專(zhuān)利名稱(chēng)：：診斷、監(jiān)測(cè)和治療激素失調(diào)的組合物、試劑、試劑盒及方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及激素失調(diào)標(biāo)記物；可以檢測(cè)激素失調(diào)標(biāo)記轉(zhuǎn)錄物和翻譯產(chǎn)物的試劑；用于測(cè)定激素失調(diào)標(biāo)記轉(zhuǎn)錄物和翻譯產(chǎn)物的試劑盒(kit)和方法；在個(gè)體間篩選和診斷激素失調(diào)的方法和試劑盒，監(jiān)測(cè)已診斷患有激素失調(diào)的病人對(duì)治療的響應(yīng)、病情發(fā)展和病情復(fù)發(fā)的方法和試劑盒；特異結(jié)合激素失調(diào)標(biāo)記轉(zhuǎn)錄物的翻譯產(chǎn)物的化合物；使用一種或幾種激素失調(diào)標(biāo)記的組合物或它們的翻譯產(chǎn)物作為治療劑，治療激素失調(diào)；治療激素失調(diào)的組合物和方法。
背景技術(shù)：
：每個(gè)細(xì)胞能夠生產(chǎn)大量調(diào)節(jié)分子(激素)。典型的內(nèi)分泌腺和它們的激素產(chǎn)物被特化以在整個(gè)有機(jī)體水平上進(jìn)行調(diào)控，但在許多情況下可以用于其它途徑或僅僅在組織水平上進(jìn)行調(diào)控。最通常通過(guò)體內(nèi)平衡控制系統(tǒng)來(lái)調(diào)節(jié)已知、激素的產(chǎn)率，一般通過(guò)負(fù)反饋?zhàn)饔?。除了生產(chǎn)，激素的體內(nèi)平衡調(diào)節(jié)取決于激素的代謝和排泄。用其它的激素(刺激或釋放-激素)、離子或營(yíng)養(yǎng)素的血漿濃度以及結(jié)合蛋白、神經(jīng)元和智力活動(dòng)可以刺激和抑偉't激素分泌。肽類(lèi)激素是一類(lèi)肽，它們分泌進(jìn)入血流并在活的動(dòng)物中具有內(nèi)分泌功能。在幾個(gè)階段、典型地在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中處理肽^^激素前體(前-激素原)，包括切除N-末端信號(hào)序歹拼且有時(shí)糖割七以產(chǎn)生激素原。這些激素原常常包含多余的氨基酸殘基這對(duì)于引導(dǎo)激素分子折疊為它的活性構(gòu)型是需要的，但一旦激素折疊后就沒(méi)有功能了。細(xì)胞內(nèi)特異的肽內(nèi)切酶恰洽在激素原釋放iSA血流之前對(duì)其切害U產(chǎn)生成熟的激素分子形式。成熟肽激素然后在血液中擴(kuò)散到體內(nèi)所有的細(xì)胞，在它們的靶細(xì)胞表面上與特異受體相互作用。肽類(lèi)激素在大多數(shù)主要危急生命的疾病如糖尿病、肥胖、癌癥和心血管疾病中具有關(guān)鍵作用。一直需要激素失調(diào)特異性標(biāo)記。一直需要可用于測(cè)定病人樣品中激素失調(diào)標(biāo)記存在的試劑和試劑盒。一直需要可用于測(cè)定病人樣品中激素失調(diào)未來(lái)發(fā)展傾向的試齊訴n試劑盒。一直需要可用于篩選和診斷具有激素失調(diào)個(gè)體的方法和監(jiān)測(cè)己診斷患有激素失調(diào)的病人對(duì)治療的響應(yīng)、病情發(fā)展和病情復(fù)發(fā)的方法。一直需要可用于確定個(gè)體具有的激素失調(diào)(hormonalimbalance)類(lèi)型的試劑、試劑盒和方法。一直需要可特異耙向激素失調(diào)相關(guān)細(xì)胞的組合物。一直需要可用于治療被懷疑患有激素失調(diào)個(gè)體的改進(jìn)方法。術(shù)語(yǔ)以下說(shuō)明書(shū)和權(quán)禾腰求中常常會(huì)用到多個(gè)術(shù)語(yǔ)，根據(jù)本發(fā)明這些術(shù)語(yǔ)所具有的含義如下"激素失調(diào)(imbalance)核,歹U"-SEQIDNO:l至SEQIDNO:2和SEQIDNO:20至SEQBDNO:21的任一個(gè)中所示的序列，與所述序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少％%、至少97%、至少98%或至少99%同一性(見(jiàn)下文)的序列，上述序列長(zhǎng)度最少為15b.p.的片段(見(jiàn)下文)。這些序列是編碼天然存在的、天然的和已知的胰高血糖素的選擇性拼接變體(alternativesplicevariant)的序列，^NCBI基因數(shù)據(jù)庫(kù)中描述為GenelD:2641，登錄號(hào)為NM—002054，該序列編碼180個(gè)氨基酸的人21kDa前蛋白原，其被切割為5個(gè)不同的成熟肽，胰高血糖素(Glucagon)、GLP-1、GLP-2、胃酸分泌調(diào)節(jié)B太(Oxyntomodulin)和腸高血糖素(Glicentin)。其中之一胰高血糖素通過(guò)提高糖原異生和降低糖酵解來(lái)調(diào)節(jié)血液葡萄糖，在葡萄糖代謝和體內(nèi)平衡中起關(guān)鍵作用。胰高血糖素是胰島素的反調(diào)節(jié)激素，提高血漿葡萄糖濃度以響應(yīng)胰島素誘導(dǎo)的低血糖，并且在起始和保持糖尿病血糖升高中起重要作用。GLP-1在胃動(dòng)力和抑制血漿胰高血糖素7jC平Ji^重要作用，是一種葡萄糖性胰島素釋放的強(qiáng)力刺激物。GLP-1可能涉及在外周組織中抑偉鵬脹感和刺激葡萄糖處理，不胰島素的作用，并且在腸上皮上具有皿生長(zhǎng)活性。GLP-1此外可以M3i影響LH、TSH、CRH、催產(chǎn)素(oxytocin)和血管加壓素(vasopressin)分泌來(lái)調(diào)節(jié)下丘腦垂體軸(HPA)。GLP-1fflil^^l夷島再生和IWl3-細(xì)胞增殖來(lái)提高胰島質(zhì)量，并且它抑制|3-細(xì)胞凋亡。GLP-2刺激腸生長(zhǎng)和正向調(diào)節(jié)小腸內(nèi)絨毛高度，伴隨著提高小囊細(xì)胞增殖和降低腸上皮細(xì)胞凋亡。從胃到結(jié)腸的胃腸道是GLP-2作用的主要革巴點(diǎn)。GLP-2在營(yíng)養(yǎng)體內(nèi)平衡、fflil增強(qiáng)胃腸功能來(lái)提高營(yíng)養(yǎng)消化以及增強(qiáng)營(yíng)養(yǎng)處理(nutrientdisposal)中起關(guān)鍵作用。GLP-2刺激腸的葡萄糖繊和降低粘膜的滲透性。胃酸分泌調(diào)節(jié)肽顯著地?cái)嘭凳澄飻z入量，它抑制人體內(nèi)的胃排空。此外胃酸分泌調(diào)節(jié)肽抑制胃排空，其可以引起增加的胃膨脹，隨后可以fflil引起脹滿感以有助于t鵬感。最后，第5肽腸高血糖素可以調(diào)節(jié)胃酸分泌和胃幽門(mén)十二指腸的活力。腸高血糖素同時(shí)可以在生命的早期對(duì)腸粘膜生長(zhǎng)起重要作用。應(yīng)該強(qiáng)調(diào)，本發(fā)明的新變體是來(lái)自胰高血糖素選擇性微alternativesplicing)的天然存在的序列，而不僅僅是該基因的截短、突變或片段形式。畫(huà)SEQIDNO:3至SEQIDNO:5禾口SEQIDNO:22至SEQE)NO:24的任一個(gè)中所示的序列，與所述序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%同一性(見(jiàn)下文)的序列，上,列的片段(見(jiàn)下文，表2)長(zhǎng)度最少為15b.p.。這些序列是編碼天然存在的、天然的和己知的神經(jīng)降壓素(neurotension)的選擇性拼接變體的序列，在NCBI基因數(shù)據(jù)庫(kù)中描述為GenelD:4922，登錄號(hào)為NM—006183，該序列編碼人的20kDa，兩個(gè)肽即神經(jīng)調(diào)節(jié)肽N和神經(jīng)降壓素的170個(gè)氨基酸共同前體。神經(jīng)降壓素是一種分泌十三肽，其廣泛地分布在整個(gè)中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，并可肖跑神經(jīng)遞質(zhì)或神經(jīng)調(diào)節(jié)劑的作用。它可能涉及多巴胺相關(guān)的病理生理事件(pathophysiologicalevents)、腸結(jié)構(gòu)和功能的維持和脂肪代謝的調(diào)節(jié)。組織特異性處理可導(dǎo)致在一些組織中形成神經(jīng)調(diào)節(jié)形CN和神經(jīng)降壓素的更大形式。大分子形式可以是更穩(wěn)定的肽，其也具有生物學(xué)活性。應(yīng)該強(qiáng)調(diào)，本發(fā)明的新變體是來(lái)自神經(jīng)降壓素選擇性拼接的天然存在的序列，而不僅僅是該基因的截短、突變或片段形式。-SEQIDNO:6至SEQIDNO:7和SEQIDNO:25至SEQIDNO:26的任一個(gè)中所示的序列，與所述序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%同一性(見(jiàn)下文)的序列，J^序列長(zhǎng)度最少為15b.p.的片段(見(jiàn)下文)。這些序歹提編碼天然存在的、天然的和已知的胰多肽(PPY)的選擇性拼接變體的序列，toCBI基因數(shù)據(jù)庫(kù)中描述為GenelD:5539，登錄號(hào)為NM一002722，i亥序列編碼95個(gè)氨基酸的人10kDa蛋白前體。胰島素祖angerhans的胰島中合成并作為胰腺和胃腸功能的調(diào)節(jié)劑。該36個(gè)氨基酸的激素涉及調(diào)節(jié)l^l外分泌和膽道動(dòng)力。PPY涉及調(diào)節(jié)攝入食物量。應(yīng)該強(qiáng)調(diào)，本發(fā)明的新變體是來(lái)自PPY的選擇性拼接的天然存在的序列，而不僅僅是該基因的截短、突變或片段形式。-SEQIDN0:8至SEQIDN0:9和SEQIDNO:27至SEQIDNO:28的任一個(gè)中所示的序列，與所述序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%同一性(見(jiàn)下文)的序列，Jd^序列長(zhǎng)度最少為15b.p.的片段(見(jiàn)下文)。這些序列是編碼天然存在的、天然的和已知的CART(可卡因-和安非他明-調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄物)的選擇性拼接變體的序列，在NCBI基因數(shù)據(jù)庫(kù)中描述為GenelD:9607，登錄號(hào)為NM—004291，該序列編碼為116個(gè)氨基酸的人13kDa前蛋白。CART是與瘦素和神經(jīng)肽Y作用緊密相關(guān)的飽脹感因子；該厭食肽抑制正常的和饑餓誘導(dǎo)的攝食，并完全阻斷下丘腦中神經(jīng)肽Y誘導(dǎo)的和瘦素調(diào)節(jié)的攝食反應(yīng)。它，神經(jīng)元的發(fā)育和體外存活。應(yīng)該強(qiáng)調(diào)，本發(fā)明的新變體是來(lái)自CART的選擇性拼接的天然存在的序列，而不僅僅是該基因的截短、突變或片段形式。隱SEQK)NO:lO至SEQIDNO:ll和SEQIDNO:29至SEQIDNO:30的任一個(gè)中所示的序列，與所述序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%同一性(見(jiàn)下文)的序列，Jd^序列長(zhǎng)度最少為15b.p.的片段(見(jiàn)下文)。這些序列是編碼天然存在的、天然的和已知的尿皮質(zhì)醇(UCN)的選擇性拼接變體的序列，在NCBI基因數(shù)據(jù)庫(kù)中描述為GenelD:7349，登錄號(hào)為NM—003353，該序列編碼124個(gè)氨基酸的人13.5kDa前蛋白。尿皮質(zhì)醇在體外作用以刺激促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)的分泌并可能擔(dān)負(fù)對(duì)食欲的壓制作用。尿皮質(zhì)醇與CRF受體類(lèi)型1、2-a^2-卩以高度親合力結(jié)合。應(yīng)該強(qiáng)調(diào)，本發(fā)明的新變體是來(lái)自尿皮質(zhì)醇的選擇性拼接的天然存在的序列，而不僅僅是該基因的截短、突變或片段形式。國(guó)SEQIDN0:12至SEQIDNO:13和SEQIDNO:31至SEQIDNO:32的任一個(gè)中所示的序列，與所述序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%同一性(見(jiàn)下文)的序列，J^序列長(zhǎng)度最少為15b.p.的片段(見(jiàn)下文)。這些序列是編碼天然存在的、天然的和已知的腦啡肽原(PENK)的選擇性鵬變體的序列，在NCBI基因數(shù)據(jù)庫(kù)中描述為GenelD:5179，登錄號(hào)為NM—006211，i^列編碼267個(gè)氨基酸的人31kDa前蛋白。腦啡肽原與阿片類(lèi)藥物競(jìng)爭(zhēng)并且作用與之相仿。它在許多生理功能包括疼痛感知和應(yīng)激反應(yīng)中起作用。應(yīng)該強(qiáng)調(diào)，本發(fā)明的新變體是來(lái)自腦啡肽原的選擇性拼接的天然存在的序列，而不僅僅是該基因的截短、突變或片段形式。-SEQIDNO:14至SEQIDNO:15和SEQIDNO:33至SEQIDNO:34的任一個(gè)中所示的序列，與所述序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%同一性(見(jiàn)下文)的序列，J^序列長(zhǎng)度最少為15b.p.的片段(見(jiàn)下文)。這些序列是編碼天然存在的、天然的和已知的斯f!素2(STC2)的選擇性變體的序列，在NCBI基因數(shù)據(jù)庫(kù)中描述為GenelD:8614，登錄號(hào)為NM—003714，i^列編碼302個(gè)氨基酸的人33kDa前蛋白。斯銬素2在鈣和fl酸鹽體內(nèi)平衡中具有抗低銬血性作用。應(yīng)該強(qiáng)調(diào)，本發(fā)明的新變體是來(lái)自斯轉(zhuǎn)素2的選擇性拼接的天然存在的序列，而不僅僅是該基因的截短、突變或片段形式。誦SEQIDNO:16至SEQIDNO:17和SEQIDNO:35至SEQIDNO:36的任一個(gè)中所示的序列，與所述序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%同一性(見(jiàn)下文)的序列，J^列長(zhǎng)度最少為15b.p.的片段(見(jiàn)下文)。這些序列是天然存在的編碼序列，天然的和已知鈉尿肽前體B(NPPB)的選擇性皿變體的序歹ij，在NCBI基因數(shù)據(jù)庫(kù)中描述為GenelD:4879，登錄號(hào)為NM—002521，該序列編碼為134個(gè)氨基酸的人15kDa前蛋白。NPPB作用為一種心臟激素，具有尿鈉排泄、利尿、血管舒張及腎素和醛甾酮抑制的多種生物作用。它被認(rèn)為在心血管體內(nèi)平衡中起關(guān)鍵作用，并且它幫助恢復(fù)身體鹽份和水份平衡。NPPB也改善心臟功能。應(yīng)該強(qiáng)調(diào)，本發(fā)明的新變體是來(lái)自NPPB的選擇性拼接的天然存在的序列，而不僅僅是該基因的截短、突變或片段形式。畫(huà)SEQIDN0:18至SEQIDNO:19和SEQIDNO:37至SEQIDNO:38的任一個(gè)中所示的序列，與所述序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%同一性(見(jiàn)下文)的序列，Jl^列長(zhǎng)度最少為15b.p.的片段(見(jiàn)下文)。這些序列是編碼天然存在的、天然的和己知的神經(jīng)調(diào)節(jié)肽U(NMU)的選擇性搬變體的序列，^ENCBI基因數(shù)據(jù)庫(kù)中描述為GenelD:10874，登錄號(hào)為NM—006681，i^列編碼174個(gè)氮基酸的人20kDa前蛋白。NMU刺激胃腸道特定區(qū)域的肌肉收縮。在人體中，NMU刺激回腸和膀胱的收縮。應(yīng)該強(qiáng)調(diào)，本發(fā)明的新變體是來(lái)自NMU的選擇性拼接的天然存在的序列，而不僅僅是該基因的截短、突變或片段形式。下表1描述了激素失調(diào)相關(guān)基因變體以及它們與原始序列的不同之處表l<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>SEQIDNOs:l-19是核苷,歹U。SEQIDNOs:20-38是由SEQIDNOs:l-19編碼的蛋白序列。"激素失調(diào)變體產(chǎn)物"有時(shí)也稱(chēng)為"激素失調(diào)變體蛋白"或"激素失調(diào)變體多肽"-尉旨由激素失調(diào)變術(shù)亥!W列編碼的氨基,列，所述核,列是作為選擇性拼接的結(jié)果獲得的天然存在的mRNA序列。所述氨基酸序列可以是肽、蛋白，以及具有化學(xué)修飾的氨基酸(見(jiàn)下文)的肽或蛋白，如糖肽或糖蛋白。激素失調(diào)變體產(chǎn)物如SEQIDNOs:21，23，24，26，28，30，32，34，36和38的任意一個(gè)所示。該術(shù)語(yǔ)也包括添加、缺失、取代(見(jiàn)下文)一個(gè)或多個(gè)氨基酸或?qū)σ粋€(gè)或多個(gè)氨基酸進(jìn)行了化學(xué)修飾(見(jiàn)下文)的所,列的同源物(見(jiàn)下文)以及具有至少10個(gè)氨基酸的所述序列的片段(見(jiàn)下文)。"激素失調(diào)相關(guān)變^t亥酸序列的片段"-SEQIDNO:2，SEQIDNO:4，SEQIDNO:5，SEQIDNO:7，SEQIDNO:9，SEQE)NO:ll，SEQIDNO:13，SEQIDNO:15，SEQIDNO:17或SEQIDNO:19的任意一個(gè)的部分序歹iJ，其包含含有變體和原始序列之間的核苷酸變異的區(qū)域。這些區(qū)域(在氨基酸水平)描述于上文表l。因此，例如15b.p.的片段SEQIDNO:2可以包括SEQIDNO:2的核苷酸402416，403417，404418，405419，406420，407421，408422，409423，410424，411425，412426，413427，414428或415429。與原始的SEQIDNO:1序列相比較，這些序列都齡了SEQIDNO:2搬變體的缺失部分，這樣可以將其中的任一片段與可能來(lái)自于原始序列的片段相區(qū)別。類(lèi)似地構(gòu)造較大的片段。與原始的序列相比較，相關(guān)的拼接變體具有插入部分，例如SEQIDNO:7，15b.p.的片段包含至少一個(gè)插入核苷酸。因此，例如SEQIDNO:7的15b.p.片段可以包含起始于核苷酸191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、或206的片段，15b.p.的片段完全位于SEQIDNO:7的插入?yún)^(qū)域內(nèi)。SEQIDNO:7的15b.p.片段還可以包含起始于核苷酸178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188或189的片段，其為15b.p.的片段，包含SEQEDNO:7滴入?yún)^(qū)的至少一個(gè)核苷酸(注意，從第176或177位開(kāi)始會(huì)產(chǎn)生15b.p.片段，雖然包含第一個(gè)和在第177位為第二的情況，其為SEQIDNO:7插入部分的核苷酸，分別等同于源自原始序列SEQIDNO:6的核苷酸176-190和177-191的片段)。SEQIDNO:7的15b.p.片段還可以包含起始于核苷酸207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219或220的片段，15b.p.的片段包含SEQIDNO:7.插入?yún)^(qū)的至少一個(gè)核苷酸。在任何瞎況下，類(lèi)似地構(gòu)造較大的片段。至于皿變體，與其原始序列例如SEQIDNO:13相比具有不同核苷酸的區(qū)域，15b.p.片段將含有至少一個(gè)來(lái)自分化區(qū)域的核苷酸。因此，例如SEQIDNO:13的15b.p.片段可以包含起始于核苷酸l、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44或45的片段，其為完全在SEQK)NO:13分化區(qū)內(nèi)的15b.p.的片段。另外地，SEQIDNO:13的15b.p.片段還可以包含起始于核苷酸46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58或59的片段，其為15b.p.的片段，包含SEQIDNO:7.分化區(qū)的至少一個(gè)核苷酸。在任何情況下，類(lèi)似地構(gòu)造較大的片段。"激素失調(diào)相關(guān)變體產(chǎn)物的片段"-M:，核酸片段編碼的氨基酸序列，其包含不同于原始序列的變體區(qū)域，這些區(qū)域標(biāo)于表l。因此，例如含有10個(gè)氨基酸的SEQIDNO:24片段可以包含SEQIDNO:24的氨基酸3746、3847、3948、40-49、41-50、42-51、43-52、44-53或45國(guó)54。與原始序列SEQ1DNO:22相比，所有這些序列均整合了SEQIDNO:24皿變體中的缺失部分，這樣可以將其中的任一片段與可能來(lái)自于原始序列的片段相區(qū)別。類(lèi)似地構(gòu)造較大的片段。至于皿變體與其原始序列相比具有一個(gè)插入，例如SEQE)NO:26的10個(gè)氨基酸片段將含有至少一個(gè)來(lái)自插入的氨基酸。因此，例如SEQE)NO:26的10個(gè)氨基酸片段可以含有一個(gè)起始于核苷酸63的片段，期各是完全在SEQIDNO:26插入?yún)^(qū)內(nèi)的10個(gè)氨基li)t段。SEQIDNO:26的10個(gè)氨^lt)t段還可以包括起始于氨基酸54、55、56、57、58、59、60、61或62的片段，其將是包含來(lái)自SEQIDNO:26插入?yún)^(qū)的至少一個(gè)氨基酸的10個(gè)氨基酸片段。SEQIDNO:26的10個(gè)氨基酸片段還可以包括起始于氨基酸64、65、66、67、68、69、70、71或72的片段，其將是包含來(lái)自SEQIDNO:26插入?yún)^(qū)的至少一個(gè)氨基酸的10個(gè)氨基酸片段。在任何情況下，類(lèi)似地構(gòu)造駄的片段。至于搬變體與其原始序列相比具有一個(gè)不同的氨基酸區(qū)域，例如SEQIDNO:21的10個(gè)氨基酸片段將含有至少一個(gè)來(lái)自分化區(qū)域的氨基酸。因此，例如SEQIDNO:21的10個(gè)氨基酸片段可以含有一個(gè)起始于氨基酸106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119或120的片段，其將是完全在SEQIDNO:21分化區(qū)域內(nèi)的10個(gè)氨基酸片段。另外地，SEQIDNO:21的10個(gè)氨基斷段還可以含有一個(gè)起始于氨基酸97、98、99、100、101、102、103、104或105的片段，其將是完全在SEQIDNO:21分化區(qū)域內(nèi)的10個(gè)氨基酸片段。在任何情況下，類(lèi)似地構(gòu)造ltt的片段。"核辦列"-由DNA核苷酸、RNA核苷酸或這兩種類(lèi)型的組合組成的序列，并且可以包含天然核苷酸、化學(xué)斷布的核苷酸和合成的核苷酸。'^基,列"-由20種天然存在的氨基酸中的任織基酸、經(jīng)化學(xué)1針布的氨基酸(見(jiàn)下文)、或由合成的氮基酸組成的序列。"變彬產(chǎn)物的同源物"-添加、缺失或取代了一個(gè)或多個(gè)氨基酸的變體的氨基列。例如，根據(jù)表1的解釋?zhuān)淖兊陌被?該位于變體與原始序歹lj不同的區(qū)域內(nèi)。"保守取代"一指一類(lèi)氨基酸被同類(lèi)的氨基酸取代，其中所述類(lèi)別是由共同的生理化學(xué)氨基酸側(cè)鏈特性和天然同源蛋白中的高取代頻率而限定，所述取代頻率是例如由標(biāo)tDayhoff頻率交換矩陣，LOSUM矩陣確定。已經(jīng)分類(lèi)了6大類(lèi)的氨基酸側(cè)鏈，包括I類(lèi)(Cys);n類(lèi)(Ser，Thr，Pro,Ala，Gly);EI類(lèi)(Asn，Asp，Gln，Glu);IV類(lèi)(His,Arg，Lys);V類(lèi)(Ue，Leu，Val，Met);和VI類(lèi)(Phe，Tyr，Tip)。例如，用另一個(gè)m類(lèi)的殘基，如Asn、Gln或Glu取^Asp，是保守取代。"非保守取代"-指將屬于一類(lèi)的氨基酸被屬于另一類(lèi)的氨基酸取代；例如，用m類(lèi)殘基，如Asp、Asn、Glu或Gh取^n類(lèi)殘基Ala。"化學(xué)修飾的"一指本發(fā)明的產(chǎn)物時(shí)，意指通過(guò)天然過(guò)程，如加工或其它翻譯后修飾，或通過(guò)本領(lǐng)域公知的化學(xué)修飾技術(shù)而修飾了至少一個(gè)氨基酸殘基的產(chǎn)物(蛋白/肽)。在多種公知的修飾中，典型但并非唯一的例^括乙酰化、酰化(例如辛?；?、酰胺化、ADP-核糖基化、糖基化、GPI錨形成、脂或脂衍生物的共^^接、甲基化、十四烷基化、PEG化(pegylation)、預(yù)[eta]基化、磷酸化、遍在蛋白化或任何相似的方法。"生物活性的"-是指變體產(chǎn)物具有某類(lèi)生物活性，例如結(jié)合激素失調(diào)產(chǎn)物受體相關(guān)的基因產(chǎn)物或結(jié)合其它已知的原始激素失調(diào)相關(guān)基因的激動(dòng)劑的能力。"免疫活性的"一定義了天然的重組或合成變體產(chǎn)物或其片段在適當(dāng)?shù)膭?dòng)物或細(xì)胞中誘導(dǎo)特異性免疫應(yīng)答和結(jié)^f寺異性抗體的能力。因此，例如，變體產(chǎn)物的免疫活性片段是指保留了變體產(chǎn)物的某些或全部免疫原性特性，如能夠結(jié)合特異性抗變體產(chǎn)物抗體或能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生所述抗體的免疫應(yīng)答或?qū)е庐a(chǎn)生變體的特定免疫細(xì)胞增殖的片段。"最優(yōu)比對(duì)，-定義為得到最高百分同一性評(píng)分的比對(duì)。所述比對(duì)可以采用多種可商購(gòu)的序列分析程序，如采用等于1的ktup、缺省參數(shù)和缺省PAM的局部比對(duì)程勝ALIGN進(jìn)行。優(yōu)選的比對(duì)是用來(lái)自MacVector，的CLUSTAL"W禾聘進(jìn)行的比沐采用等于10.0的開(kāi)放空位罰分，等于0.1的延伸的空位罰分，以郎LOSUM相似性矩陣進(jìn)行操作。如果需要將空位插入第一個(gè)序列以將其與第二個(gè)序列進(jìn)行最優(yōu)比對(duì)，僅僅采用與相應(yīng)的氨基,基配對(duì)的殘基計(jì)算百分同一性(即，該計(jì)算不考慮位于第一個(gè)序列的"空位"中的第二個(gè)序列)。在將已知基因序列與新變體進(jìn)行比對(duì)的情況下，最優(yōu)比對(duì)總是包括將兩個(gè)序列的相同部h起進(jìn)行比沐然后將兩個(gè)序列彼此不同的序列保持分開(kāi)和不進(jìn)行比對(duì)。"具有至少90%同一性"、"具有至少91%同一性"、"具有至少92%同一性"箏關(guān)于兩個(gè)氨基酸或核1列，是指當(dāng)對(duì)序列進(jìn)行最優(yōu)比對(duì)時(shí)，二個(gè)序列中相同殘基的百分比。因此，90%氨基列同一性是指兩個(gè)或更多個(gè)最優(yōu)比對(duì)的多月游列中90%的氨基酸是相同的。這也適用于91%同一性、92%同一性等。"具有變術(shù)亥酸序列的分離的核酸好"-是指包含激素失調(diào)相關(guān)變術(shù)亥酸編碼序列的核酸分子。所述分離的核酸分子可以包括激素失調(diào)相關(guān)變^t亥酸序列作為獨(dú)立的插入物；可以包括與其它編碼序列融合的激素失調(diào)相關(guān)變體核,列，它們一起編碼融合蛋白，其中變體編碼序列是決定性的編碼序列(例如，其它編碼序列可能編碼信號(hào)肽)；激素失調(diào)相關(guān)變體核1W列可以與非編碼序列重組，如內(nèi)含子或調(diào)控元件，例如啟動(dòng)子和終止子元件或有效用于在合適的宿主中表達(dá)編碼序列的5'和/或3'非編碼區(qū)；或者可以是載體，其中激素失調(diào)相關(guān)變體蛋白的編碼序列是異源的。"表達(dá)載體"-是指具有在外源細(xì)胞中插入和表達(dá)異源DNA片段的能力的載體。許多原核和真核表達(dá)載體是公知的和/或可商購(gòu)的。選擇合適的表達(dá)載條本令頁(yè)域技術(shù)人員的知識(shí)范圍內(nèi)。"缺失"-是核苷酸或氨基酸序列中的改變，其中分別缺少了一個(gè)或多個(gè)核苷酸或氨基膨爐。"插入"或"添加"-是核苷酸或氨基,列中的改變，其導(dǎo)致與天然存在的序列相比，分另贈(zèng)加了一個(gè)或多個(gè)核苷酸或氨基,戔基。"取代"-分另,不同的核苷酸或氨基酸替代一個(gè)或多個(gè)核苷酸或氨基酸。至于氨基酸序列，取代可以是保守的或非保守的。"抗體'-是指IgM、IgD、IgA和IgG抗體。該定義包括多克隆抗體或單克隆抗體。該術(shù)語(yǔ)是指完整抗體或包含抗變體產(chǎn)物抗體的抗原結(jié)合域的抗體片段，如沒(méi)有Fc部分的抗體、單鏈抗體、基本僅僅由抗體的可變抗原結(jié)合域組成的片段等o"治療疾病"-是指給藥有效緩解與疾病相關(guān)的癥狀、離疾病的嚴(yán)重程度或治愈疾病，或防止疾病發(fā)生的治療物質(zhì)。"檢測(cè)"-是指檢測(cè)疾病、紊亂、病理或正常狀況的方法。該術(shù)語(yǔ)可以指檢測(cè)發(fā)生疾病的傾向以及通過(guò)確定疾病的嚴(yán)重程度而確定患者的預(yù)后。"探針"-激素失調(diào)變體核PW列，或其互補(bǔ)序列，用于檢測(cè)樣品中其它相似序列或與該序列具有一定同源性的序列的存在。該檢測(cè)^I過(guò)鑒定探針和測(cè)定序列之間的雜交復(fù)合體而進(jìn)行的。探針可以附著固體支持物或可檢測(cè)標(biāo)記。"原始的激素失調(diào)相關(guān)基因"-由于選擇性拼接而改變了氨基酸或核,列，從而得到本發(fā)明的激素失調(diào)相關(guān)變體。原始的核酸序列對(duì)于人J3夷高血糖素是描述于SEQIDN0:1的人髓失調(diào)相關(guān)基因的序列，原始的氨基,列是由其編碼的序列；對(duì)于神經(jīng)降壓素是SEQIDN0:3，原始的氨基,歹提由其編碼的序列;對(duì)于胰多肽是SEQIDNO:6，原始的氨基,列是由其編碼的序列；對(duì)于CART是SEQIDNO:8，原始的氨基,列是由其編碼的序列；對(duì)于尿皮質(zhì)醇是SEQIDNO:IO，原始的氨基,列是由其編碼的序列；對(duì)于腦啡肽原是SEQIDNO:12，原始的氨基酸序列是由其編碼的序列；對(duì)于斯f5素是SEQIDNO:14，原始的氨基酸序列是由其編碼的序列；對(duì)于鈉尿肽前體B是SEQIDNO:16，原始的氨基,列是由其編碼的序列；對(duì)于神經(jīng)調(diào)節(jié)肽U是SEQIDNO:18，原始的氨基酸序列是由其編碼的序列。發(fā)明簡(jiǎn)述本發(fā)明涉及分離的核酸分子，包含的序列選自SEQIDNos:2、4、5、7、9、11、13、15、17、19及其互補(bǔ)序列，以及包含它們的至少15個(gè)核苷酸的片段。本發(fā)明涉及分離的核酸肝，包括SEQIDNos:2、4、5、7、9、11、13、15、17或19及其互補(bǔ)序列；并且分離的核酸分子包括SEQIDNos:2、4、5、7、9、11、13、15、17或19的片段，所述片段包含至少15個(gè)核苷酸。本發(fā)明涉及可以1頓SEQEDNos:2、4、5、7、9、11、13、15、17或19的序列作為模板而擴(kuò)增產(chǎn)物的PCR弓,。本發(fā)明涉及篩查、診斷、監(jiān)測(cè)個(gè)體的激素失調(diào)的方法。該方法包括檢測(cè)樣品中包含選自SEQIDNos:2、4、5、7、9、11、13、15、17和19的序列的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的存在、不存在或數(shù)量。所述轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的存在或數(shù)量，指示激素失調(diào)。本發(fā)明涉及治療激素失調(diào)的方法，包括給藥需治療的哺乳動(dòng)物以藥物組合物的治療有效量，所述藥物組合物包括(a)分離的氨基lW列，選自SEQIDNO:21、SEQIDNO:23、SEQIDNO:24、SEQIDNO:26、SEQIDNO:28、SEQIDNO:30、SEQIDNO:32、SEQIDNO:34、SEQK)NO:36、SEQIDNO:38，以及包含其至少10個(gè)連續(xù)氨基酸區(qū)段的肽；和(b)載體。本發(fā)明涉及用于篩查、診斷、監(jiān)測(cè)個(gè)體的激素失調(diào)的試劑盒。本發(fā)明涉及分離的氨基,列，選自SEQE)N0s:21、23、24、26、28、30、32、34、36和38及其免疫原性片段。本發(fā)明涉及特異性結(jié)合于由選自SEQE)NOs:21、23、24、26、28、30、32、34、36和38的氨基酸序列上的表位的抗體。本發(fā)明涉及特異性結(jié)合于由選自SEQIDNOs:21、23、24、26、28、30、32、34、36和38的氨基酸序列上的表位的抗體，其與可檢測(cè)標(biāo)記或活性劑連接。本發(fā)明涉及藥物組合物，該藥物組合物包含特異性結(jié)合于由選自SEQIDNOs:21、23、24、26、28、30、32、34、36和38的氨基酸序列上的表位的抗體，所述抗體與活性劑連接。本發(fā)明涉及藥物組合物，該藥物組合物包含源自氨基酸序列的生物活性肽，該氨基,列選自由SEQIDNOs:21、23、24、26、28、30、32、34、36和38組成的組中的序列，所述生物活性肽與活性劑連接。本發(fā)明涉及治療懷疑患有激素失調(diào)的個(gè)體的方法。該方法包括給予個(gè)體抗體的步驟，該抗體特異性結(jié)合于由選自SEQIDNOs:21、23、24、26、28、30、32、34、36和38的氨基酸序列上的表位，其與活性劑連接。本發(fā)明涉及能夠影響激素失調(diào)相關(guān)蛋白質(zhì)與所述蛋白質(zhì)受體結(jié)合親合力的化合物的鑒定方法，其包括步驟(a)提供氨基,列，選自由SEQIDNO:21、SEQIDNO:23、SEQIDNO:24、SEQIDNO:26、SEQIDNO:28、SEQIDNO:30、SEQIDNO:32、SEQIDNO:34、SEQIDNO:36和SEQIDNO:38組成的組；(b)在至少一個(gè)激素失調(diào)相關(guān)基因受條在的情況下，使fl魏化合物與所述氨基酸序列接觸；(c)確定|，化合物在所述氮基酸序列與所述至少一個(gè)受體結(jié)合方面的作用；和(d)選擇獸,影響激素失調(diào)相關(guān)蛋白質(zhì)與所述蛋白質(zhì)受體結(jié)合親合力的化合物。本發(fā)明涉及用于確定在第一生物樣品中激素失調(diào)相關(guān)蛋白變體的水平和在第二生物樣品中通ai^擇拼接而產(chǎn)生的變體的水平之間的比值的方法，其包括步膝(a)確定在第一生物樣品中mm失調(diào)相關(guān)基因變體的第一氨基,歹啲7K平；(b)確定在第二生物樣品中變體的選擇拼接形式的第二氨基酸序列的水平；(c)比較在步驟(a)和步驟(b)中獲得的水平以得至吡值。附圖簡(jiǎn)述圖1表示A^源的2個(gè)氨基酸序列(描述于SEQIDNO:20-SEQIDNO:21)彼llfct間的比對(duì)；圖2表示A^源的3個(gè)氨基,列(描述于SEQIDNO:22-SEQIDNO:24)彼lfet間的多重比對(duì)；圖3表示A^源的2個(gè)氨基,列(描述于SEQIDNO:25-SEQIDNO:26)彼此t間的比對(duì)；圖4表示A^源的2個(gè)氨基酸序列(描述于SEQIDNO:27-SEQIDNO:28)彼此t間的比對(duì)；圖5表示人來(lái)源的2個(gè)氨基酸序列(描述于SEQIDNO:29-SEQIDNO:30)彼lfct間的比對(duì)；圖6表示人來(lái)源的2個(gè)氨^IW列(描述于SEQIDNO:31-SEQIDNO:32)彼llfct間的比對(duì)；圖7表示人來(lái)源的2個(gè)氨基酸序列(描述于SEQIDNO:33-SEQIDNO:34)彼此t間的比對(duì)；圖8表示A^源的2個(gè)氨基,列(描述于SEQE)NO:35-SEQIDNO:36)彼life間的比對(duì)；圖9表示人來(lái)源的2個(gè)氨基,列(描述于SEQIDNO:37-SEQIDNO:38)彼lfet間的比對(duì)；圖10表示A^源的2個(gè)核酸序列(描述于SEQIDNO:l-SEQIDNO:2)彼ifet間的比對(duì)；圖11g人來(lái)源的3個(gè)核1W列(描述于SEQIDNO:3-SEQIDNO:5)彼!lfc^間的多m比；圖12表示人來(lái)源的2個(gè)核1W列(描述于SEQIDNO:6-SEQIDNO:7)彼此t間的比對(duì)；圖13表示A5fc源的2個(gè)核酸序列(描述于SEQIDNO:8-SEQIDNO:9)彼Itb2j司的比對(duì)；圖14表示人來(lái)源的2個(gè)氨基,列(描述于SEQIDNO:10-SEQIDNO:l1)彼lltt間的多重比沐圖15表示人來(lái)源的2^h氨基,列(描述于SEQIDNO:12-SEQIDNO:13)彼ilfct間的多重比對(duì)；圖16表示人來(lái)源的2^^氮基,列(描述于SEQIDNO:14-SEQIDNO:15)彼lfct間的多重比對(duì)；圖17表示人來(lái)源的2個(gè)氨基,列(描述于SEQIDNO:16-SEQIDNO:17)彼此t間的多重比對(duì)；圖18g人來(lái)源的2個(gè)氨基酸序列(描述于SEQIDNO:18-SEQIDNO:19)彼此t間的多重比對(duì)。雌實(shí)施方案的詳述申請(qǐng)人特此引入在本公開(kāi)內(nèi)容中弓l用的所有參考文獻(xiàn)的完整內(nèi)容。此外，當(dāng)以一個(gè)范圍、優(yōu)選范圍、或一系列高優(yōu)選值和低tt^值給出量、濃度或其它值或參數(shù)時(shí)，應(yīng)該理解，這如同特別公開(kāi)了由任意一對(duì)任意上限或值和任意下限或^^值形成的所有范圍，而無(wú)論是否單獨(dú)公開(kāi)了范圍。當(dāng)此處指出數(shù)字值的范圍時(shí)，除非特別指出，該范圍意欲包括其終點(diǎn)，以及該范圍內(nèi)的所有整數(shù)和分?jǐn)?shù)。當(dāng)限定一個(gè)范圍時(shí)，本發(fā)明的范圍并不限于指出的特定值。麟失調(diào)變條,列本發(fā)明的核酸序列包括編碼激素失調(diào)變體產(chǎn)物及其片段和類(lèi)似物的核,列?；蛘?，核酸序列可以是與上述編碼序列互補(bǔ)，或與所述編碼序列的區(qū)域互補(bǔ)的序列。互補(bǔ)序列的長(zhǎng)度足夠避免編碼序歹啲敏。核,列可以^RNA形式或DNA形式，并且包括信^RNA、合成RNA禾nDNA、cDNA和基因組DNA。DNA可以是雙鏈或單鏈的，并且如果是單鏈，可以是編碼鏈或非編碼(反義、互補(bǔ))鏈。核!W列也可以包括dNTPs、rNTPs以及非天然存在的序歹iJ。i游列可以是氮基酸序列和核酸序列之間的雜交體的一部分。在一般的實(shí)M^"案中，核酸序列與SEQIDNO:2或SEQIDNO:4或SEQIDNO:5或SEQIDNO:7或SEQK)NO:9或SEQIDNO:l1或SEQIDNO:13或SEQIDNO:15或SEQIDNO:17或SEQIDNO:19所示序列的任意一個(gè)具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%同一性。核,列可以自身包括編碼序列。另一方面，編碼區(qū)可以與其它編碼序列，如編碼融合蛋白或信號(hào)肽的那些序列重組，與非編碼序列重組，如與有效用于在合適的宿主內(nèi)表達(dá)編碼序列基因內(nèi)含子和控制元件(controlelement)、啟動(dòng)子和終止子元件或5'和/或3'非翻譯區(qū)重組，禾口/或位于載體或宿主環(huán)境中，其中將變^W亥酸序列作為^H序列而導(dǎo)入。本發(fā)明的核酸序列也可以包括與能夠純化變體產(chǎn)物的標(biāo)記物序列框內(nèi)融合的激素失調(diào)變體產(chǎn)物編碼序列。例如，在細(xì)菌宿主的情況下，標(biāo)記物序列可以是六組氨酸標(biāo)志，其提供與標(biāo)記物融合的成熟多肽的純化，或當(dāng)使用哺乳動(dòng)物宿主，如COS-7細(xì)胞時(shí)，標(biāo)記物序列可以是血凝素(HA)標(biāo)志。HA標(biāo)志相當(dāng)于來(lái)源于流感血凝素蛋白的表位(WilsonJ.,等人Cell37:767(1984))。本發(fā)明的范圍內(nèi)也包括上文所定義的片段，此處也稱(chēng)作寡核苷酸，它們通常具有相當(dāng)于核酸序列的編碼序列區(qū)的至少17^itt，優(yōu)選17-30個(gè)。根據(jù)公知方法，這些片段可以用作探針、引物，并且當(dāng)互補(bǔ)時(shí)，也可以作為反義劑等。如上文所述，核酸序列可以基本上如SEQIDNO:2或SEQIDNO:4或SEQIDNO:5或SEQIDNO:7或SEQIDNO:9或SEQIDNO:11或SEQIDNO:13或SEQIDNO:15或SEQIDNO:17或SEQE)NO:19所述，或者可以是其片段或如上文所解釋的，與±3^序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%同一性的序歹U?；蛘撸捎谶z傳密碼的簡(jiǎn)并性質(zhì)，辦列可以是編碼SEQIDNO:21或SEQIDNO:23或SEQIDNO:24或SEQIDNO:26或SEQIDNO:28或SEQIDNO:30或SEQIDNO:32或SEQE)NO:34或SEQIDNO:36或SEQIDNO:38的氨基,列的任意-個(gè)^^f述氨基酸序列的片段或類(lèi)似物。A.制備核,列可以通過(guò)用能夠與編碼此處公開(kāi)的激素失調(diào)變體產(chǎn)物的核1W列雜^對(duì)其進(jìn)行PCR擴(kuò)增的寡核苷酸探針篩選cDNA文庫(kù)來(lái)獲得核,列。從多種組織制備的cDNA文庫(kù)是可以商購(gòu)的，并且，用于篩選和分離cDNA克隆的禾歸是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。所述技術(shù)描述于，例如，Sambrook等人(1989)MolecularCloning:ALaboratoryManual(2ndEdition),ColdSpringHarborPress,Plainview,N.Y.andAusubelFM等人(1989)CurrentProtocolsinMolecularBiology,JohnWiley&Sons,NewYori^N.Y?？梢匝由旌宿k列，以獲得上游和下游序列，如啟動(dòng)子、調(diào)節(jié)元件和5'和3'非翻譯區(qū)(UTRs)o可獲得的轉(zhuǎn)錄物序列的延伸可以用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的多種方法進(jìn)行，如PCR或弓I物延伸(Sambrook等人同上)，^ii3K頓例如MarathonRACE試劑盒(Clontech，Cat.#K1802-1)進(jìn)行的RACE方法進(jìn)行。或者，可以釆用"限制位點(diǎn)'TCR(Gobinda等人，PCRMethodsAppl.2:318-22(1993))的技術(shù)，該技剩頓通用引物提取已知基因座的側(cè)翼序列。首先，在接頭序列的弓胸和己知區(qū)域的特異性弓胸存在下擴(kuò)增基因組DNA。擴(kuò)增的序列用相同的接頭弓l物和第一特異性弓卿內(nèi)部的另一特異性弓卿進(jìn)行第二輪PCR。用合適的RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄每一輪PCR的產(chǎn)物，并且用逆轉(zhuǎn)錄酶測(cè)序。可以l頓基于已知區(qū)域的分歧引(divergent)物，，用反向PCR擴(kuò)增^E伸序列(Triglia，T.等人，NucleicAcidsRes.16:8186(1988))?？梢杂肙LIGO⑧4.06引物分析軟件(1992;NationalBiosciencesInc，Plymouth,Minn.)或其它魏的禾聘來(lái)設(shè)計(jì)引物，該引物長(zhǎng)度為22-30個(gè)核苷酸，具有50X或更多的GC含量，并且在大約68-72°。的、鵬下與革醇列退火。該方法l糊幾種限制酶以制備己知基因區(qū)中的合適的片段。然后通過(guò)分子內(nèi)連接對(duì)該片段環(huán)化，并且用作PCR模板。捕iSPCR(Lagerstrom，M.等人，PCRMethodsAppl.1:111-19(1991))是一種用于對(duì)人和酵母人工染色體DNA中的已知序列相鄰的DNA片段進(jìn)行PCR擴(kuò)增的方法。捕^PCR也要求多次限制酶消化和連接，以便^CR^fT將工程化的雙游列置于DNA舒的側(cè)翼部分?？梢杂糜谔崛?cè)翼序列的另一種方法是Parker，J.D.，等人，NucleicAcidsRes.19:3055-60(1991)的方法。此外，可以^fflPCR、巢式引物禾nPromoterFinder^文庫(kù)在基因纟IDNA中"行走"(PromoterFinder;Clontech，PaloAlto，CA)。該過(guò)程避免了對(duì)篩選文庫(kù)的需要，并且可以用于發(fā)現(xiàn)內(nèi)含子/外顯子連接。用于篩選錄cDNAs的4繼文庫(kù)^ia行了大小選擇以包括更大cDNAs的那些。同樣，隨機(jī)弓l物文jf(randomprimedlibraries)皿選的，因?yàn)樗鼈儼ǜ嗟暮谢?'和上游區(qū)的序列。如果寡d(T)文庫(kù)不產(chǎn)生錄cDNA，那么隨機(jī)弓卿文庫(kù)可以特別有用?；蚪M文庫(kù)用于延伸到5'非翻銜周節(jié)區(qū)中。也可以根據(jù)公知的合成方法，通過(guò)固相方法制備本發(fā)明的核酸序列和寡核苷酸。典型地，分別合成最多達(dá)大約100個(gè)鵬的片段，然后連接形成最多達(dá)幾百個(gè)堿基的連續(xù)序列。B.用激素失調(diào)變^t亥酸生產(chǎn)激素失調(diào)變體產(chǎn)物根據(jù)本發(fā)明，上文指出的核酸序列可以用作指導(dǎo)激素失調(diào)變體產(chǎn)物表達(dá)的重膨NA舒。如本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解的，生產(chǎn)具有在人類(lèi)基因組中天然存在的SEQIDNO:2或SEQIDNO:4或SEQIDNO:5或SEQIDNO:7或SEQE)NO:9或SEQID在的密;馬子以外的密碼;的激素失調(diào)變:產(chǎn)物編碼核苷i^列可能是有利的?？梢赃x擇特定原核或真核宿主優(yōu)選的密碼子(Murray,E.等人，NucleicAcidsRes.l7:477-508(1989))，以便例如，增加變體產(chǎn)物表達(dá)率或生產(chǎn)具有需要的特性的重纟SRNA轉(zhuǎn)錄物，如比天然存在的序列產(chǎn)生的轉(zhuǎn)錄物更長(zhǎng)的半衰期?？梢詫?duì)本發(fā)明的核酸序列進(jìn)行工程化，以便為了多種目的改變激素失調(diào)變體產(chǎn)物編碼序列，所述目的包括，但不限于，修飾產(chǎn)物的克隆、加工和/或皿的改變。例如，可以^ffl本領(lǐng)域公知的技術(shù)，如定點(diǎn)誘變而導(dǎo)入改變，以插入新柳蹄'」位點(diǎn)、改變糖基化模式、改變密碼子偏好等。本發(fā)明也包括包含上文廣泛描述的一種或多種序列的重組構(gòu)建體。所述構(gòu)建體包括載體，如質(zhì)?；虿《据d體，其中以正向或反向方向插入了本發(fā)明的核列。在該實(shí)施方案的方面，所述構(gòu)建體還包含調(diào)節(jié)序列，包括，例如與序列可操作性連接的啟動(dòng)子。大量合適的載體和啟動(dòng)子是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，并且是可商購(gòu)的。用于原核和真核宿主的合適的克隆和載體也描述于Sambrook，等人(上文)。本發(fā)明也涉及用本發(fā)明的載體遺傳工程化的宿主細(xì)胞和通過(guò)重組技術(shù)生產(chǎn)本發(fā)明的產(chǎn)物。用本發(fā)明的載體對(duì)宿主細(xì)胞進(jìn)行遺傳工程化(即，轉(zhuǎn)導(dǎo)、轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染)，所述載體可以是，例如，克隆載體或載體。載體可以是例如質(zhì)粒、病毒顆粒、噬菌體等形式。工程化的宿主細(xì)胞可以在經(jīng)過(guò)修飾以適用于激活啟動(dòng)子、選擇轉(zhuǎn)化體或擴(kuò)增變體核酸序列的表達(dá)的常規(guī)營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)。培養(yǎng)割牛，如纟驢、pH等，是以前用于為進(jìn)行鋭而選擇的宿主細(xì)胞中的那些，并且對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見(jiàn)的。本發(fā)明的核酸序列可以包含在用于表達(dá)產(chǎn)物的多種表達(dá)載體中。所述載體包含染色體、非染色體和合J^DNA序列，如SV40的衍生物；細(xì)菌質(zhì)粒；噬菌體DNA;桿狀病毒；酵母質(zhì)粒；衍生自質(zhì)粒和噬菌體DNA重組體的載體、病毒DNA如痘苗病毒、腺病毒、禽痘病毒和假狂犬病病毒。然而，可以i細(xì)任何其它的載體，只要它是可復(fù)制的，并且在宿主中是可存活的?？梢酝ㄟ^(guò)多種程序?qū)⒑线m的DNAj^列插入載體。概言之，通財(cái)領(lǐng)域公知的禾歸將DNAj^列插入誠(chéng)柳艮制性核酸內(nèi)切離點(diǎn)。所述程序和相關(guān)的亞克隆程序也被認(rèn)為在本領(lǐng)域技術(shù)人員的知識(shí)范圍內(nèi)。將表達(dá)載體中的DNA序列可操作性連接于誠(chéng)的轉(zhuǎn)錄控制序列(啟動(dòng)子)以指導(dǎo)mRNA合成。所述啟動(dòng)子的例子包括LTR或SV40啟動(dòng)子、大腸桿節(jié)ac或trp啟動(dòng)子、噬菌，L啟動(dòng)子和其它已知育,控制原核或真核細(xì)胞或其病毒中的基因表達(dá)的啟動(dòng)子。表達(dá)載體也包含用于翻譯起始的核糖體結(jié)合位點(diǎn)和轉(zhuǎn)錄終止子。載體也可以包含用于擴(kuò)增表達(dá)的合適序列。此外，表達(dá)載體，包含一個(gè)或多個(gè)選擇標(biāo)記基因，以提供用于選擇轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞的表型性狀，如真核細(xì)胞培養(yǎng)的二氫葉酸還原酶或新霉素抗性，或例如大腸桿菌的四環(huán)素或氨芐青霉素抗性?？梢允褂煤斜疚乃龊线m的DNA序列以及合適的啟動(dòng)子或控制序列的載體轉(zhuǎn)化合適的宿主，以使得宿主表達(dá)蛋白。合適的表達(dá)宿主的例子包括細(xì)菌細(xì)胞，如大腸桿菌、鏈霉菌(Sre/7towyce力、傷寒沙門(mén)氏菌(&/附o"e/to0^/2/附wnw附)；真菌細(xì)胞，如酵母；昆蟲(chóng)細(xì)胞，如果蠅和夜蛾Sf9(S/70必/7teraSf9);動(dòng)物細(xì)胞，如CHO、COS、HEK293郝owes黑素瘤；腺病毒；植物細(xì)胞等。根據(jù)此處的教導(dǎo)，合適的宿主細(xì)胞的選擇被認(rèn)為是在本領(lǐng)域技術(shù)人員的知識(shí)范圍內(nèi)。本發(fā)明不受所使用的宿主細(xì)胞的限制。在細(xì)菌系統(tǒng)中，可以根據(jù)激素失調(diào)變體產(chǎn)物的用途而選擇多種表達(dá)載體。26例如，當(dāng)誘導(dǎo)抗體需要大量激素失調(diào)變體產(chǎn)物時(shí)，可能需要指導(dǎo)容易純化的融合蛋白的高水平表達(dá)的載體。所述載體包括，但不限于，多功能大腸桿菌克隆和表達(dá)載體，如Bluescript⑧(Stratagene)，其中可以將激素失調(diào)變體多肽編碼序列與氨S^Me湘隨后的卩-半學(xué)LM^酶的7個(gè)殘基的編碼序列框內(nèi)連接，以便生產(chǎn)雜交蛋白；plN載體(VanHeeke&SchusterJ.Biol.Chem.264:5503-5509(1989));pET載體(Novagen，MadisonWI)等。在釀酒酵母中，可以使用多個(gè)含有組成型或誘導(dǎo)型啟動(dòng)子，如a因子、醇脫氫酶禾PPGH啟動(dòng)子的載體。綜述可參見(jiàn)Ausubel等人(上文)和Grant等人(MethodsinEnzymologyl53:516-544(1987))。當(dāng)使用植物表達(dá)載體時(shí)，可以通過(guò)許多啟動(dòng)子中的任意一個(gè)驅(qū)動(dòng)變體產(chǎn)物的編碼序列表達(dá)。例如，可以單獨(dú)使用病毒啟動(dòng)子，如CaMV的35S和19S啟動(dòng)子(Brisson等人，Nature310:511-514(1984))或與TMV的Q前導(dǎo)序列(Takamatsu等人，EMBOJ.6:307-311(1987))組合使用?；蛘?，可以4OT植物啟動(dòng)子，如RUBISCO的小亞基(Coruzzi等人，EMBOJ.3:1671-1680(1984);Broglie等人，Science224:838-843(1984));或熱激啟動(dòng)子(WinterJ和SinibaldiR.M,，ResultsProbl.CellDiffer.17:85-105(1991))?？梢詅fiil直^DNA轉(zhuǎn)化鋼原體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染將這些構(gòu)建體導(dǎo)入植物細(xì)胞。關(guān)于所述技術(shù)的綜迷，參艦obbsS.^MunyL.E.(1992)inMcGrawHillYearbookofScienceandTechnology,McGrawHill，NewYofk，N.Y.，ppl91-196;^Weissbach禾nWeissbach(1988)MethodsforPlantMolecularBiology,AcademicPress,NewYoik，N.Y.，pp421~463。也可以在昆蟲(chóng)系統(tǒng)中表達(dá)激素失調(diào)變體產(chǎn)物。在一個(gè)所述系統(tǒng)中，將苜蓿丫紋夜蛾(^wtogra/7/wca/^m/ao7)核型多角體病毒(AcNPV)用作在草地夜蛾(S/7oafo/7tera/n/^mfo)細(xì)胞中或粉蛟夜斷7h'c/2o;/^/a)幼蟲(chóng)中表達(dá)外源基因的載體。可以將激素失調(diào)變體產(chǎn)物編碼序列克隆至l摘毒的非必需區(qū)，如多角體蛋白(polyhedrin;)基因，并且置于多角體啟動(dòng)子的控制下。激素失調(diào)編碼序列的成功插入，將使得多角體蛋白基因失活并產(chǎn)生缺乏外殼蛋白外殼的重組病毒。然后將重組病毒用于感染草地夜蛾細(xì)胞或粉蚊夜蛾幼蟲(chóng)，其中表達(dá)了變體蛋白(Smith等人，J,Virol.46:584(1983);Engelhard,E.K.等人，Pro"Nat.Acad.Sd.USA91:3224-7(1994))。在哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞中，可以使用多種基于病毒的表達(dá)系統(tǒng)。當(dāng)腺病毒用作表達(dá)載體時(shí)，可以將激素失調(diào)變體產(chǎn)物編碼序列連接到由晚期啟動(dòng)子和三分前導(dǎo)序列組成的腺病毒轉(zhuǎn)敦翻譯復(fù)合物中。插入病毒基因組的非必需的El^E3區(qū)，將得到能夠在感染的宿主細(xì)胞中表達(dá)變體蛋白的可存活的病毒(Logan和Shenk，Proc.Natl.Acad.Sd.USA81:3655-59(1984))。此夕卜，可以用轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)子，如勞斯肉瘤病毒(RSV)增強(qiáng)子來(lái)增加在B群L動(dòng)物宿主細(xì)胞中的敲。變體產(chǎn)物編碼序列的有效翻譯也可能需要特異性起始信號(hào)。這些信號(hào)包括ATG起始密碼子和鄰近的序列。在激素失調(diào)變體產(chǎn)物編碼序列、其起始密碼子和上游序列插入合適的表達(dá)載體的情況下，可以不需要其它的翻i畢控制信號(hào)。但是，當(dāng)僅僅將編碼序列或其部分插入時(shí)，必須提供包括ATG起始密碼子的外源轉(zhuǎn)錄控制信號(hào)。lM卜，起始密碼子必須在正確的讀框中，以確保完整插入物的轉(zhuǎn)錄。夕卜源轉(zhuǎn)錄元件和起始密碼子可以是多種來(lái)源，可以是天然的和合成的?？梢詅fiil導(dǎo)A3g用于所使用的細(xì)胞系統(tǒng)的增強(qiáng)子而增強(qiáng)表達(dá)效率(Scharf，D.等人，ResultsProbl.CellDiffer.20:125-62(1994);Bittaer等人，Meth.Enzymol.153:516-544(1987))。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含上文所述構(gòu)建體的宿主細(xì)胞。該宿主細(xì)胞可以是高等真核細(xì)胞，如哺乳動(dòng)物細(xì)胞，或低等真核細(xì)胞，如酵母細(xì)胞，或者宿主細(xì)胞可以是原核細(xì)胞，如細(xì)菌細(xì)胞?？梢酝ㄟ^(guò)磷酸藥轉(zhuǎn)染、DEAE-右旋糖酐介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染或電穿孔(Davis,L.，Dibner，M.，andBattey，I.(1986)BasicMethodsinMolecularBiology)將構(gòu)建體導(dǎo)入宿主細(xì)胞。也可以采用無(wú)細(xì)胞的翻譯系統(tǒng)，用來(lái)源于本發(fā)明的DNA構(gòu)建體的RNAs生產(chǎn)多肽?？梢赃x擇宿主細(xì)胞株，以選擇其調(diào)節(jié)插入序列的皿或以需要的方式加工表達(dá)蛋白的能力。所述蛋白的修飾包括，但不限于，乙?；?、羧化、糖基化、磷酸化、脂化和酰化。切害U"前-原"形式的蛋白的翻譯后加工對(duì)于正確的插入、折疊和/或功能也可能是重要的。不同的宿主細(xì)胞，如CHO、HeLa、MDCK、293、WI38等，對(duì)于翻譯后活性具有特定細(xì)胞機(jī)制和特征性機(jī)理，可以對(duì)其進(jìn)行選擇以用于確保導(dǎo)入的夕卜源蛋白的正確修飾和加工。對(duì)于重組蛋白的長(zhǎng)期高產(chǎn)率生產(chǎn)，^m穩(wěn)定的表達(dá)。例如，可以用含有病毒復(fù)制起點(diǎn)或內(nèi)源元件和選擇標(biāo)記基因的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化穩(wěn)定表達(dá)變體產(chǎn)物的細(xì)胞系。在導(dǎo)入載體后，可以讓細(xì)胞在富集培養(yǎng)基中生長(zhǎng)1-2天，然后將其轉(zhuǎn)Aif擇培養(yǎng)基中。選擇標(biāo)記的目的是賦予對(duì)選擇的抗性，其存在允許生長(zhǎng)和回收成功表達(dá)導(dǎo)入序列的細(xì)胞?？梢杂眠m于細(xì)胞類(lèi)型的組織培養(yǎng)技術(shù)增殖穩(wěn)定轉(zhuǎn)化的細(xì)胞的抗性簇?？梢允褂萌魏螖?shù)目的選擇系統(tǒng)回收轉(zhuǎn)化的細(xì)胞系。這些包括，但不限于，單純皰疹病毒胸苷激酶(WiglerM.，等人，Cell:223-32(1977))和腺嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(LowyI.，等人，Cell22:817-23(1980))基因，可以將其分別用^tk-^aprt-細(xì)胞。同樣，也可以將抗代謝物、抗生素或除草劑抗性用作選擇基礎(chǔ)，例如，賦予對(duì)氨甲蝶呤抗性的dhfr(WiglerM.，等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA77:3567-70，(1980));賦予纖鎌苷類(lèi)新霉素和G"418抗性的npt(Colbere-Garapin，F(xiàn).等人，J.Mol.Biol.l50:1-14(1981));和賦予對(duì)綠磺隆和膦絲菌素乙酰轉(zhuǎn)移TO性的als或pat(Muny，上文)。已經(jīng)描述了其它可選擇的基因，如允許細(xì)胞禾,吲哚代替色氨酸的tipB，或允許細(xì)胞利用組氨醇代替組氨酸的hisD(HartmanS.C.禾吸.C.Mulligan,Proc.Natl.Acad.Sci.USA85:8047-51，(1988))。使用可見(jiàn)標(biāo)記獲得了普及，例如在花青素、(3"葡糖醛酸酶及其底物、GUS、熒光素酶及其底物、熒光素及ATP，不僅廣泛用于鑒定轉(zhuǎn)化體，也用于對(duì)特定載體系統(tǒng)引起的瞬時(shí)或穩(wěn)定蛋白敏量進(jìn)行定量(Rhodes,CA等人，MothodsMol.Biol.55:121-131(1995))?？梢栽谶m于蛋白表達(dá)和從細(xì)胞培養(yǎng)物回收編碼蛋白的條件下培養(yǎng)用編碼激素失調(diào)變體產(chǎn)物的核苷酸序列轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞。由重組細(xì)胞生產(chǎn)的產(chǎn)物分泌到細(xì)胞外或包含在細(xì)胞內(nèi)取決于所4柳的序列和/或載體。如本領(lǐng)域技術(shù)人員育^理解的，可以用指導(dǎo)透過(guò)原核或真核細(xì)胞膜分泌激素失調(diào)變體產(chǎn)物的信號(hào)序列設(shè)計(jì)包含編蹄失調(diào)變體產(chǎn)物的核苷酸序列的表達(dá)載體。也可以將激素失調(diào)變體產(chǎn)物作為重組蛋白而表達(dá)，添加一個(gè)或多個(gè)禾盱蛋白純化的額外多肽結(jié)構(gòu)域。所述禾盱純化結(jié)構(gòu)域包括，但不限于金屬螯合肽，如使得能夠在固定化的金屬上進(jìn)衍屯化的組氨酸-色氨酸組件、使得獸,在固定化的免疫球蛋白上進(jìn)行純化的蛋白A結(jié)構(gòu)域、和在FLAGS延伸/親和純化系統(tǒng)(ImmunexCorp.，Seattle,Wash.)中4頓的結(jié)構(gòu)域。在純化結(jié)構(gòu)域和激素失調(diào)變體產(chǎn)物之間引入蛋白酶可切割的多肽接頭序列，對(duì)利于純化是有用的。一種這樣的表達(dá)載體提供了融合蛋白的表達(dá)，所述融合蛋白包含與通過(guò)腸激酶切割位點(diǎn)隔開(kāi)的聚組氨酸區(qū)域融合的變體多肽。組氨酸殘基利于在MIAC(固定化的金屬離子親和層析，如Porath，等人，ProteinExpr.Purif3:263-281(1992)中的描述)上純化，而腸激酶切害U位點(diǎn)提供了用于從融合蛋白分離變體多肽的工具。pGEX載體(Promega，Madison，Wis.)也可作為與谷胱苷肽S-轉(zhuǎn)移酶(GST)融合蛋白用于表達(dá)外源多肽。通常，所述融合蛋白是可溶的，并且可以通過(guò)吸附于配體瓊脂糖珠(如在GST-融合體的情況下是谷胱苷肽-瓊脂糖)很容易從裂解的細(xì)胞純化，然后在游離配體存在下洗脫。在轉(zhuǎn)化合適的宿主菌株并且使宿主菌株生長(zhǎng)到合適的細(xì)胞密度時(shí)，M:合適的方法(如溫度轉(zhuǎn)變或化學(xué)誘導(dǎo))誘導(dǎo)所選擇的啟動(dòng)子，并且培養(yǎng)細(xì)胞額外的一段時(shí)間。通常M31離心收獲細(xì)胞，通過(guò)物理或化學(xué)方法破壞，將得到粗提取物保留用于進(jìn)一步純化?？梢訫包括凍-融循環(huán)、超聲處理、機(jī)械破壞或使用細(xì)胞裂解劑的任何常規(guī)方法，或M:本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的其它方法破壞在蛋白表達(dá)中使用的微生物細(xì)胞?？梢酝ㄟ^(guò)本領(lǐng)域公知的多種方法中的任意方法從重組細(xì)胞培養(yǎng)物回收并純化激素失調(diào)變體產(chǎn)物，包括硫酸銨或乙醇沉淀、酸萃取、陰離子或陽(yáng)離子交換層析、磷酸纖維素層析、疏L7K相互作用層析、親和層析、羥基磷灰石層析和凝集素層析。在完成成熟蛋白構(gòu)型的過(guò)程中，可以根據(jù)需要使用蛋白重折疊步驟。最后，可以使用高效液相層析(HPLC)用于最后的純化步驟。C.禾,核,列的診斷應(yīng)用本發(fā)明的核酸序列可以用于多種診斷目的。通過(guò)檢測(cè)編碼激素失調(diào)變體產(chǎn)物的mRNA的存在，可以用核酸序列檢測(cè)和定量激素失調(diào)變體在患者細(xì)胞，如活檢組織中的表達(dá)?；蛘撸撚^啶可以用于檢測(cè)血清或血液中的可溶性變體。該測(cè)定通常包括從組織或血清獲得總mRNA，并且將mRNA與核酸探針接觸。所述探針是至少20個(gè)核苷酸，雌20-30個(gè)核苷酸的核酸肝，育灘在雜交條件下與包含編碼激素失調(diào)變體產(chǎn)物的核酸分子的序列特異性雜交，檢測(cè)與探針雜交的mRNA的存在，從而檢測(cè)變體的表達(dá)。該測(cè)定可以用于區(qū)分激素失調(diào)變體產(chǎn)物的不存在、存在和過(guò)量表達(dá)，以及用于監(jiān)測(cè)治療干涉期間激素失調(diào)變體表達(dá)的水平。此外，該測(cè)定可用于比較本發(fā)明的激素失調(diào)變體水平與經(jīng)改變而得到變體的原始激素失調(diào)序列的水平，或比較相互之間的水平，該比較可以具有某些生理含義。本發(fā)明也包括使用核酸序列診斷由遺傳缺陷變體序列導(dǎo)致的疾病或得到激素失調(diào)變體的原始激素失調(diào)序列與本發(fā)明的新的激素失調(diào)變體的比例發(fā)生改變的疾病。可以通過(guò)比較缺陷的(即突變的)激素失調(diào)變體編碼區(qū)的序列與正常編碼區(qū)的序列而檢測(cè)這些序列。編碼突變的激素失調(diào)變體產(chǎn)物的序列與非正常變體產(chǎn)物活性的關(guān)系可以改變。此外，可以將編碼突變的激素失調(diào)變體產(chǎn)物的序列插入合適的載體，用于在功能測(cè)定系統(tǒng)(如在HEK293細(xì)胞的變體蛋白缺陷株中的比色測(cè)定、互補(bǔ)實(shí)驗(yàn))中表達(dá)，作為證明或鑒定突變的另一種方法。一旦鑒定了突變基因，可以篩查感興趣群體中突變基因的攜帶者?？梢酝ㄟ^(guò)多種技術(shù)在DNA水平檢測(cè)攜帶本發(fā)明的核酸序列中的突變的個(gè)體。用于診斷的核酸可以獲自患者的細(xì)胞，包括，但不限于例如獲自血液、尿、唾液、胎盤(pán)、組織活檢物和尸檢材料?？梢灾苯訉⒒蜴鵩iDNA用于檢觀蜮可以M5^f頓PCRJS行^^擴(kuò)增，(Saiki，等人，Nature324:163-166(1986))然后用于分析?？梢詫NA或cDNA用于相同的目的。例如，可以將與本發(fā)明的核酸互補(bǔ)的PCR引物用于鑒定和分析本發(fā)明基因中的突變。通過(guò)擴(kuò)增產(chǎn)物與正常基因型相比的大小改變而檢測(cè)缺失和插入?？梢酝ㄟ^(guò)將擴(kuò)增的DNA與放射性標(biāo)記的本發(fā)明的RNA或放射標(biāo)記的本發(fā)明的反處N游列雜交，鑒定點(diǎn)突變。也可以M核酸謝呆護(hù)測(cè)定，如RNA酶和S1保護(hù)或化學(xué)裂解方法(如Cotton，等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA85:43974401(1985))或fflil解鏈皿的差異發(fā)現(xiàn)特定位點(diǎn)的序列改變。也可以用"舒信標(biāo)"(KostrikisL.G.等人，Science279:1228-1229(1998))，即一種含有與本發(fā)明的核酸互補(bǔ)的探針序列的發(fā)夾形、單鏈合成寡核苷酸，檢測(cè)點(diǎn)突變或其它序列改變，以及監(jiān)測(cè)變體產(chǎn)物的表達(dá)水平。所述診斷方法對(duì)產(chǎn)前檢測(cè)特別有用。另一種用于檢測(cè)突變的方法^il兩個(gè)DNA探針，所述^^針設(shè)計(jì)為與靶的具有鄰基的鄰接區(qū)雜交，其中已知或杯疑突變的區(qū)域位于或鄰近所述鄰接的減基?？梢岳缭谶B接酶的存在下，在鄰接的堿基處連接兩個(gè)探針，但只能在兩個(gè)探針都在探針連接區(qū)域正確進(jìn)行堿基配對(duì)的條件下連接。然后可以通過(guò)連接的探針的存在與否檢測(cè)突變的存在與否。例如美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5,547,839中描述的基于通過(guò)雜，行測(cè)序(SBH)的寡核苷酸陣列方法也適用于檢測(cè)激素失調(diào)變體產(chǎn)物編碼序列中的突變。在典型的方法中，DNA耙分析物與在微芯片上形成的寡核苷酸陣列雜交。然后可以從耙與陣歹U結(jié)合的模式"讀出"耙的序列。D.核酸序列的治療用途本發(fā)明的核酸序列也可以用于治療用途。關(guān)于本發(fā)明的第二方面(即，抑制激素失調(diào)變體的表達(dá))，可以通過(guò)反義技術(shù)調(diào)節(jié)激素失調(diào)變體產(chǎn)物的表達(dá)，該技術(shù)通過(guò)互補(bǔ)核酸序列，即反^DNA^RNA與編碼變體產(chǎn)物的基因的控制區(qū)、5'區(qū)或調(diào)節(jié)區(qū)的雜交而控制基因皿。例如，將編碼本發(fā)明的產(chǎn)物的核,列的5'編碼部分用于設(shè)計(jì)長(zhǎng)度為大約1040個(gè)tt對(duì)的反義寡核苷酸。來(lái)源于轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)，如M^始位點(diǎn)開(kāi)始的-io至U+io位置之間的寡核苷酸是im的。將反義DNA寡核苷酸設(shè)計(jì)為與參與轉(zhuǎn)錄的核酸序列的區(qū)域互補(bǔ)(Lee等人，Nucl.AcidsRes.6:3073(1979);Cooney等人，Science241:456(1988);禾nDervan等人，Science251:1360(1991))，從而阻止變體產(chǎn)物的轉(zhuǎn)錄和生產(chǎn)。反義RNA寡核苷酸與信使RNA體內(nèi)雜交并且阻斷mRNA分子翻譯為變體產(chǎn)物(Okano，J.Neurochem.56:560(1991))。可以通M^領(lǐng)域公知的程序?qū)⒎戳x構(gòu)建體送遞到細(xì)胞，以便可以體內(nèi)表達(dá)反義RNA或DNA。反義可以是反義mRNA或肯,編碼所述反XmRNA的DNAj^列。反3CmRNA^其編碼DNA可以與編碼激素失調(diào)變體蛋白的序列或者與所述序列的片段互補(bǔ)，其長(zhǎng)度足夠抑制蛋白產(chǎn)物生產(chǎn)。也可以將反義技術(shù)用于抑制一種變體相對(duì)于另一種變體的表達(dá)，或抑制變體相對(duì)于原始序歹啲變體表達(dá)。關(guān)于本發(fā)明的第一方面，即，激素失調(diào)變體的表達(dá)，可以通過(guò)提供在合適的控制元件的控制下的編碼所述激素失調(diào)變體產(chǎn)物的編碼序列而增加激素失調(diào)變體產(chǎn)物的表達(dá)，所述控制元件在需要的宿主中終止所述編碼序列的表達(dá)。本發(fā)明的核酸序列可以與合適的藥用載體組合使用。所述組合物包含治療有效量的化合物和藥學(xué)可接受的載體或賦形劑。所述載體包括，但不限于鹽水、緩沖鹽水、右旋糖、水、甘油、乙醇及其組合。所述制劑應(yīng)當(dāng)適用于給藥模式。根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明的產(chǎn)物也可以iM:在體內(nèi)^i所述多肽，通常稱(chēng)作'基因治疔'?？梢杂镁幋a多肽的核酸序列(DNA^RNA)對(duì)來(lái)自患者的細(xì)胞進(jìn)行離體工程化，然后給用所述多肽治療的患者提供工程化的細(xì)胞。所述方法是本領(lǐng)域公知的。例如，ffl31使用含編碼本發(fā)明的多肽的RNA的逆轉(zhuǎn)錄病毒顆粒，可以Mil本領(lǐng)域公知的程序?qū)?xì)M行工程化。類(lèi)似地，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行體內(nèi)工程化，通過(guò)本領(lǐng)域公知的程序體內(nèi)表達(dá)多肽。如本領(lǐng)域公知的，可以將用于生產(chǎn)包含編碼本發(fā)明的多肽的RNA的逆轉(zhuǎn)錄病毒顆粒的生產(chǎn)細(xì)胞給藥患者，以便對(duì)細(xì)胞進(jìn)行體內(nèi)工程化并且在體內(nèi)表達(dá)多肽。根據(jù)本發(fā)明的教導(dǎo)，給藥本發(fā)明的產(chǎn)物的這些和其它方法對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該是顯而易見(jiàn)的。例如，用于對(duì)細(xì)胞進(jìn)行工程化的表達(dá)載體可以是逆轉(zhuǎn)錄病毒以外的那些，例如，與合適的送遞載體重組后的腺病毒，可以用于對(duì)細(xì)胞進(jìn)行體內(nèi)工程化?？梢缘玫缴鲜瞿孓D(zhuǎn)錄病毒質(zhì)粒載體的逆轉(zhuǎn)錄病毒包括，但不限于莫洛尼鼠白血病病毒、脾壞死病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒，如勞斯肉瘤病毒、哈維肉瘤病毒、禽白細(xì)胞增多癥病毒、長(zhǎng)臂猿白血病病毒、人類(lèi)免疫缺陷性病毒、腺病毒、骨髓增生性肉瘤病毒和哺乳動(dòng)物腫瘤病毒。將逆轉(zhuǎn)錄病毒質(zhì)粒載體用于轉(zhuǎn)導(dǎo)包裝細(xì)胞系以形成生產(chǎn)細(xì)胞系?？梢员晦D(zhuǎn)染的包裝細(xì)胞包括，但不限于Mller描述的PE501、PA317、psi-2、psi-AM、PA12、T19隱14X、VT-19-17—H2、psi-CRE、psi畫(huà)CRIP、GP+E-86、GP+envAm12禾HDAN細(xì)胞系(HumanGeneTherapy,Vol.1，pg.5-14，(1990))。載體可以S^領(lǐng)域公知的任何方法轉(zhuǎn)導(dǎo)包裝細(xì)胞。所述方法包括，但不限于電穿孔、使用脂質(zhì)體和CaP(V沉淀。在一種替代方式中，可以將逆轉(zhuǎn)錄病毒質(zhì)粒載體包裹到脂質(zhì)體中，或與脂質(zhì)偶聯(lián)，然后纟合予宿主。生產(chǎn)細(xì)胞系產(chǎn)生包含編碼多肽的核酸序列的傳染性逆轉(zhuǎn)錄病毒載體顆粒。然后可以用所,轉(zhuǎn)錄病毒載體顆粒體外或體內(nèi)轉(zhuǎn)導(dǎo)真核細(xì)胞。轉(zhuǎn)導(dǎo)的真核細(xì)胞將皿編碼多肽的核列?？梢赞D(zhuǎn)導(dǎo)的真核細(xì)胞包括，但不限于胚胎干細(xì)胞、胚胎癌細(xì)胞，以及造血干細(xì)胞、肝細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、成鵬胞、角質(zhì)形成細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和支氣管上皮細(xì)胞?？梢詫?dǎo)入細(xì)胞的基因置于誘導(dǎo)型啟動(dòng)子，如放射誘導(dǎo)的Egr-l啟動(dòng)子(Maceri，H丄，等人，CancerRes.56(19):4311(1996))的控制下，以刺激反應(yīng)于放射，如用于治療腫瘤的放射治療的變體產(chǎn)生或反義抑制。激素失調(diào)變體產(chǎn)物本發(fā)明的基本純化的激素失調(diào)變體產(chǎn)物定義為由本發(fā)明的核酸序列編碼的產(chǎn)物。氨基酸序列優(yōu)選是與SEQIDNO:21或SEQIDNO:23-SEQE)NO:24或SEQIDNO:26或SEQIDNO:28或SEQIDNO:30或SEQIDNO:32或SEQIDNO:34或SEQIDNO:36或SEQIDNO:38所示序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%同一性的氨基酸序列。蛋白或多肽可以是上文所定義的成熟和/或修飾的形式，例如通過(guò)切除前導(dǎo)序列進(jìn)行修飾。也包括具有來(lái)源于激素失調(diào)變體產(chǎn)物的至少10個(gè)連鄉(xiāng)魏基^^魅，雌至少10-20個(gè)歹縫的蛋白片段，以及上文解釋的同源物。序列變異雌是上文定義的保守取代的那些。因此，例如，ttMai:文所述的保守取代得到的具有與SEQIDNO:21或SEQIDNO:23-SEQIDNO:24或SEQIDNO:26或SEQIDNO:28或SEQIDNO:30或SEQIDNO:32或SEQIDNO:34或SEQIDNO:36或SEQIDNO:38所示產(chǎn)物具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的序列的蛋白也是本發(fā)明的一部分，M是它與經(jīng)改變(通常，取代是在變體與原始序列不同的區(qū)域，例如表1所示)得到它的原始肽不同。在更特定的實(shí)施方案中，蛋白具有或含有SEQIDNO:21或SEQE)NO:23誦SEQIDNO:24或SEQIDNO:26或SEQIDNO:28或SEQIDNO:30或SEQIDNO:32或SEQIDNO:34或SEQIDNO:36或SEQ1DN0:38所示序列。驗(yàn)失調(diào)變體產(chǎn)物可以是(i)上文所列序列中的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基被保守或非保守氨基酸殘基(tra保守氨基酸殘基)取代的序列，或(ii)一個(gè)或多個(gè)氮基酸歹^^含取代基團(tuán)的序列，或(iii)激素失調(diào)變體產(chǎn)物與另一種化合物融合的序歹ij，所述另一種化合物如增加蛋白半衰期的化合物(例如聚乙二醇(PEG))、或作為將蛋白導(dǎo)向于其靶組織^l巴細(xì)胞群的導(dǎo)向工具的部分(如抗體)，或(iv)額外的氨基酸與激素失調(diào)產(chǎn)物S蟲(chóng)合的序列。根據(jù)此處的教導(dǎo)，這樣的片段、變體和衍生物被認(rèn)為在本領(lǐng)域技術(shù)人員的知識(shí)范圍內(nèi)。A.激素失調(diào)變體產(chǎn)物的制備上文描述了用于生產(chǎn)和分離激素失調(diào)變體產(chǎn)物和蛋白片段的重組方法。除了重組生產(chǎn)，可以采用固相技術(shù)通過(guò)直接肽合成(參見(jiàn)Stewart等人，(1969)Solid-PhasePeptideSynthesis，WHFreemanCo，SanFrancisco;MerrifieldJ.,J.Am.Chem.Soc.85:2149-2154(1963))而生產(chǎn)變體產(chǎn)物的片段和部分。可以用人工技掘通過(guò)自動(dòng)化進(jìn)行體夕卜肽合成。例如，根據(jù)制造商提供的說(shuō)明，可以用PeptideSynthesizer431A肽合成儀(PerkinElmer,FosterCity,Calif.)完成自動(dòng)化合成?？梢詥为?dú)化學(xué)合成激素失調(diào)變體產(chǎn)物的片段，并且用化學(xué)方法組合以生產(chǎn)全長(zhǎng)分子。B.禾傭激素失調(diào)變體產(chǎn)物的治療用途和組合物本發(fā)明的激素失調(diào)變體產(chǎn)物通常用于治療激素失調(diào)。可以通過(guò)設(shè)計(jì)在耙器官或組織提供一致的和可預(yù)觀啲化合物濃度的許多途徑和方法中的任何一種，給藥激素失調(diào)變體產(chǎn)物或片段?？梢詥为?dú)給藥含產(chǎn)物的組合物，或與其它的試劑如穩(wěn)定化合物組合，和/或與其它藥劑如藥物或激素組合?？梢酝ㄟ^(guò)多種途徑給藥含激素失調(diào)變體產(chǎn)物的組合物，包括，但不限于口服、皮下、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、經(jīng)皮、皮下、局部、舌下或飾途徑，以及通過(guò)鼻施用。含激素失調(diào)變體產(chǎn)物的組合物也可以通過(guò)脂質(zhì)體給藥。所述給藥途徑和合適的制劑是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的?？梢酝ㄟ^(guò)靜脈內(nèi)，膜內(nèi)注射給藥激素失調(diào)變體產(chǎn)物。類(lèi)似地，可以將產(chǎn)物注射到身體的其它局部區(qū)域。也可以皿鼻吹入法給藥所述產(chǎn)物。腸內(nèi)給藥也是可以的。對(duì)于所述給藥，可以將產(chǎn)物配制于飽的膠囊或酏劑中用于口服給藥，或配制于栓劑中用于M給藥。前述示例性給藥方式可能需要將產(chǎn)物配制于合適的載體中，包括，例如油膏、凝膠或栓劑。合適的制劑是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。產(chǎn)物的劑量將根據(jù)所選擇的特定多肽的效力和治療指數(shù)而改變。用于治療方法中的治療性組合物可以包括無(wú)菌可注射溶液中的產(chǎn)物、口服送遞載體中的多肽、適于鼻給藥的氣溶膠中的產(chǎn)物、或噴霧化形式的產(chǎn)物，所有這些都是根據(jù)公知方法制備的。所述組合物包含治療有效量的化合物和藥學(xué)可接受的載體或賦形劑。所述載體包括，但不限于，鹽水、緩沖鹽水、右旋糖、7jC、甘油、乙醇及其組合。本發(fā)明的產(chǎn)物也可以用于調(diào)節(jié)內(nèi)皮分化和增殖，以及用于離體或體外調(diào)節(jié)例如細(xì)胞培養(yǎng)物中的細(xì)胞凋亡。抗變體抗體A.合成在本發(fā)明的另一方面，將純化的變體產(chǎn)物用于生產(chǎn)抗變體抗體，所述抗體具有與激素失調(diào)變體產(chǎn)物的活性、分布和表達(dá)相關(guān)的診斷和治療用途?？梢酝茴I(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法制備抗激素失調(diào)變體的抗體。所述抗體可以包括，但不限于，多克隆抗體、單克隆抗體、嵌合抗體、人源化抗體、單鏈抗體、Fab片段和通MFab表達(dá)文庫(kù)制備的片段?？贵w，即抑制二聚體形成的那些，對(duì)于治療用途是特別的。用于抗體誘導(dǎo)的激素失調(diào)變體產(chǎn)物的片段不需要以生物學(xué)活性為特征，但必須以免疫學(xué)活性為特征；但是，蛋白片段或寡肽必須是抗原性的。用于誘導(dǎo)特異性抗體的肽可以具有SEQIDN0:21或SEQIDNO:23-SEQIDNO:24或SEQE)NO:26或SEQIDNO:28或SEQIDNO:30或SEQIDNO:32或SEQIDNO:34或SEQIDNO:36或SEQIDNO:38所示序列的至少5個(gè)氨基酸，優(yōu)選至少10個(gè)氨基酸組成的氨基鵬列。它們tti^該模擬天然蛋白的氨基iW列的一部分，并且可以含有小的天然存在分子的完整氨基酸序列。激素失調(diào)變體蛋白氨基酸的短片段可以與其它蛋白如匙孔血藍(lán)蛋白的片段和針對(duì)嵌合分子產(chǎn)生的抗體融合?？梢詫⒈绢I(lǐng)域公知的程序用于生產(chǎn)抗激素失調(diào)變體產(chǎn)物的抗體。為了生產(chǎn)抗體，可以通過(guò)注射激素失調(diào)變體產(chǎn)物或保留免疫原性特性的任何部分、片段或寡肽而免疫各種宿主，包括山羊、兔、大鼠、小鼠等。根據(jù)宿主的物種，可以用多種佐劑增加免,答。所述佐劑包括，但不限于弗氏佐劑、礦物凝膠，如氫氧化鋁，和表面活性物質(zhì)，如溶血卵磷脂、復(fù)合多元醇、聚陰離子、肽、油乳狀液、匙孔血藍(lán)蛋白的和二硝基苯酚。BCG(卡介苗)和小棒狀桿菌(Co，eZwcten'wm/arvw附)是潛在有用的人佐齊U?？梢杂萌魏渭夹g(shù)制備抗激素失調(diào)變體蛋白的單克隆抗體，該技術(shù)通,續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞系生產(chǎn)抗體分子。這，括，但不限于最初由KoehlefSMlstein描述的雜交瘤技術(shù)(Nature256:495497(1975))，AB細(xì)胞雜交瘤技術(shù)(Kosbor等人，Immunol.Today4:72(1983);Cote等人，Proc.Natl,Acad.Sci.USA80:2026-2030(1983))禾PEBV畫(huà)雜交瘤技術(shù)(Cole等人，Mol.CellBiol.62:109-120(1984))。也可以f柳開(kāi)發(fā)用于生產(chǎn)'嵌合抗體"的技術(shù)，將小鼠抗體基因拼接于人抗體基因，以獲得具有合適抗原特異性和生物活性的分子(Monison等人，Proc.Natl.AcadSd.USA81:6851^6855(1984);Neuberger等人，Nature312:604-608(1984);Takeda等人，Nature314:452454(1985))?；蛘撸梢?爐為生產(chǎn)單鏈抗體所描述的技術(shù)(美國(guó)專(zhuān)利號(hào)4,946,778)以適于生產(chǎn)變體蛋白的特異性單鏈抗體。也可以按照Orlandi等人(Proc.Natl.AcadSci.USA86:3833-3837(1989))禾口WinterG禾nMilsteinC(Nature349:293-299(1991))的描述，S)l體內(nèi)誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞群生產(chǎn)或通過(guò)篩選重組免疫球蛋白文庫(kù)或高度特異性結(jié)合試齊啲組而制備抗體。也可以制備含有激素失調(diào)變體蛋白的特異性結(jié)合位點(diǎn)的抗體片段。例如，所述片段包括，但不限于可以通過(guò)用胃蛋白酶消化抗體M制備的F(ab')2片段和可以i!MSI^F(ab')2片段的二硫鍵而制備的Fab片段?；蛘撸梢詷?gòu)敏ab表達(dá)文庫(kù)，以便允許ffi3I和容易地鑒定具有所需特異性的單克隆Fab片段(HuseW.D.等人，Science256:1275-1281(1989))。B.抗體的診斷用途用于使用具有建立的特異性的多克隆或單克隆抗體的競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合或免疫放射性測(cè)量分析的多種方案是本領(lǐng)域公知的。所述免疫測(cè)定通常涉及激素失調(diào)變體產(chǎn)物及其特異性抗體之間的復(fù)合物形成和復(fù)合物形成的測(cè)量。,的是利用與特異性變體產(chǎn)物上的兩個(gè)不干擾的表位反應(yīng)的單克隆抗體的兩位點(diǎn)、基于單克隆的免疫測(cè)定，但也可以使用競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定。這些測(cè)定描述于MaddoxD.E.等人的文獻(xiàn)aE鄧,Medl58:1211(1983))。特異性結(jié)合于激素失調(diào)變體產(chǎn)物的抗體可以用于通過(guò)激素失調(diào)變體的超量表達(dá)或表達(dá)不足而診斷特征在于表達(dá)本發(fā)明的新的激素失調(diào)變體(正常情況下不表達(dá))的狀況^病，也可以用于檢測(cè)這樣的疾病，其中本發(fā)明的激素失調(diào)變體和發(fā)生改變而得到變體的原始激素失調(diào)序列的量之間的比例發(fā)生了改變。或者，所述抗體可以用于監(jiān)測(cè)用激素失調(diào)變體產(chǎn)物治療的患者的測(cè)定中。用于變體蛋白的診斷性測(cè)定包括利用抗體和標(biāo)記檢測(cè)人體液或細(xì)胞或組織提取物中的變體產(chǎn)物的方法?？梢允褂媒?jīng)過(guò)修飾或未修飾的本發(fā)明的產(chǎn)物和抗體。通常，通過(guò)與報(bào)道舒共價(jià)或非共l條接，來(lái)標(biāo)記蛋白和抗體。多禾襯艮道分子是本領(lǐng)域公知的。多種利用各自蛋白的特異性多克隆或單克隆抗體測(cè)量激素失調(diào)變體產(chǎn)物的方案是本領(lǐng)域公知的。其例子包括酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)、放射免疫測(cè)定(RIA)和熒光激活的細(xì)胞，(FACS)。如上文所述，優(yōu)選的是利用與特異性變體產(chǎn)物上的兩個(gè)不干擾的表位反應(yīng)的單克隆抗體的兩位點(diǎn)、基于單克隆的免疫測(cè)定，但也可以^頓競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定。這些測(cè)定描述于Maddox等人的文獻(xiàn)(上文)和其它文獻(xiàn)。所述方案提供了診斷激素失調(diào)變體產(chǎn)物表達(dá)水平改變或異常的基礎(chǔ)。通過(guò)在本領(lǐng)域公知的適于復(fù)合物形成的條件下將采集自正常受試者，，人的體細(xì)胞提取物與抗激素失調(diào)變體產(chǎn)物的抗體組合，確立激素失調(diào)變體產(chǎn)物表達(dá)的正?；驑?biāo)準(zhǔn)值?？梢酝ㄟ^(guò)多種方法，^il過(guò)光測(cè)量法對(duì)標(biāo)準(zhǔn)復(fù)合物形成進(jìn)行定量。然后，可以將從正常樣品獲得的標(biāo)準(zhǔn)值與從潛在受疾病影響的受試者的樣品獲得的值進(jìn)行比較。標(biāo)準(zhǔn)值和受試者值的偏差確定了疾病狀態(tài)的存在?？贵w測(cè)定可以用于確定存在于體液樣品中的激素失調(diào)變體產(chǎn)物的水平，以便確定它是否被表達(dá)，是否在組織中被過(guò)量表達(dá)^達(dá)不足，或作為可變產(chǎn)物的激素失調(diào)變體水平如何響應(yīng)藥物治療的指標(biāo)。C.抗體的治療用途除了診斷用途，所述抗體可以具有治療用途，用于阻斷或降低病理狀況中的激素失調(diào)變體產(chǎn)物的活性，其中通過(guò)所述斷氏，可以達(dá)到有益效果。使用的抗體151公知的球蛋白-基因文庫(kù)方法制備的人源化單克隆抗體，或AMab。通常作為無(wú)菌溶MMIV注射給藥抗體，但是其它的腸胃外途徑也是合適的。通?？贵w的給藥量是約l-15mg/kg受試者體重。例如用每l-7天給藥而繼續(xù)進(jìn)行治療，直到觀察到治療改進(jìn)。盡管參照特定方法和實(shí)施方案描述了本發(fā)明，應(yīng)當(dāng)理解，可以進(jìn)行多種修改和改變而不背離本發(fā)明。實(shí)施例1-分離以等于2的MOI，用皿包含SEQIDN0:21或SEQIDNO:23-SEQIDNO:24或SEQIDNO:26或SEQIDNO:28或SEQIDNO:30或SEQIDNO:32或SEQIDNO:34或SEQIDNO:36或SEQIDNO:38的氨基,列的激素失調(diào)變體(AC-激素失調(diào)變體)的桿狀病毒感染Sf-9細(xì)胞。在28"，連續(xù)振蕩(90ipm)下生長(zhǎng)細(xì)胞。在感染后(hpi)60小時(shí)，收集培養(yǎng)基，M31以5000ipm離心5併中而從培養(yǎng)基分離細(xì)胞。采用SP-Sepharose柱，通過(guò)陽(yáng)離子効奐層析分離10ml培養(yǎng)基。用PBSpH6.5平衡柱子，并且在將樣品力鵬到柱子上后，用PBS洗滌柱子，以洗脫未結(jié)合的蛋白(流通級(jí)分)。用濃度逐漸增加的NaCl，以2mL/min(5%NaCl/min)的^I進(jìn)療冼脫。對(duì)不同的級(jí)分進(jìn)行SDS-PAGE電泳，并且用抗激素失調(diào)變體抗體進(jìn)行蛋白印跡。實(shí)施例2-分泌以等于2的MOI，用表達(dá)激素失調(diào)變體(Ac-^m失調(diào)變體)的桿狀病毒感染Sf-9細(xì)胞。在28匸，連續(xù)振蕩(90ipm)下生長(zhǎng)細(xì)胞，在感染后(hpi)24、48和60小時(shí)收集lmL樣品。離心后，用翻轉(zhuǎn)爰沖液(50mMTrispH7.5，l%tritonX100，和蛋白酶抑制劑混合物)在4X:下裂解細(xì)胞沉淀30併中，并且超聲處理30秒。以14000ipm離心樣品10分鐘，將上清、游旨定為PeM。將樣品緩沖液補(bǔ)加到40MLPellet制齊訴M0ML培養(yǎng)基(指定培養(yǎng)基)，在15XSDS-PAGE上電泳。電泳后，對(duì)凝膠進(jìn)行半干蛋白轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上。將所述膜與抗激素失調(diào)變體抗^^顯育2小時(shí)，并且與第二抗-兔抗體再溫育1小時(shí)。用商購(gòu)的蛋白印跡檢測(cè)試劑盒進(jìn)行信號(hào)檢測(cè)。實(shí)施例3-競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定在密度為仕105細(xì)胞每孔的密度下針對(duì)方鄉(xiāng)性配體的5-8%結(jié)合轉(zhuǎn)染后一天，將轉(zhuǎn)染的COS-7細(xì)胞轉(zhuǎn)入培養(yǎng)平板。轉(zhuǎn)染后2天，在4。C下使用25pM的，q激素失調(diào)變體進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合i式驗(yàn)。在0.5ml的50mM的Hepes緩沖液、pH7.4，補(bǔ)充有l(wèi)mMCaCl2、5mMMgCl2和0.1%(w/v)牛血清蛋白、40ng/ml桿菌肽中進(jìn)行結(jié)合測(cè)定。在1微摩爾未標(biāo)記激素失調(diào),變胃在下的結(jié)合確定為非特異結(jié)合。在0.5ml冰冷緩沖液中洗滌細(xì)胞兩次，并加入0.5-lml裂解緩沖液(8M脲、在3M乙酸中的2Q/。NP40)，計(jì)算結(jié)合放射性強(qiáng)度。測(cè)定按一式兩^it行。實(shí)施例4-激素失調(diào),變體類(lèi)似化合物的合成生產(chǎn)氨基酸衍生物和合成試劑可以商購(gòu)獲得?？墒褂糜蒔erkinElmer生產(chǎn)的AppliedBiosystem433A合成^JS行肽鏈伸展，并通過(guò)Boc彌moc方法構(gòu)建保護(hù)肽衍生物-樹(shù)脂。通MBoc方法獲得的保護(hù)肽樹(shù)脂在對(duì)甲酚存在下與無(wú)水氟化氫(HF)進(jìn)纟于脫保護(hù)，從而釋方文肽，然后純化。通MFmoc方法獲得的保護(hù)肽樹(shù)脂與三氟乙酸(TFA)或稀船有各種清除齊啲TFAiS行脫保護(hù)，純化釋放的肽。在C4或C18柱上用反ffiHPLC進(jìn)行提純。純化產(chǎn)物的純度可以用反相HPLC確認(rèn)，通過(guò)氨基酸組成分析和質(zhì)譜可以確認(rèn)它的結(jié)構(gòu)?？梢杂贸Ｒ?guī)的肽合成法生成在此公開(kāi)的肽。具體地說(shuō)，?；蛲榛牡暮?1列如下?？s略語(yǔ)"HMP樹(shù)脂"是指4-羥甲基苯氧基甲SM脂；"Fmoc,樹(shù)脂"是指4-(2',4'-二甲氧基苯S-Fmoc-氨基甲基)苯氧基乙酰氨S"乙對(duì)對(duì)脂；"PAM樹(shù)月旨"是指苯基乙,安基甲繊脂；"HBTU"是指2-(lH-苯并三唑-l-基)-1,1,3,3-四甲基脲(tetramethyluronium)六氟磷酸酉旨；"TBTU"是指2-(1H-苯并三唑-l-基)-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯；"HOBt"是指l-羥基苯并三唑；"DCC"是指二環(huán)己基碳二亞胺；"DIPCr是指二異丙基碳二亞胺；"TFA"是指三氟乙酸；"DIPEA"是指二異丙基乙胺；"TIPS"是指三異丙基硅烷;"Fmoc"是指銜基甲M基;"Boc"是指叔丁氧羰基；"Trt"是指三苯甲基；"Bu"是指叔丁基；"Pmc"是指2,2,5,7,8-五甲基苯并二氫吡喃-6-磺?；?M"是指丙?；?PhM"是指苯丙?；?；"BzT是指節(jié)基；"Bom"是指賴(lài)基甲基；"Tos"尉旨甲苯磺?；?；"C1-Z"是指2-氯-芐基；"Pis"是指2-苯基異丙基；"Mtt"是指4-甲基三苯甲基；"DMF'是指lSgS[-二甲基甲醐安；"NMP"是指N-甲勘比咯烷酮；"DMAP"是指4-二甲基氨勘比啶；"HOSu"是指N-羥基琥珀酰亞胺；"Adod"是指2-氨基十二酸；"Aib"是指2-氨基異丁酸；"Ape"是指5-氨基戊酸；"Cha"是指環(huán)戰(zhàn)丙氨酸；"D邵"是指2,3-二氨基丙酸；NaT是指萘丙氨酸；"Nie"是指正亮氨酸?？梢员挥糜诤螶^Fmoc方法的保護(hù)性氨^^:Boc-Gly、Fmoc-Gly、Fmoc-Ser(Bu)、Fmoc-Ser(Trt)、Fmoc畫(huà)Glu(OBu)、Fmoc-His(Boc)、Fmoc畫(huà)Gln(Trt)、Fmoc-Arg(Pmc)、Fmoc-Lys(Boc)、Fmoc-Pro、Fmoc畫(huà)Leu、Fmoc-Ala、Fmoc-Val、Fmoc-Phe、Fmoc-Phe、Fmoc-Ser(n-CgH")、Fmoc-Ser(n-CgH")、Fmoc-Cys(n-CgH17)、Fmoc畫(huà)Asp(OPis)、Fmoc-Ser(Bzl)、Fmoc-Cys(Trt)、Fmoc國(guó)Dap(Octanoyl)、Fmoc畫(huà)2-Nal、Fmoc國(guó)2醫(yī)Nal、Fmoc畫(huà)Nle、Fmoc國(guó)Lys(Mtt)、Fmoc-Aib-OH、Fmoc-Asp(0-C7H15)。Boc方法Boc國(guó)Gly、Boc-Ser(Bzl)、Boc-Ser(Ac)、Boc-Ser(Prl)、Boc國(guó)Glu(OBzI)、Boc國(guó)His(Bom),Boc國(guó)Gln、Boc-Arg(Tos)、Boc曙L(fēng)ys(Cl-Z)、Boc畫(huà)Pro、Boc畫(huà)Leu、Boc隱Ala、Boc畫(huà)Val、Boc-Phe、Boc-Cys(n-CgH17)、Boc誦Ape、Boc-Ser(n-CgH17)使用的單元(a)分析'(4HPLC系統(tǒng)單元ShimadzuLC-10A系統(tǒng)；柱YMCPROTEIN-RP(4.6mmxl50mm);柱溫40。C;洗脫液在0.1%三氟乙酸中從0至50%乙腈的線性梯度20倂中；^31:lmL/併中；檢測(cè)UV(210nm);注射體積10至100mu1。(b)制備'MPLC系統(tǒng)單元Waters600MultisolventDeliveiySystem;柱YMC國(guó)Pack"ODS-A(5mum，20mmx250腿)YMC國(guó)Pack國(guó)PROTElN誦RP(5mum，C4，10mmx250腿)YMC-PackPROTEIN-RP(5mum，C4，20mmx250謹(jǐn))YMCPROTEIN-RP(4.6mmxl50腿)；洗脫液在0.1%三氟乙酸中乙腈濃度合適的線性梯度；流速lOmL/min(柱內(nèi)徑為20mm)，3mL/min(柱內(nèi)徑為10mm)，lmL/min(柱內(nèi)徑為4.6mm);檢測(cè)210nm、260nm;注射10至2000mul(通31泵注射2000mul或更多)(c)質(zhì)譜儀單位FinniganMATTSQ700;離子源ESI;檢測(cè)離子方式正噴霧；電壓4.5千伏；毛細(xì)管》驢250°C;流動(dòng)相0.2%乙酸和甲醇(1:1)的混合物；流速0.2mL/min;掃瞄范圍300到1,500m/z(d)氨基酸序列單元的分析使用由PerkinElmerfU備的AppliedBiosystem477A、492型測(cè)序儀(e)氨基酸組成單元的分析由Hitachi有限公司制備的L-8500型氨基酸分析儀；樣品除非另有說(shuō)明，11(TC下用6MHC1在密封管中水解樣品24小時(shí)。根據(jù)本發(fā)明的其它化合物可以采用類(lèi)似方式生產(chǎn)。實(shí)施例5-在健康受試者中隨機(jī)化的、單中心、4-周期交叉i微，用于研究激素失調(diào)拼接變體靜脈內(nèi)給藥和激素失調(diào)拼接變體皮下給藥的三個(gè)不同單劑量的會(huì)M生物利用度目的首先以單一靜脈內(nèi)和皮下劑量給藥，研究激素失調(diào)拼接變體的三個(gè)不同劑量的絕對(duì)生物利用度。其次1)研究上升劑量的劑量線性度(劑量比值)。2)研究和比較治療之間的藥效學(xué)屬性。3)評(píng)估安全性和局部耐受性。逸驗(yàn)設(shè)計(jì)在健康受試者中隨機(jī)化的、單中心、不平衡沖莫i央設(shè)計(jì)(unbalancedblockdesign)、4-周期交叉試驗(yàn)，用于研究三個(gè)不同單齊糧的激素失調(diào)拼接變體靜脈內(nèi)給藥和激素失調(diào)拼接變體皮下給藥的絕對(duì)生物利用度。M給藥途徑將采用三種劑量低、中等和高。為了斷氐每一個(gè)體的給藥次數(shù)(numberofdosing)并因此縮短試驗(yàn)的周期，各個(gè)受試者將僅僅承受總共六個(gè)劑量中的四個(gè)劑量，即分別靜脈內(nèi)和皮下給藥的兩種劑量水平。雖然不是所有受試者將承受所有的劑量水平，但不平衡模塊設(shè)計(jì)將保證以該方式所有三個(gè)劑量水平均能覆蓋。將一個(gè)充分間隔期(washoutperiod)設(shè)置在單個(gè)劑量周期之間。最后激素失調(diào),變體的藥物動(dòng)力學(xué)AUCo-t、AUC、Cmax、tmax、t、Cl/f、Wf、Cl、Vz、tl/zMRT藥效學(xué)GH:AUC、Cmax禾口tmax心輸出量，饑餓感、食物/能量攝取、與MA食物相關(guān)的愉決程度、體重、能量消耗、DEXA的評(píng)定。安全性安全性和局部耐受性的評(píng)價(jià)將通過(guò)臨床評(píng)估(身，查和生命體征)、心電圖學(xué)和實(shí)驗(yàn)室沈驗(yàn)(血液學(xué)和臨床化學(xué))貫穿于研究之中。沈驗(yàn)人群和動(dòng)力計(jì)算:健康的男性受試者，年齡在1845歲，體重指數(shù)(BM)為19-26kg/m2(兩者均包括端值)。該研究的主要目的是研究激素失調(diào)皿變體靜脈內(nèi)和皮下給藥的絕對(duì)生物利用度。將應(yīng)用不平衡模塊設(shè)計(jì)以縮短試驗(yàn)周期和降低齡受試者的給藥次數(shù)。需要針對(duì)每個(gè)劑量7R平進(jìn)行絕對(duì)生物禾,度的統(tǒng)計(jì)分析以及進(jìn)行劑量間的齊糧統(tǒng)性度分析的受試者的數(shù)量將基于現(xiàn)有文獻(xiàn)娜計(jì)算。it驗(yàn)產(chǎn)物用于靜脈內(nèi)和皮下給藥的激素失調(diào)皿變體。實(shí)施例6-激素失調(diào)jfflt變體受體的功魁式驗(yàn)轉(zhuǎn)染和組織培養(yǎng)C0S-7細(xì)胞toilbecco's改良伊格爾培養(yǎng)基1885中生長(zhǎng)，其中還補(bǔ)充有10%胎牛血清、2mM谷氨翻安和0.01mg/ml慶大霉素。使用先前描述(HolstB.等人，Mol.Pharmacol.53:166-175(1998))的加入氯喹的^l酸鈣沉淀方法轉(zhuǎn)染細(xì)胞。對(duì)于基因劑量的試驗(yàn)，使用可變化量的DNA。產(chǎn)生最大信號(hào)的cDNA的量(20pi^75cm2)用于劑量反應(yīng)曲線。HEK-293細(xì)胞在高葡萄糖的D-MEM、Dulbecco's改良的伊格爾培養(yǎng)基31966中生長(zhǎng)并補(bǔ)充有10%胎牛血清、2mM谷氨翻安和0.01m^ml慶大霉素。用Lipofectamine，2000(Invitrogen公司，Carlsbad，Cal.)轉(zhuǎn)染細(xì)胞。磷脂酰肌醇轉(zhuǎn)換轉(zhuǎn)染后一天，將COS-7細(xì)胞與5)LiCi的[3H]-肌醇(GEHealthcare,Piscataway，NJ)在補(bǔ)加了10%胎牛血清、2mM谷氨翻安和0.01mg/ml慶大霉素的lml培養(yǎng)掛孔中培養(yǎng)24小時(shí)。細(xì)胞用補(bǔ)加了140mMNaCl、5mMKC1、lmMMgS04、lmMCaCl2、10mM葡萄糖、0.05%(w/v)牛血清的20mMHEPES，pH7.4的緩沖液洗滌兩次；用補(bǔ)加了10mMLiCl的0.5ml緩沖液37。C培養(yǎng)30倂中。在37。C下用各種濃度的J3域臓45^H中，然后用10%冰冷的高氯酸萃取細(xì)胞，然后在冰上培養(yǎng)30射中。用HEPES緩沖液中的KOH中和得到的上清液，按照廠商的技術(shù)說(shuō)明書(shū)用BioRadAGl-X8陰離子交換樹(shù)脂(Bio-Rad實(shí)驗(yàn)室，Hercules,Cal.)純化產(chǎn)生的[3H]-肌醇磷酸。測(cè)定按一式兩份進(jìn)行。CRE、SRE禾nNF-K-B報(bào)道基因測(cè)定短暫轉(zhuǎn)染接種于96-孔板的HEK293細(xì)胞(30,000細(xì)膨孔)。在CRE報(bào)道基因測(cè)定的情況下，用pFA2-CREB禾口pFR-Luc報(bào)道基因質(zhì)粒(PathDetectCREBtrans-ReportingSystem,Stratagene,LaJolHCal.)或SRE國(guó)Luc(PathDetectSRECis曙ReportingSystem,Stratagene，LaJolHCal.)的混合物轉(zhuǎn)染該細(xì)胞，并顯示受體DNA的數(shù)量。轉(zhuǎn)染后，實(shí)驗(yàn)期間在低濃度血清(2.5%)培養(yǎng)細(xì)胞和用胞內(nèi)信號(hào)途徑的各自抑制劑處理。轉(zhuǎn)染后一天，在100W測(cè)定體積的培養(yǎng)基中用各自配體處理細(xì)胞5小時(shí)。用PBS洗滌該細(xì)胞兩次并加入100W熒光素,測(cè)定試劑(LucLite,PerkinElmer,Inc.,Wellesley,Mass.)終止測(cè)定。在TopCounter(TopCountNETT,PackardInstrumentCo.,Merid叫Conn.)中測(cè)量熒光5秒鐘。熒光值以相對(duì)光單位(RLU)給出。MAP激酶測(cè)定:在測(cè)定板中轉(zhuǎn)染COS7細(xì)胞(播種密度為150,000細(xì)膨孔)。43轉(zhuǎn)染后2天，在37"C下將標(biāo)明濃度的配體加入到不含任何血清的測(cè)定培養(yǎng)基并培養(yǎng)10併中。除去培養(yǎng)基并用冰冷的PBS進(jìn)行兩次洗滌步驟終止反應(yīng)。細(xì)胞溶解在樣品緩沖液中，根據(jù)LaemmliU.K.,Nature227:680-85(1970)在10%SDS-PAGE上分離。蛋白轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素上，f頓小鼠單克隆抗磷酸-ERK1/2抗體(SantaCruzBiotechnologyInc.，Santa,Cal.)的1:5000稀釋液進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡分析。^f柳抗-ERK抗體(SantaCruzBiotechnologyInc.,Santa,Cal,)的1:10000稀釋液確定總ERK蛋白。用抗小鼠辣根過(guò)氧化物酶綴合的二級(jí)抗體探測(cè)印跡，使用增強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光試劑(GEHealthcare,Piscataway,NJ)顯影和用顯像密度計(jì)分析定量。通過(guò)將數(shù)據(jù)敲為phosphoERK1/2與總ERK1/2的比艦根據(jù)蛋白負(fù)荷標(biāo)準(zhǔn)^ERK1/2磷酸化作用。結(jié)果用非刺激模擬轉(zhuǎn)染細(xì)胞獲得值的百分比表不。實(shí)施例7-激素失調(diào)皿變體的皮下給藥在體重增加、食物攝取、激素、血液學(xué)和生化參數(shù)上的功效用激素失調(diào)變體(lmg/kg)或賦形劑(1.6%甘露糖醇)經(jīng)由皮下(SC)途徑每天一次、連續(xù)14天給藥至包含n-10的SpragueDawley大鼠的組。所有動(dòng)物在緊臨安樂(lè)死之前在二氧化碳麻醉下進(jìn)行末端方她。逐次按照動(dòng)物編號(hào),而不是按組進(jìn)行尾部血收集。血液學(xué)收集血樣(至少500mO到預(yù)標(biāo)iBEDTA涂覆管中。管被預(yù)標(biāo)記，并包含下列信息研究編號(hào)、組號(hào)、動(dòng)物編號(hào)和日期。在2-8"C下保留樣品直到鵬和分析。艦SysmexKx21測(cè)試的血液學(xué)參數(shù)是職C、RBC、HGB、HCT、MCV、MCH、MCHC、血小板。AX進(jìn)行差別計(jì)數(shù)。生物化學(xué)用于生物化學(xué)分析的血液收集到非涂覆的預(yù)標(biāo)記管中。該管是預(yù)標(biāo)記的，其包含下列信息研究編號(hào)、組號(hào)、動(dòng)物編號(hào)和日期。凝結(jié)后，離心各動(dòng)物的血，收集血清至兩個(gè)預(yù)標(biāo)記管，提交用于如下分析在2-8。C下保存250m1血清直到分析。4頓Hitachi917系^t樣品進(jìn)行如下列表測(cè)試肌酸酐、總膽紅素、葡萄糖、甘油三酯、膽固醇、HDL、LDL、總蛋白、球蛋白、白蛋白、脲、鉀、磷、轉(zhuǎn)、鈉、氯、sGOT、sGPT、ALP、胰島素、IGF。尿分析在安樂(lè)死之前和/或之后，從所有的動(dòng)物(如果可能)收集尿至預(yù)標(biāo)記管(如上)中。對(duì)于所有存活動(dòng)物，逐次按照動(dòng)物編號(hào),而不是按組收集尿。使用商業(yè)試條(Bayer，Multistix10SG)伸入尿中對(duì)尿樣品進(jìn)行尿分析并測(cè)定以下參數(shù)葡萄糖、酮、pH值、白血球、血液、密度、亞硝酸鹽、膽紅素、尿膽素原和蛋白。尸檢方法和粗視檢定所有的動(dòng)物進(jìn)行詳細(xì)尸檢。預(yù)定末端放血之后立即針對(duì)所有存活動(dòng)物，逐次按照動(dòng)物編號(hào)，而不是按組進(jìn)行尸檢。在尸檢中，作一個(gè)全面檢查并觀察和記錄在組織和/或器官中的任何異?；蚩偟牟±硇愿淖儭Ｆ鞴倭锟検占谐斜淼钠鞴俸徒M織(大腦、肝、腎、胃、胰腺、肺、脾、心臟、附睪的WAT、臓后的WAT、肩胛間的BAT)，在切除和除去附著脂肪和其它連接組織后盡快稱(chēng)量濕重。收集來(lái)自一個(gè)動(dòng)物的所有器官到一個(gè)容器中，用以下信息預(yù)標(biāo)記研究編號(hào)、組號(hào)、動(dòng)物編號(hào)和日期。試驗(yàn)動(dòng)物的給藥途徑、劑量、特定株和種以及待檢驗(yàn)的參數(shù)組可以不同，其取決于每種激素失調(diào)拼接變體可獲得的相關(guān)文獻(xiàn)。實(shí)施例8-激素失調(diào)皿變體半抗原免疫交聯(lián)物合成合成激素失調(diào)拼接變體肽并與載體蛋白KLH偶聯(lián)生產(chǎn)免疫交Ml激素失調(diào)搬變體KLH。在CSBio136自動(dòng)肽合成^Lb[頓定抓寫(xiě)入的Fmoc—tBuSPPS的程i^DIC—HOBt，在l.O-mmol尺度上制備所有的半抗原和底物作為C-端的酰胺化合物。對(duì)于實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)，參見(jiàn)實(shí)施例4。受i式者。成熟的雄性Wistar大鼠(n=15)(CharlesRiver,Hollister，CA)斜蟲(chóng)地關(guān)在一個(gè)12h:12hhit(0600hlightson)、控制濕度(60%)和控制鵬(22°C)，自由進(jìn)食食物和1:力JC的動(dòng)物,所。基于谷類(lèi)的顆粒食物飲食(LM485Diet7012;HarlanTeklad，Madison,WI)由65%碳水化合物、13%脂肪、21%蛋白和可代謝能量為3.41kca]/g的擠出的谷物組成?；钚悦庖呓臃N。使用涉及12星期的五次免疫接種的方案免疫年齡和重量匹配的成熟大鼠。在第0、21、35、56和84實(shí)驗(yàn)天在黑暗循環(huán)之前90min免疫(i.p.0.4ml)年齡和重量匹配的成熟大鼠。頭三個(gè)免疫由RibiMPL-TDM乳液佐劑(RibiImmunochemicalResearchInc.)組成，含有pH7.4的100mMPBS中的250|iig、,失調(diào)皿變體KLH^H。收集免疫后1周的尾部血，離心并進(jìn)行抗體滴度和激素失調(diào)拼接變體結(jié)合親合力的血漿分析。權(quán)利要求1.分離的核酸序列，其選自由SEQIDNO2、SEQIDNO4、SEQIDNO5、SEQIDNO7、SEQIDNO9、SEQIDNO11、SEQIDNO13、SEQIDNO15，SEQIDNO17、SEQIDNO19及其互補(bǔ)序列組成的組。2.分離的核1W列，其與權(quán)利要求1所述的分離的核,列具有90%的同一性。3.分離的核酸片段，其包含如權(quán)利要求l所述的分離的核li^歹啲至少15個(gè)連續(xù)堿基對(duì)區(qū)段。4.如權(quán)利要求3所述的分離的核酸片段，其包含如權(quán)利要求1所述的分離的核IW列的15-30個(gè)連續(xù)堿基對(duì)區(qū)段。5.包含如權(quán)利要求3所述的分離的核酸片段的弓卿。6.包含如權(quán)禾腰求3所述的分離的核酸片段的探針。7.如權(quán)利要求1所述的分離的核1列，其中至少一^i^的密碼子替代所，列的至少一個(gè)密碼子。8.—種表達(dá)載體，其包含如權(quán)利要求1所述的分離的核,列，所游列可操作性地連接用于在宿主細(xì)胞中表達(dá)所述序列的控制元件。9.用如權(quán)利要求8所述的表達(dá)載條染的宿主細(xì)胞。10.反義寡核苷酸，包含選自由SEQE)N0:2、SEQIDN0:4、SEQIDN0:5、SEQIDN0:7、SEQIDNO:9、SEQIDNO:ll、SEQIDNO:13、SEQIDN0:15、SEQIDNO:17和SEQIDNO:19組成的組中的核酸序列的反向互補(bǔ)序列的1040個(gè)連續(xù)堿基對(duì)區(qū)段。11.分離的氨基酸序列，其選自由SEQIDN0:21、SEQIDNO:23、SEQK)NO:24、SEQIDNO:26、SEQIDNO:28、SEQIDNO:30、SEQIDNO:32、SEQIDNO:34、SEQIDNO:36和SEQIDNO:38組成的組。12.分離的氨基酸序列，其與權(quán)利要求11所述的分離的氨基酸序列具有90%的同一性。13.分離的抗體，其特異地結(jié)合至選自由SEQIDNO:21、SEQIDNO:23、SEQIDNO:24、SEQIDNO:26、SEQIDNO:28、SEQIDNO:30、SEQIDNO:32、SEQIDNO:34、SEQIDNO:36和SEQIDNO:38組成的組中的氨基酸序列上的表位。14.分離的肽，其包含選自由SEQIDNO:21、SEQIDNO:23、SEQIDNO:24、SEQIDNO:26、SEQIDNO:28、SEQIDNO:30、SEQIDNO:34、SEQIDNO:36禾口SEQIDNO:38組成的組中的氨基1W列的至少10個(gè)連鄉(xiāng)魏基酸區(qū)段。15.如權(quán)利要求14所述的分離的肽，包含選自由SEQIDNO:21、SEQIDNO:23、SEQIDNO:24、SEQIDNO:26、SEQK)NO:28、SEQIDNO:30、SEQIDNO:34、SEQIDNO:36和SEQIDNO:38組成的組中的氨基酸序列的10-20個(gè)連鶴基酸區(qū)段。16.用于檢測(cè)生物樣品中與激素失調(diào)相關(guān)的基因的至少一個(gè)變體核酸序列存在的方法，包括以下步驟(a)將選自由SEQIDNO:2、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQE)NO:7、SEQIDNO:9、SEQIDNO:ll、SEQIDNO:13、SEQIDNO:15、SEQIDNO:17、SEQIDNO:19及其互補(bǔ)序列組成的組中的分離的核酸序列與所述生物樣品中的核,質(zhì)雜交；和(b)檢測(cè)由步驟(a)產(chǎn)生的雜交復(fù)合物；其中所述雜交復(fù)合物的存在與至少一種變術(shù)亥,列在所述生物樣品中的存在相關(guān)。17.用于測(cè)定生物樣品中的變體核酸序列水平的方法，包括以下步驟(a)將選自由SEQE)NO:2、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:7、SEQE)NO:9、SEQIDNO:ll、SEQIDNO:13、SEQE)NO:15、SEQIDNO:17、SEQIDNO:19及其互補(bǔ)序列組成的組中的分離的核,列與所述生物樣品中的核酸物質(zhì)雜交；和(b)確定由步驟(a)產(chǎn)生的雜交復(fù)合物的量；禾口(c)對(duì)雜交復(fù)合物的量進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，以提供所述生物樣品中的變術(shù)亥1W列水平。18.確定第一生物樣品中激素失調(diào)相關(guān)基因變體與第二生物樣品中fflii^擇性拼接產(chǎn)生的變體與的核,列水平之間比例的方法，包括以下步驟(a)確定第一生物樣品中激素失調(diào)相關(guān)基因變體的第一核酸序列7K平；(b)確定第二生物樣品中該變體的選擇性拼接形式的第二核酸序列水平；和(c)比較在步驟(a)和步驟(b)獲得的水平，得到比例。19.如權(quán)利要求18所述的方法，其中所述第一生物樣品和所述第二生物樣品是相同的樣品。20.如權(quán)利要求18所述的方法，其中所述第一核,歹訴卩第二核,列是mRNA轉(zhuǎn)錄物。21.如權(quán)利要求20所述的方法，其中所述第一核1W列和第二核,列沉積在核酸芯片上。22.鑒定能夠影響激素失調(diào)相關(guān)蛋白與所述蛋白的受體結(jié)合親和力的化合物的方法，其包括以下步驟(a)提供選自由SEQIDN0:21、SEQIDNO:23、SEQIDNO:24、SEQIDNO:26、SEQIDNO:28、SEQIDNO:30、SEQIDNO:32、SEQIDNO:34、SEQIDNO:36禾口SEQIDNO:38組成的組中的氨基,列；(b)在激素失調(diào)相關(guān)基因的至少一種受,在情況下，使fl，化合物與所述氨基1W列接觸；(c)確定所述fl魏化合物對(duì)所述氨基,歹lj與所述至少一種受體的結(jié)合的影響；禾口(d)選擇肖,影響激素失調(diào)相關(guān)蛋白與所述蛋白受體的結(jié)合親和力的化合物。23.確定第一生物樣品中激素失調(diào)相關(guān)蛋白變體的水平與第二生物樣品中M31^擇性拼接產(chǎn)生的變體的水平之間比值的方法，包括以下步驟(a)確定第一生物樣品中激素失調(diào)相關(guān)基因變體的第一氨基酸序列水平；(b)確定第二生物樣品中該變體的選擇性拼接形式的第二氨基酸序列水平；和(c)比較在步驟(a)和步驟(b)獲得的水平，得到比值。24.通過(guò)聚合,反應(yīng)檢測(cè)特定激素失調(diào)相關(guān)核酸序列的方法，其包括以下步驟(a)用引物對(duì)擴(kuò)增特異性激素失調(diào)相關(guān)核辦列，其中至少一個(gè)所述弓l物包含選自由SEQIDNO:2、SEQIDNO:4、SEQE)NO:5、SEQIDNO:7、SEQIDNO:9、SEQIDNO:ll、SEQIDNO:13、SEQIDNO:15、SEQIDNO:17，SEQIDNO:19及其互補(bǔ)序列組成的組中的核,列的至少15個(gè)連續(xù)M^對(duì)區(qū)段；禾口(b)檢測(cè)步驟(a)的核,物。25.治療激素失調(diào)的方法，其包括對(duì)需治療的哺乳動(dòng)物給藥治療有效量的藥物組合物，所述藥物組合物包含(a)分離的氨基,列，選自由SEQIDNO:21、SEQE)NO:23、SEQIDNO:24、SEQIDNO:26、SEQIDNO:28、SEQIDNO:30、SEQIDNO:32、SEQE)NO:34、SEQIDNO:36、SEQIDNO:38，以及包含其至少10個(gè)連纟魏基酸區(qū)段的肽組成的組；和(b)載體。全文摘要本發(fā)明涉及激素失調(diào)相關(guān)基因的十種新型選擇性拼接變體。文檔編號(hào)C07K14/575GK101321779SQ200680040997公開(kāi)日2008年12月10日申請(qǐng)日期2006年11月1日優(yōu)先權(quán)日2005年11月3日發(fā)明者利亞特·明茨申請(qǐng)人:利亞特·明茨