專利名稱：同步分離提取與純化荷葉中黃酮、生物堿和多糖的方法
技術領域：
本發(fā)明屬農(nóng)、林產(chǎn)品深加工領域，涉及以荷葉為原料提取黃酮、荷葉生物堿和荷 葉多糖的方法。
技術背景我國荷葉資源相當豐富，被列入了第2批"既是食品又是藥品"的名單，可以作 為生產(chǎn)保健食品的原料。長期以來，荷葉在食用及藥用兩方面均有廣泛的應用。荷葉 分布我國大部地區(qū)，主產(chǎn)于江西、湖南、湖北、浙江、江蘇等地。荷葉具有解署清熱、 生發(fā)清陽、散瘀止血等功效，臨床亦將其廣泛用于肥胖癥及高脂血癥，并取得了較好 療效，綜合利用價值很高。荷葉中具有生理活性的物質(zhì)主要為黃酮類物質(zhì)、生物堿和荷葉多糖。目前獲得這 些有效成分的提取方法主要為水或有機溶劑直接浸提或者回流浸提。國內(nèi)外對荷葉中 功能成分的應用研究主要集中于單一地提取黃酮或生物堿成分，在提取這些成分的同 時舍棄了其他兩種功能成分，或者只是簡單的生產(chǎn)醇提物或水提物，技術含量不高，難以實現(xiàn)高附加值的產(chǎn)業(yè)升級要求。未見有綜合分離提取利用荷葉三種功能成分黃酮、 生物堿及荷葉多糖的研究報道。這主要是在提取單一成分時，提取條件會破壞其他成 分或對其他成分提取率低，并使得到的提取物雜質(zhì)高，增加后續(xù)純化的難度和要求。 如用水或有機溶劑提取黃酮時，部分生物堿也能提取出來，得到的粗黃酮雜質(zhì)高，增 加了后續(xù)純化的難度，同時也影響生物堿的再提取。同樣在提取生物堿時，提取條件 影響黃酮的穩(wěn)定性，大大影響黃酮的再提取，得到的粗生物堿雜質(zhì)高，增加了后續(xù)純 化的難度。在用水提取多糖時，前處理復雜，提取的粗多糖雜質(zhì)高、色澤深、很難純 化。因此必須找到一種兼顧了黃酮、生物堿和多糖的化學性質(zhì)，充分考慮了各種成分 提取過程中的相互影響、活性和提取率的同步提取方法，使三種活性成分提取率高， 純度高，提取效率高，荷葉資源利用率高。 發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種高效、綜合提取荷葉中黃酮、生物堿和多糖三種主要功 能成分的提取方法。本發(fā)明的具體工藝步驟如下(l )將新鮮荷葉用含o. 05-0. 15%NaCl的磷酸水溶液(pH=3. 0-4. 0 )常溫浸泡3min, 淋洗瀝干后干燥，粉碎至18目-30目，微波預處理lmin-3niiri;(2) 將經(jīng)微波處理后的荷葉干粉，加入25-30倍40-70%的堿性有機溶液，調(diào) pH-9. 0-14. 0,加入抗氧化劑0. lg/Kg-0. 3g/Kg干荷葉，在65°C-85。C下浸提1-2小時， 提取l次，以提取荷葉黃酮；(3) 將(2)中所得荷葉粉殘渣，加入25-30倍60%-95%的酸性有機溶液，調(diào) pH=l. 0-6. 0,加入抗氧化劑0. 3g/Kg-0. 5g/Kg干荷葉，在65-85。C下浸提1-2小時，提取2次，以提取荷葉生物堿；(4) 將(3)中所得荷葉粉殘渣，加入25-30倍的中性水，調(diào)pH=6. 0-8. 0，在 65。C-85匸下浸提l-2小時，提取l次，以提取荷葉多糖；(5) 將(2)中所提取的荷葉黃酮粗提物，經(jīng)離心、過濾后的上清液，減壓蒸餾 回收乙醇后，用10°/。鹽酸調(diào)溶液至pH = 6. 5-7. 0,再經(jīng)離心、過濾，取上清液配制成 l-5mg/mL上樣液，經(jīng)弱極性大孔樹脂吸附后用純水、10%-30%乙醇分別沖洗除去雜質(zhì)， 50-90%有機溶液洗脫，收集洗脫液，在真空度0. 06Mpa-0. 09Mpa、 65-85。C下蒸發(fā)濃縮， 回收浸提液中的有機溶劑，得到濃縮液，經(jīng)真空干燥制得荷葉黃酮成品；(6) 將(3)中所提取的荷葉生物堿粗提物，經(jīng)離心、過濾后的上清液，減壓蒸 餾回收乙醇后，經(jīng)酸性溶液復溶，酸性條件下有機溶劑脫色，調(diào)節(jié)pH-7.0后離心、 過濾除去鞣質(zhì)；取上清液，調(diào)節(jié)pH》12. 0,并配制成0. lmg/mL-2mg/mL上樣液，經(jīng)弱 極性大孔樹脂吸附后，用純水、10%-30%乙醇分別沖洗除去雜質(zhì)，50-9oy。有機溶液洗脫， 收集洗脫液，在真空度0. 06Mpa-0. 09Mpa、 65"C-85匸下蒸發(fā)濃縮，回收浸提液中的有 機溶劑，得到濃縮液，經(jīng)真空干燥制得荷葉生物堿成品；(7) 將(4)中所提取的荷葉多糖粗提物，經(jīng)離心、過濾后的上清液濃縮至糖濃 度為2-6%，調(diào)節(jié)pH-6. 0-7. 0，保持溶液溫度為40°C-6(TC下條件下，經(jīng)弱極性大孔樹 脂動態(tài)吸附脫色后，水洗出滯留于柱中的荷葉多糖，并濃縮至糖濃度4%-6%,用saveg 除蛋白后，在真空度0. 06Mpa-0. 09Mpa、 65°C-85。C下蒸發(fā)濃縮，得到濃縮液，經(jīng)真空 或冷凍干燥制得荷葉多糖成品。本發(fā)明所述的步驟(2)黃酮提取過程中的有機溶劑為甲醇、乙醇或者正丁醇，抗 氧化劑可以是特丁基對苯二酚、丁基羥基茴香醚(BHA)或者二丁基羥基甲苯(BHT)等。本發(fā)明所述的步驟(3)生物堿提取過程中的有機溶劑為甲醇、乙醇或者正丁醇， 抗氧化劑可以是D-異抗壞血酸或者D-異抗壞血酸鈉等。本發(fā)明所述的步驟(5)黃酮純化過程中的有機溶劑是甲醇、乙醇或者正丁醇，所 述的弱極性大孔樹脂為AB-8、 D101B、 H-30、 H-60等。本發(fā)明所述的步驟(6)生物堿純化過程中的有機溶劑是正已烷、氯仿、石油醚、 甲醇、乙醇或者正丁醇，所述的弱極性大孔樹脂為D101 DlOl、 H-20、 H-60、 C004、 C008等。。本發(fā)明所述的步驟(7)多糖純化過程中所述的弱極性大孔樹脂如AB-8、 D208、 LSA-5B、 D4020、隨、S-8、 NKA、 MG-1等,saveg試劑配制用有機溶劑為氯仿、正丁 醇或者戊醇。該方法克服了目前僅只能提取單一成分或在提取單一成分過程中對其他成分的破 壞或對其他成分提取率低、或提取物雜質(zhì)高等的缺點，兼顧了黃酮、生物堿和多糖的 化學性質(zhì)，充分考慮了各種成分提取過程中的相互影響、活性和提取率。該方法同步 提取的黃酮、生物堿和多糖，具有提取率高，純度高，提取效率高，荷葉資源利用率高的特點。
具體實施方式
本發(fā)明將通過以下實施例作進一步地說明。 實施實例1。取新鮮荷葉，經(jīng)含0. l%NaCl的磷酸溶液(pH=3.0)清洗以后，烘干至水含量為 8%時，粉碎，過18目篩，稱取粉碎后的荷葉干粉100g,微波處理，輸出功率為300W, 總處理時間為2min，然后加入由氨水調(diào)節(jié)ph-13. 0的50%的乙醇溶液2. 5L，同時加入 特丁基對苯二酚(TBHQ) 0. 02g,加熱，攪拌浸提2h,過濾得浸提液1;向濾渣中加入 經(jīng)鹽酸調(diào)節(jié)pH-2. 0的90。/。乙醇溶液2. 5L,同時加入D-異抗壞血酸0. 05g,加熱，攪拌 浸提2h,過濾得浸提液，再向殘渣中加入此種提取液按同樣方法浸提，過濾得浸提液， 合并兩次浸提液，是為浸提液2;向殘渣中加入純水3L，加熱，攪拌浸提2h,過濾得 浸提液3。取浸提液l,調(diào)節(jié)pH-7. 0，濃縮至荷葉黃酮含量為3mg/mL，泵入AB-8大孔樹脂 柱中吸附，上樣量為4BV,以不同乙醇濃度的有機溶液各2BV梯度洗脫，收集70%乙醇 洗脫部分，減壓回收乙醇，再進一步濃縮后真空干燥，得到棕黃色粉末產(chǎn)品3.254g， 其中含荷葉黃酮2. 747g，純度為84.43%。取浸提液2，減壓回收乙醇，再加入2。/。鹽酸溶液2L,經(jīng)超聲溶解lh后，用2L正 已烷分三次萃取色素，調(diào)節(jié)溶液pH-7. 0,離心，過濾，調(diào)節(jié)上清液pH43. 0，泵入DIOI 大孔樹脂柱中吸附，上樣量為2BV,以不同甲醇濃度的有機溶液各2BV梯度除雜，最 后用4BV體積50%甲醇溶液洗脫，收集50y。甲醇洗脫部分，減壓回收甲醇，再進一步濃 縮后真空干燥，得到黃綠色粉末產(chǎn)品0.514g,其中含荷葉生物堿0.425g,純度為 82. 76%。取浸提液3，濃縮至糖度為5%,調(diào)節(jié)pH-6. 0,泵入柱溫控制在55T下的AB-8大 孔樹脂柱中吸附脫色，上樣量為5.5BV,再以1BV的純水沖洗滯留在柱中的荷葉多糖， 合并漏出液，減壓濃縮后冷凍干燥，得到略帶黃色的白色粉末產(chǎn)品10.085g,其中含 荷葉多糖8.647g,純度為85.74%。實施實例2。取新鮮荷葉，經(jīng)含0. l%NaCl的磷酸溶液(pH=4. 0)清洗以后，烘干至水含量為 8%時，粉碎，過18目篩，稱取粉碎后的荷葉干粉100g，徽波處理，輸出功率為300W, 總處理時間為2min，然后加入由氨水調(diào)節(jié)pH44. 0的50%的乙醇溶液2. 5L,同時加入 二丁基羥基甲苯(BHT) 0. 02g,加熱，攪拌浸提2h,過濾得浸提液l;向濾渣中加入 經(jīng)鹽酸調(diào)節(jié)pH=3. 0的90%乙醇溶液2. 5L,同時加入D-異抗壞血酸0. 05g,加熱，攪拌 浸提2h,過濾得浸提液，再向殘渣中加入此種提取液按同樣方法浸提，過濾得浸提液， 合并兩次浸提液，是為浸提液2;向殘渣中加入純水3L，加熱，攪拌浸提211，過濾得 浸提液3。取浸提液l,調(diào)節(jié)pH-6. 5，濃縮至荷葉黃酮含量為3mg/mL，泵入AB-8大孔樹脂 柱中吸附，上樣量為4BV,以不同乙醇濃度的有機溶液各2BV梯度洗脫，收集〉60%乙醇洗脫部分，減壓回收乙醇，再進一步濃縮后真空干燥，得到棕黃色粉末產(chǎn)品3.456g, 其中含荷葉黃酮2. 833g，純度為84.20%。取浸提液2，減壓回收乙醇，再加入2y。鹽酸溶液2L,經(jīng)超聲溶解lh后，用2L正 已烷分三次萃取色素，調(diào)節(jié)溶液pH-7， 0,離心，過濾，調(diào)節(jié)上清液pH-14. 0，泵入DIOI 大孔樹脂柱中吸附，上樣量為2BV,以不同甲醇濃度的有機溶液各2BV梯度除雜，最 后用4BV體積60%甲醇溶液洗脫，收集60。/。甲醇洗脫部分，減壓回收甲醇，再進一步濃 縮后真空干燥，得到黃綠色粉末產(chǎn)品0.502g，其中含荷葉生物堿0.420g，純度為 83. 50°/。。取浸提液3，濃縮至糖度為6%,調(diào)節(jié)pH-6. 0,保持溶液溫度55'C，泵入AB-8大 孔樹脂柱中吸附脫色，上樣量為5.5BV，再以1BV的純水沖洗滯留在柱中的荷葉多糖， 合并濾出液，減壓濃縮后冷凍干燥，得到略帶黃色的白色粉末產(chǎn)品10.125g,其中含 荷葉多糖8. 726g,純度為86. 183°/。。
權利要求
1、一種同步分離提取與純化荷葉中黃酮、生物堿和多糖的方法，其特征是工藝步驟如下(1)將新鮮荷葉用含0.1％NaCl的磷酸水溶液(pH＝3.0-4.0)常溫浸泡3min，淋洗瀝干后干燥，粉碎至18目-30目，微波預處理；(2)將經(jīng)微波處理后的荷葉干粉，加入25-30倍40％-70％的堿性有機溶液，調(diào)pH＝9.0-14.0，加入抗氧化劑0.1g/Kg-0.3g/Kg干荷葉，在65℃-85℃下浸提1-2小時，提取1次，以提取荷葉黃酮；(3)將(2)中所得荷葉粉殘渣，加入25-30倍60％-95％的酸性有機溶液，調(diào)pH＝1.0-6.0，加入抗氧化劑0.3g/Kg-0.5g/Kg干荷葉，在65℃-85℃下浸提1h-2h，提取2次，以提取荷葉生物堿；(4)將(3)中所得荷葉粉殘渣，加入25-30倍的中性水，調(diào)pH＝6.0-8.0，在65℃-85℃下浸提1h-2h，提取1次，以提取荷葉多糖；(5)將(2)中所提取的荷葉黃酮粗提物，經(jīng)離心、過濾后的上清液，減壓蒸餾回收乙醇后，用10％鹽酸調(diào)溶液至pH＝6.5-7.0，再經(jīng)離心、過濾，取上清液配制成1mg/mL-5mg/mL上樣液，經(jīng)弱極性大孔樹脂吸附后用純水、10％-30％乙醇分別沖洗除去雜質(zhì)，50-90％有機溶液洗脫，收集洗脫液，在真空度0.06Mpa-0.09Mpa、65℃-85℃下蒸發(fā)濃縮，回收浸提液中的有機溶劑，得到濃縮液，經(jīng)真空干燥制得荷葉黃酮成品；(6)將(3)中所提取的荷葉生物堿粗提物，經(jīng)離心、過濾后的上清液，減壓蒸餾回收乙醇后，經(jīng)酸性溶液復溶，酸性條件下有機溶劑脫色，調(diào)節(jié)pH＝7.0后離心、過濾除去鞣質(zhì)；取上清液，調(diào)節(jié)pH≥12.0，并配制成0.1mg/mL-2mg/mL上樣液，經(jīng)弱極性大孔樹脂吸附后，用純水、10％-30％乙醇分別沖洗除去雜質(zhì)，50％-90％有機溶液洗脫，收集洗脫液，在真空度0.06Mpa-0.09Mpa、65℃-85℃下蒸發(fā)濃縮，回收浸提液中的有機溶劑，得到濃縮液，經(jīng)真空干燥制得荷葉生物堿成品；(7)將(4)中所提取的荷葉多糖粗提物，經(jīng)離心、過濾后的上清液濃縮至糖濃度為2％-6％，調(diào)節(jié)pH＝6.0-7.0，保持溶液溫度為40℃-60℃下條件下，經(jīng)弱極性大孔樹脂動態(tài)吸附脫色后，水洗出滯留于柱中的荷葉多糖，并濃縮至糖濃度4％-6％，用saveg除蛋白后，在真空度0.06Mpa-0.09Mpa、65℃-85℃下蒸發(fā)濃縮，得到濃縮液，經(jīng)真空或冷凍干燥制得荷葉多糖成品。
2、 根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征是步驟(2)所述的有機溶劑為甲醇、乙 醇或者正丁醇；抗氧化劑為特丁基對苯二酚、丁基羥基茴香醚或者二丁基羥基甲苯。
3、 根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征是步驟(3)所述的有機溶劑為甲醇、乙 醇或者正丁醇；抗氧化劑為D-異抗壞血酸或者D-異抗壞血酸鈉。
4、 根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征是步驟(5)所述的有機溶劑為甲醇、乙醇或者正丁醇；弱極性大孔樹脂為AB-8、 D101B、 H-30或者H-60。
5、 根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征是步驟(6)所述的有機溶劑為正已烷、 氯仿、石油醚、甲醇、乙醇或者正丁醇；弱極性大孔樹脂為DlOl、 H-20、 H-60、 C004 或者C008。。
6、 根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征是步驟(7 )所述的弱極性大孔樹脂為AB-8、 D208、 LSA-5B、 D4020、 D201、 S-8、 NKA或者MG-1; saveg試劑配制用有機溶劑為氯 仿、正丁醇或者戊醇。
全文摘要
一種同步分離提取與純化荷葉中黃酮、生物堿和多糖的方法，其特征是將荷葉經(jīng)預處理后，加入不同的有機溶劑連續(xù)浸提三次，分別得到黃酮、生物堿和多糖三種浸提液，經(jīng)濃縮、脫色、干燥處理得黃酮、生物堿、多糖三種產(chǎn)品，該方法克服了目前僅只能提取單一成分或在提取單一成分過程中對其他成分的破壞或對其他成分提取率低、或提取物雜質(zhì)高等的缺點，兼顧了黃酮、生物堿和多糖的化學性質(zhì)，充分考慮了各種成分提取過程中的相互影響、活性和提取率，具有提取率高，純度高，荷葉資源利用率高的特點。
文檔編號A61K36/185GK101402627SQ20081010727
公開日2009年4月8日 申請日期2008年10月15日 優(yōu)先權日2008年10月15日
發(fā)明者斌 單, 范亞葦, 鄧澤元 申請人:南昌大學