專利名稱：一種提純桑葉黃酮的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物分離技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種采用大孔樹(shù)脂和聚酰胺聯(lián)用制備高 純度桑葉黃酮的工藝。
背景技術(shù)：
我國(guó)是世界上種桑養(yǎng)蠶最早的國(guó)家，也是中華民族對(duì)人類文明的偉大貢獻(xiàn)之一。 桑樹(shù)的栽培已有七千多年的歷史。栽培范圍廣泛，東北自哈爾濱以南；西北從內(nèi)蒙古南部至 新疆、青海；南至兩廣，東至臺(tái)灣；西至四川、云南；長(zhǎng)江中下游各地栽培最多。桑葉為?？?Moraceae)桑屬植物桑(Morns dba L.)的葉，味苦、甘，性寒，歸肺、 肝經(jīng)，具有疏散風(fēng)熱、清肺潤(rùn)燥、平肝明目、涼血止血之功效?！侗静菥V目》記載桑葉乃手、足 陽(yáng)明之藥，治勞熱咳嗽，明目長(zhǎng)發(fā)，止消渴。桑葉含有含牛膝留酮、脫皮留酮、保留醇、蕓香甙、桑甙、異槲皮甙、傘形花內(nèi) 酯、東莨菪甙、a_、己烯醛、葫蘆巴堿(trigonelline、膽堿、腺嘌呤、天冬氨酸、氯原酸。 桑葉中黃酮類成分含量豐富，含量約占干葉重的1.0% 3.0%，是植物莖葉中黃酮類化合 物含量較高的一種。黃酮類化合物因其生理活性多種多樣，引起了國(guó)內(nèi)外學(xué)者的廣泛重視， 研究進(jìn)展很快。它具有良好的自由基、抗氧化、抗衰老、降血脂、免疫調(diào)節(jié)、抗菌等生理活性， 具有廣闊的應(yīng)用前景?，F(xiàn)有提取桑葉黃酮多是乙醇提取或水煎煮，再經(jīng)大孔樹(shù)脂吸附或萃取。如專利申 請(qǐng)?zhí)?00810059049 “一種從桑葉中提取黃酮、多糖的方法”，公開(kāi)的方法采用乙醇超聲提取 制備出低含量桑葉黃酮。還如專利200810236144 “一種聯(lián)產(chǎn)桑葉黃酮、多糖和生物堿”，公 開(kāi)的方法采用水加熱浸提、大孔樹(shù)脂吸附。還如陳建明等發(fā)表的“AB-8大孔樹(shù)脂分離純化 桑葉黃酮的工藝研究”也是采取乙醇超聲提取。這些方法存在著醇耗大或工業(yè)化難度大，所 得黃酮含量比較低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了克服以上述已有工藝缺陷和不足，提供一種高純度桑葉黃酮
生產(chǎn)工藝。本發(fā)明的目的是這樣來(lái)實(shí)現(xiàn)的一種提純桑葉黃酮的方法，其特征在于包括以下幾個(gè)步驟1)將桑葉粉碎，用6-10倍量ph9_12堿水40_60°C動(dòng)態(tài)提取1_3小時(shí)，提取2_3次， 合并提取液；2)提取液調(diào)ph5_6加入大孔樹(shù)脂柱吸附，水_醇洗脫，收集桑葉黃酮流分，減壓濃 縮至密度1. 2-1. 3 ；3)濃縮液加入聚酰胺樹(shù)脂烘干，再1 2聚酰胺樹(shù)脂裝柱，水一醇梯度洗脫，收集 桑葉黃酮流分調(diào)phl-3，靜置結(jié)晶；4)重結(jié)晶將上述結(jié)晶物濾出，用70-80%乙醇回流溶解靜置結(jié)晶2-3次，干燥即得廣品。步驟1)中的堿可選氫氧化鈉或氫氧化鈣。優(yōu)選氫氧化鈣。步驟2)、3)中的調(diào)ph的可選鹽酸、硫酸或磷酸的一種。步驟2)中大孔樹(shù)脂可選D101或SPD100，水-醇洗脫為水洗中性再5-6BV650_70% 乙醇洗脫桑葉黃酮。優(yōu)選65%乙醇步驟3)中的水一醇梯度洗脫順序?yàn)?-7BV水一4-6BV10-30 %乙醇 —5-6BV60-80% 乙醇。綜上所述，本發(fā)明存在以下優(yōu)點(diǎn)1)堿水提取，黃酮溶出快，無(wú)需濃縮，直接上柱。2)大孔樹(shù)脂和聚酰胺柱的應(yīng)用，除雜效果好，中間產(chǎn)物更易純化。下面將結(jié)合具體實(shí)施方式
進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限 于下列實(shí)施方式。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1 取1kg干燥桑葉(桑葉黃酮含量3% )，粉碎，加入lOLphlO的氫氧化鈣溶液，加熱 至50°C動(dòng)態(tài)提取2小時(shí)，提取兩次，合并提取液濾過(guò)鹽酸調(diào)ph至5加入500mlD101樹(shù)脂柱 吸附，水洗中性，2. 5L65 %乙醇洗脫桑葉黃酮，減壓濃縮至密度1. 2，加入20g聚酰胺，烘干 和100g新聚酰胺一起裝柱，依次用800ml水一500ml30%乙醇一600ml75%乙醇洗脫，收集 桑葉黃酮流分加入鹽酸調(diào)ph至1靜置結(jié)晶，濾出結(jié)晶物再用75%乙醇回流溶解靜置結(jié)晶2 次，濾出結(jié)晶，干燥得桑葉黃酮21g，含量95%。實(shí)施例2 取1kg干燥桑葉(桑葉黃酮含量3% )，粉碎，加入10Lphl2的氫氧化鈣溶液，加熱 至40°C動(dòng)態(tài)提取2小時(shí)，提取兩次，合并提取液濾過(guò)硫酸調(diào)ph至6加入500mlD101樹(shù)脂柱 吸附，水洗中性，2. 5L70%乙醇洗脫桑葉黃酮，減壓濃縮至密度1. 25，加入20g聚酰胺，烘干 和100g新聚酰胺一起裝柱，依次用700ml水一700ml 10%乙醇一700ml60%乙醇洗脫，收集 桑葉黃酮流分加入硫酸調(diào)Ph至3靜置結(jié)晶，濾出結(jié)晶物再用75%乙醇回流溶解靜置結(jié)晶3 次，濾出結(jié)晶，干燥得桑葉黃酮19g，含量96%。實(shí)施例3 取lkg干燥桑葉(桑葉黃酮含量3% )，粉碎，加入8LpM的氫氧化鈉溶液，加 熱至60°C動(dòng)態(tài)提取3次，提取時(shí)間3 — 2 — 1小時(shí)，合并提取液濾過(guò)鹽酸調(diào)ph至5加 入500mlSPD100樹(shù)脂柱吸附，水洗中性，3L50%乙醇洗脫桑葉黃酮，減壓濃縮至密度1. 2， 加入30g聚酰胺，烘干和150g新聚酰胺一起裝柱，依次用800ml水一500ml20 %乙醇 —600ml75%乙醇洗脫，收集桑葉黃酮流分加入鹽酸調(diào)ph至2靜置結(jié)晶，濾出結(jié)晶物再用 75%乙醇回流溶解靜置結(jié)晶，濾出結(jié)晶，干燥得桑葉黃酮20g，含量95%。實(shí)施例4 取10kg干燥桑葉(桑葉黃酮含量3% )，粉碎，加入100Lphl0的氫氧化鈣溶液，加 熱至40°C動(dòng)態(tài)提取2小時(shí)，提取兩次，合并提取液濾過(guò)鹽酸調(diào)ph至6加入5LD101樹(shù)脂柱吸 附，水洗中性，25L65%乙醇洗脫桑葉黃酮，減壓濃縮至密度1. 25，加入200g聚酰胺，烘干和1000g新聚酰胺一起裝柱，依次用8L水一5L30%乙醇一6L75%乙醇洗脫，收集桑葉黃酮流 分加入鹽酸調(diào)ph至1靜置結(jié)晶，濾出結(jié)晶物再用75%乙醇回流溶解靜置結(jié)晶2次，濾出結(jié) 晶，干燥得桑葉黃酮208g，含量95.2%。實(shí)施例5 取10kg干燥桑葉(桑葉黃酮含量3% )，粉碎，加入lOOLphlO的氫氧化鈉溶液，加 熱至50°C動(dòng)態(tài)提取1. 5小時(shí)，提取3次，合并提取液濾過(guò)硫酸調(diào)ph至5加入5LSPD100樹(shù)脂 柱吸附，水洗中性，30L65%乙醇洗脫桑葉黃酮，減壓濃縮至密度1. 25，加入200g聚酰胺，烘 干和1000g新聚酰胺一起裝柱，依次用7L水一6L20%乙醇一7L70%乙醇洗脫，收集桑葉黃 酮流分加入鹽酸調(diào)ph至2靜置結(jié)晶，濾出結(jié)晶物再用75%乙醇回流溶解靜置結(jié)晶2次，濾 出結(jié)晶，干燥得桑葉黃酮201g，含量95%。
權(quán)利要求
一種提純桑葉黃酮的方法，其特征在于包括以下幾個(gè)步驟1)將桑葉粉碎，用6-10倍量ph9-12堿水40-60℃動(dòng)態(tài)提取1-3小時(shí)，提取2-3次，合并提取液；2)提取液調(diào)ph5-6加入大孔樹(shù)脂柱吸附，水—醇洗脫，收集桑葉黃酮流分，減壓濃縮至密度1.2-1.3；3)濃縮液加入聚酰胺樹(shù)脂烘干，再1∶2聚酰胺樹(shù)脂裝柱，水→醇梯度洗脫，收集桑葉黃酮流分調(diào)ph1-3，靜置結(jié)晶；4)重結(jié)晶將上述結(jié)晶物濾出，用70-80％乙醇回流溶解靜置結(jié)晶2-3次，干燥即得產(chǎn)品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述提純桑葉黃酮的方法，其特征在于步驟1)中的堿可選氫氧化鈉 或氫氧化鈣。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述提純桑葉黃酮的方法，其特征在于步驟2)、3)中的調(diào)ph的可選 鹽酸、硫酸或磷酸的一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述提純桑葉黃酮的方法，其特征在于步驟2)中大孔樹(shù)脂可選 DlOl或SPD100，水一醇洗脫為水洗中性再5-6BV50-70%乙醇洗脫桑葉黃酮。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述提純桑葉黃酮的方法，其特征在于步驟3)中的水一醇梯度洗脫 順序?yàn)?5-7BV 水一4-6BV10-30% 乙醇一5-6BV60_80% 乙醇。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種提純桑葉黃酮的方法。工藝步驟包括堿水加熱提取，調(diào)酸過(guò)大孔樹(shù)脂柱，聚酰胺分離純化，調(diào)酸結(jié)晶和重結(jié)晶。采用本發(fā)明生產(chǎn)桑葉黃酮，工藝簡(jiǎn)單、能耗低、大孔樹(shù)脂、聚酰胺和乙醇可以重復(fù)使用，所得產(chǎn)品純度高、符合食品醫(yī)藥要求。該工藝適合工業(yè)化。
文檔編號(hào)A61P39/06GK101862372SQ201010130290
公開(kāi)日2010年10月20日 申請(qǐng)日期2010年3月23日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月23日
發(fā)明者蘇劉花 申請(qǐng)人:南京澤朗農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司