專利名稱：荷葉總生物堿提取物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種中藥荷葉的總生物堿提取物及制備方法、質(zhì)量控制方法及其在醫(yī)藥和保健食品領(lǐng)域的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
荷葉系睡蓮科蓮屬植物蓮Nelumbo nucifera Gaertn.的干燥葉。傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為荷葉性味苦寒，具有清暑利濕，生發(fā)清陽，清心去熱，止血利水的活性。據(jù)《本草綱目》記載“荷葉服之，令人瘦劣”、“生發(fā)元氣，裨助脾胃，澀精濁，散淤血，消腫痛，發(fā)痘瘡”?，F(xiàn)代藥理研究表明荷葉具有降脂減肥、抗氧化、抗衰老、抑制脂肪肝、抑菌、抑制HIV增殖、抗病毒、抗炎、抗過敏等作用。荷葉的臨床應(yīng)用較多的是以復(fù)方的形式用于減肥降脂、改善肝臟代謝、延緩衰老等。荷葉中主要含有生物堿類、黃酮類、多糖類等成分，藥理研究表明生物堿類成分為其主要活性成分。迄今，未見涉及荷葉總生物堿提取物及其制備方法和用途的專利。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種荷葉總生物堿提取物及其制備方法。
本發(fā)明的另一個目的在于提供一種荷葉總生物堿提取物與某些酸形成的鹽。
本發(fā)明的再一個目的在于提供一種荷葉總生物堿提取物與某些金屬離子形成的鹽或絡(luò)合物。
本發(fā)明提出的荷葉總生物堿提取物，是從中藥荷葉中提取的含有多種生物堿類活性成分的組合，其中主要化合物結(jié)構(gòu)如下1.芐基異喹啉類

芐基異喹啉類成分結(jié)構(gòu)母核

2.阿樸啡類

阿樸啡類成分結(jié)構(gòu)骨架


鵝掌揪堿
3.去氫阿樸啡類

去氫阿樸啡類成分結(jié)構(gòu)骨架

本發(fā)明所述原料荷葉，來源于睡蓮科蓮屬的任意一種植物。作為提取荷葉總生物堿的原材料，可以是市售荷葉飲片，也可以是這些植物的莖、葉、花穗、果實、地下根莖及根等任一部位或全部植株，其中優(yōu)選的藥材部位為這些植物的干燥葉。上述所述的荷葉包括未經(jīng)任何炮制處理的原藥材及飲片，還包括各種炮制品，如“炒荷葉”、“麩炒荷葉”、“荷葉炭”等。
本發(fā)明所述的荷葉總生物堿提取物，是指從上述任一植物的任何部位提取得到的，包含多種荷葉生物堿類活性成分的組合物，其中優(yōu)選的是從Nelumbonucifera Gaertn.干燥葉中提取制備得到的，含有多種生物堿類活性成分的組合物。這些生物堿類成分主要包括荷葉堿、N-去甲基荷葉堿、O-去甲基荷葉堿、番荔枝堿、蓮堿、鵝掌揪堿、N-去甲基亞美罌粟堿、2-羥基-1-甲氧基阿樸啡、亞美帕堿、N-甲基異衡州烏藥堿、N-甲基衡州烏藥堿、去氫荷葉堿、去氫蓮堿以及以其為母核的其它衍生物。
作為荷葉總生物堿提取物，其中各種生物堿類成分百分含量的總和為5～100％(w/w)，其中優(yōu)選的為50～100％(w/w)。
本發(fā)明所述的荷葉總生物堿提取物，可以與某些酸，如鹽酸、硫酸、硝酸、磷酸等無機酸或甲酸、醋酸、檸檬酸、酒石酸、琥珀酸等有機酸，形成鹽類衍生物。這些衍生物具有與上述荷葉總生物堿提取物相同或相近的藥理活性和用途。
本發(fā)明所述的荷葉總生物堿提取物，還可以與鈉、鉀、鈣、鐵、鋁、鋅、銅、鉻、鍶等金屬離子形成金屬鹽或絡(luò)合物。這些金屬鹽或絡(luò)合物具有與上述荷葉總生物堿提取物相同或相近的藥理活性或用途。
在本發(fā)明所述的荷葉總生物堿提取物所涵蓋的各種生物堿類活性成分之中，最主要的是荷葉堿、N-去甲基荷葉堿、O-去甲基荷葉堿、番荔枝堿、蓮堿、鵝掌揪堿、N-去甲基亞美罌粟堿、2-羥基-1-甲氧基阿樸啡等成分。作為荷葉總生物堿提取物，荷葉堿的含量占全部總生物堿含量的5～100％(w/w)。
本發(fā)明還提出了所述荷葉總生物堿提取物的制備工藝，它可以采用以下任意一種方法，或這些方法的任意組合進(jìn)行制備(1)溶劑提取法；(2)溶劑萃取法；(3)離子交換樹脂法；(4)大孔吸附樹脂法；(5)超臨界流體萃取法；(6)柱色譜法；(7)液-液逆流分配色譜法。其中優(yōu)選的方法為離子交換樹脂法。
在使用這些方法進(jìn)行制備時，一般包括以下幾個步驟(1)提取所用溶劑可以是水或任意一種醇類、酮類及酯類溶劑，或這些溶劑按一定比例組成的混合溶劑，或由這些溶劑與酸、堿配成的酸性或堿性溶劑。提取方法可以是煎煮、加熱回流、超聲提取、冷浸、滲漉、微波提取、高壓提取等。
優(yōu)選的提取工藝為荷葉藥材加30～90％乙醇，回流提取2～3次，每次提取1～2小時，溶劑用量為15～30倍量(L/kg)。
(2)過濾包括離心、抽濾、超濾、壓濾等方法，使用或不使用以下任意一種澄清劑或其組合醇沉劑，明膠，高嶺土，各種樹脂，聚乙二醇，聚乙三醇，殼聚糖以及天然澄清劑成品如101果汁澄清劑、ZTC+1天然澄清劑等。
(3)濃縮包括常壓或減壓條件下的薄膜蒸發(fā)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)及煎煮濃縮等。
(4)干燥包括真空干燥、噴霧干燥、冷凍干燥等。
當(dāng)采用溶劑萃取法進(jìn)行制備時，一般先將提取物混懸于水中，然后用低極性的酯類、烷烴類或醚類溶劑(如石油醚、乙醚、己烷、汽油、乙酸乙酯等)萃取除去脂溶性雜質(zhì)，然后用合適極性的溶劑，如氯仿、乙酸乙酯、丙酮、正丁醇等，或是這些溶劑的混合物，萃取獲得其中的總生物堿成分，得到總生物堿提取物。
當(dāng)使用離子交換樹脂法時，所用的樹脂可以是強酸性、弱酸性、大孔型、凝膠型等任何一種類型，這些樹脂的代號由于生產(chǎn)廠家不同而不同，如732型、D001-CC、D001-SS、D061、D072等，其中優(yōu)選的為強酸性陽離子樹脂，如732型、D001-CC、D001-SS等，所用的洗脫劑為酸水和含氨的乙醇、甲醇等，其中優(yōu)選的為0～100％的氨醇。
優(yōu)選的荷葉生物堿提取物樹脂純化工藝為選用732型、D001-CC、D001-SS等強酸性陽離子交換樹脂作為純化用樹脂，荷葉乙醇提取物以總生物堿量計的上樣液濃度為0.1～1mg/mL，吸附流速為3～15BV/h，樹脂柱徑高比為1∶5～1∶10，以總生物堿量計的上樣量為5～50mg/mL，0～70％乙醇洗脫1～7倍樹脂體積進(jìn)行除雜，除雜流速為3～10BV/h，用40～90％氨性乙醇(其中氨濃度為0.1％～5％)洗脫3～10倍樹脂體積，洗脫流速為8～20BV/h。
當(dāng)采用大孔吸附樹脂法進(jìn)行制備時，所用的大孔樹脂可以是非極性、弱極性、中等極性、弱堿性或弱酸性等任意一種類型，這些樹脂的代號由于生產(chǎn)廠家不同而不同，如D101、D4020、HPD400、AB-8、S-8、HZ-806等，其中優(yōu)選的為弱極性或中等極性的樹脂，如AB-8、HPD400、D101等。所用的洗脫劑為水和含水的乙醇、甲醇、丙酮等，其中優(yōu)選的為0～100％的乙醇。
當(dāng)采用超臨界CO2流體萃取法進(jìn)行制備時，可以對荷葉原材料直接進(jìn)行萃取，也可以對上述任一方法和步驟所獲得的產(chǎn)物進(jìn)行萃取。萃取時可以使用或不使用以下任一種類溶劑及溶劑混合物水、醇類、酮類及酯類溶劑。
當(dāng)采用柱層析法進(jìn)行制備時，其處理的對象可以是上述提取步驟所獲得的產(chǎn)物，也可以是經(jīng)上述溶劑萃取法、離子交換樹脂法、大孔吸附樹脂法或超臨界流體萃取法初步純化后的產(chǎn)物。所用的固定相可以是硅膠、聚酰胺、氧化鋁、葡聚糖(Sephadex系列或Sephadex LH-20系列)、C-8、C-18、活性炭、纖維素等，所用的洗脫液因固定相的不同而不同，一般是由水、甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、石油醚等組成的混合溶劑。
當(dāng)采用液-液逆流分配色譜法進(jìn)行制備時，其處理的對象可以是上述提取步驟的產(chǎn)物，也可以是經(jīng)上述溶劑萃取法、離子交換樹脂法、大孔吸附樹脂法或超臨界流體萃取法初步純化后的產(chǎn)物。一般先將提取物混懸于水中，然后用低極性的酯類、烷烴類或醚類溶劑(如石油醚、乙醚、己烷、汽油、乙酸乙酯等)萃取除去脂溶性雜質(zhì)，然后用合適極性的溶劑，如氯仿、乙酸乙酯、丙酮、正丁醇等，或是這些溶劑的混合物，萃取獲得其中的總生物堿成分，得總生物堿提取物。
該提取物可以單獨或與其它任何中西藥物或食物按任意比例配伍，用于制備藥物或功能性食品，所制得的藥物或功能性食品可以是膠囊劑、片劑、丸劑、顆粒劑、口服液、糖漿、沖劑、酒劑、注射劑、膏劑、散劑、飲料等。
本發(fā)明質(zhì)量控制方法可包括以下含量測定方法中的一種或兩種1.總生物堿精密稱取荷葉堿對照品適量(約5mg)，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。精密吸取荷葉堿對照品溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.5mL，蒸干，加溴甲酚綠緩沖液(pH5.6)4.0mL及氯仿6.0mL，劇烈掙搖2min，于分液漏斗中靜置分層2h，分取氯仿層，于413nm處測定吸光度。以荷葉堿對照品濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
精密稱取荷葉總生物堿提取物樣品各3份，每份5mg，置25mL量瓶中，加甲醇超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻。分別精密吸取上述樣品溶液0.5mL，荷葉堿對照品溶液0.5mL、1.0mL，蒸干，加溴甲酚綠緩沖液(pH5.6)4.0mL及氯仿6.0mL，劇烈掙搖2min，于分液漏斗中靜置分層2h，分取氯仿層，于413nm處測定吸光度。外標(biāo)兩點法計算含量。
2.荷葉堿色譜條件色譜柱Hypersil C18色譜柱(4.6mm×150mm，5μm)；流動相乙腈-水(43∶57)；檢測波長280nm；柱溫30℃。
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制分別精密吸取荷葉堿對照品溶液(濃度為0.0515μg/μL)0、2、4、6、8、10μL注入液相色譜儀，測定各色譜峰峰面積，以對照品進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，色譜峰峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
含量測定精密稱取3批荷葉生物堿提取物樣品各3份，每份約5mg，置25mL量瓶中，加甲醇超聲溶解，并稀釋至刻度，搖勻，作為荷葉堿含量測定的供試品溶液。精密吸取上述供試品溶液10μL，注入液相色譜儀，測定荷葉堿峰面積，計算含量。
具體實施例方式
實施例1荷葉總生物堿提取物制備工藝取荷葉飲片1kg，加90％乙醇16L，回流提取3次，每次提取1.5小時，減壓回收溶劑，提取物加1％鹽酸水溶液分散溶解，使酸水溶液濃度為0.165mg/mL(以總生物堿量計)，以3000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心30min，取上清液，通過300mL D001-CC大孔型強酸性陽離子交換樹脂，吸附流速為10BV/h，樹脂柱徑高比為1∶8，上樣量為27.5mg/mL(以總生物堿量計)，50％乙醇洗脫5倍樹脂體積進(jìn)行除雜，除雜流速為10BV/h，70％氨性乙醇(氨濃度為1％)洗脫7倍樹脂體積，洗脫流速為10BV/h，收集70％氨性乙醇洗脫液，回收溶劑，減壓干燥，即為荷葉總生物堿提取物。
測定荷葉總生物堿提取物中總生物堿含量為56％，荷葉堿含量為21％。
實施例2荷葉總生物堿提取物制備工藝取荷葉飲片1kg，加70％乙醇20L，回流提取3次，每次提取1.5小時，減壓回收溶劑，提取物加0.5％鹽酸水溶液分散溶解，使酸水溶液濃度為0.33mg/mL(以總生物堿量計)，以3000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心30min，取上清液，通過300mL D001-CC大孔型強酸性陽離子交換樹脂，吸附流速為5BV/h，樹脂柱徑高比為1∶10，上樣量為30.25mg/mL(以總生物堿量計)，水洗脫10倍樹脂體積進(jìn)行除雜，除雜流速為10BV/h，90％氨性乙醇(氨濃度為0.5％)洗脫5倍樹脂體積，洗脫流速為10BV/h，收集90％氨性乙醇洗脫液，回收溶劑，減壓干燥，即為荷葉總生物堿提取物。
測定荷葉總生物堿提取物中總生物堿含量為53％，荷葉堿含量為20％。
實施例3荷葉總生物堿提取物制備工藝取荷葉飲片1kg，加50％乙醇25L，回流提取2次，每次提取2小時，減壓回收溶劑，提取物加1.5％鹽酸水溶液分散溶解，使酸水溶液濃度為0.495mg/mL(以總生物堿量計)，以3000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心30min，取上清液，通過300mL D001-CC大孔型強酸性陽離子交換樹脂，吸附流速為3BV/h，樹脂柱徑高比為1∶6，上樣量為24.75mg/mL(以總生物堿量計)，10％乙醇洗脫6倍樹脂體積進(jìn)行除雜，除雜流速為5BV/h，50％氨性乙醇(氨濃度為0.3％)洗脫7倍樹脂體積，洗脫流速為10BV/h，收集50％乙醇洗脫液，回收溶劑，減壓干燥，即為荷葉總生物堿提取物。
測定荷葉總生物堿提取物中總生物堿含量為55％，荷葉堿含量為18％。
實施例4荷葉總生物堿提取物制備工藝取荷葉飲片1kg，加70％乙醇18L，回流提取2次，每次提取2小時，減壓回收溶劑，提取物加水分散溶解，使上樣液濃度為0.165mg/mL(以總生物堿量計)，通過7L D101大孔吸附樹脂，吸附流速為3BV/h，樹脂柱徑高比為1∶9，上樣量為27.5mg/mL(以總生物堿量計)，水洗脫4倍樹脂體積進(jìn)行除雜，除雜流速為3BV/h，90％乙醇洗脫4倍樹脂體積，洗脫流速為6BV/h，收集90％乙醇洗脫液，回收溶劑，減壓干燥，即為荷葉總生物堿提取物。
測定荷葉總生物堿提取物中總生物堿含量為58％，荷葉堿含量為18％。
實施例5荷葉總生物堿片的制備荷葉總生物堿提取物100g淀粉 100g上述組分混合均勻，加滑石粉適量，壓制成1000片。
實施例6荷葉總生物堿復(fù)方制劑的制備荷葉總生物堿提取物50g何首烏總二苯乙烯提取物50g山楂提取物100g決明子提取物 300g上述組分混合均勻，裝入硬明膠膠囊中，共2000粒膠囊。
權(quán)利要求
1.一種荷葉總生物堿提取物，其特征在于該提取物由中藥荷葉中提取獲得，并含有以下生物堿類成分荷葉堿、N-去甲基荷葉堿、O-去甲基荷葉堿、番荔枝堿、蓮堿、鵝掌揪堿、N-去甲基亞美罌粟堿、2-羥基-1-甲氧基阿樸啡、亞美帕堿、N-甲基異衡州烏藥堿、N-甲基衡州烏藥堿、去氫荷葉堿、去氫蓮堿及其衍生物等。
2.如權(quán)利要求1所述的荷葉總生物堿提取物，其特征在于荷葉為市售荷葉飲片或睡蓮科蓮屬任一種植物的全部植株或任何部位，如根、根莖、莖、葉、花穗、果實等，還包括經(jīng)過炮制的各種炮制品，如“炒荷葉”、“麩炒荷葉”、“荷葉炭”等。
3.如權(quán)利要求1所述的荷葉總生物堿提取物，其特征在于上述總生物堿類成分含量總和以重量計為5～100％。
4.如權(quán)利要求3所述的荷葉總生物堿提取物，其特征在于各生物堿類成分中荷葉堿的含量占全部總生物堿含量以重量計為5～100％。
5.如權(quán)利要求1所述的荷葉總生物堿提取物，其特征在于上述生物堿類成分，還包括與某些酸如鹽酸、硫酸、硝酸、磷酸等無機酸或甲酸、醋酸、檸檬酸、酒石酸、琥珀酸等有機酸形成的鹽，以及與鈉、鉀、鈣、鐵、鋁、鋅、銅、鉻、鍶等金屬離子形成的金屬鹽或絡(luò)合物。
6.如權(quán)利要求1～5所述的荷葉總生物堿提取物，其特征在于采用溶劑提取法、溶劑萃取法、離子交換樹脂法、大孔吸附樹脂法、超臨界流體萃取法、柱色譜法、液-液逆流分配色譜法等任意一種方法，或這些方法的任意組合進(jìn)行制備。
7.如權(quán)利要求6所述的荷葉總生物堿提取物制備方法，其特征在于，在使用這些方法進(jìn)行制備時，包括以下一個或幾個步驟提取所用溶劑可以是水或任意一種醇類、酮類及酯類溶劑，或這些溶劑按一定比例組成的混合溶劑，或由這些溶劑與酸、堿配成的酸性或堿性溶劑；提取方法可以是煎煮、加熱回流、超聲提取、冷浸、滲漉、微波提取、高壓提取等；過濾包括離心、抽濾、超濾、壓濾等方法，使用或不使用以下任一種澄清劑或其組合醇沉劑，明膠，高嶺土，各種樹脂，聚乙二醇，聚乙三醇，殼聚糖以及天然澄清劑成品如101果汁澄清劑、ZTC+1天然澄清劑等；濃縮包括常壓或減壓條件下的薄膜蒸發(fā)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)及煎煮濃縮等；干燥包括真空干燥、噴霧干燥、冷凍干燥等。
8.如權(quán)利要求6所述的荷葉總生物堿提取物制備方法，其特征在于當(dāng)使用離子交換樹脂法時，所用的樹脂可以是強酸性、弱酸性、大孔型、凝膠型等任何一種類型，這些樹脂的代號由于生產(chǎn)廠家不同而不同，如732型、D001-CC、D001-SS、D061、D072等，其中優(yōu)選的為強酸性陽離子樹脂，如732型、D001-CC、D001-SS等，所用的洗脫劑為酸水和含氨的乙醇、甲醇等。
9.如權(quán)利要求6所述的荷葉總生物堿提取物制備方法，其特征在于當(dāng)采用大孔吸附樹脂法進(jìn)行制備時，所用的大孔樹脂可以是非極性、弱極性、中等極性、弱堿性或弱酸性等任意一種類型，這些樹脂的代號由于生產(chǎn)廠家不同而不同，如D101、D4020、HPD400、AB-8、S-8、HZ-806等，其中優(yōu)選的為弱極性或中等極性的樹脂，如AB-8、HPD400、D101等，所用的洗脫劑為水和含水的乙醇、甲醇、丙酮等。
10.如權(quán)利要求8所述的荷葉總生物堿提取物制備方法，其特征在于選用732型、D001-CC、D001-SS、D061、D072等強酸性陽離子交換樹脂作為純化用樹脂，荷葉乙醇提取物以總生物堿量計的上樣液濃度為0.1～1mg/mL，吸附流速為3～15BV/h，樹脂柱徑高比為1∶5～1∶10，以總生物堿量計的上樣量為5～50mg/mL，0～70％乙醇洗脫1～7倍樹脂體積進(jìn)行除雜，除雜流速為3～10BV/h，用40～90％氨性乙醇(其中氨濃度為0.1％～5％)洗脫3～10倍樹脂體積，洗脫流速為8～20BV/h。
11.如權(quán)利要求1、5所述的提取物的應(yīng)用，其特征在于，該提取物可以單獨或與其它任何中西藥物或食物按任意比例配伍，用于制備藥物或功能性食品，所制得的藥物或功能性食品可以是膠囊劑、片劑、丸劑、顆粒劑、口服液、糖漿、沖劑、酒劑、注射劑、膏劑、散劑、飲料等。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種從中藥荷葉中提取得到的總生物堿提取物及其制備方法。該提取物主要包括荷葉堿、N－去甲基荷葉堿、O－去甲基荷葉堿、番荔枝堿、蓮堿、鵝掌揪堿、N－去甲基亞美罌粟堿、2－羥基－1－甲氧基阿樸啡、亞美帕堿、N－甲基異衡州烏藥堿、N－甲基衡州烏藥堿、去氫荷葉堿、去氫蓮堿及其衍生物等。該提取物可由溶劑提取法、溶劑萃取法、離子交換樹脂法、大孔吸附樹脂法、超臨界流體萃取法、柱色譜法、液－液逆流分配色譜法等任意一種方法，或這些方法的任意組合制備獲得。所制得的荷葉總生物堿提取物中各種生物堿類成分百分含量的總和為5～100％(w/w)，其中荷葉堿含量占全部總生物堿含量的5～100％(w/w)。
文檔編號C07D221/00GK101085041SQ20071012264
公開日2007年12月12日 申請日期2007年7月11日 優(yōu)先權(quán)日2007年7月11日
發(fā)明者劉斌, 石任兵, 王偉, 王玉霞, 王玲玲, 王東方 申請人:石任兵, 劉斌