一種同時(shí)分離、提純荷葉黃酮和多糖的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種荷葉提取物的提取方法，具體涉及一種同時(shí)分離、提純荷葉黃酮和多糖的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]荷葉為睡蓮科植物蓮的葉子，具有藥食兩用的植物葉，荷葉中含有荷葉黃酮和多糖等多種活性物質(zhì)，有清熱解毒、升發(fā)清陽(yáng)、涼血止血的作用，荷葉色青綠，氣芬芳，還有很好的降血脂、降膽固醇和減肥的功效；其中荷葉黃酮是荷葉具有生物抗氧化性、抗衰老的主要生理活性物質(zhì)，具有降低膽固醇水平、治療心腦血管疾病的作用；多糖具有降血糖、降血月旨、保護(hù)免疫器官、增強(qiáng)免疫作用、抗病毒、抗癌等多種生物活性。
[0003]由于荷葉的成分復(fù)雜，目前對(duì)荷葉中功能成分的應(yīng)用主要集中于單一地提取其中的一種有效成分，舍棄其他成分，只是采取簡(jiǎn)單的進(jìn)行直接浸提或回流浸提，生產(chǎn)簡(jiǎn)單的醇提物或水提取，技術(shù)含量不高，難以實(shí)現(xiàn)附加值的產(chǎn)業(yè)升級(jí)，最大限度的開(kāi)發(fā)荷葉中有效成分的利用價(jià)值。目前的單一成分的提取主要是由于在提取單一組分時(shí)，提取條件會(huì)破壞其他組分或者導(dǎo)致其他組分的提取率低，并且純度低，后續(xù)處理復(fù)雜。因此，在充分考慮各種成分的相互影響、活性和提取率，亟待開(kāi)發(fā)一種能同時(shí)提取荷葉黃酮和多糖的方法，使得荷葉黃酮和多糖的提取率高、純度高，提高荷葉的利用率。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]為解決上述問(wèn)題，本發(fā)明的目的是提供一種同時(shí)分離、提純荷葉黃酮和多糖的方法。
[0005]本發(fā)明為實(shí)現(xiàn)上述目的，通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):
一種同時(shí)分離、提純荷葉黃酮和多糖的方法，包括以下步驟:
①將PH為9~12的堿性水溶液和荷葉混合加入容器中，于70~100°C浸提20~25小時(shí)，壓濾后得到提取液；所述的荷葉與堿性水溶液的重量體積比為Ig:8~15ml ;所述的堿性水溶液為氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣或氨水的水溶液；
②將步驟①所得提取液調(diào)節(jié)PH至3~5后加入大孔樹脂柱上，用pH為3~5的鹽酸水溶液沖洗，收集洗脫液a，將洗脫液a濃縮后除蛋白得到多糖；所述的大孔樹脂柱裝有DA-201、DlOl和DM-301組成的大孔樹脂組合物，DA-201、DlOl和DM-301的質(zhì)量比為4-10:1~6:1-6 ；
③用體積濃度為20°/『95%的乙醇沖洗步驟②處理后的大孔樹脂柱，收集洗脫液b，將洗脫液b經(jīng)減壓蒸發(fā)濃縮，回收乙醇，得到濃縮液，將濃縮液經(jīng)干燥后得到荷葉黃酮。為進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，還可以采用以下技術(shù)方案:
優(yōu)選的一種同時(shí)分離、提純荷葉黃酮和多糖的方法，DA-201、DlOl和DM-301的質(zhì)量比為 7:2:1。
[0006]優(yōu)選的一種同時(shí)分離、提純荷葉黃酮和多糖的方法，干燥方法為噴霧干燥或減壓干燥。
[0007]進(jìn)一步優(yōu)選的一種同時(shí)分離、提純荷葉黃酮和多糖的方法，包括以下步驟:
①將pH為11的堿性水溶液和荷葉混合加入容器中，于80°C浸提24小時(shí)，壓濾后得到提取液；所述的荷葉與堿性水溶液的重量體積比為Ig:10ml ;所述的堿性水溶液為氫氧化鈉水溶液；
②將步驟①所得提取液調(diào)節(jié)PH至4后加入大孔樹脂柱上，用pH為4的鹽酸水溶液沖洗，收集洗脫液a，將洗脫液a濃縮后除蛋白得到多糖；所述的大孔樹脂柱裝有DA-201、D101和DM-301組成的大孔樹脂組合物，DA-20UD101和DM-301的質(zhì)量比為7:2:1 ；
③用體積濃度為30%的乙醇沖洗步驟②處理后的大孔樹脂柱，收集洗脫液b，將洗脫液b經(jīng)減壓蒸發(fā)濃縮，回收乙醇，得到濃縮液，將濃縮液經(jīng)減壓干燥后得到荷葉黃酮。
[0008]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于:本發(fā)明采用堿性水溶液浸提荷葉后，得到提取液，通過(guò)DA-20UD101和DM-301的大孔樹脂組合物對(duì)提取液中的荷葉黃酮和多糖進(jìn)行吸附，先采用水沖洗大孔樹脂柱，將多糖分離，然后采用乙醇溶液沖洗大孔樹脂柱得到荷葉黃酮；本發(fā)明充分考慮了荷葉黃酮和多糖的化學(xué)性質(zhì)，充分考慮了各種成分提取過(guò)程中的相互影響、活性和提取率，采用DA-201、D101和DM-301的大孔樹脂組合物對(duì)荷葉黃酮和多糖同時(shí)進(jìn)行提取，并且保證所提取的兩種成分均具有提取率高、純度高的優(yōu)點(diǎn)，采用本發(fā)明的方法提取的荷葉黃酮和多糖不用后續(xù)提純處理，可直接使用；本發(fā)明利用荷葉黃酮和多糖的性質(zhì)差異，采用大孔樹脂組合物對(duì)其進(jìn)行分離提純，并且同時(shí)得到高純度、高收率的荷葉黃酮和多糖，能有效降低生產(chǎn)成本，并且本發(fā)明的工藝易于操作，工藝流程短，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[0009]一種同時(shí)分離、提純荷葉黃酮和多糖的方法，包括以下步驟:
①將PH為9~12的堿性水溶液和荷葉混合加入容器中，于70~100°C浸提20~25小時(shí)，壓濾后得到提取液；所述的荷葉與堿性水溶液的重量體積比為Ig:8~15ml ;所述的堿性水溶液為氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣或氨水的水溶液；
②將步驟①所得提取液調(diào)節(jié)PH至3~5后加入大孔樹脂柱上，用pH為3~5的鹽酸水溶液沖洗，收集洗脫液a，將洗脫液a濃縮后除蛋白得到多糖；所述的大孔樹脂柱裝有DA-201、DlOl和DM-301組成的大孔樹脂組合物，DA-201、DlOl和DM-301的質(zhì)量比為4-10:1~6:1-6 ；
③用體積濃度為20°/『95%的乙醇沖洗步驟②處理后的大孔樹脂柱，收集洗脫液b，將洗脫液b經(jīng)減壓蒸發(fā)濃縮，回收乙醇，得到濃縮液，將濃縮液經(jīng)干燥后得到荷葉黃酮。為進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，還可以采用以下技術(shù)方案:
優(yōu)選的一種同時(shí)分離、提純荷葉黃酮和多糖的方法，DA-201、DlOl和DM-301的質(zhì)量比為7:2:1，優(yōu)選的不同型號(hào)大孔樹脂的配比能有效提高荷葉黃酮和多糖的純度和收率。
[0010]優(yōu)選的一種同時(shí)分離、提純荷葉黃酮和多糖的方法，干燥方法為噴霧干燥或減壓干燥，優(yōu)選的干燥方法能有效降低荷葉黃酮的污染和氧化變質(zhì)。
[0011]進(jìn)一步優(yōu)選的一種同時(shí)分離、提純荷葉黃酮和多糖的方法，包括以下步驟:
①將pH為11的堿性水溶液和荷葉混合加入容器中，于80°C浸提24小時(shí)，壓濾后得到提取液；所述的荷葉與堿性水溶液的重量體積比為Ig:10ml ;所述的堿性水溶液為氫氧化鈉水溶液；
②將步驟①所得提取液調(diào)節(jié)PH至4后加入大孔樹脂柱上，用pH為4的鹽酸水溶液沖洗，收集洗脫液a，將洗脫液a濃縮后除蛋白得到多糖；所述的大孔樹脂柱裝有DA-201、D101和DM-301組成的大孔樹脂組合物，DA-20UD101和DM-301的質(zhì)量比為7:2:1 ；
③用體積濃度為30%的乙醇沖洗步驟②處理后的大孔樹脂柱，收集洗脫液b，將洗脫液b經(jīng)減壓蒸發(fā)濃縮，回收乙醇，得到濃縮液，將濃縮液經(jīng)減壓干燥后得到荷葉黃酮。優(yōu)選的同時(shí)分離、提純荷葉黃酮和多糖的方法能有效提高荷葉黃酮和多糖的純度和收率，并且以上實(shí)驗(yàn)條件的選擇能使大孔樹脂吸附的荷葉黃酮和多糖易于沖洗，為最優(yōu)制備工藝。
[0012]本發(fā)明的荷葉為水分小于13%的干荷葉，也可使用鮮荷葉，可先將水分烘干至水分小于13%。
[0013]本發(fā)明的大孔樹脂組合物在進(jìn)行荷葉黃酮和多糖的分離前，需要進(jìn)行預(yù)處理，具體為:在裝柱之前先將按照比例混合的大孔樹脂用乙醇浸泡24小時(shí)，濕法裝柱后用純凈水洗至無(wú)醇味。
[0014]本發(fā)明除去多糖中蛋白，采用北京正天成澄清技術(shù)有限公司生產(chǎn)的ZTC1+1天然澄清劑-1I型，該試劑由A劑和B劑組成。使用時(shí)根據(jù)說(shuō)明書，配制方法如下:A組分:稱取澄清劑A組分lg，用1mL蒸餾水溶解，并攪拌成糊狀，再加入剩余90mL蒸餾水，不斷攪拌，使其充分溶解，溶脹24h，配成1%黏膠液(用前搖勻)10mL,即得。B組分:先配制1%醋酸(v/v)，稱取澄清劑B組分lg，用1mL 1%醋酸溶解，并攪拌成糊狀，加入余下的90mL 1%醋酸，充分?jǐn)嚢枋蛊淙芙?，溶?4h，配成1%黏膠液(用前搖勻)10