如其中一種或兩種藥劑之劑量可小于上述或制造商所建議之最高劑量之3/4、小于1/2、小于1/4、或小于10％)。
用于組合療法時，如上述藥物組合物可進(jìn)一步包含一種或多種如上述藥物。某些此等組合物中，該其它藥物為止痛劑。本文亦提供包裝之藥物制劑，其在同一包裝中包含一種或多種VR1調(diào)節(jié)劑及一種或多種其它藥物(例如止痛劑)。此等包裝之藥物制劑通常包括(i)一容器，內(nèi)裝包含至少一種本文所說明之VR1調(diào)節(jié)劑之藥物組合物，(ii)一容器，內(nèi)裝包含至少一種如上述其它藥物(如緩解疼痛與/或消炎之藥物)，及(ii)說明書(例如卷標(biāo)或包裝內(nèi)頁)，指示其中該組合物系同時、分開或依序用于治療或預(yù)防患者對VR1調(diào)節(jié)作用有反應(yīng)之病癥(如出現(xiàn)疼痛與/或發(fā)炎之病癥)。
作為VR1激動劑的化合物亦可用在例如群體控制(替代催淚氣體)或個人保護(hù)(例如呈噴霧調(diào)配物)或經(jīng)由辣椒素受體去敏化作用，作為治療疼痛、瘙癢、停經(jīng)癥狀、尿失禁或膀胱過動癥之醫(yī)療劑。通常，用于群體控制或個人保護(hù)的化合物系依據(jù)習(xí)知催淚氣體或胡椒噴霧技術(shù)調(diào)配及使用。
另一態(tài)樣，本發(fā)明提供多種本文所提供化合物之非藥物活體外與活體內(nèi)用途。例如此等化合物可加以標(biāo)記及用為檢測與定位辣椒素受體(于如細(xì)胞制劑或組織切片、制劑或其部份中)之探針。此外，本文所提供包含合適反應(yīng)基(如芳基、羰基、硝基或疊氮基)的化合物可用于進(jìn)行受體結(jié)合位置之光親和性標(biāo)記試驗(yàn)。此外，本文所提供化合物亦可用為受體活性分析法中之陽性對照組，作為測定候選試劑與辣椒素受體結(jié)合之能力之標(biāo)準(zhǔn)物，或作為正子放射斷層掃瞄攝影(PET)顯影或單光子放射計算機(jī)斷層掃瞄攝影(SPECT)的放射追蹤劑。此等方法可用于判別活體中辣椒素受體。例如VR1調(diào)節(jié)劑可采用多種習(xí)知技術(shù)標(biāo)記(例如放射性標(biāo)記如本文中說明的放射性核種如氚)，與樣本培養(yǎng)一段合適之時間(例如先分析一段結(jié)合時間決定)。培養(yǎng)后，排除未結(jié)合的化合物(例如洗滌)，采用任何適合所采用標(biāo)記物之方法檢測已結(jié)合的化合物(例如自動放射照相術(shù)或閃爍計數(shù)法，測定標(biāo)記放射性的化合物；可采用分光鏡分析法檢測冷光基團(tuán)與螢光基團(tuán))。依相同方式處理含有有標(biāo)記的化合物與較高量(例如超過10倍以上)無標(biāo)記的化合物作為對照組之平行樣本。試驗(yàn)樣本中殘留可檢測之標(biāo)記物含量高于對照組時，表示樣本中含有辣椒素受體。檢測分析法(包括培養(yǎng)細(xì)胞或組織樣本中辣椒素受體之受體自動放射照相術(shù)(受體圖譜分析))可依Kuhar述于Current Protocols in Pharmacology(1998)John Wiley &Sons，New York中第8.1.1至8.1.9.節(jié)中之方法進(jìn)行。
本文所提供的化合物亦可用于多種習(xí)知的細(xì)胞分離法。例如調(diào)節(jié)劑可連結(jié)組織培養(yǎng)板或其它擔(dān)體之內(nèi)表面，用為固定親和性配位體，以于活體外單離辣椒素受體(例如單離表達(dá)受體的細(xì)胞)。一項較佳具體實(shí)施例中，調(diào)節(jié)劑系連結(jié)螢光標(biāo)記物，如螢光素，與細(xì)胞接觸后，使用螢光活化的細(xì)胞篩選法(FACS)分析(或單離)。
本文所提供VR1調(diào)節(jié)劑亦可用于判別其它與辣椒素受體結(jié)合之制劑之分析法中。通常，此等分析法為標(biāo)準(zhǔn)競爭性結(jié)合分析法，其中以試驗(yàn)化合物置換已結(jié)合且有標(biāo)記之VR1調(diào)節(jié)劑。簡言之，此等分析法系(a)使辣椒素受體與本文所說明標(biāo)記放射性之VR1調(diào)節(jié)劑，于可使VR1調(diào)節(jié)劑與辣椒素受體結(jié)合之條件下接觸，以產(chǎn)生已結(jié)合之有標(biāo)記之VR1調(diào)節(jié)劑；(b)于沒有試驗(yàn)制劑之存在下檢測相當(dāng)于已結(jié)合有標(biāo)記之VR1調(diào)節(jié)劑含量之信號；(c)由已結(jié)合之有標(biāo)記之VR1調(diào)節(jié)劑與試驗(yàn)制劑接觸；(d)于試驗(yàn)制劑之存在下檢測相當(dāng)于已結(jié)合之有標(biāo)記之VR1調(diào)節(jié)劑含量之信號；及(e)與(b)步驟檢測到之信號比較，檢測(d)步驟信號之下降程度。
下列實(shí)例系供說明用，并未加以限制。除非另有說明，否則所有試劑與溶劑均為標(biāo)準(zhǔn)商品級，未再進(jìn)一步純化即使用。采用例行修飾法可以變化起始物與其它所采用之步驟，以制成其它本文所提供之其它化合物。
實(shí)施例 下列實(shí)施例中，質(zhì)譜數(shù)據(jù)為電噴灑MS，系使用加裝Waters 600幫浦，Waters 996光二極管排列檢測器，Gilson 215自動取樣機(jī)與Gilson841微注射器之Micromass Time-of-Flight LCT，以15V或30V錐電壓，在陽離子模式下測得。采用MassLynx(Advanced ChemistryDevelopment，Inc；Toronto，Canada)4.0版軟件收集數(shù)據(jù)及分析。取1微升樣本體積注射至50×4.6毫米Chromolith SpeedROD C18管柱中，采用兩相線性梯度，依6毫升/分鐘之流速沖提。采用220至340nm UV范圍內(nèi)測得之總吸光度檢測樣本。沖提條件為移動相A-95/5/0.05水/甲醇/TFA；移動相B-5/95/0.025水/甲醇/TFA。
梯度時間(分鐘) ％B 010 0.5 100 1.2 100 1.21 10 每次注射之間之總操作時間為2分鐘。
實(shí)例1 代表性中間物制法 此實(shí)例說明適用于合成經(jīng)鹵烷基取代之嘧啶酮衍生物之代表性中間物制法。
A.3-氮基丙胺酸乙酯
取含氰基乙醛酸乙酯-2-肟(50克，352毫摩爾)之440毫升水混合物，使用340毫升飽和NaHCO3水溶液小心處理后，分批添加亞硫酸氫鈉(165克，950毫摩爾)。以35分鐘之時間加熱反應(yīng)至內(nèi)部溫度為35℃。冷卻至室溫后，反應(yīng)經(jīng)NaCl(約250克)飽和，以CH2Cl2(6×150毫升)萃取。將合并之CH2Cl2萃液脫水(Na2SO4)，過濾與真空濃縮，產(chǎn)生標(biāo)題化合物之褐色油狀物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ4.43(1H，s)，4.34(2H，q，J 7.2)，2.30(2H，bs)，1.35(3H，t，J 7.2)。
B.5-氨基-1-乙基-1H-咪唑-4-甲酸乙酯
在含3-氮基丙胺酸乙酯(25克，0.195摩爾)之MeCN(400毫升)溶液中添加原甲酸三乙酯(32.5毫升，28.9克，0.195摩爾)，加熱所得溶液至90℃。70分鐘后，溶液冷卻至室溫，添加乙基胺溶液(2M THF溶液，98毫升，0.195摩爾)，于室溫下攪拌反應(yīng)18小時。反應(yīng)真空濃縮成黏稠油狀物后，溶于鹽酸(1N，200毫升)。水層經(jīng)DCM(2×200毫升，1×100毫升)洗滌。添加碳酸氫鈉固體(～25克)中和水層，以DCM(5×200毫升)萃取。合并有機(jī)層，經(jīng)硫酸鎂脫水與真空濃縮，產(chǎn)生褐色/紅色固體殘質(zhì)。殘質(zhì)于EtOAc(50毫升)形成漿物，過濾，以乙醚潤洗固體與干燥，產(chǎn)生標(biāo)題化合物。1H NMR(360MHz，CDCl3)δ7.05(1H，s)，4.85(2H，br.s)，4.34(2H，q，J 7)，3.79(2H，q，J 7)，1.43(3H，t，J 7)，1.39(3H，t，J 7)。
C.5-氨基-1-甲基-1H-咪唑-4-甲酸乙酯
在含3-氮基丙胺酸乙酯(20克，0.156摩爾)之MeCN(400毫升)溶液中添加原甲酸三乙酯(26毫升，23.2克，0.156摩爾)，加熱所得溶液至90℃。1小時后，溶液冷卻至室溫，添加甲基胺溶液(8M于EtOH，20毫升，0.156摩爾)。于室溫下攪拌反應(yīng)18小時。反應(yīng)真空濃縮成黏稠油狀物后，溶于鹽酸(1N，180毫升)。水層經(jīng)DCM(2×200毫升，1×100毫升)洗滌。添加碳酸氫鈉固體(～20克)中和水層，以DCM(5×200毫升)萃取。合并有機(jī)層，經(jīng)硫酸鎂脫水與真空濃縮，產(chǎn)生褐色/紅色固體殘質(zhì)。殘質(zhì)于EtOAc(40毫升)中經(jīng)超音波處理形成漿物，過濾后，以醚潤洗固體與干燥，產(chǎn)生標(biāo)題化合物。1H NMR(400MHz，DMSO)δ7.08(1H，s)，5.94(2H，s)，4.15(2H，q，J 7.1)，3.39(3H，s)，1.24(3H，t，J 7.1)。
D.5-氨基-1-丙基-1H-咪唑-4-甲酸乙酯
此化合物基本上依實(shí)例1B的說明，但改用正丙基胺替代乙基胺制備。1H NMR(360MHz，DMSO)δ7.10(1H，s)，5.89(2H，s)，4.14(2H，q，J7.1)，3.75(2H，t，J 7.0)，1.63(2H，q，J 7)，1.23(3H，t，J 7.1)，0.83(3H，t，J7.4)。
E.5-氨基-1-環(huán)丙基-1H-咪唑-4-甲酸乙酯
此化合物基本上依實(shí)例1B的說明，但改用環(huán)丙基胺替代乙基胺制備。1H NMR(360MHz；CDCl3)5.09(2H，s)，4.33(2H，q，J 7)，3.00-2.94(1H，m)，1.38(3H，t，J 7)，1.2-1.0(2H，m)，1.0-0.8(2H，m)。
F.5-氨基-1-(2，2，2-三氟乙基)-1H-咪唑-4-甲酸乙酯
此化合物基本上依實(shí)例1B的說明，但改用2，2，2-三氟乙基胺替代乙基胺制備。1H NMR(360MHz，d6-DMSO)1.24(3H，t，J 7.1)；4.17(2H，q，J 7.1)；4.92(2H，q，J 9.3)；6.32(2H，br s)；7.18(1H，s)。
G.5-氨基-1-(2，2-二氟乙基)-1H-咪唑-4-甲酸乙酯
此化合物基本上依實(shí)例1B的說明，但改用2，2-二氟乙基胺替代乙基胺制備。
H.3-氨基吡啶-2-甲酸乙酯
取含3-氨基吡啶-2-甲酸(6.4克，46.3毫摩爾)之26毫升EtOH與8毫升濃硫酸混合物加熱至回流2天。冷卻后，混合物濃縮至約15至20毫升，倒至20克冰中。使用濃NH4OH，同時在冰浴冷卻下，堿化混合物至pH 8至9。過濾排除所得褐色沉淀，以醚(4×60毫升)萃取濾液。合并之醚萃液經(jīng)鹽水(4×60毫升)洗滌，脫水(Na2SO4)，過濾與蒸發(fā)，產(chǎn)生黃色/褐色固體。此固體與得自上一份濾液之固體合并，全部一起與冷醚磨制，產(chǎn)生淡褐色固體之標(biāo)題化合物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.08(1H，m)，7.21(1H，m)，7.03(1H，m)，5.74(2H，bs)，4.44(2H，q，J 7.2，6.9)，1.45(3H，t，J 6.9)。
I.5-氨基-N-(4-氯苯基)-1-甲基-1H-咪唑-4-甲醯胺
于室溫與氮蒙氣下，以5分鐘時間滴加三甲基鋁(2M己烷溶液；8.9毫升，17.7毫摩爾)至含4-氯苯胺(1.13克，8.87毫摩爾)之1，2-二氯乙烷(18毫升)溶液中。攪拌所得懸浮液30分鐘后，添加5-氨基-1-甲基-1H-咪唑-4-甲酸乙酯(1.00克，5.91毫摩爾)，加熱該漿物至回流6小時。冷卻時，以CH2Cl2(60毫升)稀釋溶液，添加飽和酒石酸鉀鈉水溶液(60毫升)后，添加飽和氯化銨水溶液(20毫升)與MeOH(10毫升)。激烈攪拌混合物1小時后，靜置1小時后才分相。以8％MeOH/DCM(50毫升)萃取水相，合并之有機(jī)萃液經(jīng)1M酒石酸鉀鈉(150毫升)洗滌，經(jīng)硫酸鎂脫水，過濾與真空濃縮，產(chǎn)生橙色固體。此固體于乙醚中形成漿物，過濾混合物。殘質(zhì)經(jīng)醚洗滌，于空氣流下干燥1小時，產(chǎn)生金黃色固體之標(biāo)題化合物。1H NMR(500MHz，DMSO)δ9.44(1H，s)，7.84(2H，d，J8.8)，7.30(2H，d，J 8.8)，7.19(1H，s)，5.98(2H，s)，3.43(3H，s)。
J.5-氨基-N-(4-氟苯基)-1-甲基-1H-咪唑-4-甲醯胺
此化合物基本上依實(shí)例1I的說明，但改用4-氟苯胺替代4-氯苯胺制備。
K.3-氨基-N-(4-氯苯基)皮考啉醯胺(picolinamide)
此化合物基本上依實(shí)例1I的說明，但改用3-氨基吡啶-2-甲酸乙酯與4-氯苯胺制備。
L.5-氨基-N-(4-氯苯基)-1-乙基-1H-咪唑-4-甲醯胺
此化合物基本上依實(shí)例1I的說明，但改用5-氨基-1-乙基-1H-咪唑-4-甲酸乙酯與4-氯苯胺制備。1H NMR(500MHz，DMSO)δ9.44(1H，s)，7.83(2H，d，J 8.9)，7.29(2H，d，J 8.9)，7.24(1H，s)，6.02(2H，s)，3.85(2H，q，J 7.3)，1.27(3H，t，J 7.2)。
M.乙酸甲酸酐 添加乙酸酐(35.94克，352毫摩爾)與甲酸(16.20克，352毫摩爾)至圓底燒瓶中，于55℃下加熱3小時。反應(yīng)混合物未再純化即用于實(shí)例1N。
N.N-甲酰基-3-氮基丙胺酸乙酯
取3-氮基丙胺酸乙酯(26.9克，210毫摩爾)溶于無水醚(200毫升)，于冰/水浴中冷卻。滴加乙酸甲酸酐(如上述制成之混合物)。當(dāng)添加完畢時，使反應(yīng)混合物回升至室溫，于室溫下攪拌一夜。真空排除大部份揮發(fā)物，與甲苯(100毫升×4)共蒸發(fā)排除殘余溶劑。所得紅色油狀物當(dāng)于醚中刮下時會沉淀，所得固體于醚中再結(jié)晶，產(chǎn)生白色固體之標(biāo)題化合物。1H NMR(400MHz，CDCl3)8.32(1H，s)，7.26(1H，s)，6.46(1H，bs，)，5.56(1H，d，J 7.8)，4.39(2H，q)，1.37(3H，t)。
O.5-氨基-1，3-噻唑-4-甲酸乙酯
取N-甲酰基-3-氮基丙胺酸乙酯(11.22克，71.86毫摩爾)溶于無水苯(220毫升)中。添加勞森試劑(Lawesson′s reagent)(14.53克，35.93毫摩爾)后，懸浮液回流24小時。真空排除大部份溶劑，將黏性紅色殘質(zhì)預(yù)吸附在硅膠上，且加至硅膠管柱(沖提溶劑EtOAc∶己烷＝50∶50)。得到黃色固體之標(biāo)題化合物。1H NMR(400MHz，CDCl3)7.87(1H，s)，7.26(1H，s)，6.01(2H，broad s)，4.38(2H，q)，1.41(3H，t)。
P.5-氨基-N-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-甲醯胺
此化合物系由5-氨基-1，3-噻唑-4-甲酸乙酯(Tetrahedron 1985，41，5989)與4-氯苯氨基本上依實(shí)例1I的說明制備，但反應(yīng)時間縮短為90℃下3小時，以CH2Cl2(替代8％MeOH/CH2Cl2)萃取產(chǎn)物，以10％Et2O/己烷(替代Et2O)洗滌。1H NMR(500MHz，DMSO)δ9.83(1H，s)，8.08(1H，s)，7.85(2H，d，J 8.9)，7.35(4H，m)。
Q.5-氨基-N-(4-氯苯基)-1-環(huán)丙基-1H-咪唑-4-甲醯胺
此化合物系由5-氨基-1-環(huán)丙基-1H-咪唑-4-甲酸乙酯與4-氯苯氨基本上依實(shí)例1I的說明制備。
R.5-氨基-N-(4-氯苯基)-1-(2，2-二氟乙基)-1H-咪唑-4-甲醯胺
此化合物系由5-氨基-1-(2，2-二氟乙基)-1H-咪唑-4-甲酸乙酯與4-氯苯氨基本上依實(shí)例1I的說明制備。
S.5，5，5-三氟-3-甲基戊-2-烯酸乙酯
在含4，4，4-三氟-2-丁酮(5克，40毫摩爾)之苯(150毫升)溶液中添加(乙氧羰基亞甲基)-三苯基磷烷(phosphorane)(15.2克，44毫摩爾)，加熱所得溶液至回流16小時。溶液冷卻至室溫，真空濃縮成黏稠油狀物，懸浮于己烷中。混合物過濾，濾液濃縮。殘質(zhì)經(jīng)快速層析法，以5％EtOAc-己烷沖提純化，產(chǎn)生順式與反式異構(gòu)物混合物之標(biāo)題化合物。
T.5，5，5-三氟-3-甲基戊酸
在含5，5，5-三氟-3-甲基戊-2-烯酸乙酯(1.4克，7.1毫摩爾)之EtOH(50毫升)溶液中添加10％Pd-C(0.2克)，所得混合物于20psi下氫化3小時(TLC顯示沒有殘留起始材料)?；旌衔镞^濾排除Pd-C，添加10％NaOH(20毫升)至濾液中。加熱所得溶液至回流3小時后，冷卻至室溫與濃縮。殘質(zhì)經(jīng)醚(2×50毫升)洗滌，酸化至pH 4。水層經(jīng)醚(3×50毫升)萃取。合并有機(jī)層，經(jīng)硫酸鎂脫水與真空濃縮，產(chǎn)生標(biāo)題化合物。
U.5，5，5-三氟-3-甲基戊醯氯
在含5，5，5-三氟-3-甲基戊酸(1.0克，5.9毫摩爾)之DCM(30毫升)溶液中添加(COCl)2(2M于DCM；4.4毫升，8.8毫摩爾)與1滴DMF。于室溫下攪拌所得混合物16小時。溶液經(jīng)真空濃縮，產(chǎn)生標(biāo)題化合物。
V.(R)-4-苯基-3-[(S)-5，5，5-三氟-3-甲基戊?；鵠唑啶-2-酮
在冷卻(-78℃)之含(R)-4-苯基-2-唑啶酮(216毫克，1.33毫摩爾)之THF(15毫升)溶液中滴加n-BuLi溶液(2.5M于己烷；557微升，1.39毫摩爾)。于-78℃下攪拌混合物15分鐘后，添加含5，5，5-三氟-3-甲基戊醯氯(250毫克，1.33毫摩爾)之THF(5毫升)溶液。使所得混合物慢慢回溫至室溫，并攪拌16小時。以飽和NH4Cl中止反應(yīng)，以醚(3×30毫升)萃取。合并有機(jī)層，經(jīng)硫酸鎂脫水與真空濃縮。使用對掌性HPLC管柱(Chiralpak AD，Diacel Chemical IND.，LTD；移動相96％己烷4％異丙醇，添加0.2％二乙基胺)分離非鏡像異構(gòu)性混合物，其中滯留時間較短之波鋒相當(dāng)于標(biāo)題化合物。
W.(S)-5，5，5-三氟-3-甲基戊酸
在冷卻(-5℃至0℃)之含(R)-4-苯基-3-[(S)-5，5，5-三氟-3-甲基戊?；鵠-唑啶-2-酮(250毫克，0.8毫摩爾)之THF/H2O(15/7毫升)溶液中添加30％H2O2(380微升，4.0毫摩爾)。攪拌所得混合物1分鐘后，添加含LiOH□H2O(67毫克，1.6毫摩爾)之H2O(5毫升)溶液。于0℃下攪拌混合物2小時。添加含Na2SO3(900毫克，7.1毫摩爾)之H2O(5毫升)溶液，于0℃下攪拌混合物20分鐘。蒸發(fā)THF，殘質(zhì)經(jīng)DCM(2×30毫升)萃取。中和水層至pH 1至2后，以醚(3×500毫升)萃取。合并有機(jī)層，經(jīng)硫酸鎂脫水與真空濃縮，產(chǎn)生標(biāo)題化合物。
X.4，4，4-三氟-3-甲基丁醯氯
此化合物基本上依實(shí)例1U的說明，但改用4，4，4-三氟-3-甲基丁酸制備。
Y.(S-4-第三丁基-3-[(S)-4，4，4-三氟-3-甲基丁酰基]唑啶-2-酮
與(S)-4-第三丁基-3-[(R)-4，4，4-三氟-3-甲基丁?；鵠唑啶-2-酮
此非鏡像異構(gòu)性混合物基本上依實(shí)例1V的說明，以4，4，4-三氟-3-甲基丁醯氯為起始物制備。利用快速層析法(沖提液5％至20％EtOAc/己烷)分離非鏡像異構(gòu)物，產(chǎn)生標(biāo)題化合物。
Z.(S)-4，4，4-三氟-3-甲基丁酸
此化合物基本上依實(shí)例1W的說明，以(S)-4-第三丁基-3-[(S)-4，4，4-三氟-3-甲基丁?；鵠唑啶-2-酮為起始物制備。
AA.5，5，-二氟-戊酸甲酯
在含5-氧代戊酸甲酯(1.0克，7.7毫摩爾；基本上依歐洲專利申請案0338993A1的說明制備)之DCM(30毫升)溶液中添加[雙(2-甲氧基乙基)-氨基]硫三氟化物(2.4毫升，13毫摩爾)與EtOH(90微升，1.54毫摩爾)。于室溫下攪拌所得混合物20小時?；旌衔锏怪溜柡蚇aHCO3(40毫升)中，攪拌20分鐘?；旌衔锝?jīng)DCM(2×30毫升)萃取。合并有機(jī)層，經(jīng)硫酸鎂脫水，真空濃縮。殘質(zhì)經(jīng)快速層析法，以EtOAc/己烷(50％)沖提純化，產(chǎn)生標(biāo)題化合物。
BB.5，5，-二氟-戊酸
在含5，5，-二氟-戊酸甲酯(300毫克，2.0毫摩爾)之MeOH□H2O(1∶1；50毫升)溶液中添加KOH(3當(dāng)量)，于室溫下攪拌所得混合物4小時。蒸發(fā)MeOH，殘質(zhì)經(jīng)DCM(2×30毫升)萃取。中和水層至pH1至2，以醚(3×50毫升)萃取。合并有機(jī)層，經(jīng)硫酸鎂脫水與真空濃縮，產(chǎn)生標(biāo)題化合物。
CC.甲磺酸4，4，4-三氟-3-甲基丁酯
滴加甲磺醯氯(1.64毫升，21.1毫摩爾)與TEA(3.9毫升，28.2毫摩爾)至冷卻之含4，4，4-三氟-3-甲基-丁烷-1-醇(2.0克，14.1毫摩爾；基本上依歐洲專利案案號0300497B1的說明制備)之THF(40毫升)溶液。于室溫下攪拌混合物2小時，以飽和NaHCO3中止反應(yīng)。以醚(3×50毫升)萃取混合物，合并之有機(jī)相經(jīng)脫水(MgSO4)與蒸發(fā)，產(chǎn)生標(biāo)題化合物。
DD.5，5，5-三氟-4-甲基戊腈
添加NaCN(2.1克，42.3毫摩爾)至含甲磺酸4，4，4-三氟-3-甲基-丁酯(3.1克，14.1毫摩爾)之DMSO(40毫升)溶液中。加熱混合物至120℃24小時。冷卻混合物至室溫，以醚(200毫升)稀釋，以水(3×40毫升)洗滌，取有機(jī)相脫水(MgSO4)與蒸發(fā)。殘質(zhì)經(jīng)快速層析法(25％EtOAc-己烷)純化，產(chǎn)生標(biāo)題化合物。
EE.5，5，5-三氟-4-甲基戊酸
添加25％NaOH(20毫升)至含5，5，5-三氟-4-甲基-戊腈(1.2克，7.9毫摩爾)之EtOH(20毫升)溶液中。加熱混合物至回流24小時。冷卻混合物至室溫，濃縮，以H2O(10毫升)稀釋，以醚(20毫升)洗滌。酸化水層至pH 2，以醚(3×30毫升)萃取，合并之有機(jī)相經(jīng)脫水(MgSO4)與蒸發(fā)，產(chǎn)生標(biāo)題化合物。
FF.4，4，4-三氟-2 2-二甲基丁烷-1-醇
分三批添加氫化鋰鋁(0.42克，37.95毫摩爾)至室溫下之丁酸乙基-4，4，4-三氟-2，2-二甲酯(Synquest Laboratories；Alachua，F(xiàn)lorida)中。于此溫度下攪拌0.5小時后，使混合物回流一夜。反應(yīng)冷卻至0℃，以二乙醚(35毫升)稀釋后，進(jìn)行費(fèi)雪操作法(Fieser workup)，其系涉及添加H2O(0.42毫升)、15％NaOH(0.42毫升)與另一份H2O(1.26毫升)。至少攪拌混合物2小時后，濾出固體，同時以醚洗滌。濾液脫水(MgSO4)，過濾，小心濃縮，產(chǎn)生標(biāo)題化合物，其未再純化即用于制備5，5，5-三氟-3，3-二甲基戊腈。
GG.5，5，5-三氟-3，3-二甲基戊腈
滴加甲磺醯氯(0.66克，5.8毫摩爾)至于0℃下冷卻之含4，4，4-三氟-2，2-二甲基-丁烷-1-醇(0.60克，3.8毫摩爾)與TEA(0.78克，7.7毫摩爾)之THF(10毫升)溶液中。于室溫下攪拌混合物2.5小時(此時之TLC顯示已消耗起始材料)，以飽和NaHCO3中止反應(yīng)。以二乙醚(3×20毫升)萃取混合物，合并之有機(jī)萃液脫水(MgSO4)，過濾與濃縮，產(chǎn)生粗產(chǎn)物甲磺酸4，4，4-三氟-2，2-二甲基丁酯，其立即溶于DMSO(15毫升)后，添加NaCN(0.56克，11.5毫摩爾)。混合物于120℃下加熱24小時。混合物冷卻至室溫，以醚(50毫升)稀釋，以H2O(3×10毫升)洗滌。有機(jī)層經(jīng)脫水(MgSO4)，過濾與濃縮，產(chǎn)生標(biāo)題化合物。
HH.5，5，5-三氟-3，3-二甲基戊酸
添加NaOH(4N，5毫升)至含5，5，5-三氟-3，3-二甲基戊腈(0.4克，2.4毫摩爾)之EtOH(10毫升)溶液中。加熱混合物至回流24小時。冷卻混合物至室溫，濃縮，以H2O(5毫升)稀釋，以二乙醚(2×10毫升)萃取。酸化水層至pH2，以醚(3×20毫升)萃取。合并之有機(jī)萃液經(jīng)鹽水洗滌，脫水(MgSO4)與濃縮，產(chǎn)生標(biāo)題化合物。
實(shí)例2 代表性經(jīng)鹵烷基取代之嘧啶酮衍生物的合成 A.1-(4-氯苯基)-9-甲基-2-(4，4，4-三氟-2，2-二甲基丁基)-1H-嘌呤-6(9H)-酮(化合物1)
取5-氨基-N-(4-氯苯基)-1-甲基-1H-咪唑-4-甲醯胺(30毫克，0.12毫摩爾)與5，5，5-三氟-3，3-二甲基戊酸(45毫克，0.24毫摩爾)及聚磷酸(0.5毫升)于密封管中合并。加熱混合物至140℃，攪拌5小時。冷卻反應(yīng)至室溫且加入冰。打碎聚磷酸塊，使懸浮液分溶于4N NaOH水溶液(10毫升)與CH2Cl2(20毫升)。分層，水相經(jīng)CH2Cl2(20毫升)萃取，合并之有機(jī)相脫水(Na2SO4)，過濾與真空濃縮。經(jīng)制備性TLC純化，產(chǎn)生白色固體之標(biāo)題化合物。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.74(s，1H)，7.52(m，2H)，7.12(m，2H)，3.82(s，3H)，2.57(m，2H)，2.45(s，2H)，1.15(s，6H)。MS(M+1)399.11；RT＝1.4分鐘。
B.(S)-1-(4-氯苯基)-9-甲基-2-(4，4，4-三氟-2-甲基丁基)-1H-嘌呤-6(9H)-酮(化合物2)
此化合物基本上依實(shí)例2A的說明，但改用5-氨基-N-(4-氯苯基)-1-甲基-1H-咪唑-4-甲醯胺與(S)-5，5，5-三氟-3-甲基戊酸制備。1HNMR(CDCl3)δ(ppm)7.74(s，1H)，7.52(dd，2H)，7.14(dd，2H)，3.81(s，3H)，2.52-2.64(m，1H)。2.29-2.48(m，2H)，2.18-2.27(m，1H)，1.84-2.04(m，1H)，1.03(d，3H)。MS(M+1)385.04；RT＝1.25分鐘。
C.(S)-1-(4-氯苯基)-9-甲基-2-(3，3，3-三氟-2-甲基丙基)-1H-嘌呤-6(9H)-酮(化合物3)
此化合物基本上依實(shí)例2A的說明，但改用5-氨基-N-(4-氯苯基)-1-甲基-1H-咪唑-4-甲醯胺與(S)-4，4，4-三氟-3-甲基丁酸制備。1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)7.75(s，1H)，7.53(dd，2H)，7.14(dd，2H)，3.83(s，3H)，3.06-3.18(m，1H)。2.76(dd，1H)，2.32(q，1H)，1.16(d，3H)。MS(M+1)371.08；RT＝1.34分鐘。
D.6-(4-氮苯基)-5-(4，4，4-三氟-3-甲基丁基)[1，3]噻唑并[5，4-d]嘧啶-7(6H)-酮(化合物4)
此化合物系由5-氨基-N-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-甲醯胺與5，5，5-三氟-4-甲基-戊酸，基本上依實(shí)例2A的說明制備。MS(M+1)388.03；RT＝1.25分鐘。
E.6-(4-氯苯基)-5-(4，4，4-三氟-2-甲基丁基)[1，3]噻唑并[5，4-d]嘧啶-7(6H)-酮(化合物5)
此化合物系由5-氨基-N-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-甲醯胺與5，5，5-三氟-3-甲基戊酸，基本上依實(shí)例2A的說明制備。MS(M+1)388.12；RT＝1.22分鐘。
F.(R)-1-(4-氯苯基)-9-甲基-2-(3，3，3-三氟-2-甲基丙基)-1H-嘌呤-6(9H)-酮(化合物6)
此化合物系由5-氨基-N-(4-氯苯基)-1-甲基-1H-咪唑-4-甲醯胺與(R)-4，4，4-三氟-3-甲基丁酸，基本上依實(shí)例2A的說明制備。MS(M+1)371.08；RT＝1.34分鐘。依實(shí)例6的說明所測定之IC50為100毫微摩爾或以下。
G.1-(6-氯吡啶-3-基)-9-乙基-2-(3，3，3-三氟-2-甲基丙基)-1，9-二氫-6H-嘌呤-6-酮(化合物7) 步驟1.5-氨基-N-(6-氯吡啶-3-基)-1-乙基-1H-咪唑-4-甲醯胺
于室溫與氮蒙氣下，以5分鐘時間滴加三甲基鋁(2M己烷溶液；8.9毫升，17.7毫摩爾)至含4-氯苯胺(1.13克，8.87毫摩爾)之1，2-二氯乙烷(18毫升)溶液中。攪拌所得懸浮液30分鐘后，添加5-氨基-1-乙基-1H-咪唑-4-甲酸乙酯(5.91毫摩爾)，加熱該漿物至回流6小時。冷卻時，以CH2Cl2(60毫升)稀釋溶液，添加飽和酒石酸鉀鈉水溶液(60毫升)后，添加飽和氯化銨水溶液(20毫升)與MeOH(10毫升)。激烈攪拌混合物1小時后，靜置1小時后才分相。以8％CH3OH/DCM(50毫升)萃取水相，合并之有機(jī)萃液經(jīng)1M酒石酸鉀鈉溶液(150毫升)洗滌，經(jīng)硫酸鎂脫水，過濾與真空濃縮，產(chǎn)生固體。此固體于二乙醚中形成漿物，過濾混合物。殘質(zhì)經(jīng)醚洗滌，于空氣流下干燥1小時，產(chǎn)生固體之標(biāo)題化合物。
步驟2.N-(6-氯吡啶-3-基)-1-乙基-5-(4，4，4-三氟-3-甲基丁醯氨基)-1H-咪唑-4-甲醯胺
合并5-氨基-N-(6-氯吡啶-3-基)-1-乙基-1H-咪唑-4-甲醯胺(1.14毫摩爾)、4，4，4-三氟-3-甲基丁酸(1.93毫摩爾)、雙-(2-氧代-3-唑啶基)次膦醯氯(1.93毫摩爾)、N，N-二異丙基乙基胺(1.93毫摩爾)與二氯乙烷(10毫升)，于微波爐中，以160℃下加熱20分鐘，之后之TLC顯示反應(yīng)已完成。混合物分溶于DCM(30毫升)與10％碳酸鉀水溶液(30毫升)。分層，水相再經(jīng)DCM(30毫升)萃取，合并有機(jī)層，以水與鹽水洗滌。有機(jī)相經(jīng)脫水(MgSO4)與蒸發(fā)。殘質(zhì)以醚磨制，產(chǎn)生標(biāo)題化合物。
步驟3.1-(6-氯吡啶-3-基)-9-乙基-2-(3，3，3-三氟-2-甲基丙基)-1，9-二氫-6H-嘌呤-6-酮
添加N-(6-氯吡啶-3-基)-1-乙基-5-(4，4，4-三氟-3-甲基丁醯氨基)-1H-咪唑-4-甲醯胺(3.73毫摩爾)至POCl3(10毫升)中，所得溶液于110℃下回流4小時。減壓排除大部份揮發(fā)物，殘質(zhì)溶于DCM。有機(jī)相經(jīng)飽和NaHCO3溶液洗滌，經(jīng)硫酸鈉脫水與減壓濃縮。經(jīng)硅膠管柱層析法純化，產(chǎn)生標(biāo)題化合物。MS(M+1)386.06；RT＝1.23分鐘。依實(shí)例6的說明所測定之IC50為100毫微摩爾或以下。
實(shí)例3 其它代表性經(jīng)鹵烷基取代之嘧啶酮衍生物 采用例行修飾法，可以變化起始物及增加其它步驟以制成本文所提供之其它化合物。表I所列化合物系采用此等方法制備。標(biāo)示“IC50”之欄中，*表示依本文實(shí)例6所述測定之IC50為100毫微摩爾或以下(亦即使曝露到IC50之辣椒素的細(xì)胞螢光反應(yīng)下降50％時所需此等化合物濃度為100毫微摩爾或以下)。如上述所得質(zhì)譜數(shù)據(jù)系于標(biāo)示“MS”一欄中，以M+1表示，且滯留時間系于標(biāo)示“ RT”一欄中，以分鐘表示。
表I 代表性經(jīng)鹵烷基取代之嘧啶酮衍生物









實(shí)例4 VR1轉(zhuǎn)染的細(xì)胞與膜制劑 此實(shí)例說明用于辣椒素結(jié)合性分析法(實(shí)例5)之VR1轉(zhuǎn)染的細(xì)胞與含VR1之膜制劑之制法。
取編碼全長度人類辣椒素受體之cDNA(美國專利案No.6,482,611之SEQ ID NO1、2或3)次克隆至質(zhì)體pBK-CMV(Stratagene，La Jolla，CA)，供于哺乳動物細(xì)胞中重組表達(dá)。
采用標(biāo)準(zhǔn)方法，使人類胚胎腎臟(HEK293)細(xì)胞經(jīng)編碼全長度之人類辣椒素受體之pBK-CMV表達(dá)構(gòu)筑體進(jìn)行轉(zhuǎn)染。在含G418(400微克/毫升)之培養(yǎng)基中選拔轉(zhuǎn)染的細(xì)胞兩周，得到一群安定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。經(jīng)由限制稀釋法，自此群細(xì)胞中單離出獨(dú)立純系，得到純系之安定細(xì)胞株，供下一個試驗(yàn)使用。
進(jìn)行放射性配位體結(jié)合性試驗(yàn)時，接種細(xì)胞至T175細(xì)胞培養(yǎng)燒瓶內(nèi)不含抗生素之培養(yǎng)基中，生長至約90％融合度。燒瓶隨后經(jīng)PBS洗滌，于含5mM EDTA之PBS中收集細(xì)胞。細(xì)胞經(jīng)溫和離心集結(jié)成塊，保存在-80℃下至分析為止。
取先前冷凍的細(xì)胞利用組織均質(zhì)器之助勻散于冰冷HEPES均質(zhì)緩沖液中(5mM KCl 5、5.8mM NaCl、0.75mM CaCl2、2mM MgCl、320mM蔗糖與10mM HEPES pH 7.4)。組織均質(zhì)液先于1000×g(4℃)下離心10分鐘，排除核部份及細(xì)胞碎片，然后取第一次離心之上澄液再于35,000×g(4℃)下離心30分鐘，得到部份純化之膜部份。膜先再懸浮于HEPES均質(zhì)緩沖液中后才進(jìn)行分析。取一份膜均質(zhì)液，利用Bradford方法(BIO-RAD蛋白質(zhì)分析套組，#500-0001，BIO-RAD，Hercules，CA)測定蛋白質(zhì)濃度。
實(shí)例5 辣椒素受體結(jié)合性分析法 本實(shí)例說明辣椒素受體結(jié)合性之代表性分析法，其可用于測定化合物對辣椒素(VR1)受體之結(jié)合親和性。
與[3H]樹脂毒素(resiniferatoxin)(RTX)之結(jié)合性試驗(yàn)基本上系依Szallasi與Blumberg(1992)J.Pharmacol.Exp.Ter.262883-888中說明之方法進(jìn)行。此方法中，當(dāng)結(jié)合反應(yīng)結(jié)束后，非專一性RTX結(jié)合性會因添加牛α1酸醣蛋白(每支試管100微克)而下降。
[3H]RTX(37Ci/毫摩爾)系由國家癌癥研究所-費(fèi)得利克癌癥研究與發(fā)展中心之化學(xué)合成與分析實(shí)驗(yàn)室(the Chemical Synthesis and AnalysisLaboratory，Naional Cancer Institute-Frederick Cancer Research andDevelopment Center，F(xiàn)rederick，MD)合成得到。[3H]RTX亦可得自商品(例如Amersham Pharmacia Biotech，Inc.；Piscataway，NJ)。
取實(shí)例4之膜均質(zhì)液依上述離心及再懸浮于均質(zhì)緩沖液中，達(dá)蛋白質(zhì)濃度333微克/毫升。于冰上制備結(jié)合性分析法混合物，其中包含[3H]RTX(比活性2200mCi/毫升)、2微升非放射活性試驗(yàn)化合物、0.25毫克/毫升牛血清白蛋白(Cohn部份V)、與5×104至1×105VR1轉(zhuǎn)染細(xì)胞。使用上述冰-冷HEPES均質(zhì)緩沖液(pH 7.4)調(diào)整最終體積至500微升(用于競爭結(jié)合性分析法)或1,000微升(用于飽和結(jié)合性分析法)。非專一結(jié)合性之定義為在1μM非放射活性RTX(Alexis Corp.；San Diego，CA)之存在下之結(jié)合性。分析飽和結(jié)合性時，[3H]RTX之添加濃度范圍為7至1,000pM，稀釋1至2次。典型作法為每條飽和結(jié)合性曲線收集11個濃度點(diǎn)。
競爭結(jié)合性分析法系于60pM[3H]RTX及不同濃度之試驗(yàn)化合物之存在下進(jìn)行。將分析混合物移至37℃水浴中以開始進(jìn)行結(jié)合性反應(yīng)，培養(yǎng)60分鐘后，試管于冰上冷卻以中止反應(yīng)。于WALLAC玻璃纖維濾紙(PERKIN-ELMER，Gaithersburg，MD)(使用前先浸泡1.0％PEI(聚乙烯亞胺)2小時)上過濾分離與膜結(jié)合之RTX及游離之RTX，及任何與α1酸醣蛋白結(jié)合之RTX。使濾紙干燥一夜后，添加WALLAC BETASCINT閃爍計數(shù)液，于WALLAC 1205 BETA PLATE計數(shù)器上計數(shù)。
平衡結(jié)合性參數(shù)之決定法系代入變構(gòu)性希爾公式(the allosteric Hillequation)，藉由計算機(jī)程序FIT P(Biosoft，F(xiàn)erguson，MO)之助(說明于Szallasi等人之(1993)J.Pharmacol.Exp.Ther.266678-683)計算數(shù)據(jù)。本文所提供化合物于此分析法中對辣椒素受體之Ki值小于1μM、100nM、50nM、25nM、10nM或1nM。
實(shí)例6 鈣移動性分析法 本實(shí)例說明用于分析試驗(yàn)化合物之激動劑與拮抗劑活性之代表性鈣移動性分析法。
經(jīng)表達(dá)質(zhì)體轉(zhuǎn)染(依實(shí)例4所述)以表達(dá)人類辣椒素受體的細(xì)胞接種至FALCON黑邊透明底板之96孔盤中(#3904，BECTON-DICKINSON，F(xiàn)ranklin Lakes，NJ)，生長至融合度70至90％。排空96孔盤中之培養(yǎng)基，在各孔中添加FLUO-3AM鈣敏感性染料(Molecular Probes，Eugene，OR)(染料溶液1毫克FLUO-3AM、440微升DMSO與440微升20％普羅尼克酸(pluronic acid)之DMSO溶液，于克氏-林格氏(Krebs-Ringer)HEPES(KRH)緩沖液(25mM HEPES、5mMKCl、0.96mM NaH2PO4、1mM MgSO4、2mM CaCl2、5mM葡萄糖、1mM羧苯磺胺(probenecid)，pH 7.4)中稀釋1∶250，每孔50微升稀釋溶液))。以鋁箔蓋上分析盤，于37℃之含5％CO2環(huán)境下培養(yǎng)1至2小時。培養(yǎng)后，排空分析盤中之染料，以KRH緩沖液洗滌細(xì)胞一次，再懸浮于KRH緩沖液中。
辣椒素EC50之測定法 為了測定試驗(yàn)化合物于表達(dá)辣椒素受體的細(xì)胞中對辣椒素或其它類香草醇激動劑激動或拮抗鈣移動性反應(yīng)之能力，因此先測定激動劑辣椒素之EC50。在各孔細(xì)胞中添加依上述制備之20微升KRH緩沖液與1微升DMSO。采用FLIPR儀器，自動取出100微升含辣椒素之KRH緩沖液加至各孔中。采用螢光掃瞄器(FLUOROSKAN ASCENT)(Labsystems；Franklin，MA)或FLIPR(螢光測定儀顯影板讀數(shù)系統(tǒng)；Molecular Devices，Sunnyvale，CA)儀器追蹤辣椒素誘發(fā)之鈣移動性。以施用激動劑后30至60秒之間取得之?dāng)?shù)據(jù)制成8個點(diǎn)之濃度效應(yīng)曲線，最終辣椒素濃度為1nM至3μM。采用KALEIDAGRAPH軟件(SynergySoftware，Reading，PA)將數(shù)據(jù)代入公式 y＝a*(1/(1+(b/x)c)) 以測定反應(yīng)之50％激發(fā)濃度(excitatory concentration)(EC50)。此公式中，y為最高螢光信號，x為激動劑或拮抗劑(此時指辣椒素)濃度，a為Emax；b相當(dāng)于EC50值，與c為希爾系數(shù)(Hill coefficient)。
促效激動劑活性測定法 取試驗(yàn)化合物溶于DMSO中，于KRH緩沖液中稀釋，立即加至依上述制備的細(xì)胞中。亦添加100nM辣椒素(約EC90濃度)至相同96孔盤的細(xì)胞中作為陽性對照組。分析孔中試驗(yàn)化合物之最終濃度為0.1nM至5μM之間。
試驗(yàn)化合物作為辣椒素受體之激動劑之能力系藉由測量表達(dá)辣椒素受體的細(xì)胞被化合物誘發(fā)之螢光反應(yīng)來測定，化合物濃度為螢光反應(yīng)之函數(shù)。依上述代入此數(shù)據(jù)，得到EC50，結(jié)果通常小于1微摩爾濃度，較佳為小于100nM，更佳為小于10nM。亦由試驗(yàn)化合物濃度(典型為1μM)誘發(fā)之反應(yīng)相對于由100nM辣椒素誘發(fā)之反應(yīng)計算各試驗(yàn)化合物之效力程度。此數(shù)值稱為信號百分比(POS)，由下列公式計算 POS＝100*試驗(yàn)化合物反應(yīng)/100nM辣椒素反應(yīng) 此分析法提供分析試驗(yàn)化合物作為人類辣椒素受體激動劑之強(qiáng)度與效力之定量法。人類辣椒素受體之激動劑通常在小于100μM濃度下誘發(fā)可檢測之反應(yīng)，或較佳為小于1μM之濃度，或最佳為小于10nM之濃度。其在1μM濃度時，對人類辣椒素受體之效力程度較佳為大于30POS，更佳為大于80POS。某些激動劑在下文說明之分析法中，于低于4nM的化合物濃度，更佳為低于10μM之濃度，及最佳為低于或等于100μM之濃度下，沒有可檢測之拮抗劑活性，即證實(shí)其基本上沒有拮抗劑活性。
拮抗劑活性測定法 取試驗(yàn)化合物溶于DMSO中，以20微升KRH緩沖液稀釋，使分析孔中最終試驗(yàn)化合物濃度為1μM至5μM之間，加至如上述制備的細(xì)胞中。取含已制備的細(xì)胞與試驗(yàn)化合物之96孔盤于黑暗中與室溫下培養(yǎng)0.5至6小時。應(yīng)注意，培養(yǎng)時間不可持續(xù)超過6小時。即將測定螢光反應(yīng)之前，方利用FLIPR儀器自動添加100微升含辣椒素之KRH緩沖液至96孔盤各孔中，其濃度為如上述測得之EC50之兩倍濃度，最終樣本體積為200微升，最終辣椒素濃度等于EC50。分析孔中試驗(yàn)化合物之最終濃度為1μM至5μM之間。辣椒素受體之拮抗劑在10微摩爾或以下濃度，較佳為1微摩爾或以下濃度，使此反應(yīng)相對于平行對照組(亦即在沒有試驗(yàn)化合物之存在下，使用兩倍EC50濃度之辣椒素處理的細(xì)胞)降低至少約20％，較佳為至少約50％，最佳為至少80％。取相對于在辣椒素之存在下及沒有拮抗劑下所觀察到之反應(yīng)降低50％時所需拮抗劑濃度，為拮抗劑之IC50，較佳為低于1微摩爾、100毫微摩爾、10毫微摩爾或1毫微摩爾。
數(shù)據(jù)分析法如下。首先，由其它各實(shí)驗(yàn)孔所檢測到最高反應(yīng)扣除陰性對照組孔(沒有激動劑)之平均最高相對螢光單位(RFU)反應(yīng)。其次，計算陽性對照組孔(激動劑孔)之平均最高RFU反應(yīng)。然后采用下列公式計算各試驗(yàn)化合物之抑制百分比 抑制百分比＝100-100×(試驗(yàn)細(xì)胞最高峰信號/對照組細(xì)胞最高峰信號) 由抑制％數(shù)據(jù)以試驗(yàn)化合物濃度為函數(shù)作圖，采用例如KALEIDAGRAPH軟件(Synergy Software，Reading，PA)由數(shù)據(jù)擬合公式，決定化合物IC50 y＝m1*(1/(1+(m2/m0)m3)) 其中y為抑制百分比，m0為激動劑濃度，m1為最高RFU，m2相當(dāng)于試驗(yàn)化合物IC50(相對于在激動劑存在下但沒有拮抗劑下所觀察到之反應(yīng)下降50％時所需之濃度)，m3為希爾系數(shù)?；蛘?，試驗(yàn)化合物IC50系使用線性回歸決定，其中x為ln(試驗(yàn)化合物濃度)，y為ln(抑制百分比/(100-抑制百分比))。抑制百分比高于90％或低于15％之?dāng)?shù)據(jù)則淘汰不用于回歸分析。依此方式計算之IC50為e(-截距/斜率)。
某些較佳VR1調(diào)節(jié)劑為于上述分析法中，于低于4nM的化合物濃度，更佳為低于10μM之濃度，及最佳為低于或等于100μM之濃度下沒有可檢測之激動劑活性時，即證實(shí)其為基本上沒有激動劑活性之拮抗劑。
實(shí)例7 背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞分析法 此實(shí)例說明用于分析化合物之VR1拮抗劑或激動劑活性之代表性背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞分析法。
依標(biāo)準(zhǔn)方法，自新生老鼠中切下DRG，解離及培養(yǎng)(Aguayo與White(1992)Brain Research 57061-67)。培養(yǎng)48小時后，洗滌細(xì)胞一次，與鈣敏感性染料Fluo 4 AM(2.5至10微克/毫升；TefLabs，Austin，TX)培養(yǎng)30至60分鐘。然后再洗滌細(xì)胞一次。采用螢光計測定Fluo 4螢光之變化，追蹤細(xì)胞內(nèi)鈣濃度因添加辣椒素至細(xì)胞中而隨VR1增加之變化。收集60至180秒之?dāng)?shù)據(jù)，測定最高螢光信號。
拮抗劑分析法中，添加不同濃度的化合物至細(xì)胞，然后以化合物濃度為函數(shù)畫出螢光信號曲線，以判別達(dá)到抑制50％辣椒素活化反應(yīng)時所需之濃度或IC50。辣椒素受體之拮抗劑之較佳IC50低于1微摩爾、100毫微摩爾、10毫微摩爾或1毫微摩爾。激動劑分析法中，添加不同濃度的化合物至沒有添加辣椒素的細(xì)胞中。作為辣椒素受體激動劑的化合物采用螢光計追蹤Fluo-4螢光變化，細(xì)胞內(nèi)鈣濃度會隨VR1增加。達(dá)到辣椒素活化反應(yīng)最高信號之50％時所需濃度或EC50，其較佳為低于1微摩爾、低于100毫微摩爾或低于10毫微摩爾。
實(shí)例8 測定疼痛緩解之動物模式 此實(shí)例說明分析化合物緩解疼痛程度之代表性方法。
A.疼痛緩解試驗(yàn) 下列方法系用于分析疼痛緩解程度。
機(jī)械性觸痛 基本上依Chaplan等人之(1994)J.Neurosci.Methods 5355-63及Tal與Eliav之(1998)Pain 64(3)511-518中說明之方法分析機(jī)械性觸痛(對無害刺激產(chǎn)生之異常反應(yīng))。取一系列不同剛度之凡弗瑞(von Frey)絲線(典型為一系列8至14條絲線)施加在后腳足底表面上，其力量恰足使絲線彎曲。絲線保持此位置不超過3秒鐘或直到大鼠出現(xiàn)陽性觸痛反應(yīng)為止。陽性觸痛反應(yīng)包括舉起處理的后腳，立即舔或搖動腳部。采用狄克森上下分析法(Dixon up-down method)決定各絲線之施加順序與頻率。使用此系列中之中等絲線開始試驗(yàn)，隨后依向上或向下順序連續(xù)施用，分別依開始時所使用絲線是否出現(xiàn)陰性或陽性反應(yīng)而定。
若接受此等化合物處理之大鼠相較于未處理對照組或媒劑處理組大鼠需要使用較高剛度之凡弗瑞(von Frey)絲線刺激方可引起陽性觸痛反應(yīng)時，表示該化合物可有效逆轉(zhuǎn)或預(yù)防類似機(jī)械性觸痛之癥狀?；蛘?，或此外，可在給予化合物之前及之后測試動物之慢性疼痛。此等分析法中，相較于處理前誘發(fā)反應(yīng)時所需絲線或未經(jīng)處理或經(jīng)媒劑處理且亦具慢性疼痛之動物所需絲線，有效化合物可使處理后誘發(fā)反應(yīng)所需絲線剛度提高。試驗(yàn)化合物系于疼痛發(fā)作之前或之后投藥。當(dāng)試驗(yàn)化合物在疼痛發(fā)作之后投藥時，在投藥后進(jìn)行試驗(yàn)10分鐘至3小時。
機(jī)械性痛覺過敏 基本上依Koch等人之(1996)Analgesia 2(3)157-164說明之方法測定機(jī)械性痛覺過敏(對疼痛刺激之反應(yīng)過度)。取大鼠置于有溫?zé)岫嗫捉饘俚匕逯畟€別籠內(nèi)。在任一只后腳足底表面上溫和針刺后，測定后腳抽回之時間期(亦即動物將其后腳放回地板上之前保持之時間)。
若化合物使后腳抽回之時間期縮短達(dá)統(tǒng)計顯著性時，則該化合物可降低機(jī)械性痛覺過敏。試驗(yàn)化合物系于疼痛發(fā)作之前或之后投藥。當(dāng)試驗(yàn)化合物在疼痛發(fā)作之后投藥時，在投藥后進(jìn)行試驗(yàn)10分鐘至3小時。
熱痛覺過敏 基本上依Hargreaves等人說明于(1988)Pain.32(1)77-88中方法測定熱痛覺過敏(對有害熱刺激之反應(yīng)過度)。簡言之，在動物任一只后腳之足底表面施加恒定之輻射熱源。抽回后腳之時間(亦即動物移動后腳之前之加熱時間期)，或稱為熱閥值或潛伏期，即可決定動物后腳對熱之敏感性。
若化合物使抽回后腳之時間延長達(dá)統(tǒng)計顯著性時(亦即出現(xiàn)反應(yīng)之熱閥值或潛伏期加長)，則該化合物可降低熱痛覺過敏。試驗(yàn)化合物系于疼痛發(fā)作之前或之后投藥。當(dāng)化合物在疼痛發(fā)作之后投藥時，在投藥后進(jìn)行試驗(yàn)10分鐘至3小時。
B.疼痛模式 可采用下列任一種方法誘發(fā)疼痛，以測定化合物之止痛效力。一般而言，采用雄性SD大鼠及下列至少一種模式時，本文所提供化合物可在上述至少一種試驗(yàn)法中使疼痛統(tǒng)計上顯著降低。
急性發(fā)炎疼痛模式 急性發(fā)炎疼痛系基本上依Field等人說明于(1997)Br.J.Pharmacol.121(8)1513-1522中之角叉菜膠模式中誘發(fā)急性疼痛。取100至200微升1至2％角叉菜膠溶液注射大鼠后腳中。注射后3至4小時，依上述方法測定動物對熱及與機(jī)械性刺激之敏感性。在試驗(yàn)前或注射角叉菜膠之前，對動物給予試驗(yàn)化合物(0.01至50毫克/公斤)?；衔锟山?jīng)口或任何非經(jīng)腸式途徑、或局部投藥至腳部。在此模式中緩解疼痛的化合物可使機(jī)械性觸痛與/或熱痛覺過敏在統(tǒng)計上顯著降低。
慢性發(fā)炎疼痛模式 采用下列一種方法誘發(fā)慢性發(fā)炎疼痛 1.基本上依Bertorelli等人于(1999)Br.J.Pharmacol.128(6)1252-1258及Stein等人于(1998)Pharmacol.Biochem.Behav.31(2)455-51所述，取200微升完全弗洛伊德氏輔劑(Complete Freund′sAdjuvant)(0.1毫克熱殺死與干燥之結(jié)核菌(M.Tuberculosis))注射至大鼠后腳中100微升注入足背，100微升注入足底表面。
2.基本上依Abbadie等人于(1994)J Neurosci.14(10)5865-5871所述，在大鼠之脛骨跗骨關(guān)節(jié)上注射150微升CFA(1.5毫克)。
其任一方法中，在注射CFA之前，先取得各試驗(yàn)動物后腳對機(jī)械及熱刺激之個別敏感度基準(zhǔn)線。
注射CFA后，依上述測試大鼠之熱痛覺過敏、機(jī)械性觸痛與機(jī)械性痛覺過敏。為了確使其發(fā)展出癥狀，在注射CFA后第5、6與7天時才開始進(jìn)行大鼠試驗(yàn)。第7天時，以試驗(yàn)化合物、嗎啡或媒劑處理動物。以口服劑量為1至5毫克/公斤之嗎啡作為合適之陽性對照組。典型采用之試驗(yàn)化合物劑量為0.01至50毫克/公斤?；衔锟稍谠囼?yàn)前呈單一大丸劑(single bolus)投藥或在試驗(yàn)前，每天投藥1、2或3次，進(jìn)行數(shù)天。藥物可經(jīng)口或任何非經(jīng)腸式途徑、或局部投藥給動物。
其結(jié)果以最高可能效力百分比(MPE)表示。0％MPE之定義為媒劑之止痛效力，100％MPE之定義為動物至恢復(fù)注射CFA前之基準(zhǔn)線敏感度。在此模式中緩解疼痛的化合物所得到之MPE為至少30％。
慢性神經(jīng)性疼痛模式 慢性神經(jīng)性疼痛系基本上依Bennett與Xie于(1988)Pain 3387-107中所述之采用慢性收縮傷害(CCI)處理大鼠坐骨神經(jīng)而誘發(fā)。麻醉大鼠(例如經(jīng)腹膜內(nèi)使用劑量50至65毫克/公斤之戊巴比妥及依需要再增加劑量)。將各后腳側(cè)面刮毛及消毒。采用無菌技術(shù)，切開后腳側(cè)面中股。將股二頭肌切成鈍端，曝露出坐骨神經(jīng)。在每只動物之其中一只后腳上，依約1至2毫米之間隔，將四條結(jié)扎線松弛結(jié)扎坐骨神經(jīng)。另一只腳之坐骨神經(jīng)則沒有結(jié)扎且不處理。隨后依連續(xù)模式蓋上肌肉，使用傷口夾或縫合線縫合皮膚。依上述分析大鼠之機(jī)械性觸痛、機(jī)械性痛覺過敏與熱痛覺過敏。
當(dāng)化合物在此模式中，在即將試驗(yàn)前呈單一大丸劑投藥或在試驗(yàn)前，每天投藥1、2或3次，進(jìn)行數(shù)天(0.01至50毫克/公斤，經(jīng)口、非經(jīng)腸式或局部投藥)時，該化合物可在統(tǒng)計上顯著降低機(jī)械性觸痛、機(jī)械性痛覺過敏與/或熱痛覺過敏。
權(quán)利要求
1.一種如下式的化合物
或其藥學(xué)上可接受的鹽或水合物，其中
代表包含1、2或3個獨(dú)立選自O(shè)、N與S中的雜原子的稠合5或6元雜芳基，其余環(huán)原子為碳，其中，該稠合的雜芳基經(jīng)0至3個獨(dú)立選自下列的取代基取代氨基、羥基、C1-C6烷基、C1-C6羥基烷基、(C3-C7環(huán)烷基)C0-C2烷基、C1-C6鹵烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烷基醚、C1-C6烷酰氧基、C1-C6烷基磺?；被?、C1-C6烷酰基氨基與單或二(C1-C6烷基)氨基；
Ar為苯基或5或6元雜芳基，其分別經(jīng)0至4個獨(dú)立選自下列的取代基取代鹵素、氰基、氨基、硝基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6鹵烷基、C1-C6羥基烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6鹵烷氧基、(C3-C7環(huán)烷基)C0-C4烷基與單或二(C1-C6烷基)氨基；
X為C1-C2亞烷基，其中，各碳原子經(jīng)0、1或2個獨(dú)立選自下列的取代基取代甲基、乙基與可共同形成C3-C5環(huán)烷基的取代基；以使其中至少一個碳原子被取代；及
Y為二氟甲基或三氟甲基。
2.如權(quán)利要求1所述的化合物或其鹽或水合物，其中，該化合物如下式
或其藥學(xué)上可接受的鹽或水合物，其中
代表包含1、2或3個獨(dú)立選自O(shè)、N與S中的雜原子的稠合5或6元雜芳基，其余環(huán)原子為碳，其中，該稠合雜芳基經(jīng)0至3個或0至2個獨(dú)立選自下列的取代基取代氨基、羥基、C1-C6烷基、C1-C6羥基烷基、(C3-C7環(huán)烷基)C0-C2烷基、C1-C6鹵烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烷基醚、C1-C6烷酰氧基、C1-C6烷基磺?；被?、C1-C6烷?；被c單或二(C1-C6烷基)氨基；
W為N或CH，其任選經(jīng)R1所代表的取代基取代；及
R1代表0至3個獨(dú)立選自下列的取代基鹵素、氰基、氨基、硝基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6鹵烷基、C1-C6羥基烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6鹵烷氧基、(C3-C7環(huán)烷基)C0-C4烷基與單或二(C1-C6烷基)氨基。
3.如權(quán)利要求1或2所述的化合物或其鹽或水合物，其中
為經(jīng)0至2個獨(dú)立選自下列的取代基取代的5元雜芳基C1-C4烷基、(C3-C5環(huán)烷基)C0-C2烷基與C1-C4鹵烷基。
4.如權(quán)利要求3所述的化合物或其鹽或水合物，其中
為
或
其中，R2為氫、C1-C4烷基、C1-C4鹵烷基或(C3-C5環(huán)烷基)C0-C2烷基。
5.如權(quán)利要求1或2所述的化合物或其鹽或水合物，其中，
為經(jīng)0至3個獨(dú)立選自下列的取代基取代的6元雜芳基羥基、C1-C6烷基、(C3-C7環(huán)烷基)C0-C2烷基、C1-C6鹵烷基、C1-C6羥基烷基、C1-C6烷氧基、單(C1-C6烷基)氨基、C1-C6烷?；被駽1-C6烷基磺?；被?。
6.如權(quán)利要求5所述的化合物或其鹽或水合物，其中，
為
其中，R4代表1至3個獨(dú)立選自下列的取代基羥基、C1-C4烷基、(C3-C5環(huán)烷基)C0-C2烷基、C1-C4鹵烷基、C1-C4羥基烷基、C1-C4烷氧基、單(C1-C4烷基)氨基、C1-C4烷?；被駽1-C4烷基磺?；被?。
7.如權(quán)利要求1至6中任一項所述的化合物或其鹽或水合物，其中，R1代表1至3個獨(dú)立選自下列的取代基鹵素、氰基、C1-C4烷基與C1-C4鹵烷基。
8.如權(quán)利要求7所述的化合物或其鹽或水合物，其中，一個由R1代表的取代基為位于對位的鹵素或氰基。
9.如權(quán)利要求1至8中任一項所述的化合物或其鹽或水合物，其中，R1代表僅一個取代基。
10.如權(quán)利要求8所述的化合物或其鹽或水合物，其中，該化合物如下式
其中
R2為氫、C1-C4烷基、C1-C4鹵烷基或C3-C5環(huán)烷基；
R3為鹵素、氰基、C1-C4烷基或C1-C4鹵烷基；與
R4代表1至2個獨(dú)立選自下列的取代基C1-C4烷基、(C3-C5環(huán)烷基)C0-C2烷基與C1-C4鹵烷基。
11.如權(quán)利要求1至10中任一項所述的化合物或其鹽或水合物，其中，X為-CH(R5)-、-CH2-CH(R5)-或-CH(R5)-CH2-，其中，R5為甲基或乙基。
12.如權(quán)利要求1至10中任一項所述的化合物或其鹽或水合物，其中，X為-CH(CH3)-、-CH2-CH(CH3)-、-CH(CH3)-CH2-、-C(CH3)2-、-C(CH3)2-CH2-、-CH2-C(CH3)2、-CH(CH3)-CH(CH3)-、-CH(CH3)2-CH(CH3)-、-CH(CH3)-CH(CH3)2-或-CH(CH3)2-CH(CH3)2-。
13.如權(quán)利要求12所述的化合物或其鹽或水合物，其中，該化合物如下式
14.如權(quán)利要求12所述的化合物或其鹽或水合物，其中，該化合物如下式
15.如權(quán)利要求1至10中任一項所述的化合物或其鹽或水合物，其中，該化合物如下式
16.如權(quán)利要求1至15中任一項所述的化合物或其鹽或水合物，其中，Y為三氟甲基。
17.如權(quán)利要求16所述的化合物或其鹽或水合物，其中，該化合物如下式
18.如權(quán)利要求16所述的化合物或其鹽或水合物，其中，該化合物如下式
19.如權(quán)利要求16所述的化合物或其鹽或水合物，其中，該化合物如下式
20.如權(quán)利要求16所述的化合物或其鹽或水合物，其中，該化合物如下式
21.如權(quán)利要求16至20中任一項所述的化合物或其鹽或水合物，其中，R3為鹵素或CN。
22.如權(quán)利要求1所述的化合物或其鹽或水合物，其中，該化合物為
(S)-1-(4-氯苯基)-9-甲基-2-(3，3，3-三氟-2-甲基丙基)-1H-嘌呤-6(9H)-酮；
(S)-1-(4-氯苯基)-9-甲基-2-(4，4，4-三氟-2-甲基丁基)-1H-嘌呤-6(9H)-酮；
1-(4-氯苯基)-9-(2，2，2-三氟乙基)-2-(3，3，3-三氟-2-甲基丙基)-1，9-二氫-6H-嘌呤-6-酮；
1-(4-氯苯基)-9-(2，2，2-三氟乙基)-2-(4，4，4-三氟-2-甲基丁基)-1，9-二氫-6H-嘌呤-6-酮；
1-(4-氯苯基)-9-(2，2，2-三氟乙基)-2-(4，4，4-三氟-3-甲基丁基)-1，9-二氫-6H-嘌呤-6-酮；
1-(4-氯苯基)-9-(2，2-二氟乙基)-2-(3，3，3-三氟-2-甲基丙基)-1，9-二氫-6H-嘌呤-6-酮；
1-(4-氯苯基)-9-(2，2-二氟乙基)-2-(4，4，4-三氟-2-甲基丁基)-1，9-二氫-6H-嘌呤-6-酮；
1-(4-氯苯基)-9-(2，2-二氟乙基)-2-(4，4，4-三氟-3-甲基丁基)-1，9-二氫-6H-嘌呤-6-酮；
1-(4-氯苯基)-9-環(huán)丙基-2-(4，4，4-三氟-2-甲基丁基)-1，9-二氫-6H-嘌呤-6-酮；
1-(4-氯苯基)-9-乙基-2-(3，3，3-三氟-2-甲基丙基)-1，9-二氫-6H-嘌呤-6-酮；
1-(4-氯苯基)-9-乙基-2-(4，4，4-三氟-2-甲基丁基)-1，9-二氫-6H-嘌呤-6-酮；
1-(4-氯苯基)-9-乙基-2-(4，4，4-三氟-3-甲基丁基)-1，9-二氫-6H-嘌呤-6-酮；
1-(4-氯苯基)-9-甲基-2-(3，3，3-三氟-2-甲基丙基)-1，9-二氫-6H-嘌呤-6-酮；
1-(4-氯苯基)-9-甲基-2-(4，4，4-三氟-2，2-二甲基丁基)-1H-嘌呤-6(9H)-酮；
1-(4-氯苯基)-9-甲基-2-(4，4，4-三氟-2-甲基丁基)-1，9-二氫-6H-嘌呤-6-酮；
1-(4-氯苯基)-9-甲基-2-(4，4，4-三氟-3-甲基丁基)-1，9-二氫-6H-嘌呤-6-酮；
1-(4-氯苯基)-9-甲基-2-(4，4-二氟丁基)-1H-嘌呤-6(9H)-酮；
1-(4-氯苯基)-9-甲基-2-[(2R)-3，3，3-三氟-2-甲基丙基]-1，9-二氫-6H-嘌呤-6-酮；
1-(4-氯苯基)-9-甲基-2-[(2R)-4，4，4-三氟-2-甲基丁基]-1，9-二氫-6H-嘌呤-6-酮；
1-(4-氯苯基)-9-甲基-2-[(3R)-4，4，4-三氟-3-甲基丁基]-1，9-二氫-6H-嘌呤-6-酮；
1-(4-氯苯基)-9-甲基-2-[(3S)-4，4，4-三氟-3-甲基丁基]-1，9-二氫-6H-嘌呤-6-酮；
1-(4-氟苯基)-9-甲基-2-(4，4，4-三氟-2-甲基丁基)-1，9-二氫-6H-嘌呤-6-酮；
1-(4-氟苯基)-9-甲基-2-(4，4，4-三氟-3-甲基丁基)-1，9-二氫-6H-嘌呤-6-酮；
1-(6-氯吡啶-3-基)-9-乙基-2-(3，3，3-三氟-2-甲基丙基)-1，9-二氫-6H-嘌呤-6-酮；
3-(4-氯苯基)-2-(4，4，4-三氟-2-甲基丁基)吡啶并[3，2-d]嘧啶-4(3H)-酮；
3-(4-氟苯基)-7-甲基-2-(3，3，3-三氟-2-甲基丙基)噻吩并[3，2-d]嘧啶-4(3H)-酮；
4-[9-乙基-6-氧代-2-(3，3，3-三氟-2-甲基丙基)-6，9-二氫-1H-嘌呤-1-基]苯甲腈；
4-[9-乙基-6-氧代-2-(4，4，4-三氟-2-甲基丁基)-6，9-二氫-1H-嘌呤-1-基]苯甲腈；
4-[9-乙基-6-氧代-2-(4，4，4-三氟-3-甲基丁基)-6，9-二氫-1H-嘌呤-1-基]苯甲腈；
4-[9-甲基-6-氧代-2-(3，3，3-三氟-2-甲基丙基)-6，9-二氫-1H-嘌呤-1-基]苯甲腈；
4-[9-甲基-6-氧代-2-(4，4，4-三氟-2-甲基丁基)-6，9-二氫-1H-嘌呤-1-基]苯甲腈；
4-[9-甲基-6-氧代-2-(4，4，4-三氟-3-甲基丁基)-6，9-二氫-1H-嘌呤-1-基]苯甲腈；
6-(4-氯苯基)-5-(4，4，4-三氟-2-甲基丁基)[1，3]噻唑并[5，4-d]嘧啶-7(6H)-酮；
6-(4-氯苯基)-5-(4，4，4-三氟-3-甲基丁基)[1，3]噻唑并[5，4-d]嘧啶-7(6H)-酮；
7-甲基-3-[4-(三氟甲氧基)苯基]-2-(3，3，3-三氟-2-甲基丙基)噻吩并[3，2-d]嘧啶-4(3H)-酮；
9-(2，2-二氟乙基)-1-(4-氟苯基)-2-(4，4，4-三氟-2-甲基丁基)-1，9-二氫-6H-嘌呤-6-酮；
9-(2，2-二氟乙基)-1-(4-氟苯基)-2-(4，4，4-三氟-3-甲基丁基)-1，9-二氫-6H-嘌呤-6-酮；
9-乙基-1-(4-氟苯基)-2-(3，3，3-三氟-2-甲基丙基)-1，9-二氫-6H-嘌呤-6-酮；
9-乙基-1-(4-氟苯基)-2-(4，4，4-三氟-2-甲基丁基)-1，9-二氫-6H-嘌呤-6-酮；或
9-乙基-1-(4-氟苯基)-2-(4，4，4-三氟-3-甲基丁基)-1，9-二氫-6H-嘌呤-6-酮。
23.如權(quán)利要求1至22中任一項所述的化合物或其鹽或水合物，其中，該化合物于辣椒素受體激動作用的活體外分析法中沒有可檢測到的激動劑活性。
24.如權(quán)利要求1至23中任一項所述的化合物或其鹽或水合物，其中，該化合物于辣椒素受體鈣移動性分析法中的IC50值為1微摩爾或以下。
25.一種藥物組合物，其包含至少一種如權(quán)利要求1至24中任一項所述的化合物或其鹽或水合物與生理上可接受的載體或賦形劑組合。
26.一種降低細(xì)胞辣椒素受體的鈣傳導(dǎo)性的方法，其包括使表達(dá)辣椒素受體的細(xì)胞與至少一種如權(quán)利要求1至24中任一項所述的化合物或其鹽或水合物接觸，以降低辣椒素受體的鈣傳導(dǎo)性。
27.如權(quán)利要求26所述的方法，其中，該細(xì)胞是在動物活體內(nèi)接觸。
28.如權(quán)利要求27所述的方法，其中，該細(xì)胞為神經(jīng)元細(xì)胞。
29.如權(quán)利要求27所述的方法，其中，該細(xì)胞為膀胱上皮細(xì)胞。
30.如權(quán)利要求27所述的方法，其中，在接觸期間，該化合物或其鹽或水合物是存在于該動物的體液中。
31.如權(quán)利要求30所述的方法，其中，該化合物或其鹽或水合物以濃度為5微摩爾或以下存在于該動物的血液中。
32.如權(quán)利要求30所述的方法，其中，該化合物或其鹽或水合物以濃度為1微摩爾或以下存在于該動物的血液中。
33.如權(quán)利要求27所述的方法，其中，該動物為人類。
34.如權(quán)利要求27所述的方法，其中，該化合物是經(jīng)口投藥。
35.一種于活體外抑制類香草醇配位體與辣椒素受體的結(jié)合性的方法，該方法包括使辣椒素受體與至少一種如權(quán)利要求1至24中任一項所述的化合物或其鹽或水合物在足以可檢測到其抑制類香草醇配位體與辣椒素受體結(jié)合的條件及用量下接觸。
36.一種于患者體內(nèi)抑制類香草醇配位體與辣椒素受體的結(jié)合性的方法，該方法包括使表達(dá)辣椒素受體的細(xì)胞與至少一種如權(quán)利要求1至24中任一項所述的化合物或其鹽或水合物在足以于活體外可檢測到其抑制類香草醇配位體與表達(dá)克隆的辣椒素受體的細(xì)胞結(jié)合的用量下接觸，以于患者體內(nèi)抑制類香草醇配位體與該辣椒素受體結(jié)合。
37.如權(quán)利要求36所述的方法，其中，該患者為人類。
38.如權(quán)利要求36所述的方法，其中，該化合物或其鹽或水合物以濃度為5微摩爾或以下存在于該患者的血液中。
39.如權(quán)利要求36所述的方法，其中，該化合物或其鹽或水合物以濃度為1微摩爾或以下存在于該患者的血液中。
40.一種治療患者對辣椒素受體調(diào)節(jié)作用有反應(yīng)的病癥的方法，該方法包括對該患者給予治療有效量的至少一種如權(quán)利要求1至24中任一項所述的化合物或其鹽或水合物，以減輕該患者的該病癥。
41.如權(quán)利要求40所述的方法，其中，該患者遭受(i)曝露于辣椒素，(ii)因曝露于熱引起的灼傷或刺激，(iii)因曝露于光引起的灼傷或刺激，(iv)因曝露于催淚氣體、傳染媒介、空氣污染物或胡椒噴霧引起的灼傷、支氣管收縮或刺激，或(v)因曝露于酸引起的灼傷或刺激。
42.如權(quán)利要求40所述的方法，其中，該病癥為氣喘或慢性阻塞性肺病。
43.一種治療患者疼痛的方法，該方法包括對遭受疼痛的患者給予治療有效量的至少一種如權(quán)利要求1至24中任一項所述的化合物或其鹽或水合物，以減輕該患者的疼痛。
44.如權(quán)利要求43所述的方法，其中，該化合物或其鹽或水合物以濃度為5微摩爾或以下存在于該患者的血液中。
45.如權(quán)利要求44所述的方法，其中，該化合物或其鹽或水合物以濃度為1微摩爾或以下存在于該患者的血液中。
46.如權(quán)利要求43所述的方法，其中，該患者遭受神經(jīng)性疼痛。
47.如權(quán)利要求43所述的方法，其中，該疼痛與選自下列的病癥有關(guān)乳房切除手術(shù)后疼痛綜合征、殘肢疼痛、幻肢疼痛、口腔神經(jīng)性疼痛、牙痛、皰疹后神經(jīng)痛、糖尿病神經(jīng)性病變、反射性交感神經(jīng)失養(yǎng)癥、三叉神經(jīng)痛、骨關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、纖維肌痛、吉蘭-拜瑞綜合征、感覺異常性股痛、口腔灼熱綜合征、兩側(cè)周邊神經(jīng)性病變、灼痛、神經(jīng)炎、神經(jīng)元炎、神經(jīng)痛、AIDS相關(guān)神經(jīng)性病變、MS相關(guān)神經(jīng)性病變、脊柱傷害的相關(guān)疼痛、手術(shù)相關(guān)的疼痛、肌肉骨骼疼痛、背痛、頭痛、偏頭痛、絞痛、分娩、痔瘡、消化不良、沙爾科氏疼痛、腸脹氣、月經(jīng)、癌癥、曝露到毒液、腸躁癥、發(fā)炎性腸道疾病與創(chuàng)傷。
48.如權(quán)利要求43所述的方法，其中，該患者為人類。
49.一種治療患者的瘙癢的方法，該方法包括對患者給予治療有效量的如權(quán)利要求1至24中任一項所述的化合物或其鹽或水合物，以減輕該患者的瘙癢。
50.一種治療患者的咳嗽或打嗝的方法，該方法包括對患者給予治療有效量的如權(quán)利要求1至24中任一項所述的化合物或其鹽或水合物，以減輕該患者的咳嗽或打嗝。
51.一種治療患者的尿失禁或膀胱過動癥的方法，該方法包括對患者給予治療有效量的如權(quán)利要求1至24中任一項所述的化合物或其鹽或水合物，以減輕該患者的尿失禁或膀胱過動癥。
52.一種治療患者的停經(jīng)癥狀的方法，該方法包括對患者給予治療有效量的如權(quán)利要求1至24中任一項所述的化合物或其鹽或水合物，以減輕該患者的停經(jīng)癥狀。
53.一種促進(jìn)肥胖患者降低體重的方法，該方法包括對患者給予治療有效量的如權(quán)利要求1至24中任一項所述的化合物或其鹽或水合物，以促進(jìn)該患者降低體重。
54.如權(quán)利要求1所述的化合物或其鹽或水合物，其中，該化合物經(jīng)放射性標(biāo)記。
55.一種測定樣本中是否存在辣椒素受體的方法，該方法包括下列步驟
(a)使樣本與如權(quán)利要求1至24中任一項所述的化合物或其鹽或水合物于允許該化合物與辣椒素受體結(jié)合的條件下接觸；及
(b)檢測代表該化合物或其鹽或水合物與辣椒素受體結(jié)合程度的信號，以測定該樣本中是否含有辣椒素受體。
56.如權(quán)利要求54所述的方法，其中，該化合物或其鹽或水合物經(jīng)放射性標(biāo)記，且其中該檢測步驟包括下列步驟
(i)從已結(jié)合的化合物中分離未結(jié)合的化合物；及
(ii)檢測該樣本中是否存在已結(jié)合的放射性標(biāo)記化合物。
57.一種包裝的藥物制劑，其包括
(a)位于容器中的如權(quán)利要求24所述的藥物組合物；及
(b)使用該組合物治療疼痛的說明書。
58.一種包裝的藥物制劑，其包括
(a)位于容器中的如權(quán)利要求24所述的藥物組合物；及
(b)使用該組合物治療咳嗽或打嗝的說明書。
59.一種包裝的藥物制劑，其包括
(a)位于容器中的如權(quán)利要求24所述的藥物組合物；及
(b)使用該組合物治療肥胖的說明書。
60.一種包裝的藥物制劑，其包括
(a)位于容器中的如權(quán)利要求24所述的藥物組合物；及
(b)指示該組合物用于治療尿失禁或膀胱過動癥的說明書。
61.一種如權(quán)利要求1至24中任一項所述的化合物或其鹽或水合物在制造治療對辣椒素受體調(diào)節(jié)作用有反應(yīng)的病癥的藥物中的用途。
62.如權(quán)利要求61所述的用途，其中，該病癥為疼痛；氣喘；慢性阻塞性肺?。豢人?；打嗝；肥胖；尿失禁；膀胱過動癥；停經(jīng)癥狀；曝露于辣椒素；因曝露于熱引起的灼傷或刺激；因曝露于光引起的灼傷或刺激；因曝露于催淚氣體、傳染媒介、空氣污染物或胡椒噴霧引起的灼傷、支氣管收縮或刺激；或因曝露于酸引起的灼傷或刺激。
63.一種治療患者的疼痛的方法，包括對遭受疼痛的患者給予治療有效量的含(i)至少一種如權(quán)利要求1至24中任一項所述的化合物或其鹽或水合物與(ii)布洛芬的組合，以減輕該患者的疼痛。
全文摘要
本發(fā)明提供一種如下式之經(jīng)鹵烷基取代之嘧啶酮衍生物其中，代號如本文中說明。此等化合物為可用于在活體外或活體內(nèi)調(diào)節(jié)特定受體活性之配位體，且特別適用于治療人類、家庭寵物與家畜動物中與病理性受體活化作用有關(guān)之病癥。亦提供使用此等化合物治療此等疾患之藥物組合物與方法，及使用此等配位體進(jìn)行受體定位試驗(yàn)之方法。
文檔編號C07D471/04GK101563349SQ200780031023
公開日2009年10月21日 申請日期2007年8月22日 優(yōu)先權(quán)日2006年8月23日
發(fā)明者C·A·布盧姆, X·鄭, I·馬丁內(nèi)斯, B·L·謝納爾 申請人:神經(jīng)能質(zhì)公司